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Colegio de estudios cientificos y tecnologicos del estado de michoacan.

Platel 05 guacayas
Especialidad: analisis y tecnologia de los alimentos submodulo 3: Analisis Microbiologico a leche y poductos lacteos practica 1: Determinacion de staphylococcus aureus en alimentos (leche pasteurizada) Docente: Elizabeth Pea Sanchez alumno: Alejandro Damian Andrade grupo: 303-c intregantes: Karina, Monserrat, Alejandro EQUIPO 2

objetivos: realizar adecuadamente la cuantificacion de staphylococcus aureus en alimentos, mediante la tecnica descrita en la norma oficial mexicana. Explicar el fundamento de todos las etapas del metodo de derteccion de staphylococcus aureus en alimentos

introduccion: Staphylococcus aureus, conocido como estafilococo ureo o comnmente estafilococo dorado, es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmovil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimndose que una de cada tres personas se hallan colonizadas, que no infectadas, por ella. Puede producir una amplia gama de enfermedades, que van desde infecciones cutneas y de las mucosas relativamente benignas, tales como foliculitis, forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como celulitis, abscesos profundos, osteomielitis, meningitis, sepsis, endocarditis o neumona. Adems, tambin puede afectar al aparato gastrointestinal, ya sea por presencia fsica de Staphylococcus aureus o por la ingesta de la enterotoxina estafiloccica secretada por la bacteria. En la actualidad, este microorganismo se encuentra como el principal causante de las infecciones nosocomiales. Esta situacin se ve favorecida por el hecho de que esta especie habita tanto en las mucosas como en la piel de los seres humanos, lo que permite que a travs de las heridas quirrgicas pueda penetrar en el torrente sanguneo del paciente por medio del contacto directo o indirecto con el personal sanitario, con un objeto contaminado o incluso con otro paciente. Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los antibiticos ms eficaces para combatirlos a los aminoglucsidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina.Adems de la administracin del tratamiento antimicrobiano correspondiente, puede ser conveniente, en funcin del caso, la eliminacin de puertas de entradas como catteres venosos permanentes o drenajes quirrgicos

Desorrollo de la practica 1.- reactivos -NaOH 1N -Agar de sal y manitol -KH2 PO4 (Fosfato de potacio monobacico). Con Ph=7.2 (Agua fosfatada preparar 1Litro 0.1ml) 2.- materiales 7 cajas de petri 1 matras erlenmeyer de 250 ml 6 pipetas de 1.0 ml 1 pipeta de 10 ml 1 asa de platino (no esterilizar) 2 tubos con rosca 16 x 150 mm 1 probeta de 100 ml (no esterilizar) 2 mecheros bunsen 1 pizeta 1 frasco de cultivo 2.- procedimiento preparar el material y esterilizar correctamente con forme a la norma Calentar y fucionar el agar utilizando una parrilla elecctrica, agitando constantemente. Llenar las cajas de 15 a 20ml de agar de sal y manitol y dejarlas solidificar. Toma 10g de muestra de leche. Adicionar la muestra al frasco de cultivo esteril ( o matraz Erlenmeyer de 250ml previamente esterilizado) q contienen los 90.0ml de solucio amortiguadora de fosfato 0.1M esteril de Ph 7.2 o agua peptonada esteril al 0.1% (1:10). Adicionar 9ml de agua fosfatada al primer tubo y adicionar 1ml de la dilucin 1:10 (1:100). Adicionar 9ml de agua fosfatada al segundo tubo y adicionar 1ml de la dilucin 1:100 (1:1000). Transferir 0.1ml de las diluciones 1:10, 1:10, y 1:1000 a cada caja respectivamente, extender el 0.1ml de inoculo con la ayuda de una asa bactereologica sembrando en forma de estras. Invertir las placas e incuvar a 35+-1C. Durante 24 a 48h. Despus de incubar, observar y contar las colonias caractersticas de sete microrganismo en el agar sal y manitol. Estas se presentan como : colonias amarillas encendidas.

PREPARACION DE NaOH 1N Preparar 100ml de solucin de Hidroxido de sodio 1N Pesar 4g de Hidroxido de sodio, disolver y aforar a 100ml con agua PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO (Agar de sal y manitol): Disolver 111g del medio en 1L de agua destilada. Reposar de 10 a 15 min. Calentar agitador frecuentemente hasta el punto de ebullicin durante 1min, hasta disolverlo por completo. Esteriizar y vaciar en caja de Petri.

NOTA Preparar solo 150ml de medio de cultivo de agar de sal y manitol por equipo para una determinacin por duplicado con una dilucin de 1:10, 1:100, 1:1000 y un blanco.( Llenado de siete cajas de Petri). Preparacion de agua fosfatada Disover 34g en 500ml de H2O agustar a Ph 7.2 con NaOH 1N. Aforar con agua a 1L.(En un matraz volumtrico). Homogenizar perfectamente la solucin.(Solucion Madre). Tomar 1.25ml de la la sulucion madre y llevarla a 1L con agua.(Solucion de Trabajo). Vaciar en matraces Erlenmeyer de 500ml ambas solucione y esterilizar a 121C por 15min. A 15lb de precion. Una vez ya esterilizadas las dos soluciones guardar la solucin madre para practicas posteriores.(De preferencia en refrigeracin). De la solucin de trabajo tomar una alcuota de 90ml. (Pipeta de 10ml esteril). Y vaciar en el frasco de cultivo (o matraz Erlenmeyer de 250ml. Previamente esterilizado) y adicionar 9ml de solucin en cada tubo respectivamente (desechar el reto de la solucin.

resultados conteo de placa (1) 1:10= 25 (2) 1:10= 4 (1) 1:100= 7 (2) 1:100= 6 (1) 1:1000= 0 (2) 1:1000= 0

25+4= 29/2= 14.5 x 10 = 145 u.f.c

7+6= 13 /2 = 6.5 x 100 = 650 u.f.c

conclucion en esta practica aprendimos a derminar Staphylococcus aureus en los alimentos y derivados de la leche. En nuestras cajas si uvo cresimiento de staphylococcus aureus que tiene una forma de putos amirillos encendido.

firma del alumno:

alejandro damin andrade