UNIVERSIDAD AUTONOMA CHAPINGO DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA

PROGRAMA DEL CURSO: INTRODUCCIN AL CULTIVO DE CLULAS, TEJIDOS Y RGANOS VEGETALES

DATOS GENERALES: Departamento: Programa Educativo: Nivel Educativo: Area: Asignatura: Carcter: Tipo: Prerrequisitos: Profesores: Fitotecnia Ingeniero Agrnomo Especialista en Fitotecnia Licenciatura Agrobiologa Introduccin al Cultivo de Clulas, Tejidos y Organos Vegetales Optativo Terico - Prctico Estructura de las Plantas Cultivadas, Fisiologa Vegetal, Gentica. Dr. Jos Luis Rodrguez de la O. Dr. Remigio Madrigal Lugo M.C. Alejandro Manzo Gonzlez Ing. Edgar Lpez Herrera Primero y Segundo Sexto 3.0 3.0 102.0

Semestre: Ao: Horas Teora/semana: Horas Prctica/Semana: Horas Totales: INTRODUCCIN

El curso de Introduccin al Cultivo de Clulas, Tejidos y rganos Vegetales es un curso optativo que se ubica en el sexto ao de la carrera de Ingeniero Agrnomo especialista en Fitotecnia, el cual es un curso integrador de varias disciplinas, horizontalmente tiene una estrecha relacin con las materias que se imparten en ambos semestres de sexto ao, y verticalmente su relacin ms estrecha es con las materias de Estructura de las Plantas Cultivadas, Fisiologa Vegetal, Bioqumica Vegetal, Gentica, Genotecnia, Propagacin de Plantas y Produccin de Flores y Ornamentales y varias materias optativas. El curso en un 60 % se apoya en la teora con clases de saln, uso de acetatos y transparencias, elaboracin y (realizacin -opcional) de un proyecto de investigacin relacionado con cualquiera de los temas del curso y su presentacin en un seminario; adems se realizan tres visitas a laboratorios dedicados al cultivo de tejidos vegetales, uno oficial y dos particulares. En la parte prctica, que es el 40 % restante del curso, se imparten prcticas de laboratorio e invernadero. PRESENTACIN

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El curso de Introduccin al Cultivo de Clulas, Tejidos y rganos Vegetales toma como base el objeto de aprendizaje de la Fitotecnia aplicado en los diferentes Sistemas de Produccin Agrcola Vegetal, y cumpliendo con el objetivo general del Departamento de Fitotecnia, en la formacin de agrnomos con los conocimientos, habilidades y aptitudes, que le permitan optimizar los aspectos tcnicos, administrativos y biolgicos que conlleven a aumentar la produccin vegetal; es as que el presente curso de Introduccin al Cultivo de Clulas, Tejidos y rganos Vegetales se incluye dentro de la formacin profesional agronmica de los alumnos de esta especialidad, para que conozcan, asimilen y apliquen los actuales avances que viene logrando la biotecnologa a travs de las diversas tcnicas y metodologas del cultivo de tejidos aplicadas a la agricultura, las que al lado de otras disciplinas agronmicas participan conjuntamente como estrategias, para el planteamiento de alternativas de solucin que presenta la diversa problemtica agrcola del pas. En Mxico actualmente dentro de las aplicaciones que en forma multidisciplinaria viene presentando la Biotecnologa, destacan los logros en la clonacin de plantas ornamentales como son las cactceas, orqudeas, gerberas, crisantemos, entre otras; clonacin de frutales como fresas, zarzamoras, manzanos, duraznos, bananos, etc e igualmente ha sucedido la clonacin con otras especies como medicinales, hortalizas, forestales, industriales, etc.; en la obtencin de plantas libres de patgenos han destacado los logros con plantas ornamentales, frutales etc. y el mejoramiento gentico in vitro de diversas especies agrcolamente importantes donde se han rescatado hbridos incompatibles en diversas variedades de durazno, donde indudablemente la tecnologa del cultivo in vitro de clulas tejidos y rganos vegetales ha sido un rea prioritaria dentro de los programas de desarrollo agrcola nacional por los beneficios que se pueden obtener a corto, mediano y largo plazo. Por otra parte se reconoce ampliamente que la investigacin dentro del cultivo de tejidos vegetales, ofrece un acceso directo a una tecnologa de un alto valor potencial y de aplicabilidad en la agricultura, produccin de alimentos, energa, industria farmacutica y qumica, y otras, por lo que el alumno en este curso adquirir y desarrollar los conocimientos de los principios bsicos en el manejo de esta tecnologa, as como sus principales aplicaciones en la Agricultura. As, el curso de Introduccin al Cultivo de Clulas, Tejidos y rganos Vegetales esta planteado para que el alumno adquiera una alta capacidad para estudiar, analizar y plantear diferentes alternativas biotecnolgicas para resolver problemas relacionados con la propagacin, obtencin de plantas libres de patgenos y con el mejoramiento gentico de cultivos importantes de la agricultura del pas. OBJETIVO GENERAL. Proporcionar al estudiante los conocimientos terico - prcticos necesarios que le permitan analizar, evaluar y aplicar los principios tericos y prcticos del cultivo de tejidos vegetales para aislar y cultivar in vitro clulas, tejidos y rganos vegetales, as como sus principales aplicaciones en la agricultura, contribuyendo formativamente para que el alumno plantee diferentes opciones de desarrollo biotecnolgico para la solucin de diversos problemas que enfrenta el sector Agrcola en Mxico. PROGRAMA DE TEORA.

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UNIDAD 1. La Historia del Cultivo de Tejidos Vegetales

3.0 H

Objetivo: Identificar el desarrollo evolutivo de esta tecnologa, as como los principales eventos y descubrimientos cientficos que han coadyuvado el desarrollo biotecnolgico de esta tecnologa aplicada a la agricultura. 1.1 Introduccin 1.2 Descubrimientos, Aos y Cientficos 1.3 Metodologas bsicas UNIDAD 2. Terminologa usada para Cultivo de Tejidos Vegetales y Biotecnologa 3.0 h Objetivo: Conocer y comprender la terminologa bsica utilizada en el cultivo de tejidos vegetales y Biotecnologa agrcola. UNIDAD 3. La contaminacin in vitro 7.5 h

Objetivo: Analizar e identificar las principales fuentes de contaminacin in vitro con objeto de prevenirla y evitarla. 3.1 Los agentes contaminantes 3.2 La deteccin e identificacin de organismos contaminantes. 3.3 La contaminacin en: 3.3.1 El medio de cultivo 3.3.2 La fuente de aire 3.3.3 La vidriera, instrumento de diseccin y otros materiales 3.3.4 El Inoculo UNIDAD 4. El medio de cultivo 7.5 h

Objetivo: Identificar y relacionar la importancia de los principales componentes de un medio de cultivo para clulas, tejidos u rganos vegetales as como el procedimiento para su preparacin. 4.1 Introduccin. 4.2 Composicin de los medios de cultivo 4.2.1 Las sales inorgnicas 4.2.2 Los compuestos orgnicos 4.2.3 Los complejos orgnicos 4.2.4 Los materiales inertes de soporte 4.3 El equipo y materiales para preparar el medio de cultivo. 4.3.1 Los Aparatos 4.3.2 El material de vidriera 4.3.3 Otros apoyos 4.4. Procedimiento para prepara un medio de cultivo. 4.4.1 Las soluciones concentradas 4.4.2 El ajuste de pH 4.4.3 Disolucin de agar y distribucin del medio

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4.4.4 La esterilizacin del medio de cultivo 4.4.5 El almacenamiento del medio de cultivo UNIDAD 5. Las Condiciones de Incubacin 3.0 h

Objetivo: Determinar las condiciones de incubacin especficas para cada etapa del cultivo in vitro y su relacin con el mtodo utilizado. 5.1 Los requerimientos de luz 5.1.1 La intensidad lumnica 5.1.2 Fotoperodo 5.1.3 Termoperodo 5.1.3 Calidad lumnica 5.1.4 La humedad relativa 5.1.5 Equipos utilizados UNIDAD 6. La propagacin clonal in vitro 6.0 h

Objetivo: Analizar y manejar las principales fuentes de inoculo empleadas para la propagacin clonal in vitro, caractersticas fisiolgicas y metablicas de los tejidos utilizados as como los constituyentes bsicos del medio de cultivo y caractersticas ambientales de incubacin que influyen en su respuesta. 6.1 Antecedentes 6.2 Cultivo in vitro de meristemos apicales 6.3 Cultivo in vitro de pices de tallo 6.4 Microinjerto 6.5 Regeneracin de plantas a partir de clulas y tejidos especializados. 6.6 Factores que ayudan a incrementar las probabilidades de obtencin de plantas libres de patgenos. 6.6.1 Termoterapia 6.6.2 Quimioterapia 6.6.3 Etiolacin 6.6.4 La influencia estacional 6.6.5 El tamao del inoculo 6.6.6 Ciruga y cultivo 6.6.7 El medio de cultivo 6.6.8 El medio ambiente 6.6.9 El transplante de in vitro a suelo UNIDAD 7. La obtencin de plantas libres de patgenos 6.0 h

Objetivo: Identificar y manejar las diferentes tcnicas que se utilizan dentro de esta tecnologa para eliminar diferentes patgenos y obtener plantas libres de patgenos. 7.1 Embriognesis 7.2 Organognesis

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7.3 La multiplicacin de yemas axilares 7.4 Caractersticas de la planta madre 7.5 Caractersticas de la fuente de inoculo 7.6 Caractersticas del medio de cultivo 7.7 Caractersticas de las condiciones de incubacin 7.8 Las etapas de la propagacin in vitro 7.8.1 El establecimiento de un cultivo asptico 7.8.2 La multiplicacin de propgulos 7.8.3 El pre-acondicionamiento de plantas al transplante a suelo 7.8.4 La adaptacin de plantas bajo condiciones de invernadero 7.9 La evaluacin de las plantas propagadas in vitro. UNIDAD 8. Las tcnicas in vitro aplicadas al mejoramiento gentico 6.0 h

Objetivo: Evaluar las principales tcnicas y metodologas usadas en el mejoramiento gentico in vitro de plantas as como valorar las posibilidades de integracin de stas en los programas de fitomejoramiento convencional. 8.1 Cultivo de vulos, ovarios y fertilizacin in vitro 8.2 Cultivo in vitro de clulas y rganos 8.3 Cultivo in vitro de embriones inmaduros 8.4 Produccin de haploides y usos 8.5 La obtencin, cultivo y uso de protoplastos 8.6 La variacin somaclonal y gametoclonal. UNIDAD 9. Establecimiento de bancos de germoplasma y criopreservacin 3.0 h

Objetivo: Manejar las principales ventajas, desventajas, metodologas y usos de los bancos de germoplasma in vitro para la preservacin de clulas, tejidos y rganos vegetales a corto, mediano y largo plazo. 9.1 Bancos de germoplasma 9.2 Medios de cultivo 9.3 Fuentes de inoculo 9.4 Pretratamiento 9.5 Materiales y equipos 9.6 Usos UNIDAD 10. Obtencin de productos secundarios 3.0 h

Objetivo: Valorar las principales especies de uso industrial, medicinal y otras de importancia econmica utilizadas va cultivo de clulas, tejidos y rganos vegetales para la extraccin de diferentes principios activos incluidos los farmacuticos, insecticidas, perfumes y saborizantes principalmente. 1. Antecedentes 2. Especies vegetales

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3. Productos obtenidos in vitro UNIDAD 11. Perspectivas de la tcnica a futuro 3.0 h

Objetivo: Evaluar los avances y perspectivas de las diferentes tecnologas asociadas al cultivo in vitro de clulas, tejidos y rganos vegetales como herramientas biotecnolgicas empleadas tanto para la transformacin celular e ingeniera gentica, as como los avances, ms significativos que en la actualidad se tienen dentro de la Biotecnologa moderna y su impacto en la Agricultura. 1. Desarrollo biotecnolgico vegetal en Mxico 2. Limitaciones, alcances y aplicaciones 3. Investigacin biotecnolgica en pases en vas de desarrollo 4. Prioridades en el desarrollo biotecnolgico en el mundo. 5. Relacin del cultivo in vitro con la Gentica Molecular e ingeniera gentica. PROGRAMA DE PRCTICAS PARACTICA 1. Uso de equipo, material, reactivos y facilidades de laboratorio e invernadero 3.0 h Objetivo: El propsito de la prctica es que el estudiante ubique y distinga los principales componentes del laboratorio e invernaderos necesarios para el cultivo in vitro vegetal. PRACTICA 2. Elaboracin de un medio de cultivo 6.0 h

Objetivo: El propsito de la prctica es que el alumno identifique los componentes y elabore un medio de cultivo especfico para una especie vegetal. PRACTICA 3. Aislamiento de tejidos vegetales e induccin de callosidades 6.0 h

Objetivo: El propsito de la prctica es que el alumno maneje el aislamiento y establecimiento de callosidades en tabaco y zanahoria. PRACTICA 4, 5 y 6. La propagacin in vitro 15.0 h

Objetivo: El propsito de esta prctica es que el alumno maneje la propagacin in vitro de una especie va la organognesis, embriognesis y multiplicacin de yemas auxiliares. PRACTICA 7. La obtencin de plantas libres de patgenos 6.0 h

Objetivo: EL propsito de esta prctica es que el alumno maneje el cultivo in vitro de pices de tallo de clavel (Dianthus caryophylus). PRACTICA 8 y 9. La aplicacin del cultivo de tejidos en el fitomejoramiento 9.0 h

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Objetivo: El propsito de esta prctica es que el alumno maneje el cultivo in vitro de ovarios y anteras con objeto de producir frutos con semilla y plantas haploides en jitomate y tabaco, respectivamente. PRACTICA 10. Adaptacin de plantas obtenidas in vitro al medio ambiente en condiciones de invernadero. 6.0 h Objetivo: El propsito de esta prctica es que el alumno maneje el transplante a suelo de plantas obtenidas in vitro y su acondicionamiento al ambiente natural. METODOLOGA: En la prctica se desarrollarn actividades en el laboratorio, en el campo experimental universitario y con gua de estudio, esto con el afn de afianzar y clasificar todas las actividades que se tienen contempladas en el presente programa. El curso es semestral y mantiene a los estudiantes ocupados durante un mnimo de 7 a 10 horas por semana. Los principios tericos y prcticos que se ensean en el aula y laboratorio adems se complementan con lecturas. Durante el semestre se llevarn a cabo diferentes experimentos de laboratorio que son acumulativos y traslapados, lo cual forja al estudiante a desarrollar habilidades y capacidad de anlisis que le permite una mejor comprensin del cultivo de tejidos vegetales siguiendo las instrucciones que se siguen para la publicacin de artculos en la revista In Vitro de la Tissue Culture Association. Adems se requiere que el estudiante desarrolle por escrito un proyecto de investigacin en las reas de aplicacin del cultivo de tejidos vegetales en la agricultura. El proyecto se escribe siguiendo el formato del Consejo Nacional de Ciencias y Tecnologa (CONACyT), e incluye la presentacin de un presupuesto. Los proyectos elaborados en numerosas ocasiones sirven al estudiante de ayuda o de base para elaborar un proyecto de tesis. Al final del curso el estudiante presenta un proyecto oral y por escrito sobre un tema relacionado con el curso o bien sobre el progreso de los experimentos de su tesis si es sobre cultivo de tejidos vegetales o un tema relacionado, y para esto se sigue el formato respectivo de CONACyT. La elaboracin de este proyecto ayuda a desarrollar en el estudiante un nivel de conocimientos, confianza, independencia y habilidades, as como cualidades interactivas que permiten al estudiante aplicar exitosamente estas tecnologas en la agricultura. EVALUACIN. El curso se evaluar de acuerdo a los criterios y ponderaciones siguientes: Dos exmenes de conocimientos. Presentacin de proyecto. Presentacin de seminario. Reportes de prcticas. BIBLIOGRAFA. 40 % 10 % 10 % 40 %

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Barz, W. E. Reinhard and M.H. Zenk. 1977. Plant tissue culture and its biotechnologcal Application Springer Verlag 419 pp. Conger, B.V. 1981. Cloning agricultural plants via in vitro techniques. CRC Press Inc. Boca Raton, Fla. 273p. Constantin, M.J. R.R. Henke K.W. Hughes and B.V. Conger, 1981. Propagation of higher plants through tissue Culture. Procc. Int. Symposium. October 12-15, 1980. University of Tennessee, Knoxville. Pergamon Press. 452 pp. Dixon, R.A. and A. Gonzales. 1994 . Plant cell culture. Oxford Univ. Press. 230 p. Dodds, D.G.L. Farkas and P. Maliga. 1976 Cell Genetics in higher Plants. Procc. Int. training Course. July 5-17, 1976. Szegod, Hungary Akademillan Publ. Co. 970. pp. Evans, D.A. W.R. Sharp, P.V. Ammirato and Y, Yamada 1983. Handbook of plant cell culture Vol. 1 Techniques for propagation and breeding. Macmillan Publ. Co. 970. pp. Fogh, J. 1973. Contamination in tissue culture. Academic Press Inc. 288 pp. Fujiwara, A. Plant Tissue Culture. 1982. Procc. th Int. Congress of Plant tissue culture July 1116, 1982. Tokyo and lake Yamanaka, Japan. 839 pp. Gamborg, O.L. and K.R. Wetter. 1975 Plant tissue culture methods R.R.C.C. Nal. Res. Council of Canad, Prairie Regional Lab. Saskatton. Gamborg, O.L. T. Murashige, T.A. thorpe and I.K. Vasil. 1976 Plant tissue culture Media. In vitro 12 (7) 473 - 478. Gautheret. R.L. 1959. La culture des tissue vegetaux, techiques et realisations. PARIS, MASSON & Cie 849 pp. Handbook of Plant Cell Culture. Vol. 2,3,4,5,6. 1984, 1990. Sharp. W.R., D.A. Evans, P.V. Ammirato, Y. Yamada (eds). Macmillan Publishing Co. Kasha, K.J. 1974 Haploids in higher plant, advances and potential. Procc. of the first Int. Symp. Jun 10 - 14 University of Guelph. Kung, Shain - dow and Ch. J.Arntzen. 1989. Plant biotecnology. Butterworths. 423 p. Murashige, T. 1974. Plant Propagation Through tissue culture, Ann Rev, Plant Physiol 25: 135 166. Reinert, J. and Y.P.S. Bajaj. 1977. Applied and Fundamental Aspects of plant cell, tissue and organ culture. Springer Verlag 803 pp. Reinert, J. and M.M. Yeoman 1982, Plant cell and tissue culture. Springer - Verlag. 83 pp. Sala. R., B. Parisi, m R. Cell and O. Ciferri. 1980 Plant Cell Culture Results and perspectives. Procc. Int. Workshop. Plant Cell Cultures. August 1-3 1979. Pavia, Italy. Elsevier North Holland Biodical Press. 433 pp. Sharp, W.R., P.O. Larsen, F.F. Paddock, and V. Raghavan. 1979. Plant Cell and tissue Culture. Ohio State University Press: Columbus. 892 pp. Symposium on plant culture, Peking, 1978. Procc. Symp on Plant Tissue Culture August, 1978 531 pp. Thomas, E. and M.R. Davey 1975. From single Cells to plants. The Wykeham Sciences Series. U.S.D.A. 1980 Procc. of the Conference on Nursery Production of Fruit Plants through Tissue culture. Aplications and Development in plant Biology No. 5 433 pp. Vasil, I.K., W.R. Scowcroft and K.J. Frey, 1982. Plant Improvement and Somatic Cell Genetics. Academic Press. 330 pp. Alva, R., E. S. 1996. Efecto del 2, 4- D, ANA, Cinetina y BAP en la formacin de callo en epidermis de frutos de cacao (Theobroma cacao L.). Tesis profesional. UACH. Chapingo, Mx. 53 p.

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Brusco, G.C. Cardenas, A.M. Y Madrigal, L.R. 1985. Certificacin de plantas de fresa Fragaria x ananassa Duch, Libres de virus; obtenidas por cultivo in vitro de pices de tallo. Revista Chapingo, Vol. IX No. 45 Jul - Dic. 1984. (en prensa). Coutio, A.D. Y Madrigal, L.R. 1983. Propagacin in vitro de jojoba Simmondsia chinesis ( Lin) Schneider. Revista Chapingo Vol. VIII. No. 42, Oct - Dic. 1983. P. 39 - 41. Granada, C.L. 1980 Propagacin in vitro de Dioscorea composita Hemsl. Tesis Profesional UACH. Chapingo, Mx. pp. 56. Granada, C.L. Cardenas, A.M. y Madrigal L.R. 1985. Propagacin in vitro de plantas de fresa. Revista Chapingo. Vol. IX No. 45 - 46 Jul. Dic, 1984. (Sobretiro). Ortuo, O. L. 1995. Cultivo de anteras en tomate de cscara ( Physalis ixocarpa ) Brot. Tesis de maestria. UACH. Chapingo, Mx. 105 p. Madrigal. L.R. y Manzo, G.A. 1985. La aplicacin de la tcnica de Cultivo de Tejidos in vitro en cafeto Coffea spp. Revista Chapingo 49 - 50 Jul - Dic. 1985 23 pp. Rosas, M., V. 1995. Obtencin y propagacin de plantas de alcatrz ( Zantedeschia sp.) a partir del cultivo in vitro de yemas de bulbo. Tesis profesional. UACH. Chapingo, Mx. 66 pp. Rodrguez De La O. J.L. 1982. Obtencin de plantas de vid ( portainjerto R-110 ) libres de virus hoja de abanico (GELV) por cultivo in vitro de yemas axilares termoterapia. Tesis Profesional. UACH. Chapingo, Mx,. 10l pp. Solorzano, V. MA. DEL C. 1983. Obtencin de plantas de papa ( Solanum tuberosum L. ) vars. Greta y Lpez libres de virus a partir del cultivo in vitro de pices de tallo. Tesis profesional UACH. Chapingo, Mx., 13 pp.

ltima revisin Julio del 2007