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DETERMINACION DE CAFEINA EN UNA BEBIDA Prctica N0 2 UNIVERSIDAD DE CARTAGENA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES DOCENTE: JAIRO MERCADO ESTUDIANTES:

Martinez Katiana; Meja Nely; Montes Frank; Prez Sandra.

Resumen: La cromatografa de lquidos es un mtodo de separacin fsica basado en la


distribucin de los componentes de una mezcla entre una fase estacionaria y una fase mvil que en este caso es un lquido, este es su principio fundamental, en esta prctica utilizaremos esta tcnica para conocer la concentracin de cafena en la Coca-Cola. Abstracts: Liquid chromatography is a separation method based on the physical distribution of the components of a mixture between a stationary phase and a mobile phase in this case is a liquid, this is the basic principle, in practice this technique to use this know the concentration of caffeine in Coca-Cola.

Introduccin La cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente de vidrio, la cual est rellena con la fase estacionaria. Luego de sembrar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que la fase mvil fluya a velocidades razonables. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas. En esta prctica se realizarn aplicaciones de esta tcnica, como la cuantificacin de cafena en bebida

(coca cola) utilizando fase inversa; con una mezcla metanol, agua, cido actico (69:28:3) como fase mvil [1]. Marco terico La Cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC), se ha convertido en la tcnica ms popular y verstil de las tcnicas analticas modernas en los laboratorios actualmente. Los sistemas de HPLC se utilizan hoy en da en una amplia variedad de campos, ya que da a da las exigencias de confiabilidad de los datos analticos y de la eficiencia en el trabajo del laboratorio aumentan, las bebidas por ejemplo son un caso peculiar de anlisis por esta tcnica, para cumplir con estndares ms altos en regulaciones ambientales y de consumo. Estos productos carbonatados como comerciales gaseosas

las

contienen cierta cantidad de ingredientes dainos, si estn en altas cantidades pueden llegar a ser nocivos para el organismo si son consumidos constantemente. La cafena es uno de esos ingredientes, este es un alcaloide (C8H10O2N4H2O) del caf, el t, el cacao y otras plantas. Tambin la contienen la

mayora de los refrescos de cola. Un ejemplo es la bebida refrescante CocaCola (grafica1.), que es el agua carbonatada la base esencial para la produccin de la bebida gaseosa siendo la cafena tambin uno de sus componentes esenciales en sus ingredientes.[2]

Fig1 .Bebida Coca-Cola

La estructura de la cafena se muestra a continuacin;

Pertenece al grupo de sustancias llamadas xantinas, estimula el cerebro al interferir en la accin de la adenosina, un transmisor nervioso que produce calma y tranquilidad, y provoca una sensacin de euforia y de fuerza durante algunas horas. Todo esto ocurre junto con un incremento de los niveles de adrenalina y noradrenalina, que son neurotransmisores activadores.

PROCEDIMIENTO o se prepar una solucin estndar de concentracin conocida de 1000 mg/L de cafena al 100%segun datos tomados de etiqueta. o Luego se prepararon 3 soluciones a partir del estndar, una de 80, 100,200 mg/L respectivamente se tomaron alcuotas de 8,1 y 2 mL, depositadas todas en balones de 25 mL y aforamos con fase mvil. o Las condiciones cromatografas para el equipo se tabularon de la siguiente manera.

columna Fase mvil flujo Longitud de onda Inyeccin y tipo de muestra

CONDICIONES CROMATOGRAFICAS C-18 x5m150x4,6mm Agua/metanol/Ac actico(69:28:3) 1,5 mL/min 275nm 20L

La determinacin de cafena en la bebida carbonatada por HPLC se hizo a partir de una solucin de concentracin conocida de una muestra prepara en el laboratorio de 1000 mg/L, en un equipo marca CHROMOLITH PERFORMANCE R-P 18e, con detector UV-VISIBLE UV-116 A BAS UV-VIS DETECTOR de la siguiente manera. Se inyectaron una serie de estndares de concentraciones conocidas preparadas en el laboratorio apartir del patrn de 1000 mg/L, en el HPLC para su deteccin, estas fueron de; 80100-200 mg/L. El cromatograma de estas concentraciones conocidas dio una serie de picos que se correlacionan con la

concentracin del compuesto inyectado, es decir, las reas de cada estndar, tendr una relacin lineal con la concentracin de ste, lo que origina una curva de calibracin. o Luego observamos los cromatogramas de las muestras desconocidas y de acuerdo al rea de ellas con respecto a las de los estndares, ser su concentracin; rea es proporcional a la concentracin.

CLCULO Y ANALISIS DE RESULTADOS Los cromatogramas obtenidos nos dan informacin del rea y los tiempos de retencin, tanto de los estndares como de las muestras.

Cafena(mg/L) 80 100 200 Muestra (primera corrido) Muestra (segunda corrida)

rea 319785 601295 1018572 421716 425366

TR 2.96 2,90 2,91 2,91 2.87

Area
1200000 1000000 800000 Area 600000 400000 200000 0 0 50 100 150 200 250 Concentracion

y = 5290.8x - 23620 R = 0.936

Area Linear (Area)

CONTENIDO DE CAFENA EN LA COCA-COLA En 237 ml. (8 oz.); 31 mg.; CONC. 130, 80 mg/l. [3] A partir de siguiente ecuacin, calculamos la concentracin de cafena en la coca-cola, segn las muestras inyectadas. Y=mx + b Siendo m la pendiente, X la concentracin de la muestra, y b el intercepto. 423541= 5290,8 X- 23620 X= 423541 + 23620 / 5290,8 = 84,5167 mg/L Teniendo en cuenta el resultado obtenido (84,5167 mg/L) y lo permitido (130, 80 mg/L) de cafena en las bebidas carbonatadas en este caso la Coca-Cola, podemos analizar que est entre un rango permitido, la cantidad que est contenida en ella de cafena.

CONCLUSION De esta prctica podemos concluir que la tcnica HPLC es de mucha ayuda a la hora de determinar concentraciones de compuestos que estn en las bebidas carbonatadas. El procedimiento llevado a cabo, partiendo de la preparacin de estndares y de la muestra junto con el estndar, se procede a inyectarlos en el equipo, se obtuvieron unos buenos cromatogramas, entendiendo as que las condiciones cromatografcas fueron las apropiadas, para as construir una curva de calibracin con las reas obtenidas; fue la herramienta necesaria para la determinacin de concentracin de cafena estableciendo que el rea de la seal cromatografca es directamente proporcional a la cantidad de masa de un determinado compuesto que ha sido inyectado en el equipo, obteniendo la seal de la cafena a tiempo de retencin muy parecidos( ver cromatogramas).De acuerdo a la curva de calibracin el contenido de cafena en la coca cola tiene una concentracin 84,5167 mg/L , con un coeficiente de relacin de 0,936 indicando que la relacin es correcta.

Bibliografa [1] http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/1963 0/Capitulo2.pdf

[2] http://clubensayos.com/Ciencia/ExtraccionLiquidoliquido/329891.html [3]http://www.monografias.com/trabajos12/ sini/sini2.shtml

ANEXOS.
Estndar 80

Tiempo de retencin: 2.96 Min Area:319785

Estndar 100

Tiempo de retencin: 2.90 Min rea: 601295

Estandar 200

Tiempo de retencin: 2.91 Min rea: 1018572 Muestra Coca-Cola (primera corrida)

Tiempo de retencin: 2.91 Min rea: 421716 Muestra de Coca-Cola (segunda corrida)

Tiempo de retencin: 2.87 Min rea: 425366.