DIRECTRICES PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE REALIZAN ENSAYOS MICROBIOLGICOS

Documento explicativo Nota Tcnica n 32 Rev. 2 Julio 2010

Jornada Tcnica Barcelona 10 de noviembre de 2010

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En la elaboracin de este documento han participado la Sociedad Espaola de Microbiologa (SEM), la Agencia Espaola de Seguridad Alimentaria y Nutricin (AESAN), la Asociacin de Entidades de Ensayo, Calibracin y Anlisis-FELAB (EUROLABEspaa / AELI Asociacin Espaola de Laboratorios Independientes) y el Ministerio de Agricultura (MARM)
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Introduccin: Razn de ser del documento NT-32

- Herramienta para el evaluador y para el laboratorio: permite establecer las referencias necesarias para la evaluacin de cada ensayo - Evitar actividades innecesarias en el trabajo tcnico para la acreditacin - Contribucin a la armonizacin entre laboratorios acreditados - Garantizar el valor aadido de las actividades acreditadas gracias al soporte de validez que aportan los mtodos de referencia, alternativos e internos. - No debe ser un obstculo para la innovacin tecnolgica (ej. aplicacin de metodologas basadas en tcnicas emergentes como PCR para las que no hay an suficiente informacin de validacin y el laboratorio tiene que realizar esas tareas) - No sustituye al juicio tcnico del experto (ej. basar la evaluacin en un mero cotejo del procedimiento interno con el mtodo de referencia) ni del laboratorio 3

INDICE Mtodos de ensayo Caractersticas de funcionamiento de los mtodos y Validacin Estimacin de Incertidumbre Aseguramiento de la Calidad

CLASIFICACIN DE MTODOS
Mtodos normalizados (de referencia) (TIPO I) Mtodos alternativos (TIPO II) Mtodos basados en mtodos de referencia (TIPO III) Otros Mtodos (TIPO IV)

TIPO I: Mtodos normalizados (de referencia)

- Qu es un mtodo de referencia? Elaborado por organizacin tcnica reconocida del mbito tanto pblico como privado, con garantas de revisin peridica y de actualizacin de su contenido. - Principales organizaciones que elaboran mtodos de referencia reconocidos y aceptados: ISO, organismos de estandarizacin nacionales (UNE, BS, NF etc), CEN, Standard Methods, AOAC, HPA, Laboratorios de Referencia etc - Mtodos oficiales (publicados en la legislacin): se deben incluir en el grupo de metodologas de referencia? (excepto: cuando tengan carencias tcnicas claramente identificadas; ej. Orden 27 de julio de 1983, Orden 8 de mayo de 1987) - Publicaciones de organizaciones tcnicas y/o centros de referencia: para considerarlas en el grupo de mtodos de referencia debe haber garantas de su vigencia. Cautela: en ltima instancia se consultar al organismo correspondiente en cada caso. - Caso de normas de ensayo obsoletas: se seguir el criterio habitual 6 (justificacin tcnica para el uso)

TIPO II: Mtodos alternativos

- Debe disponerse de informacin adecuada y suficiente de su validez - Validacin: i) necesariamente por comparacin, mediante estndares reconocidos, con un mtodo de referencia y ii) mediante ejercicio interlaboratorios (si no, Grupo IV). - No imprescindible certificacin de la validez siempre y cuando exista la informacin necesaria proporcionada por entidades independientes y reconocidas (ej. mtodos publicados por organismos o publicaciones cientficas que, sin posibilidad de emitir un certificado, aporten informacin suficiente para garantizar la validez del mtodo como alternativo, de acuerdo con estndares reconocidos, tanto por la sistemtica utilizada en los estudios como por la rigurosidad y nivel cientfico de la institucin que realiza la evaluacin del mismo) - El procedimiento de ensayo debe seguir exhaustivamente el 7 protocolo de ensayo aportado por el propietario del mtodo.

TIPO III: mtodos basados en mtodos de referencia

- Deben garantizar que siguen el mtodo de referencia en al menos: i) composicin crtica de medio/os de pre y enriquecimiento, aislamiento etc; ii) temperatura/as de incubacin; iii) tiempos de incubacin de las etapas de pre y enriquecimiento y aislamiento; iv) mtodos de confirmacin.
- Flexibilidad en casos justificados: i) tolerancias (ej. cantidad de muestra, volmenes, tiempos, temperaturas); ii) actividades de confirmacin alternativas (siempre que se considere garantizada su validez); iii) Otros (ej. inclusin de actividades adicionales como medio de enriquecimiento o de aislamiento adicional) - Es el laboratorio el que establece el mtodo de referencia para cada procedimiento de ensayo. - Caso de procedimientos claramente basados en normas de ensayo obsoletas: se seguir el criterio habitual (justificacin tcnica del uso)
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TIPO IV: Otros Mtodos

- No tienen cabida: i) mtodos tcnicamente cuestionables que entran en abierta contradiccin con mtodos de referencia (e incluso alternativos); ii) y/o soportados por una validacin interna realizada de acuerdo a protocolos de validacin no homologables con estndares reconocidos. Pueden ser: - Mtodos desarrollados internamente por el laboratorio. - Mtodos validados (no desarrollados por el laboratorio) (ej. mtodos basados en tcnicas PCR, mtodos desarrollados por grupos de trabajo o de investigacin)
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INDICACIN EN ANEXO TCNICO ENAC

Mtodos de referencia Misma codificacin

Mtodos alternativos Mtodos basados en mtodos de referencia Mtodos internos
Proced. Interno

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Mtodos de ensayo

Procedimientos de preparacin de muestras: Deben incluirse como parte de los mtodos de ensayo, en relacin con el alcance solicitado.

Crtico en determinados alcances (ej: Alimentos, Aguas)

Tomar como referencia las normas existentes (tanto por los laboratorios como por parte de ENAC): Ej: ISO 6887, UNE-EN ISO 8261 (Alimentos)

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Caractersticas de funcionamiento de los mtodos y Validacin

Mtodos de referencia (TIPO I) Mtodos alternativos (TIPO II) Mtodos basados en (TIPO III) Otros mtodos (TIPO IV)
Respaldo de un mtodo validado y/o aceptado

Necesaria demostracin de validez

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Mtodos normalizados (TIPO I), alternativos (TIPO II) y basados en normas (TIPO III)
No requieren de una demostracin de validez por parte del laboratorio En todo caso: determinar caractersticas funcionamiento en el propio laboratorio UNE-EN ISO/IEC 17025 el laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los mtodos normalizados antes de utilizarlos para los ensayos
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de

Mtodos normalizados (TIPO I), alternativos (TIPO II) y basados en normas (TIPO III)
Actividades mnimas de naturaleza del mtodo: validacin segn la

Mtodos cuantitativos: Precisin y Recuperacin Mtodos cualitativos: Lmite de deteccin

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MATRICES
Las actividades de verificacin de funcionamiento (validacin) deben realizarse sobre muestras naturalmente contaminadas o en su defecto, en muestras naturales contaminadas artificialmente, Nota.- La esterilizacin de muestras no es una prctica adecuada El laboratorio debe justificar la seleccin del tipo y nmero de matrices en funcin del alcance de acreditacin. Debera basarse en la informacin tomada de documentacin tcnica reconocida (ej: Anexo B UNE-EN ISO 16140, etc) Imprescindible: Las instrucciones internas para la preparacin de muestras y las actividades programadas de control de calidad contemplan adecuadamente las 15 diferentes matrices incluidas en el alcance

TIPO IV: OTROS MTODOS

Las actividades de validacin debern ser mucho ms extensas, y dependern de cada caso concreto, para poder garantizar la validez tcnica del mtodo.

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ESTIMACIN DE INCERTIDUMBRE
Aplica a ensayos cuantitativos. No es de aplicacin a ensayos cualitativos ni a NMP.

Pueden utilizarse las dos aproximaciones:

-Paso a paso: considerando las contribuciones por separado -Global: todas las contribuciones en conjunto (caja negra)
Referencias disponibles: G-ENAC-09 ISO/TS 19036:2006 para productos agroalimentarios
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ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
UNE-EN ISO/IEC 17025 el laboratorio debe establecer un control de calidad para realizar el seguimiento de la validez de los ensayos.

En el mbito de los ensayos microbiolgicos la implantacin de actividades de control de calidad adecuadas resulta especialmente importante dado que no siempre es posible caracterizar de forma completa el funcionamiento de los procedimientos de ensayo, a diferencia de otros mtodos como es el caso de los ensayos fsico-qumicos. No obstante, es factible establecer sistemas que permitan garantizar el adecuado control de los procedimientos de ensayo microbiolgicos.
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ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
Control de calidad interno: Control de las condiciones de trabajo: blancos, ensayos repetidos (de todo a parte del ensayo) Control de la precisin: con muestras naturales y/o naturales contaminadas artificialmente Control de la recuperacin: muestras naturales contaminadas artificialmente mediante materiales de referencia o a partir del uso de cepas de referencia En el caso de ensayos cualitativos, el nivel de contaminacin de la muestra debe ser representativa del lmite de deteccin. Deben establecerse criterios
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ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
Debern tenerse en cuenta los resultados obtenidos en la validacin al definir los criterios. -Frecuencia: En funcin del volumen, la complejidad de los mtodos, su robustez, etc. Debe tenerse en cuenta el uso de matrices: muestras naturales positivas y negativas. Deber planificarse de forma que en el tiempo se incluya una representacin de la variedad de matrices incluidas en el alcance, complementndose los resultados obtenidos en la validacin inicial.
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ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
- Evaluar resultados para detectar tendencias

- Repetibilidad y recuperacin: deben ser conocidas por el laboratorio para poder realizar el seguimiento del funcionamiento de su mtodo (en ocasiones la recuperacin proporcionada por el fabricante del medio de cultivo puede ser adecuada)

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MUCHAS GRACIAS

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