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D
VITAMINAS
Son un grupo heterogneo de sustancias orgnicas de estructura ms o menos complicada, indispensables para el metabolismo normal de otras sustancias nutritivas.
ENFERMEDADES CARENCIALES
RAQUITISMO
BERI-BERI
ESCORBUTO
* Tienden a presentarse en pequeas cantidades en los materiales biolgicos * Componentes esenciales de sistemas bioqumicos y fisiolgicos de la vida animal, vegetal y microorganismos * A mayor grado de evolucin animal menor capacidad de sintetizarlas en cantidades adecuadas
VITAMINAS
HIDROSOLUBLES Vitamina B1 Vitamina B2 Vitamina B6 Vitamina B8 Vitamina B9 Vitamina B12 tiamina, aneurina riboflavina piridoxina biotina cido flico cobalamina
LIPOSOLUBLES Vitamina A retinol, axeroftol Vitamina A2 Provitaminas A Vitamina D2 Provitamina D2 Vitamina E tocoferol Vitamina K1 Vitamina K2 filoquinona menaquinona dehidrorretinol carotenos ergocalciferol ergosterol
VITAMINA A
PAPEL BIOLOGICO Componente fotosensible de la rodopsina Favorece formacin de mucopolisacridos Xeroftalmia Vitamina del crecimiento. Vitamina antioxidante Carencia: prdida de la visin crepuscular Xeroftalmia (queratinizacin de la cornea) Hiperqueratinizacin de la piel. Se acumula en el hgado Fuentes: Vegetales verdes y amarillos, zanahorias, brocoli, espinacas, calabaza, albaricoques, melocotones Aceite hgado bacalao, productos lcteos, hgado, huevos
-CAROTENO
Pro-vitamina A: pigmento naranja de las plantas
6 mg -caroteno 1 mg retinol
Oxidacin
Retinal
Retinol (Vitamina A)
ESPECIES VITAMINA A
11-trans-retinal
11-cis-retinal
Retinol
Acido retinoico
En tejidos animales la vitamina A se almacena y transporta como ester del retinol con cidos de cadena larga (palmtico y esterico)
ANALISIS VITAMINA A
Alimento KOH (Alcohlico) Saponificacin
Fundamento
Liberacin de la Vit. A de los steres de los cidos grasos (hidrlisis alcalina) Extraccin con ter. Purificacin por cromatografa en columna. Eliminacin del disolvente. Residuo en isopropanol. Determinacin fotomtrica Patrn: Acetato de retinol: 1g = 500.000 U.I. Los resultados se expresan en U.I. Vit. A/100g
Carotenoides totales Vitamina A + Carotenos Medir a 440 nm Reactivo Carr-Price (SbCl3 en CHCl3) Medir a 620 nm Aplicaciones: alimentos grasos preparados multivitamnicos
ANALISIS VITAMINA A
HPLC
Dos tipos de columnas a) Fases estacionarias normales de slice: separacin de carotenoides b) Fases estacionarias inversas de slice: separacin steres del retinol Las ms utilizadas C18, mayor selectividad con C30. Deteccin: VIS-UV, diodos en fila (permite verificar la pureza de cada pico) y fluorimtrica. Cuantificacin con patrn interno.
Espectro absorcin -caroteno
Tcnica sensible (L.D. 1 ng) y permite la separacin de las diversas formas vitamnicas (retinol, retinal, acido retinoico), las formas esterificadas y los ismeros eventualmente presentes. Riesgos mnimos de alteracin de las sustancias analizadas.
Absorbancia
Longitud de onda, nm
VITAMINA D
Hormona esteriodea que regula funciones especficas de expresin de genes. La forma biolgicamente activa es 1,25-dihidroxi-vitamina D3 (CALCITRIOL). Acta en combinacin con la hormona paratiroidea y la calcitonina para regular las concentraciones de calcio y fsforo en suero.
CARENCIA Raquitismo en nios (mineralizacin deficiente de huesos en formacin) Osteomalacia en adultos (desminerailizacin de huesos ya formados)
7-dehidro-colesterol
ESPECIES VITAMINA D
En la piel
Luz ultravioleta
Provitamina D3
25-hidroxi-vitamina D3 En riones
Hidroxilacin 1,25-dihidroxi-vitamina D3
VITAMINA E
R' HO
R'' CH3
CH3
CH3
CH3
VITAMINA E
Fuentes: aceites vegetales, pan y cereales -tocoferol integrales, huevos, vsceras, vegetales de hojas verdes
Funcin ms importante: antioxidante natural, consumiendo radicales libres y oxgeno molecular. Impide la oxidacin de la vitamina A y de los cidos grasos insaturados de las membranas celulares Debido a su lipofilia se acumula en las membranas celulares, depsitos grasos y en en lipoprotenas portadoras. La mayor acumulacin tiene lugar en el tejido adiposo. La carencia es rara. Se manifiesta con anemia hemoltica en nios prematuros
VITAMINA K
Fuentes: vegetales de hojas verdes (vitamina K1, fitil-menaquinona), coliflor, hgado y yema de huevo
La vitamina K2 (menaquinona) se absorbe desde el intestino slo en presencia de cidos biliares y otros lpidos con los que interacciona. Los desrdenes asociados a una dbil absorcin de cidos grasos da lugar a deficiencia de esta vitamina. La vitamina K3 se absorbe aun en ausencia de lpidos intestinales. Tratamientos prolongados con antibiticos puede originar deficiencia en adultos. En recin nacidos la deficiencia se manifiesta como sndrome hemorrgico.
VITAMINA K
O CH3 O CH3 O 3 O CH3
Cadena fitol
Menaquinona Vitamina K2
Cadenas isoprenoides 4-10 unidades
Filoquinona Vitamina K1
OH
O O
OH
Dicumarol
Warfarina
Columna Cromatogrfica
Columna
2 4 6 8 10 12 14 Tiempo, minutos
100x2,1 mm Hypersil MOS, 5 mm A = agua B= acetonitrilo (70%) A 15 min 90%B A 16 min 95%B 0,5 ml/min 40C 2-5 ml UV-DAD
Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin ..1 ppb Repetibilidad (10 inyecc) TR Areas < 0.82% < 2.2%
Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin Lmite de deteccin Repetibilidad (10 inyecc.) TR Areas
Fluoresc.
Hexano Bomba isocrtica Muestreador + Desgfidor.
Columna
DAD
VITAMINA B1 (TIAMINA)
Las necesidades diarias son proporcionales a la ingesta calrica. Oscila entre 1.0 - 1.5 mg/da para adultos. Si la ingesta de carbohidratos es elevada se requiere mayor cantidad de vitamina.
Deficiencia: estreimiento, falta de apetito, nauseas, fatiga y depresin. La deficiencia crnica: problemas neurolgicos (ataxia, confusin mental, prdida de coordinacin ocular), problemas cardiovasculares y musculares. La deficiencia ms severa: Beriberi, resultado de una dieta rica en carbohidratos y pobre en tiamina y sndrome de WernickeKorsakoff, comn en alcohlicos crnicos por sus hbitos alimenticios.
Noviembre de 2004. Recin nacidos Hospital Israel Sntomas de Beriberi Alimentacin: formulacin infantil
VITAMINA B1 (TIAMINA)
TPP-sintetasa
Protn acdico
Pirofosfato de tiamina
Piruvato decarboxilasa Fermentacin alcohlica piruvato a acetaldehdo Piruvato dehidrogenasa Sntesis de acetil-CoA a-cetoglutarato dehidrogenasa Ciclo del cido ctrico Reaccin de la transcetolasa Fijacin de C en reacciones de fotosntesis Sintetasa acetolasa Biosntesis de valina, leucina
VITAMINA B1 (TIAMINA)
H 3C N
NH 2 CH 2 N
CH 2CH 2 OH
OH-
CH 3
HSO3-
H 3C N
NH 2 CH 2 OH
Pirimidina
H 3C N
NH 2 CH 2
SO3H
S N
CH 2CH 2 OH CH 3
Tiazol
Sulfo-pirimidina
EXCISION DE LA VITAMINA B1
ANALISIS VITAMINA B1
Pirimidina
H 3C N N NH 2 CH 2 N
Tiazol
S CH 2CH 2 OH CH 3
Hidrlisis HCl o H2SO4 100C Hidrlisis enzimtica: diastasa
K 3 Fe(CN) 6 Oxidacin
H 3C N N CH 2 N S CH 2CH 2OH CH 3
TIOCROMO (Fluorescente)
VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
Precursora de las coenzimas flavin mononucleotido (FMN) y flavin adenin dinucleotido (FAD).
La deficiencia es rara. Puede observarse en alcohlicos crnicos debido a los pobres hbitos dietticos. Carencia se manifiesta con glositis, seborrea, estomatitis, dermatitis, fotofobia . La riboflavina se decompone por exposicin a la luz. Esta caracterstica puede dar lugar a deficiencias en neonatos tratados de hiperbilirrubinemia por fototerapia. Fuentes: lcteos, huevos, cereales
VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
En las flavoprotenas participa en reacciones de oxidacin/reduccin y en el transporte de hidrgeno a travs del grupo isoaloxacina
NADH dehidrogenasa, succinato dehidrogenasa, D y L-amino acido oxidasas, piridoxin-5fosfato oxidasa, glutation reductasa, xantina oxidasa
+ UREA
4-AMINO-1,2-DIMETIL5-METIL-AMINOBENCENO
ALOXANO
VITAMINA B2 (RIBOFLAVINA)
Preparacin de la muestra 1. 2. 3. Autoclave 0.1 N HCl, 30 min Ajustar pH punto isoelctrico para precipitar protenas. Filtrar Determinacin fluorescente Excitacin: 440 nm Emisin: 525 nm Eliminacin de fluorescencia endgena: permanganato/perxido de hidrgeno Muestra + metabisulfito => fluorescencia del fondo Mtodos biolgicos Liberacin de coenzimas
VITAMINA B3 (NIACINA)
Niacina: denominacin conjunta del cido nicotnico y su amida. En los sistemas vivos se presenta como componente del NAD+
Nicotinamida (forma oxidada) Nicotinamida (forma reducida) Pro-R pro-S
Ion hidruro, H:-
Nicotinamida-adnin-dinucleotido, NAD+
Fuentes: vsceras,
pescado (salmn), frutos secos, cereales, levaduras
VITAMINA B3 (NIACINA)
Carencia: alimentacin a base de maz o deficiente en protenas Pelagra o mal de la rosa: anorexia, debilidad muscular, dermatitis, demencia El triptfano puede sustituir a la niacina: 60 mg de triptfano son equivalentes a 1 mg de niacina. 60 g de protena contienen 600 mg de triptfano, que representan 10 mg de niacina. Triptfano Formil-quinurenina Quinurenina 3-hidroxi-quinurenina Reaccin dependiente de B6
PELAGRA
Grandes dosis: perforacin mucosa gastrointestinal Elevacin del nivel de glucosa y de cido rico
VITAMINA B3 (NIACINA)
1. Digestin e hidrlisis Muestra + Ca(OH)2 autoclave/ 2h
2. Precipitacin de las protenas con (NH4)2SO4 3. Centrifugar y filtrar 4. Ruptura del anillo de piridina con bromuro de ciangeno (CNBr) 5. Desarrollo de color con cido sulfanlico 6. Medida espectrofotomtrica a 470 nm 7. Preparar linea de calibrado con patrones de niacina
O C N Br OH + CNBr N CN O DERIVADO REAGRUPADO O + H N 2 S O OH C-OH R-N-CH=CH-CH=C-CH=N O S O OH O C OH REAGRUPAMIENTO APERTURA DE ANILLO DERIVADO REAGRUPADO
m Niacina g
Estable al calor hmedo y frente a agentes oxidantes y reductores. En la naturaleza slo enantimero R. Hidrolizable en medio cido y alcalino
OH-CH2-C-CH-C-N-CH2-CH2-COOH OH O
Funciones biolgicas:
-Libre slo en el plasma. En los rganos como CoA -Como CoA: activacin de los acidos carboxlicos en
NH 2 N N N N O H H OH HO HO H O H O
OH
Acetil-coenzima A
VITAMINA B6 (Piridoxina,
CHO HO CH2OH HO CH2-NH2
piridoxal,piridoxamina)
CH2-OH HO CH2OH
CH2OH
H3C
H3C
H3C
PIRIDOXAL
PIRIDOXAMINA
PIRIDOXINA
ATP/piridoxal-kinasa
CHO HO O O P OH OH
H3C
N H
Fuentes: la piridoxina en la mayora de los productos vegetales; el piridoxal y la piridoxamina en la mayora de los productos animales. Deficiencia: Es muy poco probable en humanos pero puede inducirse con antagonistas de la piridoxina
FOSFATO DE PIRIDOXAL
Funciones biolgicas
Decarboxilacin de amino cidos Reacciones de transaminacin Reacciones de racemizacin Reacciones de excisin de aldoles Reacciones de transulfuracin Conversin de triptfano a niacina Conversin de c.linoleico en araquidnico Formacin de esfingolpidos
NH-NH 2 N N
CHO HO O
O P OH OH
H 3C
N H
Es antagonista de la L-DOPA (L-3,4-dihidroxi-fenil-alanina) (antiparkinsoniano), estimulando la reaccin fuera del cerebro: L-DOPA ----------L-dopamina CO2
O C NH NH 2 H 2N O
N O N
ANTAGONISTAS de la vitamina
CH 3 H HS C C COOH
CH 3 NH 2
O C HN NH
VITAMINA B8 (BIOTINA)
Fuentes:
Hgado, riones, yema de huevo, leguminosas, hongos. Sntesis por las bacterias intestinales
(CH2)4-COOH
HC S
CH
Deficiencia: Es rara. Puede inducirse por la avidina Grupo prosttico en sistemas enzimticos: (enlace avidina-biotina) Piruvato carboxilasa (p.e. ingesta masiva de huevos, 20 huevos/dia) Propionil-CoA carboxilasa Alteraciones trficas cutneas, glositis, B-metilcrotonil-CoA carboxilasa dermatitis Holocarboxilasa sintetasa (carboxilasa mltiple) Participa en la sntesis de cidos grasos y en la gluconeognesis. Slo es biolgicamente activa la biotina D-(+). Se encuentra unida a protenas. Grupo carboxilo unido a restos de lisina (amino) Uso teraputico: dermatitis seborreica infantil
Fuentes:
Hortalizas verdes Hgado, riones Carne, huevos
Anillo pteridina
H2N HN
H N
Funciones biolgicas
Conversin de serina en glicina De homocistena en metionina Sntesis de purinas y cidos nucleicos Sntesis de glicina Metabolismo de la histidina, del ac. ascrbico y de la vitamina B12
N H O
VITAMINA B9 (Acido
H NH2 N H2N N N CH2 N CH3 METOTREXATO N O
flico)
Folato
CH
(CH2)2-COOH
COOH
MTX: tratamiento de leucemia linfoctica en nios, sarcomas y carcinomas. En dosis bajas: tratamiento de psoriasis y artritis reumatoide El MTX inhibe la dihidrofolato reductasa, la enzima que mantiene el nivel de tetrahidrofolato necesario para la sntesis de DNA. FORMA BIOLOGICAMENTE ACTIVA
Di-hidro-folato
Tetrahidro-folato
Nueces
Guisantes
Levadura
Fuentes:
Sintetizada slo por las bacterias Se almacena en el hgado como co-enzima Hgado, pescado graso, huevos, leche Ausente en vegetales y frutas.
5,6-dimetilbenzimidazol
L-metil-malonil-CoA
Co-enzima B12
Succinil-CoA
Cobalamina
Co-enzima B12
Dieta
VITAMINA B12
Necesidades diarias: 3-4 g Carencia: Rara por deficiencia en la dieta Ingesta de anticonceptivos orales, N2O Parsitos intestinales, gastrectoma Gastritis crnica Anemia perniciosa (no se absorbe por prdida del factor intrnseco)
Al leon
B12
Clulas parietales
B12
B12
Protenas enlace-B12
Clulas de la mucosa del leon
Efectos: Anemia macroctica megaloblstica Bloqueo de la sntesis del ADN: bloqueo de la sntesis de purina y timidina Degeneracin irreversible del cordn espinal: prdida de mielina en las clulas nerviosas Estabilidad: pH 4-6 muy estable, incluso a alta temperatura Se degrada en presencia de reductores (SO2, cido ascrbico)
B12
B12
Sangre
Papel biolgico:
Sntesis de catecolaminas, hidroxiprolina, hidroxitriptfano, y corticosteroides. Hidroxilacin de desoxicorticosterona. Se absorbe completamente y se concentra
HO
OH
principalmente en la hipfisis y suprarrenales. Antioxidante. Se encuentra en las clulas animales y vegetales libre.
Fuentes:
Escaramujos, grosellas rojas y negras, fresas, naranjas, limones y pomelos, coles.
Acido ascrbico
Acido dehidro-ascrbico
Cl O Cl
2,6-dicloroindofenol
N OH
HO
OH
CH2OH CH HO
El punto final se detecta por el color rosa del dicloroindofenol en exceso, que ya no se reduce.
O O
+
Cl HO Cl
F E
V X
A= ml gastados de 2,6-dicloroindofenol B= idem para un blanco de reactivos F= mg de cido ascrbico equivalentes a 1 ml de valorante V= volumen de muestra inicial E= gr de muestra tomados X= alcuota de muestra valorada
Muestreador
Columna
DAD
Riboflavina
Acido flico
Disolver en agua. Filtrar. 100 x 4 mm Hypersil BDS, 3m A= [agua, pH 2.1(H2SO4)] 99% B= ACN 1% a 3.5 min, 1%B a 11 min 25% B a 29 min 90% B 6min 0,5 ml/min 30C 2-5 l UV-DAD: 220/30 nm Referencia: 400/100 nm
ESPECTROS
Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin <500 pg (S/N = 2) Repetibilidad (10 inyecc.) TR <0.2% Areas <2%
Muestreador Automtico
Columna
Detector Electroqumico
Agua
Stop time Flujo Temperatura Volumen inyeccin Detector Electrodo de trabajo Modo de operacin Potencial de trabajo Intervalo Electrodo referencia Tiempo de respuesta
Dilucin en agua 1:100. 125 x 4 mm Lichrospher RP 18, 5m Agua + 0.02M KH2PO4 + 0.03 M TBAHS + 0.03 M Ac.Heptanosulfnico + 2% ACN 15 min 0,8 ml/min 30C 1 l standard 5 l muestra Electroqumico Carbono vitrificado Amperometra 1.2 V 0.5 A AgCl/KCl 1s
Caractersticas del mtodo Lmite de deteccin 30 pg (S/N = 2) Repetibilidad (10 inyecc.) TR <0.5% Areas <5% Intervalo lineal 30 pg - 1 ng
Prevail C18, 5 m, 150 x 4.6mm (Part No. 99208) A: 100% Agua, pH3.2 w/Acido frmico B: (83:17) Acetonitrilo:Metanol Gradiente: Tiempo: 0 3 10 10.1 30 %B: 0 0 45 100 100 Flujo: 1.5mL/min Detector: ELSD (VER FUNCIONAMIENTO EN DIAPOSITIVA SIGUIENTE) Columna: Fase mvil:
efluyente de la columna pasa a travs de una aguja, se mezcla con N2 y forma un aerosol., 2. Evaporacin de la fase mvil: Las gotculas pasan a
travs de un tubo caliente donde la fase mvil se evapora, dejando un fino aerosol de partculas secas de la muestra en el vapor del disolvente. 3. Deteccin: Las partculas pasan a travs de una celda
de flujo donde interaccionan con un haz de luz. La radiacin dispersada por la muestra genera una seal elctrica en el detector.