I.

EFECTO DE LAS HORMONAS ENANTATO DE TESTOSTERONA (ET) Y UNDECANOATO DE TESTOSTERONA (UT) EN LA INDUCCIN DE LA REVERSIN SEXUAL DE LA TILAPIA HBRIDA ROJA (Oreochromis spp) II.RESUMEN

Los mayores problemas en los sistemas tradicionales de produccin de alevines de Tilapia son: reproduccin incontrolada, baja produccin de huevos en cada desove, alta frecuencia de desoves, puestas asincrnicas y canibalismo de larvas, temprana madurez sexual, obtencin de larvas y alevines de diferentes tallas, baja fecundidad, tiempo invertido y desgaste energtico durante el cuidado parental (Macintosh y Little 1995; Suresh 1999; Prieto et al 2002). Los Andrgenos como las testosteronas actan sobre los rganos y caracteres sexuales secundarios, en las hembras producen virilizacin y puede inhibir y suprimir la maduracin de los folculos ovricos cuando aun las tilapias hembras no han diferenciado aun el tejido gonadal. En producciones comerciales de tilapias se emplean tilapias monosexo machos dado que estas presentan una mejor tasa de crecimiento; existe una gran variedad de hormonas que se emplean revertir el sexo como la Metiltestosterona (MT), la Etiltestosterona (ET), la Dihidrotestosterona (DT), Mibolerone. el Acetato de Trenbolone (AT), la Etiniltestosterona (ET), Dietilestilbestrol (DEB), el Propionato de Testosterona (PT), Fluoximesterona (FM) y la Mesterolona. Todas estas hormonas se tienen que importar de otros pases, elevando los costos de produccin de alevines. En el mercado nacional existen dos hormonas andrgenicas de estructura qumica similares a las mencionadas que no se han evaluado y que podan ser una alternativa para nuestro pas. El objetivo del presente trabajo de investigacin es determinar el efecto, concentracin y tiempo de exposicin a las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y Un decanoato de Testosterona (UT) en la induccin de la reversin sexual de la Tilapia Hbrida Roja (Oreochromis spp). III.- ANTECEDENTES Y FUNDAMENTACIN CIENTFICA 3.1. ASPECTOS BIOECOLGICOS

Tilapia es un trmino genrico utilizado para denominar un grupo de especies de peces de valor comercial que pertenecen a la familia Cichlidae que incluye ms de 70 especies, a las que por sus caractersticas biolgicas y ecolgicas se las divide en tres principales Gneros, que son el Gnero: Sarotherodon Oreochromis y Tilapia. Son originarias de frica y el Medio Oriente; ms de 75 pases producen tilapias que incluyen 30 en frica, 12 en Asia, 7 en el Caribe,

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13 en Latinoamrica 9 en Centroamrica y los EE.UU., Blgica entre otros (Baltazar 2001; Baltazar 2000; Castillo 1994). Tienen una tendencia hacia hbitos alimenticios omnvoros, aceptan fcilmente alimentos elaborados artificialmente. Para reproducirse necesitan temperaturas superiores a los 20 C. El nmero de huevos por desove, como el tamao de los huevos es proporcional al peso corporal de la hembra. La hembra de la especie Oreochromis niloticus incuba sus huevos y las cras en la boca, los machos permanecen en el rea de nidacin, delimitando y protegiendo su territorio. Las tilapias alcanzan su madurez sexual a un tamao pequeo (50 g) y a una edad temprana (2 mes de nacidos). Las tilapias viven en aguas estancadas o con poca corriente y encuentran refugio en las mrgenes de los pantanos y riberas bajo el ramaje entre piedras y races de plantas acuticas. Muchas especies son de hbitos territoriales particularmente durante la temporada de reproduccin. Su territorio se observa claramente definido y defendido de los depredadores e intrusos que atacan a sus cras, y puede ser fijo o desplazarse a medida que las cras nadan en busca de alimento. La sistemtica de la tilapia segn Berg y modificada por Trewavas es la siguiente: o o o o o o o o o o Phylum Subphylum Superclase Serie Clase Orden Suborden Familia Gnero Nombre comn Chordata Craneata Gnathostomata Pisces Actinopterygii Perciformes Percoidei Cichlidae Oreochromis Tilapia, Mojarra, carpa

Dentro del Gnero Oreochromis, en forma intempestiva aparece la tilapia roja como una mutacin albina en un cultivo artesanal de tilapia Oreochromis mossambicus de coloracin normal (negra) cerca de la poblacin de Tainan (Taiwn) en 1968. El cultivo a nivel comercial de la Tilapia Roja, comenz a presentar un desarrollo acelerado a partir de la dcada de los 80 en pases sin tradicin acucola suramericanos como: Colombia (introducida en 1982), Venezuela (introducida en 1989) y Ecuador (introducida en 1993) en forma casi simultnea con pases Centroamericanos, Caribeos y Norteamericanos. 3.2. ASPECTOS BIOLGICOS DE LA DETERMINACIN DEL SEXO

Los mecanismos de la determinacin del sexo de las tilapias se encuentran en una condicin lbil primitiva (Lagler et al 1984), es muy inestable despus de la absorcin del saco vitelino y puede ser afectado por factores externos e internos, el sexo se puede definir en un estadio final del desarrollo de la

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postlarva, Moreno et al (2003) y Fajardo et al (1995) demuestran que pasados los 12 mm de longitud el tejido gonadal se comienza a diferenciar y Hiott y Phelps (1993) encontraron que alevines de 11 mm de longitud total tena una eficiencia de reversin sexual del 96 %, notndose que baja la efectividad conforme se incrementa la edad y la talla. El sexo en las tilapias lo definen los cromosomas sexuales y un gen sexual autonmico simple que tiene alelos mltiples (Jalabert et al 1974, Manosroi et al 2003). Tave (1989), establece la participacin del Factor Determinante del Testculo (FDT) en un gen de los cromosomas para Y, que libera una sustancia proteica que preserva la definicin testicular y dems estructuras del sistema reproductor del macho. La no presencia del FDT, provoca la prdida de la seal especfica de la protena, por lo que los rganos sexuales que se encuentran indiferenciados se definen como ovarios y otras estructuras del sistema reproductor de la hembra. Las especies Oreochromis poseen un nmero diploide de 44 cromosomas autosmicos, en las especies O. niloticus y O. mossambicus el macho es heterogamtico (XY) y la hembra homogamtica (XX); en otras especies la hembra es heterogamtica (WZ) y el macho es homogamtico como ocurre con las especies O. urolepsisi hornorum y O. aureus. El gen con el factor Determinante para macho con cromosoma Z ejerce una dominancia que el gene con el Factor Determinante para las hembras en el cromosoma X, mientras que el gene con el Factor Determinante para machos con el cromosoma Y es ligeramente Dominante sobre el gene con Factor Determinante para las hembras con el cromosoma W. Lo cual unido a los genes de origen autosmicos A y a y el FDT permiten explicar las alteraciones frecuentes en las proporciones mendeliana de sexos esperados (Lovshin 1982, Castillo 1994). Dentro de la produccin a escala comercial de alevines monosexo de Tilapia, se aprovecha la condicin lbil primitiva en la definicin del sexo de estos peces. Las caractersticas biolgicas relacionadas en la determinacin del sexo de la Tilapia que permite la aplicacin de la tcnica de la reversin sexual como: o El sexo en las tilapias es muy inestable poco despus de la eclosin de las larvas y puede ser afectado por factores externos e internos. o El sexo en estos peces se define en un estadio final del desarrollo de la postlarva, en una longitud que puede variar dependiendo de la especie entre 11 y 20 mm (Moreno et al 2003; Fajardo et al 995; Hiott y Phelps 1993, Popma 1987). El perodo crtico larval de inestabilidad sexual facultad el poderlos intervenir para determinar el sexo en la mayora de los peces Para la obtencin de machos el suministro de un andrgeno por va oral de alto poder andrognico es la tcnica por la cual se puede revertir a la mayor parte de la poblacin (> 95

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%); planificndose cultivos monosexuales con un alto rendimiento en la produccin por hectrea en piscigranjas comerciales. 3.3. ANDRGENOS

Los andrgenos son esteroides derivados del ciclopentano-perhidrofenantreno, se encuentran estructurados por cuatro anillos unidos entre si; tres anillos fenantreno completamente hidrogenados (perhidro), designados literalmente como anillos: A, B y C se encuentran conformados por seis tomos de carbono, adems de un anillo ciclopentano, designado como anillo D contiene cinco tomos de carbono. La numeracin de los tomos de carbono se efectan correlativamente (Fig 1). Los andrgenos, bsicamente la testosterona, son segregados por los testculos, pero tambin por los ovarios en las hembras y por la corteza suprarrenal. Los andrgenos pertenecen al grupo de los compuestos denominados C19 derivados del androstano. La testosterona, hormona sexual masculina tiene 19 tomos de C, una doble ligadura entre C4 y C5, un tomo de O en C3 y un grupo hidroxilo en la posicin de C17. Esta estructura es necesaria para el
mantenimiento de la actividad andrognica.

ANDRGENO

TESTOSTERONA

Fig. 1. Estructura qumica del andrgeno y de la Testosterona

La testosterona es sintetizada a partir del colesterol en las clulas de Leydig de los testculos, la corteza suprarrenal y en las clulas tecales del ovario. Varios derivados se originaron a partir de modificaciones de la estructura de la testosterona: el agregado de grupos metilos en C1, C7 y C17 aumenta la actividad biolgica. La 17-- metil-testosterona es un derivado especial porque conserva su accin andrognica y es activa por va oral. La fluoximesterona es un derivado fluorado en C9 de la metiltestosterona. Estos derivados alquilados de la testosterona son metabolizados lentamente en el hgado, luego de su absorcin oral. La esterificacin de la testosterona en posicin del OH en C17 incrementa la liposolubilidad de la testosterona y prolonga su accin. El propionato de testosterona es particularmente activo por va parenteral y de accin relativamente corta, 1-2 das. El enantato, el undecanoato, el ciclopentilpropionato y el cipionato, son andrgenos de accin prolongada. Administrados por va intramuscular profunda producen efectos andrognicos 2-3 semanas. Los steres son convertidos en testosterona libre en la circulacin (Malgor et al 1975; Marcillo y Landivar 2000).

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3.4.

ACCIONAR HORMONAL EN LAS TILAPIAS

Los andrgenos actan sobre los rganos y en los caracteres sexuales secundarios, acta en el sexo masculino, as como tambin en el femenino. Poseen una potente accin metablica. Su accin fundamental consiste en el desarrollo de los caracteres sexuales secundarios; comportamiento reproductor; maduracin de los gametos en los machos, contribuyen al crecimiento general y a la sntesis de protena tal como acontece con las protenas miofibrilares, presentada por la mayor masa muscular de los machos en relacin a las hembras en muchos de los vertebrados (Lagler et al 1984; Eckert et al 1992). En el sexo femenino produce fenmeno de virilizacin y puede inhibir y suprimir la maduracin de los folculos ovricos (Marcillo y Landivar 2000). 3.5. EXPERIENCIAS CON HORMONAS MASCULIZANTES

Los primeros trabajos de reversin sexual fueron desarrollados por primera vez en la Universidad de Auburn, en Alabama, EUA (Macintosh y Little 1995). Posteriormente, Jalabert et al (1974) realizaron la reversin sexual de la Tilapia del Nilo, O. niloticus, utilizando la hormona 17--metiltestosterona (MT), en dosis de 40 mg de la hormona incorporada a un kilogramo de alimento balanceado. En 1978, Tayamen y Shelton evaluaron los andrgenos Etiniltestosterona (ET) y la MT, as como los estrgenos Dietilestilbestrol (DEB) y Estrona (E), administrados oralmente, encontrando que se podran obtener poblaciones 100% machos utilizando ET y MT en una dosis de 30 mg por kilogramo de alimento, durante 30 y 59 das de tratamiento respectivamente. McGeachin et al (1987) realizaron pruebas con la hormona Etiniltestosterona (ET) a concentraciones de 60, 90, 120 y 240 mg por kilogramo de alimento y con la MT a concentraciones de 60, 90 y 120 por kilogramo de alimento, ambas por un periodo de 22 das, obteniendo para la ET un 100% de reversin para los cuatro tratamientos y para la MT 99, 98 y 96% de machos respectivamente. Vera-Cruz y Mair 1994 probaron la MT en dosis de 40 mg por kilogramo de alimento en la Tilapia del Nilo (O. niloticus) a una densidad de 1 000 alevines por metro cuadrado en estanques y hapas, obteniendo porcentajes de machos de 98.4 y 95.4 respectivamente. Probaron tambin, una dosis de 60 mg por kilogramo de alimento a densidades de 1 000, 3 000 y 5 000 alevines por metro cuadrado en hapas, obteniendo porcentajes de reversin de 91,2, 96,7 y 99,4 respectivamente. Jimnez et al (1998b) probaron la efectividad de la MT, la Fluoximesterona (FM) y el Propionato de Testosterona (PT), a una dosis de 40, 1 y 5 mg por kilogramo de alimento, obteniendo un porcentaje de machos de 98,9, 80,6 y 67,6 respectivamente. Jimnez et al (1998 a) encontraron que una dosis de 5 mg de FM en un kilogramo de alimento en 35 das de tratamiento permite obtener hasta el 100% de machos. Phelps et al (1992) probaron la hormona FM en dosis de 0,2, 1, 5 y 25 mg/kg de alimento, encontrando una produccin de 100% machos en las concentraciones de 1, 5 y 25 mg. Otros datos indican que el tratamiento hormonal se debe iniciar con alevines menores de 11 mm de longitud total, un peso de 0,1 g y de cinco das de edad, para que ste sea eficiente, aunque tambin se han logrado buenos resultados con alevines con una edad menor a los 19 das (Hiott y Phelps 1993; Jimnez et al

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1998 a). Arias (1995) demuestra que la Mesterolona (ME) a una dosis de 90 mg/kg de alimento puede lograr masculinizaciones superiores a los 90 %. Allan et al (2004) mediante baos de inmersin (DMSO) a concentraciones de 0,04 %, 0,1 %, 0,3 %, 0,7 % y 1,0 % en Dimetilsulfxido y 0,5; 1,5; 2,5; 3,5; 4,5; y 5,5 mg de 17 alfa metiltestosterona/L, por un periodo de 36 horas, obteniendo que a 0,04 % de DMSO y 5,5 mg se obtienes 86, 15 % de tilapias masculinizadas. 3.5. PRODUCCIN DE ALEVINES MONOSEXO DE TILAPIAS

La produccin de alevines masculinizados de tilapias, busca contrarrestar la precocidad reproductiva de estos ciclidos, beneficiando el incremento de la produccin en los cultivos a escala comercial (Jalabert et al 1998; Fajardo et al 1995; Lovshin 1982) La tendencia es la produccin de alevines machos dado que estos peces tienen mayores tasas de crecimiento que las hembras. Las hembras por su capacidad precoz de reproduccin desvan mucha energa hacia la vitelogenesis. Se ha observado que retirando los huevos y las larvas, aun con saco vitelino, de la cavidad bucal de las hembras de Oreochromis spp., para continuar la incubacin artificialmente, se logra un control individual sobre los lotes de huevos/larvas, mayores tasas de supervivencias, tamao uniforme (8 mm) edad conocida (1 da) a los que se les puede aplicar en un 100 % la reversin sexual con hormonas de forma ms efectiva evitando problemas de canibalismo, mejor monitoreo de reproductores en trminos de produccin de huevos y alevines, adems permitira un programa de seleccin eficiente por familias y as se evitara la disminucin de la intromisin gentica. 3.6. PRODUCCIN DE ALEVINOS Y NECESIDADES NACIONALES

Existe ms de 600 piscigranjas de subsistencia, seis de escala menor y una a escala mayor, que se encuentran distribuidas en la costa norte, costa central y selva oriental del Per. Estas empresas requieren de un abastecimiento de aproximadamente de 10 millones anuales de alevines de calidad la cual no es abastecida en su momento teniendo que importarse alevines para desarrollar la etapa de engorde. Existe en nuestro pas alrededor de 8 laboratorios de produccin de alevines revertidos a machos, ubicados en los departamentos de Piura (American Quality), de Lima (Acua Huaura, Facultad de Pesquera- UNA y la Estacin de San Juan), de Ica (Centro de Acuicultura Tambo de Mora Fondepes), de San Martn (Estacin Pesquera de Ahuashiyacu y Marona ambas pertenecen a la DIREPRO y un tercero no legalizado la granja ARENYS ubicada en la Banda de Shilcayo (Tarapoto). Las empresas American Quality y Acua Huaura producen para autoabastecerse. Estimndose una produccin aproximada de 390 mil y 100

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alevines /mes respectivamente, las producciones de carne sirven para abastecer mercado americano. Los centros productores de alevines como Facultad de Pesquera- UNA, la Estacin de San Juan-Ministerio de Vivienda, el Centro de Acuicultura Tambo de MoraFondepes, la Estacin Pesquera de Ahuashiyacu, granja ARENYS (Tarapoto) y Marona (Moyollamba) comercializan sus alevines a terceros. Las producciones en conjunto se estiman en 212,5 millares/mes (Tabla 1). Estas Producciones de semillas posteriormente convertidas en carne abastecen principalmente mercados locales o regionales.
Tabla 1. Centros Productores de Alevinos de tilapia (Oreochromis niloticus y Oreochromis spp) al 2005
Centros Productores de Alevinas de Tilapia Facultad de Ingeniera Pesquera-UNA Estacin Productora de Alevines San Juan Centro de Acuicultura Tambo de Mora Estacin Pesquera de Ahuashiyacu Produccin Millares/anual 12,5 10 10 70 10 100 212,5 Costo Millar S/. 120 70 70 60 60 60

ARENYS
Estacin Pesquera de Marona TOTAL

Los alevines producidos por el Fondepes y la Universidad Agraria son comercializados en la Selva Oriental y a lo largo de la costa; y la produccin del Dpto. de San Martn se comercializa a los acuicultores locales.
Tabla 2. Entre el ao 2003 y 2005 se han introducido nuevos especies como reproductoras, as tenemos):
Especie Oreochromis niloticus x O. aurea Oreochromis niloticus O. urolepsis hornorun O. mossambicus O. aureans O. niloticus Procedencia Panam Panam Colombia Colombia Israel Costa Rica N 300 400 Ao 2004 2004 2005 2005 Institucin UNA UNA Fondepes Fondepes American Quality Acua Huaura

La mayora de los centros productores obtienen sus alevines mediante el sistema tradicional que consiste en colocar en los estanques de reproduccin 2 o 3 hembras por macho, luego esperar alrededor de 20 a 30 das para colectar los alevines y luego llevarlos a la reversin sexual con hormonas principalmente la 17 metil alfa testosterona. Al nacer los alevines estas tienen un tamao de 8 a 9 mm. Durante la colecta de alevines esta no es totalmente capturada, quedando en el estanque aun cohortes anteriores las que siguen creciendo en tamao. Cuando los animales sobrepasan los 13 mm la hormona sexual ya no es efectiva, dado que las gnadas se encuentran bien diferenciadas. Obtenindose por lo tanto bajos porcentajes de reversin sexual (60 a 80 %). Lo que a su vez ocasiona problemas durante la etapa de engorde dado que van haber reproducciones indeseadas y diferentes grupos en edad y

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tamao lo que entorpece las labores de cosecha en los estanques, as mismo las Tasas de Conversin Alimenticia tienden a incrementarse. En el Per las hormonas ms empleada para la reversin sexual es la 17 metil alfa Testosterona y la Mesterolona, ambas hormonas se tienen que importan de Norteamrica, del Ecuador, Colombia o Mxico, lo que eleva los costos de produccin de alevines. El costo de la Mesterolona es de US$ 20 dlares americanos por 500 mg y las dosis empleadas es de 90 mg/kg de alimento. El costo de la metil testosterona es de US$ 850 dlares americanos por 100 mg y la dosis empleada es de 60 mg/kg de alimento, ambas hormonas en las concentraciones sealadas sirven para revertir 700 alevines de tilapias. 3.6. PRODUCCIN MUNDIAL DE TILAPIAS Y MERCADO

Actualmente la produccin mundial de tilapia cultivada y pescada en ambientes naturales sobrepasa los 2 millones TM. La produccin total en 1990 fue de 830 mil TM y paso a 2 millones de TM en el 2001. Siendo la acuicultura la principal responsable de este crecimiento. 3.6.1. MERCADO DE TILAPIA EN LOS EEUU Desde hace algunos aos, en Estados Unidos las Tilapias son el tercer producto acutico ms importado despus del camarn marino y el salmn del Atlntico, y desde 1998 ha sido considerado el pez del ao. Entre 1992-2004, las importaciones de tilapia aumentaron de 3.400 TM a unas 112,900 TM. Paralelamente en el mismo perodo, la produccin de tilapia en los EEUU experiment un incremento de unas 2.300 TM a ms de 8.700 TM. Esto implica que el mercado norteamericano pas de consumir unas 5.700 TM en 1992, a aproximadamente 121,600 TM en el 2004. Durante el primer trimestre del 2005 EE.UU. haba importado alrededor de las 39 mil toneladas, estimndose que para fines de este mismo ao la importacin de tilapia sobrepasara las 120 mil toneladas (Baltazar et al 2005). 3.6.2 MERCADO EUROPEO El reino Unido es considerado como el principal mercado de salida de la tilapia de Europa. La tilapia tambin se comercializa en Francia, Blgica, Alemania, Holanda y en menores cantidades, en Austria, Italia, Suiza, Dinamarca y Suecia. Casi toda la tilapia que se comercializa en Europa proviene de las importaciones, dado que la produccin europea es bastante escasa. De acuerdo con las estadsticas de FAO la produccin acucola de tilapias en Europa en 1999 era de 270 TM. Los principales abastecedores son China, Jamaica, Brasil y Ecuador. Desde 1996 las importaciones europeas han mostraron un extraordinario incremento de 1820 TM a 7800 TM en el 2002, (Baltazar et al 2005) 3.6.3 SITUACIN NACIONAL La produccin de tilapia en el Per ha sido muy variable hasta 1990, siendo el Dpto. de San Martn el de mayor produccin, llegando a sobrepasar las 1000

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TM/ao. Entre 1998 y el 2000 , se realizaron cosechas de Tilapias de la Laguna La Nia- Sechura (Dpto. de Piura), las que fueron exportadas por la empresa Seafrost S.A.C principalmente a Italia, posteriormente declino la actividad al disminuir los niveles de agua de dicha laguna, siendo los volmenes de exportacin 1998: 181,35 TM, 1999: 140,19 TM y 2000: 37.01 TM. A partir del 2001 se le da una mayor importancia al cultivo de la tilapia apareciendo varias empresas a nivel comercial siendo las ms importantes y que aun persisten como por ejemplo Fondepes, AcuaHuaura SAC (Huacho), Melis Fishery S.A (Piura) y American Quality Acuaculture S.A (Piura). Durante el 2003 y 2004 se establecen Dpto. de Ica (Chincha, Pisco, Ica y Llipata) alrededor de 60 piscigranjas a nivel de subsistencia, las que en su conjunto han comercializaron en ese mismo periodo 1270 kg de tilapia entera a un precio que fluctu entre 5 a 9 soles el kilo. A nivel internacional, el precio de venta de filete fresco oscila entre US$ 4,44 y 6,68 /kg. Las tilapias peruanas del tipo fileteado fresco que se comercializaron al mercado norteamericano se encontraron en US$ 5,45 el kilo, durante el 2004 y en el 2005 en US$ 5,68. En el mercado nacional el precio de venta de la tilapia entera fresca, en los terminales pesqueros se la encuentra entre 8 a 9 soles kilo; en las piscigranja el kilo de tilapia viva, fresca entera se encuentra entre 5 y 9 soles el kilo. En las grandes tiendas de autoservicio de Lima se ofrece el producto al pblico a un precio de: tilapia entera entre 10 a 11 soles por kg, eviscerada entre 25 a 34 soles por kg y viva 20 soles kilo (Baltazar et al 2005). IV. JUSTIFICACIN

Las hormonas que se emplean para la reversin sexual en el pas se tienen que importar principalmente del mercado Americano, cuyos costos elevan la produccin de alevines en el Per. Pases como Ecuador, Mxico y Brasil mediante diversos trabajos de investigacin han logrado disminuir sus costos de produccin de alevines revertidos debido a que han experimentado con hormonas locales obteniendo buenos resultados. En nuestro mercado contamos con las hormonas sexuales masculinas como el Enantato de Testosterona (ET) y el Undecanoato de Testosterona (UT) de estructura qumica y de principio activo similar a las hormonas que se vienen empleando en la reversin sexual de las tilapias, cuyos costos son menores, pero que no se han sido evaluadas en la masculinizacin de los alevines de tilapias. La mayora de las producciones de alevines masculinizados que se expende en el pas presentan un porcentaje muy bajo de reversin sexual (60 a 80 %), debido a que no se emplean las hormonas y concentraciones adecuadas. Ello ocasiona que en los estanques de engorde existan altas tasas de conversin alimenticia, sobrepoblacin, bajas producciones por estanque, entre otros.

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La mayora de productores de alevines de tilapia roja mantienen el sistema tradicional que consiste en colocar los reproductores en los estanques de reproduccin, colectar los alevines y transferirlos a los estanques de reversin sexual, no existe un descanso y reacondicionamiento de reproductores ocasionando una notable cada de la productividad debido a las puestas continuas, al entrecruzamiento y sobrepoblacin de los estanques. El acondicionamiento y reacondicionamiento de los reproductores y la incubacin artificial de huevos y larvas de tilapia roja permitir obtener mayores producciones de alevines y a la vez evaluar si esta la tecnologa de produccin es adecuada para el pas. V. HIPTESIS

Con la incubacin artificial y la adicin de las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y el Undecanoato de Testosterona (UT) se lograran altas tasas de supervivencia de alevines hbridos de tilapia roja y un 100 % de animales revertidos machos. VI. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El Per cuenta con ms de 600 piscigranjas que se dedican al cultivo de tilapias, la mayora de ellas adquieren alevines para desarrollar la etapa de engorde de diversos centros de Produccin, quienes a la fecha vienen logrando reversiones sexuales a machos del 70 al 80 %, generndose un 20 al 30 % de animales no masculinizados, estos a su vez durante el desarrollo del cultivo se van reproducir ocasionado que se incremente la densidad de cultivo, las tasas de conversin alimenticia, disminuya los niveles de oxigeno y se incremente los niveles de amonio lo que su vez ocasiona una mayor frecuencia de bombeo de agua, al final todo esto conlleva a que los costos de produccin se incrementen notablemente. El problema se ve agudizado aun ms, dado que se tienen que importar las hormonas de reversin sexual y los costos de estas son muy elevados, para revertir 700 alevines se emplean 60 mg de metil testosterona cuyo costo es de US$ 510 dlares americanos. Por ello la mayora de piscigranjas que se encuentran asentadas en la Selva Peruana (Tarapoto, Iquito, Pucallpa, Amazonas, Selva Central) solo realizan el sexado manual, sea cuando los peces llegan a los 50 g son separados en machos y hembras, esta actividad requiere de mucha mano de obra y de una buena preparacin tcnica. Las empresas productoras de alevines de tilapias asentadas principalmente en la costa (Piura, Lima e Ica) empelan hormonas de reversin sexual teniendo que importarlas principalmente del mercado Americano. Por otro lado la mayora de centros de produccin de tilapias realizan el cultivo tradicional, los animales se aparean asincrnicamente en el mismo estanque donde se incuban los huevos y eclosionan las larvas y posterior a la cosecha de las larvas, los reproductores se reacondicionan para el siguiente ciclo sin intervencin por parte del productor. En este sistema es imposible recolectar todas las larvas, de forma que el estanque pronto estar superpoblado lo que aumenta la competencia por el alimento, el espacio y al canibalismo reduciendo

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la produccin de semilla. Las hembras de Oreochromis incuban las larvas en su boca durante 24 das, tiempo en el que no consumen alimento. Finalizada esta etapa, requieren dos semanas para reacondicionarse antes de volver a desovar, esto conduce a que los intervalos entre los desoves sean muy largos y se disminuye la vida reproductiva de las hembras. Existen muchos trabajos que demuestran que pasado los 13 mm el sexo de los peces esta definido y las hormonas no actan. Mediante la incubacin artificial se tiene un control individual de los lotes de huevos recolectados de cada hembra. Es decir, cada ovoposicin de una hembra puede ser incubada separadamente del resto de los huevos. Al poder incubar embriones de la misma edad, o con diferencia de edades muy cercanas, se obtienen poblaciones con diferencias de tamao mnimas lo que evita problemas de canibalismo, adems la tcnica de incubacin artificial permite un programa de seleccin eficiente por familias, y as se evita la disminucin de la introgresin gentica. As como el aprovechamiento del 100% de las larvas sexualmente indiferenciadas para someter a tratamientos hormonales de reversin sexual, con resultados por encima del 99% ya que cuando se reabsorbe el saco vitelino las larvas tienen un talla de 8 a 9 mm. No existe una hormona alternativa que nos permita disminuir los costos de produccin de alevines como si los tiene Estados Unidos, Costa Rica, Colombia, Venezuela con la 17-lfa-metiltestosterona; Mxico con la Fluoximesterona, Brasil y Ecuador con la Mesterolona. VII. OBJETIVO

Determinar el efecto, concentracin y tiempo de exposicin a las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y Undecanoato de Testosterona (UT) en la induccin de la reversin sexual de la Tilapia Hbrida Roja (Oreochromis spp). VIII. OBJETIVOS ESPECFICOS

o Determinar la concentracin ms adecuada en la que las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y Undecanoato de Testosterona (UT) permiten lograr un mayor porcentaje de alevines de Tilapia roja revertidos. o Determinar cual de las hormonas y el tiempo en que se produce un mayor porcentaje de reversin de alevinos de Tilapia roja. o Determinar el tiempo de exposicin en que se obtienen mayores porcentajes de alevines de Tilapia roja revertidos que son expuestas a las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y o Undecanoatode Testosterona (UT). o Determinar la utilizacin de la hormona ms eficaz que permita obtener altos porcentajes de alevines revertidos de Tilapia roja.

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IX.

CONTRIBUCIN E IMPACTO o Obtener una hormona que permita lograr reversiones sexuales al 100 %, que disminuya los costos de produccin y que puedan ser aplicados por los piscicultores de tilapias del Per. o Demostrar que la metodologa de la incubacin artificial permite una mayor sobrevivencia, tallas uniformes de alevines y un mayor porcentaje de tilapias masculinizadas, que permitirn que los piscicultores puedan lograr mayores rendimientos productivos en sus cultivos.

X.

METODOLOGA DE TRABAJO

Los experimentos se realizaron en las instalaciones del Centro de Acuicultura Tambo de Mora del Fondo Nacional de Desarrollo Pesquero (Fondepes), que se encuentra ubicado en el Distrito de Tambo de Mora, Provincia Chincha, Dpto. de Ica. Para el desarrollo del presente proyecto se empleara estanques de Reproduccin, una sala de incubacin (Hachery), jaulas de reversin sexual, estanques de engorde y acuarios de vidrio. 10.1. INFRAESTRUCTURA 10.1.1. Estanques de Reproduccin Se emplearan tres estanques de tierra de 20 m2 (10 x 2 m), los cuales tendrn un flujo continuo de agua, con un caudal de 30 L Seg-1. El agua que alimenta a estos estanques proviene de un manantial que se encuentra ubicado al interior del Centro de Acuicultura Tambo de Mora, que a su vez procede del agua subterrnea. En cada uno de los estanques se realizara una siembra de 1,6 ejemplares m-2, manteniendo la relacin sexual de 3 hembras: 1 macho; sea que en cada estanque se sembrara 32 reproductores: 24 hembras: 8 machos, siguiendo la metodologa descrita por Bhujel 2000; Suresh 1999. 10.1.2. Sala de Incubacin El laboratorio cuenta con 12 mesas de concreto, cada mesa con 20 bandejas de incubacin, con una red de distribucin y evacuacin de agua a base de tuberas de PVC. As mismo es alimentada con 6 toneladas de agua temperada a 28 - 30 C que discurren entre filtros de 1, 5 y 10 micras que a su vez pasan por lmparas ultravioletas, para lograr una mejor calidad de agua. Para esta fase de la investigacin solo se emplearan dos mesas y 36 bandeja de incubacin; cada bandeja contara con un flujo continuo de agua de 1 L s-1. Las bandejas sern de forma rectangular de color blanco, de fibra de vidrio con

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dimensiones de 40 x 25 x 8 cm, alrededor en la parte superior se dispondr de cuatro filas de perforaciones de 2 cm de dimetro protegidas con malla fina, para evitar la fuga de las larvas contenidas en ellas. Cada bandeja ser identificada con un cdigo y ser distribuir al azar de acuerdo al diseo experimental. La densidad de siembra ser de 375 huevos L1 , sea que cada bandeja tendr un total de 3000 huevos en incubacin. 10.1.3. Jaulas de Reversin Sexual Las jaulas contaran con una armazn de fierro de 3/8 recubiertas con malla mosquitera de dimetro de 1,5 mm. Se emplearan un total de 108 jaulas, cada una tendr una dimensin de 2 x 1 x 1 m (2 m 3), estas sern colocadas al interior de un estanque de tierra de 2500 m2, con recambios interdiarios de agua y solo del 50 % del volumen total. En cada jaula se sembraran una densidad de 500 alevines m-3, lo que equivale que cada jaula contenga inicialmente 1000 alevinos en reversin sexual. 10.1.4. Julas de Engorda Estas sern las mismas que se emplearan en la reversin sexual. La densidad disminuir y la abertura de la malla por jaula se incrementara conforme van creciendo los peces. Pasado la reversin sexual se tendr en cuenta la siguiente tabla:
ESTADIO Alevines: <0,002 g De 0,5 a 5 g De 5 a 50 g De 50 a 100 g De 100 a 150 g TAMAO DE (mm) Polvo 0,5 A 1 1x1 1 x1 2x2 TIPO DE ALIMENTO PREINICIO I CRECIMIENTO I CRECIMIENTO II ENGORDE ENGORDE DENSIDAD m3 500 200 100 50 25 TAMAO malla mm 1,5 5 15 30 50

10.1.5. Acuarios Se considera acuarios para realizar observaciones de comportamiento reproductivo las que sern filmadas empleando una cmara digital Panasonic modelo 300 X. Para estas observaciones se cuenta con 6 acuarios de vidrio doble de las siguientes dimensiones: 30 X 60 X 40 cm. 10.2. MATERIALES Y EQUIPOS Durante el desarrollo de la presente investigacin se empleara una serie de equipos que nos permitirn monitorear la calidad del agua en que se criaran los huevos, alevinos, juveniles y adultos de tilapias, estos son: Termmetro y oximetro digital marca YSI modelo 55, peachimetro digital marca HANNA, Modelo HI 9025 C, espectrofotmetro marca HACH, modelo DR/2010, cmara fotogrfica marca Canon 500 D, filmadora digital Panasonic modelo

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300 X, esteroscopio marca NOVA, Microscopio con cmara fotogrfica invertido marca NOVA, balanza digital marca Ohaus y un blower (aireador). Los principales materiales a emplear sern las bandejas de incubacin, los clcales, tinas, jarras, ictometro, lunas de reloj, pipetas, placas petris, chinchorros, marcadores, acuarios, mangueras. 10.3 METODOLOGIA

10.3.1. Reproduccin e Incubacin En estanques de reproduccin se colocara una proporcin sexual de 3 hembras: 1 macho, a una temperatura de 28 C, con valores de oxigeno > a los 3 mg/L y pH entre 7 a 8 (Bhujel 2000; Jimnez et al 1998; Little 1998; Macintosh et al 1995). El peso los reproductores machos ser de 200 a 300 g y de las hembras entre 100 a 200 g. segn lo sealado por Prieto y Oliva 2002. Paralelamente en acuarios se realizaran observaciones sobre el comportamiento reproductivo. Diariamente se revisara sobre el fondo del estanque la presencia de nidos, el cual indirectamente nos indicara que habra hembras sexualmente maduras. Cada 5 a 7 das se revisaran las hembras, los embriones sern retirados de la cavidad oral y se colocaran en incubadoras tipo bandejas con un flujo continuo de agua a razn de 1 L min-1 (Prieto y Oliva 2002; Zimmerman, 2000; Suresh 1999; Zimmerman, 1999; Little 1998). El agua para esta etapa deber ser sometida previamente a un proceso de filtracin a travs de filtros de gravilla o de arena, o un esterilizador de rayos UV con posterior recirculacin del agua, la temperatura del agua en esta etapa se mantendr en 28 C, empleando para ellos termostatos (Prieto y Oliva, 2002; Subasinghe y Sommerville 1988). Empleando un microscopio y esteroscopio con cmara fotogrfica se registrara diariamente el desarrollo embriolgico, la supervivencia y el crecimiento de los embriones y larvas. 10.3.2. Reversin Sexual Despus de la reabsorcin del saco vitelino, las larvas pasaran a las jaulas para iniciar la reversin sexual, en donde se sembraran a una densidad de 1000 alevines/jaula. Las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y el Undecanoato de Testosterona (UT) previamente sern disueltas en alcohol, luego mezcladas con el alimento balanceado (Preinicio I) para ser suministradas a una racin del 30 % de la biomasa total por da. Las concentraciones de las hormonas a experimentar sern de 30, 60, 90 y 120 mg/kg de alimento as mismo se probaran diferentes tiempos de suministro de las hormonas + alimento en un periodo de cultivo de 15, 25 y 35 das. As mismo se empleara la hormona Mesterolona para comparar los resultados con las hormonas experimentales.

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10.3.3. Evaluacin de sexos Para determinar el sexo de los organismos se realizara a travs de anlisis histolgicos el cual se realizara cuando las tilapias alcancen un peso aproximado de 5 g de (50 mm longitud total), 15 g y 50 g (Marcillo y Landivar, 2000; Rana, 1986). Paralelamente en las jaulas de engorde se mantendr una proporcin de la poblacin hasta que alcancen los 200 g para evaluar si existe reproduccin. Se proceder luego del experimento al anlisis heptico y de sangre para verificar si las hormonas ocasionaron ictericia o si estas se lograron metabolizar. De esta forma verificaremos si estos peces puedan ser consumidos sin riesgo que se pueda ocasionar efectos colaterales en la salud humana, por parte del incremento en el peso del anlogo hormonal (Marcillo y Landivar, 2000). Posterior a la reversin sexual, durante un periodo de 4 meses se mantendr una proporcin de la poblacin, hasta que alcancen los 200 g para evaluar los niveles de hormonas sexuales masculinas en la sangre de los peces. Los anlisis histolgicos sern realizados por el laboratorio Histologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y de los de sangre por la Facultad de Pesquera de la Universidad Nacional Agraria. 10.4 Diseo Experimental

Para los ensayos de reversin sexual se emplearn las hormonas Enantato de Testosterona (ET) y el Undecanoato de Testosterona (UT) a diferentes concentraciones y tiempos de suministros del alimento hormonado: 30, 60, 90 y 120 mg/kg de alimento y 15, 25 y 35 das respectivamente; as como para evaluar los porcentajes de masculinizacin. Como hormona de contraste se empleara la Mesterolona. Se utilizar un diseo factorial 2 x 3 x 4 x 3, es decir: 2 hormonas masculinizantes diferentes, 3 tiempos de aplicacin diferentes y 4 concentraciones diferentes de Enantato de Testosterona y Undecanoato de Testosterona y tres replicas. Las variables experimentales son las siguientes: Hormonas Tiempos de aplicacin Concentracin de Hormonas Repeticiones Blanco : Se aplicara 2: Hormonas masculinizantes (ET y UT) : Se aplicara 3: T1, T2 y T3 : Se aplicaran 4: C1, C2, C3, C4 y C5 : El experimento se realizara con 3 repeticiones: R1, R2 y R3. : Mesterolona

La densidad del cultivo ser de 1000 ejemplares / jaula

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10.5

De la evaluacin

Se monitorear diariamente (4 veces: 6:00, 12:00, 18:00 y 24:00 horas) los parmetros abiticos de los estanques de reproductores, de las bandejas de incubacin, de las jaulas de reversin sexual, crecimiento y engorde; con el fin de controlar las condiciones en que se est desarrollando el cultivo. Se analizar cada semana los parmetros qumicos del agua (amonio, nitrito, nitratos y dureza) a fin de observar como estos influyen en los parmetros del crecimiento. Para la toma de temperatura y oxigeno se empleara el equipo YSI 55, para el pH el equipo HANNA, para el amonio, nitrito, nitrato, dureza se empleara el espectrofotmetro HACH. Con un ictometro y una balanza digital Ohaus se monitorear cada semana la talla (Longitud estandar, longitud ceflica, altura ceflica, y altura mxima) y el peso de los animales en experimentacin, as mismo se llevara un registro de la cantidad de alimento suministrado. Para los muestreos biomtricos se considerara el 20 % de la poblacin que se encuentre en las bandejas o jaulas. Con estos datos, se calculara:
1. Tasa de Crecimiento Instantneo en Talla (mm) y Peso (g): W (%) = [ Wf Wi ] * 100 Das

2. ndice de Eficacia Alimentara (IEA):

IEA (%) = [ W (%) * 100 ] R (%) 3. Tasa de Conversin Alimenticia (TCA): TCA = Alimento Suministrado Ganancia de biomasa 4. Tasa de Ingestin Diaria R (%): R (%) = Alimento Ingerido * 100/1/2 (Pf + Pi) Das

5. Tasa Absoluta de Crecimiento Instantneo (TCIa): TCIa = (Pf Pi) Das

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6. Factor de Condicin (FC): FC = (Peso (g) * 100) L st3 (cm) 7. Supervivencia (S %): S (%) = (Poblacin Final) * 100 Poblacin Inicial

8. Poblacin Revertida (PR %): PR (%) = (PR) * 100 PN

Donde: W = Tasa de Crecimiento en talla o peso Wi = Talla o peso inicial promedio Wf = Talla o peso final promedio Pf = Peso final Pi = Peso inicial Tf = Tiempo final Ti = Tiempo Inicial L st = Longitud estndar

10.11 Anlisis estadsticos Se utilizar el programa estadstico SPSS v 8.0 para los anlisis de varianza y el test de Duncan para determinar las diferencias significativas (p > 0,05) entre los tratamientos.

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ARBOL

DE DISEO FACTORIAL
R1 R2 R3

36 mil postlarvas

T1 T2 T3

C1 C2

ET HORMONAS

C3 C4

C1 C2

UT

C3 C4

T1 T2
R1

36 mil postlarvas
T3
R2 R3

SUBTOTAL
I. TOTAL XI.

72 mil alevines + 36 mil blanco

= 108 mil alevines

CRONOGRAMA.

El proceso experimental, tendr una duracin de un ao y ocho meses que abarcaran los cuatro semestres de la Maestra. El primer semestre que esta relacionado con la elaboracin del perfil y bsqueda de informacin, el segundo semestre se realizara la instalacin de los experimentos, en el tercer semestre se iniciaran los experimentos y en el cuarto semestre se realizaran los anlisis
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de los resultados que debe culminar con la elaboracin de la tesis y su exposicin. Los detalles de las actividades a desarrollar se presentan en la tabla adjunta.
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
AOS
ACTIVIDAD MESES A TES IS I M J J A S

2005
TESIS II O TESIS III

2006
TESIS IV

N X

D X

E
X

F
X

M A M
X X X

J
X

J
X

A
X

S
X

O
X

I. ELABORACION DE PERFIL 1 2 3 II. 1 2 3 III. 1 2 3 4 5 6 7 IV. Revisin Bibliografica Elaboracin de Perfil Sustentacin de Perfil INSTALACION DE EXPERIMENTO Actualizacin Bibliografica Instalacin de Experimento Acondicionamiento Reproductores EXPERIMENTACION Obtencin e incubacin de huevos embrionados Obtencin e incubacin de alevines I Reversin sexual Precultivo de alevinos II Comprobacin de la Reabsorcin de hormona Comprobacin del sexo: Histologa Controles biometricos (Talla y Peso) ANALISIS DE RESULTADOS X X X X X X X X X X X X X X X

X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

X X X

X X X

X X X

X X X

X X X

1 Analisis de resultados IV. SUSTENTACION 1 Redaccin 2 Sustentacin

X X X X X X X X X

XII.

PRESUPUESTO

Para el desarrollo del presente trabajo de investigacin se requiere de:

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ITEMS Reproductores Hembras Reproductores Machos Alevines Enantato de Testosterona Undecanoato de Testosterona Mesterolona Alimento reversin sexual Alimento engorde Incubadoras Jaulas Anlisis histologa Anlisis de sangre Acondicin y Mantenimiento Unidades experimentales Equipos anlisis de agua Conduccin e imprevisto Redaccin y publicacin TOTAL

CANTIDAD 72 24 108 4050 4050 4050 162 990 36 108 100 200 1000 4500 1000 1000

COSTO UNITARIO S/. 175 175 120 0.13 0.12 0.15 2.86 1.70 14.50 20.00 130 72 1 1 1 1

UNIDAD Unidad Unidad Millar mg mg mg Kg Kg Unidad Unidad Veces Veces

MONTO S/. 12600 4200 12960 527 486 608 463 1683 522 2160 13000 14400 1000 4500 1000 1000 71108

Unidad

El trabajo experimental ser financiado por el Programa de Investigacin del FONDEPES.

XIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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ALUMNO:

Paul Baltazar Guerrero

ASESOR:

Guillermo lvarez Bejar

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