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PRACTICA NO. 2 MEDIO DE CULTIVO OBJETIVO: Conocer los diferentes medios de cultivos y tcnicas de sembrado. INTRODUCCION

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Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metablica de los microorganismos es enorme; por ello la variedad de medios de cultivo es grande, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos. Un medio de cultivo debe contener una forma asimilable: Nitrgeno y Protenas, Lpidos e Hidratos de Carbono, distintas Sales Minerales, factores de crecimiento (Vitaminas), agua, extractos de carne o levaduras. Deben ser estriles, poseer propiedades buffer, y una viscosidad ptima. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Los principios generales que rigen la preparacin de un medio tanto en forma natural como utilizando medios sintticos deshidratados, son en general: 1. Asegurar cantidades adecuadas de substancias estimulantes del desarrollo, pensando con exactitud los distintos ingredientes. 2. Adaptar la reaccin final del medio de cultivo a un pH ptimo. 3. Emplear la menor filtracin posible. 4. Emplear el mnimo de calor en la esterilizacin. Los medios de Cultivo se clasifican de acuerdo al: Estado fsico: lquidos, semislidos y slidos. Segn su composicin: simples, enriquecidos. Al uso al que se destinen.

METODOS BASICOS DE INOCULACION 1. Siembra por picadura o siembra profunda: Se utilizan tubos que contengan un medio solido o semislido, o un medio solido inclinado. Se introduce el asa recta cargada, casi hasta el fondo, utilizando una trayectoria recta y teniendo cuidado de que el trayecto de salida sea el mismo. Un medio de cultivo inclinado puede inocularse por picadura y estraque en la superficie, en este caso se efecta primero la picadura. 2. Siembra por estras o siembra superficial: El estriado sobre las superficies de placa de agar o en medios inclinados es usado especialmente para aislar cultivos puros a partir de especmenes que contienen flora mixta las caractersticas de homogeneidad de las colonias aisladas permiten la diferenciacin de las cepas.

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La siembra por estras consiste en extender el material por cultivar en lneas paralelas o estras cubriendo ampliamente la superficie de forma que las bacterias al ir avanzando se distribuyan y finalmente puedan depositarse clulas aisladas. La siembra por estras en medios inclinados se inicia en el fondo del tubo, al principio de la superficie inclinada. MATERIAL Bolsa Roja 3 vasos de precipitados de 250 ml. Soporte Universal Mechero Rejilla de Asbesto 3 Agitadores de Vidrio 3 Cajas de Petri 1 Abate lenguas 3 Asa de Siembra Agua Destilada 3 diferentes frmulas de medio de cultivo Fruta en descomposicin Portaobjetos Guantes Cubre bocas Palillos de Madera

DESARROLLO DE LA PRCTICA Empleando diferentes medios de cultivo, realizar la preparacin de cada medio en 1.1 g. de polvo agar en 50 ml de agua destilada en un vaso de precipitado. Mezclar bien con agitacin frecuente y hervir durante 1 min. Distribuir en cajas de Petri, todo este procedimiento debe hacerse junto al fuego. Flamear la tapa de la caja de Petri y dejar en la mesa reposar para que el agar solidifique adecuadamente (en caso de realizar en cajas de vidrio). Si se realiza en cajas de plstico dejar reposar sin flamear, hasta que solidifique. Una vez solidificada tome el asa de siembra y ponerla en el fuego al rojo vivo. Para realizar la siembra tomar una muestra de la parte interna del contorno de las uas, con el palillo y depositarlo en el portaobjetos, posteriormente con el asa tomar la muestra y llevar a cabo la siembra en la tcnica de estra, colocar la tapa de la caja petri, sellarla e introducir la caja a la estufa a una temperatura de 37. Observar resultados 72 horas despus. EVALUACION Realizacin de los medios de cultivos. Observacin de resultados. Presentacin de reporte.

BIBLIOGRAFIA Gerhardt, p,. Methods for general and molecular bacteriology. American society for microbiology, Washington, 1993. Murray P. R., Kobayashi. g. s., Rosenthal, K.s,. MicrobiologiaMedica. 2ed. Harcourt brace, 1997.