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Tema 11.

Metabolismo de carbohidratos

Bioqumica y Biologa Molecular

TEMA 11

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
1. 2. 3. 4. 5. Glucolisis Fermentacin Transformacin del piruvato en Acetil-CoA Ciclo de los cidos tricarboxlicos Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa

1. Glucolisis La glucolisis consiste en una secuencia de 10 reacciones enzimticas que catalizan la transformacin de una molcula de glucosa a dos de piruvato, con la produccin de dos moles de ATP y dos de NADH por mol de glucosa. Se trata de la ruta metablica mejor conocida, que desempea un papel clave en el metabolismo energtico al proporcionar una parte importante de la energa utilizada por la mayora de los organismos. Sirve en su funcin principal para preparar la glucosa y otros carbohidratos para su posterior degradacin oxidativa. En la Figura 1 se representa una visin general de la va glucoltica y su continuacin hasta la degradacin completa de la glucosa. El piruvato formado por degradacin de la glucosa puede sufrir posteriormente distintas degradaciones, dependiendo de las condiciones y del organismo: a) En condiciones aerobias, el piruvato se transforma en Acetil-CoA, que se oxida aun ms a travs del ciclo de los cidos tricarboxlicos, y posteriormente a travs de la fosforilacion oxidativa, generando CO2 y agua b) En condiciones anaerobias tiene lugar la fermentacin, que es la transformacin del piruvato hasta molculas con un grado medio de oxidacin, permitiendo la regeneracin del NAD+. Dos de las fermentaciones ms
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importantes son la homolctica, en el msculo, por la que el piruvato es reducido hasta lactato, y la fermentacin alcohlica, en levaduras, por la que se reduce hasta etanol y CO2 .

Figura 1. Visin general de la glucolisis.

La glucosa, que inicia la va glucoltica en animales, aparece en la sangre directamente de la degradacin de polisacridos complejos o de su sntesis a partir de distintas fuentes de carbohidratos (gluconeognesis) y penetra en la mayor parte de las clulas a travs de un transportador especifico que la traslada hasta el citosol. Las enzimas de la glucolisis estn localizadas en el citosol. La glucolisis convierte la molcula de glucosa en dos de piruvato, en un proceso que utiliza la energa libre liberada para sintetizar ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico (Pi). Este proceso requiere de la existencia de una serie de reacciones de transferencia del grupo fosforilo acopladas qumicamente. As pues, la estrategia qumica de la glucolisis es la siguiente:

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a) Adicin de grupo fosforilo a la glucosa b) Conversin qumica de grupos intermediarios fosforilados a compuestos con alto potencial de transferencia de grupos fosfato. c) Acoplamiento de la hidrlisis de estos compuestos para la sntesis de ATP. Las 10 reacciones enzimticas constituyentes de la glucolisis se recogen esquemticamente en la Figura 2 y ms detalladamente en los esquemas posteriores. Al inicio de la va se consume ATP para la generacin de grupos fosforilo, pero posteriormente se regenera.

Figura 2. Visin esquemtica de las 10 reacciones de la glucolisis.

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Por tanto, la glucolisis transcurre en dos fases: FASE I. (Reacciones 1-5). Fase preparatoria en que la glucosa es fosforilada y fragmentada, dando lugar a dos molculas de gliceraldehido-3-fosfato. Este proceso consume 2 ATPs. FASE II (Reacciones 6-10). Las dos molculas anteriormente formadas se convierten a dos molculas de piruvato, con la produccin de 4 ATPs y 2 NADH. Por consiguiente, el rendimiento de la glucolisis es de dos ATPs formados por molcula de glucosa y la reaccin global sera:

Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi

2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 4H+

El NAD+ es el principal agente oxidante de la va glucoltica, as que el NADH formado durante el proceso debe ser continuamente reoxidado para mantener el suministro de NAD+. Las reacciones las dos fases de la glucolisis pueden desglosarse en sus 10 reacciones: 1. Consumo del primer ATP Transferencia del grupo fosforilo del ATP a la glucosa para formar glucosa-6fosfato (G6P) en una reaccin catalizada por la hexoquina.
6 CH2OH 6 CH OPO 2 2 3 5 4

H
4

O H
2

H OH
3

ATP ADP H H
1

O H
2

OH

OH

Mg2+

H OH
3

H
1

OH

OH

OH

Hexokinase

OH

glucose

glucose-6-phosphate

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2. Isomerizacin Conversin de G6P a fructosa-6-fosfato (F6P) catalizada por la Fosfoglucosa isomerasa. Primero debe abrirse el anillo para que ocurra la isomerizacin, con posterior ciclacin de la fructosa. Para la apertura del anillo se requiere la presencia de un grupo cido, probablemente el resto de butilamonio de una lisina.
6 CH OPO 2 2 3

H
4

O H
2

H OH
3

H
1

6 CH OPO 2 2 3

1 CH2OH

H
4

HO H

OH

OH

3 OH

OH

OH

Phosphoglucose Isomerase glucose-6-phosphate fructose-6-phosphate

3. Consumo del segundo ATP La fosfofructoquinasa fosforila la F6P para formar fructosa-1,6-bifosfato (FBP). Esta reaccin controla la velocidad de la va glucoltica. Esta reaccin es estimulada alostricamente por AMP e inhibida alostricamente por ATP y citrato.

Phosphofructokinase
6 CH OPO 2 2 3

1CH2OH

ATP ADP Mg2+

6 CH OPO 2 2 3

1 CH2OPO32

H
4

HO H

H
4

HO H

3 OH

3 OH

OH

OH

fructose-6-phosphate

fructose-1,6-bisphosphate

4. Rotura La aldolasa cataliza la rotura de la FBP en dos triosas, el gliceraldehido-3fosfato (GAP) y la dihidroxacetona fosfato (DHAP).

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1CH2OPO3 2C

O H OH OH

HO 3C H 4C H
5

Aldolase

CH2OPO32 3
2C

H
1C

1CH2OH

H 2C OH 2 3 CH2OPO3

2 6CH2OPO3

fructose-1,6bisphosphate

dihydroxyacetone glyceraldehyde-3phosphate phosphate

Triosephosphate Isomerase

5. Isomerizacin Slo uno de los productos de la rotura aldlica, el GAP, continua la va glucoltica. La interconversin entre ste y la DHAP es catalizada por la triosa fosfato isomerasa.
1 CH2OPO3 2C
2

O H OH OH
2

HO 3C H 4C H
5

Aldolase

CH2OPO32 3
2C

H
1C

1CH2OH

H 2C OH 2 3 CH2OPO3

6 CH2OPO3

fructose-1,6bisphosphate

dihydroxyacetone glyceraldehyde-3phosphate phosphate

Triosephosphate Isomerase

6. Formacin del primer intermediario de "alta energa" La gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa cataliza la oxidacin y fosforilacin del GAP, por NAD+ y fosfato inorgnico, para producir el 1,3-bifosfoglicerato (BFG).

Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase
H
1C

O C OH

OPO32 + H+ O NAD+ NADH 1C + Pi H C OH


2

3 CH2OPO 3

3 CH2OPO 3

glyceraldehyde3-phosphate
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1,3-bisphosphoglycerate

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7. Primera produccin de ATP Se forma el primer ATP por defosforilacin del 1,3-bisfosfoglicerato, rindiendo adems 3-fosfoglicerato (3PG) en una reaccin catalizada por la fosfoglicerato quinasa (PGK).

Phosphoglycerate Kinase
O
1C

OPO32 ADP ATP O


1

O C

H 2C OH 2 3 CH2OPO3

Mg2+

H 2C OH 2 3 CH2OPO3

1,3-bisphosphoglycerate

3-phosphoglycerate

8. Isomerizacin La fosfoglicerato mutasa cataliza la conversin de 3PG a 2-fosfoglicerato (2PG).

Phosphoglycerate Mutase
O
1

O C

O
1

O C

H 2C OH 2 3 CH2OPO3

H 2C OPO32 3 CH2OH

3-phosphoglycerate

2-phosphoglycerate

9. Formacin del segundo intermediario de "alta energa" La enolasa cataliza la deshidratacin del 2PG a fosfoenolpiruvato (PEP), formando un complejo activo por la presencia del catin magnesio.

Enolase
O
1

O C C

O
1

O C C OPO32 + H2O

OPO32

3 CH2OH

3 CH2

2-phosphoglycerate phosphoenolpyruvate
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10. Produccin del segundo ATP La piruvato quinasa cataliza el acoplamiento de la energa libre de la hidrlisis del PEP a la sntesis de ATP para formar piruvato.

Pyruvate Kinase
O
1 2

O C C OPO3

ADP ATP
2

O
1 2

O C C OH

O
1 2

O C C O

3 CH2

3 CH2

3 CH3

phosphoenolpyruvate

enolpyruvate

pyruvate

Entrada de otros azcares en la gluclisis Adems de la glucosa procedente de la degradacin de almidn y glucgeno, hay otras hexosas de importancia, como la fructosa, que procede de la hidrlisis del azcar de mesa y tambin de la fruta, la galactosa, que procede de la hidrlisis del azcar de leche (lactosa), y la manosa, obtenida a partir de la digestin de polisacridos y glucoprotenas. La fructosa es fosforilada en el msculo y convertida directamente a fructosa-6fosfato, siguiendo despus la va glucoltica gracias a la accin de la hexoquinasa. No obstante, en el hgado la fructosa sigue una ruta ms compleja cuyo resultado final es la produccin de dos unidades de gliceraldehido-3-fosfato que se incorpora a la ruta. La galactosa se transforma en glucosa-6-fosfato, aunque este proceso parece simple las enzimas de la glucolisis no son capaces de reconocer la configuracin de la galactosa, lo que hace que el proceso sea catalizado por 5 enzimas. Una de las enzimas cataliza la trasformacin de la galactosa-1-fosfato a su derivado de uridina fosfato, revelando el papel que pueden jugar los nucleotidil-azcares en el transporte activo de determinado metabolitos. La manosa es fosforilada para rendir manosa-6-fosfato y a continuacin se produce una isomerizacin hasta fructosa-6-fosfato.

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Regulacin de la gluclisis Desde un punto de vista global podemos decir que la gluclisis se inhibe cuando hay mucho ATP. Los puntos clave en la regulacin de la gluclisis son las tres enzimas que catalizan pasos irreversibles: la hexoquinasa, la fosfofructokinasa y la piruvato kinasa.

2. Fermentacin Para la continuacin de la degradacin de glucosa, el NAD+ (en cantidades limitadas en la clula) consumido en la gluclisis debe ser reciclado. En presencia de oxgeno, el NADH pasa a la mitocondria para ser nuevamente oxidado. En condiciones anaerbicas, el NAD+ se recupera por reduccin del piruvato, en lo que constituye una extensin de la va glucoltica. Los procesos fermentativos permiten recuperar el NAD+. La fermentacin homolctica y la fermentacin alcohlica son dos ejemplos que tienen lugar en el msculo y en la levadura, respectivamente. A. Fermentacin homolctica En el msculo, especialmente durante el ejercicio intenso, cuando la demanda de ATP es elevada y se ha consumido el oxgeno, la lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la oxidacin del NADH por el piruvato para dar lactato. Los mamferos poseen hasta 5 isoenzimas de la LDH (todas ellas tetramricas) algunas de ellas estn ms adaptadas para la reaccin directa y otras para la inversa, dependendiendo de factores estructurales referentes a las distintas estructuras terciarias que puede presentar la enzima.

Lactate Dehydrogenase
O C C O O NADH + H+ NAD+ O C HC OH O

CH3

CH3

pyruvate

lactate

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La reaccin global de la degradacin anaerbica de glucosa mediante la fermentacin lctica puede esquematizarse como sigue: Glucosa + 2ADP + 2Pi -------------> 2 lactato + 2ATP + 2H+ La mayor parte del lactato, producto final de la glucolisis anaerbica, es exportado de las clulas musculares por la sangre hasta el hgado, donde vuelve a convertirse en glucosa. Al contrario de lo que se cree, la causa de la fatiga muscular y el dolor no es la acumulacin de lactato en el msculo, sino del cido producido durante la glucolisis (los msculos pueden mantener su carga de trabajo en presencia de concentraciones elevadas de lactato si el pH permanece constante). Los cazadores saben del sabor agrio de la carne de un animal que ha corrido hasta agotarse antes de morir. Esto es debido a la acumulacin de cido lctico en los msculos. B. Fermentacin alcohlica En levadura, el NAD+ se regenera en condiciones anaerbicas mediante un proceso de gran importancia para la humanidad: la conversin de piruvato a etanol y dixido de carbono. El etanol es el componente activo de vinos y licores, y el CO2 producido en la panificacin es el responsable de la subida del pan.

O C C

O O

Pyruvate Decarboxylase
CO2 H C CH3 O

Alcohol Dehydrogenase
NADH + H+ NAD+ H H C OH

pyruvate

CH3

CH3

acetaldehyde

ethanol

El etanol se produce a travs de las siguientes reacciones; la primera es la descarboxilacin del piruvato para formar acetaldehido y dixido de carbono, catalizada por la piruvato descarboxilasa (ausente en animales) y que contiene el coenzima pirofosfato de tiamina (TPP) como grupo prosttico.

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La tiamina, vitamina B1, es esencial al no ser sintetizada ni almacenada en cantidades significativas por la mayora de vertebrados, por lo que debe ser tomada en la dieta. Su deficiencia produce importantes disfunciones, al intervenir el TPP en multitud de procesos de descarboxilacin. Una consecuencia de su falta en el hombre es la enfermedad del beriberi, que puede resultar mortal y se caracteriza por alteraciones neurolgicas, parlisis, atrofia muscular y/o paro cardiaco. El acetaldehido formado por descarboxilacin del piruvato es reducido a etanol por el NADH, en una reaccin catalizada por la alcohol deshidrogenasa (ADH). La transferencia del H del NADH al acetaldehido est favorecida por un cofactor de Zn2+, que estabiliza la carga negativa de un intermediario que se forma en el proceso. El sentido de esta reaccin vara con las concentraciones relativas de acetaldehido y etanol. As, la ADH del hgado de mamferos metaboliza los alcoholes producidos anaerbicamente por la flora intestinal, as como los que provienen de fuentes externas. En ambos tipos de fermentacin el fin ltimo es el mismo: regenerar NAD + para poder continuar la glucolisis. La diferencia son los productos metablicos generados en funcin de las condiciones que se den.

3. Transformacin del piruvato en Acetil-CoA Los grupos acetilo entran en el ciclo en forma de acetil-CoA. Es este el producto comn de la degradacin de carbohidratos, cidos grasos y aminocidos. El grupo acetilo esta unido al grupo sulfhidrilo del CoA por un enlace tioster. Es interesante tener en cuenta que la hidrlisis del enlace tioster del acetil-CoA libera 31,5 kJ/mol y es, por lo tanto, un enlace rico en energa. El acetil-CoA se forma por descarboxilacin oxidativa del piruvato, por la accin del complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa (Figura 3). Este proceso, constituye, adems, un punto de regulacin previo al ciclo de Krebs. De hecho, el complejo multienzimtico presenta dos tipos de regulacin. La piruvato dehidrogenasa est regulada por dos mecanismos superpuestos. Por una parte est alostericamente inhibida cuando las proporciones de

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ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas, adems la enzima se inhibe cuando la disponibilidad de combustible para el ciclo, en foma de Acetil-CoA o cidos grasos, es alta. Y se activa cuando las demandas energticas crecen y por tanto el flujo de Acetil-CoA aumenta.

Figura 3. Conversin de piruvato en acetil-CoA.

Pyruvate Dehydrogenase
O H3 C C O C O HSCoA H3 C O C S CoA

+ CO2

pyruvate

NAD+ NADH

acetyl-CoA

Por otra parte esta regulada por un mecanismo de modificacin covalente. La piruvato deshidrogenasa fosforilada es inactiva, mientras que la enzima defosforilada es activa. La interconversin entre las formas fosforilada y defosforilada est catalizada por las enzimas piruvato deshidrogenasa kinasa y la piruvato deshidrogenasa fosfatasa. La kinasa es activada por ATP (cuando la

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concentracin de ATP es alta, mientras que la piruvato deshidrogenasa se inactiva por fosforilacin) (Figura 4).

Enzima - Pi

Inactiva

Piruvato deshidrogenasa quinasa

+ ATP

Piruvato deshidrogenasa fosfatasa

Enzima

Activa

Figura 4. Regulacin de la piruvato deshidrogenasa.

4. El ciclo de los cidos tricarboxlicos Este ciclo, conocido tambin como de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs, es la va de oxidacin de la mayor parte de carbohidratos, cidos grasos y aminocidos y genera numerosos metabolitos intermediarios de otras rutas metablicas. Es, por lo tanto, un ciclo anfiblico, es decir, opera catablica y anablicamente. Una visin general del ciclo del cido ctrico nos muestra una secuencia de reacciones que, en la mitocondria, oxidan el grupo acetilo del acetil-CoA a dos molculas de dixido de carbono, de forma que se conserva la energa libre producida, utilizndola en la sntesis de ATP. El ciclo fue propuesto por Hans Krebs en 1937. Las ocho enzimas del ciclo catalizan una serie de reacciones que, globalmente, oxidan un grupo acetilo a dos molculas de dixido de carbono, con la generacin de tres molculas de NADH, una de FADH2 y una de GTP. Tal y como se muestra en la Figura 5.

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Figura 5. Reacciones del ciclo de los cidos tricarboxlicos.

1. La citrato sintasa cataliza la condensacin entre acetil-CoA y oxalacetato para rendir citrato, que da nombre al ciclo. 2. Las dos etapas siguientes conllevan la transformacin del citrato en un ismero ms fcilmente oxidable. Para ello, la aconitasa convierte el citrato en isocitrato mediante una deshidratacin, producindose cis-aconitato unido al enzima, seguida de una hidratacin. As, el grupo hidroxilo del citrato es transferido a un tomo de carbono adyacente. 3. La isocitrato deshidrogenasa oxida el isocitrato a oxalosuccinato, con la reduccin acoplada de NAD+ a NADH. Posteriormente, el oxalosuccinato es descarboxilado, rindiendo -oxoglutarato. Esta es la primera etapa en la que la oxidacin se acopla a la produccin de NADH, y tambin la primera en la que se genera dixido de carbono.

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4. El complejo enzimtico -oxoglutarato deshidrogenasa descarboxila oxidativamente el -oxoglutarato a succinil-CoA. Esta reaccin conlleva la reduccin de una segunda molcula de NAD+ a NADH y la generacin de una segunda molcula de dixido de carbono. Hasta aqu ya se han producido dos molculas de dixido de carbono, por lo que se ha completado la oxidacin neta del grupo acetilo. Hay que resaltar que no son los tomos del grupo acetilo entrante los que han sido oxidados. 5. La succinil-CoA sintetasa convierte el succinil-CoA en succinato. La energa libre de la reaccin se conserva aqu por la formacin de GTP, a partir de GDP y Pi. 6. Las reacciones restantes suponen la preparacin de otra vuelta del ciclo, y para ello completan la oxidacin de succinato a oxalacetato gracias a la succinato deshidrogenasa, la cul cataliza la oxidacin del enlace sencillo situado en el centro de la molcula de succinato a un doble enlace trans, dando lugar a fumarato con la reduccin simultnea de FAD a FADH2. 7. La fumarasa cataliza despus la hidratacin del doble enlace del fumarato para rendir malato. 8. Finalmente, la enzima malato deshidrogenasa regenera el oxalacetato, oxidando el grupo alcohol secundario del malato a la correspondiente cetona, con la reduccin de una tercera molcula de NAD+ a NADH. La oxidacin completa de los grupos acetilo sigue entonces la siguiente estequiometra:
3NAD+ + FAD + GDP + acetil-CoA + Pi 3NADH + FADH2 + GTP + CoA + 2CO2

Catalticamente, el ciclo funciona como consecuencia de la regeneracin del oxalacetato. Se pueden oxidar un nmero ilimitado de grupos acetilo con la mediacin de una sola molcula de oxalacetato, ya que sta se regenera en el ciclo. El NADH y el FADH2 son productos vitales del ciclo. Su reoxidacin por el oxgeno, a travs de la cadena de transporte electrnico y la fosforilacin oxidativa, completa la degradacin del combustible metablico para la sntesis de ATP.

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Hay dos aspectos importantes sobre el ciclo de Krebs que deben conocerse: a) la regulacin del ciclo b) la naturaleza anfiblica del ciclo a) Regulacin del ciclo El fujo de carbono desde el piruvato a travs del ciclo del cido ctrico est finamente regulado mediante efectores alostricos y/o modificacin covalente de ciertas enzimas regulatorias. Adems de la regulacin a nivel de la piruvato deshidrogenasa, este ciclo est regulado a nivel de la entrada de acetil-CoA en el ciclo (citrato sintasa). Esto es importante pues el Acetil-CoA que se incorpora al ciclo de Krebs no llega slo del piruvato sino tambin del la degradacin de otras molculas como cidos grasos y aminocidos. Adems, tambin juegan un importante papel en la regulacin del ciclo la IDH y la -cetoglutarato deshidrogenasa. Es decir, los tres pasos irreversibles son nuevamente los pasos de control del ciclo. Estas enzimas, en la mayora de los casos, parecen estar controladas de tres maneras simples: a) disponibilidad de sustrato. b) inhibicin por producto. c) inhibicin competitiva por retroalimentacin de los intermediarios que se encuentran ms adelante en el ciclo. Por ejemplo, la citrato sintasa y la IDH se inhiben por ATP, y la cetoglutarato deshidrogenasa se inhibe por sus productos succinil-CoA y NADH. En condiciones normales las velocidades de la gluclisis y del ciclo del cido ctrico estn integradas de forma que slo se metaboliza a piruvato la cantidad de glucosa necesaria para abastecer al ciclo del cido ctrico. La velocidad de la glucolisis se acopla a la del ciclo del cido ctrico no slo a travs de su inhibicin por altos niveles de ATP y NADH, productos del ciclo, sino tambin por la inhibicin por citrato, producto de la primera etapa del ciclo.

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b) Naturaleza anfiblica del ciclo Es interesante realizar unas breves apreciaciones sobre la doble naturaleza del ciclo de Krebs. Es obvia su naturaleza degradativa, con la consiguiente conservacin de parte de la energa libre, siendo el ciclo un importante sistema para dicha funcin conservativa en la mayora de organismos. Adems, algunos de los intermediarios del ciclo de Krebs intervienen en otras rutas biosintticas, lo que implica que continuamente tienen que ser repuestos en el ciclo del cido ctrico para no desabastecer aquellas de sustrato. Se comentan seguidamente y de forma breve algunas de estas interconexiones metablicas, citando ejemplos de rutas que utilizan intermediarios del ciclo de Krebs: 1. La biosntesis de glucosa que ocurre en el citosol utiliza malato que ha sido transportado a travs de la membrana mitocondrial. 2. La biosntesis de aminocidos utiliza de dos formas los intermediarios del ciclo; el -oxoglutarato se usa en la sntesis directa de glutamato mediante una aminacin reductiva; adems dicho compuesto y el oxalacetato se emplean en la sntesis de glutamato y aspartato, respectivamente, mediante reacciones de transaminacin, ambas con alanina, para rendir los correspondientes aminocidos y piruvato. 3. La biosntesis de lpidos (que incluye la de cidos grasos o la de colesterol) son procesos que requieren acetil-CoA. Este se genera en la mitocondria y no puede ser transportado a travs de la membrana mitocondrial interna, luego el acetil-CoA citoslico se genera por degradacin del citrato, que puede atravesar la citada membrana en un transporte mediado por ATP.

5. Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa Lavoisier ya haba demostrado que los seres vivos consuman oxgeno y producan dixido de carbono. Pero no fue hasta principios del siglo XX, despus del desarrollo de la enzimologa (en parte gracias a los trabajos de Otto Warburg) cuando se demostr que las oxidaciones biolgicas se catalizan mediante enzimas intracelulares. Como hemos visto, la glucosa se oxida a CO2

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mediante las reacciones de glucolisis y ciclo de Krebs. Pero, cul es el destino de los electrones que pierde la glucosa en este proceso? La respuesta la discutiremos en este apartado. La oxidacin completa de la glucosa se escribe como indica la siguiente ecuacin: Glucosa + 6O2 6CO2 + 6H2O Separando en dos semirreacciones, podemos expresar en la primera la oxidacin de los tomos de C y en la segunda la reduccin del oxgeno molecular: C6H12O6 + 6H2O 6CO2 + 24H+ + 24 e 6O2 + 24H+ + 24e 12 H2O En los sistemas vivos, estas reacciones de transferencia electrnica ocurren a travs de una va con mltiples etapas, que aprovechan la energa libre producida para formar ATP. Los 12 pares de electrones involucrados en la oxidacin de la glucosa no pasan directamente al oxgeno, sino que se transfieren a los coenzimas NAD+ y FAD, formndose un total de 10 NADH y 2 FADH2 (Figura 6). Los electrones pasan entonces a la cadena de transporte electrnico donde participan (por la reoxidacin mitocondrial del NADH y FADH2) en un proceso de oxidacin-reduccin secuencial de determinados centros redox antes de reducir el oxgeno a agua. En este proceso, los protones son expulsados de la mitocondria, y la energa libre almacenada en el gradiente de pH resultante impulsa la sntesis de ATP, a partir de ADP y Pi, a travs de la fosforilacin oxidativa. La reoxidacin de cada NADH da lugar a la sntesis de 3 ATP, y la de un FADH2 a 2 ATP. El total por molcula de glucosa oxidada es pues de 38 ATP, 30 proceden de los 10 NADH, 4 de los 2 FADH 2, adems en la glucolisis se producen 2 ATP por mol de glucosa y en el ciclo de Krebs 2 GTP (= 2 ATP) por cada 2 de piruvato que entra en el ciclo. La respiracin celular y la fosforilacin oxidativa tienen lugar en las mitocondrias de los eucariotas, cuya membrana interna es impermeable a la mayora de las pequeas molculas e iones, incluyendo los protones. En los procariotas que carecen de mitocondrias las protenas de la cadena de
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transporte electrnico de la respiracin se encuentran en la membrana plasmtica,

Figura 6. Poder reductor generado por oxidacin de glucosa.

La obtencin de ATP a partir de la oxidacin de NADH y FADH2 se realiza mediante la fosforilacin oxidativa. El primer paso es la entrada de los electrones en la cadena respiratoria. La mayora de los electrones provienen de la accin de dehidrogenasas que recogen los electrones de los distintos procesos catablicos y los canalizan hacia los aceptores universales de electrones (NAD+, NADP+, FMN o FAD). Entonces los electrones son transferidos a una serie de transportadores asociados a membrana (Figura 7). Estos transportadores son de naturaleza proteica y tiene grupos prostticos capaces de aceptar/donar electrones. El movimiento de electrones por los transportadores se produce desde potenciales estndar de reduccin bajos a otros ms elevados (Figura 8). En la cadena respiratoria intervienen tres tipos de molculas capaces de transportar electrones. La ubiquinona o coenzima Q (una quinona hidrofbica), los citocromos (proteinas que tienen como grupos

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prostticos grupos hemo con hierro) y las protenas con agrupaciones sulfofrricas. El complejo I, tambin llamado NADH: ubiquinona oxidorreductasa transporta los electrones del NADH a la ubiquinona. El complejo II, es la succinato dehidrogenasa, nica enzima del ciclo de Krebs unida a membrana, que pasa los electrones del FADH2 a la ubiquinona. El complejo III, tambin llamado citocromo bc1 o complejo ubiquinona:citocromo c oxidorreductasa, acopla la transferencia de electrones desde la ubiquinona al citocromo c.

El complejo IV, tambin llamado citocromo oxidasa, es la ltima etapa de la cadena de transporte electrnico de la respiracin y conduce los electrones desde el citocromo c hasta el ltimo aceptor de los electrones, el oxgeno que se reduce a agua.

Figura 7. Cadena de transporte electrnico.

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Figura 8. Cadena de transporte electrnico.

Fosforilacin oxidativa La sntesis de ATP a partir de ADP y Pi en las mitocondrias est catalizada por la ATP sintasa (complejo V), y est impulsada mediante el proceso de transporte electrnico anterior. Para ello, la energa liberada durante el transporte debe conservarse en una forma que pueda ser usada por la ATPsintasa. Esto se conoce como acoplamiento de energa o transduccin de energa. Para explicar tal acoplamiento, existen distintas hiptesis. La teora ms aceptada es la de Mitchell, que propone que los transportadores de electrones adems de transportar electrones bombean protones desde la matriz mitocondrial al espacio intermembrana en contra de gradiente, para ser llevado a cabo este proceso endergnico es acoplado a la energa producida por el transporte de electrones a favor de gradiente, de modo que se crea un gradiente electroqumico de protones a travs de la membrana mitocondrial interna. El potencial electroqumico de este gradiente es aprovechado por la ATP sintasa para sintetizar ATP. La ATP sintasa transporta los protones a la

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Tema 11. Metabolismo de carbohidratos

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matriz mitocondrial a favor de gradiente y acopla este proceso exergnico a al sntesis de ATP De esta forma, el transporte electrnico provoca que los complejos I, III y IV transporten protones a travs de la membrana mitocondrial interna desde la matriz (una regin de baja concentracin de protones y potencial elctrico negativo), al espacio intermembranal (una regin de elevada concentracin de protones y potencial elctrico positivo). La energa libre secuestrada por el gradiente electroqumico resultante impulsa la sntesis de ATP por la accin de la ATP-sintasa. La ATP sintasa translocadora de protones es la estructura ms compleja de la membrana mitocondrial, contiene dos subestructuras principales (F0 y F1 ) cada una con una Funcin determinada, F0 es una protena submembranal insoluble en agua y que contiene un canal para la translocacin de los protones. F1 es una protena perifrica de membrana, soluble en agua, que participa directamente en la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi, como se muestra en la Figura 9.

Figura 9. Fosforilacin oxidativa. Teora quimiosmtica y complejo ATP-sintasa.

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Otras respiraciones no aerobias En la respiracin aerobia el aceptor final de los electrones es el oxgeno que se reduce a agua. Pero hay organismos que son capaces de respirar sin oxgeno llevando los electrones hasta otros aceptores con el mismo objetivo final, obtener mucho ATP. Hay organismos capaces de respirrar: Nitrato, generando nitrgeno (bacterias denitrificantes) Sulfato, generando sulfuro (bacterias sulforeductoras) CO2, generando metano (bacterias metanognicas)

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