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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS DA SADE DEPARTAMENTO DE ANLISES CLNICAS DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA CLNICA

RELATRIO DE MICROBIOLOGIA Identificao de bactria desconhecida

ALUNA: Adriana Kleist Clark Nunes

Florianpolis, 8 de junho de 2008.

ETAPAS DE IDENTIFICAO: 1. Bactria em meio Casoy A bactria recebida apresentava-se semeada em meio Casoy. Notou-se que a bactria apresentava consistncia bastante mucide. 2. Gram Para a realizao do Gram, foi feito um inculo denso a partir das colnias da bactria e foi espalhada uma alada do mesmo na lmina, deixando a mesma secar na estufa. Aps a secagem da lmina, esta foi fixada na chama e corada com Gram I, II, III e IV. A lmina corada e seca foi visualizada em microscpio por imerso. Com a realizao do Gram, observou-se a presena de pequenos bacilos Gram negativos.
Gram BGN Seleo dos meios de isolamento: Mac Conkey

3. Semeadura em gar mac Conkey A bactria desconhecida foi ento semeada em gar Mac Conkey pelo mtodo de esgotamento, a partir de um inculo denso e a placa foi incubada a 37oC por 24h. Aps incubao, as bactrias desconhecidas apresentaram colnias bem mucides e bastantes rosadas, portanto, pde-se notar que era uma bactria lactose positiva, ou seja, consome a lactose presente no meio.

Agar Mac Conkey BGN

Lactose +

4. Prova da oxidase Em seguida, foi feita a prova da oxidase, onde a bactria apresentou oxidase negativa. Portanto, desconfiou-se de uma enterobactria, mas para a confirmao foi realizada a prova de OF de glicose. 5. OF de glicose Pingaram-se gotas do inculo nos tubos de OF e em um dos tubos acrescentou-se leo mineral, ambos foram incubados 37 oC por 24h. Aps o tempo de incubao, tanto o tubo contendo leo quanto o tubo sem leo do teste de OF de glicose passaram de verde para amarelo, ou seja, a bactria consumiu glicose em aerobiose e anaerobiose. Concluiuse, ento, que a bactria fermentadora, pois a prova de OF foi negativa.

Lactose +

E.coli Citrobacter Enterobacter Klebsiella

6. Triagem em IAL A bactria desconhecida foi semeada em IAL a partir de uma colnia utilizando o fio bacteriolgico. O IAL foi realizado em duplicata para no gerar dvidas quanto ao resultado. Esse permite a triagem e a confirmao dos testes de identificao, onde observou-se: Indol Sacarose + Lisina + Glicose + Uria Gs + H2S LTD Motilidade - pouca 7. Indol, VM, VP e Citrato Foi feita a prova de indol, VM e VP em tubo a partir de um inculo denso, onde se pingou 2 gotas em cada tubo, em seguida os tubos foram incubados a 37 oC por 24h. Aps incubao, adicionou-se ao tubo de indol 5 gotas (pela parede do tubo) do reativo de Kovacs, o reativo ficou na superfcie e no formou um anel cor de rosa. Ao tubo VM adicionou-se 5 gotas do indicador pela parede do tubo e a colorao ficou amarelada/acastanhada. Ao tubo do teste VP adicionou-se 0,6mL de Barrit I e 0,2mL de Barrit II e agitou-se vigorosamente o tubo por 3 minutos, a colorao formada foi vermelha. Ao gar citrato fez-se uma estria na superfcie inclinada do tubo e aps incubao a 37 oC por 24h notou-se alterao da cor da superfcie do gar de verde para azul. As provas de Indol, VM, VP e Citrato auxiliaram para excluir a possibilidade da bactria ser uma E. coli ou uma Citrobacter. Portanto, a bactria poderia ser do gnero Klebsiella ou Enterobacter segundo as provas, pois o resultado foi: Indol VM VP + Citrato+
I + +/VM + + VP + + citrato + + +

E.coli

Citrobacter Klebsiela Enterobacter

8. Prova da Ornitina Para a confirmao do Gnero da bactria desconhecida foi feito o teste da Ornitina. importante ressaltar que pelas caractersticas mucides das colnias, pela sua positividade lactose em gar Mac Conckey desconfiou-se que a bactria era do gnero Klebsiella. A Klebsiella apresenta colnias bastantes mucides e grandes com bordos esbranquiados (ver foto abaixo), muito parecida com a bactria desconhecida recebida para identificao. Porm, ao realizar a prova que diferencia os gneros de Klebsiella e Enterobacter o teste foi ornitina positivo contradizendo o que era esperado. Verificou-se na placa de gar Mac Conkey se havia contaminao da mesma ou no, mas as colnias apresentavam-se todas com as mesmas caractersticas, sem sinal de contaminao. Resolveu-se repetir a prova da ornitina, a mesma novamente foi positiva.

Foto: Klebsiella pneumoniae. Para a prova da ornitina pingou-se 2 gotas de inculo denso no tubo de controle negativo e no tubo teste, acrescentou-se leo mineral em ambos (aproximadamente 2 mm) e os tubos foram incubados a 37 oC por 24h. O tubo teste ficou da cor roxa, o que confirmou o consumo do aminocido, e o tubo controle ficou amarelado/esbranquiado, o que confirmou o consumo de glicose somente, j que esse tubo no contm o aminocido. Portando a reao foi positiva para ornitina, a positividade para ornitina ocorre quando o gnero da bactria Enterobacter, mas desconfia-se desse resultado. 9. Provas da uria e da lisina Para identificao da espcie foram feitas as provas da uria e da lisina. No tubo do teste de uria fez-se uma estria na superfcie inclinada do meio e incubou-se o tubo a 37oC por 24h. J para a prova da lisina pingou-se 2 gotas de inculo denso no tubo de controle negativo e no tubo teste, acrescentou-se leo mineral em ambos (aproximadamente 2 mm) e os tubos foram incubados a 37 oC por 24h. O tubo teste ficou da cor roxa, o que confirmou o consumo da lisina, e o tubo de controle ficou amarelado/esbranquiado, o que confirmou o consumo de glicose somente, j que esse tubo no contm o aminocido. Portanto, os testes resultaram em urease negativa (no houve alterao na cor do meio de amarelo para rosa, portanto no houve transformao da uria a amnia) e lisina positiva (o meio ficou roxo, portanto houve consumo do aminocido).

10.

Identificao da espcie e Laudo

Caso o teste de ornitina estivesse funcionando corretamente e no tivesse ocorrido suposta contaminao, o conjunto de provas e semeaduras realizadas possibilitaria a identificao da bactria, que seria a Enterobacter aerogenes. No entanto, o laudo no seria feito nesse momento, pois acredita-se que houve alguma contaminao - verificada a partir do teste da ornitina - pois as colnias mucides so caractersticas do gnero Klebsiella. O ideal seria refazer a semeadura em gar Mac Conkey a partir das colnias puras do meio Casoy e refazer os testes para no induzir a um falso diagnstico. Em funo do tempo no foi possvel refazer, pois notou-se a contaminao somente aps o teste da ornitina.

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