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Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza


2004 Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Material de uso libre con fines acadmicos


Prohibida su reproduccin total o parcial con fines de lucro

Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Q.F.B LUCA BAILN LIRA


Q.F.B. ROBERTO C. GONZLEZ MELNDEZ M. en C. ARMANDO CERVANTES SANDOVAL

MEDIOS DE CULTIVO

TCNICAS DE INOCULACIN

Ingraham J.L.2000. .

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEDIOS DE CULTIVO

Definicin

Medios bsicos Medios enriquecidos Pruebas bioqumicas


Medios selectivos diferenciales y de enriquecimiento

Medios especiales Por consistencia Por composicin Otras clasificaciones


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TCNICAS DE INOCULACIN

Tipos de asas

Medio lquido

Inoculacin en tubo Inoculacin en placa

Medio slido

Medio semislido

Estra

Vaciado en placa

Estra cruzada

Estra simple

Estra en Z

Inoculacin masiva

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FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS

REDUCCIN DE LA LECHE CON AZUL DE METILENO

PRUEBA DE FENILALANINA

PRUEBA DE CITRATO

PRUEBA DE OXIDACIN Y FERMENTACIN (O/F)

S I M

LICUEFACCIN DE GELATINA

PRUEBA DE UREA

T S I

LECHE CON TORNASOL

REACCIN RMVP

L I A

REDUCCIN DE NITRATOS
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M I O

Un medio de cultivo es cualquier sustancia que pueda ser usada para el cultivo de microorganismos.

Los medios sirven para uno de dos propsitos principales: Fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las caractersticas de cultivo. Facilitar algunas reacciones bioqumicas que luego puedan ser demostrables por observacin directa o bien indirectamente por la reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo as como las bioqumicas, dependen de la composicin del medio y de la naturaleza del cultivo que se estudie.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en: 1. Medios bsicos 2. Medios enriquecidos 3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento 4. Medios especiales
Koneman,1992

Placas de agar soya tripticasa inoculado con una bacteria que produce un pigmento amarillo, importante caracterstica diferencial para identificar bacilos gram negativos no fermentadores.

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MEN

MEDIOS DE CULTIVO

Son aquellos medios que solo contienen algn extracto de carne u otra infusin simple, peptona, sal y agua. El extracto o la infusin de carne proporcionan al organismo los aminocidos, vitaminas, sales, y pequeas cantidades de carbono, nitrgeno, hidrgeno y otros elementos. Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requerida para el mantenimiento de presiones osmticas constantes. El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines. Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, son lquidos; para el estudio de las caractersticas de las colonias es indispensable el uso de medios slidos. La solidificacin se consigue agregando agar, gelatina, albmina de suero o de huevo, a los otros ingredientes.

Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio slido que no se desintegra por los medios fsicos usados en el cultivo de la mayora de los microorganismos. Ejemplos
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Ejemplos de medios bsicos


1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Caldo nutritivo Agar nutritivo

Caldo de triptona y soya


Caldo de infusin de cerebro y corazn Agar de infusin de cerebro y corazn Caldo de infusin de corazn Agar y extracto de hgado Dextrosa de Saboraud
Koneman,1992

Agar EMB con crecimiento de E. coli, colonias de color verde birillante, las especies de Shigella no fermentan lactosa, por eso se ven translucidas.

Son aquellos medios bsicos que han sido complementados con lquidos corporales, vitaminas especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Ejemplos: Agar sangre Agar sangre chocolate Caldo de suero Agar con suero Suero de Loeffler con sangre Medios inclinados con suero Agar de Bordet Gengou Medio de Levinthal Agar de Mueller-Hinton Agar infusin de cerebro corazn Agar proteosa
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Hemlisis
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Los medios selectivos son usualmente medios de agar bsico, o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayora de las bacterias, permitiendo por lo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en los especimenes que contengan grandes nmeros de organismos indeseables. Los medios diferenciales son medios bsicos o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarn con algunos tipos especficos de bacterias en cierta forma observable. Los medios de enriquecimiento son por lo general medios lquidos enriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo que se crea un medio ambiente especialmente favorable para lmites ms bien estrechos de bacterias. Ejemplos

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MEDIOS DE CULTIVO

Ejemplos de medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento

Medio de Thayer Martin Agar con feniletanol Agar con sangre y bilis al 40% Agar con esculina y bilis Agar con sangre y telurito Medio de Tinsdale modificado Agar con Lowenstein Jensen en tubos inclinados Agar con citrato y desoxicolato Agar de sulfito de bismuto Caldo de selenito de sodio Agar XLD (xilosa, lactosa, desoxicolato)

Agar de Mac Conkey Agar Salmonella Shigella Agar con eosina y azul de metileno (EMB) Agar de bilis y rojo de violeta Agar dextrosa y tripticaseina Agar entrico Hektoen Agar S-110 Agar tergitol 7 Agar verde brillante Agar Vogel Jhonson Agar Baird-Parker Agar sal y manitol Agar sangre con azida

Son los medios que no pueden ser fcilmente agrupados bajo alguno de los anteriores grupos. La mayora de ellos sern medios empleados para comprobar una o ms a caractersticas bioqumicas, lo cual facilita la clasificacin, en este caso de las bacterias y hongos. Ejemplos: Pruebas bioqumicas

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MEDIOS DE CULTIVO

Koneman,1992

Koneman,1992

1.

Medios slidos. Son tiles para el crecimiento, aislamiento y obtencin de cultivos puros de bacterias.

2.

Medios semislidos. tiles para la observacin de metabolismo, as como la propagacin y obtencin de cultivos de bacterias anaerbicas.
Medios lquidos. Permiten la difusin del microorganismo.
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3.

Medios sintticos
Es aquel en el que se conoce la composicin qumica exacta de los ingredientes.
Hacer clic Clasificacin de reinos

Medio no sinttico

No se conoce de una manera definida la composicin precisa de alguna o de todas las sustancias nutritivas.
Koneman,1992

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MEDIOS DE CULTIVO

Por picadura en forma vertical


Cuando se inocula agar semislido en un tubo para pruebas de motilidad (aunque no sea la nica prueba que se valora) es importante que el asa de inoculacin sea retirada a lo largo del mismo camino que se us para atravesar inicialmente el medio. Solo se pica el agar con un movimiento uniforme y recto y para ello se utiliza el asa recta.
Documento electrnico FINALIZAR TCNICAS DE INOCULACIN Hacer clic

Difusin

Los medios lquidos se inoculan como en el mtodo ilustrado; el tubo debe inclinarse aproximadamente 30, con un asa de inoculacin se toca la superficie interna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medio forma un ngulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo. Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posicin erecta, el rea de inoculacin queda sumergida en el medio. Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el lquido salpique la tapa del tubo. S se inocula una batera con una misma especie de bacteria no hay necesidad de pasar por la llama entre cada inoculacin. Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batera con un solo inculo, el traspaso de azcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de que un tubo contenga una mezcla de carbohidratos. S se inocula una batera no es necesario observar en forma apreciable el inculo en cada uno de los tubos. Un solo inculo espeso tomado de cultivo contiene millones de bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un nmero apreciable de bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.

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TCNICAS DE INOCULACIN

Documento electrnico Hacer clic

Pico de flauta o cola de pescado (en tubo) a) Por puncin (picadura) b) Por estra c) Por puncin y estra Los picos de flauta (planos inclinados) de agar se inoculan de la siguiente forma: primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de inoculacin, esto cuando sea necesario ya que no todos los medios lo requieren, posteriormente ste se retira con un movimiento en S a travs del agar, con lo que se disemina el inculo. Se utiliza el asa recta.

b)

a)

c)

Documento electrnico TCNICAS DE INOCULACIN Hacer clic

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TCNICAS DE INOCULACIN

Hacer clic Documento electrnico

Estra simple

Estra en Z

Inoculacin masiva
Documento electrnico FINALIZAR TCNICAS DE INOCULACIN Hacer clic

MUESTRA POR SER CONTADA

9 ml DE SOLUCIN. SALINA

COLONIAS

AGAR FUNDIDO VERTIDO EN PLACA


Ingraham L.J. 2000, modificado

COLONIAS AISLADAS

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TCNICAS DE INOCULACIN

Hacer clic Vaciado en placa

Asa en arillo

Asa recta

Hisopo
FINALIZAR TCNICAS DE INOCULACIN

Documento electrnico Hacer clic

Medio de cultivo Fundamento Inoculacin

Condiciones de incubacin

Consistencia del medio

Aplicaciones
Reporte de resultados

Interpretacin Resultados
ATLAS FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

a) b) c) d) e)

Medio de cultivo: Caldo bsico rojo de fenol y carbohidratos. Composicin: Peptona Extracto de carne Cloruro de sodio Agua destilada Indicador de pH: Rojo de fenol cido: Color amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4) Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)

Tincin de Gram: Micrococcus sp

Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina, lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente.
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PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato especfico incorporado a un medio bsico. La fermentacin es un proceso metablico de oxido-reduccin que ocurre en un medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxgeno, un sustrato orgnico sirve como el aceptor final de hidrgeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriolgicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos cidos. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentacin un carbohidrato es degradado y descompuesto en dos molculas de carbono (triosas) que son nuevamente degradadas en un nmero de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Los productos finales varan con cada especie bacteriana y depende del sistema enzimtico existente en la especie y las condiciones del medio ambiente. El ms importante ciclo fermentativo de la degradacin de la glucosa es el ciclo de Embden - Meyerhof aun cuando ste tambin puede producirse por la derivacin de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos de carbono.

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PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

Utilizando un indicador de pH con un determinado carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio de color visible en el medio.

bacteria
Indicador de pH + CHO

gluclisis

H2CO2 (aldehdos) + cambio de color

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Lquido

Condiciones de incubacin
Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37 C

Inoculacin
Por difusin, inculo denso

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin
Positiva = Color amarillo (cido) Negativa = Color rosa rojizo (alcalina) Color anaranjado

Reporte de resultados
Koneman,1992 Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El aspecto amarillo alrededor de las colonias indica utilizacin de lactosa y sacarosa, por que se ha producido una caida suficiente del pH por debajo del punto decisivo del indicador rojo de fenol.

A = cido K = alcalino G = gas

Identificacin de Staphylococcus Hacer clic

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PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO
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NEGATIVO
PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

Microorganismos Fermentadores de Carbohidratos:


Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las Enterobacteriaceae. Fermentadores de glucosa y lactosa: Escherichia coli, Klebsiella y grupos

Ingraham L.J. 2000

Enterobacter.

de manitol: Staphylococcus aureus Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia alcalifaciens Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus sanguis Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes Fermentadores

Yersinia enterocolitica. American Museum of Natural History, 1998.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Microorganismos no Fermentadores de Carbohidratos:

No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patgenas como Salmonella y Shigella. No fermentadores de manitol: Staphylococcus

epidermidis

No fermentadores de salicina: Especies de

Corynebacterium No fermentadores de rafinosa: Otras especies de Aeromonas No fermentadores de inositol: P roteus morganii No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D
No fermentadores de sacarosa: Otras especies de

Escherichia coli vista en microscopio electrnico

Yersinia

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio un anin como nica fuente de carbono, y fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno. Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensacin de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimtico sin la intervencin de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo del citrato.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio: pH bsico: Citrato CO2 + cido frmico + 2 cido actico

pH cido: 2 Piruvato 2 Piruvato

acetato + CO2 + lactato acetona + 2CO2

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo: Citrato de Simmons Composicin: a) Sulfato de magnesio b) Monofosfato de amonio c) Fosfato dipotsico d) Citrato de sodio e) Cloruro de sodio f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6) Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Ingraham L.J. 2000

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Slido inclinado (pico de flauta)

Inoculacin
Se inocula como una estra nica en la superficie del pico de flauta.

Black, 1996 Pseudomona sp, (8100x)

Incubacin
Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37 C

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin
Hacer clic

Caractersticas de Corynebacterium diphteriae

Positivo : Crecimiento aunque no exista cambio de color. Crecimiento y el medio de color azul intenso en pico de flauta. Negativo : No se observa crecimiento y medio de color verde. Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, tambin se extrae nitrgeno del fosfato de amonio contenido en el medio, liberndose amoniaco. En ocasiones se detecta un crecimiento visible a lo largo de la lnea de siembra antes de la aparicin de color. Este crecimiento visible tambin indica resultado positivo.

Ingraham L.J. 2000

Reporte de resultados
Negativo Positivo (-) (+)

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO POSITIVO
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POSITIVO
PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

Microorganismos positivos
Especies de :

Microorganismos negativos

Salmonella Arizona Citrobacter Enterobacter Klebsiella Serratia licuefaciens Pseudomonas cepacia

Edwarsiella Yersinia enterocolitica Escherichia coli Shigella Yersinia pseudotuberculosis


Otras especies de

Moraxella Proteus morganii


Black J.G. 1996

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo : Gelatina nutritiva Composicin: a)Extracto de carne b)Peptona c) Gelatina d)Agua destilada
Streptococcus sp.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteoltico (gelatinasas) que licuan la gelatina. Las protenas que se producen naturalmente son demasiado grandes para entrar en una clula bacteriana; por lo tanto, para que una clula utilice las protenas, primero debe ser catabolizada en componentes ms pequeos. Las enzimas exonucleares de tipo proteltico, gelatinasas, son secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las protenas y esta capacidad ayuda a la identificacin bacteriana. gelatinasas polipptidos proteasas

Protena + H2O

gelatinasas
Polipptidos + H2O aminocidos individuales peptidasas

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Semislido
Black J.G. 1996

Inoculacin
Picadura en posicin vertical hasta una profundidad de 2 - 2.5 cm, inculo denso.

Colonias de Serratia marcescens en agar EMB, produciendo pigmento

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37 C

Condiciones de incubacin

Al termino de la incubacin se coloca el tubo en un refrigerador o bao de hielo durante dos horas para determinar si se ha producido o no la digestin de la gelatina (licuefaccin).
Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin
Positivo : Medio licuado (estado lquido) Negativo : Medio slido

Hacer clic Identificacin de Staphylococcus

El medio de gelatina nutritiva para puncin no es conveniente para las pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchas especies requieren una incubacin prolongada antes de que aparezcan muestras de licuefaccin. En los mtodos diagnsticos de rutina para identificar bacterias, la duracin de la incubacin deber alcanzar un perodo razonable.

Reporte de resultados
Positivo Negativo (+) (-)

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Microorganismos positivos

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis (lenta) Serratia liquefaciens Serratia marcescens Pseudomona aeruginosa (rpida) Especies de Flavobacterium

Microorganismos negativos

Listeria monocytogenes

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada Composicin:

1.

2.
3.

Leche descremada Agua destilada Indicador de pH: Tornasol cido : Color rojo (pH = 4.5) Alcalino : Color azul ( pH = 8.3) Medio no inoculado: Azul purpreo (pH = 6. 8)

Clostridium perfringens, tincin de Gram.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Permite diferenciar organismos sobre la base de sus mltiples reacciones metablicas en un medio lcteo como: fermentacin de lactosa, caselisis, y coagulacin de la casena. El tornasol incorporado a la leche es un indicador de pH y de oxidacin-reduccin que hace que el medio pueda indicar diversas funciones metablicas. La leche contiene lactosa, casena, lactoalbmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar una o varias propiedades metablicas en la leche tornasolada ayudando as a la identificacin bacteriana:

1. 2. 3. 4. 5.

Fermentacin de lactosa Reduccin del tornasol Formacin de cogulo Peptonizacin (digestin) Formacin de gas

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fermentacin de lactosa

Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente cido lctico, con una condicin cida indicada por el cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el cido butrico es el producto final. Ciertas bacterias que forman lcalis no fermentan lactosa, pero actan sobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la leche liberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que se manifiesta por un color prpura azulado. Lactosa glucosa + galactosa cido lctico cido butrico CO2 + H2

Glucosa

cido pirvico

Reduccin del tornasol

El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidacin reduccin; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.
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PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

Formacin de cogulo

Las enzimas proteolticas provocan la hidrlisis de las protenas de la leche lo que resulta en su coagulacin. La principal enzima responsable de la formacin de cogulo es la renina. La formacin del cogulo es causada por la precipitacin de la casena, por la formacin de cidos o por la conversin de la casena en paracasena por la enzima renina. La casena es una fosfoprotena compleja y es la protena ms importante de la leche.

Formacin de un cogulo cido La precipitacin de la casena provocada por los cidos orgnicos a partir de lactosa en condiciones cidas produce un cogulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes del tubo. caseasa Lactosa cido Lctico + casenato de Ca caseingeno (pp)

Otra forma de cogulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversin de la casena en paracasena por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en la leche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de casena soluble en una paracasena insoluble que es el cuajo o requesn. renina Casena paracasena (pp) Ca

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Peptonizacin (digestin)
La hidrlisis de la casena por la actividad enzimtica produce una conversin final del precipitado caseingeno en un lquido claro; el proceso se denomina peptonizacin y se manifiesta por una aclaracin acuosa del medio causada por una digestin del precipitado (cogulo) y las protenas de la leche por las enzimas proteolticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce una peptonizacin cuando la bacteria que se desarrolla en la leche tornasolada contiene la enzima proteoltica caseinasa.

Formacin de gas
Los gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la fermentacin de la lactosa.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio Inoculacin

Lquido

Difusin

Condiciones de incubacin

Tiempo : 24 - 48 horas
Ingraham L.J. 2000

Temperatura : 35 - 37 C

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Hacer clic

Rojo rosado: cido; fermentacin de lactosa Azul purpreo: No fermentacin de lactosa; sin cambio del indicador de pH.

Diferencicin de especies de Streptococcus

Azul : Alcalino; Ausencia fermentacin de lactosa. El organismo ataca las sustancias nitrogenadas que se encuentran en el medio. Blanco : Reduccin del tornasol a una leucobase.
Formacin de cogulo : Coagulacin de la protena de la leche. Aclaracin del medio : Digestin; se ha ingerido la protena de la leche.

Gas : Produccin de burbujas en la campana de Durham.

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PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

En la tabla de resultados solo se escribirn las letras que aparecen dentro del parntesis.

Rojo rosado (A) Azul purpreo (SC) Azul ( K) Blanco (Red) Cogulo (C) Digestin (D) Gas (G)

Encarta 2002

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

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FERMENTACIN DE LACTOSA

PRUEBAS BIOQUMICAS

DIGESTIN

NO FERMENTACIN DE LACTOSA

MEN

COGULO

REDUCCIN DE TORNASOL

Ayuda a la diferenciacin de especies sobre todo del gnero

Clostridium.

Sin crecimiento:

Clostridium choleraerium Clostridium difficile Clostridium putrefaciens Clostridium tetanomorphum Streptococcus equinus

Con crecimiento:

Streptococcus bovis
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Caractersticas de especies de Bacillus y Clostridium Hacer clic

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Medio de leche Composicin:

1.

2.
3.

Leche descremada deshidratada Agua destilada Indicador : Azul de metileno Incoloro : Estado reducido Azul : Estado oxidado ; medio no inoculado (pH= 6.4)

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Diferenca organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un medio con leche. El sistema citocromo oxidasa activa la oxidacin del citocromo reducido por el oxgeno molecular que a su vez acta como un aceptor de electrones en el periodo terminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aerbicas el oxgeno es el aceptor final del hidrgeno, produciendo agua o perxido de hidrgeno segn la especie bacteriana y su sistema enzimtico. Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores de electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones, donde actan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorante sinttico reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la forma oxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro, hidrogenado, leuco-azul de metileno.

FINALIZAR
Custom Medical Stock, 1999.

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

El azul de metileno, sal bsica, es un indicador de la oxidacin reduccin que cuando es incorporado a un medio, indica los cambios en el potencial de oxidacin-reduccin producidos por un organismo. Algunos organismos, utilizando el oxgeno disuelto en un medio, son capaces de reducir el potencial redox, la reduccin es catalizada por la enzima reductasa, enzima respiratoria vinculada con la oxidacin celular.
Diferenciacin de especies de Streptococcus
Hacer clic FINALIZAR

(CH3)2N

Azul de metileno (estado oxidado color azul) Reductasa


H N

N(CH3)2

(CH3)2N S Leuco-azul de metileno (estado reducido, incoloro)

N(CH3)2

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Lquido

Black J.G. 1996

Inoculacin
Difusin, inculo denso

Enterococcus feacalis, fisin binaria.

Condiciones de incubacin
Tiempo: 18 - 24 horas

Black J.G. 1996

Beta hemlisis

Temperatura : 35- 37 C
PRUEBAS BIOQUMICAS MEN

FINALIZAR

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin
Positiva : Incoloro; reduccin

Negativa : Azul; no hay reduccin

Ingraham L.J. 2000

Streptococcus sp,
tincin de Gram

Reporte de resultados
R = Reduccin (-) = Negativo, sin cambio de color

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Hacer clic Caractersticas bioqumicas de especies de Streptococcus

Esta capacidad enzimtica se utiliza fundamentalmente para diferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) de otros miembros del gnero Streptococcus.

Microorganismos positivos

Enterococos (Streptococcus del grupo D)

Microorganismos negativos

Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos.


La oxidacin del azul de metileno reducido produce perxido de hidrgeno como su producto final. La mayora de las bacterias contienen la enzima catalasa, que degrada el perxido de hidrgeno, dado que su acumulacin es txica. Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tanto mueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo : Medio bsico de Hugh Leifson, medio OF Composicin:


1.

2.
3. 4. 5. 6. 7.

Peptona Cloruro de sodio Fosfato de potasio Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa ) Agar Agua destilada Indicador de pH : Azul de bromotimol cido : Color amarillo (pH = 6) Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)

Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con sello de parafina.

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Semislido (tambin permite la observacin de movilidad).

Inoculacin
Picadura, inculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.

Condiciones de incubacin
Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37 C

Aislamiento de bacterias en heces Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Amarillo: cido Burbujas : Gas Verde : alcalino

Incubacin

Oxidativo No fermentador

Fermentador

No oxidativo No fermentador

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

METABOLISMO

TUBO CON REACCIN

TUBO SIN SELLO

TUBO CON SELLO

Oxidacin (O) Fermentacin (F) Fermentacin (F) Ni fermentacin ni oxidacin (-) Fermentacin y oxidacin (O+F)

Abierto Cubierto Cubierto Ninguno Ambos

Amarillo (A) Amarillo (A) Amarillo (AG) Azul o verde (-) Amarillo (A AG)

Verde (-) Amarillo (A) Amarillo (AG) Verde (-) Amarillo (A AG)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

OXIDATIVO NO FERMENTADOR

FERMENTADOR
FINALIZAR

NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR
PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

1.Fundamentalmente para diferenciar gneros intestinales no entricos, gram negativos de las Enterobacterias. 2. Ayuda a la diferenciacin entre los gneros de la familia Micrococcaceae.

Micrococcus oxida glucosa Staphylococcus fermentan glucosa.


3. Ayuda a Enterobacterias la identificacin de

Fermentadoras de glucosa: Escherichia

coli

Oxidativas de glucosa: Pseudomonas

aeruginosa No sacaroltico: Especies de Moraxella

Caractersticas de la Familia Micrococcacea Hacer clic FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN
World Book, 1991

Medio de cultivo

Condiciones de incubacin

Fundamento

Inoculacin

Consistencia del medio

Interpretacin

Reporte de resultados

Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

Aplicaciones

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen Composicin:

a) Peptona b) Cloruro de sodio c) Fosfato monopotsico d) Glucosa e) Urea f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH : Rojo de fenol cido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los compuestos orgnicos.

H2 N

NH3 (NH4)2CO2 H2 N
urea

C=O

2 HOH

CO2 + H2O + 2
Carbonato de amonio

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Slido en pico de flauta (cola de pescado)
Koneman,1992

Inoculacin
Estra en pico de flauta (no hacer puncin).

Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas en agar sangre de colonias no pigmentadas, mucoides y relativamente grandes de Klebsiella, en comparacin de las colonias amarillas ms pequeas de S. aureus.

Condiciones de incubacin
Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37 C
Efecto swarming producido por Proteus vulgaris

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

NEGATIVO

POSITIVO

POSITIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin

Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta


Negativo: Amarillo

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo (-)


Black J.G. 1996

OBSERVACIONES En muchas especies, la reaccin positiva de ureasa se detecta primero por un cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojo porque la accin alcalina, resultado de la degradacin de pequeas cantidades de urea, es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilacin oxidativa de los aminocidos en la parte del medio expuesta al aire.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Se usa para diferenciar los organismos Proteus rpidamente ureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otros gneros pueden ser positivos retardados.

Klebsiella sp (+) Escherichia coli (-) Proteus sp (+ rpido) Providencia sp (-)


Koneman,1992

Placa de agar sangre que indica un patrn de swarming como ondas de una cepa mvil de Proteus.

Pruebas para la identificacin de Enterobacterias Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretacin Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculacin

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubacin

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP) Composicin:


1. 2.

3.
4. 5.

Polipeptona Dextrosa Fosfato de potasio Agua destilada Indicador: rojo de metilo pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo. cido: rojo (pH = 4.4) Alcalino: amarillo (pH = 6)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales cidos de la fermentacin de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la produccin de cido (determinacin de pH). Las bacterias que principalmente siguen la va de fermentacin de cidos mixtos a menudo producen suficiente cido para mantener un pH menor de 4.4. La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentracin de iones hidrgeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen cidos estables manteniendo una alta concentracin de iones hidrgeno hasta alcanzar cierta concentracin y entonces cesa toda actividad. Los organismos RM negativo tambin producen cidos pero tienen una menor concentracin de iones hidrgeno porque hay una reversin hacia la neutralidad debida a la nueva degradacin de los cidos orgnicos en carbonatos. La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubacin suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarn por lo menos 2 das, lo que permite que todos los organismos con baja proporcin gaseosa muestren su lmite en la concentracin de iones hidrgeno.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.

La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una va alternativa del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta va producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

El primer reactivo agregado a una alcuota incubada es el catalizador alfa-naftol porque este acta como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reaccin sin prdida de su especificidad. El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la absorcin de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionar con la peptona dando un color rosado salmn y con el agregado posterior de alfa-naftol no habr alteracin del color. El hidrxido de potasio acta como agente oxidante para apresurar la oxidacin de la acetoina en diacetilo. El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reaccin entre el diacetilo y el ncleo guanina presente en la peptona, en condiciones alcalinas. Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y el alfa-naftol, se produce casi instantneamente un color rojo en la superficie del medio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetona que se encuentra en el cultivo de prueba.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

OH

CH3

CH3

KOH
+ C O C O

O2 OXIDADO
CHOH C

Alfa-naftol (catalizador)
CH2 CH2

Acetona

Diacetilo
+ NH2

Color rojo rosado

condensacin
C NH NH

Ncleo de guanidina

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio

Lquido

Inoculacin

Difusin

Condiciones de incubacin
Salmonella typhi, tincin de flagelos, observada en microscpio electrnico

Tiempo : 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37 C

Coprocultivo
Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Reactivos adicionales para Rojo de Metilo

Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado. Interpretar el resultado del color inmediatamente. Conservacin: Guardar el reactivo en refrigeracin (4 C) mientras no se usa. Reactivos adicionales para Voges Proskauer Alfa naftol al 5%, intensificador del color Hidrxido de potasio 40%, agente oxidante

Agregar directamente los reactivos al tubo despus de la incubacin en el siguiente orden : 1) 0.6 ml de alfa naftol 2) 0.2 ml de KOH 3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la interpretacin.
PRECAUCIONES El orden de adicin de los reactivos es importante, ya que la inversin de incorporacin dar como resultado un dbil positivo o falso negativo. No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reaccin VP dbilmente positiva. FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

MEDIO NO INOCULADO

POSITIVO

NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Reaccin de rojo de metilo


No debe intentarse interpretar un resultado con el rojo de metilo despus de menos de 48 horas de incubacin. Positiva: Rojo en la superficie del medio (pH = 4.4) Algunas bacterias pueden producir menores cantidades de cido a partir del sustrato por ello es posible que aparezca un color naranja. Esto indica una prueba positiva. Negativo : Amarillo (pH = 6) naranja

Reaccin de VogesProskauer
Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetona) Negativo : Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero an as la reaccin es negativa.

Reporte de resultados
(ambas reacciones)
Positivo (+) Negativo (-)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Prueba de rojo de metilo


Microorganismos positivos

Pruebade Voges Proskauer


Microorganismos positivos

Escherichia coli Especies de Yersinia

Klebsiella pneunoniae Yersinia enterocolitica

Microorganismos negativos

Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Klebsiella

Microorganismos negativos

Escherichia coli K. ozaenae

Urocultivo Hacer clic


Encarta, 2002

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretacin Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculacin

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubacin

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo: Caldo con nitrato Composicin:


Extracto de carne Peptona Nitrato de potasio Agar Agua destilada pH inicial = 7.0

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o en nitrgeno libre. La reduccin de nitrato en nitrito y en gas nitrgeno tiene lugar generalmente en condiciones anaerbias, en las cuales un organismo obtiene su oxgeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor de hidrgeno. Esta respiracin anaerobica es un proceso de oxidacin por el cual las sustancias inorgnicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratos de carbono proporcionan oxgeno para que sirva como aceptor de electrones para suministrar energa. Reduccin del nitrato en nitrito NO3 + 2 e + 2 H Nitrato Nitrato en nitrgeno molecular 2 NO3 + 10 e + 12 H+
+

NO2

+ H2O Nitrito N2 + 6 H2 O

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

La reduccin de nitrato en nitrito est indicada por la aparicin de color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reaccin de color resultante se debe a la formacin de un compuesto diazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina. El enlace del grupo azo N=N- da como resultado un compuesto coloreado por medio de una reaccin nitrosa. El colorante diazoico se forma por acoplamiento a travs del enlace azo de una amina aromtica con un compuesto de tipo fenlico por lo general en la posicin para de un grupo (OH) o amino. La reduccin de la sal diazica por el agente reductor polvo de zinc, en presencia del cido actico produce un compuesto coloreado, la arilhidracina.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

NH2

+ HNO2

SO2H

NH2

SO2H

NH2

cido sulfanilico (incoloro)

Alfa-naftilamina

P-sulfobenceno-azo-affanaftilamina (rojo)

Zn

CH2COOH
cido actico

(C6H3NHNH3) OSO3H
Arilhidracina

SO2H

NH2

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Hacer clic Caractersticas de Bacterias Gramnegativas no fermentadoras

Consistencia del medio


Lquido

Inoculacin

Difusin, inculo denso.

Condiciones de incubacin

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 C


Raramente es necesaria una incubacin prolongada de hasta 5 das. La mayora de los organismos capaces de reducir el nitrato, lo hacen dentro de las primeras 24 horas.

Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre, observese la produccin de H2S (colonias de color negro).

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

1. Alfa - naftilamina 0.05% 2. cido sulfanlico 0.8 %

Adicionar directamente al tubo de reaccin en el siguiente orden:

1. Alfa - naftilamina 1ml. 2. cido sulfanlico 1 ml.


Conservacin: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general se mantienen estables durante tres meses.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin

Se interpretan los resultados un minuto despus de adicionar los reactivos.


Positivo: intenso Rosado a rojo

Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)

Negativo: Amarillo
PRECAUCIONES Una prueba negativa indica que los nitratos, no han sido reducidos o que han sido reducidos a otros productos, como amoniaco, nitrgeno molecular, oxido ntrico u xido nitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos de prueba detectan solo nitritos, este ltimo proceso llevara a una lectura falso negativa. Por ende es necesario agregar una pequea cantidad de polvo de zinc a todas las reacciones negativas. Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la aparicin de color rojo despus del agregado de zinc indica una reaccin positiva.
Koneman,1992

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Aplicaciones
Ayuda a la identificacin de Enterobacterias que por lo general son positivas. Todas las Enterobacterias, con excepcin de ciertos tipos de Enterobacter agglomerans y especies de Erwinia, reducen nitratos a nitritos.

MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretacin Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculacin

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubacin

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo: medio de fenilalanina Composicin:


1. 2.

3.
4. 5. 6. 7.

D-L-fenilalanina Extracto de levadura Cloruro de sodio Fosfato de sodio Agar Agua destilada pH inicial = 7.3

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determina la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina en cido fenilpirvico por su actividad enzimtica, con la consiguiente acidez resultante. El aminocido aromtico fenilalanina sufre una desaminacin oxidativa catalizada por un aminocido oxidasa para producir el cido cetnico.

La desaminacin oxidativa da como resultado la extraccin del grupo amino del aminocido para formar un doble enlace alfacetocido y libre de amoniaco. Este es un proceso en dos etapas: La extraccin del hidrgeno dando un aminocido y un hidrgeno, se combina con el oxgeno para formar agua. El aminocido es hidrolizado en un cetocido.

1.

2.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

CH2

CH

COOH

- 2H NH2 + 1/2 O FLAVOPROTENA

FENILALANINA CH2 C COOH

NH2 AMONIACO

CIDO FENILPIRVICO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuencia del agregado de cloruro frrico al 10% se debe a la formacin de un cetocido, el cido fenilpirvico. La reaccin positiva con este reactivo se debe a la formacin de una hidrazona. El cloruro frrico acta como agente quelante actuando con el cido fenilpirvico para formar un color verde. Cuando se expone al oxgeno atmosfrico un tubo de cultivo con fenilalanina despus del agregar el cloruro frrico aumenta la produccin y la intensidad de la reaccin positiva.
CH2 C COOH CH2 C COOH

N O + RNH

NHR

- NH2
Fenilhidrazona

Hidracina cido fenilpirvico

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Slido en pico de flauta

Reactivos adicionales
Cloruro frrico 10%

Inoculacin
Estra en pico de flauta, inculo denso.

Adicionar de 4-5 gotas a un tubo incubado


Hacer rotar suavemente el tubo para que el crecimiento se separe. Esperar de 1 a 5 minutos para leer la reaccin Guardar los reactivos en refrigeracin y colocarlos en frascos oscuros para evitar la descomposicin.
Caractersticas de Bacilos Gramnegativas oxidasa positivas
Hacer clic

Condiciones de incubacin

Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 C

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

NEGATIVO

MEDIO NO INOCULADO

POSITIVO

NEGATIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Interpretacin

Aplicaciones
Esta actividad enzimtica es caracterstica de todas las especies de Proteus y del grupo Providencia, y se usa para separar estos dos gneros de otros miembros de las Enterobacterias

Positiva: Verde claro a intenso en el pico de flauta. Negativo: Amarillo

Reporte de resultados

Positivo (+) Negativo(-)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretacin Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculacin

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubacin

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo: Medio SIM Composicin:

Extracto de carne Peptona Hierro peptonizado (Indicador de SH2) Tiosulfato de sodio (indicador de SH2) Agar Agua destilada pH = 7.3

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Prueba de cido sulfhdrico


La proteolisis de las protenas en aminocidos (aa.) individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen, produciendo el gas cido sulfhdrico (SH2). La peptona, cistena y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.

Primera etapa La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reaccin de reduccin que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiracin anaerbica donde el tomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidacin de los sustratos orgnicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo. Segunda etapa El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato frrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso. Bacteria (medio cido) SH2 + iones frricos + tiosulfato de sodio gas SH2

sulfuro ferroso (pp. negro)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolactico. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en ste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin del indol. El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indolprvico. La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido pirvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran produccin de energa. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminocidos empleando la energa que se encuentra para la reaccin anablica. La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentacin de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptfano estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la inhibe.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

La prueba de indol se basa en la formacin de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo de pdimetilaminobenzaldehdo (sustancia activa del reactivo de Kovacs).
COOH

NH2 N

Triptofanasa H2O Desaminacin

L - Triptfano

+
H3C N COOH

NH3

H Indol cido Pirvico Amoniaco

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Xileno
P-dimetilaminobenzaldehdo Color rojo

INDOL

PIRUVATO

NH3

TRIPTFANO
Triptofanasa

BACTERIAS
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Determina si un organismo es mvil o inmvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmviles.

Black J.G. 1996 Black J.G. 1996

Monotricas

Atricas

Las bacterias mviles pueden contener un solo flagelo o muchos; adems su localizacin vara con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo.
A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no mviles que parecen ser estables y raramente se revierten en formas mviles. Los organismos no mviles carecen de flagelos.

Black J.G. 1996

Black J.G. 1996

Lofotricas

Peritricas

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Medios para la deteccin de H2 S

Medios para la deteccin de movilidad


Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato-citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM

SIM MIO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Semislido en forma vertical

Consistencia del medio

Picadura en forma vertical


Salmonella typhimurium, tincin de Gram.

Inoculacin

Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura 35 - 37 C


Los cultivos que van a someterse a pruebas de indol debern ser incubados aerbicamente el descenso de la tensin de oxgeno disminuye la produccin de indol.

Condiciones de incubacin

Klebsiella pneumoniae en sedimento, tincin de Gram

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Reactivo de Kovacs
Composicin: Alcohol amlico p-dimetilaminobenzaldehdo HCl Adicionar 5 gotas directamente al tubo despus de la incubacin. Agitar suavemente Leer inmediatamente la reaccin
Coprocultivo FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

a)

b)
c)

MEN

Hacer clic

H2S NEGATIVO

H2S POSITIVO

MEDIO SIN INOCULAR

INDOL NEGATIVO

INDOL POSITIVO GAS MOVILIDAD


MEN

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Positivo: Ennegrecimiento del medio Negativo: Sin ennegrecimiento

cido sulfhdrico

Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol.
La reaccin positiva despus de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
Black J.G. 1996

Indol

Streptococcus pneumoniae: las cpsulas se observan de color blanco.

Positiva. Los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra.

Movilidad

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Bacteria

Salmonella thypi Salmonella sp. E. coli Klebsiella Enterobacter Citrobacter Shigella

Produccin Prouduccin de H2S de indol +o+o+

Movilidad + + +o-

+ +oFINALIZAR

+o+oPRUEBAS BIOQUMICAS

+ + +oMEN

Medio de cultivo

Inoculacin

Consistencia del medio

Reporte de resultados

Interpretacin
Condiciones de incubacin

Resultados

Fundamento
ATLAS FINALIZAR

Aplicaciones
PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo: Agar hierro triple azcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)

1. 2. 3.

4.
5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

Composicin: Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteasa Lactosa Dextrosa Sulfato ferroso Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio Agar Agua destilada Indicador : Rojo de fenol cido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)

Koneman,1992

Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento de 24 horas de colonias fermentadoras de lactosa rojas.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

No fermentador
No fermentacin pH = 7.4

O2

Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina

No fermentador de lactosa

Dextrosa
cidos mixtos Dextrosa cidos mixtos Fermentador de lactosa (sacarosa)
Dextrosa + lactosa cidos mixtos

O2

Pico de flauta cido/profundidad cida Reaccin inicial

O2

Pico de flauta alcalino/profundidad cida Reaccin retardada

O2

Pico de flauta cido/profundidad cida

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Slido en pico de flauta

Inoculacin
Picadura y estra en pico de flauta

Condiciones de incubacin
Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35 - 37 C

Urocultivo Hacer clic

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradacin aerbica de glucosa Amarillo en capa profunda: cido; degradacin anaerbica de la glucosa 2. Amarillo en pico: cido Amarillo en capa profunda: cido

3. Rojo en pico de flauta: alcalino Sin cambio de color en capa profunda: alcalina. Produccin de H2S: precipitado negro Produccin de gases: Produccin de burbujas, descomposicin del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo dejando un espacio libre.
OBSERVACIONES Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S es que existe en la capa profunda una condicin cida, aun cuando no se observe, y debe ser registrada como tal. Es esencial que se interprete la fermentacin al trmino de 18 24 horas de incubacin, ya que una interpretacin prematura o demorada dar formas de fermentacin no vlidas que llevarn a errores en el agrupamiento del gnero o especie.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

1. K / A (Fermentacin de glucosa solamente) 2. A / A (Fermentacin de glucosa y lactosa) 3. K / K (No fermentacin de glucosa y lactosa). Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrn. Primero la reaccin del pico de flauta seguida por la reaccin de la capa profunda, separadas por una barra. Reacciones de TSI Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentacin de hidratos de carbono. Caracterstico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas

aeruginosa.

Pico de flauta alcalino / profundidad cida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de Shigella.
Pico de flauta alcalino / profundidad cida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada; produccin de H2S. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus.

Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. Caracterstico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-

Enterobacter.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para la identificacin primaria de los miembros de las Enterobacterias.

Especie bacteriana
Enterobacter
Hafnia Klebsiella E. coli Shigella

Superficie inclinada
A
K A A K

Fondo
K
A A A A

Gas
++
+ ++ + -

H 2S
-

Salmonella thypi

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

S. parathypi

S. choleraesuis
Otras Salmonellas

K
K

A
A

+
+

+++

Citrobacter
Edwarsiella

K
K

A
A

+
+

+++
+++

Serratia
Proteus vulgaris

K
K

A
A

+++

P. mirabilis
P. morganii

K
K

A
A

+
-

+++
-

P. retgeri
Providencia

K
K
FINALIZAR

A
A

+oMEN

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo

Inoculacin

Consistencia del medio

Reporte de resultados

Interpretacin
Condiciones de incubacin

Resultados

Fundamento
ATLAS FINALIZAR

Aplicaciones
PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller


agar sangre.University of MissouriComposicin: Columbia,1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm Peptona Extracto de carne Piridoxal L-lisina Citrato de amonio Tiosulfato de sodio Glucosa Agua destilada Agar Indicador de pH: Prpura de bromocresol cido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color prpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color prpura intenso brillante (pH = 6.0)

Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en

1. 2.

3.
4. 5. 6. 7. 8. 9.

10.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. La descarboxilacin es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas son capaces de atacar a los aminocidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhdrido carbnico. La descomposicin de los aminocidos se produce anaerbicamente. El proceso de descarboxilacin es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima comn, el fosfato de piridoxal. El aminocido L-lisina sufre la descarboxilacin para dar cadaverina y CO2 por accin de la enzima especfica lisina-descarboxilasa. El aminocido L-arginina es catabolizado a travs de dos sistemas que pueden ocurrir simultnea o separadamente. Estos sistemas son de arginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Consistencia del medio


Slido en pico de flauta

Inoculacin
Por picadura y estra, inculo liviano
Koneman,1992

Condiciones de incubacin
Temperatura: 35 37 C Tiempo: 18 24 horas

Superficie de placa de agar EMB que ilustra el brillo verde producido por miembros de Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como Escherichia coli.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

K/K = azul de Prusia /azul de Prusia Desaminacin oxidativa / descarboxilacin K/A= azul de prusia / lila No desaminacin Produccin de H2S = Ennegrecimiento del medio Produccin de gas = Burbujas o levantamiento del medio del tubo.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

A = cido K = Alcalino N = Neutra R = Rojo ( desaminacin oxidativa)

Hacer clic Clasificacin y pruebas para Streptococcus

Encarta, 2002

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

K/K

H2S

K/A

GAS
MEDIO NO INOCULADO PRODUCCIN DE H2S

K/K

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Especie bacteriana

Superficie inclinada K K

Fondo KoN A

Gas -o+ -

H2S -

E. coli Shigella

Salmonella thypi
S. parathipy Otras Salmonellas

K
K K

K
A KoN

+o-

+o-o+ +

Arizona
Citrobacter

K
K

KoN
A

-o+

+
+o-

Edwarsiella

- o+

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Klebsiella

K oN

+o-

Enterobacter cloacae
E. aerogenes E. hafniae Proteus vulgaris P. mirabilis P. morganii P. rettgeri Providencia

K
K K R R KoR R R

A
KoN KoN A A A A A

+o+ -o+ -

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Fundamento

Medio de cultivo
Interpretacin Consistencia del medio Aplicaciones

Inoculacin

Reporte de resultados

Resultados
Condiciones de incubacin

Reactivos adicionales

ATLAS

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

Medio de cultivo Composicin: Extracto de levadura Peptona L- ornitina Dextrosa Agar Agua Indicador de pH: prpura de bromocresol cido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color prpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color prpura intenso brillante (pH = 6.0)

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

La prueba MIO se utiliza para la identificacin de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la produccin de ornitina descarboxilasa y de indol. Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido (ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.

La descarboxilacin es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas especficas son capaces de atacar a los aminocidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhdrido carbnico. La descomposicin de los aminocidos se produce anaerbicamente. El proceso de descarboxilacin es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima comn, el fosfato de piridoxal.
El aminocido L-lisina sufre la descarboxilacin para dar cadaverina y CO2 por accin de la enzima especfica lisina-descarboxilasa.

El aminocido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa para dar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Semislido en forma vertical


Inoculacin Por picadura, en forma vertical

Consistencia del medio

Reactivos adicionales

Prueba de indol
Reactivo de Kovacs

Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo


Interpretar inmediatamente.

Temperatura: 35 37 C Tiempo: 24 48 horas

Condiciones de incubacin

Conservacin: Los reactivos debern guardarse en el refrigerador (4 C) mientras no se usan su estabilidad es variable, por lo tanto se har todas las semanas un control de calidad, desechndolos si muestran una reaccin dbil o negativa con un organismo positivo conocido.

Black J.G. 1996

Exudado faringeo Hacer clic

Bacteria flagelar mostrada por la tcnica de anticuerpo fluorescente

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

ORNITINA POSITIVO MOVILIDAD NEGATIVO

ORNITINA NEGATIVO MOVILIDAD POSITIVO (turbidez)

INDOL NEGATIVO MEDIO NO INOCULADO

INDOL POSITIVO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Ornitina descarboxilasa Positivo: color prpura del medio Negativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser prpura al final Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol.
La reaccin positiva despus de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.

Movilidad Positiva. Los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio provocando turbidez. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra. Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar el reactivo de Kovacs para la prueba de indol.

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Prueba

Positivo

Negativo

Bacterias

Indol + +o-

Movilidad + + + -

H2S +o+o-

Salmonella thypi

Movilidad

Otras

Salmonellas E. coli

Indol

Klebsiella

Enterobacter

+o-

+
+ +o-

+ -

Ornitina

Citrobacter Shigella

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Microorganismos ornitina positivos

Microorganismos ornitina negativos

Especies de

Enterobacter Proteus mirabilis Proteus morganii Yersinia enterocolitica

Especies de Klebsiella

Enterobacter aglomerans Proteus vulgaris Proteus rettgeri Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis

Urocultivo Hacer clic

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Robert Koch (1843-1910), cientfico alemn galardonado con el premio Nbel iniciador de la bacteriologa mdica moderna; aisl varias bacterias patgenas, incluida la de la tuberculosis, y descubri los vectores animales de transmisin de una serie de enfermedades importantes. Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorpor a la Universidad de Gotinga en 1862, donde estudi botnica, fsica y matemticas e inici la carrera mdica, que ocupara el resto de su vida. Tras breves estancias en el Hospital General de Hamburgo y en una institucin para nios discapacitados psquicos, comenz a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no le impidieron desarrollar otros intereses como la arqueologa, la antropologa, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergente campo de la bacteriologa. Su primer descubrimiento importante se produjo en la dcada de 1870, cuando demostr que el carbunco infeccioso, tambin conocido como ntrax, slo se desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguneo contena bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilo del carbunco por parte de Koch constituy un hito histrico, ya que por primera vez pudo demostrarse sin duda cul era el agente causante de una enfermedad infecciosa. Qued claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas por sustancias misteriosas, sino por microorganismos especficos, en este caso bacterias. Koch mostr tambin cmo debe trabajar el investigador con dichos microorganismos, cmo obtenerlos a partir de animales infectados, cmo cultivarlos artificialmente y cmo destruirlos. Koch comunic sus observaciones al gran patlogo alemn Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era el bacterilogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunologa moderna.

Prueba Prueba Prueba Medios Medios

del cido sulfhdrico de indol de movilidad para la deteccin de H2S para la deteccin de movilidad

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PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

PRUEBA Sulfuro Indol Movilidad

POSITIVO + + +

NEGATIVO -

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

K/A

K/K

GAS

MEDIO

A/A

H2S

NO INOCULADO

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriolgico sobre infecciones en las heridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de la Salud en Berln, donde, a partir de entonces, llev a cabo la mayora de sus investigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al ao siguiente anunci que haba aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad. Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. El descubrimiento permiti mejorar las tcnicas diagnsticas mediante la identificacin del bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos. Koch dedic entonces su atencin al clera, que en 1883 haba alcanzado niveles de epidemia en la India. Se desplaz all, identific el bacilo causante de la enfermedad y descubri que era transmitido a los seres humanos sobre todo a travs del agua. Ms tarde viaj a frica, donde estudi las causas de las enfermedades transmitidas por insectos. En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berln (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigacin mdica especializada. Permaneci al frente del mismo hasta el da de su jubilacin en 1904. En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina. Muri el 27 de mayo de 1910 en el balneario alemn de Baden-Baden.

Enciclopedia Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos

Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. La utilizacin que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugar por alguno de dos procesos, de fermentacin o de oxidacin. Algunas bacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condiciones aerbicas, mientras que otras producen cido tanto aerbica como anaerbicamente. La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativo depende de los requerimientos de oxgeno atmosfrico y de la fosforilacin inicial. La fermentacin es un proceso anaerbico que requiere la fosforilacin inicial de la glucosa previamente a su degradacin, mientras que la oxidacin, en ausencia de compuestos inorgnicos como nitrato y sulfato, es un proceso estrictamente aerbico que comprende la oxidacin directa de una molcula de glucosa no fosforilada (inicialmente). La fermentacin produce una acidez ms elevada que el proceso metablico oxidativo.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

Tamao: dimetro en mm. Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide. Elevacin: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada. Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado, filamentoso, rizado. Color: blanco, amarillo, negro, marrn, naranja, etc. Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa Densidad: opaca, translcida, transparente, etc. Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa, quebradiza.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html

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PRUEBAS BIOQUMICAS

Hacer clic

Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen en agar hierro de Kligler. En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producir cidos a partir de la fermentacin de glucosa o lactosa; no existe ningn cambio en el medio.

B ilustra una acidificacin inicial de la profundidad y el pico de flauta del medio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a un pH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de la descarboxilacin oxidatva de pptidos (derivados de protenas en el medio) cerca de la superficie.
C ilustra la completa acidificacin permanente de la profundidad y el pico de flauta por bacterias que fermentan lactosa.

Black J.G. 1996

Black J.G. 1996

Beta hemlisis. Zona de aclaramiento total de sangre alrededor de las colonias debido a la lisis de los eritrocitos.

Alfa hemlisis. Aclaramiento parcial de sangre alrededor de las colonias con coloracin verde del medio, contorno de los eritrocitos intacto.

Prueba con Rojo de Metilo

Prueba de Voges - Proskauer

Bases bioqumicas

Reacciones

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Enciclopedia Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.

Hacer clic

REINO
Monera

PRINCIPALES CARACTERSTICAS
Organismos procariotas unicelulares.

EJEMPLOS DE ORGANISMOS
Bacterias

Protistas

Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes ms inmediatos.

Algas, protozoos

Hongos

Organismos hetertrofos que obtienen su alimento por absorcin. No realizan la fotosntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.

Levaduras, setas

Vegetal

Organismos inmviles que realizan la fotosntesis. Pared celular compuesta de celulosa.

Musgos, helechos, rboles Moluscos, peces, aves

Animal

Organismos mviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan tejidos diferenciados.

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COPROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar entrico Hektoen Agar de eosina y azul de metileno Agar ENDO Agar XLD Agar Salmonella Shigella Agar verde brillante PARA ENRIQUECIMIENTO Base de caldo tetrationato Caldo de selenito y cistina PARA IDENTIFICACIN Agar de hierro y triple azcar Caldo rojo de fenol y carbohidratos Medio urea Medio SIM Agar hierro y lisina Medio MIO Agar citrato de Simmons

AISLAMIENTO
PLACAS: Agar S-S, verde brillante, sulfito de bismuto. Agar sangre

ENRIQUECIMIENTO

TUBOS: Caldo tetrationato y/o caldo selenito PLACAS: Agar verde brillante,sulfito de bismuto,XLD,EMB, ENDO, Mac Conkey.

INCUBACIN 24 hs 37 C PLACA: Agar EMB ENDO, XLD, Mac Conkey

IDENTIFICACIN BIOQUMICA
TSI, MIO, LIA, SIM, fenilalanina, RMVP,Citrato de Simmons, urea

Principales Pruebas para la identificacin de Enterobacterias


BACTERIA OXIDASA INDOL VP RM CITRATO SH2 UREA MOVIL IDAD GELA TINA LISINA DESC. ARGI NINA DESC . + -

E. coli Shigella Edwardsiella

+ + +

+ + +

Salmonella
Arizona Citrobacter

--

+
+ +

+ +

+
+ +

+ -

+ -

+
+ -

+
+ -

Klebsiella
Enterobacter

+
-

+
+

+
+

+
-

+
+

Serratia
Proteus vulgaris

+
-

+
+

+
+

+
+

+
+

+
-

Providencia

Hacer

http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html

Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras


Prueba bioq.
O/F glucosa Oxida sa Catala sa Reducci n de NO2 Variable Red.ucc in de N2 Variable Movilida d Mac Conkey SS Agar pseudo cel +

Gneros
Pseudonomas
O + + +
(excepto P. mallei)

Acinetobacter
Achromobacter Alcaligenes Eikenella corrodens Flavobacterium Grupos del CDC Moraxella

O
O Inactivo Inactivo O Variable Inactivo

-+ + + + + +

+
+ + + + +

+ Variable + Variable Variable

Variable Variable

+ + Variable -

+
+ + -

V
+ V V -

V V -

ESTAFILOCOCOS
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar S-110 Agar sal y manitol Agar de Vogel Johnson PARA IDENTIFICACIN Medio CTA Caldo rojo de fenol Caldo SF
Tincin de Gram

1.Examen directo

2. Siembra

Agar S-110
Agar sal y manitol Agar de Vogel Johnson

3. Frotis
4. Pruebas bioqumicas Coagulasa Catalasa Fermentacin de

manitol
Susceptibilidad a
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm

novobiocina

Hacer clic

FAMILIA MICROCOCCACEA
CARACTERSTICA Racimos irregulares Tetradas

MICROCOCCUS
+ +

STOMATOCOCCUS
+ -

PLANOCOCCUS
+ -

STAPHYLOCOCCUS
+ -

Cpsula
Movilidad Crecimiento Gfurazolidona Fermentacin de glucosa

+ -

+
+

+ -

Oxidasa
Resistencia de lisostafina

+
R

No desarrolla
R

Glicina de pptidoglicana
cidos teicoicos en pared celular

+
+

Identificacin de Staphylococcus
PRUEBA
Pigmento colonial Coagulasa Factor de agregacin Nucleasa termoestable Fosfatasa alcalina Ornitina descarboxilasa Ureasa Beta-galactosidasa Produccin de acetona Resistencia a novobiocina Resistencia a polimixina Trehalosa Manitol Manosa Xilosa Celulosa Maltosa Sacarosa

S. aureus
+ + + + + 10-90% cepas + + + + + + + +

S. epidermidis
+ 10-90% cepas + + + + + + +

S. saprophyticus
10-90% cepas + + + + + + 10-90% cepas + + +

ESTREPTOCOCOS
Especie
Susceptibili dad Susceptibili dad

bacitraci na Estreptococos betahemolticos Grupo A Grupo B Enterococos No enterococos

optoquin a

Hidrlisi s hiprat o

Hidrlisi s esculina

Crecimient o en bilis

Crecimient o en NaCl 6.5%

CAM P

Fenmen o satelitism o

S R R R R

R R R R R

+ + -

+ -

+ + -

+ + -

+ -

S. viridans

S. pneumoniae

http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm

Hacer clic

Diferenciacin de especies de Streptococcus


Especie
Reduccin

de Azul de metileno

Crecimieto en Litmus milk

Lactosa

Trehalosa

Sorbitol

Manitol

Sacarosa

HEMOLTICO PIOGNICO

S. pyogenes S. agalactiae S. equi


ORALES

+ +

+ +
+ + +

+ + + + +
+ +

+ + + + -

+ -

+ + + +

S. salivarius S. Mutanm S. termophilus


DEL CIDO LCTICO

S. lactis S cremoris
ENTEROCOCOS

E. feacalis S. liquefaciens S zymogenes

Caractersticas
Morfologa
Cpsula Hemlisis Crecimiento en caldo Solubilidad en bilis Fermentacin de inulina Sensibilidad a Optoquina

S. pneumoniae
Diplococo lanceolado
+ Alfa Turbio uniforme + + +

Streptococcus sp.
Pequeas cadenas de cocos
Alfa Crecimiento granuloso -

Virulencia para ratn

http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm Hacer clic

HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS
Tipo serolgico Eritrocitos susceptibles Conejo Borrego Borrego Humano Conejo, humano, borrego, cobayo, rata Conejo, humano, borrego, cobayo, rata Conejo, humano, ratn, cobayo Leucocitos susceptibles Conejo Humano Ninguno Toxicidad

ALFA

Dermonecrtica para conejo Letal para conejo en grandes dosis Dermonecrtica para conejo y cobayo; letal para conejo Edema en conejo y cobayo

BETA

GAMMA

DELTA

BACILLUS Y CLOSTRIDIUM
CARACTERSTICA Forma Esporas Movilidad Crecimiento en: Aerobiosis Anaerobiosis

Bacillus
Bacilos + +

Clostridium
Bacilos + +

+ +
+

+ +

Catalasa
cido de glucosa

Diferencias de especies de Bacillus


Caractersticas
cido de: Arabinosa Glucosa Manitol Salicina
Cpsula Crecimiento en: Agar penicilina Anaerobiosis Citrato Glucosa O/F

B. anthracis
+ +

B. cereus
+ +/-

B. megaterium
+ + + -

B. subtilis
+ + + +/-

+ + F

+ + + F

+ O

+ O

Hemlisis ASC
Hidrlisis de: Almidon Gelatina Indol Movilidad Peptonizacin LT Reduccin de Nitratos Virulencia de ratn Voges-Proskauer

BETA

+/-

+ + + + +

+ + + + + +

+ + + +/-

+ + + + + +

Diferencias de especies de Clostridium


Caractersticas cido de: Glucosa Lactosa Maltosa Manitol Sacarosa Sorbitol Trehalosa Crecimiento aerbico Esporas Hemlisis ASC H2S Indol Leche tornasolada Movilidad Reduccind de nitratos Voges - Proskauer

C. perfringes

C. botulinum

C. tetani

+ + + + Variable Subterminal + ACG Variable Variable

+ Variable Variable Variable Variable Subterminal +/+/+ -

Terminal + Variable Variable Variable + -

CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
Especie Morfologa celular Morfologa en ASC Crecimiento en caldo Hemlisis Fermentacin

Glu
Variedad gravis Bacilos cortos Colonias 2-4mm, grises, cabeza de margarita, planas Pelcula +

Sac
-

Alm
+

Variedad mitis

Bacilos largos, con granos en los extremos


Bacilos largos en bastn

Colonias 1-2mm, negras, convexas, lisas y brillantes


Colonias >0.5mm, negras, planas, secas, duras

Difuso

Variedad intermedius

Sedimento granular

EXUDADO FARINGEO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar sangre Agar eosina y azul de metileno Agar sal y manitol Agar S-110 Medio de transporte Stuart Agar BIGGY

Tincin de Gram
Hemoltico grupo A

Streptococcus

Disco de bacitracina Disco de optoquina

Agar sangre Agar eosina y azul de metileno Agar S-110, sal y manitol Agar BIGGY

Neumococos

Solubilidad de bilis

Enterobacterias

TSI, LIA, MIO, citrato y urea

Staphylococcus aureus y otros Micrococcus Candida albicans

Catalasa y coagulasa

Tubos germinales y clamidiosporas

UROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar sangre Agar EMB Agar S-110 Agar sal y manitol Agar Biggy PARA IDENTIFICACIN

TSI, Caldo rojo de fenol


Urea, SIM, MIO, LIA, Citrato de simmons

PARA SENSIBILIDAD A ANTIBITICOS Agar de Mueller Hinton Agar soya tripticasena

Orina

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN

Tincin de Gram

Agar sangre, identificacin de:


Estafilococos

Agar EMB Identificacin de: Enterobacterias Pseudomonas Salmonella y Shigella

Agar S-110 sal y manitol


Identificacin de Staphylococcus y otros Micrococos

Estreptococos
Neumococos Observacin de hemlisis

Aislamiento de bacterias patgenas en heces


Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica

Materia fecal
Mac Conkey EMB o XLD Sulfito de bismuto Caldo de selenito

Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y

Colonia negra = Salmonella

Sulfito de bismuto

XLD, VB

Shigella

Certifique Y. enterocolitica

Colonia negra

Salmonella

(-)=Salmonella typhi

Colonia lactosa

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http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html

Clasificacin y pruebas para Streptococcus


Grupo de Lancefi eld Especie Hemli Habitat sis humano Enfermedades Pruebas de laboratorio

S. pyogenes

beta

Faringe, piel

Infecciones primarias: Faringitis aguda, erisipela, celulitis, imptigo, septicemia Secuelas postinfecciosas: Fiebre reumtica, glomerulonefritis, endocarditis reumtica.
Sepsis puerperal, endocarditis, neumonitis, neumona, meningitis, septicemia. Infecciones en heridas, sepsis puerperal, celulitis, endocarditis.

Disco de bacitracina A Aglutinacion en ltex

B
C

S. agalactiae

beta

Faringe, vagina

Prueba de CAMP Bilis esculina Aglutinacin en ltex

S. equi S. equisimilis S. dysgalactiae

beta beta alfa

Faringe, vagina, piel

Hidrlisis de hipurato, Fermentacin de glicerol, trehalosa, sorbitol Aglutinacin al ltex

Grupo de Lancefi eld

Especie

Hemli Habitat sis humano

Enfermedade s

Pruebas de laboratorio

Enterococos:

Intestino grueso

E. faecalis E. faecium E. turans


No enterococos:

Alfa Beta Gama Alfa Beta


Boca, dientes, faringe

Infecciones en tracto urinario, abcesos pelvianos, peritonitis, infecciones en heridas, endocarditis.

Hidrlisis de bilis esculina Aglutinacin al latex Tolerancia a 6.5% NaCl

S. bovis S. equinus

F
H K

S. anginosus

Sinusitis, caries dental, meningitis, abceso cerebral, neumona Caries endocarditis, septicemia dental,

Produccin de cido a partir de glucosa, maltosa, salicina y sacarosa Aglutinsacin al latex Fermentacin de inulina

S. sanguis

Alfa

Boca, dientes, faringe

S. salivarius

Alfa

Faringe, boca

Endocarditis, septicemia, sinusitis, meningitis Neumona septicemia, meningitis, endocarditis lobar, otitis,

cido aprtir de glucosa, sacarosa y maltosa Serotipficacin Reaccin de quellung Solubilidad en bilis Susceptibilidad a optoquina

S. pneuomoniae

Alfa

Faringe, boca, traquea

la

BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA POSITIVOS


Prueba

Aeromonas
+
+

Plesiomonas
+
+ -

Vibrio
+
+ +

Pseudomonas

Fermentacin de glucosa
Crecimiento en NaCl 6.5% cido de inositol cido de manitol

No aplicable No aplicable

Crecimiento en TCBS Licuefaccin de gelatina

+ +

Variable

Bacteria con forma de bastn (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; est considerada como el material biolgico ms utilizado en experimentacin. Esta bacteria se encuentra en el tracto intestinal de los mamferos. La especie comprende varios grupos que se establecen segn su actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones slo si abandonan el colon. Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta ltima no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los nios puede provocar la inflamacin de la mucosa intestinal, dando lugar a deshidratacin grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo adecuado para la investigacin por su crecimiento rpido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproduccin celular e ingeniera gentica.
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http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm

Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esfrica. Los estreptococos aparecen en pares o cadenas, y algunas especies son patgenas en los seres humanos. Las infecciones estreptoccicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas neumonas. Los frmacos de eleccin en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patognicos lcticos se emplean en la fermentacin de productos lcteos como el queso y la mantequilla.
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La bacteria Staphylococcus aureus es un patgeno comn en el ser humano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puede originar abcesos y fornculos en la piel adems de provocar osteomielitis, endocarditis y otro gran nmero de infecciones.
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La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, una enfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupcin de manchas rojas en trax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal.
Enciclopedia Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-Merieux, CNRI/Science Photo Library/Photo Researchers, Inc.

Estructura proteica de un microtbulo Los microtbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructuras celulares como cilios y flagelos. stos son orgnulos filamentosos, destinados a la locomocin y a la obtencin de alimento, que estn incrustados en la membrana celular de algunos organismos eucariotas. Las paredes del tubo estn formadas por dos tipos de subunidades de una protena globular, la alfa y la beta tubulina, que se renen para formar un dmero. Los dmeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro de cada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtbulos que rodean a un dcimo par central.
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El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinacin de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato para formar cido ctrico. Este compuesto cido tiene seis tomos de carbono y experimenta una serie de reacciones qumicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos tomos. Las enzimas tambin modifican la estructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. ste se combina a continuacin con la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molcula de ATP rico en energa (que se forma por liberacin de cuatro electrones) y otra de GTP.
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Esta micrografa electrnica ilustra la bacteria Vibrio cholerae, causante del clera, una grave enfermedad infecciosa del hombre. Produce una toxina que induce la secrecin de grandes cantidades de lquido en el intestino delgado, lo cual determina un cuadro de vmitos, diarrea, calambres musculares y, a veces, la muerte. Hay una vacuna preparada con bacterias muertas que proporciona proteccin parcial.
Enciclopedia Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Moredun Animal Health LTD/Photo Researchers, Inc.

Bacilos Gram positivos grandes que se agrupan formando cadenas, forman esporas y son aerobios La mayor parte de las especies de Bacillus producen catalasa, y la esporulacin no es inhibida por la incubacin aerobia caracterstica positiva que ayuda a la diferenciacin del gnero Bacillus del Clostridium. El Bacillus anthracis causa antrx en animales y humanos. El Bacillus cereus ha sido asociado con brotes de intoxicacin alimentara.

Ingraham L.J. 2000

Black, 1996

Ingraham L.J. 2000

Diplococos Gram positivos, frecuentemente lanceolados y agrupados en cadenas, poseen una cpsula formada por polisacridos que permite una fcil tipificacin con antisueros especficos. Pueden ser lisados con facilidad por agentes tensoactivos, como las sales biliares. Estos organismos son habitantes del aparato respiratorio superior del hombre, y pueden causar neumona, sinusitis, otitis, bronquitis, meningitis entre otros.

Corynebacterium diphteriae en tincin de Gram. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

Son bacilos Gram positivos, inmviles y no esporulados, que frecuentemente presentan sus extremos en forma de mazas, as como grnulos irregularmente teidos. A menudo se encuentran formando asociaciones caractersticas, semejando letras chinas o palizadas. Algunas especies forman parte de la flora normal del aparato respiratorio del hombre. C diphtheriae produce una poderosa exotoxina que causa la difteria en el hombre.

Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

Streptococcus

en fisin binaria, coco Gram positivo, flora normal del intestino grueso, sin embargo causa infecciones en el tracto genitourinario y en sistema cardiovascular. Los enterococos se pueden desarrollar tpicamente en medios con concentraciones de NaCl al 6.5% o bilis al 40%, son inhibidos pero no destruidos por las penicilinas.

faecalis

http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm

Estafilococo, nombre comn de un gnero de bacterias parsitas (Staphylococcus) de forma redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patgena, y cuando abandonan su localizacin en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden producir procesos como los fornculos, infecciones de heridas (abscesos; neumona; meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a travs de la piel o la faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocccicas se realiza mediante antibiticos, como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de cepas resistentes a los antibiticos habituales, que requieren antibiticos ms especficos para su control.
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Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y lceras ppticas. Se asocia tambin con algunos cnceres de estmago. Con toda probabilidad, la infeccin por Helicobacter pylori se produce en la edad infantil. Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con mltiples flagelos, microaerfilo (con preferencia por medios escasos en oxgeno), que coloniza las capas profundas del moco de recubrimiento gstrico y duodenal y se adhiere a las clulas epiteliales superficiales de la mucosa del estmago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amonaco, alcalinizando el medio; as se protege de la accin acdica del jugo gstrico (pH 3). El amonaco adems irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el moco protector. La mucosa y su lmina propia son invadidas por un denso infiltrado de clulas inflamatorias, especialmente neutrfilos. Se ha relacionado con el 95% de las lceras duodenales, el 70% de las lceras gstricas, el 100% de las gastritis crnicas activas y el 100% de las gastritis crnicas tipo B. DIAGNSTICO Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infeccin pueden ser directas, si se basan en la identificacin del microorganismo (histologa y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna caracterstica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los anticuerpos producidos por el paciente (serologa). Las muestras utilizadas para el diagnstico pueden obtenerse por mtodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos (suero, saliva, aliento).
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Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html

Salmonella, gnero de bacterias patgenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. sta ltima presenta ms de 1.400 variedades antignicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las diferentes S. enteriditis, la ms tpica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis (salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, nuseas, vmitos y diarrea. El periodo de incubacin vara entre 8 y 48 horas y la duracin de los sntomas oscila entre 3 y 7 das. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las prdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en portador crnico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratacin intravenosa y, en ocasiones, con antibiticos. La prevencin de estas infecciones pasa por extremar la higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparacin culinaria de los alimentos.
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Las arquebacterias constituyen un grupo de bacterias adaptado a vivir en condiciones extremas. La especie Methanospirillum hungatii es una arquebacteria metanognica Gram negativa presente en ambientes carentes de oxgeno. Estas bacterias producen metano a partir de dixido de carbono e hidrgeno. En la fotografa aparece la bacteria en fase de escisin, es decir, mientras se est dividiendo para dar lugar a dos clulas hijas.
Enciclopedia Microsoft Encarta 2002. 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Dr. Kari Lounatmaa/Science Photo Library/Phot Researchers, Inc.

Las espiroquetas son bacterias con una morfologa y mecanismo de movilidad nicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuticos y en los cuerpos de animales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sfilis, originada por Treponema pallidum. La clula espiroqueta es delgada, flexuosa y de forma helicodal.
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bacteria Neisseria meningitidis que muestra esta imagen, produce meningitis bacteriana as como otras enfermedades. Su carcter Gram negativo se debe a su incapacidad para captar un tipo especfico de colorante bacteriano denominado tincin de Gram. La
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Neiseria meningitidis University of MissouriColumbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

COOH

NH 2 N

H L - Triptofano

COOH

O N

H Indolpiruvico

DESAMINACIN

H Indol

H C O N

H Indolacetaldehdo

CH3 COOH N N

H Escatol (metilindol) incubacin de largo trmino

H cido Indolactico(indolacetato). Incubacin de corto tiempo

FINALIZAR

PRUEBAS BIOQUMICAS

MEN

G L U C O L I S I S
Glucosa
ATP ADP 2 ADP

2
2 ATP

fosfoenolpiruvato

piruvato H2O 2 2-fosfoglicerato

Glucosa-6-fosfato

Fructosa-6-fosfato
ATP ADP

2 3-fosfoglicerato
2 ADP

2 ATP

Fructosa-1,6-bifosfato

2 1,3-bifosfoglicerato
2 NAD 2 PO4

2 NADH

Dihidroxiacetona fosfato

3-fosfogliceraldehdo

NADH

NAD

CoA

Piruvato

CoA

CO2

Acetil CoA

oxalacetato

DE KREBS

citrato

NADH NAD

malato
isocitrato
H2O NAD CO2 NADH

CICLO

fumarato
FADH2 FAD

Alfa-cetoglutarato
NAD NADH CO2 CoA

succinato
CoA

Succinil CoA

GTP

GDP

VIA HEXOSA MONOFOSFATO


NADP
NADP

Glucosa

Glucosa-6-fosfato

5-P-gluconato

Ribulosa-5-P
NADPH NADPH CO2

Ribosa-5-p

Xilosa-5-P

GLUCOLISIS

Gliceraldehdo-3-P

Sedoheptulosa-7-P

Fructosa-5-P

Eritrosa-4-P

Gliceraaldehdo-3-P

Fructosa-5-P

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

PRUEBAS BIOQUMICAS

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm

Bacillus subtillis

Proteus vulgaris

Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html

Streptococcus pyogenes

Staphylococcus aureus

Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html

University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides .htm

Staphylococcus aureus

Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes

Streptococcus viridans

Streptococcus faecalis

Streptococcus pneumoniae

Homepage of Microbiologia clnica, 2000 http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo

En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el nmero de clulas viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otros mtodos el vaciado en placa. Para obtener el nmero apropiado de colonias, usualmente se debe diluir la muestra a contar. Es comn usar varias diluciones decimales de la muestra. Para la dilucin se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente. En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas. Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para cada dilucin, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estar esterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizar. Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad de organismos, no se expuls a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar el contenido de esta. Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastrados fuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que se obtiene. El nmero de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de la cantidad del inculo, sino tambin de los adecuado del medio de cultivo y de las condiciones de incubacin. No todas las clulas depositadas sobre la placa formarn colonias a la misma velocidad y si se usa un tiempo corto de incubacin, se puede obtener menos del mximo de colonias. El recuento de viables est sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, se debe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado. Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC).