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1 www.monografias.com 2 3 Efecto de la coinoculacin de Pseudomonas putida y Glomus spp 4 sobre la absorcin de 15N-urea en trigo sembrado en suelo calcreo. 5 6 1. Resumen 7 Introduccin 8 2. Materiales y mtodos 9Resultados y discusin 10 3. Conclusiones 11 4. Referencias 12 13RESUMEN 14El suelo calcreo limita la produccin de trigo. Una posible alternativa de solucin es aplicar 15rizomicroorganismos que favorezcan una mayor absorcin del fertilizante nitrogenado y solubilizen el 16fsfato no disponible. Para ello, se coinocularon semillas de trigo con Pseudomonas putida y Glomus spp, 17aisladas de malezas crecidas exitosamente en un suelo calcreo del Noroeste de Mxico. En este 18ensayo el trigo se fertiliz con urea (UN) y superfosfato triple (PO) y medir la incorporacin de fertilizante 19nitrogenado el istopo estable del nitrgeno: 15N-urea. Las variables-respuesta empleadas fueron: 20nitrgeno total absorbido (Nt) y rendimiento. 21Los resultados muestran que el trigo coinoculado y fertilizado con una dosis de UN y PO inferior a lo 22recomendado, registr ms Nt en el vstago: entre un 72.3 y 88.4%. En comparacin con el trigo testigo 23(control relativo) fertilizado con la dosis mxima (100%) recomendada para la regin. En el grano de trigo 24se detect un 24.4% ms de Nt, que en el trigo sin coinocular. Se obtuvo un rendimiento similar en el 25trigo coinoculado, con la dosis reducida al 50% de UN y PO. Que en el trigo usado como control relativo 26con la dosis 100%. 27Estos resultados apoyan el efecto positivo de la combinacin P. putida y Glomus spp, sobre la absorcin 28radical de urea y PO; y el impacto positivo sobre el rendimiento de trigo. Similar al registrado en el trigo 29con la dosis 100 % de UN y PO, pero sin inocular. Al reducir el nivel de UN y PO, la cantidad de 15N 30proveniente de la urea en el trigo coinoculado, fue mayor que, en el trigo usado como control relativo. Se 31concluye que la coinculacin, es favorable para la produccin de trigo en un suelo calcreo, a dosis 32reducida de UN y PO. 33Palabras clave: rizomicroorganismos, promocin de crecimiento vegetal, suelos calcreos. 34Nitrogen uptake and wheat yield response to inoculation with Pseudomonas putida and Glomus spp. 35 36 ABSTRACT 37 Wheat seeds of Mexico were inoculated with Psuedomonas putida and Glomus spp isolated from 38weeds colected from calcareous solis of north west of Mexico. Wheat was fertilized with urea (N) and 39phosphate (P). Also with 15N urea to determinate the total nitrogen (Nt) absorbed, variable-respond and 40yield of wheat plants. Wheat co-inoculated and fertilized with low rates of N and P, reached greater 41quantities of Nt in plantlets from 72.3 to 88.4% and seeds 24.4%. The yield of the co-inoculated plants 42was similar to the one obtained in the non-inoculated full fertilized ones. These results showed a positive 43effect of P. putida and Glomus spp. inoculation on wheat plants absorption of N and its growth using lower 44doses of N and P fertilizers. 45Key word: Rhizomicroorganisms, vegetal growth promotion, alkaline soils. 46 47 INTRODUCCIN 48El suelo calcreo limita la disponibilidad de las formas combinadas de nitrgeno (N) y de los fosfatos 49(PO). Lo cual, aunado a la escasez de agua en regiones semiridas del pas, afecta la productividad del 50cultivo del trigo. Una alternativa para elevar su produccin a un nivel rentable, es el uso de inoculantes 51biolgicos. As como la posterior reduccin y fraccionamiento del fertilizante nitrogenado (FN) y los PO, 52para incrementar la baja absorcin radical de ambos elementos aplicados como fertilizante.

53Se calcula que estos valores entre un 24 a un 50% mximo es (Van y Hera, 1996). Para mantener su 54rendimiento y minimizar el exceso NH4, que contamina el agua superficial y los mantos freticos (Zapata, 551990). 56 La nutricin mineral del trigo, en suelo calcreo es crtica, pues parte de los PO aplicados se 57precipitan, al combinarse con calcio (Ca) magnesio (Mg) de las arcillas una de las causas principales. 58Esto disminuye ms, su ya limitada disponibilidad qumica, una de las principales causas del bajo 59rendimiento del trigo en este tipo de suelo (Marschner, 1995). Una posible alternativa para resolver este 60problema, es la coinoculacin del trigo a la siembra; con bacterias promotoras del crecimiento vegetal 61BPCV (Gyaneshwar et al., 2002) y hongos micorrzicos arbusculares (HMA). As como la posterior 62aplicacin de una dosis reducida y fraccionada del FN y los PO. 63Algunos de los gneros reportados de BPCV, que favorecen la absorcin radical del FN en gramneas 64son: Pseudomonas (Reis et al., 2000; Muoz-Garca y Valds, 1995), Bacillus (Bashan, 1998), 65Azospirillum (Garca et al., 1995), Azotobacter y Burkholderia (Reis et al., 2000; Heungens y Parke, 662000). El gnero reportado en la literatura de HMA ms comn, benfico para plantas, bajo carencia de 67los PO insolubles, es Glomus (Xavier y Germida, 1997). 68Este HMA incrementa la absorcin radical de los PO insolubles, y tambin del FN, del cobre (Cu 2+) y del 69cinc (Zn2+) en trigo. De esa forma estimula su crecimiento, en comparacin con trigo no inoculado, pero 70que se fertilizan con elevadas dosis de FN y PO. Se reporta en consecuencia que la coinoculacin del 71trigo con Pseudomonas y Glomus, mejora la absorcin radical del FN, ello estimula su crecimiento y 72mantiene su rendimiento a dosis reducidas del FN y los PO, aproximadamente de entre un 20 a 50% 73menos de lo recomendado para cada especfica regin (Fester et al., 1999). 74La estrategia comn para seleccionar BPCV y HMA, para la inoculacin del trigo fertilizado con dosis 75bajas de FN y los PO, recomendadas para el agricultor. Es el aislamiento de microorganismos nativos de 76la rizsfera de otras gramneas cultivadas. Los cuales son estimulados por los exudados radicales (ER) 77de la planta (Patten y Glick, 2002). 78Sin embargo, la experiencia indica que est forma de seleccin microbiana, para la inoculacin de trigo, 79no necesariamente resuelve el problema de su inconsistente respuesta a la inoculacin con 80rizomicroorganismos en suelo calcreo; en funcin del crecimiento, mantenimiento del rendimiento y 81ahorro del FN y los PO (Bashan, 1998). Una estrategia poco explorada, consiste en aislar 82rizomicroorganismos de plantas silvestres, donde este problema es crtico. Esta clase de 83microorganismos se presume, tienen ventaja ecolgica sobre rizobacterias (RB) aisladas de plantas 84domesticadas, por su adaptacin a ambientes adversos: stress provocado por la falta de los PO solubles 85para la nutricin vegetal (Snchez-Yez et al., 1998). 86En general las plantas silvestres que crecen en esta clase de suelo, son beneficiadas por estos 87microorganismos, que se hipotiza mejoran el funcionamiento de su sistema radical, por diversos 88mecanismos para enfrentar con xito tipos de estrs fisiolgico: hdrico, nutrimental ausencia de PO 89solubles, competencia contra fitopatgenos de races, para soportar cambios drsticos de temperatura. 90En Saltillo, Coah, Mxico tal situacin es climtica frecuente con temperaturas durante las maanas de 91entre 8-10C, al medio da y tarde de 29-35C. Las plantas silvestres son un ejemplo de malezas 92consideradas nocivas para la agricultura tradicional, pero persistentes y exitosas en la naturaleza. 93 A pesar de los esfuerzos para su control y/ eliminacin. Se hipotiza que los rizomicroorganismos de 94malezas, estimulan el crecimiento y mantienen el rendimiento de trigo, en especial si pertenecen a la 95misma familia. Adems, pueden reducir la dosis del FN y los PO, bajar su costo de produccin (Valdivia96Urdiales et al., 1999; Fester et al., 1999; Snchez-Yez et al., 1998). Los objetivos de este trabajo 97fueron: i) evaluar el efecto de la coinoculacin de Pseudomonas putida y Glomus spp. sobre la absorcin 98radical de 15N urea en trigo y ii) estimar el rendimiento de este trigo coinoculado con una dosis reducida 99de urea y fosfato en suelo calcreo en el campo. 100 101 MATERIALES Y MTODOS 1023.1. Aislamiento e identificacin de rizomicroorganismos de malezas. 103 Se colectaron tres especies de malezas asociadas al cultivo de trigo: Reseda luteola, Aristida 104spp, y Eruca sativa en la regin agrcola cercana a Saltillo, Coahuila, Mxico. Se les elimin el exceso de 105suelo de las races de cada especie, se cortaron en segmentos de 5 cm, para preparar diluciones en

106agua destilada esterilizada: 0.1 g de races en tubos de 18 x 50 ml con 9 ml de agua destilada. Se 107sembr 0.1 mL de la dilucin: 10-5 de sta suspensin-races, en un medio de cultivo conocido como agar 108Ashby (g L-1): manitol 1.5; K2HPO4 0.02; MgSO4.7H2O 0.02; NaCl 0.02; CaSO4.2H20 0.01; CaCO3 0.5; 109agar. 1.6, para el aislamiento de bacterias promotoras de crecimiento vegetal, de la clase que fija N2. Las 110cajas con agar Ashby despus de sembrarse con estas diluciones, se incubaron a 30C durante 48 h. 111Las rizobacterias que crecieron, se resembraron en el agar Ashby, hasta obtener cultivos axnicos. Se 112seleccionaron las RB dominantes, con base a su morfologa colonial: las lisas redondas, color crema y 113elevada produccin de muclago. Estas son caractersticas presuntivas distintivas tpicas de BPCV, 114crecida en un medio mineral, sin nitrgeno combinado como el agar Ashby. 115 Para la inoculacin de las RB en plantas de trigo, cada una se multiplic en matraz de 250 mL 116con 50 mL de caldo nutritivo (Bioxon), en agitacin rotatoria a 150 rpm a 30C durante 48 h. Luego cada 117RB, se lav con solucin salina por centrifugacin a 1500 rpm, para usar un inculo de RB suspendido en 118solucin salina (NaCl 0.85%), a una densidad de 9.8 x 103 UFC mL-1, determinada por la tcnica de 119cuenta viable. De cada RB se usaron 2 mL de suspensin, para inocular plntulas de trigo (var Pavn F12076), crecidas en una mezcla de suelo-arena (1:4) esterilizada, en el sistema hidropnico de jarras de 121Leonard. El reservorio contena 500 mL de la solucin nutritiva para plantas, esterilizada de Jensen (g L1221): CaHPO4, 0.1; K2HPO4, 0.02; MgSO4.7H2O, 0.02; NaCl, 0.02; FeCl3, 0.01; pH 7; mL L-1 de la solucin 123de micronutrimentos (g L-1): H3BO3, 0.05; MnSO4, 0.05; ZnSO4, 0.005; Na2MoO4, 0.005 y CuSO4, 0.002. 124Enriquecida con el equivalente a 60 kgN ha-1, en forma de urea correspondiente al 50% de la dosis, 125recomendada para la regin. Las plantas de trigo se mantuvieron en invernadero (25C/19C) hasta la 126etapa 10.5 de la escala de Feeke (Large, 1954). Al llegar a esta etapa fisiolgica, se tomaron 10 plantas 127de trigo, para determinar su peso seco. 128 Con base al resultado obtenido, se seleccion la RB aislada de Aristida spp, que gener un 129incremento en el peso seco total del trigo, similar al peso seco registrado en las plantas, sin inocular y 130fertilizadas con 120 Kg Nha-1 (100%) de urea. Esta RB se identific como Pseudomonas putida segn el 131sistema BIOLOGMR. Lo que adems se confirm con el patrn bioqumico tpico de este gnero (Valdivia132Urdiales et al., 1999). 133 Los HMA se aislaron de malezas comunes de la zona: R. luteola y E. sativa. Las races se 134separaron de la parte rea, luego se lavaron con agua para eliminar el suelo, despus se tieron con la 135tcnica propuesta por Phillips y Hayman, (1970). El inculo de HMA se prepar con races de las 136malezas cortadas, molidas y tratadas con kanamicina 0.1 gL-1 para eliminar bacterias. Las races se 137secaron a temperatura ambiente, se molieron por separado en un mortero en asepsia (Luna y Snchez138Yez, 1991). Para la inoculacin del trigo, las semillas se desinfectaron con NaOCl (hipoclorito de 139sodio) al 10% por 3 min, luego se lavaron cinco veces con agua destilada esterilizada. Las semillas de 140trigo se mojaron con sacarosa al 10% (p/v) y se inocularon con 0.1 g de cada HMA. 141 Estas semillas se sembraron en el sistema de jarras de Leonard en la condicin previamente 142indicada. Los HMA aislados de R. luteola y E. sativa e inoculados en races de trigo, provocaron un 143aumento en su crecimiento, medido como peso seco, en comparacin con las plantas sin inocular, pero 144fertilizado con la dosis 100% de UN y los PO. 145 Las esporas de los HMA, que causaron el efecto positivo sobre el crecimiento del trigo; se 146separaron, tamizaron y decantaron (Gerdeman y Nicolson, 1963). Posteriormente se realiz su 147identificacin como miembros del gnero Glomus (Morton, 1988). A cada uno se les design como G1 a 148Glomus aislado de R. luteola y como G2 al de E. sativa (Valdivia Urdiales et al., 1999). 1493.2. Marcaje de P. putida. 150 Para evaluar la colonizacin de P. putida en las plantas de trigo, se le marc con antibiticos. 151Para ello, la RB se cultiv en un matraz de 250 mL con 50 mL de caldo nutritivo (Bioxon), en agitacin a 152150 rpm a 30C por 24 h. Luego P. putida se sembr en agar nutritivo para determinar su resistencia153susceptibilidad a 12 antibiticos (multidiscos Gram Negativo, Senofi). As como su tolerancia a 200 g 154mL-1 de trimetoprim-sulfametoxasol (Bactrin, Roche). Para asegurar su recuperacin de la rizsfera del 155trigo sembrado en campo. 1563.3. Preparacin de los inoculantes. 157 P. putida se cultiv en matraz de 250 mL con 50 mL de caldo nutritivo, este matraz se agit 158rotatoriamente a 150 rpm a 25C por 30 h, hasta alcanzar una densidad de 10 3 x 106 UFC mL-1. El

159soporte para el transporte de P. putida fue turba canadiense molida en molino elctrico, para un tamao 160de partcula equivalente a una malla de 2 mm y esterilizada en autoclave a 120C durante 2 h. P. putida 161se mezcl con la turba para obtener el inoculante usado en el campo. ste se madur a 20-25C durante 16215 a 20 das hasta alcanzar una densidad de 3.5 x 109 UFC g-1. El inoculante a base de HM se prepar 163con races desinfectadas y molidas de R. luteola, as como de E. sativa. 1643.4. Siembra, inoculacin y fertilizacin de trigo. 165 Antes de la siembra del trigo, se realiz un muestre del suelo a 30 cm de profundidad y se 166determinaron algunas de sus propiedades fsicas y qumicas importantes para el ensayo como: textura: 167Arena 52.5%, limo 24%, arcilla 23.5%, este suelo se clasific como arenoso-limoso, pH 8.3 (alcalino); 168con un porcentaje en materia orgnica de 1.92% (pobre); con un nivel de nitrgeno total con un valor de 1690.12 % (muy pobre); con un valor de carbonato total de 36.3%, que explica su elevada alcalinidad y con 170una concentracin baja del fsforo aprovechable de 32.5 mg kg-1 (muy pobre). 171 El terreno se prepar con tractor, segn la prctica cultural recomendada para la regin. Se 172trazaron parcelas de rendimiento de 4 m2 (2x2 m) con cinco surcos cada una, separados a 30 cm. Se 173estableci como parcela til, una rea de 1.0 m 2 con tres surcos centrales. Las semillas de trigo se 174coinocularon con P. putida y Glomus spp, 12 h antes de la siembra, para lo cual las semillas se mojaron 175con sacarosa al 10% y se mezclaron con 0.2 g de G1 y/ G2 y 40 g del inoculante bacteriano. La 176siembra se realiz por el mtodo de chorrillo con una densidad de 150 kg de semilla ha -1, durante las 177primeras horas del da para evitar el efecto biocida de la radiacin solar sobre los microorganismos (Luna 178y Snchez-Yez, 1991). 179 La dosis de fertilizacin qumica recomendada para la regin fue de: 120-80-60 (INEGI, 1996). 180En referencia a la dosis del FN y fosfatos se evaluaron: 0, 60, 120 y 180 kg N ha -1, aplicadas como urea y 1810, 40 y 80 kgP205 ha-1 como superfosfato triple. Ambos fertilizantes se fraccionaron en tres partes iguales 182y se aplicaron manualmente en banda: al amacollamiento, en la antesis y al inicio del llenado de grano 183(Van Cleimput y Hera, 1996). 1843.5. Evaluacin de la absorcin radical del fertilizante adicionado, marcado como 15N-urea. 185 Para determinar el efecto de la coinoculacin, sobre la absorcin radical del N proveniente de la 186urea en el trigo, se fertiliz con el istopo estable del nitrgeno conocido como 15N-urea, con 10% de 187tomos en exceso de 15N. En siete microparcelas de 1.0 m2 cada una. Las semillas de trigo se 188coinocularon con: (a) G1, (b) G2, (c) P. putida y G1, (d) P. putida y G2, y (e) P. putida y G1+G2 y se 189fertilizaron con 60 kg de N ha-1 y 40 80 kg de P2O5 ha-1. Como se presenta en la fig. 5. Para el anlisis 190isotpico se cosecharon 20 plantas de trigo de cada microparcela, se trillaron mecnicamente y molieron 191a una partcula de 1.0 mm. Se analizaron por espectrometra de masa en la unidad del CINVESTAV, 192Irapuato, Guanajuato, Mex y se calcul el porcentaje del 15N derivado de la urea (Zapata, 1990). 1933.6. Diseo experimental y anlisis estadstico 194 Se estableci un diseo experimental completamente al azar, con un arreglo factorial de 195tratamientos con 4 repeticiones, 4 niveles de urea, 3 niveles de PO y 3 categoras de inoculacin (sin 196inocular, inoculado con P. putida+G1 con P. putida+G2). El trigo maduro, se cosech en forma manual y 197se trill mecnicamente. Se moli el grano y el vstago en molino elctrico para cuantificar el porcentaje de 198nitrgeno total (Nt) por el mtodo Kjeldahl y el rendimiento del grano (ton ha -1). Los resultados se 199sometieron a anlisis de varianza y comparacin de medias mediante la prueba de Tukey (P<0.01). 200 201 RESULTADOS Y DISCUSIN 2023.7 Dinmica de colonizacin de P. putida en el rizoplano del trigo. 203 La colonizacin del rizoplano del trigo por P. putida fue de 1.5 x 105 a 4.8 106 UFC g-1 races, reportado 204como suficiente (Simon et al., 2001; Garca et al., 1995) para ejercer un efecto positivo sobre la absorcin 205radical de la urea por el trigo. Lo cual probablemente favoreci la entrada de la UN y los PO. Se reporta 206que P. putida utiliza los ER del trigo y que es competitiva contra la poblacin microbiana nativa del suelo 207calcreo, por su adaptacin a este ambiente alcalino (Valdivia-Urdiales et al., 1999). 208La atraccin de P. putida por los ER, sugiere que la maleza Aristida spp y el trigo comparten un patrn 209de productos de excrecin radical similar, pues ambas son gramneas. Esto se apoya en que el trigo y las 210malezas de este trabajo, pertenecen a la misma familia (Thirup et al., 2001; Chelius y Triplett, 2000). No 211se estableci diferencia significativa en la densidad poblacional de P. putida en el sistema radical del trigo

212a diferentes niveles de UN de los PO, como tampoco en la etapa de crecimiento 10.5 de la escala 213Feeke (Large, 1954). Lo que sugiere que la poblacin de P. putida domin la zona rizosfera del trigo, 214como se reporta en experimentos semejantes al de este ensayo (Saubidet et al., 2002). 2153.8. Contenido de Nt en el grano del trigo. 216 En la Figura 1 se muestra que una correcta combinacin de P.putida + G1 increment el 217contenido en Nt en granos del trigo a pesar de reducir la dosis de UN a 60 kg N ha-1, este valor fue 218semejante al registrado en la concentracin del Nt del grano del trigo, empleado como control relativo 219fertilizado con 180 kg N ha-1 como urea y 40 kg de superfosfato triple, sin inocular. Adems se 220determin un aument en el Nt del grano de trigo coinoculado de un 24.4%, ms de lo reportado en el Nt 221del grano del trigo usado como control relativo de un 14.2%, pero no inoculado y con la dosis mxima de 222urea de 160 kg de N ha,-1. 223 La coinoculacin del trigo con P.putida y G2, sin UN y los PO, caus un incremento en el 224contenido de Nt en el grano de un 15.3%, similar, al Nt del grano del trigo usado como control relativo. 225La mezcla de P. putida + G1 con la dosis de 60 kg de N ha -1 como urea y 40 kg de P205 ha-1 (UN y PO 226dosis 50% menor), mejor la absorcin de UN, medido como Nt en el g.rano de trigo (Gyanesshwar et 227al., 2002). Con un valor semejante a la concentracin en el Nt del grano del trigo usado como control 228relativo, sin inocular y la dosis mxima de UN y los PO. 229 Adems, la Figura 1 muestra que en el grano del trigo sin inocular, el Nt fue bajo a pesar de 230que se le fertiliz con la dosis mxima de urea (180 kg de N ha-1). Se reporta que este resultado pudo 231ser consecuencia del pH alcalino del suelo (8.3), que redujo la capacidad de absorcin radical de la 232gramnea. Esto tambin indica que la dosis de UN recomendada para esta regin de Coahuila, en 233realidad supera la demanda real del trigo, agrava la ya crtica prdida de fertilidad del suelo y 234contribuye a la contaminacin de aguas superficiales y manto fretico (Valdivia-Urdiales et al., 1999), 235por el excedente de UN no absorbido por el trigo. 2363.9. Rendimiento de trigo. 237 En la Fig. 2, se muestra el rendimiento de trigo coinoculado con P. putida+G1 con la dosis 60 kg 238de N ha-1 como urea y de 40 kg de P205 ha-1, que alcanz un valor similar al logrado en el trigo usado 239como control relativo con la dosis 100% de UN y PO recomendadas para la regin de 160 kg N h -1 como 240urea y 40 kg P ha-1 como superfosfato. Estos resultados muestran que una forma de resolver la absorcin 241de la UN en el suelo alcalino, no necesariamente aumentando la dosis de UN y de los PO y por el 242contrario apoya usar la coinoculacin con rizobacterias promotoras de crecimiento vegetal (Galvn, 2004; 243Bashan, 1998), para aumentar la absorcin radical, a la par con la solubilizacin de los fosfatos con un 244adecuado hongo micorrzico (Ames et al., 1983). En esta Fig. 2 tambin fue evidente el efecto negativo 245del elevado nivel de UN y de los PO, sobre el rendimiento alcanzado en el trigo no coinoculado empleado 246como control relativo con la dosis mxima de la UN, recomendada para los suelos calcreos del Noreste 247de Mxico. 248En comparacin con el valor del rendimiento en el trigo coinoculado, al reducir la dosis de urea y los PO, 249el cual fue superior en un 20% al valor del trigo no coinoculado. Este efecto positivo de la coinoculacin, 250sobre el rendimiento del trigo con P. putida y Glomus (Valdivia-Urdiales et al., 1999), supone que ambos 251microorganismos contribuyeron en una mayor absorcin de UN y los PO, al inducir de la proliferacin de 252pelos radicales, mediante sustancias promotoras de crecimiento vegetal (SPCV) por P. putida, que 253increment la absorcin de UN en las races del trigo, as como Glomus facilit la solubilizacin de los 254PO, para un crecimiento sano del trigo y en consecuencia un aceptable rendimiento (Germida y Walley, 2551997); en comparacin con la absorcin radical de UN y los PO en el trigo sin coinocular y fertilizado con 256la dosis 100% de UN y los PO. 257Lo anterior, fortalece la hiptesis que la coinoculacin con microorganismos, es clave en el 258aprovechamiento racional de la UN y los PO, para prevenir la prdida de fertilidad del suelo y reducir el 259costo de produccin del trigo, en suelo calcreo. El efecto de la coinoculacin en el trigo fertilizado con el 26050% de la dosis de la UN y los PO, fue similar al reportado en otras gramneas (James, 2000; Fester et 261al., 1999), inoculadas con la combinacin Pseudomonas y Glomus. En donde se informa que estos 262rizomicroorganismos favorecen la absorcin de UN y los PO y que eventualmente pueden incrementar el 263rendimiento del trigo (Saubidet et al., 2002). En comparacin con los valores obtenidos en las plantas de 264trigo con la dosis 100% de UN y los PO, pero sin microorganismos.

265 266 267El efecto de la estimulacin del crecimiento del trigo por P. putida y Glomus spp, apoya una accin 268sinrgica de ambos, para aumentar la absorcin radical de UN y los PO, fenmeno que se reporta en la 269naturaleza, por interacciones ecolgicas de este tipo y/ simbioticas: raz-microorganismo, como en el 270caso de suelos calcreos que tienen deficiencia de estos elementos esenciales para cultivos agrcolas 271como el trigo (Carlsson y Huss-Danell, 2003; Requena et al., 2001; Dukestra et al., 1987; Ames et al., 2721983). 2734. Absorcin radical de 15N urea. 274 En la Fig. 3, se muestra que la absorcin de UN marcada con el istopo estable 15N fue de un 27544%, en el trigo usado como control relativo y sin coinocular. En el vstago del trigo coinoculado con P. 276putida + G1 y la dosis reducida de 60 kg de N ha -1 como urea y con 40 kg de P205 ha-1, comprobado con 277el istopo estable 15N-urea, que registr que absorbi un 54.5% del nitrgeno derivado del fertilizante 278(NdF). Este resultado fue similar al NdF registrado en los vstagos de trigo usado como control relativo 279con la dosis mxima de UN y los PO no inoculado. En algunos casos se registr, una disminucin en la 280concentracin del NdF medido como 15N-urea absorbido por la planta. Tanto en la raz como en el 281vstago del trigo coinoculado con P. putida y los hongos micorrizcos: G1+G2. 282 En general, se determin un incremento en la absorcin del NdF marcado como 15N- urea. Estos 283datos apoyan una actividad favorable de promocin del crecimiento vegetal estimulado por P. putida 284(Saubidet et al., 2002; Simon et al., 2001; Valdivia-Urdiales, 2000), que aument en un 44% el ingreso de 285la urea en el trigo. Este efecto se apoy por el valor del N 15 de esta planta, similar de UN marcado con 28615N, registrado en el trigo usado como control relativo con la dosis mxima de UN y los PO. 287 Estos resultados coinciden con diversos reportes al respecto (James, 2000; Clark y Zeto, 1996), 288quienes sealan que la absorcin radical del 15N-urea, en genotipos de trigo, vara entre un 23 al 51%, 289dependiente del tipo de rizomicroorganismo inoculado en cereales (Sanford y Mackown, 1982). El trigo 290coinoculado con P. putida + G1 y la dosis 50% de UN y los PO absorbi un 54.5% ms UN, lo que se 291confirm por la concentracin del contenido en 15N en el vstago. 292 A diferencia de lo registrado en el vstago del trigo usado como control relativo, de un 44% de N 293absorbido con la dosis mxima de UN y los PO. Estos resultados apoyan que una adecuada seleccin y 294combinacin de P. putida y Glomus favorecen una mejor actividad fisiolgica de las races del trigo, para 295una mayor absorcin de UN. Simultneamente y en consecuencia de la accin de Glomus, hubo una 296mayor solubilizacin de los PO (Reis et al., 2000; Xavier y Germida, 1997). 297 La absorcin radical medida con el 15N-urea, decreci en el trigo coinoculado con P. 298putida+G1+G2, probablemente por la competencia entre las especies de Glomus, como se reporta en 299otras gramneas y leguminosas (Xavier y Germida, 1997), inoculadas con una mezcla de hongos 300micorrizcos. Este dato reafirma la necesidad de seleccionar correctamente una combinacin rizobacteria 301y hongo endomicorrzico que realicen una accin sinrgica en la absorcin de UN y PO (Valdivia302Urdiales, 2000; Valdivia-Urdiales et al., 1999). 303 304Figura 1. Efecto de Pseudomonas putida+Glomus spp. sobre el N total en el grano del trigo.

305 306

307

308

309 310 311 312Figura 2. Efecto de la inoculacin de Pseudomonas putida+Glomus spp. sobre el rendimiento de trigo. 313Leyenda igual que Fig.1. 314

(b)

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317 318

319 320 321Figura 3. Efecto de la inoculacin con Pseudomonas putida y Glomus spp. sobre la de absorcin de 15N322urea en vstago y grano del trigo a 60 kg de N ha -1. Trigo usado como control relativo sin inocular y con 323120 kg de N ha-1+80 kg de P205 ha-1; G1; P.putida+G1; P. putida +G1+G2; G2; P. putida+G2.

324 325

SI

P.p+Gi

P.p+G2

CA

CR

326 327

328 329

330 331 332 333 CONCLUSIONES: 334 El efecto positivo de Pseudomonas putida y Glomus sp sobre la absorcin radical de urea 335marcado como 15 N-urea en plantas de trigo, sugiere que la coinoculacin es una alternativa viable, para 336la produccin de trigo a dosis reducidas de UN y los PO en suelos calcreos. Lo cual evita el incremento 337en las dosis de UN y un mayor costo de produccin del cultivo. La coinoculacin contribuye en la solucin 338del problema del bajo rendimiento del trigo en suelo calcreo, comn en algunas zonas productoras del 339noreste de Mxico. Adems, reduce la aplicacin de un exceso de UN y PO que contribuyen a la prdida 340de materia orgnica en el suelo y provocan contaminacin de agua superficial y subterrnea. 341 Agradecimientos. 342 Al apoyo del Instituto de la Potasa y el Fsforo, A.C., Mxico, Norte y Centro Amrica. A la 343Agencia Internacional de Energa Atmica Research Contract D1-MEX-1994. Al proyecto 2.7 de la CIC 344de la UMSNH (2005-2006) por la facilidades para su publicacin. Al Dr. Juan Jos Pea-Cabriales y M.C. 345Antonio Vera del CINVESTAV-IPN, U. Irapuato, Gto. por los anlisis isotpicos de muestras vegetales. A Grano 346Beatriz Noriega-Gamboa por su trabajo secretarial. 347 348 REFERENCIAS

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3491. 350 351 3522. 353 3543. 355 3564. 357 3585. 359 360 3616. 362 363 3647. 365 366 3678. 368 3699. 370 37110. 372 373 374 37511. 376 37712. 378 379 38013. 381 382 38314. 384 38515. 386 38716. 38817. 389 390 39118. 392 39319. 394 39520. 396 39721. 398 39922. 400 401

Ames, R.N., Reid, C.P.P., Porter, L.K. and Cambardella, C. 1983. Hyphal uptake and transport of nitrogen from two 15N-labelled sources by Glomus mosseae, a vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. New Phytol.95: 381-396. Bashan, Y. 1998. Inoculants of plant growth-promoting bacteria for use in agriculture. Biotech. Advances 16: 729-270. Clark, R.B. and Zeto, S.K. 1996. Mineral acquisition by mycorrhizal maize grown on acid and alkaline soil. Soil Biol Biochem. 28: 1495-1503. Carlsson, G, and Huss-Danell, K. 2003. Nitrogen fixation in perennial forage legumes in the field. Plant and Soil. 253: 353-372. Chelius, MK. and Triplett, E.W. 2000. Prokaryotic Nitrogen Fixation; Model system for the analysis of a biological process. Ed. Horizon Scientific Press, Hwitts Lane Wymondahm NR18. England. pp:1-20. Dukestra, A.F., Scholten, G.H.N. and Van Veen, J.A. 1987. Colonization of wheat seedling (Triticum aestivum) roots by Pseudomonas fluorescens and Bacillus subtilis. Biol. Fert. Soils. 4: 41-46. Fester, T., Maier, W. and Strack, D. 1999. Accumulation of secondary compounds in barley and wheat roots in response to inoculation with arbuscular mycorrhizal fungus and co-inoculation with rhizosphere bacteria. Mycorrhiza 8: 241-246. Gyaneshwar, P., Kumar, G.N., Parekh, L.J., Poole, P.S. 2002. Role of soil microorganisms in improving P nutrition of plants. Plants and Soil 245: 83-93. Garca, M.M., Moreno, P.E.Z, Pea-Cabriales, J.J, y Snchez-Yez, J.M. 1995. Respuesta del maz (Zea mays L.) a la inoculacin con bacterias fijadoras de nitrgeno. Terra 13: 71-80. Galvn, G.D. 2004. Sistema sostenible de produccin de trigo (Triticum aestivum L.) mediante labranza de conservacin, abono verde e inoculacin con Bacillus cereus. Tesis Doctoral. Universidad de Colima-Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo. Tecomn, Col. Mxico. p: 10-30; 60-80. Gerdeman, J.M. and Nicolson, T.N. 1963. Spores of mycorrhizal endogone species extracted from soils by wet sieving and decanting. Trans. Brit. Mycol. Soc. 46: 235-244. Germida, J.J. and Walley, F. L. 1997. Plant growth-promoting rhizobacteria alter rooting patterns and arbuscular mycorrhizal fungi colonization of field-grown spring wheat. Biology and Fertility of Soils 23: 113-120. Heungens, K, and Parke, J.L. 2000. Zoospore homing and infection events; Effects of biocontrol bacteriun Burkholderia cepacia AMMDR1 on two oomycee pathogens of pea (Psium sativum L).Appl. Environ. Microbiol. 66:5192-5200. Instituto Nacional de Estadstica, Geografa e Informtica (INEGI). 1996. El Sector Agropecuario en el Estado de Coahuila. ISBN 970-13-1678-9. Mxico. James, E.K. 2000. Nitrogen fixation in endophytic and associative symbiosis. Field Crop. Res. 65:197-209. Large, E.C. 1954. Growth stages in cereals. Plant Pathol. 3:128-129 Luna, O. H.A. y Snchez-Yez, J.M. 1991. Manual de prcticas de microbiologa del suelo. 3ed. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Autnoma de Nuevo Len, Monterrey, N.L. Mxico. pp: 120-143. Marschner, H. 1995. Mineral Nutrition of Higher Plants. 2 ed. Academic Press Limited. USA. pp. 566-595. Morton, J.B. 1988. Taxonomy of mycorrhizal fungi: classification, nomenclature and identification. Mycotaxon. 32: 276-324. Muoz-Garca, A. and Valds, M. 1995. The population dynamics of maize rhizoplane inoculated with Pseudomonas and Azospirillum. Rev. Lat. Amer. Microbiol. 37: 305-313. Patten, CH.L, and Glick, B.R. 2002. Role of Pseudomonas putida indolacetic and in development of the host plant root system. Appl. Environ. Microbiol 98:3795-3801. Phillips, J.M. and Hayman, D.S. 1970. Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi or rapid assessment of infections. Trns.Br.Mycol.Soc. 55:158-161

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