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1. SISTEMA NACIONAL DE EDUCACION SUPERIOR TECNOLOGICA INSTITUTO TECNOLOGICO DE LA REGION MIXE INGENIERIA EN DESARROLLO COMUNITARIO Compil: M.C.

Carlos Antonio Martinez Santa Mara Tlahuitoltepec, Mixe, Oaxaca. Agosto 2007 1 MICROBIOLOGIA 2. APORTACIN DE LA ASIGNATURA AL PERFIL DEL EGRESADO Permite adquirir conocimientos bsicos relacionados con la organizacin de los microorganismos. OBJETIVO(S) GENERAL(ES) DEL CURSO El alumno conocer la diversidad de los microorganismos y su aplicacin como productores, transformadores y causantes de enfermedades. Utilizar tcnicas especficas para su cultivo, aislamiento, purificacin e identificacin de los mismos. A fin de incrementar la produccin agropecuaria, forestal e industrial: optimizando el uso de los recursos disponibles para ello, sin afectar el ambiente TEMARIO. Unidad 1. Introduccin a la microbiologa. 1.1. Antecedentes 1.2. Desarrollo histrico 1.3. Conceptos bsicos 1.4. Relacin con otras ciencias 1.5. Importancia 1.5.1. La distribucin de los microorganismos en la naturaleza 1.5.2. Campos de aplicacin de la microbiologa. Unidad 2. Mtodos microbiolgicos. 2.1. Mtodos de cultivo 2.1.1. Tipos 2.1.2. Clasificacin de medios por uso 2.2. Preparacin de medios 2.3. Tcnicas de cultivo 2.3.1. Mtodos para aislar cultivos puros. 2.3.2. Siembra en tubo 2.4. Preparaciones para microscopia 2.4.1. Tipos de microscopios 2.5. Caractersticas para la identificacin 2.5.1. Morfolgicas 2.5.2. Bioqumicas 2.5.3. Antignicas 2 MICROBIOLOGIA 3. Unidad 3. Nomenclatura, taxonoma y caractersticas de los microorganismos 3.1. Virus 3.1.1. Propiedades generales 3.1.2. Criterios de clasificacin 3.1.3. Nomenclatura y taxonoma 3.1.4. Estructura 3.1.5. Reproduccin 3.1.6. Importancia 3.2. Bacterias 3.2.1. Propiedades generales 3.2.2. Criterios de clasificacin 3.2.3. Nomenclatura y taxonoma 3.2.4. Estructura 3.2.5. Reproduccin 3.2.6. Importancia 3.3. Algas 3.3.1. Propiedades generales 3.3.2. Criterios de clasificacin 3.3.3. Nomenclatura y taxonoma 3.3.4. Estructura 3.3.5. Reproduccin 3.3.6. Importancia 3.4. Protozoarios 3.4.1. Propiedades generales 3.4.2. Criterios de clasificacin 3.4.3. Nomenclatura y taxonoma 3.4.4. Estructura 3.4.5. Reproduccin 3.4.6. Importancia 3.5. Hongos 3.5.1. Propiedades generales 3.5.2. Criterios de clasificacin 3.5.3. Nomenclatura y taxonoma 3.5.4. Estructura 3.5.5. Reproduccin 3.5.6. Importancia 3.6. Nematodos 3.6.1. Propiedades generales 3.6.2. Criterios de clasificacin 3.6.3. Estructura 3.6.4. Reproduccin 3.6.5. Importancia Unidad 4. Factores Ambientales que afectan el crecimiento, desarrollo y reproduccin de microorganismos. 3 MICROBIOLOGIA 4. 4.1. Factores de crecimiento 4.2. Presin Hidrosttica 4.3. Temperatura 4.4. Potencial de Hidrgeno (pH) 4.5. Oxgeno 4.6. Nutrientes Unidad 5. Metabolismo Microbiano. 5.1. Origen de las cepas industriales 5.2. Propiedades de un microorganismo industrial 5.3. Productos industriales 5.3.1. Empleo de microorganismos en la elaboracin de alimentos 5.4. Metabolitos microbianos 5.4.1. Primarios 5.4.2. Secundarios 5.5. Control del crecimiento microbiano en alimentos 5.5.1. Control qumico 5.5.1.1. Actividad antimicrobiana 5.5.2. Control biolgico 5.5.2.1. Antimicrobianos naturales FUENTES DE INFORMACIN 1. Alexander, M. 1980. Introduccin a la microbiologa del suelo. ed. GT. Mxico. 2. Alexopoulos, C. J. 1979. Introduction to Mycology. De. John Wiley and Sons. USA. 3. ATLAS, R.M. 1988. Microbioly fundamentals and applications. ed. MacMillan Publishing Company. USA. 807

p. 4. Brock T.D., Smith, D.W. y Madigan, M.T. 1987. Microbiologa. ed. Prentice-Hall. Mxico. 906 p. 5. Carone, D.M. 1986. Micologa. ed. Pueblo y Educacin. Mxico. 6. Carter G.R. M.M. Chengappa. 1998. Bacteriologa y Micologa Veterinaria. Aspectos esenciales. Ed. Manual Moderno S.A de C.V. 7. Frazier, W.C. y Westhoff, D.C. 1991. Microbiologa de Alimentos. ed. Acribia, Espaa. 522 p. 8. Freedman B.A. 1998. Microbiologa de Burrows. Editorial Interamericana Mc Graw-Hill 9. I.P.N. 1991. Manual de prcticas de microbiologa sanitaria. Departamento de microbiologa de la ENCB. Mxico. 250 p. 4 MICROBIOLOGIA 5. 10. Jay, J. M. 1986. Modern Food Microbiology. Third edition. Van Nostrand Rewinhold Company, New York. 11. Koneman, Allen, Dowell, Sommers, Winn. Diagnostico Microbiolgico. Texto y Atlas de color Editorial Medica Panamericana S.A 12. Lorraine, A.S. 1985. Principles of Microbiology. Times Mirror/Mosby. College Publishing. Canad. 929 p. 13. Madigan, T.M. et. al 1998. Biologa de los Microorganismos. 8a. Edicin. Prentice Hall Iberia, Madrid, Espaa. 14. Pelczar, M.J. Jr., Reid, R. y Chan. E.C.S. 1983. Microbiologa. ed. Mc Graw Hill. Mxico. 826 p. 15. Richards, B.N. 1987. The Microbiology of terrestrial ecosystems. ed. Logman. England. 399 p. 16. Sceley, H.W. and Van Demark, P.J. 1987. Microbes in action: a laboratory manual of microbiology. ed. W.H. Freeman Company. USA. 17. Villee, A.C. 1996. Biologa. 8a. Edicin. McGraw Hill Editores. Mxico, DF. VINCULOS DE UTILIDAD: 1. http://web.uct.ac.za/microbiology/manual/MolBiolManual.htm 2. http://www-micro.msb.le.ac.uk/210/bs210.html 3. http://www.slic2.wsu.edu:82/hurlbert/micro101/pages/101hmp g.html 4. http://www.umsl.edu/~microbes/links.html 5. http://www.bact.wisc.edu/microtextbook/ 5 MICROBIOLOGIA 6. Unidad 1. Introduccin a la microbiologa 1.1. Antecedentes El conocimiento humano sobre los efectos producidos por los microorganismos ha estado presente incluso desde antes de tener conciencia de su existencia; debido a procesos de fermentacin provocados por levaduras se puede hacer pan, bebidas alcohlicas y productos derivados de la leche. En la antigedad la causa de las enfermedades era atribuida a castigos divinos, fuerzas sobrenaturales o factores fsicos (La 6 MICROBIOLOGIA 7. palabra malaria significa mal aire, se crea que era el aire viciado de los pantanos el que provocaba esta enfermedad). Durante este periodo previo al descubrimiento de los microorganismos, los naturalistas solo podan especular sobre el origen de las enfermedades. La microbiologa es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeos (de mikros "pequeo", bios, "vida" y logos, "estudio"), tambin conocidos como microbios. Es la rama de la biologa dedicada a estudiar los organismos que son solo visibles a travs del microscopio (virus, procariontes y eucariontes simples). Son considerados microbios todos los seres vivos microscpicos consistentes en una sola clula, es decir unicelulares, as como aquellos que forman agregados celulares en los cuales todas las clulas son equivalentes (en los cuales no existe diferenciacin celular). Los microorganismos pueden ser eucariotas (las clulas poseen ncleo), tales como los hongos y los protistas, o procariotas (clulas carentes de ncleo), como las bacterias y los virus (aunque los virus no son considerados seres vivos estrictamente hablando). Aunque los conocimientos microbiolgicos de que se dispone en la actualidad son muy amplios, todava es mucho lo que queda por conocer y constantemente se efectan nuevos descubrimientos en este campo.

Tanto es as que, segn las estimaciones ms habituales, slo un 1% de los microbios existentes en la biosfera han sido estudiados hasta el momento. Por lo tanto, a pesar de que han pasado ms de 300 aos desde el descubrimiento de los microorganismos, la ciencia de la microbiologa se halla todava en su infancia en comparacin con otras disciplinas biolgicas tales como la zoologa, la botnica o incluso la entomologa. Al ser muchos de estos organismos patgenos, la microbiologa se relaciona con ramas de la medicina como patologa, inmunologa y epidemiologa. 1.2. Desarrollo histrico. En la historia evolutiva de la microbiologa a permitido intervenir a varios cientficos. La microbiologa inicio cuando el hombre empez a pulir el vidrio y a combinarla con el objeto de lograr amplificaciones de organismos muy pequeos (inicio con la aparicin del microscopio). 7 MICROBIOLOGIA 8. En el siglo XIII Roger Bacon, postulo que las enfermedades son causadas por seres invisibles. En 1658 un monje llamados Kircher, hizo referencia de gusanos invisibles que intervenan en la descomposicin de cuerpos orgnicos, en la carne, en la leche y en exudados diarreicos. Fue el primero en determinar que las bacterias y otros miembros producen enfermedades. En 1655 descubri la clula en un pedazo de corcho. De 1632 a1723 el holands Antonio Van Leeuwenhock fue el primero en hacer descripciones y dibujos precisos de bacterias y protozoarios que fueron observados por el microscopio. Su descubrimiento no fue apreciado. Louis Paster. Descubri la participacin de los microorganismos en la fermentacin para la elaboracin de vinos y cervezas. Demostr mediante experimentos que las bacterias son la causa de algunas enfermedades. Junto con Robert Koch comprobaron que el carbunco en los animales era producido por una bacteria. En 1880 aisl el germen causante del clera aviar (gallinas), desarrollando la bacteria en cultivo puro. Trabajo con la vacuna contra la hidrofobia o rabia, aislando el germen en cultivo puro. Robert Koch. Aisl las bacterias que causan el carbunco en bovinos y ovinos, descubriendo los bacilos en las puntas angulosas en la sangre. Fue la primera vez que se comprob que una bacteria causa enfermedad en los animales. Con este antecedente estableci unos postulados: (postulado de Koch), que indican los siguientes. 1. El organismo especfico debe siempre estar asociado a la enfermedad. 2. El organismo debe ser aislado y obtenido a cultivo puro en laboratorio. 3. El cultivo puro inoculado a un animal susceptible, produce la enfermedad. 4. Debe recuperarse en cultivo puro el organismo en el animal infectado experimentalmente. 8 MICROBIOLOGIA 9. Aisl la bacteria que causa la tuberculosis. Estableci las reglas para indicar que las bacterias son las causantes de enfermedades. Observo que si se extiende las bacterias en una lamina de vidrio delgada agregndola colorantes se podr observar mejor. En 1905 fue acreedor al premio novel por los descubrimientos realizados Con Louis Pasteur y Robert Koch se abri una nueva era de conocimiento para la microbiologa, a ellos asistieron varios cientficos para ser asociados, para distribuir esos conocimientos en toda Amrica y Europa. Joseph Lister en 1878 obtuvo por primera vez cultivos pares de bacterias por diluciones sereadas en medios lpidos. Busco una forma de apartar bacterias de las heridas y por las incisiones causadas por los cirujanos, utilizando el acido fenico y polvenizaciones de bicloruro de mercurio estableciendo la antisptica quirrgica y los principios de la tcnica asptica (sin intencin) de hoy. Edwin Klebs y Frederick Leoffler descubrieron el bacilo de la difteria. Emil y Kitasado crearon la antitoxina para controlar el ttano, a dems de que ellos fueron seguidores de

los descubrimientos de Pasteur y Koch que fueron aprovechados inmediatamente en el campo agropecuario y en la industria. A finales del siglo XIX el ruso Sergio winogradski, demostr que las bacterias adsorban nitrgeno de la atmsfera hacindose indispensable para el alimento de las plantas y de los animales. En 1901 el microbilogo holands Beinbjerink descubri el nitrgeno producida por las bacterias en el suelo. Indicando que stas producen fertilidad en el suelo. El Dans Anes Emil Cristian Hansen, realiz estudios para uso industrial de las fermentaciones mediante el cultivo de bacterias en la produccin de vinagre (acido actico). Conn, Cennicut y Weisman, en Alemania de 1890 a 1891 realizaron cultivos puros para la fabricacin de mantequilla. 9 MICROBIOLOGIA 10. En 1889 el austriaco Avamert, cre cultivo puro para la fabricacin de queso. A final del siglo XIX Barril, descubri la enfermedad del tizn en la pera. En 1915 Smith y Bunquet descubrieron que los insectos son portadores de enfermedades virosas de planta infectadas a planta sana. En el ao de 1900 la microbiologa caus gran importancia por que se le incluy como una rama de la biologa 1.3. Conceptos bsicos Desde el punto de vista general la microbiologa: es la ciencia que trata sobre el estudio de microorganismos o microbios, sus caracterstica y su influencia con su habitad (tiende a modificar su habitad). En puntos de vista mas amplio la microbiologa estudia a los microorganismos y sus actividades, las formas, estructuras, metabolismo, fisiologa, reproduccin y crecimiento, identificacin, distribucin en la naturaleza. Su relacin con otros seres, sus efectos perjudiciales y benficos en humanos en plantas y animales, as como las alteraciones fsicas y qumicas que provocan en su medio. La microbiologa estudia a los seres unicelulares. Todos los organismos vivos unicelulares estn compuestos qumica y biolgicamente de una misma forma, poseen hidratos de carbono, lpidos, protenas, cidos nucleicos, estn bien constituidos por el ncleo, membrana o pared celular. Todos los sistemas biolgicos tienen en comn las caractersticas de: 1. Capacidad de reproducirse. 2. Capacidad de asimilar e ingerir sustancias nutritivas y tienen la facultad de metabolizarla. Para producir energa y desarrollarse 3. Capacidad de excretar productos de desechos 4. Capacidad de reaccionar a los cambios de medio ambiente (irritabilidad). 10 MICROBIOLOGIA 11. 5. La susceptibilidad a mutacin. 1.4. Relacin con otras ciencias La biologa Es el estudio de los diversos organismos vivientes, en otras palabras es el estudio de la vida. Para su comprensin y entendimiento se divide en dos grandes partes: 1). Unidad taxonmica: Contempla la botnica, zoologa, microbiologa. Botnica. Estudia diversas especies de plantas, se dividen en criptgamas: No poseen semillas y se reproducen sexualmente. Las fanergamas: Dan frutos y flores, se divide en: Angiosperma. Tiene el ovulo dentro del fruto y se divide en monocotiledneas, dicotiledneas. Gimnosperma. Tienen el ovulo fuera del fruto y el ovulo fuera del ovario. Zoologa. Estudia las diversas especies de animales se divide en: Invertebrados. No tienen huesos, y se dividen en invertebrados inferiores, son los que tienen mas clulas como; moluscos, lombrices, los invertebrados superiores son las que pueden tener algo de dureza, los artrpodos por ejemplo, chicharras, chapulines. Vertebrados. Tienen huesos y se encuentran los cordados inferiores que pueden ser es la mobranquias (tiburn, pez, espora, mantaraya), y los cordados superiores como; anfibios, reptiles, aves, mamferos.

Microbiologa. Ciencia que trata sobre el estudio de microbios o microorganismos: bacterias, hongos, virus, protozoarios, algas, nematodos. 11 MICROBIOLOGIA 12. 2). Unidad bsica: Corresponde al estudio de la interrelacin de los diversos organismos y ciencias que la poseen. Organismos procariticos y eucariticas. 1). Los organismos procariticos. Los constituyen las clulas incompletas, porque no tienen ncleo definido, el jugo nuclear esta en contacto directo con la membrana celular. 2). Organismos eucariticos. Los constituyen las clulas completas. Estn constituidas por organelos y microestructuras. Organeros. Tienen membrana propia y estn en contacto directo con el citoplasma. Clasificacin de los reinos para los seres vivos. Reino monera. Lo constituyen algunas bacterias y algas cianofitas, poseen clulas procariticas. Reino protista. La conforman los protozoarios, algunas bacterias y algas (clorofceas, rodofceas, feofceas). Estn constituidas por clulas eucariticas. Reino fung. Lo integran los hongos, moho y levaduras. Poseen clulas eucariticas. Reino vegetal. Integrado por planta criptgamas, fanergamas, gimnosperma, angiosperma, monocotiledneas, dicotiledneas. Poseen clulas eucariticas. Reino animal. Integrados por seres invertebrados y vertebrados poseen clulas eucariticas. 1.5. Importancia de la microbiologa. Los microbios son microorganismos ideales para investigacin, porque utilizan menos espacios y tiempo para la observacin y experimentacin. Los microorganismos proporcionan conceptos bsicos para la comprensin de la fisiologa y gentica y las reacciones fsicas - qumicas que son la base de la vida. 12 MICROBIOLOGIA 13. Proporcionan conocimiento sobre la reproduccin y desarrollo de organismos, en una bacteria por ejemplo: en 24 horas. Se conoce el proceso metablico de los microorganismos, que es igual a los organismos superiores. Es importante porque se observan los diferentes cambios que se presentan por alterar el medio que nos rodea. Los microorganismos poseen potencialidades mayores que otros organismos, en el aspecto fisiolgico y bioqumico. Con la microbiologa se conocen y describen nuevos microbios tiles y perjudiciales. Con el conocimiento de la microbiologa, para los microbios benficos, se utilizan, en la industria, alimento, agricultura, medicina y en la ciencia en general. Con los nuevos conocimientos en la qumica, fsica, matemticas (bioestadstica o biometra, ingeniera gentica) se podr aportar mayores caractersticas de la microbiologa. Los microbilogos han hecho contribuciones fundamentales a la biologa y medicina, especialmente en los campos de la bioqumia, gentica y biologa celular. Los microbios tienen muchas caractersticas que los hacen organismos modelo ideales: Son pequeos, por lo que no consumen muchos recursos. Algunos tienen tiempos de generacin muy cortos (el tiempo necesario para la divisin de una clula baterial en dos en condiciones ptimas; ~30 minutos para E. coli, pero de 12 a 24 h para Mycobacterium tuberculosis). Las clulas pueden sobrevivir fcilmente separadas de otras clulas. Los eucariontes unicelulares se reproducen por divisin mittica y los procariontes mediante fisin binaria. Esto permite la propagacin de poblaciones clnicas genticamente iguales. Pueden permanecer congelados por grandes perodos de tiempo. An y cuando el 90% de las clulas mueran en el proceso de congelacin, existen millones de clulas en cada mililitro de lquido cultural. La extensiva caracterizacin de microbios

ha permitido que stos sean usados en la industria como herramientas experimentales en diferentes ramas de la biologa. 13 MICROBIOLOGIA 14. 1.5.1. La distribucin de los microorganismos en la naturaleza. Los microorganismos se encuentran en todas partes, son transportados por la corriente de aire desde la superficie de la tierra hasta el contacto con la atmsfera. Se localizan desde las partes mas profundas de los ocanos hasta las partes ms altas de las montaas. Se encuentran en los suelos frtiles (porque proporcionan nitrgeno (N) y transforman la materia orgnica). Son arrastrados por arroyos y ros para ser depositados en algunos lugares como: lagos, lagunas, esteros. Se localizan en los desechos humanos, si estas son arrastrados por aguas se infectan y causan enfermedades. Abundan donde se encuentra mucho alimento, humedad y una temperatura propicia. Los microorganismos viven en las mismas condiciones ambientales que las personas por lo que estamos rodeados de microbios, por ejemplo en el aire, en el alimento, en la superficie de nuestros cuerpos, en las partes interna y orificios corporales, nariz, boca, esfago, odo, etc. Afortunadamente la gran mayora de los microbios son inocuos para las partes sanas, a dems de poseer defensas contra ellos. 1.5.2. Campos de aplicacin de la microbiologa. Para su aplicacin varios microbilogos se especializan en cierto tipo de conocimiento especficos de microbios, existiendo: la bacteriologa, la protozoologa, la parasitologa (estudio de los parsitos micro y macro, existentes), micologa (trata el estudio de hongos, mohos y levaduras), la virologia, ficologa (estudio de algas). Existen tambin otras disciplinas muchos ms especficos como la gentica bacteriana, la fisiologa de las algas, la citologa de los protozoarios. Hay muchos campos de aplicacin de la microbiologa tales como: la microbiologa mdica, industrial, de alimentos, de suelo, ambiental, acutica, agua, drenaje, aire, leche, de los insectos del espacio (exobiologa) y los microorganismos y transformaciones bioqumicas 14 MICROBIOLOGIA 15. Unidad 2. Mtodos microbiolgicos. 2.1. Medio de cultivo Material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos, as como efectuar pruebas de susceptibilidad. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular, pero tambin pueden presentarse hidratados y preparados. Por su tamao de los microbios solo se pueden distinguir a travs del microscopio. Por lo que no se puede estudiar una sola clula en forma aislada. Por esta razn se estudia en grupos constituyendo los cultivos. En esta forma se estudia millones de microbios. El cultivo de microorganismos. Es el procedimiento que promueve el crecimiento y desarrollo de microorganismos en el laboratorio, proporcionndoles las condiciones ambientales 15 MICROBIOLOGIA 16. favorables como: nutrimentos, temperatura, pH y una a creacin. Son tambin controlados otros factores como la concentracin salina, presin osmtica, la luz para organismos fotosintticos. 2.1.1. Tipos de medios de cultivo Los tipos dependen de la cantidad, clase y lugar o medio donde se realicen los estudios de los microorganismos. 1. Cultivo axenico: Es aquel microorganismo, bacteria, hongo, alga, protozoo, etc., se cultiva en un medio libre, de otro tipo de microorganismo. 2. Cultivo Puro: Se realiza en microorganismos, protozoo, bacteria, hongo, que se cultivan en un medio artificial, y de laboratorio, obteniendo una generacin en una sola clula para conservar sus caractersticas genticas puras. Diferencias: En el cultivo axenico es un grupo de bacterias en cultivo, pero sin control, y en el cultivo puro, se

lleva un control de reproduccin para que conserve sus caractersticas genticas puras. 3. Cultivos Mixtos: Se realiza cuando dos o mas especies de microorganismos, se desarrollan en su conjunto en un solo medio. Es comn este tipo en la naturaleza. 2.1.2. Medios de cultivo Es el medio seleccionado para realizar una investigacin dependiendo de la especie, en general, para establecer un medio o mtodo de cultivo, se tienen las siguientes consideraciones: 1. Se puede levantar una cosecha de clulas que se tiene a la mano. 2. Determinar el tipo de organismo para investigacin o realizar el cultivo. 3. Aislar un tipo de microorganismo de su fuente natural, para poder obtener lo anterior se requiere del medio de cultivo, como es el: a). Laboratorio: Es el espacio donde se realizan las actividades. 16 MICROBIOLOGIA 17. b). Materiales de Laboratorio: Tubo de ensayo, matraces, capsula de petri, mechero de bunsen, etc. c). Sustancias: Productos qumicos a utilizar, agar, agua deshidratada (purificada), reactivos (medir el PH), etc. e). Equipo: Estufas, autoclave, microscopios, balanzas, etc. 2.2. Preparacin de medios de cultivo Para la preparacin de los medios se debe tener a disposicin la sustancia. Por ejemplo para el caso de bacterias en ocasiones se usa la leche entera semidescremada o descremada. Los materiales deben ser esterilizados a travs de las autoclaves. Tener a disposicin el agar (extracto polisacrido de las algas rojas rodofceas es utilizado en microbiologa como solidificante) o caldo nutritivo que ser como base del medio para reproduccin. Que se le agregar agua mediante se vaya requiriendo. Para la preparacin de los medios de cultivo se debe de seguir los siguientes pasos: 1. Cada ingrediente, o el medio deshidratado completo se debe disolver en un volumen adecuado de agua destilada. 2. Se determinar el PH del medio y si es necesario se ajustara, el PH se determina por medio de indicadores o potencimetro. Alcance del Indicador del PH Indicadores (Nombre comn) Acido Neutro Alcalino 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 1 1 0 1 2 3 4 Azul de Timol Azul de Bromotenol Rojo de Metilo Azul de Bromatimol Rojo de Fexiol Rojo de Cresol 17 MICROBIOLOGIA 18. Fenolftalena CAMBIO DE COLOR Acido Alcalino Rojo Amarillo Amarrillo Azul Rojo Amarrillo Amarrillo Azul Amarrillo Rojo Amarrillo Rojo Incoloro Rojo 3. El medio se pondr en recipiente adecuado como tubos de ensayo, matraz, botellas, cuyas bocaduras se cerraran con tapones de algodn plsticos o cubiertas de metal. 4. Los medios se esterilizaran en autoclaves. 2.3. Tcnicas de cultivo. 2.3.1. Mtodos para aislar cultivos puros. 1). Siembra por estras en placa y tcnica de siembra por difusin en placa. En un asa bacteriolgica, se pone una porcin de la muestra a un medio de cultivo a base de agar, se siembra las bacterias por estras o difusin. Para realizar la siembra por lo general se utiliza una varilla de cristal estril o el asa de platino, para dispersar la muestra. Con la varilla se hace la dilucin (adelgazamiento) de la muestra para que las bacterias queden separadas una de otras. Cuando la muestra bacteriolgica se distribuye uniformemente en el asa, es un tipo de siembra llamado difusin. Cuando se ralla con la varita el medio de cultivo o el agar, es un tipo de siembra llamada por estras. 18 MICROBIOLOGIA El propsito de rayar el agar de la muestra es para separar19. los grupos de bacterias, y no lleguen a mezclarse. Cada grupo obtendr descendencia exclusiva, el cual ser un cultivo puro. El cultivo o siembra por difusin las bacterias no quedan sobre puestas, por lo que su descendencia es nica y ser un cultivo puro. Diferencia: en el cultivo por estras habr descendencia en grupo; por difusin, se obtiene descendencia en forma individual o sola. Es la tcnica

de siembra ms comn en los laboratorios por su bajo costo y sin mucho recurso material. 2.3.2. Siembra en tubo 2). Tcnica de placa vertida. Esta tcnica consiste en hacer la dilucin de la muestra en tubos de ensayo con agar fundido y enfriado. Para hacer las diluciones se requieren de ms de dos tubos, para obtener colonias aisladas. El medio de cultivo se mantiene en estado lquido a 45 C para permitir la mayor reproduccin y distribucin de la muestra. Una vez hecha la mezcla se coloca en caja de petri y se incuban. Se procede aislar bacterias, que es el principal objetivo de esta tcnica aislar tipos de bacterias en forma cuantitativa y cualitativa. 3).Tcnica de enriquecimiento de cultivo. El objetivo de esta tcnica es la de crear un tipo de ambiente adecuado para cierta bacteria u otros microorganismos para su proliferacin. Este tipo de ambiente ser adecuado para una determinada bacteria especfica, pero no para cualquier otra o en su caso la bacteria no deseada pueda desarrollarse con certitud en relacin a la bacteria deseada. Por ejemplo se desea la reproduccin y desarrollo de la bacteria azotobacter que es la generadora de nitrgeno en el suelo. Se toma una muestra del suelo, al observarla se encontrar en esa muestra varios tipos de bacterias. Para proliferar a la azotobacter exclusivamente se criar un medio de cultivo exclusivo para la azotobacter con el fin que pueda ser la nica de reproducirse y desarrollarse en ese medio. 4). Tcnica de aislamiento de una sola clula 19 MICROBIOLOGIA 20. Para obtener un solo microorganismo, para su estudio, se necesita de equipo especial como el micromanipulador (aparato que permite observar y manejar microorganismos muy pequeos). Este aparato permite al cientfico o investigador controlar los movimientos con una micropipeta o microcnula (agujas finas con canaletas). Al observando bacterias, si se desea investigar, a una en especial se utiliza la micropipeta para atrapar a la clula, a travs de una cnula para ser depositada a un medio de cultivo. Esta tcnica se utiliza en estudios especializados con operadores o investigadores especializados 2.4. Preparaciones para microscopia Un microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mnimo a esa distancia. El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mnimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la informacin La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espcimen, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin. Tericamente la mxima resolucin que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolucin. Existen distintos microscopios pticos generales y de investigacin que se diferencian en factores tales como la longitud de onda de la iluminacin del espcimen, la alteracin fsica de la luz que incide en la muestra y procesos analticos que se aplican a la imagen final 2.4.1. Tipos de microscopios 20 MICROBIOLOGIA 21. Microscopio de campo claro Es descendiente de los disponibles a partir de 1800 Compuestos por: Fuente luminosa que ilumina la muestra Condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra Platina sobre la cual se coloca la

muestra Objetivo que recibe la luz que atraves la muestra Ocular que recibe directamente la imagen formada por el objetivo La muestra a observar debe ser fina para que pueda ser atravesada por la luz. Con este tipo de microscopio se deben utilizar mtodos de tincin porque el campo claro de este no produce un nivel til de contraste. Microscopio de contraste de fase Permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial. Microscopio de campo oscuro El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas 21 MICROBIOLOGIA 22. partculas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo. El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un proyector de diapositivas en una habitacin oscura. La luz reflejada por las partculas de polvo llega hasta la retina del ojo y las hacen visibles. La resolucin de este microscopio no puede ser mejor que la del microscopio de campo oscuro porque emplea la misma fuente de longitud de onda, sin embargo puede detectar partculas individuales ms pequeas en las imgenes de campo oscuro, debido al contraste creado. Es til para observar autorradiografas, cristales en la orina y para detectar espiroquetas en particular el Treponema pallidum microorganismo causante de la sfilis. Microscopio de fluorescencia Una molcula que fluorece emite luz de longitud de onda que se encuentra dentro del espectro visible, cuando es expuesta a una fuente de luz ultravioleta. Se usa para revelar molculas fluorescentes naturales, como la vitamina A y algunos neurotransmisores. Al ser escasas las molculas autofluorecentes su aplicacin ms difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos en procedimientos de coloracin inmunocitoqumica. Tambin se puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o directamente en clulas y usarlas como marcadores. Estos mtodos sirvieron para estudiar uniones intercelulares, trayectorias de las fibras nerviosas en neurobiologa y en deteccin de marcadores del crecimiento fluorescentes en tejidos mineralizados. Se insertan distintos filtros entre la fuente de luz ultravioleta y la muestra para producir luz monocromtica o casi monocromtica, o entre el espcimen y el objetivo permitiendo que la estrecha banda de longitudes de onda de fluorescencia llegue hasta el ojo o incida en una emulacin fotogrfica u otro procedimiento analtico. Microscopio de barrido confocal Se usa para estudiar la estructura de

los materiales biolgicos. Emplea un sistema de iluminacin con rayo lser que es muy convergente y, en consecuencia produce un punto de barrido muy poco profundo. La luz que emerge del punto es dirigida a un tubo fotomultiplicador, donde es analizada. Se utiliza un sistema de espejos para mover el rayo lser a travs del espcimen, iluminando un solo punto por vez. Se registran los datos de 22 MICROBIOLOGIA 23. cada punto de la muestra recorrida con este rayo mvil y se guardan en una computadora. Luego se puede llevar la imagen a un monitor de alta resolucin. Este mtodo tiene la ventaja de que se pueden tomar imgenes de la muestra en cortes muy finos. Las regiones fuera de foco se restan de la imagen mediante un programa para dar una definicin mxima a la imagen Microscopio de polarizacin Este microscopio es una simple modificacin del microscopio ptico, contiene un filtro polarizante llamado polarizador entre la fuente de luz y la muestra y se ubica un segundo polarizador, denominado analizador entre el objetivo y el observador. Se puede rotar el polarizador y el analizador; la diferencia entre sus ngulos de rotacin se usa para determinar el grado en que una estructura afecta el haz de luz polarizada. La capacidad que tiene un cristal o estructura cristalina de rotar el plano de la luz polarizada se denomina birrefringencia. Exhiben birrefringencia el msculo estriado o esqueltico y las inclusiones cristaloides de las clulas intersticiales testiculares Microscopia electrnica. Dentro de los microscopios electrnicos tenemos el de barrido y el de transmisin. La ventaja de los microscopios electrnicos frente a los pticos esta en que la longitud de onda del haz de luz es aproximadamente 1/200, lo cual aumenta la resolucin. Microscopio electrnico de transmisin La ptica es muy similar al ptico pero se diferencia en que usa un haz de electrones en vez de un haz de luz visible. Este microscopio se basa en los siguientes principios: Una fuente, un filamento de tungsteno calentado que emite electrones (ctodo). Un nodo, hacia el cual son atrados los electrones. - Una diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo imparte un voltaje de aceleracin entre 20.000 y 200.000 voltios a los electrones, que crea el haz. El haz pasa por una serie de electroimanes que tienen las mismas funciones que las lentes de vidrio de un microscopio ptico 23 MICROBIOLOGIA 24. El haz que atraviesa la muestra se coloca en foco y se aumenta por medio de un objetivo y se aumenta aun ms con una o ms lentes proyectoras. La imagen final se visualiza sobre una planilla cubierta por fsforo. Las porciones de la muestra que han sido atravesadas por los electrones aparecen brillantes, las porciones que absorbieron o esparcieron los electrones por su densidad inherente o debido al agregado de metales pesados durante la preparacin del espcimen aparecen oscuras. Se coloca una placa fotogrfica o un detector de video por encima o por debajo de la pantalla del visor, con la finalidad de obtener un registro permanente de la imagen sobre la pantalla. Microscopio electrnico de barrido Se asemeja ms que al microscopio electrnico de transmisin a los tubos de televisin de donde deriva la microscopia electrnica. Para analizar la mayora de los tejidos se deja la muestra, se deshidrata por desecacin de punto crtico, se cubre con una pelcula evaporada de oro-carbn, se monta en un taco de aluminio y se coloca en la cmara de muestras del microscopio. En los tejidos mineralizados es posible eliminar todos los tejidos blandos con una leja y analizar las caractersticas estructurales del mineral. Se logra el barrido con el mismo tipo de rastreo que explora el haz de electrones a travs de la superficie un tubo de televisin. Los electrones reflejados desde la superficie y los

electrones forzados hacia el exterior de la superficie son captados por uno o ms detectores y reprocesados para formar una imagen tridimensional en una televisin. Se pueden tomar fotografas para registrar los datos o la imagen en una cinta de video. Se pueden usar otros detectores para medir los rayos X emitidos desde la superficie, la catodoluminiscencia de las molculas del tejido por debajo de la superficie y los electrones de Auger emitidos en la superficie. Muchos microscopios combinan las caractersticas de un microscopio electrnico de transmisin y de barrido, el cual permite microanlisis por rayos X con sonda electrnica. 2.5. Caractersticas para la identificacin 2.5.1. Morfolgicas Consiste en determinar forma, tamao y color del microorganismo, en s es la estructura externa. Para poder identificarlos se utilizan equipos como el microscopio. Por ser organismos unicelulares y su medida es en micras (). 24 MICROBIOLOGIA 25. Algunas bacterias particularmente tienen forma de bacilos (bastones), en ocasiones esos bacilos se unen en cadena, como en el caso del carbunco. Las bacterias esfricas al unirse en dos forman el gonococo, al agruparse en mas de dos o tres se llaman estreptococos, la agrupacin en forma de racimos de uva se les llama estafilococos. Las algas por lo general, particularmente son ovoides o esfricas, al agruparse forman cenobios que son laminosos, filamentosos o globulosos, son inmviles. Los hongos estn formados por un soma vegetativo. El soma del hongo se denomina micelio, y las bifurcaciones individuales y filamentosas del micelio en su conjunto forman hifas, estas contiene esporas, las hifas tienen forma de bifurcaciones y filamentos, las esporas comnmente son esfricas. Los virus tiene formas y tamaos distintos, son muy pequeos, se miden por amstrong, por lo comn son de forma de varilla rgida o filamentos, ondulados con dimensiones de 15 a 300 miliamstrong (como el mosaico del tabaco que es e mas pequeo). 2.5.2. Bioqumicas En ocasiones no basta identificar a un microbio por su estructura externa, para asegurar su identificacin, se requiere de estudios mas profundos sobre toda su constitucin qumica y la forma de transformacin de alimento. Existen tambin organismos parecidos unos a otros que a travs de las caractersticas metablicas se llegan a identificar. Por ejemplo, la Escherichia coli, organismo natural y comn en nuestro intestino, es confundido con la Salmonella Typha causante de la fiebre tifoidea, para poder diferenciarlos e identificarlos se realiza en cada uno de ellos, medios de cultivos, y as ver sus reacciones metablicas de cada uno, que enzimas intervienen, cuales son los productos intermedios y en si la reaccin final de cada clula. 2.5.3. Antignicas El estudio de la composicin antignica de los microorganismos nos revela un aspecto especial de la 25 MICROBIOLOGIA 26. composicin qumica. La caracterizacin antignica supone la inyeccin de microorganismos, o alguna parte del mismo, en un animal, con el fin de estudiar el suero sanguneo de ese animal en busca de anticuerpos. Las reacciones antgeno anticuerpo son muy especficas. Los microorganismos poseen muy deficientes clases de antgenos que por lo comn se detectan con precisin extraordinaria. Unidad 3. Nomenclatura, taxonoma y caractersticas de los microorganismos 3.1. Virus 3.1.1. Propiedades generales Son organismos de grupo muy grandes heterogneo. (diversos, o sea no tienen una caracterstica igual para 26 MICROBIOLOGIA 27. todos). Son agentes infecciosos, son parsitos de las clulas y viven intracelularmente. Son muy pequeos, se permiten atravesar todo tipo de poros,

hasta los de porcelana. Se propagan en el interior de la clulas, producen una gran variedad de enfermedades en plantas y animales; en animales y hombres producen enfermedades como, gripe, sida, evoca, poliomielitis, hidrofobias y varios tipos de tumores, en plantas producen enfermedades como el enanismo, mosaico (la hoja tiende a ser dura con varios colores, brillo), enrizamiento, manchas anulares foliares (tienen en las hojas formas de anillo), tristeza. La cantidad de virus que se conocen en la actualidad sobrepasan el milln y se podra decir que cada mes se descubren ms. Los virus producen enfermedades en las clulas alterando su metabolismo produciendo sustancias anormales, que va a influir en las funciones y vidas de las clulas. 3.1.2. Criterios de clasificacin La mayora de los nombres de los virus derivan de las caractersticas clnicas, patolgicas y epidemiolgicas asociadas con las infecciones virales. Como ejemplos podemos citar el virus de la dermatitis postular contagiosa que pertenece al grupo de los poxvirus, y el virus de la degeneracin vascular del frijol grueso. Algunos virus han sido nombrados de acuerdo con la localidad geogrfica donde fueron aislados por primera vez: el virus de Sendai. Otros virus llevan el nombre de sus descubridores: virus de Epstein-Barr. Algunos virus son conocidos solamente en la versin abreviada de su nombre original; as, reovirus corresponde a respiratory enteric orphan virus, y arbovirus corresponde a arthropod-borne virus. El mtodo ms extendido y aceptado para clasificar los virus agrupa a estos agentes de acuerdo con el tipo de hospedero que infectan: bacterias, hongos, plantas, invertebrados (particularmente insectos), animales, humanos. Los virus pueden ser subdivididos de acuerdo con un particular nivel de inters sobre los mismos. En aos recientes el uso de un sistema taxonmico racional basado en principios de estructura y formacin molecular 27 MICROBIOLOGIA 28. ha sido promovido por el Comit Internacional de Taxonoma de los Virus; la figura XV1 es un esquema simplificado de este tipo de clasificacin. Considerando lo anterior, podemos citar algunas de las mltiples definiciones de virus producidas a lo largo del tiempo. Por ejemplo, Andr Lwoff propuso en 1957 que un virus es: "una entidad estrictamente intracelular y potencialmente patgena que se caracteriza por tener una fase infecciosa, poseer solamente un tipo de cido nucleico, multiplicarse en la misma forma que su material gentico, incapaz de crecer o dividirse en forma binaria, carente de un sistema productor de energa metablica". De acuerdo con esta definicin, el virus es fundamentalmente de naturaleza no celular y es dependiente por completo del metabolismo de la clula hospedera, adems de que en cierto estadio del ciclo replicativo el material viral se reduce exclusivamente al cido nucleico. Otra definicin muy conocida es la propuesta por Salvatore Luna en 1959: "los virus son elementos de material gentico que pueden determinar en las clulas donde se reproducen la biosntesis de un sistema que constituye un aparato especfico para permitir la propia transferencia del virus hacia otras clulas". Los virus se han venido clasificando atendiendo al tipo de cido nucleico que contienen, a las caractersticas de la envoltura del virin, cuando existe, a la posicin taxonmica de sus huspedes, a la patologa que producen, etc. Dada su falta de autonoma para el desarrollo y su probable carcter polifiltico, es muy difcil aplicarles de forma consistente los criterios de clasificacin y nomenclatura que sirven tan bien para la clasificacin de los organismos celulares, o 28 MICROBIOLOGIA 29. verdaderos organismos. Combinando caracteres como los enumerados, y por ese orden de importancia, se han reconocido unos 30 grupos de virus

internamente bien definidos. En este artculo consideraremos tres grupos segn el tipo de clulas que infecten, y en cada grupo se citarn los ejemplos ms destacados y sus otras caractersticas definitorias. Virus del Nilo oeste: produce enfermedades en aves y mamferos, incluidos humanos. Se transmite a travs de los mosquitos. El primer virus descrito fue el de la fiebre aftosa (Loeffler y Frosch, finales del siglo XIX). La mayora de ellos tienen envoltura lipoproteica: Entre los virus con ARN monocatenario se pueden citar los de la rabia, el sarampin, la gripe y la rubola. Los retrovirus contienen ARN monocatenario y la enzima transcriptasa inversa. Al infectar la clula, transcriben el ARN en una molcula de ADN bicatenario que se une al ADN celular. Pertenecen a este grupo el virus del SIDA y algunos virus oncognicos. Entre los virus con ADN bicatenario se puede citar el grupo de los herpesvridos como los del herpes, y de la hepatitis. Hay tambin virus de clulas animales icosadricos sin envoltura lipoproteica: El virus de la polio humana tiene ARN monocatenario. La mayor parte de los reovirus (con ARN bicatenario) infectan clulas animales. Los virus que contienen ADN bicatenario suelen ser poco virulentos, como los adenovirus (de los resfriados) y los virus de las verrugas (papovirus). Virus que infectan bacterias Fueron descubiertos independientemente en 1915 y 1917 por Frederick Twort, bacterilogo britnico y Felix D'Herelle en Canad. La mayora son virus complejos y contienen ADN bicatenario; pertenecen al grupo de los myovridos. Hay tambin bacterifagos que no responden al tipo comn, como los corticovridos, icosadricos, o los levivridos, con ARN monocatenario, o los bacterifagos con envoltura lipoproteica. 29 MICROBIOLOGIA 30. Virus que infectan clulas vegetales Son los primeros que se descubrieron (virus del mosaico del tabaco, Ivanovski, 1892). La mayor parte de ellos contienen ARN monocatenario y cpsida helicoidal, y carecen de envoltura lipoproteica. El virus del mosaico del tabaco es un ejemplo. Algunos reovirus (virus con RNA bicatenario, icosadricos y sin envoltura lipoproteica) producen tumores en las heridas de las plantas. En este grupo hay tambin virus con ADN y cpsida icosadrica, como el del estriado del maz o el del mosaico de la coliflor. Clasificaciones alternativas El esfuerzo por alcanzar una necesaria clasificacin natural, ha producido distintos resultados, de los que consideramos aqu dos, la clasificacin de Baltimore y la del International Committee for Taxonomy of Viruses (ICTV). Clasificacin de Baltimore La clasificacin de Baltimore distribuye los virus en siete grupos fundamentales basados en la base qumica del genoma: Grupo I: Virus ADN bicatenario (doble cadena). Los virus de ADN de dos cadenas entran en la clula (independientemente del mecanismo de infeccin) y las ARN polimerasas no distinguen el genoma celular del genoma vrico, forman ARNm, que se traduce en los ribosomas y da lugar a las protenas de la cpsida, y a veces a enzimas replicativos. Son los virus ms simples. Ejemplo: los fagos de la serie T par, fueron los primeros que se descubrieron. Grupo II: Virus ADN monocatenario (de carcter positivo). Su material gentico es ADN de una cadena. Ya que es de polaridad positiva, necesita una cadena negativa para poder transcribir; as, al entrar a la clula la ADN polimerasa (enzima de reparacin o alargamiento) hace un ADN bicatenario que sirve para sintetizar (a partir de la hebra negativa) un ARNm que lleva la informacin necesaria para fabricar capsmeros y enzimas replicativos. 30 MICROBIOLOGIA 31. Grupo III: Virus ARN bicatenario. Son virus de ARN bicatenario. Llevan como parte del virin una transcriptasa viral que es una ARN polimerasa ARN

dependiente que utiliza para, a partir de la hebra negativa del ARN bicatenario, fabricar el ARNm. Adems de ser una enzima es una protena estructural, ya que forma parte de la cpsida, por ello slo se replica si a la clula entra la cpsida junto al genoma vrico. Grupo IV: Virus ARN monocatenario positivo. Son virus de ARN monocatenario cuyo genoma tiene naturaleza de ARNm. Son virus simples. Grupo V: Virus ARN monocatenario negativo. Son virus de ARN monocatenario con polaridad de antimensajero. Poseen una ARN polimerasa dependiente de ARN de una cadena. As, dentro de la clula infectada forman el ARN complementario a su genoma y que acta de ARNm. Grupo VI: Virus ARN monocatenario retrotranscrito. Son virus de ARN cuyo genoma podra actuar como mensajero pero in vivo no lo hace. Poseen una transcriptasa inversa que de un genoma ARN transcribe una molcula de ADN, primero de una cadena y luego de dos. Posteriormente y usando los enzimas celulares se elabora un mensajero. Estos virus son capaces de alcanzar el ncleo de las clulas, se insertan a los cromosomas de las clulas que infectan, son los retrovirus Grupo VII: Virus ADN bicatenario retrotranscrito. Es el grupo ms recientemente descubierto y descrito. Tiene un genoma de ADN bicateario, que se expresa formando un mensajero, que se traduce como el grupo I. No obstante, en el momento de la encapsidacin, es el mensajero el que se encapsida. ste, por retrotranscripcin a partir de una Transcriptasa inversa, en el interior del virin, forma de nuevo una molcula de ADN, primero mono y despus dicatenaria, que se convierte en el genoma del virus. Son ejemplos claros de estas rarezas, las familias Herpesviridae y Caulimoviridae. Clasificacin del ICTV 31 MICROBIOLOGIA 32. El ICTV (International Committee on Taxonomy of Viruses) intenta conseguir una clasificacin universal que pueda funcionar como el necesario estndar de clasificacin de los virus, regulando la descripcin formal de las nuevas cepas y ordenando su ubicacin dentro del esquema clasificatorio. Intenta que las reglas de nomenclatura y clasificacin se asemejen lo ms posible al estndar tradicional de la clasificacin de los organismos utilizando algunas de sus categoras, sufijos que indican el rango taxonmico y aplicando cursiva a los nombres de los taxones: Orden (-virales) Familia (-viridae) Subfamilia (-virinae) Gnero (-virus) Especie (-virus) Los nombres de los taxones de categora superior se escriben en cursiva, como en el Cdigo Internacional de Nomenclatura Botnica (pero no en el Zoolgico). Los nombres de especie siguen una regla sistemtica, nombrndose en la lengua verncula con el nombre de la enfermedad y la palabra que significa virus. Por ejemplo, virus de la inmunodeficiencia humana. El reconocimiento de rdenes se ha producido tardamente y se usan con parsimonia, habindose designado hasta ahora slo tres, de manera que la mayora de las 80 familias todava no han sido adscritas a ninguno. La lista de ICTV contiene unas 4.000 especies. 3.1.3. Nomenclatura y taxonoma La sptima comunicacin del International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) describe estos organismos como biosistemas elementales que poseen algunas de las propiedades de los seres vivos (genoma) y que se adaptan a las condiciones del ambiente. Los virus pertenecen a la biologa porque tienen genes, se replican, evolucionan y se adaptan a los huspedes y distintos nichos ecolgicos. Virus es un trmino general que denota varias propiedades relacionadas (husped, vector, capacidad infecciosa). Estas caractersticas propiedades emergentes- son tpicas del biosistema viral en conjunto y no estn presentes en los elementos constitutivos individuales. Cuando un virus inicia el

ciclo de vida adopta diversas formas y estadios, por ejemplo como cido nucleico en replicacin en la clula husped o en el vector. Un estadio en este ciclo es la partcula viral o virin 32 MICROBIOLOGIA 33. que se caracteriza por propiedades intrnsecas como tamao, masa, composicin qumica, secuencia de nuclotidos en el genoma y secuencia de aminocidos en las subunidades proteicas. Los viriones pueden ser completamente descritos segn sus propiedades fsicas y qumicas intrnsecas, pero la definicin no se vincula con las propiedades que pertenecen al virus. Nomenclatura binaria propuesta para especies de virus. Abreviaturas de los nombres de virus Durante aos los grupos que estudian virus de plantas utilizaron un sistema de dos nombres no oficial para referirse a la especie viral. Segn este sistema, la palabra virus que aparece en cursiva al final del nombre oficial de la especie se reemplaza por el nombre de gnero que tambin finaliza en virus. De esta forma Bluetongue virus se transforma en Bluetongue orbivirus y Measles virus en Measles morbillivirus. La ventaja de este modelo de denominacin es que la inclusin de un nombre de gnero en el nombre de la especie indica la relacin existente con otros virus y, por lo tanto, brinda informacin adicional acerca de las propiedades de los miembros de las especies. Debido a que este modelo parece ser preferido por una amplia mayora de virlogos, el ICTV decidir si deben introducirse los nombres binarios de especies de virus 3.1.4. Estructura Externa: Los virus tienen una variedad de forma y tamao, pero por lo general son en forma de varilla rgida, filamentos ondulados, esfricas o de bacilos. En el saso de varilla rgida la tiene el parasito de mosaico de tabaco y llegan a medir de 15 x 300 nm (nanmetro) hasta los 200 nm. Las de formas de bacilos, casos del enanismo amarillo de la papas, llegan a medir de 75 x 350 nm. Los esfricos, caso de necrosis del tabaco, llegan a tener un dimetro de 75 nm, algunos tumores de heridas, tienen hasta 60 nm de dimetro. Interna: 33 MICROBIOLOGIA 34. Un virus por lo menos debe tener en su constitucin qumica en acido nucleico, que le da su capacidad infectante y tiene protena que le da especifidad. El acido nucleico lo tiene en proporcin de 5 a 40 % en su constitucin corporal y de protenas de 95 a 60%. El acido nucleico est cubierta por una membrana CAPSIDA, constituidos por subunidades de protenas llamadas CAPSOMEROS. La partcula viral de un virus se llama virion y las partes completas del virus o unidades completas se llama viriones, los viriones tienen lpidos y lipoprotenas. Los cidos nucleico y protenas tienen residuos de carbohidratos, lpidos, metales, algunos contiene vitaminas. Los virus se diferencian por su contenido de DNA o RNA. Un virion contiene 4 posibles asidos nucleicos, se ha visto que los virus de las plantas, contienen solo RNA de una o doble cadena. Los virus en animales contienen en todos los tipos de acido nucleico excepto DNA de doble cadena. Adems de la estructura de cada nucleico, en la partcula viral es lineal o particular. Estructura de un virus 3.1.5. Reproduccin 34 MICROBIOLOGIA 35. Los virus no son clulas, no constan de ellas, son parsitos de clulas y producen una infinidad de enfermedades en seres vivientes. Los virus no se dividen ni producen una estructura reproductora especializada, pero si inducen a las clulas hospederas a producir ms virus Los virus se producen dentro de las clulas animal y vegetal, as como de otros seres; no tienen capacidad de metabolismo, tampoco movilidad dependiente. Se reproducen por replicacin, en donde sus dos partes constitutivas los cidos nucleicos y protenas se

incrementan dentro de las clulas husped, cuando la clula se infecta con el acido nucleico, se sintetiza partculas virales completas. Existen varios tipos de virus en la naturaleza, con estructuras complejas diferentes, y que utilizan varios lugares para la reproduccin, algunos lo realizan en el citoplasma, otros en el ncleo, por lo tanto hay diferentes lugares para la replicacin de virus. Reproduccin de un virus 3.1.6. Importancia Los virus han representado histricamente un problema muy grave para la salud de los humanos. Despus del reconocimiento de estos agentes como causantes de enfermedad, la virologa ha evolucionado muy rpido, incluso los virus fueron de los primeros modelos para el estudio del funcionamiento del genoma, conocimiento indispensable hoy en da para el trabajo de investigacin en ciencias biolgicas. 35 MICROBIOLOGIA 36. En general, la palabra virus inmediatamente refiere a enfermedad, y no es para menos: en 1918 una pandemia de gripe (influenza) ocasion la muerte de ms de 30 millones de personas alrededor del mundo, posteriormente este virus ha ocasionado epidemias de menor intensidad pero igualmente temidas. Entre 1957 y 1986 se estima que, slo en Estados Unidos, los virus de la influenza ocasionaron ms de 10 000 muertes. La fama de los virus es merecida en el caso del SIDA por ejemplo, actualmente una de las causas ms importantes de mortalidad en el mundo, o bien, en el caso de la viruela, que en el pasado provoc miles de muertes. Los casos ms recientes de enfermedades altamente contagiosas son los hemorrgicos y letales filovirus (Marburg y bola) y, por supuesto, el sndrome respiratorio agudo severo (SARS, por sus siglas en ingls). En el ltimo cuarto del siglo XX, los virus cobraron una importancia mdica inusitada por la aparicin de enfermedades hasta entonces desconocidas como las anteriormente mencionadas, as como el resurgimiento con mayor virulencia de enfermedades ya conocidas, como el sarampin, el dengue o la influenza. En 1999 hubo una gran epidemia en Europa ocasionada por el virus de la influenza que ocasion la hospitalizacin de miles de personas y la muerte de varias decenas de ellas; dos aos antes, en Hong Kong se tuvieron que sacrificar casi diez millones de pollos por una epidemia de influenza aviar que ya amenazaba con expandirse a regiones vecinas. Durante esta ltima tambin se registraron muertes entre personas que tuvieron contacto con los animales infectados. En los ltimos aos se detectaron algunos virus nuevos, como el de Hendra y el de Nipah (ambos en Malasia, 1998), los cuales inicialmente ocasionaron problemas en ganado equino y porcino respectivamente. Sin embargo, personas que tuvieron contacto con los animales enfermos tambin fueron infectados, algunas de ellas incluso murieron. Estos casos hacen destacar la importancia del estudio de los virus que infectan animales, no slo por cuestiones ecolgicas o comerciales, sino tambin por su influencia sobre la salud humana. La otra cara de los virus El surgimiento y resurgimiento de los virus se deben en parte 36 MICROBIOLOGIA 37. a su relativo bajo nivel de complejidad, por lo que pequeos cambios en su informacin gentica ocasionan grandes cambios en su estructura y funcionamiento general, lo cual permite evadir la respuesta inmunolgica de los organismos, variar sus comportamientos dentro de las clulas hospederas y perder su sensibilidad a tratamientos comunes para esas enfermedades. Un caso tpico son los virus de la inmunodeficiencia humana (causantes de SIDA) cuyos tratamientos son generalmente limitados porque los virus que infectan al paciente son sustancialmente diferentes de los que evolucionan en su organismo

en un determinado intervalo de tiempo. Esta variabilidad de los virus, sin embargo, aparte de causarnos los problemas mencionados, se convierte en una herramienta muy til en el estudio de la evolucin de los organismos en el nivel molecular. El estudio de la variabilidad de los virus ha producido conocimientos en el mbito de la evolucin, lo cual puede ser aplicado hasta cierto punto y en diferentes formas a la generalidad de la biologa. Actualmente se considera a los virus no slo como causantes de enfermedades sino tambin como agentes muy importantes que colaboran en el mantenimiento del equilibrio ecolgico. Los virus, adems de producir la disminucin de poblaciones animales o vegetales en un determinado hbitat, sirven como mediadores en el intercambio gentico entre individuos de una misma o de diferentes especies, cooperando en la variabilidad de los organismos que son susceptibles de ser infectados. Este fenmeno ha sido bastante estudiado en las bacterias que pueden ser infectadas por los virus denominados bacterifagos (o simplemente fagos) y de esta manera poder intercambiar informacin entre unas cepas bacterianas y otras, los fagos pueden contener informacin til para que la clula bacteriana realice ciertas funciones que en otras condiciones no podra realizar. En los animales, de modo anlogo, los retrovirus y los adenovirus, entre otros, pueden introducir informacin nueva a la clula infectada y posteriormente llevarse informacin a una clula diferente logrando as una comunicacin gentica entre diferentes poblaciones celulares o individuos. De esta manera, algunas especies de virus revisten hoy una importancia clave en la medicina porque pueden servir como 37 MICROBIOLOGIA 38. vehculo para introducir informacin a clulas con algn defecto gentico o adquirido que les permita alcanzar un funcionamiento normal. Esta rea de la biomedicina es actualmente una de las ms apoyadas ya que representa una esperanza en la cura de enfermedades genticas como la fibrosis qustica y el cncer. Es imposible dejar de ver a los virus como peligrosos agentes causales de enfermedad, pero a esto hay que agregar, por una lado, que tambin contribuyen al mantenimiento del equilibrio ecolgico y, por otro, que en pocos aos pueden ser de gran utilidad en el tratamiento de muchos problemas que aquejan a los humanos, incluyendo las enfermedades causadas por los virus mismos. 3.2. Bacterias 3.2.1. Propiedades generales Las bacterias son organismos microscpicos, se conocen aproximadamente 1600 especies. La mayora son organismos estrictamente saprofitos, no causan dao al hombre, animales y plantas. Tambin existen bacterias parsitos nocivas que producen enfermedades, en el hombre: ttano, clera, gonorrea, tuberculosis, neumona, fiebre tifoidea; en los animales: el carbunco, ntrax y brucelosis; en las plantas se producen enfermedades en los gneros: agrobacterium, erwinia (producen el tizn del fuego), seudomonas, xanthomonas y la streptomyces. Las bacterias de acuerdo a su constitucin, algunos organismos son procariticos y eucaritico. En ocasiones se juntan para formar colonias. Tiene variadas formas: * En dos bateras se llaman diptococos * Cundo son 4 se llaman tetrmeras * De tres a ms se llaman estreptococo En forma de racimos de uvas estafilococos y cuando se forman en un plano ovoide se llama sarcinas. 3.2.2. Criterios de clasificacin La identificacin de las bacterias es tanto ms precisa cuanto mayor es el nmero de criterios utilizados. Esta identificacin 38 MICROBIOLOGIA 39. se realiza a base de modelos, agrupados en familias y especies en la clasificacin bacteriolgica. Las bacterias se renen en 11 rdenes. Las eubacteriales, esfricas o bacilares, que comprenden casi todas las bacterias

patgenas y las formas fottrofas. Las pseudomonadales, orden dividido en 10 familias entre las que cabe citar las Pseudomonae y las Spirillacae. Las espiroquetales (treponemas, leptospiras) Las actinomicetales (micobacterias, actinomicetes). Las rickettsiales Las micoplasmales Las clamidobacteriales Las hifomicrobiales Las beggiatoales Las cariofanales Las mixobacteriales Relaciones entre la bacteria y su husped Ciertas bacterias viven independientes e otros seres vivos. Otras son parsitas. Pueden vivir en simbiosis con su husped ayudndose mutuamente o como comensales (sin beneficio). Pueden ser patgenas, es decir, vivir de su husped. La virulencia es la aptitud de un microorganismo para multiplicarse en los tejidos de su husped (creando en ellos alteraciones). Esta virulencia puede estar atenuada (base del principio de la vacunacin) o exaltada (paso de un sujeto a otro). La virulencia puede ser fijada por liofilizacin. Parece ser funcin del husped (terreno) y del entorno (condiciones climticas). La puerta de entrada de la infeccin tiene igualmente un papel considerable en la virulencia del germen. El poder patgeno es la capacidad de un germen de implantarse en un husped y de crear en l trastornos. Est ligada a dos causas: La produccin de lesiones en los tejidos mediante constituyentes de la bacteria, como pueden ser enzimas que ella excreta y que atacan tejidos vecinos o productos txicos provenientes del metabolismo bacteriano La produccin de toxinas. Se puede tratar de toxinas proteicas (exotoxinas excretadas por la bacteria, transportadas a travs de la sangre y que actan a distancia sobre rganos sensibles) o de toxinas glucoproteicas (endotoxinas), estas 39 MICROBIOLOGIA 40. ltimas actuando nicamente en el momento de la destruccin de la bacteria y pudiendo ser responsables de choques infecciosos en el curso de septicemias provocadas por grmenes gramnegativos en el momento en que la toxina es brutalmente liberada A estas agresiones microbianas, el organismo opone reacciones defensivas ligadas a procesos de inmunidad, mientras que el conflicto husped-bacteria se traduce por manifestaciones clnicas y biolgicas de la enfermedad infecciosa 3.2.3. Nomenclatura y taxonoma Los procariotas son las clulas vivas ms sencillas. Las procariotas constituyen el reino Monera. A los miembros reino Monera se les llama moneras. Las moneras estn divididas en grupos principales: las bacterias azul-verdoso (llamadas antes algas: verdosas) y las dems bacterias. Las moneras existen como clulas individuales o como colonias. La colonia es un grupo de clulas parecidas que estn pegadas unas a otra. Las bacterias incluyen muchas formas diferentes, la mayora de las cuales son hetertrofas. Las bacterias son las moneras ms numerosas, ellas pertenecen al flum Schizomycetes Schizo (significa "partido") porque se refiere al proceso de divisin sencilla mediante el cual se multiplican. El sufijo mycete quiere decir "hongo", un trmino que viene de cuando las bacterias y los hongos pertenecan al mismo grupo. Casi siempre, la gente piensa en las bacterias como grmenes que producen enfermedades. Esta creencia no es totalmente correcta. Las ms de 1500 especies de bacterias, slo unas 250 causan enfermedades. Las actividades de la mayora de las bacterias son tiles y necesarias, la gente ha utilizado muchas bacterias en la produccin de alimentos y medicinas. 3.2.4. Estructura Las bacterias pueden tener forma de vacilo, filamentosas, esteritas en forma de camas, elipsoidales, espirales. Los bacilos en su etapa joven son cilndricos y pueden llegar a medir. 0.6 a 3.5 milimicra de longitud, y un dimetro de 0.5 a 40 MICROBIOLOGIA

41. 1.0 milimicra. Las bacterias en cultivos viejos, los filamentos son ms grandes. Las bacterias estn cubiertas por un material viscoso y gomoso llamada capa mucilaginosa (forma de baba); o puede tambin estar cubierta por una capa dura llamada cpsula. Algunas bacterias poseen un solo flagelo, y otros, dos o hasta un ramillete. El color de las bacterias pueden ser blanquizcos, blancos amarillentos, (cuando estn en grupos) o translucidos. Las bacterias al formar colonias, estas presentan caractersticas morfolgicas diferentes, varan en forma, tamao, color, elevacin, en bordes. Forma: Pueden ser circulares, ovoides e irregulares. Tamao. Varan desde milmetro hasta centmetros. Color: Blanquizco, amarillento, negrusco y grisceo. Elevacin: Varan segn su posicin Bordes: Pueden ser rugosos, lisos, angulares, globulares. La clula bacteriana puede estar constituida por un capa mucilaginosas capsula, flagelos, pared o membrana celular citoplasma. Posen tambin encimas digestivas para nutricin y secrecin o excrecin. Las bacterias parasitas de plantas posen cloroplasto Todas las bacterias poseen o estn constituidas por productos orgnicos; carbohidratos lpidos, protenas, encimas, vitaminas, cidos nucleicos. Contienen tambin sales minerales y sobre todo mucha agua 41 MICROBIOLOGIA 42. Estructura de una bacteria 3.2.5. Reproduccin Las bacterias, realizan la reproduccin asexual conocida como fusin binaria. Esta se realiza, por la invasin de la membrana citoplsmica hacia el centro de las clulas, formando un tabique membranoso transversal que divide a la bacteria en dos partes. Durante este proceso, se sintetizan o secretan dos capas de material de la pared celular, entre las dos capas de la membrana. Cuando se concluye la formacin de las paredes celulares, las dos capas se separan dando como resultado a dos clulas hijas. Mientras la pared celular y el citoplasma estn sufriendo fisin el material se organiza formando cromosomas, las cuales se autoduplican distribuyndose en partes iguales en las dos clulas formadas. Las bacterias se reproducen a una velocidad muy rpida en condiciones favorables, las bacterias pueden dividirse cada 20 minutos, de aqu se duplica en 4, 8, 16 etc. A esta velocidad, una sola bacteria puede reproducir un milln de bacterias en 10 horas. Pero debido a la reduccin de alimentos, espacio, a las condiciones desfavorables, la reproduccin tiende a disminuir o hasta cesar. Pero en si, las bacterias alcanzan cantidades numerosas en corto tiempo, y efectan cambios qumicos en el medio que lo rodea. Estos cambios permiten alterar a la naturaleza, produciendo enfermedades, realizando descomposiciones de alimentos, en las industrias, realizan la fermentacin y pudricin de desperdicios orgnicos. 42 MICROBIOLOGIA 43. Reproduccin de una bacteria 3.2.6. Importancia Existen bacterias en todos los sitios. Hemos visto el inters de su estudio para la comprensin de la fisiolgica celular, de la sntesis de protenas y de la gentica. Aunque las bacterias patgenas parecen ser las ms preocupantes, su importancia en la naturaleza es ciertamente menor. El papel de las bacterias no patgenas es fundamental. Intervienen en el ciclo del nitrgeno y del carbono, as como en los metabolismos del azufre, del fsforo y del hierro. Las bacterias de los suelos y del las aguas son indispensables para el equilibrio biolgico Por ltimo, las bacterias pueden ser utilizadas en las industrias alimenticias y qumicas: intervienen en la sntesis de vitaminas y de antibiticos Las bacterias tienen, por lo tanto, un papel fundamental en los fenmenos de la vida, y todas las reas de la biologa han podido ser mejor comprendidas gracias a su estudio 3.3. Algas

3.3.1. Propiedades generales En la naturaleza se localizan miles de tipos de algas. Abundan en lugares hmedos, aguas de ocanos, lagunas, lagos, ros. Tambin se localizan en troncos paredes, rocas, piedras, 43 MICROBIOLOGIA 44. cortezas de rboles. Las algas sobre viven en un medio donde haya suficiente luz, humedad y suficientes alimentos simples. Las algas de vida acutica, viven en las partes de aguas profundas formando el plancton, que sirve de alimentos a algunos organismos (peces) incluyendo a las ballenas. Algunas especies se desarrollan en lugares elevados, sobre hielo, sobre el pico de montaas. Se desarrollan en aguas termales muy calidas que alcanzan hasta los 90 C, aunque su temperatura adecuada para estos lugares son de 50 a 54 C Las algas estn adecuadas para la concentracin de sales de mares, se ajustan a la desecacin por periodos prolongados en tiempos crticos. En el hemisferio norte, se localizan algas en aguas a una profundidad no mayor de 50 a 60 metros, pero en lugares tropicales o calidos, con aguas cristalinas, se localizan a una profundidad de hasta 150 metros. Las algas que crecen sobre troncos, rocas y cortezas de rboles, al degradarse se descomponen qumicamente y forma suelo frtil, es decir las algas son formadores de suelo orgnico. En algunos lugares como los balnearios, las algas crecen con exceso, que producen olores y sabores indeseables, no permiten la disolucin del oxigeno y tambin obstaculizan la fotosntesis de otras plantas que se localizan en las partes profundas del agua. Algunas algas son endofiticas, porque viven sobre protozoarios, sobre las hiedras, corales, esponjas. 3.3.2. Criterios de clasificacin Las algas se pueden dividir en 8 subdivisiones que son las siguientes: 1. Cianfitos - Se trata de organismos unicelulares carentes de un ncleo verdadero y de plastidios, que se multiplican por divisin transversal. La mayora de estas especies vive en el agua aunque algunas de estas tienen la habilidad de vivir en la tierra porque pueden fijar el nitrgeno atmosfrico a ellas. 44 MICROBIOLOGIA 45. 2. Euglenfitos - Son algas de estructura muy sencilla cuya caracterstica mas distintiva es la presencia de una mancha de pigmento fotosensible. Estas disponen de uno o de dos flagelos lo cual les permite cambiar su forma y estas se multiplican por divisin longitudinal. 3. Pirrfitos - Son algas en su mayora unicelulares que tienen dos flagelos de longitud distinta. La clula se encuentra desnuda o va provista de una cubierta ms o menos dura. Al igual que los Euglenfitos tienen un ocelo que junto con su forma de vida parasitaria o depredativa (en algunos casos) posibilita que en el pasado se les tomara como organismos animales. Esta especie tambin es marina excepto por algunas que son terrestres. a- Un ejemplo es: Noctuluca miliaris. 4. Crisfitos - Conocidos como algas amarillas, son organismos unicelulares o pluricelulares que se renen en colonias. Su principal caracterstica es la presencia de cromatoforos con pigmentos de color amarillo que les confiere un aspecto dorado. Son de morfologas variable con flagelos y sin ellos y en algunos casos se mueven por rizpodos. Siempre se reproducen por reproduccin vegetativa. 5. Clorfitas Las clorfitas o algas verdes son en su mayora de colores verdes, unicelulares o pluricelulares y de formas muy variables. La mayora de las especies microscpicas son propias de agua dulce, aunque hay numerosos grupos marinos que alcanzan cierto tamao, como la conocida lechuga de mar. Se multiplican por divisin celular, o sexualmente, o por la fusin de dos gametos de tamaos diferentes. Este grupo de algas se halla muy extendido en la naturaleza, ya que algunas de estas le dan color a los estanques o cubren la cubierta de los rboles. Esta especie se mantiene en grupos como muchas de las especies de la costa

marina. 6. Carfitos - Son algas muy complejas cuya estructura se parece a veces a la de las fanergamas. De color verde en su mayora, son frecuentes en las orillas de los ros y lagos y muy pocas especies estn en la vida marina. Estas se reproducen sexualmente o por va vegetativa. 7. Fefitos - Son algas que alcanzan mayor tamao (hasta 100m). Aunque poseen clorofila los pigmentos marrones las esconden, por lo que presentan coloracin marrn o parda. 45 MICROBIOLOGIA 46. Estas algas son tpicas del agua salada pero muy pocas de ellas viven en agua dulce. 8. Rodfitas - A estas algas se le conoce como alga roja, comprenden especies tpicas de aguas marinas de grandes profundidades en zonas donde otras especies no pueden sobrevivir por la falta de la luz. Son de color rojo aunque poseen as mismo clorofila. Se reproducen sexualmente y asexualmente y poseen complicados ciclos de alternancia de generaciones. 3.3.3. Nomenclatura y taxonoma La diversidad de seres vivos estudiados por la Botnica abarca desde las formas ms simples unicelulares hasta los vegetales con flores con estructuras morfolgicas ms elaboradas, conectados por formas intermedias, que evidencian la evolucin de la vida vegetal desde el medio acutico hasta la colonizacin del medio terrestre, no implicando este proceso la desaparicin de las formas ya establecidas, sino una mayor adaptacin a ocupar nuevos medios. La tendencia en esta evolucin ha sido el paso: Poiquilohidria: Ausencia de regulacin del contenido hdrico, dependencia directa del agua y desecacin del vegetal en ausencia de sta. Homeohidria: Regulacin del contenido hdrico y minimizacin los efectos de la desecacin. El mundo vegetal se separa en tres niveles morfolgicos de organizacin segn el grado de complejidad: PROTFITOS TALFITOS CORMFITOS Unicelulares o Pluricelulares, Pluricelulares, agregados, poiquilohidros, con homeohidros, con poliquilohidros, sin especializacin especializacin entre especializacin entre las clulas las clulas y aparicin entre las clulas (talo) de tejidos (cormo) Protfitos: 46 MICROBIOLOGIA 47. Incluyen los procariotas, muchas algas, y algunos hongos. Se puede alcanzar un elevado grado de especializacin en los orgnulos citoplasmticos. Bsicamente son unicelulares pero tambin aparecen agregados simples de clulas. Tendencias evolutivas: - Movilidad, por la presencia de flagelos se pasa de formas inmviles (cocales) a formas mviles (monadales) - Polaridad, por la distribucin de orgnulos citoplsmicos - Aumento de tamao - Retencin de las clulas hijas formando agregados irregulares o con forma definida Los agregados de clulas pueden ser de tres tipos: Cenobios, todas las clulas descienden de una misma clula madre, puede aparecer un cierta especializacin del trabajo de algunas clulas o incluso una polaridad, pero la duracin de estas agrupaciones es slo de una generacin. Colonias, todas las clulas descienden de una misma clula madre, tambin puede haber cierta especializacin y polaridad, pero la agrupacin es ms permanente y se suceden las generaciones. Consorcios de agregacin, hay una reunin de clulas que al principio estaban separadas y eran independientes, en general en un nmero determinado Talfitos Incluye a la mayor parte de las algas, los hongos, y los lquenes. Son vegetales que presentan talo, esto es, un cuerpo vegetativo pluricelular sin vascularizacin (haces vasculares). Todas las clulas proceden de una clula madre y quedan unidas por existencia de una pared celular, celulosa o quitina. En general aparece una cierta especializacin en funciones vegetativas y funciones reproductivas.

Los talos experimentan crecimiento, reproduccin y muerte, el mantenimiento se consigue a travs de las clulas reproductoras. 47 MICROBIOLOGIA 48. En los talfitos ms complejos pueden aparecer estructuras similares (anlogos) a las del cormo (raz, tallo y hojas), pero estructuralmente diferentes (rizoides, cauloides y filoides), resultado de fenmenos de convergencia evolutiva. El desarrollo del talo a partir de la clula inicial puede ser bsicamente de dos tipos: Haplstico, divisiones slo transversales, se origina un filamento de una fila de clulas. Polstico, divisiones transversales y longitudinales, se origina un filamento de varias filas de clulas. Una mayor complejidad en el talo se consigue por: Ramificaciones, apicales o laterales. Crecimiento hetertrico, diferenciacin en el talo de filamentos erectos y postrados. Paso de ejes simples o uniaxiles a ejes multiaxiales formando por varias filamentos. En el caso de que no se diferencien clulas en el talo tenemos talos sifonales o cenocticos (plurinucleados), y si aparecen grandes compartimentos plurinucleados se denomina sifonocladal. En los talos ms avanzados el crecimiento no se origina por la actividad de una nica clula sino por un grupo de clulas especializado en el crecimiento, los meristemos, y se pueden llegar a forma tejidos medulares en el centro del talo y tejidos corticales en la periferia. En los hongos el talo est formado por filamentos o hifas, el micelio, que pueden aparecer entrelazados de forma postgnita formado plectnquimas o falsos tejidos miceliares. Brifitos Incluye los musgos y las hepticas. Ocupan una situacin intermedia entre talfitos y cormfitos. Su dependencia del agua es manifiesta, aunque no mueren si se desecan, ya que presentan una organizacin simple. 48 MICROBIOLOGIA 49. Absorben agua directamente por todo el cuerpo vegetativo. El crecimiento se debe a una sola clula apical que puede originar ramificaciones. En las hepticas puede aparecer una diferenciacin en parnquima aerfero (cloroflico) y parnquima de asimilacin, incluso puede aparecer un cutcula simple y unos poros para permitir la difusin de los gases, pero sin regulacin alguna como en los estomas. En los ms desarrollados aparecen estructuras parecidas (anlogas) a races, tallos y hojas, pero muy simplificados, los tallitos (caulidios) ms avanzados pueden presentar una diferenciacin simple en tejidos conductores centrales y parenquimticos perifricos. Cormfitos Incluye las plantas vasculares, helechos y plantas con semillas o espermatofitos. El aparato vegetativo o cormo esta formado por raz, tallo y hojas, originados por meristemas. Son vegetales adaptados a la vida terrestre fuera del agua y presentan mecanismos para conservar y regular el agua de sus tejidos: Raz para absorber el agua y los nutrientes. Tallo vascularizado para conducir el agua y con tejidos de sostn. Hojas con una epidermis con cutcula y estomas. 3.3.4. Estructura Las algas tienen variadas formas: esfricas vacilares, filamentosas o puntiagudas. Son unicelulares, algunas son multicelulares por que se forman en conglomeraciones o colonias de varias formas: filamentosas, ramificadas, membranosas. Algunas colonias se dividen, formando grapas de colonias idnticas. Estos grupos de algas o colonias, llegan a asemejarse a plantas superiores. 49 MICROBIOLOGIA 50. Las algas contienen clulas eucariticas y otros procariticas, las que pertenecen a las procariticas se asemejan a las bacterias por su aspecto individual y su agrupacin. Algunas algas y bacterias poseen pared celular rgida impregnada de slice. Otras tienen envolturas celular flexible y gelatinoso. Con las algas eucariticas a excepcin de las verdiazuladas tienen incrustaciones de

ncleo, vacuola, cloroplasto, e incrustaciones de productos orgnicos. Estructuras de las algas 3.3.5. Reproduccin En las algas existen dos tipos de reproduccin. Una de estas es la vegetativa y la otra es reproduccin sexual. En la 50 MICROBIOLOGIA 51. reproduccin vegetativa ocurre por una simple divisin de la clula en dos partes o bien por fragmentacin. Reproduccin sexual 3.3.6. Importancia Las algas tienen un alto contenido de carbohidratos, protenas, vitaminas y especialmente minerales (hasta 30% por volumen). Comparadas con lcteos, las algas proveen hasta 10% ms calcio y hierro y tambin contienen otras importantes trazas de minerales. En las civilizaciones orientales tradicionalmente se ha reconocido la importancia de este alimento para fortalecer la sangre, el corazn y el sistema circulatorio Estudios cientficos recientes han descubierto tambin que las algas tienen efectos antibacteriales, antivirales y anticancerosos. Se ha descubierto tambin que el kombu, wakame, nori, hiziki y otras algas comunes reducen los niveles de colesterol en la sangre, previenen el desarrollo de la hipertensin y arteriosclerosis y mejoran el metabolismo de grasas. Se ha descubierto adems que diversas variedades de algas contienen anticoagulantes sanguneos similares a la heparina, el anticoagulante natural de la sangre que a menudo se da en forma intravenosa a los pacientes cardacos para prevenir cogulos. En el Japn se ha demostrado que en las regiones donde los habitantes consumen mayor cantidad de algas la incidencia de longevidad es ms elevada. En la agricultura, se ha comprobado su importancia como fuente de sustratos, abonos orgnicos, fertilizantes foliares, etc. Son un grupo de tal diversidad, que en un sentido amplio se les considera bajo esta denominacin global, carente de valor sistemtico y que rene diversas divisiones. Estas recogen en la actualidad los diversos tipos de algas desde las microscpicas hasta las que pueden medir ms de un pie. Las algas se definen como talofitas, es decir plantas cuyo cuerpo vegetativo no esta dividido en tallo y raz, sino que su nica unidad es el talo. Se diferencian de otros tipos de plantas por tener una menor complejidad comparativamente, y por poder llevar a cabo funciones cloroflica. 3.4. Protozoarios 3.4.1. Propiedades generales Los protozoarios, son protistas eucariticas; son microscpicos unicelulares. La palabra proviene del vocablo griego, de la palabra protos =primero, zoon= animales. 51 MICROBIOLOGIA 52. Los protozoarios constituyen colonias, en las colonias, cada una de los protozoarios estn unidos, por filamentos citoplsmicos. Los protozoarios por su estructura, tienen caractersticas en comn, pero al parecer existen diferencias entre un protozoario semejante a animal, con uno semejante a vegetal. Los protozoarios, establecidos por colonias, cada uno tiene vida independiente. Se estima que existen aproximadamente 45,000 especies, de estos casi 2,000 son fsiles, 18,000 son de vida libre o saprofitas y unas 7,000 especies, son parsitos de plantas y animales Protozoarios: Gialia alombra, se encuentran en el duodeno que provoca enterocolitis o inflamacin. Amibas: Causa la disentera, ataca al intestino delgado o grueso provoca amibiasis. 3.4.2. Criterios de clasificacin La clasificacin de Honigberg (1964), dominante en los textos de zoologa, trata a los protozoos como un slo filo dividido en cuatro clases basadas sobre todo en el modo de locomocin: Rizpodos (Rhizopoda). Estos protozoos, como las amebas, se desplazan por medio de pseudpodos, es decir, formando apndices temporales desde su superficie, que adems les sirven para captar el alimento. Los pseudpodos tambin son utilizados para capturar el alimento, que engloban

en el interior, en un proceso llamado fagocitosis. Son muchos los grupos en los que existen especies que responden a este concepto. Ciliados (Ciliophora). ste es el nico de los grupos tradicionales que se identifica como grupo natural en las clasificaciones modernas, con la categora de filo. Aparecen rodeados de cilios y presentan una estructura interna compleja. El paramecio (gnero Paramecium) es un representante muy popular del grupo. 52 MICROBIOLOGIA 53. Flagelados (Mastigophora). Se distinguen por la posesin de uno o ms flagelos. Las formas unicelulares desnudas (sin pared celular), dotadas de dos flagelos, representan la forma original de la que derivan todos los eucariontes. Por eso son tantos y tan variados los protistas diferentes que encajan en este concepto. Algunas especies portan plastos y son por lo tanto auttrofas. Esporozoos (Sporozoa). Parsitos con una fase de esporulacin (divisin mltiple). Hay por lo menos cuatro grupos distintos sin relacin entre s, y ni siquiera son todos protistas, sino que tambin hay animales y hongos. El ejemplo ms conocido es el plasmodio (gnero Plasmodium), causante de la malaria. 3.4.3. Nomenclatura y taxonoma Georg A. Goldfuss propuso una clase Protozoa (protozoos) en 1820, dentro del reino Animales, en la cual englobaba a los infusorios (Ciliophora), a los Lithozoa, es decir, los corales, a los Phytozoa, las formas unicelulares pigmentadas y fotosintetizadoras, y los Medusinae, las medusas y sus parientes. Este concepto no tiene nada que ver con el de 1964 de Honigberg, porque slo los ciliados son comunes a ambas definiciones. En 1845 Carl Theodor von Siebold utiliz el nombre para designar a un filo de animales dividido en dos clases, Infusoria, equivalentes al actual filo Ciliophora (Ciliados), y Rhizopoda, ms o menos equivalentes a los de Honigberg. Von Siebold los describi como animales unicelulares, una definicin que ha acompaado al grupo hasta su reciente abandono. Hay que tener en cuenta que en esos aos estaba recibiendo su consagracin la teora celular. No todos, en las dcadas siguientes, estuvieron de acuerdo con la interpretacin de Von Siebold, viendo muchos a estos organismos como un caso de organizacin acelular. Fue necesario el desarrollo de la microscopa electrnica, a mediados del siglo XX, para que se viera confirmada de manera definitiva la homologa entre el organismo protozoario entero y cada una de las clulas en que se basa la organizacin microscpica de los organismos complejos Al cambio del siglo el concepto de Haeckel, que no pretendi nunca ser ms que un concepto pragmtico, fue siendo visto como excesivamente polifiltico, con autores, como Otto Butschli, que rechazaban el tercer reino, a la vez que se 53 MICROBIOLOGIA 54. recuperaba la nocin de Protozoa como conjunto de organismos de tipo animal y nucleados. 3.4.4. Estructura Su tamao, aspecto, estructura y caractersticas fisiolgicas, varan notablemente. La movilidad o locomocin de los protozoarios, es un criterio importante para la clasificacin. 1. Los que se movilizan por seudpodos ejemplo la amiba 2. Los que se movilizan por flagelos ejemplo giardia lamplia 3. Los que se movilizan por cilios ejemplo paramecio 4. Los que se movilizan por inercia ejemplo los esporozoarios Las amibas por ejemplo se mueven por seudpodos otros se desplazan a travs de cabellos finos, pestaas cortas conocidas como cilio, otros se desplazan por flagelo, que son en forma de ltigos para movilizarse en un medio liquido. Los esporozoos, se movilizan por flexin del cuerpo, ya que no tienen organelos de locomocin. Loxodes Paramecio 54 MICROBIOLOGIA

55. Estructuras de amibas 3.4.5. Reproduccin Se reproducen asexualmente por divisin binaria, por gemacin y por esporulacin (fragmentacin de la clula madre en esporas) del trofozoito o forma vegetativa del protozoo. Cuando sucede este ltimo caso, pueden permanecer mucho tiempo enquistados en una cpsula. Otro tipo de reproduccin asexual es la divisin mltiple caracterstica de las amebas. En algunos grupos la reproduccin asexual alterna con fases de reproduccin sexual la cual esta condicionada a cambios desfavorables del medio. La reproduccin sexual se inicia con la formacin de gametos, macrogametos y microgametos, por diferenciacin de las clulas del trofozoito. Su unin da lugar a la formacin del cigoto seguido de meiosis. La fusin celular puede ser total, dando lugar a un cigoto (singamia), como sucede en los esporozoos o parcial, por conjugacin, como sucede en algunos ciliados. Durante el apareamiento en la conjugacin, el macroncleo de un protozoario se degenera y el microncleo por meiosis da origen a cuatro microncleos con reduccin de su material gentico, uno de estos microncleos es transferido de un protozoo al otro para formar el cigoto, los otros tres microncleos degeneran. En este proceso se produce intercambio de informacin gentica entre dos individuos. El cigoto por divisin mltiple da lugar a numerosas clulas denominadas esporozoitos. 55 MICROBIOLOGIA 56. Esporozoitos Fusin binaria Fusin mltiple Reproduccin sexuada Reproduccin por conjugacin 3.4.6. Importancia Los protozoarios ocupan un lugar importante en la cadena alimenticia de las comunidades naturales y de vida libre. Sirven de alimento a ciertos organismos acuticos, algunos son saprofitas y otros parsitos. Los protozoos tienen importancia en las cadenas alimentarias como componentes del plancton. 56 MICROBIOLOGIA 57. Son considerados como bioindicadores en el proceso de tratamiento de aguas residuales. Se utilizan para detectar vetas petrolferas. Contibuyen a degradar la celulosa en el rumen. Debido a su fcil y rpida reproduccin en el laboratorio son utilizados en investigaciones sobre nutricin y crecimiento, por ejemplo, El protozoo ciliado Tetrahymena thermophila fue el primer microorganismo eucariota en el que se desarroll la induccin de cultivos sincrnicos, facilitando el anlisis de las diferentes fases del ciclo celular eucariota. Este protozoo tambin particip en el descubrimiento de los lisosomas y peroxisomas. Un equipo de investigadores argentinos logr convertir el colesterol presente en la leche y el huevo en pro vitamina D., a travs de la aplicacin directa del protozoo ciliado denominado Tetrahymena. Tambin se ha provocado parasitismo artificial con protozoos de vida libre con el fin de llegar a conocer los cambios que ocurren en la adaptacin a la vida parastica. Algunos de tienen la habilidad de concentrar sustancias radioactivas disueltas en el agua. Estas sustancias pueden pasar a travs de la cadena alimenticia hasta el hombre, producindole un incremento en las mutaciones, cncer y otras enfermedades. La mayor importancia de los protozoos para el hombre lo constituyen las numerosas enfermedades que provocan los protozoos parsitos como se mencion anteriormente 3.5. Hongos 3.5.1. Propiedades generales Los hongos son organismos unicelulares microscpicos, carecen de clorofilas y tejidos conductores. De las 1000 especies actualmente conocidas, la gran mayora son saprofitas. Aproximadamente 50 especies, causan enfermedades al hombre, casi al mismo numero en animales, que afectan sobre las superficie de la piel o de sus apndices. Ejemplo, sarnas, tia, sabaones, caspas, etc. 57 MICROBIOLOGIA

58. Aproximadamente 800 especies, causan enfermedades en las plantas. Algunos hongos viven en las plantas como parsitos y son parsitos obligadas, aquellos que viven sobre plantas, forzosamente sobre un tipo exclusivo de plantas o familia (como el fitium, ataca a la raz; la roya del genero cuncinia, que ataca a los cereales). Los no obligados utilizan cualquier tipo de plantas para pasar un determinado ciclo de reproduccin o hibernacin. 3.5.2. Criterios de clasificacin A pesar de que en muchos textos se emplean sistemas de clasificacin relativamente complicados, los miclogos utilizan por lo comn un sistema sencillo, que tiene la ventaja de ser cmodo de usar. Segn este sistema, los cuatro filos principales son: Oomicetes (Oomycota), Zigomicetes (Zygomycota), Ascomicetes (Ascomycota) y Basidiomicetes (Basidiomycota) y sus respectivos individuos forman oosporas, zigosporas, ascosporas y basidiosporas. Oomicetes El filo Oomicetes (Oomycota) se compone de hongos que se parecen a las algas. Abarca desde organismos unicelulares hasta complejas masas de hifas que no estn tabicadas por septos (micelios no septados). Adems de producir oosporas, los oomicetes forman zoosporas que se mueven por medio de dos flagelos. Se incluyen en el filo los mohos acuticos, las royas blancas y los mildius vellosos. La mayora de los mohos acuticos viven sobre materia orgnica muerta, aunque Saprolegnia parasitica, parasita peces vivos. Las royas blancas y los mildius vellosos, pertenecientes al orden Peronosporales, son parsitos de plantas. En algunos mildius vellosos, por ejemplo en los gneros Phytophthora y Peronospora, los receptculos que contienen las zoosporas pueden estar modificados; en ese caso, los receptculos se parecen a los conidios y funcionan como tales. Chytridiomycota Los miembros del filo Quitridiomicetes (Chytridiomycota) son considerados parientes cercanos de los oomicetes. En algunos sistemas de clasificacin se incluyen en el reino Protistas, en lugar de situarlos con los hongos (vase Quitridiales). 58 MICROBIOLOGIA 59. Zygomicetes Los hongos pertenecientes al filo Zigomicetes (Zygomycota) se caracterizan por formar zigosporas con gruesas paredes, de origen sexual y esporangiosporas no nadadoras, de origen asexual. El moho negro del pan (Rhizopus nigricans), un representante bien conocido de este grupo del orden Mucorales, produce masas de hifas sobre pan, fruta y otros alimentos deteriorados. Los hongos del orden Entomoftorales son parsitos de las moscas y de otros insectos. Tienen esporangiosporas sencillas dentro de unos receptculos; en el interior de cada uno de ellos se desarrollan unas estructuras que llegan a independizarse y funcionar como conidios. El orden Zoopagales comprende hongos parsitos de amebas, nematodos y artrpodos. Ascomicetes Los hongos del filo Ascomicetes (Ascomycota), tambin llamados hongos con forma de saco, producen un nmero determinado de ascosporas en el interior de unas bolsas semejantes a vesculas, denominadas ascas. Con la excepcin de algunas levaduras y otros pocos organismos, los ascomicetes tienen hifas bien desarrolladas, por lo general con un nico ncleo en cada hifa. Ciertas clulas se transforman en binucleadas poco antes de la formacin de los sacos esporales. La unin de los ncleos se da en las ascas jvenes; tras la posterior divisin, suelen producirse ocho ncleos, los cuales darn lugar a las ascosporas. Algunos ascomicetes tienen solo una ascospora; otros pueden tener varios cientos. Las tres clases principales de este filo son: Hemiascomicetes, Euascomicetes y Loculoascomicetes. Los hemiascomicetes abarcan a las levaduras y otros hongos similares, cuyas ascas no se forman dentro ni sobre un soporte de masas de

hifas. La levadura de la cerveza (Saccharomyces cerevisiae), adems de reproducirse por medio de ascosporas, lo hace tambin mediante unas protuberancias, o yemas, que a la larga se separan de las clulas parentales. Las levaduras del gnero Schizosaccharomyces se dividen por fisin. Los miembros del orden Tafrinales, como el parsito del melocotonero que causa el rizamiento de sus hojas, se clasifican a menudo dentro de esta clase, pero la verdadera relacin entre estos organismos es confusa. Los tipos ms simples entre los miembros de la clase Euascomicetes, como los pertenecientes al orden Eurotiales, 59 MICROBIOLOGIA 60. son aquellos cuyas ascas estn esparcidas por todo el interior de unas bolas de hifas, llamadas cleistotecios. Penicillium y Aspergillus son etapas conidiales de los eurotiales. Los hongos pertenecientes al orden Erisifales, un grupo de parsitos de plantas llamados los mildius de la podredumbre, tienen cleistotecios con formas especializadas. Algunos ascomicetes, que se suelen denominar pirenomicetes, tienen ascas originadas en el interior de unas estructuras con forma de matraz llamadas peritecios. Muchos peritecios se desarrollan sobre una masa de hifas que sirve de soporte, que se llama ascocarpo. Las colmenillas o morchelas, las trufas y pezizas, son ascocarpos muy conocidos, con las ascas situadas en la cara superior de los cuerpos fructferos. Otro pirenomicete, el moho rojo del pan (del gnero Neurospora), se ha utilizado comnmente en el estudio de la herencia gentica. Los miembros de la clase Loculoascomicetes difieren de los grupos descritos anteriormente por tener ascas con doble pared que se forman dentro de unas cavidades que hay en el interior de la masa de hifas. Algunos rdenes representativos de este grupo son: Miriangiales, Dotideales y Pleosporales. Basidiomicetes El filo Basidiomicetes (Basidiomycota) comprende numerosos y variados tipos de hongos, cuyas estructuras reproductoras son basidios que se localizan en las puntas de las hifas, sobre unos salientes con forma de tallo. Lo normal es que, en cada basidio, se formen cuatro basidiosporas. Los basidios pueden ser con forma de maza, cilndricos u ovales. Las dos clases principales de este filo son: Heterobasidiomicetes, que tienen basidios con cuatro clulas y Homobasidiomicetes que, de manera tpica, tienen basidios con una clula. La clase Heterobasidiomicetes engloba a algunos importantes parsitos de las plantas, tales como las royas del orden Uredinales, o los tizones del orden Ustelaginales. Estos grupos tienen basidios que estn divididos en varias clulas, por lo general cuatro, las cuales forman una espora cada una. Muchas royas, entre ellas Puccinia graminis, la roya negra de los tallos del trigo y de otras gramneas, tienen un ciclo de vida complicado y requieren vivir en dos huspedes distintos para producir sus variadas formas de esporas. La roya negra de los tallos del trigo forma unas estructuras pequeas con forma de matraz llamadas espermatogonias. stas tienen numerosos cuerpos diminutos semejantes a esporas, 60 MICROBIOLOGIA 61. llamados espermtidas, situados sobre la cara superior de las hojas del agracejo (Berberis vulgaris). En la cara inferior se desarrollan, as mismo, unas estructuras con forma de copa, llamadas ecidios, desde cuya base se originan hileras de ecidiosporas. Las ecidiosporas nunca reinfectan a otras plantas de agracejo, sino que atacan nicamente a las gramneas, en las que forman unas pstulas rojas llamadas uredios que contienen esporas. Estos uredios son los que dan la apariencia de royas a los tallos y las hojas de las plantas parasitadas. Ms tarde, durante la misma estacin, se producen otro tipo de esporas llamadas

teliosporas, o esporas de invierno. stas son negras, con paredes gruesas y se forman en los tallos del trigo. En la primavera siguiente, las teliosporas desarrollan protecciones cilndricas, dividindose entonces en cuatro clulas que originan basidiosporas individuales. Las royas que utilizan dos huspedes se denominan heteroicas; aquellas cuyas etapas de desarrollo se realizan en un solo husped se llaman autoicas. En los tizones, las teliosporas se llaman clamidosporas. Estas esporas pueden reinfectar a otras plantas poco despus de formarse, pero es ms frecuente que germinen en el suelo durante la primavera siguiente. Producen unos filamentos cortos que tienen, aproximadamente, cuatro clulas. stas dan lugar a basidiosporas llamadas esporidios. Entre el resto de los heterobasidiomicetes se agrupan diversos hongos de consistencia gelatinosa de los rdenes Auriculariales, Dacrimicetales y Tremelales. La clase Homobasidiomicetes se subdivide en dos grupos principales que pueden considerarse subclases: Himenomicetes, cuyo himenio (superficie en la que se alojan los cuerpos fructferos) es externo, y Gasteromicetes, en los cuales los basidios se forman en el interior del cuerpo fructfero. La mayora de estos hongos son saprofitos, es decir, viven sobre materia orgnica muerta o en descomposicin. La subclase Himenomicetes engloba diversas familias que abarcan desde los championes y otros hongos similares, a las clavarias (hongos con forma de coral) y a los hongos porosos o polporos. Estos hongos difieren entre s por el tipo de cuerpo fructfero, o basidiocarpo. En los championes y en otros hongos de la familia Agaricaceae, el himenio se forma a lo largo de unas hojas alargadas, o laminillas. Las especies de la familia Clavariaceae tienen los basidiocarpos muy ramificados. El himenio se sita sobre la suave superficie de stos. Los 61 MICROBIOLOGIA 62. polporos, de la familia Polyporaceae, son comunes sobre troncos en descomposicin. Su himenio se alinea dentro de unos tubos. Los hongos con aguijones, de la familia Hydnaceae, tienen su himenio sobre unas espinas que crecen hacia fuera. La subclase Gasteromicetes comprende hongos tan familiares como los pedos o cuescos de lobo, del orden Licoperdales, y los hongos malolientes con forma de falo, del orden Falales. Los basidiocarpos de los pedos de lobo son estructuras globulares, a menudo grandes, que contienen una enorme cantidad de esporas. Los cuerpos fructferos de los falales son unas estructuras cilndricas. Sus esporas se disponen en la superficie del pice de estos basidiocarpos. Cuando maduran despiden un olor repugnante que atrae a los insectos carroeros y de esta forma aseguran la dispersin de las esporas. Deuteromicetes La mayora de los miembros del filo Deuteromicetes (Deuteromycota) son fases conidiales de ascomicetes; sin embargo, unas pocas especies son zigomicetes o basidiomicetes. Los gneros Aspergillus, Penicillium, Verticillium, Alternaria y Fusarium, pertenecen al orden Moniliales. En estos hongos, los odios y los conidios se forman sobre una almohadilla vellosa de hifas entrelazadas. Los hongos pertenecientes al orden Melanconiales, con gneros como Colletotrichum, tienen cuerpos fructferos semejantes a diminutos platillos, llamados acrvulos. Los conidios de los miembros del orden Esferopsidales se originan en el interior de unas estructuras con forma de matraz llamadas picnidios. 3.5.3. Nomenclatura y taxonoma Nomenclatura Algunos miclogos usaban textos parecidos a los de los zologos. Pero el texto bsico se basa en un cdigo internacional de nomenclatura botnica. El rango bsico es la especie. No obstante, no existe una definicin

objetiva de especie y cada autor lo considera de una forma diferente. Hay problemas. Hay ms acuerdo cuando se trata de rangos: 62 MICROBIOLOGIA 63. -Intraespecficos o supraespecficos. Dominio > Reino > Subgnero > Divisin > Clase > Subclase > Orden > Suborden > Familia > Subfamilia > Tribu > Subtribu > Gnero >... Normas bsicas de estructura Los gneros y especies no presentan terminaciones estndar. Segn los autores, cuando descubren una nueva especie, le dan un nombre nuevo, generalmente en latn binomial. El gnero se usa en maysculas y la especie en minsculas en cursiva o subrayado. Existen sinnimos aceptados y otros que no en las mismas especies de hongos. Taxonoma fngica Intentan ordenar el panorama de los microorganismos u organismos. Hay diferentes partes: -Clasificacin agrupa los microorganismos atendiendo a su parecido. -Identificacin incluye los nuevos aislamientos dentro de los grupos que ya estn establecidos. La clasificacin e identificacin son diferentes. -Nomenclatura consiste en poner nombre a los nuevos aislamientos segn una normativa internacionalmente aceptada. Funciones de los taxonmicos - Identificar y describir de la forma ms concreta posible las unidades taxonmicas bsicas (especies). - Desarrollar sistemas para ordenar y catalogar estas unidades. - Estudiar las relaciones que existen entre los hongos y otros organismos vivos. - Dar nombre a organismos siguiendo las normas internacionales 63 MICROBIOLOGIA 64. Establecimiento de la filogenia - Morfologa comparativa. - Citologa. Capacidad biosinttica segn si usan la Lisina: - cido Aminoadpico (AAA) hongos superiores y algas. - cido Diaminopimlico (DAP) bacterias, plantas y hongos inferiores. - Diagnstico serolgico protenas diferentes. - Huellas dejadas por los pocos fsiles. No se sabe ni donde ni cuando ni como se formaron. La solucin que se ha encontrado es la taxonoma molecular mediante genomas para ver las relaciones que hay. Se cree que se formaron con el origen de los eucariotas a los 1500 millones de aos. Los fsiles encontrados pertenecen a los 350 millones de aos. Hay mucho tiempo en el que no se conoce. Los fsiles ms conservados son los asociados a plantas superiores, que estaban asociadas a plantas a las que parasitaban hongos epfilos. Muchos miclogos los han estudiado como animales y, otros, como plantas. Lo hacan porque los mixomicetos se mueven. Los organismos vivos estn agrupados en 3 dominios: Bacteria, Archaea y Eukarya. Archaea est ms prximo al ms evolucionado. Por la molecular, hay hongos tan diferentes que algunos estn ms prximos al hombre que de los propios hongos superiores. Todas se basan en relaciones de DNA ribosomal. Hawksworth, propuso que los hongos se utilicen arbitrariamente como los organismos estudiados por los miclogos para incluir los que estn en otros reinos. Dentro de los diferentes reinos que se implican en el dominio Eukarya: Animalia, Plantae, Chromista, Fungi y Protozoa. En estos tres ltimos dominios, hay organismos clasificados como hongos. 3.5.4. Estructura 64 MICROBIOLOGIA 65. La mayora de los hongos poseen un soma vegetativo (van a dar origen a un nuevo organismo), conocidas como septo o esporas. Este soma produce una parte vegetativa, llamada micelios, y esta produce una serie de hifas, que son alargadas o bifurcadas (forma de horquetas). Las hifas pueden tener un grosor de 0.5 milimicra o hasta 100 milimicra, en algunos hongos. Algunos hongos, el micelio, pueden tener una longitud de algunas micras, pero en otros, hasta en varios metros. En los micelios, pueden tener las clulas, hasta dos ncleos (dinucleadas), algunos son cinocticos (poseen clulas multinucleadas). En

algunos hongos inferiores, no poseen micelios verdaderos, si no forman una parte llamada plasmodios. En otros constituyen los disomicelios. Estructura de un hongo 3.5.5. Reproduccin La mayora de los hongos se reproducen por esporas, diminutas partculas de protoplasma rodeado de pared celular. El champin silvestre puede formar 12.000 millones de esporas en su cuerpo fructfero; as mismo, el pedo o cuesco de lobo gigante puede producir varios billones. Las esporas se forman de dos maneras. En el primer proceso, las esporas se originan despus de la unin de dos o ms ncleos, lo que ocurre dentro de una o de varias 65 MICROBIOLOGIA 66. clulas especializadas. Estas esporas, que tienen caractersticas diferentes, heredadas de las distintas combinaciones de genes de sus progenitores, suelen germinar en el interior de las hifas. Los cuatro tipos de esporas que se producen de esta manera (oosporas, zigosporas, ascosporas y basidiosporas) definen los cuatro grupos principales de hongos. Las oosporas se forman por la unin de una clula macho y otra hembra; las zigosporas se forman al combinarse dos clulas sexuales similares entre s. Las ascosporas, que suelen disponerse en grupos de ocho unidades, estn contenidas en unas bolsas llamadas ascas. Las basidiosporas, por su parte, se renen en conjuntos de cuatro unidades, dentro de unas estructuras con forma de maza llamadas basidios. El otro proceso ms comn de produccin de esporas implica la transformacin de las hifas en numerosos segmentos cortos o en estructuras ms complicadas de varios tipos. Este proceso sucede sin la unin previa de dos ncleos. Los principales tipos de esporas reproductivas formadas as son: odios, conidios y esporangiosporas. Estas ltimas se originan en el interior de unos receptculos, parecidos a vesculas, llamados esporangios. La mayora de los hongos producen esporas sexuales y asexuales. Como se menciono, la reproduccin asexual se efecta por la formacin de esporas, que son cuerpos pequeos que contienen un ncleo y una pequea porcin de citoplasma. Las esporas de los organismos terrestres, son por lo general, muy livianas y poseen una pared protectora. Estos dos rasgos determinan que la esporulacin sea algo ms que un simple mecanismo de reproduccin. Su tamao pequeo y su peso liviano las habilita para ser transportadas a grandes distancias por medio de corrientes de aire. As las esporas funcionan como agentes de dispersin, que hacen posible la propagacin del organismo en nuevos lugares Los hongos producen esporas en abundancia. Un solo micelio de lycoperdon produce alrededor de 700 millones de esporas en cada perodo en sus esporangios. Si se deja un pedazo de pan hmedo (que no contenga sustancias inhibidoras del crecimiento del moho) en un lugar caliente, oscuro y expuesto a las corrientes del aire, se desarrolla un micelio abundante y exuberante que muestra cuan amplia es la distribucin de las esporas de este hongo. Los musgos, los licopodios y los helechos producen tambin enorme cantidad de esporas pequeas que se dispersan por el viento y, sirven para propagar la especie a nuevas localidades 66 MICROBIOLOGIA 67. Reproduccin sexual Reproduccin asexual 3.5.6. Importancia Desde que existimos como especie con conciencia de s misma, hemos usado a los hongos para muy diversos propsitos. Por otro lado, muchos de ellos tambin se han valido de nosotros para lograr sus fines (sobrevivir, ante todo). Por tanto, antes de que la Micologa se estableciera como ciencia, las sociedades humanas han interactuado con los hongos. Los hongos son unos organismos que desde siempre han fascinado a los humanos (vase Fig. 1). Nos rodean por doquier, y han sido empleados para los ms diversos y extraos menesteres, en ocasiones

sin que nos percatramos de ello. Por ejemplo, la fermentacin. Los pueblos antiguos, como los egipcios, han usado a las levaduras (vase Fig. 2) para obtener cerveza, vino y pan (lo consideraban un don de Osiris). Los romanos celebraban las Bacanales, en honor a Baco, dios del vino. De hecho, la ingestin de bebidas alcohlicas, aparte de la euforia asociada a ellas, era necesaria para nuestros antepasados. El agua corriente, debido al desconocimiento de las medidas higinicas, poda provocar 67 MICROBIOLOGIA 68. desde diarreas a enfermedades ms graves. En cambio, el vino y la cerveza eran inofensivos y adems el alcohol serva de germicida. Por supuesto, las antiguas bebidas alcohlicas no eran tan fuertes como los licores actuales, fruto del desarrollo de las tcnicas de destilacin. Al igual que el alcohol, muchos hongos juegan un gran papel en las religiones, ya que en ocasiones son necesarios para alcanzar estados alterados de consciencia. Los chamanes siberianos solan emplear la seta Amanita muscaria. Psilocybe cubensis, un hongo alucingeno, es usado en ciertas ceremonias religiosas americanas. Tambin se han utilizado carpforos de Fomitopsis officinalis (un yesquero) para tallar figuras sagradas, se crea que algunos hongos, como setas y trufas, eran directamente generados por los dioses (por el rayo de Jpiter, sin ir ms lejos). Los hongos yesqueros han sido utilizados para encender fuego. Concretamente, los carpforos secos de Fomes fomentarius se molan, y el polvo resultante era conocido como yesca, muy inflamable. Su uso es muy antiguo; se han encontrado restos de yesqueros en la momia del Hombre de los Hielos hallado en Tirol. Tambin hay hongos luminiscentes (foxfire), usados incluso por algunos soldados en incursiones nocturnas. No slo las setas brillan en la oscuridad, sino la madera atacada por el micelio. Realmente, la gente no suele ser consciente de la importancia de los hongos en nuestras vidas. De hecho, muchos de nosotros estamos vivos gracias a ellos. Hace no demasiadas dcadas, la tasa de mortalidad infantil era elevadsima. Una simple septicemia poda llevarle a uno a la tumba. A partir del descubrimiento de la penicilina, los antibiticos han salvado incontables vidas. Otro antibitico fngico interesante es la ciclosporina. Incluso hay hongos que producen taxol, un anticancergeno. Indiscutiblemente, la importancia de los hongos en la biosfera se debe a su carcter de descomponedores, especialmente en bosques. Reciclan la materia orgnica (y no slo la madera) con notable eficacia, regulan la liberacin de nutrientes y son esenciales para la supervivencia de plantas y animales. Por desgracia, tambin descomponen madera de construcciones, postes, embarcaciones, etc., sobre todo si hay mucha humedad (destaca la podredumbre seca de Serpula lacrimans). Otros pueden descomponer desde productos alimenticios hasta las cosas ms extraas (papel, emulsiones 68 MICROBIOLOGIA 69. fotogrficas, pintura, fungicidas, incluso discos compactos o hasta papel pintado, generando a veces en el proceso gases txicos), y nos obligan a luchar contra ellos por medios qumicos, refrigeracin, enlatado, etc. Ello supone un gran gasto de tiempo y dinero. Algunos descomponedores fabrican micotoxinas, que envenenan los alimentos. Por ejemplo, las aflatoxinas son cancergenas, e incluso se han empleado como armas de guerra biolgica. Sin embargo, la peligrosidad de las toxinas producidas por hongos no es un fenmeno actual. Es bien conocido el envenenamiento por cornezuelo del centeno, del cual, a pesar de todo, se obtienen substancias de enorme inters en medicina. Uno se pregunta la cantidad de antibiticos y productos tiles que quedan por descubrir, y que tal

vez se estn perdiendo mientras permitimos que una especie tras otra se extinga. Dicho sea de paso, otros hongos han sido usados en medicina popular. Los ms conocidos son los cuescos de lobo y hongos afines, empleados como antihemorrgicos. Por supuesto, las setas comestibles son conocidas desde tiempo inmemorial. En China se cultivan desde el ao 600 a. C., mientras que en Europa se empez hacia 1650. Hoy son cultivadas muchas especies que crecen en estircol, paja, desechos de arroz y otros sustratos baratos. Algunas han sido usadas como afrodisacas (ej.: trufas). Y, por supuesto, hay setas venenosas que pueden llegar a ser mortales. En algunos lugares (Catalua, sin ir ms lejos) hay toda una tradicin de ir a buscar setas en otoo. Existen sociedades micolgicas que se ocupan de que este pasatiempo se realice de forma instructiva para los aficionados y sin daar al entorno. Por desgracia, abundan los desaprensivos que expolian los bosques en su bsqueda de setas, bien para consumo propio o con fines de exportacin. No slo las tpicas setas se consideran un manjar. Algunos hongos comestibles son peculiares, como el cuitlacoche (agallas inmaduras del carbn del maz) en Mxico, o algunos esclerocios gigantes buscados por los aborgenes australianos. Varias especies de Penicillium dan sabor a ciertos quesos (Roquefort, Cabrales, etc.), mientras que diversas especies de Aspergillus o mucorceos son empleados en Asia para obtener alimentos fermentados a partir de soja, arroz, etc. Su sabor podr ser ms o menos extrao, pero lo cierto es que la digestibilidad de estos productos fermentados aumenta. Las levaduras, adems de para fermentar, pueden fabricar enormes cantidades de protenas (por desgracia, su 69 MICROBIOLOGIA 70. consumo humano es complicado, ya que tienen un exceso de cidos nucleicos txicos y carecen de algunos aminocidos esenciales). Otros hongos producen ergosterol, cortisona, enzimas varias, cidos, giberelinas, etc. Incluso el moho gris, un hongo destructor de cosechas, es empleado en ciertos viedos para lograr la podredumbre noble. La cantidad y diversidad de bebidas alcohlicas que los humanos han fabricado gracias a los hongos son admirables. Los hongos son los parsitos vegetales por excelencia, como muy bien saben los fitopatlogos, los especialistas que estudian las enfermedades de las plantas. Por otro lado, algunos de estos hongos podran convertirse en valiosos micoherbicidas contra las malas hierbas, bien aplicados directamente, bien mediante substancias fitotxicas obtenidas a partir de ellos. Hay hongos que viven en simbiosis con otros organismos. Los ms importantes son las micorrizas con las races de las plantas y los populares lquenes, pero hay otros. Los hongos endfitos parasitan a ciertas plantas, pero a la vez las protegen del ataque de los animales, convirtindolas en venenosas. Las asociaciones de los hongos con los artrpodos y otros pequeos animales tambin son fascinantes, y van desde el parasitismo y la depredacin de unos sobre otros (y viceversa) hasta extraas formas de simbiosis (hormigas jardineras, hongos que viven dentro de algunos insectos y detoxifican sus alimentos, etc.). Las estrategias de dispersin conjunta de insectos y hongos pueden llegar a ser muy complejas. Por otro lado, algunas moscas son resistentes a las amanitinas, las cuales matan a los nematodos que parasitan a dichas moscas. El empleo de hongos parsitos o depredadores en el control de enfermedades vegetales es un campo en constante desarrollo. Los hongos tambin provocan micosis en humanos. Abundan especialmente en pases tropicales, pero poco a poco se van extendiendo a otros mbitos. Estas micosis varan desde los omnipresentes pies de atleta y candidiasis hasta los hongos que matan a los enfermos inmunodeprimidos. Las

esporas de varios hongos (ej.: Alternaria) tambin pueden causar alergias. Por ltimo, algunos hongos son empleados como organismos de laboratorio para el estudio de procesos biolgicos fundamentales (Saccharomyces, Neurospora, Coprinus, Schizophyllum, Phycomyces, Aspergillus, Ustilago, etc.). Ciertos venenos, como las 70 MICROBIOLOGIA 71. amanitinas, tambin pueden convertirse en tiles herramientas de investigacin. Las enzimas hidrolticas de los hongos se utilizan en diversos procesos industriales. Cuando crecen sobre salvado caliente de trigo o de arroz, algunas especies fngicas producen una amilasa que se usa en la fermentacin alcohlica. Las proteasas que se obtienen de otros hongos se emplean en la fabricacin de pegamento lquido. La produccin industrial de alcohol etlico (etanol) se realiza por fermentacin de melaza de caa de azcar o de almidn hidrolizado mediante enzimas formadas por otros hongos. En el proceso de elaboracin del pan se aade levadura a la masa para producir dixido de carbono. 3.6. Nematodos 3.6.1. Propiedades generales Son uno de los grupos que pertenecen al reino animal. La gran mayora de los nematodos, son de vida libre, viviendo en las aguas dulces o saladas. Como parsitos, viven en el suelo alimentndose de las races de las plantas, otras viven en los nudos de los vegetales, produciendo gran variedad de enfermedades. Existen tambin los que parasitan en animales y en el hombre. 3.6.2. Criterios de clasificacin Debido a su gran variedad de formas de vida, los Nematodos se han estudiado por investigadores de distintas disciplinas interesados en grupos particulares. Por ello, se han investigado independientemente los de vida libre, los zooparsitos y los fitoparsitos, habindose propuesto diferentes formas de clasificacin. Su ordenacin en gneros, familias y superfamilias es satisfactoria, pero la ordenacin en grupos superiores es controvertible La clasificacin ms aceptada de los Nematodos es la propuesta por B. G. Chitwood y M. B. Chitwood (1950), segn la cual forman un filo dividido en dos clases, Phasmidia y Aphasmidia La clase Phasmidia (Fasmidios o Fsmidos) o Secernentea (Secerntidos) incluye a los Nematodos provistos de fasmidios, rganos sensoriales pares en forma de pequeas bolsas que se ubican en la zona caudal. Estructuras pares similares (anfidios) del extremo anterior, estn escasamente 71 MICROBIOLOGIA 72. desarrolladas. Sistema excretor presente, con uno o dos canales laterales, con o sin clulas glandulares asociadas. Los Fsmidos comprenden parte de las especies que habitan en el suelo, la mayora de los parsitos animales y casi todos los parsitos de los vegetales. Entre los fsmidos se encuentran los estrongilinos, los ascaridinos (grupo al que pertenecen los Ascaris y los oxiuros) y los espirulinos (al que pertenecen las filarias, como Wuchereria). La clase Aphasmidia (Afasmidios o Afsmidos) o Adenophorea (Adenofridos) incluye a los que carecen de glndulas fasmidiales y poseen anfidios de formas variables, generalmente bien desarrollados, detrs de los labios. Sistema excretor con una o ms clulas excretoras (renetas). Comnmente con glndulas hipodrmicas y caudales. La mayora son de vida libre. Comprenden a casi todas las especies acuticas, tanto dulceacucolas como ocenicas, parte de las especies del suelo, parte de los parsitos animales (como las triquinas Trichinella y tricoffalosTrichuris) y algunos parsitos de los vegetales. 3.6.3. Estructura Los nematodos son microorganismos que pueden llegar a medir de 300 a 1000 milimicra. Especficamente algunas llegan a medir aproximadamente 4 milimicras de longitud por 15 a 30 milimicras de ancho. Su tamao pequeo hace a que no se puedan observar a simple vista, si no que, se facilita a travs de

microscopio. Los nematodos pueden ser en formas de anguilas, otras en forma redondas, son de cuerpo liso y no son segmentados, incluso carecen de patas o apndices. El cuerpo de los nematodos son ms o menos transparentes cubierta por una cutcula incolora. Esta cutcula se reemplaza por otra, en su momento de muda. Tienen longitudinalmente dispuestos unos msculos muy potentes, que permiten su movilizacin y su accin parsita. Estos msculos y otros especializados, tambin se localizan en la boca, en la estructura digestiva y reproductora. La cavidad del cuerpo, coordina un lquido en el cual se realiza la circulacin y la respiracin. El sistema digestivo, es un tubo hueco, que inicia desde la boca, pasa al esfago, despus al intestino y concluye en el recto y ano. Todos los nematodos fitoparasitos, poseen un estilete, que utilizan para perforar las paredes celulares. 72 MICROBIOLOGIA 73. Imagen de nematodos 3.6.4. Reproduccin La reproduccin es siempre sexual (por jebecillos) y la fecundacin interna. Casi todos los Nematodos son de sexos separados (dioicos o bisexuales), y en la mayora de los casos el macho es menor que la hembra. Los machos presentan caracteres sexuales secundarios, tales como glndulas ventrales, lbulos caudales y testiculos. Las hembras, poseen uno o dos ovarios, un oviducto, un tero, que finaliza en la vulva. Existen algunos pocos Nematodos terrestres que son hermafroditas o partenogenticos. Hay casos en que se desconocen los machos. Las especies hermafroditas son proterndricas, es decir los rganos masculinos y los espermatozoides se desarrollan antes que los rganos femeninos y los vulos. En ellas existe un ovotestculo. En general se autofecundan. Los espermatozoides se desarrollan primero y son almacenados en las vesculas seminales. La autofecundacin ocurre despus de la formacin y maduracin de los vulos. Peridicamente surge un pequeo nmero de machos que fecundan cruzadamente a los hermafroditas. El sistema reproductor es generalmente par. Las gnadas, en nmero de una o dos, se comunica con el exterior por un poro nico, la cloaca, en los machos, y un gonoporo o vulva en las hembras. La posicin de la vulva vara, siendo a veces posterior y otras veces anterior. En los machos, hay un testculo tubular, con forma de un cordn macizo apelotonado sobre s mismo. En algunos Nematodos hay dos testculos, orientados generalmente en 73 MICROBIOLOGIA 74. forma opuesta. El o los testculos se convierten imperceptiblemente en un largo espermiducto o conducto deferente. Cada espermiducto se ensancha en el extremo posterior formando una larga vescula seminal, donde se acumulan los espermatozoides. Un conducto eyaculador muscular, con glndulas prostticas, conecta las vesculas seminales con la cloaca. Las secreciones prostticas son adhesivas y posiblemente facilitan la cpula. La vescula seminal desemboca en el recto, modificado en una cloaca. La pared de la cloaca est evaginada formando dos sacos que se unen antes de desembocar en la cmara cloacal. La regin posterior de los machos presenta una considerable variacin. Suele estar curvada en forma de gancho o la cutcula ensanchada en expansiones alares con forma de abanico, constituyendo un accesorio copulador llamado bursa. A veces presentan papilas pedunculadas, sedas sensoriales o expansiones a modo de ventosas. El poro genital masculino est situado muy cerca del ano y tiene ganchos cuticulares (espculas copuladoras), varillas utilizadas para asir a la hembra durante la cpula y para mantener abierto el gonoporo femenino durante la transmisin de espermatozoides. Cada saco contiene una espcula, que generalmente es corta, con forma de hoja aguzada y curva. Las espculas asoman

a travs de la cloaca y salen por el ano o abertura, mediante msculos especiales, pueden ser evaginadas y retradas en la bolsa cutnea. Las espculas copuladoras del macho asoman por la cloaca y el ano. Los espermatozoides, de distintas formas (redondos, cnicos, sinuosos o alargados), se pueden mover lentamente en forma ameboide y carecen de flagelo. Los espermatozoides pueden estar formados por cabeza y cola, la cola suele poseer una larga mitocondria central con microtbulos laterales. Puede haber uno o dos ovarios, tubulares, cordones apelotonados tpicamente pares. Normalmente una gnada est orientada hacia la parte anterior y la otra hacia la parte posterior, con sus extremos opuestos enfrentados. En muchas especies cada gnada se dobla sobre si misma y en algunas especies parsitas cada gnada es larga y enrollada en espiral. La parte germinativa es terminal, en las especies mayores las clulas suelen agruparse alrededor de un cordn nutricio central (raquis). La clula ms interna de cada gnada, la clula del extremo distal, secreta una substancia promotora de la mitosis, que produce la proliferacin de ncleos de clulas germinales. Cada ovario se prolonga poco a poco convirtindose primero en oviducto tubular y luego en 74 MICROBIOLOGIA 75. un tero largo y muy amplio. En algunos casos hay un ovario nico y un solo oviducto. El extremo superior del tero puede funcionar como receptculo seminal. Cada tero desemboca en un tubo muscular corto comn, denominado vagina. La vagina desemboca al exterior por el poro sexual generalmente impar (vulva), situado ventralmente, generalmente en la zona media del cuerpo. El poro sexual femenino est situado en la parte ventral del extremo anterior del cuerpo, aunque a veces se traslada hacia las proximidades del ano. Los huevos son pequeos, generalmente alargados y estn rodeados por envolturas muy duras, que les permiten esperar indefinidamente la aparicin de condiciones ambientales adecuadas. Existen tres cubiertas: una lipdica, otra cuticular y una tercera proteica, con ornamentaciones. Son numerosos en las especies parsitas. Por ejemplo, una hembra de ascride pone muchos millones de huevos. Se conocen casos de hembras que produjeron 27 millones de huevos, expulsando 200.000 diariamente. Esta elevada fertilidad puede producir deformaciones, la hembra adquiere forma redondeada, con intestino, sistema nervioso y otros rganos involucionados, a veces se evagina la vagina y crece intensamente formando una envoltura para el ovario, el tero y los embriones, quedando el cuerpo como un apndice diminuto. Las hembras de algunas especies producen una feromona que atrae a los machos. La fecundacin es interna. Durante la cpula, las espculas cloacales del extremo posterior en forma de gancho del macho son expulsadas por la abertura cloacal, se enredan en torno a la regin de los poros genitales de la hembra y se insertan en el gonoporo femenino, mantenindolo abierto. Los espermios ameboides migran hacia la vagina y se dirigen al receptculo seminal, en el extremo superior del tero, donde ocurre la fecundacin. El vulo fecundado secreta una gruesa membrana de fecundacin, que se endurece. A esta capa se agrega otra cubierta externa, secretada por las paredes uterinas, que a menudo presenta estructuras caractersticas. La superficie de los huevos est esculpida de diferentes formas especficas para cada especie. Los huevos son retenidos en el tero durante algn tiempo antes de ser depositados. A veces el desarrollo comienza cuando los huevos an estn dentro de la hembra. 75 MICROBIOLOGIA 76. Reproduccin del nematodo 3.6.5. Importancia Son pocos los animales o plantas que carecen de Nematodos parsitos. Inciden en el ser humano, como

parsitos propios, de sus animales domsticos y de sus cultivos. Existen numerosos Nematodos parsitos del ser humano que causan enfermedades que no han podido ser controladas por la medicina, y los que parasitan a los animales domsticos causan prdidas por valores de miles de millones de dlares. Se consideran que unas 15 especies de Nematodos parasitan habitualmente al ser humano, pero otras 15 adicionales que se encuentran habitualmente en otros animales, pueden parasitarlo ocasionalmente (zoonosis). Existen varios Nematodos pequeos (1-2 mm de largo) que producen lesiones en vegetales tiles, como herbceas, flores, frutos y rboles. Se calcula que consumen aproximadamente un 10% de los cultivos. Perjudican a su husped por su accin corrosiva, porque agotan la savia de la planta, lesionan los puntos de crecimiento, y por la transmisin de virus o al abrir caminos de entrada a bacterias u hongos. Los principales medios de control son la rotacin de cultivos, la esterilizacin de la tierra y el desarrollo de variedades de plantas resistentes. Entre los aspectos positivos que tienen los Nematodos para el ser humano, debe considerarse que son parcialmente responsables de la destruccin de multitud de cadveres, atacan a muchos animales y vegetales perjudiciales para el ser humano y que las actividades de los Nematodos del suelo 76 MICROBIOLOGIA 77. facilitan la aireacin del suelo y la circulacin de componentes minerales y orgnicos. Como una alternativa al uso de insecticidas qumicos se ha propuesto el control biolgico con Nematodos parsitos. Se basa en la aplicacin de un biolarvicida a base de Nematodos parsitos Romanomermis culicivorax y Romanomermis iyengari. Estos biolarvicidas, se caracterizan por ser especficos para larvas de mosquitos. Y no afectan ni a la flora, ni a la fauna, incluyendo al hombre mismo. Otra caracterstica de estos biolarvicidas es que se pueden obtener o producir a bajo costo, con materias primas locales. Adems, se pueden establecer en los criaderos tratados debido a que reciclan, manteniendo un control biolgico a mediano plazo. Desde el punto de vista cientfico, debe destacarse que el Nematodo Caenorhabditis elegans es uno de los animales ms estudiados. De l se conoce el destino de cada una de sus clulas durante el curso del desarrollo y su genoma es uno de los mejores conocidos 77 MICROBIOLOGIA 78. Unidad 4. Factores Ambientales que afectan el crecimiento, desarrollo y reproduccin de microorganismos. 4.1. Factores de crecimiento Crecimiento: Es el incremento ordenado de todos los componentes del organismo. Se realiza al multiplicarse o reproduccin de las clulas, pero en forma ordenada. Por lo tanto, se establece un crecimiento por la produccin ordenada de clulas en un organismo. Para que esto suceda, la clula, debe captar productos orgnico e inorgnicos: carbohidratos, lpidos, protenas (para que el alimento sea aprovechado) y agua, sales minerales. La multiplicacin celular tiene como consecuencia el crecimiento. En los rganos unicelulares, su crecimiento o multiplicacin conduce a la formacin de colonias, poblacin, cultivo. Un cultivo detiene su crecimiento cuando sucede cualquiera de estas tres causas: 1. Cuando se agotan uno o ms nutrimentos 2. Cuando se acumulan productos txicos. 3. Cuando establece un desequilibrio del Ion desfavorable. Ejemplo, PH inadecuado) Un factor de crecimiento, es aquel producto orgnico que una clula debe contener, pero que ella, por si sola, es incapaz de sintetizarlo. Cuando un organismo celular es suministrado los nutrimentos: donadores de hidrogeno, aceptores de hidrgeno, fuentes de 78 MICROBIOLOGIA

79. carbono, nitrgeno; son capaces de sintetizar los componentes orgnicos de la clula, incluyendo los aminocidos, especialmente; protenas, vitaminas (piriminas), cidos grasos (glicerol), cidos nucleicos (ADN, ARN). Todos los componentes orgnicos se sintetizan por enzimas (protenas) y coenzimas (vitaminas), si no existen encimas la reaccin metablica no se realiza. Los factores de crecimiento de los organismos, estn en relacin directa a su crecimiento e inversamente proporcional a la falta de ellas (falta de los factores) Existen microorganismos, que requieren de mayor o menor calidad de elementos o factores para su crecimiento. Factores ambientales que afectan el crecimiento. Un determinado cultivo debe tener todos los nutrimentos necesarios y el medio ambiente adecuado para su crecimiento: temperatura, aeracin, ph, luz. El cultivo debe estar en un medio lquido (agar), para ser gelificado, este es un medio adecuado para cultivos. 4.2. Presin Hidrosttica Todo microorganismo o clulas, su alimentacin o excrecin, la realiza a travs del fenmeno de osmosis. Se establece la presin osmtica, cuando de un lugar de alta concentracin de molculas, pasa a travs de una membrana permeable, a un lugar de baja concentracin de molculas Posterior a esto, se establece otro fenmeno, llamado: transporte activo. Donde a travs de la osmosis, permite la seleccin de molculas de sustancias orgnicas o inorgnicas. Una vez efectuada el transporte activo, sucede otro fenmeno llamado: difusin. Establece la distribucin uniforme de molculas, en el cuerpo de la clula. Cuando las molculas de sustancias orgnicas e inorgnicas no pueden ingresar al cuerpo de la clula, por el tamao que presentan, son devueltas para realizar acciones metablicas y, se constituyen en productos mucho ms pequeos, para su ingreso, constituyndose los iones de productos, que pueden ser positivos o negativos, formando la fuerza inica. 79 MICROBIOLOGIA 80. Un Ion, de un producto, tiende a ingresar en la clula, siempre y cuando se localice su polo inverso dentro de la clula. Existen ciertos microorganismos con altas concentraciones de sal, que siendo marinos, no tan fcilmente puede ingresar agua en su cuerpo. Los organismos que requieren alta concentracin de sal se llaman halofilos. Los organismos que requieren alta presin osmtica se llaman osmofilos. 4.3. Temperatura La mayora de las bacterias, varan ampliamente en las condiciones de temperatura, en el cual se desarrollan y reproducen. Las formas psicrofilas, crecen a una temperatura menor 15 a 20 C; las formas mesofilas, crecen a una temperatura de 30 a 37 C y las formas termofilas, se desarrollan a una temperatura de 50 a 60 C . La mayora de las bacterias son mesofilos, pues crecen a una temperatura de 30 C, pero la ptima de desarrollo y crecimiento es de 25 a35 C, al igual que otros organismos superiores. La adaptacin a las diversas temperaturas, estarn con bas en o relacionada en la concentracin de protenas de los microorganismos. 4.4. Potencial de Hidrgeno (pH) La mayora de los microorganismos, se reproducen en una cantidad muy estrecha de acidez y alcalinidad. La mayora de los microorganismos crecen a un PH de 6.0 a 8.0, aunque algunos, crecen a un PH ptimo de 2.0 (Thiobacillus thioxidans) y otros hasta un PH de 8.5 (Alcalgenas faciales). 4.5. Oxgeno Algunos microorganismos estn adaptados para vivir en forma aerbica (necesitan oxigeno), otros en forma mnima, 80 MICROBIOLOGIA 81. son aerobios (se desarrollan en presencia del oxigeno como el acetobacter que forma el vinagre), y otros pueden vivir en forma aerobia o anaerobia, segn las condiciones que se presenten. Incluso otros no requieren el oxigeno o su

presencia, si no que utilizan al hidrogeno para su desarrollo, por que son sensibles al oxigeno. La toxicidad del oxigeno, se debe a la reduccin de enzimas en la clula (como la fluvoprotena), o el perxido de oxigeno (H2O2), y el radical mas toxico del oxigeno el O-2 (superoxido). La provisin de oxgenos en los cultivos hermticamente cerrados, se realizan por la agitacin de envase, para producir aire o bien, es introducido el oxigeno por el aire a travs de presin y succin, porque el oxigeno es indispensable para la supervivencia y desarrollo de la clula, esta accin ser para rganos aerbios. Para los rganos anaerobios, el problema es mayor, se debe eliminar el oxigeno en el cultivo pudiendo utilizar el tioglicolato de sodio, posteriormente los tubos de ensayo se sellan con parafina, vaselina. Tambin se puede eliminar oxigeno, por otros mtodos qumicos, o colocar el microorganismos en una jarra anaerobiosis. 4.6. Nutrimentos La provisin de un nutrimento, para un determinado microorganismo, se denomina nutricin. Los nutrimentos, se clasifican de acuerdo a su papel metablico. Donadores de hidrgeno El hidrgeno es indispensable, por que interviene en la oxido reduccin de la energa. Carbohidratos + hidrogeno = energa En los rganos aerobios, requieren el H a travs del oxigeno gaseosos, y los anaerobios obtienen hidrogeno de productos inorgnicos (sulfatos, nitratos y fumaratos), tambin de productos orgnicos. Fuente de nitrgeno 81 MICROBIOLOGIA 82. Muchos constituyentes orgnicos celulares, principalmente las protenas contienen nitrgeno. En las bacterias los nitrgenos constituyen el 10% del peso seco celular. Los microorganismos contienen su nitrgeno: NH3, NO3, NO2, N2 (nitrgeno atmosfrico) R-NH3. En general en la preparacin con los cultivos de microorganismos, en relacin a sus nutrientes, deben estar en la siguiente proporcin. 1. De los receptores y aceptores de hidrogeno 2g/l 2. Fuente de carbono 1g/l 3. Fuente de nitrgeno 1g/l 4. Minerales: fsforo, azufre aprox. 50/l cada uno, Oligoelementos: N, K Ca, Mg de 0.1mg/l 5. Factores decrecimiento (aminocidos) pirimidina, purina, 50mg/l cada uno. Muchas veces para preparar cultivo, no se cuenta a la mano con productos sintticos, por lo que muchas veces es utilizado el extracto de levaduras, los hidrolizados de protenas y otros similares. En muchos organismos son utilizados los aminocidos, pues estos contienen fuente de nitrgeno, carbono, que sirven de energa. Minerales Adems del H, N, C. los microorganismos requieren de minerales para su crecimiento. Azufre Al igual que otros compuestos, el azufre es un constituyente celular. En su mayora, se localiza en los grupos SH (sulfidrilo), en las protenas, como al igual que el N. Muchos microorganismos, consiguen azufre en las fuentes orgnicas (R-SH) o H2S o lo puede conseguir en los productos inorgnicos como SO4 (sulfato), para convertirlo en orgnico (protena). Fsforo 82 MICROBIOLOGIA 83. El fsforo, lo requieren los microorganismos como un componente de ATP. En los cidos nucleicos y en las coenzimas como el NAD y las fluvinas. El fsforo es introducido a las clulas como un fosfato libre (PO) Actividades enzimticas Numerosos minerales actan como activadores enzimticos: Por ejemplo, el Ion (Mg++) y el Ion ferroso (fe++), se encuentran como activadores en las porfirinas (partculas que se encuentran dentro del ncleo, permitan absorber luz para activar el fotoperiodo). El Ion Mg++ y K+, son importante para la accin e integracin de los ribosomas. El Ion Ca++ indispensable como constituyente de las paredes celulares En la mayor parte de los cultivos de

microorganismos, deben estar presentes los estibadores enzimticos como Ion o gram positivo Mg++, Ca++, Fe++ y el Ion positivo K+. 83 MICROBIOLOGIA 84. Unidad 5. Metabolismo Microbiano. 5.1. Origen de las cepas industriales La fuente ltima de todas las cepas de microorganismos industriales es el ambiente natural. Pero a travs de los aos, a medida que los procesos microbianos a gran escala se han ido perfeccionando, un cierto nmero de cepas industriales se han ido depositando en las colecciones de cultivos. Cuando se patenta un nuevo proceso industrial, al solicitante de la patente se le requiere para que deposite una cepa capaz de llevar a cabo el proceso, en una coleccin de cultivos reconocida. Hay varias colecciones de cultivos que actan de depositarias y suministradoras de cultivos microbianos. Aunque estas colecciones pueden ser una fuente rpida y fcil de cultivos, es comprensible que la mayora de las compaas industriales se sientan poco dispuestas a depositar sus mejores cultivos en las colecciones de cultivos. Adems de cultivos de microorganismos, muchas colecciones de cultivos tienen tambin colecciones de varios plsmidos, de genes clonados y de vectores para su uso en ingeniera gentica, de lneas 84 MICROBIOLOGIA 85. celulares animales para el cultivo de virus animales, y de hibridomas para producir anticuerpos monoclonales. Mejora de cepas Como hemos indicado, la fuente inicial de un microorganismo industrial es el ambiente natural, pero el aislamiento original se modifica en gran medida en el laboratorio. Como resultado de esta modificacin, es posible anticipar una mejora progresiva en el rendimiento de un producto. El ejemplo ms espectacular de tal mejora progresiva es el de la penicilina, el antibitico producido por el hongo Penicillium chrysogenum. Cuando se produjo por primera vez la penicilina a gran escala, se obtuvieron rendimientos de 1- 10 g/ml. A lo largo de los aos, como resultado de la mejora de las cepas acoplada a cambios en el medio y en las condiciones de cultivo, el rendimiento de penicilina aument hasta 50.000 g/ml. Es interesante decir que todo este incremento de 50.000 veces el rendimiento, se obtuvo por mutacin y seleccin; no estuvo implicada ninguna manipulacin gentica. La introduccin de nuevas tcnicas genticas ha conducido a posteriores, aunque mucho ms modestos, incrementos del rendimiento. 5.2. Propiedades de un microorganismo industrial Un microorganismo adecuado para su utilizacin industrial debe producir la sustancia de inters, pero hay muchos otros aspectos a considerar. Es preciso disponer del organismo en cultivo axnico (puro), debe ser genticamente estable, y debe crecer en cultivo a gran escala. Adems, debe ser posible mantener cultivos del organismo durante un perodo de tiempo largo en el laboratorio y en la planta industrial. El cultivo debe producir preferentemente esporas o alguna otra forma celular reproductora, para que los organismos se puedan inocular fcilmente en los grandes fermentadores. Una caracterstica importante es que el organismo industrial crezca rpidamente y produzca el compuesto deseado en un perodo de tiempo relativamente corto. El organismo, adems, debe ser capaz de crecer en un medio de cultivo lquido y relativamente barato, que se pueda obtener en grandes cantidades. Muchos procesos microbiolgicos industriales utilizan fuentes carbonadas de desecho de otras industrias, como principal ingrediente o como suplemento para los medios de cultivo a escala industrial. Algunas de estas fuentes son, por ejemplo, el licor de maceracin de maz (un producto rico en nitrgeno y factores de crecimiento), el suero (un producto lquido de desecho de la 85 MICROBIOLOGIA

86. industria lechera, que contiene lactosa y sales minerales) y otros materiales de desecho industriales, que tienen elevado contenido de carbono orgnico. (La utilizacin de estos materiales carbonados de desecho ayuda tambin a resolver los problemas de eliminacin de residuos, creados por la elevada demanda biolgica de oxgeno (BOD) de los residuos orgnicos de desecho). Adems, un microorganismo industrial debera no ser daino para las personas ni para los animales y plantas econmicamente importantes. Debido al gran tamao de la poblacin dentro del fermentador y a la imposibilidad prctica de evitar la contaminacin del ambiente fuera del fermentador, un patgeno podra plantear problemas potenciales desastrosos. Otro requisito importante de un microorganismo industrial es que sea posible eliminar las clulas microbianas del medio de cultivo con relativa facilidad. En el laboratorio, las clulas se retiran principalmente por centrifugacin, pero la centrifugacin a gran escala puede ser difcil o cara. Los organismos industriales ms favorables son aquellos que tienen un tamao de clula grande, porque las clulas ms grandes se depositan rpidamente en un cultivo o pueden filtrarse fcilmente con materiales de filtro relativamente baratos. Los preferidos son los hongos, las levaduras y las bacterias filamentosas. Las bacterias unicelulares, debido a su pequeo tamao, son difciles de separar del fluido de cultivo. Finalmente, un microorganismo industrial debera ser susceptible de manipulacin gentica. En microbiologa industrial, el incremento del rendimiento se ha obtenido primordialmente por medio de la mutacin y seleccin. Tambin es deseable que el organismo industrial sea capaz de sufrir recombinacin gentica, bien por un proceso sexual o por algn tipo de proceso asexual. La recombinacin gentica permite incorporar en un solo genoma, caractersticas genticas de ms de un organismo. Sin embargo, muchas cepas industriales se han mejorado enormemente por mutacin y seleccin, sin el uso de la recombinacin gentica. 5.3. Productos industriales 5.3.1. Empleo de microorganismos en la elaboracin de alimentos Los productos microbianos de inters industrial pertenecen a varios tipos principales. Incluyen a las propias clulas, como 86 MICROBIOLOGIA 87. por ejemplo la levadura cultivada como alimento, para panadera o para la industria cervecera y sustancias producidas por las clulas. Como ejemplos de estas ltimas figuran enzimas como la glucosa isomerasa, agentes farmacolgicamente activos como los antibiticos, esteroides y alcaloides, especialidades y aditivos alimentarios como el popular "aspartame" y edulcorante de bebidas, as como productos qumicos tales como el etanol. En la imagen inferior se ofrece un resumen de algunos productos industriales importantes, muchos de los cuales sern estudiados con detalle ms adelante. 5.4. Metabolitos microbianos Anteriormente hablamos del proceso de crecimiento microbiano y describimos las diversas etapas: fase de latencia, fase logartmica y fase estacionaria. En esta parte vamos a considerar el crecimiento microbiano tal como ocurre en un proceso industrial. Vamos a referirnos en primer lugar, a aquellos procesos en los que el producto deseado es un metabolito microbiano. Hay dos tipos fundamentales de productos metablicos: primarios y secundarios. Un metabolito primario es el que se forma durante la fase primaria del crecimiento del microorganismo, mientras que un metabolito secundario es el que se forma cerca del final de la fase de crecimiento, frecuentemente cerca de, o en la fase estacionaria del crecimiento. Las diferencias entre un metabolito primario y un metabolito secundario se ilustran en la imagen de la izquierda. 87 MICROBIOLOGIA

88. 5.4.1. Primarios Un proceso microbiano tpico, en el que el producto se forma durante la fase primaria del crecimiento, es el alcohol (etanol) obtenido por fermentacin (En microbiologa industrial, el trmino fermentacin se refiere a cualquier proceso microbiano a gran escala, sea o no sea bioqumicamente una fermentacin. De hecho, la mayora de las fermentaciones industriales son aerbicas. El tanque en el cual se lleva a cabo la fermentacin industrial se denomina fermentador y el microorganismo implicado es el agente de la fermentacin.). El etanol es un producto del metabolismo anxico de la levadura y de algunas bacterias y se forma como parte del metabolismo de la energa. Debido a que el crecimiento slo puede tener lugar si puede producirse energa, la formacin de etanol tiene lugar en paralelo con el crecimiento. En la imagen inferior, se muestra una tpica fermentacin alcohlica indicando la formacin de clulas, de etanol, y la utilizacin del azcar. 5.4.2. Secundarios Un tipo ms complejo de productos industriales es aquel en el que el producto deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la fase estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se denominan metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms importantes de inters industrial. Los ms conocidos y ms ampliamente estudiados son los antibiticos y en la imagen inferior puede verse la cintica del proceso de obtencin de la penicilina. Mientras que el metabolismo primario es generalmente similar en todas las clulas, el metabolismo secundario presenta claras diferencias entre un organismo y otro. Las caractersticas reconocidas del metabolismo secundario son: 1. Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos. 2. Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la reproduccin. 3. La formacin de metabolitos secundarios es extremadamente dependiente de las condiciones de crecimiento, especialmente de la composicin del medio. Con frecuencia, se produce la represin de la formacin del metabolito secundario. 4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de estructuras estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una sola cepa de una especia 88 MICROBIOLOGIA 89. del Streptomyces produce 32 antibiticos distintos pero relacionados, del tipo antraciclina. 5. Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de metabolitos secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como estn al metabolismo primario, usualmente no se pueden superproducir de una manera tan espectacular. Trofofase e idiofase. En el metabolismo secundario, las dos fases distintas del metabolismo se denominan trofofase e idiofase. La trofofase es la fase de crecimiento (el prefijo trofos, significa "crecimiento") mientras que la fase de produccin de metabolitos es la idiofase. Si estamos tratando con un metabolito secundario debemos asegurar que durante la trofofase se proporcionen las condiciones apropiadas para un excelente crecimiento y que las condiciones se alteren adecuadamente y en el momento oportuno para que la formacin del producto sea excelente. En el metabolismo secundario, la produccin en cuestin puede no derivarse del sustrato primario del crecimiento, sino a partir de un producto que l mismo form a partir del sustrato primario del crecimiento. Por tanto, el metabolito secundario se produce, generalmente, a partir de varios productos intermedios que se acumulan, bien en el medio de cultivo o bien en las clulas, durante el metabolismo primario. Una caracterstica de los metabolitos secundarios es que las enzimas implicadas en la produccin del metabolito

secundario estn reguladas separadamente de las enzimas del metabolismo primario. En algunos casos se han identificado inductores especficos de la produccin de metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un inductor especfico de la produccin de estreptomicina, un compuesto denominado Factor A. 89 MICROBIOLOGIA 90. Relacin entre el metabolismo primario y el secundario. La mayora de los metabolitos secundarios son molculas orgnicas complejas que para su formacin requieren un gran nmero de reacciones enzimticas especficas. Se sabe, por ejemplo, que en la sntesis del antibitico tetraciclina estn implicados al menos 72 pasos enzimticos separados y ms de 25 en la sntesis de la eritromicina, y que ninguna de estas reacciones tiene lugar durante el metabolismo primario. Sin embargo, las vas metablicas de estos metabolitos secundarios arrancan del metabolismo primario porque los materiales de partida para el metabolismo secundario vienen de las vas biosintticas principales. 90 MICROBIOLOGIA 91. Muchos metabolitos secundarios estructuralmente complejos, se originan a partir de precursores estructuralmente muy similares. 5.5. Control del crecimiento microbiano en alimentos La esterilizacin elimina completamente todos los microorganismos, incluidos los virus. La desinfeccin (higienizacin) reduce el nmero de patgenos hasta un nivel aceptable. La descontaminacin hace que un instrumento o superficie que haba sido contaminado previamente vuelva a ser estril. La antisepsia trata los tejidos vivos para destruir o inhibir el crecimiento microbiano. La muerte microbiana tiene lugar cuando una clula no puede dividirse para dar lugar a nuevas clulas. De la misma manera que el crecimiento microbiano la muerte microbiana se define con respecto a toda la poblacin, no en relacin a la muerte de las clulas individuales. 5.5.1. Control qumico 5.5.1.1. Actividad antimicrobiana Los agentes qumicos que matan los microorganismos se denominan germicidas. Los germicidas que se utilizan para tratar objetos inanimados se llaman desinfectantes. Los germicidas que se aplican sobre tejidos vivos se denominan antispticos. Los germiostticos son agentes qumicos que inhiben el crecimiento bacteriano. La seleccin de un germicida En la seleccin de un germicida, hay que considerar si daar el tejido o el objeto que se va a tratar, si lograr controlar el microorganismo deseado y si el propsito del tratamiento es controlar o eliminar todos los microorganismos. Los germicidas se clasifican, de acuerdo con su actividad, en germicidas de alta actividad, baja actividad y actividad intermedia. La eleccin de un germicida depende de la presencia de otras sustancias, como por ejemplo la sangre o las heces, porque estos materiales poseen protenas protectoras. El coste puede ser otro factor a considerar. 91 MICROBIOLOGIA 92. Evaluacin de los germicidas Los germicidas se evalan comparando su actividad frente al fenol. El coeficiente de fenol es la relacin que existe entre la dilucin mas alta del fenol que mata un microorganismo en 10 minutos, dividida por la dilucin ms alta del germicida que produce el mismo efecto. La actividad de un germicida frente a un microorganismo especfico se determina mediante el mtodo del disco de papel o el test de dilucin. La presencia y el tamao de un halo de inhibicin del crecimiento bacteriano, alrededor del disco impregnado con el germicida, indicar la actividad del mismo. En el test de dilucin, se inocula un organismo control en las soluciones seriadas del germicida; a continuacin, se incuban los tobos. La actividad del germicida viene indicada por la dilucin ms alta del germicida, que permanece transparente despus del

periodo de incubacin. Los tipos de germicidas y sus mecanismos de accin El fenol es un benceno con un grupo hidroxilo. Los compuestos fenlicos tienen la misma estructura y otros grupos adicionales; todos ellos actan desnaturalizando las protenas. Los compuestos fenlicos tambin actan Sobre los lpidos. El hexaclorofeno es un compuesto fenlico que ha sido reemplazado por la clorhexidina, menos txica para la especie humana. Los alcoholes son compuestos con un grupo hidroxilo. Dicho compuestos matan los microorganismos porque desnaturalizan las protenas y desorganizan los lpidos de sus membranas plasmticas. No actan sobre las endosporal. El etanol y el isopropanol son utilizados como desinfectantes y antispticos clnicos. Los halgenos son agentes oxidantes. Estos compuestos inactivan las enzimas mediante la oxidacin de ciertos grupos funcionales. El iodo es un antisptico y el cloro un desinfectante. El perxido de hidrgeno no es un halgeno pero acta por el mismo mecanismo de accin. Se utiliza como antisptico dbil para la limpieza de heridas y para desinfectar material mdico y lentes de contacto. 92 MICROBIOLOGIA 93. Las sales de los metales pesados reaccionan con los grupos sulfhidrilo de las protenas y "envenenan" las enzimas; por lo tanto, matan los microorganismos. El Mertiolato y el Mercurocromo, compuestos orgnicos que contienen mercurio, son antispticos utilizados en los tratamientos de la piel y las mucosas. Los surfactantes son compuestos que presentan en sus molculas una parte hidroflica y otra parte hidrofbica; estos agentes penetran a travs de las sustancias oleosas suspendidas en agua y dan lugar a emulsiones. Los surfactantes no matan los microorganismos pero facilitan su eliminacin mediante el lavado con agua. Las sales de amonio cuaternario son poderosos agentes germicidas de accin surfactante. Son compuestos catinicos que matan todo tipo de microorganismos celulares y tambin los virus que tienen membranas; para el tratamiento de bacterias Gram negativas se necesitan mayores concentraciones de estos detergentes. Los agentes aninicos son desinfectantes de tipo medio que se utilizan generalmente para la desinfeccin de las mesas de trabajo, en los laboratorios de microbiologa. Los agentes alquilantes actan aadiendo pequeas cadenas de tomos de carbono a las enzimas, que como consecuencia quedan inactivadas, lo que ocasiona la muerte de las clulas. El formaldehdo, la formalina y el glutaraldehdo son algunos de estos compuestos. El xido de etileno es un compuesto gaseoso que se utiliza como agente esterilizante para el tratamiento de material termosesible y objetos voluminosos que no pueden ser esterilizados mediante otros sistemas. Sin embargo, es un compuesto muy txico para la especie humana. Los conservantes qumicos se utilizan de forma rutinaria. Por ejemplo, el propionato clcico se utiliza para conservar el pan, que de este modo puede durar casi indefinidamente. 5.5.2. Control biolgico 5.5.2.1. Antimicrobianos naturales La temperatura es el factor medioambiental que ms a menudo se utiliza para conservar los alimentos. El enlatado es el mtodo ms antiguo. Dos factores: el tiempo y la 93 MICROBIOLOGIA 94. temperatura, determinan la efectividad del tratamiento en los alimentos enlatados. La refrigeracin (alrededor de 5 0C) suele ser suficiente para detener el crecimiento de la mayora de los microorganismos. Sin embargo, los microorganismos psierfilos pueden crecer a dicha temperatura. La ventaja del calor es que penetra en los objetos y, por tanto, puede matar todos los microorganismos (algunos tratamientos solamente actan sobre las superficies

de los objetos). Se puede emplear calor seco (flameado directo y horno de aire caliente) o hmedo (ebullicin y esterilizacin mediante autoclave). El calor mata porque desnaturaliza las protenas. La baja temperatura es un tratamiento microbisostatico; no esteriliza. El choque fro, enfriamiento repentino a 50C, puede matar a la mayora de las clulas de un cultivo que se encuentre en crecimiento activo. La pasteurizacin es un tratamiento por calor que controla los microorganismos, pero no es un mtodo de esterilizacin; produce unos daos mnimos sobre el alimento tratado. La congelacin mata a la mayora de las bacterias, pero las supervivientes permanecen vivas durante largos perodos de tiempo en un estado congelado. La congelacin rpida es un sistema para conservar los cultivos bacterianos Existen dos formas de radiacin que matan las bacterias; la luz ultravioleta (UV) y la radiacin ionizante (rayos X y rayos gamma). La luz UV mata los microorganismos mientras porque que la radiacin ionizante los destruye porque hace que los tomos expulsen electrones. Solamente se esterilizan las superficies de los objetos. La filtracin no mata los microorganismos simplemente los elimina de un material. No es un mtodo de esterilizacin propiamente dicho, porque los virus pueden pasar a travs de los poros del filtro. La desecacin es la eliminacin del agua mediante evaporacion o sublimacin (eliminacin del agua congelada mediante vacio. La desecacin no esteriliza, pero ayuda a controlar los microorganismos porque elimina un nutriente esencial, el agua. El incremento de la presin osmtica, mediante la adicin de sal o azucar, se utiliza para conservar alimentos. 94 MICROBIOLOGIA 95. La desecacin y la salazn han sido mtodos utilizados durante siglos para conservar la carne, el pescado y las frutas. Ambos mtodos llevan consigo la eliminacin del agua, que es esencial para la supervivencia microbiana. Los valores de pH bajos ayudan a conservar los alimentos porque detienen el crecimiento de muchos microorganismos. La adicin de vinagre a los alimentos es un mtodo para disminuir el pH. 95 MICROBIOLOGIA