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Nanos is known as an evolutionarily conserved Nanos se conoce como un conservadas evolutivamente ARN-protena de unin, la funcin de los cuales est

implicada en el desarrollo de clulas germinales. Esto incluye el mantenimiento tanto de las clulas germinales primordiales (PGCs) y la lnea germinal las clulas madre. En ratones, Nanos2 exhibe una caracterstica nica en que su expresin se induce slo en las clulas germinales dentro de la gnada sexual masculina determinado. Nanos2 promueve diferenciacin de clulas germinales macho, mientras que simultneamente la supresin de un programa hembra. Adems, es tambin Nanos2 expresa en las clulas madre de espermatogonias y funciona como un factor intrnseco para mantener la poblacin de clulas madre durante la espermatognesis. Detalle citolgico y bioqumico anlisis en embriones gnadas masculinas en el ratn han revelado que Nanos2 se localiza en el P-cuerpos, centro de procesamiento del ARN. Tambin se ha demostrado que el Nanos2 interacta con los componentes de protena de la deadenylation complejo implicado en la etapa inicial de la ARN la degradacin de la va. Introduccin El gen Nanos codifica una protena de unin de ARN que contiene un motivo dedo de zinc y se identific por primera vez como un gen de efecto materno en Drosophila requiere para abdomen formacin de. Ms tarde se descubri que el ARNm de Nanos y protena se incorporan en la lnea germinal y clulas progenitoras son necesarias para la formacin funcional de clulas germinales [2]. La funcin de Drosophila Nanos no se limita solamente a la el desarrollo temprano de las clulas germinales durante el embrionario etapa. El producto cigticos se ha demostrado estar involucrados en el mantenimiento de las clulas madre de lnea germinal mediante la prevencin la diferenciacin de clulas madre en el ovario [3]. Drosophila Nanos tambin se conoce para trabajar con Pumilio como un represor de traduccin a travs de su unin a un Nanosresponse elemento (NRE) situado en el 3 'no traducida regin (UTR) del ARNm de sus destinatarios [4]. Sin embargo, Nanos es no implicado en la diferenciacin sexual de las clulas germinales o en la regulacin de la meiosis en Drosophila. Nanos relacionadas con los genes han sido estudiados en varios otros invertebrados como sanguijuela Helobdella robusta (HRO-nos) [5], erizo de mar, C. elegans (nos -1, -2 y nn nn -3) [6] y Hydra magnipapillata (Cnnos1 y Cnnos2) [7] y en vertebrados tales como Xenopus laevis (Xcat -2) [8], el pez cebra Danio rerio (NOS1 y NOS2) [9], medaka (nanos1a, 1b y nanos2) [10] y humanos (Nanos1-3) [11]. Es notable que

los tres genes en C. elegans Nanos trabajar de forma redundante para la supervivencia de las clulas germinales en la etapa larval, mientras NOS-3 est implicada en el mecanismo de cambio de esperma-ovocito en hermafroditas a travs de su interaccin directa con FBF, un Pumilio protena de la familia [12]. El genoma del ratn contiene tres genes Nanos, Nanos1 -3. Nanos1 se expresa en tanto embrionario y cerebros adultos y tambin en los testculos adultos. Sin embargo, Nanos1 ratones knockout muestran ninguna anormalidad y son frtiles, lo que indica que este gen es prescindible para la clula germinal el desarrollo [13]. En contraste, Nanos2 y son Nanos3 expresado en las clulas germinales embrionarias, y una deficiencia en estos genes da como resultado la prdida de las clulas germinales. Nanos3 es activado en las CGP de los primeros [14], y aunque estas clulas desarrollar y son capaces de migrar a la cresta genital en Nanos3 nulo ratones, su nmero es muy reducido en la animales knockout. Por lo tanto, las gnadas de los homocigotos ratones muestran defectos tanto en el ovario y el testculo [14]. En contraste con Nanos3, la expresin de Nanos2 est restringido a las clulas germinales masculinas despus de su colonizacin de las gnadas y desempea un papel clave en la diferenciacin sexual de germen clulas, promoviendo el destino masculino, pero la supresin de lo femenino destino [15]. Nanos2 expresin de la protena se mantiene en todo gonocitos masculinos durante la embriognesis, pero se vuelve limitado a una pequea poblacin de las espermatogonias despus del nacimiento [16]. La evidencia actual indica que la gentica es Nanos2 necesaria para el mantenimiento de las clulas madre de espermatogonias [17]. En esta revisin, la funcin de Nanos2 en lo sexual diferenciacin de las clulas germinales durante la embriognesis y en el mantenimiento de las clulas madre de espermatogonias despus del nacimiento ser discutido. Una vez que las clulas germinales ingresar ya sea el macho o crestas genitales femeninos durante la embriognesis, adoptan programas genticos completamente diferentes. Es bien conocido que la determinacin sexual de las clulas germinales es principalmente basado en el sexo de las clulas somticas que las rodean. De hecho, hay factores genticos intrnsecos que gua clulas germinales diferenciacin sexual han sido reportados. Nuestra reciente hallazgos indican que Nanos2 es una de las clulas germinales masculinas determinantes capaces de promover la diferenciacin masculina va. Adems, Nanos2 se requiere para el mantenimiento de la poblacin de clulas madre de espermatogonias. La posibles mecanismos moleculares que subyacen a las funciones de los esta protena tambin se discuti sobre la base

de los hallazgos recientes en nuestro laboratorio. La diferenciacin sexual de las clulas germinales en las gnadas de ratn Los factores involucrados en la determinacin del sexo de las clulas germinales Las clulas germinales son bi-sexual potencial en la etapa de la migracin, y su sexo-especficas de diferenciacin comienza despus de su colonizacin en las gnadas en alrededor de E10.5 (Fig. 1). La las clulas germinales de ambos sexos todava conservan la potencia para diferenciar en ambos sexos hasta E11.5, pero las clulas germinales masculinas se han encontrado en experimentos de co-cultivo de conversin destino a comprometerse con la espermatognesis por E12.5, 1 da antes de lo las clulas germinales femeninas [18]. Una vez comprometidos a la normal proceso de desarrollo, las clulas germinales femeninas entrar en meiosis E13.5, mientras que las clulas germinales masculinas someten a la detencin del ciclo celular en G1/G0 y nunca entran en meiosis durante el embrionario etapas de desarrollo [19]. Se sabe que el microambiente es importante para la diferenciacin sexual de los las clulas germinales y que el sexo de las clulas germinales sigue el sexo de las clulas somticas que los rodean [20]. SRY la expresin en clulas somticas desencadena la diferenciacin sexual de las gnadas masculinas. Sin embargo, los factores necesarios para la diferenciacin sexual de las clulas germinales han sido durante mucho tiempo no identificado. Hace tres aos, varios informes muy indicado que el cido retinoico (RA) es la meiosis inductor factor requerido para las clulas embrionarias germinales femeninas [21, 22]. Adems, la funcin de Dazl, conocido como un regulador de la traduccin que contiene un motivo de unin a ARN, se ha implicado en el mecanismo por el que las clulas germinales adquirir la competencia para entrar en meiosis como RA sealizacin no tiene efecto en la meiosis en PGCs si la funcin es Dazl comprometidos [23]. Sin embargo, el mecanismo molecular subyacente a la accin de Dazl sigue siendo desconocido. En masculino gnadas, se ha demostrado que el fracaso de las clulas germinales a introducir la meiosis es atribuible a la funcin de Cyp26b1, que se expresa en la gnada masculina y funciones a los destruir la AR [21, 24]. Esto indica que es un Cyp26b1 el factor inhibidor de la meiosis (Fig. 1). Nanos2 y la diferenciacin sexual de las clulas germinales En la va de sealizacin de la AR, un gen RA-sensible Stra8 se ha implicado en la replicacin del ADN premeitica, y las clulas germinales femeninas que carecen de esta funcin de genes no llegan a acceder meiosis [22]. Inversamente, en las clulas germinales masculinas falta Cyp26b1, Stra8 es hasta reguladas, y esto da lugar a la la induccin de la meiosis. Estos dos estudios knockout mouse establece as un vnculo importante entre la AR funcional sealizacin y Stra8 expresin, es decir, como reguladores de la

meitica iniciacin. Un fenotipo similar se observa en Nanos2 nulo las clulas germinales masculinas en las que Stra8 expresin est regulada, y como resultado, se inicia la meiosis [15]. Sin embargo, en Cyp26b1 nulos testculos, Stra8 induccin se produce en E13.5, similar a la fase en la que se induce en los ovarios embrionarias, pero esto no ocurre hasta E14.5 en Nanos2 nulos testculos. Esta diferencia parece ser debido a la presencia de Cys26b1 expresin en Nanos2 nulos gnadas, que es normalmente superior a E12.5-13.5, pero se vuelve gradualmente reducido despus de E13.5, similar a la situacin en la de tipo salvaje. La reduccin de Cyp26b1 podra facilitar la regulacin al alza de RA, que a su vez puede conducir a Stra8 induccin. En el wildtype ratn, Nanos2 comienza a expresarse a partir de E13.5 cuando Cyp26b1 es downregulated, y como resultado, no Stra8 expresin se observa. Estas observaciones indican fuertemente Nanos2 que se requiere para suprimir la expresin Stra8, que de otro modo causada por la sobre regulacin de la AR sealizacin, para evitar que las clulas germinales masculinas de entrar en la meiosis. Esta idea se ve apoyada por los anlisis de hembra las clulas germinales que expresan ectpicamente Nanos2 (Fig. 2). La supresin de Stra8 se observa en estas clulas, y este eventualmente conduce a la supresin de la progresin de la meiosis. Sorprendentemente, los efectos de la expresin no son Nanos2 limitado a la supresin de la meiosis, pero tambin muestran la promocin efectos en el programa de macho. Hay varios indicadores de este, que incluyen la regulacin de la masculina germinales de clulas especficas de genes, tales como Dnmt3L [25] y Tdrd1 [26], y la induccin de un estado epigentico de tipo masculino que implica modificaciones especficas de las histonas. Por lo tanto, Nanos2 acta como un factor de clulas intrnseca que induce macho PROMOTORAS DE programas y, a su vez muestra las funciones supresoras de programas hembra (Fig. 2). Los resultados de los anlisis de chip de gende las clulas germinales Nanos2 nulos apoyan an ms esta idea como revelaron que muchas transcripciones involucrado en la meiosis y oogenesis son upregulated, mientras que las transcripciones que participan en promueven las caractersticas masculinas son downregulated. La mecanismos moleculares que conducen a tales cambios en la transcriptoma an no estn claros, pero son en parte mediada por la desestabilizacin de ARN interacta con Nanos2, como describen ms detalladamente en una seccin posterior. Funcin de Nanos2 despus del nacimiento La expresin de Nanos2 durante la espermatognesis En los testculos de ratn, la espermatognesis se inicia a partir de un pequeo subconjunto de clulas madre que pertenece a indiferenciada espermatogonias.

El tipo A solo (A s, aisladas clulas individuales), Un pareado (A pr, cadenas de 2 clulas), y A alineados (A otros, las cadenas de 4, 8, 16 o, en ocasiones clulas 32) espermatogonias son los ms conjuntos de primitivas de las clulas germinales en los testculos maduros observados y se describen colectivamente como espermatogonias indiferenciadas [27]. El patrn de expresin observado en el Nanos2 las fases embrionarias E16.5 declina despus, aunque la protena se conserva despus de los niveles de expresin de ARNm de disminuir [28]. Despus del nacimiento, las espermatogonias recuperar su proliferativa la capacidad y establecer el sistema de clula madre que da lugar a un gran nmero de diferenciacin de clulas espermatognica poblaciones. En testculos adultos, la expresin se restringe Nanos2 a una porcin de las espermatogonias indiferenciadas, especialmente la s A y A tipos de relaciones pblicas, y su expresin es gradualmente reducido en grupos de ms de cuatro clulas [29]. Esta patrn de expresin es bastante similar a la de GFRa1, una co-receptor para GDNF, y un factor que se sabe que se requiere para el mantenimiento de la clula madre de espermatogonias poblacin [30]. Sin embargo, esto plantea la cuestin de la si Nanos2 tiene ninguna funcin en el mantenimiento de los madre de espermatogonias poblacin celular. Nanos2 se requiere para el mantenimiento de clulas madre de espermatogonias Para dilucidar la funcin in vivo de ratn durante Nanos2 espermatognesis, una estrategia de Cre-lox condicional fue empleados en nuestro laboratorio desde Nanos2 nulos clulas germinales mueren por apoptosis antes del nacimiento. La prdida de condicional Nanos2 se indujo en 4-semanas de edad, los ratones machos por el adicin de tamoxifeno. El anlisis histolgico de secciones de testculo de los postnatales Nanos2 deficientes en ratones revelaron una prdida progresiva de clulas germinales con la edad (Fig. 3 A). En los ratones viejos 8-semanas (4 semanas despus de la induccin de la Nanos2 nocaut), una clara reduccin en el tamao de la tbulos seminferos era evidente, y despus de las 12 semanas nacimiento (8 semanas despus de la knockout), la mayora de estos tbulos carecan de clulas germinales. Estas observaciones indicaron que un Nanos2 por deficiencia provoca una prdida de clulas germinales- fenotipo dentro de unos pocos ciclos de espermatognesis. La falta de clulas germinales se revel claramente por inmunotincin con TRA98 [31], un marcador de estas clulas, y por la reactividad con un anticuerpo anti-PLZF, que detecta indiferenciada espermatogonias [32]. Una causa probable de esta reduccin es la muerte celular apopttica desde Nanos2 est implicado en la mantenimiento de los embriones masculinos gonocitos [14]. Sin embargo, posterior anlisis cuantitativo de clulas apoptticas utilizando poli ADP-ribosa polimerasa

(PARP) de escisin no muestran diferencias significativas entre el control y Nanos2 deficientes en los testculos. Por lo tanto, la apoptosis puede no ser la causas subyacentes de la prdida de clulas germinales en Nanos2 deficiente testculos. Nanos2 mantiene propiedades de clulas madre mediante la supresin diferenciacin Una deficiencia Nanos2 provoca el agotamiento de las clulas germinales debido a la prdida de la poblacin de clulas espermatogonias, indicando el requisito para el mantenimiento de clulas madre espermatogonias en una celda de manera autnoma. Para seguir haciendo frente a esta cuestin, se realiz un estudio de la funcin de ganancia (Fig. 3 B). Para lograr la expresin continua de Nanos2, la CAG-floxed-CAT -3 9 Bandera Nanos2 ratn transgnico fue cruzada con el ratn Nanos3-Cre [33]. El resultante progenie mostrar Nanos2 expresin de los embriones tempranos etapas en la mayora de las clulas germinales. El Nanos2 con sobreexpresin ratones machos son estriles, y los pesos testiculares se reducen de tal manera que la mayora de los tbulos retener clulas slo en el stano membrana espermatogonias donde residen habitualmente. Marcador El anlisis tambin revel claramente que SCP3 positivo meitica Las clulas se redujeron en estos Nanos2-overexpressing testculos, lo que indica que Nanos2 expresin impide la entrada de espermatogonias en la meiosis. Adems, C-kit de expresin, un sello de diferenciacin de las espermatogonias [34], fue rara vez se observa en los tbulos de Nanos2 con sobreexpresin testculos. En contraste, PLZF-positivo espermatogonias indiferenciadas Se encontr que el aumento en Nanos2- overexpressing ratones. Adems, estas clulas tenan menor las tasas de proliferacin y los niveles normales de apoptosis. Estos datos sugieren que las clulas que sobreexpresan Nanos2 mostrar caractersticas de las espermatogonias indiferenciadas y acumularse como resultado de la diferenciacin en lugar de comandos hiper-proliferacin o una reduccin en los niveles de apoptosis. Nanos2 espermatogonias indiferenciadas que expresan exhiben propiedades de las clulas madre'' reales'' En anteriores persecucin pulso experimentos con el gen Ngn3 promotor, Nakagawa et al., propone que dos tipos de espermatogonias poblaciones de clulas madre exista, es decir, real, y posibles compartimentos de clulas madre, entre los que Ngn3 podra expresarse ms altamente en clulas madre potenciales que clulas madre reales [35]. Para examinar las propiedades de endgenos Nanos2-expresando clulas y determinar as si presentan las caractersticas de real o clulas madre potenciales, una similar pulso de etiquetado experimento se llev a cabo en nuestro laboratorio. Un

ratn transgnico que expresa MCM (MER-Cre-MER), una versin TMinducible de la recombinasa Cre [36], bajo el control de la Nanos2 potenciador se cruzaron con ratones reportero para delinear la destino de toda la progenie de las espermatogonias Nanos2 que expresan (Fig. 3 C). Los ratones de 6 semanas de edad fueron sometidas a una TM pulso durante 5 das, y se sacrificaron a 7, 10, 18, 22 y 26 semana (ver ms abajo) de edad. Claras diferencias en la celda destinos entre el Nanos2 de linaje y anteriormente el inform Ngn3 de linaje se observaron incluso durante un corto rastreo perodo. A las 10 semanas, algunas clulas marcadas se observado en las clulas de amplificacin de trnsito, y este nmero era mucho menor que la de las clulas de linaje Ngn3. A saber, en el caso de la Ngn3-linaje, la mayora de la etiqueta las clulas se observaron como espermtidas diferenciadores, mientras en los Nanos2 de linaje, mayor nmero de indiferenciado espermatogonias se observ [17]. Las diferencias entre los dos linajes, tambin se observaron a las 18 semanas (3 meses despus de etiquetado) de los parches que contienen todas las etapas de las clulas germinales de espermatognesis, indicando la existencia de clulas madre. En el Ngn3 de linaje, el promedio nmero de parches se inform a ser 6,1 0,7 por testculo en 3 meses, mientras que en la Nanos2-linaje, este nmero fue de 86,5 8,1 por testculo. Estas cifras son notablemente ms altos que los de la Ngn3linaje. Tomados en conjunto, estos resultados apoyan la nocin de que la mayora de Ngn3- clulas que expresan son amplificadores de trnsito (clulas madre potencial clulas), mientras que las clulas que expresan Nanos2 contienen una gran nmero de clulas madre reales en lugar de trnsito de amplificacin- las clulas. Las funciones moleculares de Nanos2 Los estudios genticos han demostrado inequvocamente knockout las funciones crticas de Nanos2 tanto durante el embrionario etapas y la espermatognesis. Nanos2 se expresa en todos clulas embrionarias germinales masculinas y reprime el destino hembra vas por meiosis supresin, que a su vez resulta en la promocin de la suerte macho. Adems, una vez que su expresin se convierte limita a la espermatogonias ms primitivas las clulas madre despus del nacimiento, Nanos2 parece mantener el destino de clulas madre. Cmo Nanos2 regula tales funciones pleiotrpicos tanto, es una cuestin de gran inters. Para abordar esta cuestin, ser necesario completamente elucidar la naturaleza molecular de la protena Nanos2. Nanos2 localiza a P-cuerpos e interacta con el complejo deadenylation Nanos2 protena es primero detectable en E13.5 en el citoplasma de gonocitos masculinos, lo que aumenta la intensidad de la seal hasta sobre E16.5 [28]. Curiosamente, esta protena se encontr que era localizada en P-cuerpos, que son conocidos para funcionar como un centro de

la degradacin del ARN y de almacenamiento [37], puesto que Nanos2 claramente los focos se funden con los de DCP2 y XRN, los principales componentes de P-cuerpos. P-cuerpos estn presentes en ambos sexos en E12.5, se reducen gradualmente y con el tiempo perdido por E14.5 en gonocitos hembra, y se observan especficamente slo en las clulas germinales, pero no en las clulas somticas en E15.5 macho gnadas. Esto indica que Nanos2 est implicado en la formacin de P-cuerpos. Sin embargo, muchas de estas estructuras todava se observan tanto en Nanos2 / - y Nanos2 / - macho gonocitos en E13.5, aunque su nmero se reduce en el etapas posteriores en la ausencia de Nanos2. Esto indica que Nanos2 no es esencial para el ensamblaje de P-cuerpos, pero es requerida para mantener su estado normal. Nanos2 interacta con el funcional CCR4-NO deadenylation complejo y regula su localizacin La clave para la comprensin de las funciones moleculares de Nanos2 fue proporcionada por las bsquedas de protenas que interactan. En estos anlisis, se llevaron a cabo inmunoprecipitaciones utilizando extractos gonadales masculinas de Nanos2 / -? Y Nanos2 - / - embriones utilizando Nanos2 anticuerpos. Los principales protena exclusivamente precipit de Nanos2 / -? Gnadas se identific como CNOT1, un componente de la CCR4-NO deadenylation complejo [37]. Adems inmunoprecipitacin experimentos identificaron otros componentes de la CCR4- NO complejo (CNOT3, CNOT6L/Ccr4b, CNOT7/Caf1a y CNOT9/Rcd1), lo que indica que Nanos2 asociados con el deadenylation CCR4-NO complejo in vivo. Esto fue tambin confirmado por los anlisis histolgicos en el que CNOT las protenas se encontraron con colocalize Nanos2 en P-cuerpos, lo que sugiere que este complejo puede desempear un papel en las actividades de estos elementos. Lleg a ser de vital importancia para determinar si la deadenylase Nanos2-que interactan compleja realidad tena actividad cataltica, y para este propsito se utiliz un sistema in vitro ensayo deadenylase. La resultados de este experimento muestran claramente que la escisin de la poli (A) RNA substrato se produjo slo con Nanos2 inmunoprecipitados [38]. Esto indic que promueve Nanos2 la degradacin de mRNAs Nanos2-que interactan a travs de la actividad del complejo deadenylase CCR4-NO. Curiosamente, CNOT3, un componente de CCR4-NO complejo deadenylation, se encontr que era claramente a localizar P cuerpos en Nanos2 / -? Gnadas masculinas, mientras que slo el dbil seales se encontraron en P-cuerpos en ausencia de Nanos2, aunque la abundancia de CNOT3 protena se mantuvo sin cambios. Estos datos sugieren que Nanos2 promueve la localizacin de la deadenylation CCR4-NO complejo a Pcuerpos. Nanos2 interacta con los ARNm especfico y puede promover su degradacin Sobre la base de la hiptesis de trabajo que promueve el Nanos2

degradacin de mRNAs Nanos2 interactan mediante la contratacin de el complejo deadenylation, se ha especulado que el Nanos2 complejo contiene ARNm especficos que son degradados travs de una va dependiente de deadenylation. En tales casos, se espera que los niveles de expresin de transcritos de muchos sera hasta reguladas en la ausencia de Nanos2. Estos posibilidades se examinaron por primera vez por los anlisis comparativos de la transcriptomes de macho de tipo salvaje y Nanos2 nulo gnadas. Curiosamente, muchas transcripciones se encontraron estar arriba o hacia abajo-regulada en ausencia de Nanos2. Para ejemplo, los genes que son altamente expresado slo en machos gonocitos, tales como Dnmt3L [25], Tdrd1 [26] y Miwi2 / Piwi-like 4 [39], son las reguladas en el Nanos2 - / macho gnadas, mientras que el Figla [40], Lhx8 [41] y Nobox [42] genes, que han demostrado ser esenciales para slo ovognesis y no para la espermatognesis, se acumulan en las gnadas masculinas Nanos2 nulos. Estos resultados sugieren que Nanos2 nulos gonocitos hombres no pueden entrar en las vas macho y por lo tanto llegar a ser feminizado por la sobre regulacin de tipo hembra genes. Es de destacar en particular que Stra8, un gen clave para la replicacin premeiotic, es fuertemente regulados hasta en la ausencia de Nanos2, que es coherente con el hecho de que los niveles de protena son Stra8 hasta reguladas en estas condiciones. Parte de la molecular base para la regulacin de tales transcripciones es muy probable a ser la estabilizacin de ARN a travs de la supresin de ARN la degradacin por el complejo Nanos2-deadenylation. Esta posibilidad se examin mediante anlisis RT-PCR de ARN que co-precipitado con Nanos2. Curiosamente, las transcripciones de SYCP3 [43], Stra8, Taf7l [44], Dazl y Meisetz [45] genes que estn implicados en la meiosis, fueron especficamente detectado en la protena Nanos2 precipita a pesar de su muy baja expresin en las gnadas masculinas [38]. En contraste, los G3PDH, Dnmt3L, y mRNAs Dnmt3a no mostr ningn acumulacin especfica en la Nanos2 precipitados, aunque todos ellos son altamente expresado en las gnadas masculinas. Estos datos indican que los ARNm implicados en la meiosis especficamente interactuar con Nanos2 in vivo. Basndose en estos resultados, un modelo de trabajo de la funciones moleculares de Nanos2 puede ser propuesta (Fig. 4). Lo Se sabe que las protenas Nanos no estn directamente involucrados en reconocimiento de ARN diana [46], y est implicado en Pumilio objetivo de seleccin en otros animales [12, 47]. Dado que el socio protena no ha sido identificado todava en embriones de ratn, hemos denotado como X este factor en nuestro modelo. En wildtype gonocitos masculinos, mRNAs especficos son reconocidos por los Nanos2 en complejo con X e incorporado en la CCR4 NO-deadenylation complejo que se contrataran a P-cuerpos a travs de

mecanismos mediados Nanos2. Estos mRNAs de sustrato entonces seran degradados por las enzimas contenida en el P-cuerpos despus de un acortamiento de la poli (A) cola por las subunidades catalticas de la deadenylation CCR4-NO complejo. Sin embargo, en ausencia de Nanos2, la CCR4 NO complejo deadenylation no pueden acceder y degradar estas transcripciones, lo que conduce a su acumulacin en la gonocyte macho. Esperamos que algunos de estos mRNAs puede ser traducida, lo que resulta en la manifestacin de la Nanos2 - / - fenotipo. Perspectivas El Nanos2 ARN protena de unin contiene un dedo de zinc motivo que se conserva entre otras protenas Nanos expresado en muchas especies de mosca para la salud humana. Aunque homologa fuera del dominio de dedo de zinc es baja entre los las protenas Nanos, sus funciones como factores de clulas germinales conservadas, que incluye la supresin de la apoptosis, una evento que est crticamente asociado con varios aspectos de la el desarrollo de clulas germinales. Esta conservacin es tambin bastante interesante ya que cada especie animal utiliza un diferente estrategia de especificar y mantener su linaje de clulas germinales. Sin embargo, los Nanos materna ha demostrado ser involucrado en la especificacin de las clulas germinales mediante la supresin linaje de clulas somticas en Drosophila [48], que no es observado en ratones, aunque la funcin anti-apopttica de Nanos3 ratn en la etapa temprana de la migracin de las clulas germinales es evidente [33]. En contraste, Nanos no est implicado en la supresin de la meiosis o la diferenciacin sexual de germen las clulas en la Drosophila, donde est implicada en el mantenimiento de las clulas germinales madre de lnea. La base para esta especie diferencia es probable que dependen de los factores que interactan, que puede ayudar a coordinar la funcin Nanos. En trminos de esta funcin, es interesante considerar que los Nanos las propias protenas no estn nicamente involucrados en la seleccin de ARN diana. En Drosophila, Pumilio est implicada como una factor que determina la especificidad Nanos objetivo [49]. En ratn, Pumilio2 tambin est indicado como un socio candidato protena para Nanos2 y Nanos3 para seleccionar ARN diana [50]. Sin embargo, en lo que hemos observado, ni Pumilio1 ni Pumilio2 es una protena que interacta con Nanos2 durante el etapa embrionaria. Las protenas principales que se encontraron co precipitado con Nanos2 en nuestros experimentos estn componentes del complejo deadenylation, y estos interacciones eran ARN-independiente. Por lo tanto, la mayor funcin de Nanos2 en las clulas germinales de ratn parece ser el la degradacin de ARNs dianas para prevenir el inicio de inadecuados programas genticos o caminos. Sin embargo, nos tambin han encontrado que Nanos2 se requiere para la progresin de las vas varones normales y que la mayora de las

transcripciones asociado con esta va son las reguladas en las gnadas masculinas Nanos2 nulos. Actualmente se desconoce si ste es tambin dependiente de la degradacin de ciertos ARN tales como los que codifican represores transcripcionales. Alternativamente, Nanos2 podran estar implicados en otros mecanismos que conducen a la acumulacin de mRNAs por facilitando su almacenamiento en P-cuerpos para la traduccin futuro cuando sea necesario. Sin embargo, los mecanismos por los que se dirigen RNAs son seleccionados por el complejo Nanos2-deadenylation, y si los RNAs son reclutados a P-cuerpos a travs de un Nanos2 mecanismo dependiente, an no se ha dilucidado.