TEMA 13 VITAMINAS

D
VITAMINAS
Son un grupo heterogneo de sustancias orgnicas de estructura ms o menos complicada, indispensables para el metabolismo normal de otras sustancias nutritivas.

ENFERMEDADES CARENCIALES

RAQUITISMO

BERI-BERI

ESCORBUTO

* Tienden a presentarse en pequeas cantidades en los materiales biolgicos * Componentes esenciales de sistemas bioqumicos y fisiolgicos de la vida animal, vegetal y microorganismos * A mayor grado de evolucin animal menor capacidad de sintetizarlas en cantidades adecuadas

VITAMINAS
HIDROSOLUBLES Vitamina B1 Vitamina B2 Vitamina B6 Vitamina B8 Vitamina B9 Vitamina B12 tiamina, aneurina riboflavina piridoxina biotina cido flico cobalamina

LIPOSOLUBLES Vitamina A retinol, axeroftol Vitamina A2 Provitaminas A Vitamina D2 Provitamina D2 Vitamina E tocoferol Vitamina K1 Vitamina K2 filoquinona menaquinona dehidrorretinol carotenos ergocalciferol ergosterol

Vitamina C cido ascrbico

VITAMINA A
PAPEL BIOLOGICO Componente fotosensible de la rodopsina Favorece formacin de mucopolisacridos Xeroftalmia Vitamina del crecimiento. Vitamina antioxidante Carencia: prdida de la visin crepuscular Xeroftalmia (queratinizacin de la cornea) Hiperqueratinizacin de la piel. Se acumula en el hgado Fuentes: Vegetales verdes y amarillos, zanahorias, brocoli, espinacas, calabaza, albaricoques, melocotones Aceite hgado bacalao, productos lcteos, hgado, huevos

-CAROTENO
Pro-vitamina A: pigmento naranja de las plantas

6 mg -caroteno 1 mg retinol

Oxidacin

Retinal

Necesidades diarias: 1,5-1,8 mg/dia

Retinol (Vitamina A)

ESPECIES VITAMINA A

11-trans-retinal

11-cis-retinal

Retinol

Acido retinoico

En tejidos animales la vitamina A se almacena y transporta como ester del retinol con cidos de cadena larga (palmtico y esterico)

ANALISIS VITAMINA A
Alimento KOH (Alcohlico) Saponificacin

Fundamento
Liberacin de la Vit. A de los steres de los cidos grasos (hidrlisis alcalina) Extraccin con ter. Purificacin por cromatografa en columna. Eliminacin del disolvente. Residuo en isopropanol. Determinacin fotomtrica Patrn: Acetato de retinol: 1g = 500.000 U.I. Los resultados se expresan en U.I. Vit. A/100g

3 hrs. a temperatura ambiente Extraccin con eter Extraccin (vit.A y carotenoides)

Carotenoides totales Vitamina A + Carotenos Medir a 440 nm Reactivo Carr-Price (SbCl3 en CHCl3) Medir a 620 nm Aplicaciones: alimentos grasos preparados multivitamnicos

ANALISIS VITAMINA A
HPLC
Dos tipos de columnas a) Fases estacionarias normales de slice: separacin de carotenoides b) Fases estacionarias inversas de slice: separacin steres del retinol Las ms utilizadas C18, mayor selectividad con C30. Deteccin: VIS-UV, diodos en fila (permite verificar la pureza de cada pico) y fluorimtrica. Cuantificacin con patrn interno.
Espectro absorcin -caroteno

Tcnica sensible (L.D. 1 ng) y permite la separacin de las diversas formas vitamnicas (retinol, retinal, acido retinoico), las formas esterificadas y los ismeros eventualmente presentes. Riesgos mnimos de alteracin de las sustancias analizadas.

Absorbancia

Longitud de onda, nm

VITAMINA D
Hormona esteriodea que regula funciones especficas de expresin de genes. La forma biolgicamente activa es 1,25-dihidroxi-vitamina D3 (CALCITRIOL). Acta en combinacin con la hormona paratiroidea y la calcitonina para regular las concentraciones de calcio y fsforo en suero.

CARENCIA Raquitismo en nios (mineralizacin deficiente de huesos en formacin) Osteomalacia en adultos (desminerailizacin de huesos ya formados)

Fuentes: leche enriquecida, aceite de hgado de pescado.

7-dehidro-colesterol

ESPECIES VITAMINA D

En la piel

Luz ultravioleta

Provitamina D3

Alimentos Vitamina D3 (Colecalciferol) En el hgado Hidroxilacin

25-hidroxi-vitamina D3 En riones

Hidroxilacin 1,25-dihidroxi-vitamina D3

VITAMINA E
R' HO

Estructura general de un tocoferol

H O H CH3 CH3

R'' CH3

CH3

CH3

CH3

CH3 CH3 CH3 CH3

Estructura lateral de un tocotrienol

R -CH3 -CH3 -H -H R -CH3 -H -CH3 -H Los ms ampliamente distribudos en la naturaleza: , y tocoferoles y tocotrienoles Actividad vitamnica -tocoferol -tocoferol -tocoferol -tocoferol
1 0,27 0,13 0,01

VITAMINA E
Fuentes: aceites vegetales, pan y cereales -tocoferol integrales, huevos, vsceras, vegetales de hojas verdes

Funcin ms importante: antioxidante natural, consumiendo radicales libres y oxgeno molecular. Impide la oxidacin de la vitamina A y de los cidos grasos insaturados de las membranas celulares Debido a su lipofilia se acumula en las membranas celulares, depsitos grasos y en en lipoprotenas portadoras. La mayor acumulacin tiene lugar en el tejido adiposo. La carencia es rara. Se manifiesta con anemia hemoltica en nios prematuros

VITAMINA K
Fuentes: vegetales de hojas verdes (vitamina K1, fitil-menaquinona), coliflor, hgado y yema de huevo

Menadiona, vitamina K3 sinttica

Funcin principal: mantenimiento de los niveles normales

de las protenas responsables de la coagulacin de la sangre, los factores II, VII, IX, X, protena C y protena S.

La vitamina K2 (menaquinona) se absorbe desde el intestino slo en presencia de cidos biliares y otros lpidos con los que interacciona. Los desrdenes asociados a una dbil absorcin de cidos grasos da lugar a deficiencia de esta vitamina. La vitamina K3 se absorbe aun en ausencia de lpidos intestinales. Tratamientos prolongados con antibiticos puede originar deficiencia en adultos. En recin nacidos la deficiencia se manifiesta como sndrome hemorrgico.

VITAMINA K
O CH3 O CH3 O 3 O CH3

Cadena fitol

Menaquinona Vitamina K2
Cadenas isoprenoides 4-10 unidades

Filoquinona Vitamina K1

Menadiona 2-metil-1,4-naftoquinona ANTAGONISTAS

O O HO
O 6

OH

O O

OH

Dicumarol

Warfarina

ANALISIS DE VITAMINAS LIPOSOLUBLES

Problema analtico: aislar algunas molculas con actividad vitamnica de una
masa de esteroles contenidos en el insaponificable. Proteccin de la luz. Adicin de un patrn interno y un antioxidante a la muestra. Saponificacin durante toda la noche a temperatura ambiente o bien a 70 durante 30 min. Extraccin con una mezcla de eter de petrleo:eter etlico o con hexano. Lavar hasta neutralidad. Evaporacin a sequedad, redisolucin en hexano. HPLC preparativa en columna de fase normal. Elucin con mezclas hexano/propanol o hexano/propanol/THF. Llevar a sequedad y redisolucin con metanol. Separacin por HPLC. Detector VIS-UV.

Vitamina K: sensible a los medios alcalinos. No se puede usar la saponificacin clsica.

a) hidrlisis medio amoniacal, desnaturalizacin proteica con metanol. Extraccin con hexano. b) digestin lipsica seguida de extraccin con hexano HPLC fase inversa. Deteccin VIS-UV, fluorimtrica o electroqumica.

ANALISIS DE VITAMINAS LIPOSOLUBLES HPLC fase inversa

Standards mAU Vitamina D3 -tocoferol y -tocoferol -tocoferol

Agua Bomba cuaternaria y desgasificacin

ACN Muestrea -dor automtic o

Columna Cromatogrfica

Detector Diode Array

Control y evaluacin de datos

Columna
2 4 6 8 10 12 14 Tiempo, minutos

100x2,1 mm Hypersil MOS, 5 mm A = agua B= acetonitrilo (70%) A 15 min 90%B A 16 min 95%B 0,5 ml/min 40C 2-5 ml UV-DAD

Fase mvil Gradiente Flujo Temperatura Volumen inyeccin Detector

Separacin de tocoferoles y tocotrienoles no es completa en HPLC en fase inversa

Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin ..1 ppb Repetibilidad (10 inyecc) TR Areas < 0.82% < 2.2%

ANALISIS DE VITAMINAS LIPOSOLUBLES HPLC fase normal

Preparacin muestra Columna Fase mvil Stop time Flujo Temperatura 25C Volumen inyeccin Detector 20g en 15 ml hexano 100 x 2,1 mm Hypersil SI 100, 5mm Hexano + 2% i-propanol 8min 0,3mil/min 0,5 ml UV-DAD: 295/80 nm Fluor.: 295exc/330em

ANALISIS DE TOCOFEROLES EN MARGARINA Deteccin fluorescente

Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin Lmite de deteccin Repetibilidad (10 inyecc.) TR Areas

10-20 ng (S/N = 2) DAD 0,5-2 ng (S/N = 2) Fluor <2% <2%

Fluoresc.
Hexano Bomba isocrtica Muestreador + Desgfidor.

Columna

DAD

ANALISIS DE TOCOFEROLES EN MARGARINA. La deteccin DAD no es sensible

Control y evaluacin de datos

VITAMINA B1 (TIAMINA)
Las necesidades diarias son proporcionales a la ingesta calrica. Oscila entre 1.0 - 1.5 mg/da para adultos. Si la ingesta de carbohidratos es elevada se requiere mayor cantidad de vitamina.

Deficiencia: estreimiento, falta de apetito, nauseas, fatiga y depresin. La deficiencia crnica: problemas neurolgicos (ataxia, confusin mental, prdida de coordinacin ocular), problemas cardiovasculares y musculares. La deficiencia ms severa: Beriberi, resultado de una dieta rica en carbohidratos y pobre en tiamina y sndrome de WernickeKorsakoff, comn en alcohlicos crnicos por sus hbitos alimenticios.

Noviembre de 2004. Recin nacidos Hospital Israel Sntomas de Beriberi Alimentacin: formulacin infantil

VITAMINA B1 (TIAMINA)
TPP-sintetasa

Protn acdico

Tiamina (Vitamina B1)

Pirofosfato de tiamina

Co-enzima de varias descarboxilasas Interviene en la asimilacin y metabolismo de glcidos

Piruvato decarboxilasa Fermentacin alcohlica piruvato a acetaldehdo Piruvato dehidrogenasa Sntesis de acetil-CoA a-cetoglutarato dehidrogenasa Ciclo del cido ctrico Reaccin de la transcetolasa Fijacin de C en reacciones de fotosntesis Sintetasa acetolasa Biosntesis de valina, leucina

VITAMINA B1 (TIAMINA)

H 3C N

NH 2 CH 2 N

CH 2CH 2 OH
OH-

CH 3
HSO3-

H 3C N

NH 2 CH 2 OH

Pirimidina

H 3C N

NH 2 CH 2
SO3H

S N

CH 2CH 2 OH CH 3
Tiazol

Sulfo-pirimidina

EXCISION DE LA VITAMINA B1

ANALISIS VITAMINA B1
Pirimidina
H 3C N N NH 2 CH 2 N

Tiazol
S CH 2CH 2 OH CH 3
Hidrlisis HCl o H2SO4 100C Hidrlisis enzimtica: diastasa

Mono-, piro-, o trifosfato. Proteina

K 3 Fe(CN) 6 Oxidacin
H 3C N N CH 2 N S CH 2CH 2OH CH 3

Excitacin a 365 nm y medida a 435 nm. Calibracin con un patrn de tiamina

TIOCROMO (Fluorescente)

VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
Precursora de las coenzimas flavin mononucleotido (FMN) y flavin adenin dinucleotido (FAD).

La deficiencia es rara. Puede observarse en alcohlicos crnicos debido a los pobres hbitos dietticos. Carencia se manifiesta con glositis, seborrea, estomatitis, dermatitis, fotofobia . La riboflavina se decompone por exposicin a la luz. Esta caracterstica puede dar lugar a deficiencias en neonatos tratados de hiperbilirrubinemia por fototerapia. Fuentes: lcteos, huevos, cereales

VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
En las flavoprotenas participa en reacciones de oxidacin/reduccin y en el transporte de hidrgeno a travs del grupo isoaloxacina

Forma oxidada lmax = 450 nm (amarillo)

Forma reducida Incolora

Semiquinona lmax = 570 nm (azul)

Anion Semiquinona lmax = 490 nm (rojo)

NADH dehidrogenasa, succinato dehidrogenasa, D y L-amino acido oxidasas, piridoxin-5fosfato oxidasa, glutation reductasa, xantina oxidasa

DESCOMPOSICION FOTOQUIMICA DE LA RIBOFLAVINA

+ UREA

LUMIFLAVINA Producida por ruptura fotoqumica en condiciones alcalinas

50% de prdida en leche

4-AMINO-1,2-DIMETIL5-METIL-AMINOBENCENO

ALOXANO

VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
Preparacin de la muestra 1. 2. 3. Autoclave 0.1 N HCl, 30 min Ajustar pH punto isoelctrico para precipitar protenas. Filtrar Determinacin fluorescente Excitacin: 440 nm Emisin: 525 nm Eliminacin de fluorescencia endgena: permanganato/perxido de hidrgeno Muestra + metabisulfito => fluorescencia del fondo Mtodos biolgicos Liberacin de coenzimas

VITAMINA B3 (NIACINA)
Niacina: denominacin conjunta del cido nicotnico y su amida. En los sistemas vivos se presenta como componente del NAD+
Nicotinamida (forma oxidada) Nicotinamida (forma reducida) Pro-R pro-S
Ion hidruro, H:-

Nicotinamida-adnin-dinucleotido, NAD+

Necesidades diarias: 10-20 mg

La amida y el cido libre son biolgicamente activos

NADP+ contiene un grupo fosfato sobre el hidroxilo 2

Fuentes: vsceras,
pescado (salmn), frutos secos, cereales, levaduras

VITAMINA B3 (NIACINA)
Carencia: alimentacin a base de maz o deficiente en protenas Pelagra o mal de la rosa: anorexia, debilidad muscular, dermatitis, demencia El triptfano puede sustituir a la niacina: 60 mg de triptfano son equivalentes a 1 mg de niacina. 60 g de protena contienen 600 mg de triptfano, que representan 10 mg de niacina. Triptfano Formil-quinurenina Quinurenina 3-hidroxi-quinurenina Reaccin dependiente de B6

Acido 3-hidroxi-antranlico ACIDO NICOTINICO

PELAGRA
Grandes dosis: perforacin mucosa gastrointestinal Elevacin del nivel de glucosa y de cido rico

VITAMINA B3 (NIACINA)
1. Digestin e hidrlisis Muestra + Ca(OH)2 autoclave/ 2h

2. Precipitacin de las protenas con (NH4)2SO4 3. Centrifugar y filtrar 4. Ruptura del anillo de piridina con bromuro de ciangeno (CNBr) 5. Desarrollo de color con cido sulfanlico 6. Medida espectrofotomtrica a 470 nm 7. Preparar linea de calibrado con patrones de niacina
O C N Br OH + CNBr N CN O DERIVADO REAGRUPADO O + H N 2 S O OH C-OH R-N-CH=CH-CH=C-CH=N O S O OH O C OH REAGRUPAMIENTO APERTURA DE ANILLO DERIVADO REAGRUPADO
m Niacina g

VITAMINA B5 (Acido pantotnico)

3HC OH

El cido libre es un aceite viscoso, amarillo.

H

Estable al calor hmedo y frente a agentes oxidantes y reductores. En la naturaleza slo enantimero R. Hidrolizable en medio cido y alcalino

OH-CH2-C-CH-C-N-CH2-CH2-COOH OH O

Funciones biolgicas:
-Libre slo en el plasma. En los rganos como CoA -Como CoA: activacin de los acidos carboxlicos en
NH 2 N N N N O H H OH HO HO H O H O

forma de tiosteres -Necesaria en el metabolismo de carbohidratos.

O P O3 HC

OH

O-CH 2-C-CH-C-NH-CH 2-CO-NH-CH 2CH 2-SH CH3 O

Acetil-coenzima A

Necesidades diarias: 5-7 mg No txico: tolerable 10-20 mg

VITAMINA B5 (Acido pantotnico)

Deficiencia:
ratas Blanqueamiento del pelo Dermatitis Inflamacin de mucosa nasal Hemorragia en el cortex adrenal humanos No se ha detectado o es muy rara Es dificil de inducir ya con dietas o con antagonistas (acido w-metil-pantotnico) Fuentes: hgado, riones, huevos, carne, leche, repollo, coliflor, brcoli, cacahuetes

VITAMINA B6 (Piridoxina,
CHO HO CH2OH HO CH2-NH2

piridoxal,piridoxamina)
CH2-OH HO CH2OH

CH2OH

H3C

H3C

H3C

PIRIDOXAL

PIRIDOXAMINA

PIRIDOXINA

ATP/piridoxal-kinasa
CHO HO O O P OH OH

H3C

N H

Fosfato de piridoxal Necesidades diarias: 1.4-2.0 mg

(proporcional al consumo de protenas)

Fuentes: la piridoxina en la mayora de los productos vegetales; el piridoxal y la piridoxamina en la mayora de los productos animales. Deficiencia: Es muy poco probable en humanos pero puede inducirse con antagonistas de la piridoxina

FOSFATO DE PIRIDOXAL
Funciones biolgicas
Decarboxilacin de amino cidos Reacciones de transaminacin Reacciones de racemizacin Reacciones de excisin de aldoles Reacciones de transulfuracin Conversin de triptfano a niacina Conversin de c.linoleico en araquidnico Formacin de esfingolpidos
NH-NH 2 N N

CHO HO O

O P OH OH

H 3C

N H

Es antagonista de la L-DOPA (L-3,4-dihidroxi-fenil-alanina) (antiparkinsoniano), estimulando la reaccin fuera del cerebro: L-DOPA ----------L-dopamina CO2
O C NH NH 2 H 2N O

N O N

Hydralazine (antihypertensive) Hidralazina (hipertensivo)

isoniazid (antitubercular) Isoniazida (antitubercular)

cycloserine (antitubercular) Cicloserina (antitubercular)

ANTAGONISTAS de la vitamina

CH 3 H HS C C COOH

CH 3 NH 2

Penicilamina (antirreumtico, mal de disease) penicillamine (antirheumatic; Wilson's Wilson)

O C HN NH

VITAMINA B8 (BIOTINA)
Fuentes:
Hgado, riones, yema de huevo, leguminosas, hongos. Sntesis por las bacterias intestinales
(CH2)4-COOH

HC S

CH

Necesidades diarias: 150-300 g

Deficiencia: Es rara. Puede inducirse por la avidina Grupo prosttico en sistemas enzimticos: (enlace avidina-biotina) Piruvato carboxilasa (p.e. ingesta masiva de huevos, 20 huevos/dia) Propionil-CoA carboxilasa Alteraciones trficas cutneas, glositis, B-metilcrotonil-CoA carboxilasa dermatitis Holocarboxilasa sintetasa (carboxilasa mltiple) Participa en la sntesis de cidos grasos y en la gluconeognesis. Slo es biolgicamente activa la biotina D-(+). Se encuentra unida a protenas. Grupo carboxilo unido a restos de lisina (amino) Uso teraputico: dermatitis seborreica infantil

VITAMINA B9 (ACIDO FOLICO)

COOH2N N OH N N N O C H N HC COOn

Fuentes:
Hortalizas verdes Hgado, riones Carne, huevos

Anillo pteridina

Restos glutamato, n = 3-7

H2N HN

H N

Funciones biolgicas
Conversin de serina en glicina De homocistena en metionina Sntesis de purinas y cidos nucleicos Sntesis de glicina Metabolismo de la histidina, del ac. ascrbico y de la vitamina B12

N H O

Acido tetrahidroflico Forma activa de la vitamina

VITAMINA B9 (ACIDO FOLICO)

Deficiencia
Ingesta inadecuada (p.e. alcohlicos crnicos) En no alcohlicos: mala absorcin o metabolismo inadecuado de los folatos Desrdenes intestinales y gstricos Sntesis deficiente de DNA (anemia macroctica) Deficiencia en vitamina B12 (anemia megaloblstica) Malformaciones del feto Espina bfida Necesidades diarias 0.4 0.8 mg

Muy importante durante la gestacin

VITAMINA B9 (Acido
H NH2 N H2N N N CH2 N CH3 METOTREXATO N O

flico)
Folato

INHIBIDORES: MTX, TRIMETROPRIM, PIRIMETAMINA

CH

(CH2)2-COOH

COOH

MTX: tratamiento de leucemia linfoctica en nios, sarcomas y carcinomas. En dosis bajas: tratamiento de psoriasis y artritis reumatoide El MTX inhibe la dihidrofolato reductasa, la enzima que mantiene el nivel de tetrahidrofolato necesario para la sntesis de DNA. FORMA BIOLOGICAMENTE ACTIVA

Di-hidro-folato

Tetrahidro-folato

Nueces

Guisantes

Levadura

Tomando estos alimentos aseguras una dieta rica en folatos

VITAMINA B12 (Cianocobalamina)

Anillo de corrina

Fuentes:
Sintetizada slo por las bacterias Se almacena en el hgado como co-enzima Hgado, pescado graso, huevos, leche Ausente en vegetales y frutas.

5,6-dimetilbenzimidazol

Unica vitamina que posee un ion metlico como parte de su estructura

VITAMINA B12 (Cianocobalamina)

Funciones biolgicas
Interviene como co-enzima en una reaccin de transformacin del CoA En reacciones de metilacin: de uracilo a timina, de homocistena a metionina, de amino-etanol a colina Activacin de a.a. en sntesis de protenas Transformacin de ribonucleotidos a deoxinucletidos en la sntesis de DNA en ciertas bacterias
Co-enzima B12
Metil-malonilCoA mutasa

L-metil-malonil-CoA
Co-enzima B12

Succinil-CoA

Cobalamina

Determinacin de la estructura 3D en 1956

Co-enzima B12

VITAMINA B12 (Cianocobalamina)

GRUPOS PROSTETICOS La posicin 6 puede estar sustituida por un metilo,5-desoxi-adenosil o un hidroxilo

Cianocobalamina Dimetil-benzimidazol (DMBz)

Cianocobalamina Vitamina B12

5-deoxi-adenosil-cobalamina Metilcobalamina Formas co-enzima

Hidroxicobalamina Vitamina B12b

Dieta

VITAMINA B12
Necesidades diarias: 3-4 g Carencia: Rara por deficiencia en la dieta Ingesta de anticonceptivos orales, N2O Parsitos intestinales, gastrectoma Gastritis crnica Anemia perniciosa (no se absorbe por prdida del factor intrnseco)
Al leon

B12

Clulas parietales

Factor intrnseco (glicoprotena) Estmago

B12

B12
Protenas enlace-B12
Clulas de la mucosa del leon

Efectos: Anemia macroctica megaloblstica Bloqueo de la sntesis del ADN: bloqueo de la sntesis de purina y timidina Degeneracin irreversible del cordn espinal: prdida de mielina en las clulas nerviosas Estabilidad: pH 4-6 muy estable, incluso a alta temperatura Se degrada en presencia de reductores (SO2, cido ascrbico)

B12

B12

Sangre

VITAMINA C (ACIDO ASCORBICO)

CH2OH CH HO O O

Papel biolgico:
Sntesis de catecolaminas, hidroxiprolina, hidroxitriptfano, y corticosteroides. Hidroxilacin de desoxicorticosterona. Se absorbe completamente y se concentra

HO

OH

principalmente en la hipfisis y suprarrenales. Antioxidante. Se encuentra en las clulas animales y vegetales libre.

Fuentes:
Escaramujos, grosellas rojas y negras, fresas, naranjas, limones y pomelos, coles.

VITAMINA C (ACIDO ASCORBICO)

Deficiencia:
Seborrea, escorbuto, fragilidad de los vasos sanguneos, inflamacin articulaciones, anemia Necesidades diarias: 45-80 mg Se oxida fcilmente y de modo reversible a cido dehidroascrbico (ada). La actividad biolgica se pierde cuando el anillo del ada se abre irreversiblemente a cido 2,3-dicetogulnico
CH2OH CH HO O O - 2 H+ + 2 H+ HO OH HO CH2OH CH O O

Acido ascrbico

Acido dehidro-ascrbico

DETERMINACION VOLUMETRICA DE VITAMINA C

1. Extraccin de la muestra con cido metafsforico (HPO3) en HAc. 2. Valorar la disolucin con 2, 6-dicloroindofenol hasta alcanzar el punto final (rosa) (2, 6-dicloroindofenol en medio cido).
CH2OH CH HO O O
+

Cl O Cl

2,6-dicloroindofenol
N OH

HO

OH

Rosa en medio cido

CH2OH CH HO

El punto final se detecta por el color rosa del dicloroindofenol en exceso, que ya no se reduce.

O O
+

Cl HO Cl

Incoloro en medio cido

H N OH

DETERMINACION VOLUMETRICA DE VITAMINA C

1. Extraccin de la muestra con cido metafsforico (HPO3) en HAc. 2. Valorar la disolucin con 2, 6-dicloroindofenol hasta alcanzar el punto final (rosa) (2, 6-dicloroindofenol en medio cido).

mg Acido ascrbico/g = (A-B) x

F E

V X

A= ml gastados de 2,6-dicloroindofenol B= idem para un blanco de reactivos F= mg de cido ascrbico equivalentes a 1 ml de valorante V= volumen de muestra inicial E= gr de muestra tomados X= alcuota de muestra valorada

ANALISIS DE VITAMINAS HIDROSOLUBLES HPLC fase normal

Agua ACN Control y evaluacin datos Bomba Cuaternaria + Desgfdor.

Muestreador

Columna

DAD

Preparacin muestra Columna Fase mvil

Standard Tabletas vitamnicas

Riboflavina

Acido flico

Post time Flujo Temperatura Volumen inyeccin Detector

Disolver en agua. Filtrar. 100 x 4 mm Hypersil BDS, 3m A= [agua, pH 2.1(H2SO4)] 99% B= ACN 1% a 3.5 min, 1%B a 11 min 25% B a 29 min 90% B 6min 0,5 ml/min 30C 2-5 l UV-DAD: 220/30 nm Referencia: 400/100 nm

Vitaminas B1, B6 y B12

ESPECTROS

Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin <500 pg (S/N = 2) Repetibilidad (10 inyecc.) TR <0.2% Areas <2%

Control y evaluacin de datos

Bomba Isocrtica + Desgasificador vaco

Muestreador Automtico

Columna

Detector Electroqumico

Agua

Preparacin muestra Columna Fase mvil

Stop time Flujo Temperatura Volumen inyeccin Detector Electrodo de trabajo Modo de operacin Potencial de trabajo Intervalo Electrodo referencia Tiempo de respuesta

Dilucin en agua 1:100. 125 x 4 mm Lichrospher RP 18, 5m Agua + 0.02M KH2PO4 + 0.03 M TBAHS + 0.03 M Ac.Heptanosulfnico + 2% ACN 15 min 0,8 ml/min 30C 1 l standard 5 l muestra Electroqumico Carbono vitrificado Amperometra 1.2 V 0.5 A AgCl/KCl 1s

ANALISIS DE VITAMINAS HIDROSOLUBLES HPLC fase normal

Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin 30 pg (S/N = 2) Repetibilidad (10 inyecc.) TR <0.5% Areas <5% Intervalo lineal 30 pg - 1 ng

ANALISIS DE VITAMINAS HIDRO- Y LIPOSOLUBLES

1. Thiamine 2. Ascorbic acid 3. Nicotinic acid 4. Niacinamide 5. Pantothenic acid 6. Riboflavin 7. Cyanocobalamin 8. Biotin 9. Vitamin A 10. d-Tocopherol 11. g-Tocopherol 12. a-Tocopherol 13. Vitamin D2 14. Vitamin D3 15. Vitamin K

Prevail C18, 5 m, 150 x 4.6mm (Part No. 99208) A: 100% Agua, pH3.2 w/Acido frmico B: (83:17) Acetonitrilo:Metanol Gradiente: Tiempo: 0 3 10 10.1 30 %B: 0 0 45 100 100 Flujo: 1.5mL/min Detector: ELSD (VER FUNCIONAMIENTO EN DIAPOSITIVA SIGUIENTE) Columna: Fase mvil:

EVAPORATIVE LIGHT SCATTERING DETECTION (ELSD)

Deteccin por vaporizacin/dispersin de luz 1. Nebulizacin: En el interior del nebulizador, el

efluyente de la columna pasa a travs de una aguja, se mezcla con N2 y forma un aerosol., 2. Evaporacin de la fase mvil: Las gotculas pasan a

travs de un tubo caliente donde la fase mvil se evapora, dejando un fino aerosol de partculas secas de la muestra en el vapor del disolvente. 3. Deteccin: Las partculas pasan a travs de una celda

de flujo donde interaccionan con un haz de luz. La radiacin dispersada por la muestra genera una seal elctrica en el detector.