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Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Qumica Licenciatura en Qumica

MANUAL DE LABORATORIO LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL

M. en C. A. Mara Magdalena Garca Fabila

2007

I.- INTRODUCCIN. La Qumica Analtica es una parte imprescindible del anlisis de qumico. Es una disciplina extremadamente amplia esencial para muchas industrias, particularmente aquellas como el procesamiento y manufactura del petrleo, qumicos, semiconductores, metales, plsticos, farmacuticos, cermicos, papel, textiles, alimentos y productos del vidrio, es fundamental tambin en el rea de ambiental sobre todo en el monitoreo, calificacin y cuantificacin de contaminantes a gran concentracin y en el anlisis de trazas. El qumico analtico profesional tiene la responsabilidad de determinar que procedimientos deben ser usados para un problema dado, o si se requiere, desarrollar uno nuevo. El nivel al cual los profesionistas entrenados se involucran en el anlisis qumico, depende de diversos factores que incluyen la naturaleza del problema, los recursos econmicos, de infraestructura, sensibilidad, el tiempo de respuesta y objetivos personales. A menudo se formulan en los diferentes campos preguntas como necesito saber cuanto nquel, cromo y hierro hay en esta muestra, Cundo podras darme los resultados?. Este tipo de situaciones pueden verse de dos formas: 1) como un caso de rutina general o 2)como un problema especfico en el cual existe un desconocimiento de las caractersticas del comportamiento del material al ser sometido a diferentes tcnicas. En el primer caso, la responsabilidad del Qumico Analista es la de manejar las tcnicas prevalecientes e instrumentos con los que se cuenta, as como una apreciacin de su sensibilidad, requerimientos de muestra y otras cosas. En el segundo caso, la resolucin de este tipo de problemas es a menudo el resultado de la interaccin entre el Qumico Analista y los Investigadores o Ingenieros que poseen el conocimiento sobre las muestras a tratar y que a menudo se enfrentan con una in estructuracin de la tcnica a seguir para resolver ste. El rol del qumico analista en este contexto es entonces el de postular un mecanismo para explicar los cambios producidos en una muestra en particular cuando sta es analizada y entonces examinar la validez del anlisis. El presente manual de laboratorio esta elaborado como apoyo para la licenciatura en qumica y busca dar una revisin a varias tcnicas analticas las cuales son empleadas tanto como rutina general como en investigacin, y que difieren en el equipo instrumental empleado segn su aplicacin.

Medidas de Seguridad

Emplear bata dentro del laboratorio. Todo el material de vidrio debe estar limpio y seco. Usar siempre el material adecuado para cada fin por ejemplo, pipetear con una perilla, no con la boca. Los residuos que se generen de la prctica debern deponerse en el envase destinado para ello. Cuando tenga una duda sobre el funcionamiento del equipo, pregunte a su profesor, el improvisar puede daar el equipo.

Contenido Pgina Prctica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Uso de la ley de Lamber & Beer Determinacin de fsforo en bebidas Determinacin de calcio por absorcin atmica Determinacin de Plomo en un objeto de alfarera Determinacin del contenido de Na y K empleando la tcnica de flamometra Determinacin de dextrosa por polarimetra. Determinacin de alcohol en bebidas por refractometra. Determinacin del tamao de partcula de una muestra de pegamento base agua. Manejo De Muestras Para Ser Ledas En Espectrofotometra De Luz Infrarroja. Identificacin de materiales de empaques polimricos 3 6 9 11 13 15 17 19 22 28 33 35 38 41 42

11 Determinacin de un perfil de aroma en un perfume comercial 12 Determinacin de cido Acetil Saliclico en un producto farmacutico comercial empleando HPLC 13 Comparacin de Azcar y Aspartame por Calorimetra Diferencial de Barrido (DSC) 14 Determinacin del espectro de RMN de una muestra alcohlica. Bibliografa Cuestionarios

MTODOS ESPECTROMTRICOS I. Espectrometra de Absorcin Ultravioleta Visible.

Practica 1 Uso de la ley de Lamber & Beer Objetivo. Determinar la concentracin de una muestra problema empleando el coeficiente de absortividad. Fundamento La ecuacin (1) se conoce como la ley de Beer o ley de Lambert & Beer; el valor de la absortividad es caracterstico de cada sustancia y se emplea cuando la concentracin de la solucin es estudio est dada en partes por milln o por miligramos; pero si la concentracin es molar, la a se constituye por y la constante se denomina absortividad molar. A = bc ................(1) donde: A absorbancia epsilon. Coeficiente de absortividad molar b longitud de la celda c concentracin molar de la muestra

bien A= abc donde: A absorbancia a coeficiente de absortividad b longitud de la celda c concentracin de la muestra ................(1 a )

La ley de Lamber & Beer considerada originalmente como un postulado ha sido objeto de numerosas interpretaciones y demostraciones considerando hiptesis estadsticas, cinticas o simplemente lgicas, esta ley se refiere a la fraccin de la luz absorbida, se cumple en las siguientes condiciones: La luz empleada debe ser monocromtica. La concentracin debe ser baja. La disolucin debe ser homognea. La disolucin no debe ser fluorescente. El soluto debe ser estable, no debe sufrir transformaciones fotoqumicas. El soluto no debe originar asociaciones variables con el disolvente. Caractersticas del Analito:

Se requiere de un compuesto que absorba en la regin UV/Visible, por lo que debe contener grupos cromoforos. Para esta practica se recomienda que el compuesto sea soluble en agua a temperatura ambiente. Analito___________________________ Materiales y equipo: Bitcora Espectrofotmetro con un rango de trabajo de 200 a 700 nm Material comn de laboratorio. (esptula, matraces volumtricos de 100 y 10 ml, vasos de pp de 10 ml, piseta) Balanza analtica Nota: Todo el material de vidrio empleado en esta determinacin debe ser lavado preferentemente con extrn, enjuagado con agua corriente y enjuagando con agua destilada o deionizada segn sea el caso. Procedimiento: 1) Preparar 10 ml de una solucin del analito de concentracin 100 mg/L 2) A partir de esta solucin preparar 3 diluciones de concentracin conocida Concentraciones: A______________ B______________ C______________ 3) Leer el espectro de cada una de las diluciones preparadas. 4) Observando el espectro, elegir la longitud de onda a la cual el compuesto analizado tiene mayor absorbancia. Longitud elegida ______________ 5) Obtener matemticamente con la ayuda de la ley de Lamber & Beer el coeficiente de absortividad del analito. 6) Con ayuda de los datos generados graficar la concentracin contra la absorbancia obtenida Concentracin Absorbancia inicial 100 mg/L A B C 7) Cuantificar la muestra problema empleando el mtodo de la ley de Lamber & Beer y el mtodo de la curva de calibracin. 8) Discuta los resultados Obtenidos

9) Concluya.

Practica 2 Determinacin de fsforo en bebidas. Objetivo. Determinar la cantidad de fsforo por un mtodo espectrofotomtrico (en forma de ortofosfatos) presente en los bebidas, aplicable cuando la concentracin de ortofosfatos es de 1 a 20 mg/dm3.

Fundamento Los mtodos se basan en transformar los compuestos fosforados a ortofosfatos, los cuales se hacen reaccionar con molibdato de amonio para formar el cido molibdo-fosfrico. En el mtodo del azul de molibdeno o del cloruro estanoso, el cido molibdo-fofrico se reduce para producir el complejo colorido conocido como azul de molibdeno. La intensidad de la coloracin se determina por espectrofotometra. 7H3PO4 + 12(NH4)6Mo7O24 . 4H2O 7 (NH4)3(PO4(MoO3)12) + 51 OH- +33H2O El complejo de fosfo-molibdato tiene una mezcla de Mo +5 y Mo+6, su composicin es indefinida. Este complejo es reducido a un compuesto azul soluble. Caractersticas de la muestra: Se requiere de un bebida que en teora contenga fsforo, si se elige un refresco colorido se recomienda digerir, para eliminar interferencias. Muestra___________________________ Materiales y equipo: Bitcora Espectrofotmetro con un rango de trabajo de 200 a 900 nm Material comn de laboratorio. (esptula, matraces volumtricos de 100 y 10 ml, vasos de pp de 10 ml, piseta) Balanza analtica Reactivos: Las sustancias que a continuacin se mencionan deben ser grado analtico, a menos que se especifique otra cosa. Cuando se mencione el uso de agua, debe entenderse deionizada. Acido Sulfrico concentrado (H2SO4). Molibdato de amonio tetrahidratado (NH4) 6 Mo7O244H2O). ac. Ascrbico Hidrxido de sodio (NaOH). Fosfato de potasio monobsico anhidro (KH2PO4) Sal disdica de fenolftalena (C20H14O4) Alcohol etlico (C2H6O) Metanol (CH4O)

Preparacin de soluciones: 1. Solucin stock de P2O5 Pesar 0.1915gr de KH2PO4 seco y disolver en 1000mL de agua Elaborar con esta solucin una que contenga 4 ppm de P2O5 (requiere al menos 25ml) 2. Solucin reductora 2.1 0.78 g de molibdato de amonio en 39 mL de agua 2.2 1.056 g de ac. Ascrbico en 60 ml de agua 2.3 11ml de H2SO4 conc en 125 ml de agua Mezclar 2.1, 2.2 y 2.3 aforar a 250ml y etiquetar 3. Preparar la curva de calibracin Estndar 1 2 3 4 5 blanco Conc (ppm) 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 0 ml de solucin de trabajo 1 2 3 4 5 0 ml de soln reductora 4 4 4 4 4 4 Volumen de aforo (ml) 10 10 10 10 10 10

La curva ser incubada durante 45 minutos a 50 C Posteriormente se enfrio a temperatur ambiente y se leyo a _____ nm 4. Preparar la muestra Des-gasificacin del refresco mediante agitacin Se toma 1 ml del refresco y se diluyo a 50ml De esta dilucin se tomo 1 ml y se le adicionaron 4 ml de solucin reductora y se aforo a 10 ml con agua deionizada. Para mayor seguridad realizar las determinaciones por triplicado. Calcular el coeficiente de variacin para evaluar la reproducibilidad del mtodo. 5. Leer en el espectrofotmetro seleccionando la longitud de onda mxima del espectro del complejo azul. Reportar la concentracin de fsforo encontrada en las muestras y compararlas con lo que reportan las etiquetas y la bibliografa.

I.

Espectrofotometra de Absorcin Atmica

Practica 3. Determinacin de calcio por absorcin atmica. Objetivo. Determinar la cantidad de calcio de un producto, empleando la tcnica de absorcin atmica. Fundamento Cuando de suministra una determinada cantidad de energa (calorfica) a un tomo cualquiera que se encuentre en estado fundamental E0, esta energa ser absorbida por el tomo, de tal forma que se incrementa el radio de giro de sus electrones de la capa externa llevando al tomo a un nuevo estado energtico. Cuando un tomo vuelve nuevamente a su estado fundamental, este cede una determinada cantidad de energa de excitacin, emitiendo radiaciones a longitudes de onda especficas. Cuando los tomos se encuentran con las mismas radiaciones que ellos mismos son capaces de emitir, se producir una absorcin de las radiaciones las cuales pueden ser medidas y cuantificadas. Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra que contenga calcio, puede elegirse una muestra de leche, o un producto lcteo, o bien un producto en polvo. Muestra___________________________ Equipo Espectrofotmetro de absorcin atmica. Lmpara de ctodo hueco de calcio Parrilla elctrica Balanza analtica
Materiales y reactivos Tanque de acetileno de alta pureza Tanque de aire o compresor de aire Matraces volumtricos de 100 ml Papel wahtman No. 40 Pipetas de 1.5 y 10 ml Embudo Vaso de precipitado de 150 ml Matrz Kitazato Vidrio de reloj cido Clorhdrico 1 N. Solucin patrn de Calcio de 500 ppm Oxido de Lantano cido Clorhdrico concentrado

Agua destilada

Facultad de Qumica / UAEM Manual de Laboratorio de laboratorio de Anlisis Instrumental Licenciatura en Qumica Procedimiento Preparacin de la solucin de oxido de lantano. Pesar 25 gr de oxido de lantano y suspenderlo en agua dentro de un martaza volumtrico de 500 ml , dejar reposar, acidular la solucin con 50 ml de HNO3 concentrado (agregar lenta y cuidadosamente) agitar hasta la disolucin total del soluto. Afoprar a 500 ml con agua deionizada. a)Preparacin de la solucin patrn: Colocar en tres matraces volumtricos de 100 ml, 10 ml de oxido de lantano al 5%. Aadir 1, 3 y 6 ml de la solucin stock de calcio y 10 ml de cido clorhdrico 1 N. Aforar con agua destilada. Las soluciones son de 5, 15 y 30 mg / l de calcio. b)Preparacin de la muestra A 100 ml o 10 g de polvo de muestra. Aadir 15 ml de HCl 1 N y calentar hasta ebullicin, ebullir hasta concentrar a la mitad del volmen. Enfriar y filtrar a travs de papel whatman No 41. Recoger el filtrado en un matraz volumtrico de 100 ml que contenga 10 ml de oxido de lantano al 5%. Aforar con agua destilada. Preparar un blanco. c)Preparacin del blanco: Colocar en un matraz volumtrico de 100 ml, 5 ml de HCl 1N y agregarle 10 ml de xido de lantano al 5% y aforar con agua destilada. d)Preparacin del equipo: Colocar la lmpara de calcio y proceder a la calibracin del equipo obteniendo la mxima ganancia de la lmpara ajustar ptimamente el quemador, colocar las presiones de salida del acetileno y optimizar la flama. e)Anlisis: Aspirar las soluciones estndar de 5, 15 y 30 g /ml de calcio, aspirar las muestras y medir la absorbancia. Clculos Determinar la cantidad de calcio en la muestra empleando para ello la siguiente formula.
Ca ppm = g / ml ledos en la muestra x Vol. de solucin de la muestra peso de la muestra en g

Reporte el contenido de calcio encontrado en la muestra y discuta el resultado con lo reportado en la bibliografa. Concluya.

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Facultad de Qumica / UAEM Manual de Laboratorio de laboratorio de Anlisis Instrumental Licenciatura en Qumica Practica 4 Determinacin de Plomo en un objeto de alfarera Objetivo. Determinar la cantidad de plomo que libera un objeto de alfarera empleado para el uso humano, empleando la tcnica de absorcin atmica. Fundamento Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra de alfarera barnizada presumiblemente con contenido de plomo. Muestra___________________________ Equipo Espectrofotmetro de absorcin atmica. Lmpara de ctodo hueco de plomo Parrilla elctrica Balanza analtica
Materiales y reactivos Tanque de acetileno de alta pureza Tanque de aire o compresor de aire Matraces volumtricos de 100 ml Papel wahtman No. 40 Pipetas de 1.5 y 10 ml Embudo Vaso de precipitado de 150 ml Matrz Kitazato Vidrio de reloj cido Clorhdrico 1 N. Solucin patrn de Plomo de 50 ppm cido Clorhdrico concentrado Agua destilada

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Procedimiento a)Preparacin de la solucin patrn: preparar una curva de calibracin de 1 a 50 ppm de Pb en una solucin de HNO3 al 10% b)Preparacin de la muestra Colocar la pieza (puede ser un jarrito) en la campana de extraccin, adicionar 100 mL de una solucin de cido ntrico al 10%, dejar remojar agitando por espacio de una hora. Recolectar la solucin en un matraz volumtrico evitando slidos en suspensin, si es necesario filtrar. c)Preparacin del blanco: Solucin de cido ntrico al 10%. d)Preparacin del equipo: Colocar la lmpara de plomo y proceder a la calibracin del equipo obteniendo la mxima ganancia de la lmpara ajustar ptimamente el quemador, colocar las presiones de salida del acetileno y optimizar la flama. e)Anlisis: Leer la curva y la muestra ajustando cero con el blanco. Clculos Determinar la cantidad de plomo en la muestra. Reporte el contenido de plomo encontrado en la muestra y discuta el resultado con lo reportado en la bibliografa. Concluya.

II.

Espectrometra de Emisin. Flamometra

Practica 5. Determinacin del contenido de Na y K empleando la tcnica de flamometra. Objetivo: Determinar la concentracin de Na y de K en una solucin isotnica, empleando la tcnica de flamometra. Fundamento Caractersticas de la muestra: Se requiere de una solucin isotnica con un conocido contenido de sales de sodio y potasio. Muestra___________________________ Equipo Flammetro Compresora Materiales y reactivos Vasos de pp. Matraces volumtricos de 100 y 50 ml Pipetas volumtricas de 1, 2, 3,5 y 10ml Estndar de K Estndar de Na Agua deionizada Procedimiento 1.Preparacin de la curva estndar 1.1 Elaborar a partir del estndar de sodio y del estndar de potasio diluciones de forma que se tengan concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100 mg/L de cada uno de los elementos por separado. Tomar en cuenta el porcentaje de sodio o de potasio en la molcula de NaCl o KCL empleados. 2. Preparacin del problema 2.1 Pesar un equivalente a 20 mg de K o bien medir un volumen de la muestra. 2.2 transferir a un matrz de 100 ml y aforar con agua deionizada. 3. Leer en el flammetro. Para leer potasio emplear una longitud de 760 nm Para leer Sodio emplear una longitud de 596 nm Medir en el flammetro la emisin de cada curva y leer la muestra problema al final

Nota: Checar que el tubo de desage est lleno, durante toda la operacin. Clculos Elaborar la curva de calibracin con los datos de concentracin contra los datos de emisin obtenidos. Interpolar en la curva estndar y reportar en mg/L de Na y mg/L de K. Concluir sobre la base de los resultados obtenidos.

METODOS PTICOS IV. Polarimetra

Prctica 6 Determinacin de dextrosa por polarimetra. Objetivo El alumno efectuar la determinacin de glucosa anhidra en una solucin inyectable mediante el uso del polarmetro. Fundamento Aquellas sustancias que contienen carbonos quirales, tienen la capacidad de rotar la luz polarizada, a esta propiedad se le conoce como actividad ptica, existen sustancias Dextro rotatorias y sustancias Levorrotarorias que desvan la luz hacia la derecha (+) o hacia la izquierda (-) respectivamente. La polarimetra es la tcnica de la medicin del cambio de direccin de la vibracin de la luz polarizada cuando esta interacta con materiales pticamente activos. La luz no reflejada se comporta como si consistiera de un gran numero de ondas electromagnticas vibrando en todas direcciones alrededor de la direccin de propagacin. Si se logra separar de la conglomeracin natural solo aquellos rangos vibrando en un plano particular se obtiene entonces la luz polarizada. La intensidad de la rotacin ptica se expresa mediante la rotacin especfica , dad por []= (100 /lc) donde es la rotacin observada en grados c es la concentracin del soluto en g/ 100ml l es la longitud del paso de luz en dm Si se mide la rotacin de un lquido puro, se calcula la rotacin especfica mediante la frmula []= /ld donde d es la densidad. Caractersticas de la muestra: Se requiere de una solucin de glucosa para uso mdico. Muestra___________________________ Equipo Polarmetro Materiales y Reactivos Pipeta graduada de 1ml Pipetas volumtricas Matraces volumtricos de 50 ml Termmetro Esptula

Agitador Solucin de dextrosa al 5% comercial Dextrosa estndar Hidrxido de amonio 6N Agua destilada Procedimiento Preparacin del Estndar Pesar exactamente muestras de 0.5, 1, 2,5 y 3 g. De glucosa anhidra y disolver con agua destilada, transferir a matraces de 50 ml, adicionar 0.2 ml de una solucin de amoniaco al 1%, afore con agua destilada y mezcle. Deje reposar los matraces preparados a temperatura ambiente durante 30 minutos. Mida la rotacin ptica de cada dilucin en un tubo de 2 dm. Preparacin de la muestra Transferir a un matrz volumtrico de 100ml una muestra que contenga de 5 g de dextrosa, agregar 0.2 ml de hidrxido de amoniaco y diluir hasta la marca con agua destilada, homogenizar. Dejar reposar por 30 minutos y determinar la rotacin especfica a 25C en un tubo de 2 dm. Clculos Construya una tabla con los datos obtenidos g de glucosa 0.5 1.0 1.5 2.5 3.0 problema Elabore una grafica de g/ml & con los resultados que obtuvo e interpole el valor del problema para obtener la concentracin de glucosa en la muestra problema. Concluir sobre la base de los resultados obtenidos. Concentracin g/ml

V. Prctica 7 Determinacin de alcohol en una bebida.

Refractometra.

Objetivo Que el alumno aprenda el uso del refractmetro a travs de la cuantificacin de etanol en una bebida alcohlica. Fundamento Cuando un rayo de luz pasa oblicuamente de un medio hacia otro de densidad diferente, su direccin cambia al atravesar la superficie que los separa A esto se llama refraccin. El ngulo entre el primer medio y la perpendicular de la superficie divisora se llama ngulo incidencial, mientras que el ngulo correspondiente al segundo medio se denomina ngulo de refraccin. El ndice de refraccin varia con la temperatura y con la longitud de luz as como con la presin cuando se trata de gases. El ndice de refraccin de una sustancia est basado en la relacin que existe entre la velocidad de la luz en el aire y su velocidad en la sustancia que se analiza. Una aplicacin obvia del ndice de refraccin es identificar lquidos. El ndice de refraccin es una cantidad importante al establecer la identidad de compuestos orgnicos puros. La mejor manera de realizar una comparacin es medir el ndice de refraccin de un estndar u la muestra problema con el mismo equipo y al mismo tiempo con lo que se eliminan algunas variaciones. Tambin se pueden realizar anlisis cuantitativos de soluciones por Refractometra si se trabaja en primer lugar una curva de calibracin de n en funcin de la concentracin, posteriormente se mide el ndice de refraccin de una muestra y se busca su concentracin a partir de la curva; este mtodo es particularmente estimable para el anlisis de dos lquidos miscibles. Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra comercial que contenga un contenido conocido de etanol. Muestra___________________________ Equipo Refractmetro Materiales y reactivos Equipo de destilacin Matraces volumtricos de 100 y 10 ml Pipetas volumtricas de 1, 2, 5 y 10 ml Etanol grado reactivo Agua destilada Muestra problema Procedimiento Preparacin de curva de concentracin 10, 20, 30, 40, 50 % de etanol en agua Alcuota de % de etanol Volumen final

etanol 1 2 3 4 5

10 20 30 40 50

10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml

Tratamiento de la muestra problema. Medir con exactitud 100 ml de la muestra y destilar el alcohol que contiene recibiendo el lquido en una probeta descartando las primeras y las ltimas gotas, medir el destilado y posteriormente aforar a 100ml con un matrz volumtrico. Leer con el refractmetro. . Clculos Elaborar la curva de calibracin con los datos obtenidos graficando concentracin & ndice de refraccin. Interpolar en la curva el valor del ndice de refraccin de la muestra problema. Reportar % de etanol en la muestra. Concluir sobre la base de los resultados obtenidos.

VI. Dispersin de Luz (LS) Practica 8 Determinacin del tamao de partcula de una muestra de pegamento base agua. Objetivo Que el alumno aprenda el funcionamiento del dispersor de Luz para realizar un anlisis de tamo de partcula.

Introduccin Un instrumento de dispersin de luz mide el tamao de partcula en muestras slidas o lquidas. El equipo consta de mdulos los cules son acoplados de acuerdo al tipo de anlisis a realizar, en este caso el mdulo con que se cuenta es de micro volumen el cul permite medir tamao de partcula en lquidos, en suspensiones, o polvo seco. La luz es una radiacin electromagntica con un rango de frecuencia de aproximadamente 1012 Hz ( infrarrojo) a 1017 Hz (ultravioleta). Cuando la luz se propaga esta se convierte en una onda transversal (una onda de luz) que incide en una partcula (fotn). Se espera que esta onda tenga propiedades como frecuencia, longitud, interferencia etc. Y que la partcula tenga propiedades como momento, velocidad, posicin, etc. Si una radiacin electromagntica choca con una partcula pequea con respecto a la longitud de onda de la radiacin, esta sufre una perturbacin debido a que la partcula esta sujeta al campo elctrico oscilante. Si la partcula se puede polarizar *, el campo elctrico de la radiacin induce un dipolo en la partcula. Durante el paso de la onda, el polo inducido oscila a la misma frecuencia que la radiacin y forma un campo propio que acta como una fuente de radiacin. Esta radiacin es de la misma frecuencia que la original, pero se propaga en todas direcciones produciendo una dispersin. Todos los tomos y molculas pueden causar esta dispersin, conocida como dispersin Rayleigh. Cuando las partculas son grandes, comparadas con la longitud de onda del rayo incidente, la dispersin se denomina dispersin Mie, con las mismas frecuencias que el rayo incidente, pero la distribucin angular de la luz dispersa no es uniforme como en la dispersin Rayleigh. Esta propiedad se aplica para la determinacin del tamao de partcula. La dispersin Mie es importante en nefelometra y turbidimetra, ya que estn basadas en la medida de la dispersin de la radiacin en partculas suspendidas. Cuando la luz ilumina un material como la partcula, tiene una constante dielctrica diferente a la unidad, dependiendo de la longitud de onda de la luz y las propiedades pticas de la partcula, esta puede ser absorbida o dispersada o ambos. En el caso de que la dimensin del haz de luz sea tan largo como la del material, existe una descripcin de ptica geomtrica simple semejante a la reflexin y refraccin, las cuales nos son lo suficientemente largas para describir la conducta de la luz. La energa de la luz que se absorbe, puede ser dispersada a travs de la degradacin trmica, por ejemplo: de la energa radiactiva decadente se puede producir la fluorescencia o fosforescencia, lo cul depende de la estructura electrnica de la partcula. Cuando la luz interacta con los electrones excitados del material que se esta irradiando, la luz se observa es la dispersin. Cuando algunos materiales tienen una fuerte absorcin en las regiones de infrarrojo y ultravioleta los medidores de dispersin de luz deben ser acondicionados para funcionar en el rango de luz visible a longitudes de onda de 350 a 900 nm. La intensidad de la dispersin de una unidad de volumen que es iluminada por una unidad de luz, indica el porcentaje entre el material del medio circundante esto lo dice la ley de Rayleigh, Una de las propiedades mas importantes de la luz dispersa es que la intensidad de la radiacin Rayleigh aumenta en proporcin a la cuarta potencia de la frecuencia del rayo incidente.

De hecho la longitud de onda depende del poder de dispersin. El primer fenmeno de dispersin de luz natural consiste en que el cielo sea azul al amanecer y rojo al alba o a la puesta del sol y esto es porque se ve dispersada la luz del sol durante el da y se ve transmitida durante el atardecer y el anochecer. El esplndido color azul del mar tambin se puede atribuir a la fuerte dispersin de la longitud de onda de una porcin de la luz del sol.

1.- Filtro 2.- PIDS ensamblado 3.- Lente proyector ensamblado 4.- Celda para medicin de PIDS 5.- Celda de difraccin 6.- Lentes Fourier /.- Detectores de ngulos altos 8.-Detectores de ngulos bajos 9.- Detectores de ngulos medios 10.- Descarga del haz de luz 11.- Rayo lser 12.- Alineacin del lser 13.-Diodo del lser 14.- Cable de fibra ptica Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra comercial de pegamento blanco base agua que contenga una resina. Muestra___________________________

Equipo Dispersor de Luz. Materiales y reactivos Agua destilada Muestra problema Pipeta pasteur

Procedimiento Preparacin de la muestra: Colocar unas gotas de muestra en 2 mL de agua destilada y homogenizarla perfectamente. Leer la muestra mediante las indicaciones del profesor y el procedimiento FQ-POSG-INOP 413. 0 Empleando los resultados obtenidos, fabricar con ayuda del software una grafica de tamao de partcula & volumen. Discutir los resultados obtenidos y concluir.

VII. Espectroscopia de Radiacin infrarroja Practica 9 Manejo de muestras para ser ledas en espectrofotometra de Radiacin Infrarroja. Objetivo Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo empleando el espectrofotmetro de radiacin infrarroja y adems: 1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Espectrofotmetro de Luz Infrarroja. 2. Que el estudiante aprenda a manejar una muestra para ser tratada en IR 3. Qu el estudiante compare los resultados obtenidos entre los mtodos de manejo de muestra para IR. Introduccin La espectroscopia de luz infrarroja tiene una gran aplicacin en el anlisis cualitativo y cuantitativo. Su principal utilizacin ha sido la identificacin de compuestos orgnicos, que por lo general presentan espectros complejos en el infrarrojo medio con gran nmero de mximos y mnimos que resultan tiles al efectuar comparaciones. En muchos casos el espectro de infrarrojo medio proporciona una huella nica con unas caractersticas que se distinguen fcilmente de los modelos de absorcin del resto de compuestos; solo los ismeros pticos absorben exactamente de la misma forma. La ordenada de la grfica corresponde a una escala lineal de transmitancia y la abscisa mide linealmente los nmeros de onda en unidades de cm 1. La regin infrarroja del espectro electromagntico incluye la radiacin con nmeros de onda entre los 12 800 y los 10 cm-1, lo que corresponde a longitudes de onda de 0.78 a 1000 m1. La gran mayora de las aplicaciones analticas del espectro infrarrojo se han restringido al uso de una parte de la regin comprendida entre los 4000 y los 400 cm-1 ( de 2,5 a 25 m). Sin embargo en la analtica actual se van encontrando un nmero creciente de aplicaciones de la espectroscopa infrarroja cercana y lejana. Adems de su aplicacin como herramienta en anlisis cualitativo, las medidas en el infrarrojo tambin estn encontrando un uso cada vez mayor en el anlisis cuantitativo. En este caso, su elevada selectividad a menudo hace posible la cuantificacin de una sustancia en una mezcla compleja, no siendo necesaria una separacin previa. El principal campo de aplicacin de este tipo de anlisis se halla en la cuantificacin de contaminantes atmosfricos que provienen de procesos industriales. Cambios dipolares durante las vibraciones y las rotaciones.

Por lo general, la radiacin infrarroja no es suficientemente energtica como para producir las transiciones electrnicas que se dan cuando se trata de las radiaciones ultravioleta y visible. La absorcin de radiacin infrarroja se limita as en gran parte a especies moleculares para las cuales existen pequeas diferencias de energa entre los distintos estados vibracionales y rotacionales. Para absorber radiacin infrarroja, una molcula debe experimentar un cambio neto en el momento dipolar como consecuencia de un movimiento de vibracin o de rotacin. Slo en estas circunstancias, el campo elctrico alternante de la radiacin puede interaccionar con la molcula, y causar as cambios en la amplitud de algunos de sus movimientos. Por ejemplo, la distribucin de carga alrededor de una molcula tal como el cloruro de hidrgeno no es simtrica, ya que el cloro posee una mayor densidad electrnica que el hidrgeno. Por tanto, el cloruro de hidrgeno posee un momento dipolar significativo, y por ello se dice que es una molcula polar. El momento dipolar est determinado por la magnitud de la diferencia de carga y por la distancia entre ambos centros de carga. Dado que la molcula de cloruro de hidrgeno vibra, se produce una fluctuacin regular del momento dipolar lo que origina un campo que puede interaccionar con el campo elctrico asociado a la radiacin. Si la frecuencia de la radiacin iguala exactamente a la frecuencia de vibracin natural de la molcula, ocurre una transferencia neta de energa que da lugar a un cambio en la amplitud de la vibracin molecular; como consecuencia se absorbe la radiacin. De manera anloga, la rotacin de molculas asimtricas alrededor de sus centros de masa produce una fluctuacin dipolar peridica que puede interaccionar con la radiacin. Cuando se trata de especies homonucleares como el O2, N2 o Cl2, el momento dipolar no se altera durante la vibracin o la rotacin y, este tipo de compuestos no absorben en el infrarrojo. Tcnicas para la manipulacin de las muestras. 1-. Muestra de gases. El espectro de un lquido de bajo punto de ebullicin o de un gas se puede obtener permitiendo a la muestra que se expanda en una cubeta a la que se le ha hecho el vaco. Existe una variedad de cubetas para este objeto, con longitudes de camino ptico que varan desde unos pocos centmetros a varios metros. Las mayores longitudes de camino ptico se obtienen en cubetas compactas que poseen superficies reflectantes interna, de modo que el haz pasa numerosas veces por la muestra antes de salir de la cubeta. 2-. Disolventes. No existe un solo disolvente que sea transparente en toda la regin del infrarrojo medio. El agua y los alcoholes se utilizan rara vez, no slo porque absorben intensamente, sino porque tambin atacan a los haluros de metal alcalino, que son los materiales ms comunes que se utilizan en las ventanas de las cubetas. Por estas razones, es necesario secar los disolventes indicados en la figura anterior antes de ser utilizados. Debido a la tendencia de los disolventes a absorber, las cubetas para el infrarrojo suelen ser mucho ms estrechas (0,1 a 1 mm) que las empleadas en las regiones ultravioletas y visible. Los caminos pticos en el infrarrojo requieren por lo comn, concentraciones de muestra de 0,1 a un 10 %. Con frecuencia, las celdas son desmontables, con espaciadores de Tefln que

permiten variar la longitud del camino ptico. Las celdas de camino ptico fijo se pueden llenar o vaciar con una jeringa hipodrmica. Las ventanas de cloruro de sodio son las ms utilizadas y aun teniendo cuidado, stas finalmente se velan debido a la absorcin de humedad. Si se pulen con un polvo amortiguador vuelven a su condicin original. 3-. Lquidos puros. Cuando la cantidad de muestra es pequea o cuando no se dispone del disolvente apropiado, es habitual obtener los espectros del lquido puro. En este caso, slo una pelcula muy delgada tiene un camino ptico suficientemente corto como para producir espectros satisfactorios. Por lo comn, una gota del lquido puro se comprime entre dos placas de sal de roca para obtener una placa con un grosor de 0.01 mm o menos. Las dos placas se mantienen unidas por capilaridad y se colocan entonces en la trayectoria del haz. Sin duda, con esta tcnica no se obtienen datos de transmitancia muy reproducibles, pero resulta satisfactoria para muchas investigaciones cualitativas. 4-. Slidos. Los espectros de slidos que no pueden disolverse en un disolvente transparente al infrarrojo, se obtienen con frecuencia dispersando el analito en una matriz lquida o slida, y analizando la mezcla resultante. Estas tcnicas requieren que el tamao de la partcula del slido suspendido sea menor que la longitud de onda del haz infrarrojo; si no se cumple esta condicin, se pierde una parte de la radiacin por dispersin. Uno de los mtodos utilizados para preparar la mezcla a analizar consiste en triturar de 2 a 5 mg de una muestra finamente pulverizada (tamao de partcula < 2 m) en presencia de una o dos gotas de un aceite pesado de un hidrocarburo (Nujol). Si es probable que interfieran las bandas del hidrocarburo, se puede utilizar Fluorolube, un polmero halogenado. En cualquier caso, la mezcla resultante se examina luego como una delgada pelcula entre planas de sal. En una segunda tcnica, se parte de un miligramo o menos de una muestra finamente triturada que se mezcla ntimamente con unos 100 mg de polvo de bromuro de potasio desecado. La mezcla se puede efectuar con un mortero, y mejor an en un pequeo molino de bolas. La mezcla se comprime luego en un troquel especial a una presin de 700 a 1000 kg/cm2, para obtener un disco transparente. Se obtienen mejores resultados si se forma el disco en el vaco para eliminar l aire ocluido. A continuacin, el disco se coloca en el haz del instrumento para su anlisis espectroscpico. Los espectros resultantes a menudo presentan bandas a 345 y 1640 cm-1 (2,9 y 6,1 m) debidas a la humedad absorbida.

5-. Reflectancia difusa. La espectroscopia de reflectancia difusa en el infrarrojo se ha convertido en una tcnica importante para la determinacin rutinaria de los constituyentes en slidos finamente divididos. De hecho es ampliamente utilizada en la determinacin de protenas, humedad, almidn, aceites, lpidos y celulosa en productos agrcolas tales como granos y aceites de semillas, etc.

En la espectroscopa de reflectancia en el infrarrojo cercano, la muestra finamente pulverizada se irradia con una o ms bandas de radiacin de longitud de onda comprendida entre 1 y 2,5 m, o 10 000 y 4000cm-1. Se produce una reflectancia difusa, en la que la radiacin penetra a travs de la superficie de la capa de partculas, excita los modos de vibracin de las molculas del analito, y luego se dispersa en todas direcciones. De este modo, se produce un espectro de reflectancia que depende de la composicin de la muestra. En el grfico se escribe en el eje de la ordenada el logaritmo de la inversa de la reflectancia R, donde R es el cociente entre la intensidad de radiacin reflejada por la muestra y la reflectancia de un patrn, como puede ser el sulfato de bario u xido de magnesio finamente pulverizados. Para las mediciones de la reflectancia, las muestras se pulverizan hasta un tamao de partcula controlado y homogneo y se mide su reflectancia a dos o ms longitudes de onda. Para establecer las longitudes de onda ptimas se ha de emplear un tiempo y un esfuerzo considerables. La gran ventaja de los mtodos de reflectancia en el infrarrojo cercano es su rapidez y su simplicidad en la preparacin de la muestra. Aplicaciones cualitativas de la absorcin en el infrarrojo medio. La identificacin de un compuesto orgnico a partir de los espectros de infrarrojo es un proceso en dos etapas. La primera etapa implica la determinacin de los grupos funcionales que parece ms probable que estn presentes, examinando la regin de frecuencias de grupo, que abarca la radiacin comprendida desde los 3600 cm-1 a los 1200 cm-1 aproximadamente. La segunda etapa consiste en una comparacin detallada del espectro desconocido con los espectros de compuestos puros que contienen los grupos funcionales encontrados en la primera etapa. En este caso, la regin de la huella digital, de 1200 cm-1 a 600cm-1, es muy til, debido a que pequeas diferencias en la estructura y la constitucin de una molcula provocan cambios significativos en el aspecto y la distribucin de los picos en esta regin. En consecuencia, una gran coincidencia de la regin de "huella digital" (as como en otras) entre los espectros de dos compuestos constituye casi una evidencia de su identidad. La frecuencia aproximada ( o nmero de onda) en la que un grupo funcional, como C=O, C=C, C C C, o O absorbe radiacin infrarroja, se puede encontrar en tablas H, H, especializadas. Debido a las interacciones con otras vibraciones asociadas con uno o ambos tomos que forman el grupo, estas frecuencias denominadas frecuencias de grupo rara vez permanecen invariables. Por otra parte, los efectos de las interacciones suelen ser pequeos; como consecuencia de ello, se puede asignar un intervalo de frecuencias dentro del cual es muy probable encontrar el pico de absorcin para un grupo funcional determinado. Nota: Dependiendo de la forma de manejar una muestra para ser leda por IR ser el resultado del espectro o interferograma obtenido, ya que una muestra puede ser disuelta, pulverizada o leda de manera directa; de la forma como sea tratada depender la cantidad de interferencias o picos de fondo que deban tomarse en cuenta, para interpretar un espectro de IR.

Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra de grupos funcionales conocidos. Muestra___________________________ MATERIALES Y METODOS 1.-Espectrofotmetro de Luz Infrarroja Nicolet 2.-Esptula 3.- Mortero de gata con pistilo de gata 4.- Ventanas par IR de NaCl 5.- Prensa 6.- Dado para pastillas de IR 7.- Soporte para pastillas REACTIVOS: Las sustancias que a continuacin se mencionan deben ser grado espectro, a menos que se indique lo contrario. KBr Cloroformo Progesterona Argn HUP PROCEDIMIENTO a) Pastilla 1. Coloque una pequea cantidad de KBr (20mg aprox.) en el mortero de gata y mulalo un poco. 2. Arme el dado para hacer pastillas como le indique el profesor (a) y coloque el KBr dentro del dado. 3. Elabore una pastilla con ayuda de la prensa y retrela con las pinzas, no la toque con las manos. 4. Coloque la pastilla en el soporte para pastillas. 5. Lala como background en el equipo de FT-IR. 6. Retire el soporte y la pastilla del equipo, retire la pastilla del soporte y regrsela al mortero completa, adicione la punta de la esptula de progesterona y muela todo junto un poco. 7. Elabore nuevamente una pastilla con esta mezcla. 8. Colquela en el soporte para pastillas y lala como sample en el equipo FT-IR. 9. Imprima el espectro resultante. b) Lquida

10. Coloque en un vial una pequea cantidad de progesterona y adicione lo menos posible de cloroformo para disolverla. 11. Coloque dentro de la celda para lquidos de NaCl, cloroformo. Tape perfectamente y lea como background en el equipo de FT-IR 12. Limpie la celda con flujo de argn. 13. Adicione la progesterona disuelta en cloroformo a la celda de lquidos. 14. Colquela en el porta celdas y lala como sample en el equipo de FT-IR. 15. Imprima el espectro resultante c) Film o pelcula 16. Coloque una gota de cloroformo entre dos ventanas de NaCl. 17. Coloque las ventanas en el porta ventanas y lea como background. 18. Retire las ventanas y coloque un poco de progesterona disuelta en cloroformo entre dos celdas de NaCl. 19. Lea como sample en el equipo de FT-IR. 20. Imprima el espectro resultante. REPORTE 1. Interprete cada uno de los espectros basndose en las tablas de la introduccin. 2. Compare los espectros resultantes 3. Reporte lo que observa en cada uno de los espectros que imprimi. Concluya sobre los resultados obtenidos.

Practica 10 Identificacin de materiales de empaques polimricos Objetivo:


Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo de pelculas plsticas empleadas como empaques de alimentos, frmacos, productos comerciales etc.

Introduccin Es conocido que la radiacin absorbida por una molcula puede ser utilizada en tres formas diferentes: Para efectuar una excitacin electrnica. Para causar cambios en el movimiento vibracional Para causar cambios en el movimiento rotacional. Se ha demostrado de manera tanto terica como prctica que la radiacin UV-VIS tiene la suficiente energa para producir cambios electrnicos en los compuestos, en cambio la radiacin infrarroja solo es capaz de producir cambios en los estados vibracionales y rotacionales de los compuestos, ya que estos estn asociados a la absorcin de pequeas cantidades de energa, por esto en la regin infrarroja de 4 000 - 400 cm -1 existen estos cambios y por lo tanto nos interesa el estudio de las vibraciones y rotaciones en el IR normal. INTERPRETACION Para la interpretacin del espectro de IR, primero debemos conocer el espectro, sus ordenadas y sus abscisas como se muestra a continuacin.
% de T A

4000

1600 Grfica de un espectro de infrarrojo

400cm-1

En un espectro de IR tenemos dos zonas principalmente, la de 4000 a 1600 que es la zona de mayor informacin de grupos funcionales y la 1600 a 400 que es la zona de huellas donde podemos verificar o comprobar los grupos funcionales de la primera zona.

Los principales movimientos son:

STRETCHING

Asimtricos Simtricos
SCISSORING

BENDING

ROCKING WAGGING TWISTING

Los movimientos en el IR pueden aumentar por TONOS DE COMBINACION Y SOBRETONOS y puede disminuir por movimientos prohibidos, por alta simetra en la molcula. En la elucidacin de estructuras de compuestos orgnicos por espectroscopia IR se dar un resumen de los nmeros de onda en cm-1 en los cuales aparece n los grupos funcionales: Alcanos.- son compuestos que contienen metilos y metilenos los cuales presentan los siguientes nmeros de onda 2960, 2925, 2870, 2850, 1460, 1385, y 720 cm-1. Alcanos ramificados.- presentan un par de bandas 1170, 1210, y 1155 cm-1 1385 y su comprobacin en 1140,

Alcanos cclicos.- presentan bandas en la mismo regin que los alcanos pero la banda en 1460cm-1 aumenta en intensidad. Alquenos.- son compuestos que presentan dobles enlaces y sus bandas estn entre 3000 3080, 1601 - 1670, 1000 - 800 cm-1. Alquinos.- compuestos que presentan una triple ligadura y sus bandas aparecen en 3300, 2260 - 2100, 1300 - 1200 cm-1. Nitrilos.- presentan sus bandas en 2260- 2100 cm-1. Aromticos dan bandas entre 3001 - 3070, 2000- 1650, 1640-1300, 1250- 1100,1100 - 690 cm-1. Alcoholes.- dan bandas 3500, deforman la regin 1500, 1200 - 1000 cm-1. cidos.- presenta bandas en 3500, 1700cm-1 y deforma las regiones de 1400, 1200 cm-1. teres.- dan bandas en 1275 - 1075 cm-1 que es la banda principal.

Aldehdos.- presentan bandas en 2700 - 2800, 1700 cm-1. Cetonas.- su banda principal es de 1700 cm-1. Anhdridos.- sus bandas principales son las que se localizan en regiones1400, 1200 cm-1. Aminas.- sus bandas son 3500 - 3300, 1350 - 1500, 1000 - 750 cm-1 Nitros.- presentan dos bandas casi gemelas en 1550, 1350 cm-1. Tambin se pueden obtener espectros de IR interpretacin es complicada. de compuestos inorgnicos, aunque su 1800 y deforma las

FUNDAMENTO TEORICO Para aprovechar al mximo los interferogramas, sea cual sea el campo en el cual se trabaja, se recomienda analizarlos, de cualquiera de las siguientes formas: 1 A PARTIR DE LAS VIBRACIONES FUNDAMENTALES, para realizar este tipo de interpretacin se necesita la suficiente experiencia, ya que la asignacin y clasificacin de las bandas o picos, puede resultar complicada por la presencia de sobre tonos y bandas de combinacin. 2 LA INTERPRETACION POR COMPARACION es una de las ms usuales en sta tcnica lo que se hace es cotejar el interferograma de muestra con el interferograma de un estndar, de otras muestras que se tengan como referencia. Es importante mencionar algunos de los campos de aplicacin de esta tcnica y la utilidad de los mismos. ADHESIVOS Se utiliza para la identificacin de los componentes individuales de la formulacin de stos; como puede ser un polmero del tipo de Neopreno, resinas fenlicas, antioxidantes (NFENIL -B- NAFTIL AMINA), plastificantes, estabilizadores, etc. BIOQUIMICA Anlisis de: Piedras renales, piedras biliares, piedras de la glndula prstata, identificacin de esteroides. COSMETICOS Anlisis de: Lpiz labial, aceites esenciales, talcos, fragancias, antitranspirantes. DROGAS

Identificacin de narcticos y drogas peligrosas, deteccin de compuestos txicos en plantas y animales. CONTAMINACION Determinacin de aceite en compuestos orgnicos y en agua, identificacin de gases en el aire (calibracin cuantitativa de bajos niveles en ppm de gases en aire), anlisis de muestras de aire de polvo de cuarzo y asbestos, identificacin de pesticidas en suelos y aguas de riego. ACEITES ESENCIALES Y PRODUCTOS ALIMENTICIOS Identificacin de aceites esenciales, monitoreo de la calidad de productos alimenticios, deteccin de insecticidas en plantas alimenticias. GEOQUIMICA Caracterizacin de minerales (especialmente carbonatos) composicin qumica, medida del espesor de pelculas. PETROLEO Y LUBRICANTES Anlisis de: Aceite, gasolina, lubricantes, grasas, determinacin de aditivos, calidad de nuevos aceites. POLIMEROS Identificacin de polmeros, aditivos y plastificantes relacin de Me/PHn resinas, siliconas, determinacin de isocianatos en poliuretanos, dioctilftalatos en resinas de PUG, orgnicos complejos como el Hule, Resinas, Estreo ismeros, en Polmeros etc. FARMACEUTICOS Determinacin de compuestos farmacuticos comunes, determinacin de estructuras y componentes sintticos, anlisis de ungentos y cremas. TEXTILES Identificacin de fibras, aditivos textiles, fibras microscpicas, lubricantes en fibra, composicin del porcentaje de polister y lana, identificacin de retardadores de flama. Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra polimrica en pelcula, que sea empleada para empacar o almacenar. Muestra___________________________ MATERIALES Y METODOS 1. Espectrofotmetro de Luz Infrarroja Nicolet 2. Soporte para pastillas

PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. 5. Corra un background con solo aire en el equipo. Recorte un trozo de 2 cm2 de pelcula plstica y colquela en un soporte. Instale el soporte en el equipo y lalo como sample. Imprima el espectro obtenido. Vaya a la pantalla de bsqueda bibliogrfica del equipo (search) y busque en la biblioteca de polmeros por comparacin, a que material se parece el empaque que se ley. 6. Repita la misma operacin con cada uno de los empaques que obtenga como problema. REPORTE 1. 2. 3. Analice los espectros de infrarrojo que obtuvo por medio de las tablas que se han proporcionado. Compare su anlisis con las bsquedas realizadas por el equipo. Concluya con los resultados que obtuvo.

Concluya sobre la base de los resultados obtenidos.

MTODOS CROMATOGRAFICOS VIII . Cromatografa de Gases. Practica 11 Determinacin de un perfil de aroma en un perfume comercial Objetivo

Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo de mezclas de sustancias orgnicas, adems: 1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Cromatgrafo de Gases. 2. Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo de una mezcla de sustancias orgnicas. Introduccin La cromatografa es una tcnica en donde se lleva a cabo la separacin de compuestos con el propsito de identificar, cuantificar o purificar cada uno de los componentes de una mezcla de solutos, basndose en las velocidades con las que se mueve cada soluto a travs de un medio poroso arrastrado por un solvente, una mezcla de solventes o por gas. Existen diferentes divisiones en la prctica para la cromatografa como la de adsorcin, reparto, intercambio inico, exclusin molecular, y por afinidad. En esta cromatografa un soluto gaseoso (vapor de un lquido voltil) es transportado por una fase mvil gaseosa. De acuerdo al tipo de fases estacionaria se clasifica en dos: La fase estacionara suele ser un lquido no voltil que recubre el interior de la columna o un soporte slido de grano fino. Esta forma ms comn de cromatografa de gases se llama cromatografa de reparto o de particin gas lquido. En ocasiones se utilizan como fase estacionaria partculas slidas sobre las que el soluto puede adsorberse. En este caso la tcnica se denomina cromatografa de adsorcin gas slido. FUNDAMENTO TERICO La cromatografa de gases se utiliza para separar, identificar y cuantificar cualquier material que contenga una presin de vapor apreciable (1 a 1000 mm Hg) a una temperatura de operacin de la columna (medio de separacin) desde 70 C a 400 C. Anlisis cualitativo Se basa en la diferencia de velocidades de migracin de los componentes de una mezcla entre dos fases; una estacionaria y una mvil (gas), de tal manera que cada componente es selectivamente retenido por la fase estacionaria y eluye a un cierto tiempo (tiempo de retencin), dependiendo del programa empleado para su anlisis. Caractersticas de la muestra: Se requiere de un perfume comercial. Muestra___________________________

MATERIALES Y MTODOS. Agua Destilada Etanol R.A.

Matraces volumtricos de 10ml Cromatgrafo de Gases Columna megaboro de polaridad media. PROCEDIMIENTO. Preparacin de la muestra: Colocar 2 gotas de perfume en un vial con tapa perforable de 2 ml. Calentar brevemente a 45 C con el fin de evaporar las sustancias voltiles. Preparar al mismo tiempo una muestra de etanol en un vial de igual tamao y forma. Inyectar la muestra al cromatgrafo de fases con detector FID por medio de la tcnica de head space. Leer las muestras en el Cromatgrafo de Gases, ajustando la sensibilidad y rango. Columna: Programa de columna: 40C /5 min. a 200C/min, 10/min. Temperatura del inyector: 200C Temperatura del detector: 250C Flujo de gas acarreador: 5ml/min. Los datos obtenidos para la curva de calibracin graficarlos concentracin en % contra el rea. Leer la muestra problema y la referencia de etanol, identificando mediante el tiempo de retencin su presencia.

IX . Cromatografa de Lquidos Prctica 12 Determinacin de cido Acetil Saliclico en un producto farmacutico comercial Objetivo Demostrar cuantitativamente el contenido cido acetilsaliclico en un analgsico mediante cromatografa lquida de alta eficiencia. Adems de demostrar las ventajas de la tcnica para control de calidad. INTRODUCCIN

La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC), fue introducida como tcnica analtica en los aos 60. La cromatografa es un mtodo de anlisis inmediato que permite la separacin de uno o varios componentes de una mezcla para lograr su identificacin o cuantificacin utilizando las diferencias entre sus constantes de equilibrio, con la participacin de la fase mvil en la que los componentes de la mezcla son solubles y la fase estacionaria o fija que va a ejercer sobre ellos un efecto retardador. A este sistema que permite efectuar la separacin se denomina sistema de fases. Despus de la inyeccin, la mezcla disuelta en la fase mvil es transportada a travs de la columna y las molculas entran en contacto con la fase estacionaria provocando los fenmenos de intercambio que darn origen a la separacin. El proceso de separacin La separacin de sustancias presentes en una mezcla depende del hecho de que un compuesto sea retenido mas tiempo en la fase estacionaria que otro. En la superficie de la fase estacionaria, se ejercen fuerzas de atraccin que retienen o adsorben durante un corto instante los compuestos a separar. Despus de un cierto tiempo, dichos compuestos regresan a la fase mvil (eluyente) y son transportados a otro sitio de la columna, volviendo a iniciarse el proceso de separacin un repetido nmero de veces. La retencin de un compuesto depende mucho del eluyente. As una sustancia puede ser ms o menos retenida segn la fase mvil utilizada. El tiempo que tarda una sustancia desde que es inyectada en l aparato hasta que sale de la columna se denomina tiempo de retencin (tr). La retencin de una sustancia depende tanto de la naturaleza de la fase estacionaria como de la fase mvil con que se trabaje. La separacin de una mezcla en sus diferentes componentes se debe principalmente a la estructura porosa del soporte en la fase estacionaria. La ventaja de este tipo de estructuras reside en la enorme rea superficial que se genera. La fase mvil fluye a travs de las partculas del soporte quedando retenidas en los poros. De esta manera, la muestra en estudio pasa a travs de toda la superficie de la fase estacionaria y sus componentes son separados segn su tiempo de retencin. Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra farmacutica que contenga cido acetil saliclico, preferentemente en pastilla. Muestra___________________________ MATERIAL Y EQUIPO. - Columna ODS (Octadecilsilano) de 150 mm de largo por 4.5 mm de dimetro interno, partculas de 5m. - Cromatgrafo de lquidos de alta eficiencia con detector UV (254 nm) - Microjeringa de 10 l - Centrfuga

Tubos para centrfuga Mortero con pistilo.

REACTIVOS - Fase mvil: metanol agua (contenido 1% de cido actico) 45:55 v/v - Solucin de cafena 1.0 mg/ml (usando la fase mvil como disolvente) - Solucin de cido acetilsaliclico 10.0 mg/ml (fase mvil como disolvente) - Cafiaspirina o producto similar. - Metanol. PROCEDIMIENTO Se fija el flujo de la columna en 1 ml/min 1.- Determinacin del orden de elusin: Inyecte 10 l de cada uno de los estndares por separado. 2.- Calibracin de la deteccin Prepare varias mezclas de cafena y de aspirina a partir de las soluciones anteriores e inyecte 10 l de cada mezcla por triplicado. Calcular el rea de los picos obtenidos y trazar la curva de calibracin de cada componente. 3.- Cuantificacin del problema a) Preparacin de la muestra: Muela una tableta de Cafiaspirina y mezcle el polvo con 25 ml de metanol, centrifugue y afore a 50 ml b) Anlisis Inyecte por triplicado 10 l de la solucin anterior. c) Efecto de la longitud de onda: Repita la inyeccin de 10 l a otras dos longitudes de onda diferentes ( por ejemplo 245 y 265). Establezca sus conclusiones. CLCULOS El clculo se realizar por medio del Software, tomando en cuenta las concentraciones de las soluciones de referencia y muestra, as como los tiempos de retencin. A partir del Cromatograma que presente los mejores resultados, calcular el nmero de platos tericos con la siguiente ecuacin: tr 2 tr N = 16 = 5.54 2 W tr = tiempo de retencin del pico. W = longitud del pico en la base definido como la distancia entre los puntos de interseccin de las tangentes de inflexin con la lnea base. = Longitud o ancho del pico a media altura

REPORTE
El alumno entregar anexado a su reporte una copia de la informacin proporcionada por el equipo con respecto a las soluciones que inyect.

MTODOS TRMICOS X . Calorimetra Diferencial de Barrido Practica 13 Comparacin de Azcar y Aspartame por Calorimetra Diferencial de Barrido (DSC) Objetivo: Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis trmico de compuestos de inters. 1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Calormetro Diferencial de Barrido. 2. Que el estudiante aprenda interpretar un termograma. 3. Qu el estudiante compare los resultados obtenidos entre los 2 termogramas y los discuta. INTRODUCCIN El procesado de los azcares amorfos no cristalinos es la base de la tecnologa utilizada en la produccin de muchos alimentos, por ejemplo el empleo de la lactosa amorfa en los productos lcteos en polvo. Existen procesos industriales de fabricacin de productos con azucares en su composicin en los que se persigue la formacin de estructuras amorfas, por ejemplo la concentracin de disoluciones a altas temperaturas y el posterior enfriamiento rpido, la liofilizacin, el enfriamiento rpido de diluciones o la fusin de cristales y su enfriamiento rpido. El criterio seguido para la estabilidad de los productos amorfos es almacenarlos a temperaturas por debajo de la Tg. En este caso, el principal inters radica pues en el estudio de transicin vtrea. FUNDAMENTO TERICO. El estudio de compuestos orgnicos, inorgnicos y matrices complejas como los alimentos y compositos, se ha realizado en los ltimos aos por medio de la calorimetra diferencial de barrido, ya que esta tcnica resulta de gran utilidad al ser empleada para monitorear las condiciones de pureza, estabilidad, transicin vtrea, Tg de polmeros, capacidad calorfica, etc.. La tcnica de la Calorimetra Diferencial de Barrido mejor conocida por sus siglas en ingls DSC (Diferential Scanning Calorimetry), consiste en analizar los cambios de fase, estudiando los cambios observados, por la medida del flujo calorfico dentro o fuera de la muestra, (relativo a un material de referencia) como una funcin de la temperatura durante el propio proceso. Por ejemplo, el punto de fusin es un proceso endotrmico, durante el cual la muestra toma en red cantidades de calor (determinadas por el calor de fusin molar de la muestra), y se determina como un pico en la curva DSC. La posicin del pico en el eje de temperatura, est determinada por el punto de fusin y la forma del pico est determinado por la pureza de la muestra (entre otros parmetros). En DSC la muestra y la referencia se mantienen a la misma temperatura (T= Ts -Tr = 0) a travs de un programa controlador de la temperatura, cualquier diferencia de energa en la fuente de la muestra y la referencia ser grabada en el programa de temperatura. FUNCIONAMIENTO.

Antes de realizar medida alguna debe de calibrarse el calormetro para obtener en unidades de mcal la constante de calibracin y la escala de caloras debe determinarse con exactitud. El rango de las temperaturas de operacin del DSC-7 Perkin Elmer es de -68C a 500C. TECNICAS DE MUESTREO. Sobre un crisol limpio de Al3 se coloca la muestra, se tapa y se sella, el aspecto cualitativo del termograma se ver afectado por la disposicin de la muestra aunque el rea del pico no variar. Para obtener picos estrechos y finos debe asegurarse el contacto total de la muestra con la superficie del crisol. Existen crisoles que son capaces de soportar hasta 2 a 3 atm. dependiendo de su forma y de la forma en que son prensados. Si la muestra se oxidara en el intervalo del tiempo de trabajo deben usarse este tipo de crisoles mencionados y encapsulados en una atmsfera inerte. Se ha observado tambin una clula pero su elevada masa da lugar a una menor precisin en los datos de entalpia obtenidos. Antes de comenzar debes:

Tener mucho cuidado al introducir las muestras a la celda del equipo, ya que no deben presionarse, pues se corre el riesgo de daar los filamentos que se encuentran debajo de estas. Asegurarse de que los pans que contengan las muestras estn bien sellados, para evitar fugas y derrames que pueden daar el equipo. Todo el material debe estar limpio, los crisoles o pans de aluminio se lavan con acetona y se secan en la estufa, no se tocan con las manos. Usar siempre el material adecuado para cada fin por ejemplo, ( usar pinzas, para transportar los pans, no con la mano) Los residuos que se generen de la prctica debern deponerse en el envase destinado para ello.

Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra de azcar comercial y una de aspartame. Muestra___________________________

MATERIALES Y MTODOS. 1. 2. 3. 4. 5. Azcar Aspartame Gas Nitrgeno. Paneles de aluminio para lquidos. Esptula

6. Pinzas. 7. Calormetro Diferencial de Barrido DSC7 marca Perkin Elmer 8. Intra-cooler II marca Perkin Elmer. 9. Balanza analtica Mettler 10. Prensa para celdas de lquidos. PROCEDIMIENTO. 1. Pesar 2.5 mg +/- 0.2mg de la muestra de azcar y aspartame por separado en paneles limpios de aluminio previamente tarado 2. Sellarlo hermticamente con la prensa para lquidos 3. Colocar el panel que contiene el azcar en la celda de DSC con una referencia que consiste en un panel vaco, exactamente igual al de la muestra. 4. Equilibrar la temperatura de la muestra e iniciar el calentamiento a partir de la temperatura ambiente, a una velocidad de 20C/min hasta 240C. 5. Retirar el panel usado y colocar el que contiene la muestra de aspartame. 6. Analizar los resultados. Temperatura inicial 30C Temperatura final 240C Velocidad de barrido 20 C/min Peso de la muestra 2.5 mg Condiciones de encapsulamiento en paneles para lquidos Atmsfera de trabajo Nitrgeno 7. Comparar los termogramas que se obtuvieron y discutirlos. 8. Opcional. Ingresar una muestra de un polvo para preparar agua y tratar de identificar si lo que contiene es azcar o aspartame o bien otro edulcorante.

Concluir sobre los resultados obtenidos.

OTROS MTODOS XI. Resonancia Magntica Nuclear Practica 14 Determinacin del espectro de RMN de una muestra alcohlica. Objetivo: 1. Que el estudiante aprenda las bases para realizar un anlisis de RMN.

2. Que el estudiante conozca las diferentes partes de una resonancia magntica nuclear. 3. Que el estudiante conozca las bases para la interpretacin de un espectro de RMN INTRODUCCIN La resonancia magntica nuclear es un fenmeno fsico basado en las propiedades magnticas que poseen los ncleos atmicos. La RMN permite alinear los campos magnticos de diferentes tomos en la direccin de un campo magntico externo. La respuesta a este campo externo depende del tipo de ncleos atmicos por lo que esta tcnica puede utilizarse para obtener informacin sobre una muestra. La resonancia magntica nuclear hace uso de las propiedades de resonancia aplicando radiofrecuencias a los tomos o dipolos entre los campos alineados de la muestra y permite estudiar la informacin estructural o qumica de una muestra. La RMN se utiliza tambin en el campo de la investigacin de ordenadores cunticos. Sus aplicaciones ms frecuentes se encuentran ligadas al campo de la medicina.

FUNDAMENTO TERICO. La espectroscopia de resonancia magntica nuclear (RMN) es una tcnica empleada principalmente en la elucidacin de estructuras moleculares, aunque tambin se puede emplear con fines cuantitativos. Algunos ncleos atmicos sometidos a un campo magntico externo absorben radiacin electromagntica en la regin de las frecuencias de radio o radiofrecuencias. Como la frecuencia exacta de esta absorcin depende del entorno de estos ncleos, se puede emplear para determinar la estructura de la molcula en donde se encuentran stos. Para que se pueda emplear la tcnica los ncleos deben tener un momento magntico distinto de cero. Esta condicin no la cumplen los ncleos con nmero msico y nmero atmico par. Los ncleos ms importantes en qumica orgnica son: H, 13C, 31P, 19F y 15N. Otros ncleos importantes: 29Si, 77Se, 117Sn, 195Pt, 199Hg, 203Tl, 205Tl, 207Pb Se prefieren los ncleos de nmero cuntico de espn nuclear igual a 1/2, pues si no dan seales muy anchas. Tambin es mejor que el istopo sea abundante en la naturaleza, pues si no dan seales dbiles. Por eso, uno de los ms tiles en la elucidacin de estructuras es el H, dando lugar a la espectroscopa de resonancia magntica nuclear de protn. Tambin es importante en qumica orgnica el 13C, pero se trata de un istopo poco abundante y presenta dificultades. La tcnica se ha empleado en qumica orgnica, qumica inorgnica y bioqumica. La misma tecnologa tambin ha terminado por extenderse a otros campos, por ejemplo en medicina, en donde se obtienen imgenes por resonancia magntica.

Antes de comenzar debes:


Tener mucho cuidado al introducir las muestras a la celda del equipo, ya que no deben presionarse, pues se corre el riesgo de daarlas Todo el material debe estar limpio. Los residuos que se generen de la prctica debern deponerse en el envase destinado para ello.

Caractersticas de la muestra: Se requiere de una muestra de etanol grado reactivo. Muestra___________________________

MATERIALES Y MTODOS. Etanol grado reactivo Equipo de RMN Celda para lquidos Pipetas pasteur PROCEDIMIENTO Establecer las condiciones adecuadas para leer la muestra Leer una muestra de etanol grado reactivo Obtener el espectro correspondiente. Interpretar el espectro obtenido. Concluir sobre los resultados obtenidos.

Bibliografa Brown. Introduction to Thermal Analysis Ed. Chapman Harvey David. Qumica Analtica Moderna. Ed. Mc Graw Hill. Espaa 2002. 573 pp. Martnez, Andrs, Chiralt, Fito. Termodinmica y Cintica de Sistemas Alimento Entorno. 1 ed. en Mxico Ed. IPN Mxico. 1999.

Skoog and Leary Anlisis Instrumental 4. Edicin. Ed. Mc. Graw Hill. Madrid.1994. Standard Test Method for Mol Percent Impurity by Differential Scanning Calorimetry. ASTM. Designation :E 928-85 (reaproved 1989). (pags. 648-651) Rouessac Francis, Rouessac Annick. Mtodos y Tcnicas Analticas Instrumentales Modernas Ed. Mc. Graw Hill. Madrid. 2003. 441pp. Rubinson Kenneth A., Rubinson Judith F. Analisis Instrumental. Ed. Prentince may Espaa 2000. 847 pp.

CUESTIONARIOS Espectroscopia 1. Explica los modos de operacin del espectrofotmetro de ultravioleta-visible. 2. Qu tipo de compuestos o sustancias se podran cuantificar por espectrofotometra UV / Visible? 3. - Por qu es importante trabajar en el rango lineal de la ley de Beer? 4. - Para qu sirve la absortividad molar en ultravioleta? 5. Cuales son las reacciones que se realizan en la determinacin de fsforo?. 6. Cules son los puntos de control de calidad para esta determinacin? 7. Cmo esta constituido un equipo de espectrometra UV/VIS? 8. Cul es la ecuacin que present Planck para explicar el fenmeno de absorcin? 9. Cul es la diferencia entre energa de absorcin y energa de emisin? 10. Cules son las partes fundamentales de un espectrofotmetro de absorcin atmica? 11. Cmo est constituida una lmpara? 12. Qu es el lmite de deteccin? 13. Cul es la principal diferencia entre los espectros de IR obtenidos? 14. A qu crees que se deban estas diferencias? 15. Para que es necesario correr un background antes de cada corrida de IR? 16. Investiga de que materiales pueden ser las celdas de IR y por qu se usan ms comnmente, las elaboradas con NaCl? 17. Por qu es posible comparar dos espectros de IR para identificar un material? 18. Por qu debo realizar un background antes de leer la muestra si esta no esta disuelta en una matriz? 19. Realiza una bsqueda bibliogrfica y menciona cuales son los empaques ms comunes para alimentos. Cromatografa 20. Cul es el fundamento de la Tcnica de Cromatografa de Gases? 21. Qu caractersticas debe tener una muestra para poder ser analizada por Cromatografa de Gases? 22. Si la muestra que voy a analizar es polar, Qu tipo de columna debo emplear para el anlisis? 23. Cuales son las partes de un Cromatgrafo de Gases? 24. Qu caractersticas deben tener los gases que se emplean para el detector FID? 25. Qu es el tiempo de retencin relativo? 26. Dibuja un diagrama de un Cromatgrafo de Gases y menciona cul es el trayecto de un analito dentro del equipo?

27. Cul es el principio de la Cromatografa? 28. Diferencia entre Cromatografa de Gases y Lquidos? 29. Cules son los criterios para la eleccin de la fase mvil?

30. Cuantos tipos de detectores existen? 31. Que funcin lleva a cabo la bomba en un cromatgrafo de lquidos? 32. Que es el tiempo de retencin? Anlisis Trmicos 33. Cul es el principio de la tcnica de Calorimetra Diferencial de Barrido? 34. Para qu se emplea bsicamente la tcnica de Calorimetra Diferencial de Barrido? 35. Cules son los cambios Fsicos o qumicos que pueden detectarse en un material y como se representan estos en el termograma? 36. Si mantengo un material a cierta temperatura por un tiempo conocido que tcnica estoy empleando? 37. Si t deseas analizar un alimento (por ejemplo queso) para conocer su composicin de grasas y cuentas con un DSC, que experiencias propondras y por que? 38. Para analizar un compuesto desconocido, que precauciones debes tener para realizarle un anlisis? 39. Elabora un diagrama de bloques del DSC. 40. Cul es el principio de la tcnica de Calorimetra Diferencial de Barrido para la determinacin de Pureza? 41. Cmo se representa una fusin en un termograma? 42. Cules seran las razones para no confiar en una determinacin de pureza por DSC? 43. Para analizar un compuesto desconocido, que precauciones se deben tener para realizarle un anlisis de pureza?