UNIVERSIDAD ESTATAL PENINSULA DE SANTA ELENA

FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR ESCUELA DE BIOLOGIA MARINA

TEMA:

COMPARACIN DEL NIVEL PROTEICO DEL HGADO EN 4 ESPECIES DE PECES COMERCIALES DE LA PROVINCIA DE SANTA ELENA DURANTE NOVIEMBRE 2011-FEBRERO 2012 INFORME FINAL
ASIGNATURA: BIOQUMICA DOCENTE: Q.F. MERY RAMREZ
INTEGRANTES SA GMEZ JOS DANIEL SUREZ LAINEZ ALEXIS HERNN VITERI SANTANA ERMEL ROLANDO

Santa Elena

2012

ndice.
1. INTRODUCCIN: ..................................................................................................... 1 1.1.1. Protenas ......................................................................................................... 1 1.1.2. Composicin.................................................................................................... 1 1.1.3. Estructura ........................................................................................................ 1 1.1.4. Propiedades qumicas ..................................................................................... 2 1.1.5. Clasificacin .................................................................................................... 2 1.1.6. Funcin de las protenas ................................................................................ 3 1.2. El valor nutritivo de Pescados y Mariscos........................................................... 3 1.3. Principales caractersticas generales de las especies estudiadas ......................... 5 1.3.1. HOJITA: .......................................................................................................... 5 1.3.2. SARDINA: ....................................................................................................... 6 1.3.3. PMPANO: ..................................................................................................... 7 1.3.4. CARITA: .......................................................................................................... 8 2. OBJETIVOS:........................................................................................................... 11 2.1. Objetivo General .............................................................................................. 11 2.2. Objetivos especficos:....................................................................................... 11 2.3. Hiptesis: ......................................................................................................... 11 3. METODOLOGA ..................................................................................................... 12 3.1 rea de estudio: ................................................................................................ 12 3.2. Tratamiento y anlisis de muestras: ................................................................. 12 3.3. Materiales:........................................................................................................ 12 3.4. Mtodos: .......................................................................................................... 13 3.4.1 Procedimiento. ............................................................................................ 13 3.4.2 Determinacin de la concentracin ............................................................. 13 4. RESULTADOS: ...................................................................................................... 14 5. CONCLUSIN: ....................................................................................................... 17 6. RECOMENDACIONES: .......................................................................................... 18 7. ANEXOS 8. BIBLIOGRAFAS

1. INTRODUCCIN: 1.1.1. Protenas

Las protenas estn consideradas como el constituyente ms importante de cualquier clula viviente y representan el grupo qumico ms abundante en el cuerpo de los animales, con excepcin del agua; en promedio, las protenas son componentes esenciales tanto del ncleo celular como del protoplasma celular y por lo tanto constituyen el grueso del tejido muscular, rganos internos, cerebro, nervios y piel.

1.1.2. Composicin

Las protenas son compuestos orgnicos muy complejos con un alto peso molecular. En comn con los carbohidratos y lpidos, sus elementos constitutivos son carbono (C), hidrgeno (H) y oxgeno (O) y adems contienen alrededor de un 16% de nitrgeno (N: rango 1219%), y en ocasiones fsforo (P) y azufre (S).

1.1.3. Estructura

Las protenas difieren de otras macromolculas biolgicamente importantes, tales como los carbohidratos y lpidos en su estructura bsica. As por ejemplo; en contraste con la estructura de dichos grupos qumicos, que a menudo estn formados por la repeticin de unidades idnticas o muy similares (p. ej. la glucosa es la unidad que se repite como elemento constitutivo del almidn, glicgeno y celulosa), las protenas por el contrario, pueden estar formadas hasta por 100 unidades bsicas diferentes (aminocidos). Por lo que consecuentemente es posible tener una gran variabilidad y rango de compuestos, no slo en relacin a la composicin, sino tambin en cuanto a la forma de la protena.

1.1.4. Propiedades qumicas

Las protenas son compuestos coloidales por naturaleza, con diferente grado de solubilidad al agua, pasando desde la queratina que es insoluble, hasta las albminas que son altamente solubles. Todas las protenas pueden ser desnaturalizadas por el calor, cidos fuertes, lcali, alcohol, acetona, rea y por sales de metales pesados. Cuando las protenas son desnaturalizadas pierden su estructura nica, y consecuentemente poseen diferentes

propiedades qumicas, fsicas y biolgicas (p. ej. inactivacin de enzimas por el calor). 1.1.5. Clasificacin

Las protenas pueden ser clasificadas en tres grupos principales de acuerdo a su forma, solubilidad y composicin qumica: a. Protenas fibrosas: son aquellas protenas animales insolubles, que generalmente son muy resistentes al desdoblamiento enzimtico digestivo. Las protenas fibrosas existen como cadenas filamentosas alargadas. Ejemplos de protenas fibrosas incluyen el colgeno (principal protena del tejido conectivo), la elastina (presente en los tejidos elsticos, tales como arterias y tendones), y la queratina (presente en el pelo, uas, lana y pezuas de mamferos). b. Protenas globulares: incluyen todas las enzimas, antgenos y protenas hormonales. Las protenas globulares, a su vez se subdividen en albminas (protenas solubles al agua coagulables con calor, se les encuentra en el huevo, leche, sangre y en muchos vegetales); las globulinas (insolubles o escasamente solubles en agua, estn presentes en el huevo, leche, sangre y sirven como principal reserva protenica en las semillas de vegetales); e histonas (protenas bsicas, de bajo peso molecular, solubles al agua, se les encuentra en el ncleo celular, asociadas con el cido desoxirribonucleico-ADN). c. Protenas conjugadas: son protenas que al ser hidrolizadas, dan lugar a grupos no protenicos y aminocidos. Algunos ejemplos, incluyen las
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fosfoprotenas (la casena de la leche, fosvitina de la yema del huevo), glicoprotenas (secreciones mucosas), lipoprotenas (membranas

celulares), cromoprotenas (hemoglobina, hemocianina, citocromo, flavoprotenas), y nucleoprotenas (combinacin de protenas con cidos nuclecos, presentes en el ncleo celular).

1.1.6. Funcin de las protenas

La funcin de las protenas puede ser resumida como sigue:

Reparacin del tejido daado y desgastado (mantenimiento de tejido) y formacin de tejido nuevo (sntesis de nuevas protenas durante el crecimiento).

La protena suministrada en la dieta, puede ser catabolizada y actuar como fuente de energa o puede servir como substrato para la formacin de lpidos y carbohidratos en el tejido.

La protena suministrada en la dieta, es requerida dentro del cuerpo del animal para la formacin de hormonas, enzimas y una variedad muy amplia de otras substancias biolgicamente importantes, tales como los anticuerpos y hemoglobina.

1.2. El valor nutritivo de Pescados y Mariscos

Desde el punto de vista nutritivo, el pescado es un alimento con una composicin parecida a la de la carne, aunque tambin con marcadas diferencias. Su composicin nutritiva y el valor energtico difieren segn la especie. Incluso dentro de la misma vara en funcin de diversos factores, como la estacin del ao y la poca en que se captura, la edad de la pieza, las condiciones del medio en el que vive y el tipo de alimentacin.

El agua, las protenas y las grasas son los nutrientes ms abundantes y los que determinan aspectos tan importantes como su valor calrico natural, sus propiedades organolpticas (las que se aprecian por los sentidos: olor, color, sabor), su textura y su capacidad de conservacin.

El contenido medio de protenas de pescados y mariscos es de 18 gramos por cada 100 gramos de alimento comestible, si bien los pescados azules y los crustceos pueden superar los 20 gramos de protenas por 100 gramos de producto. Es decir, 100 gramos de casi cualquier pescado aportan alrededor de una tercera parte de la cantidad diaria recomendada de protenas. La protena de pescados y mariscos es de elevado valor biolgico, al igual que la que contienen otros alimentos de origen animal, con un perfil de aminocidos esenciales muy parecidos entre ellos y este patrn apenas se altera tras los procesos de congelacin y secado a los que son sometidos algunos pescados. El tipo de protenas del pescado es lo que determina su textura o consistencia, su digestibilidad, su conservacin, as como los cambios de sabor y color que experimenta el pescado durante su trayectoria comercial hasta llegar al consumidor. En concreto, el pescado posee una proporcin de colgeno inferior a la carne. El colgeno es una protena del tejido conjuntivo que confiere mayor firmeza y dureza, motivo por el cual el pescado es ms tierno y es ms fcil de digerir que la carne y el marisco.

1.3. PRINCIPALES CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS ESPECIES ESTUDIADAS 1.3.1. HOJITA: Nombre cientfico: Chloroscombrus orqueta Nombre comn: hojita Clasificacin cientfica Reino: Filo: Clase: Subclase: Infraclase: Superorden: Orden: Familia: Gnero: Especie: Animalia Chordata Actinopterygii Neopterygii Teleostei Acanthopterygii Perciformes Carangidae Chloroscombrus C. orqueta

Distribucin geogrfica Se encuentra desde el sur de California (Estados Unidos) hasta el Per, incluyendo el Golfo de California.

Orqueta, Bonito ojn, Casabe, Jurel pardo, Jurel citarita, Horqueta del Pacfico Se distingue por su forma ovalada, muy comprimido, con el perfil ventral ms convexo que el perfil dorsal; radios dorsales VIII + I, 25-28; radios anales II + I, 25-28; sin aletillas detrs de la aleta dorsal y anal; lnea lateral con un arco anterior pronunciado y corto; 6-12 escudetes muy dbiles en la base de la cola; cuerpo escamado. Cuerpo y cabeza color azul oscuro metlico arriba, plateado en los costados y el vientre; una mancha oscura en el borde superior del oprculo; tambin tiene una mancha negra en forma de montura en la parte superior de la base de la cola; aleta caudal amarilla. Tamao: hasta 31 cm. Hbitat: pelgico, forma cardmenes en ambientes costeros de poca profundidad, tambin entra en esteros.
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1.3.2. SARDINA:

Nombre Cientfico: Sardinops sagax sagax Nombre Comn: Sardina Nombre en Ingls: Sardine Nombre FAO: Sardina peruana.

Caracterstica de la especie

La sardina es una especie pelgica, con cuerpo alargado y grueso que se adelgaza hacia el vientre. Cabeza aguda, aplanada por arriba y en los lados moderadamente comprimido; sus tamaos pueden alcanzar hasta los 36 cm de longitud total. Presenta color azulino en el lomo y plateado en los lados; con manchas oscuras a los costados. Viven en ambientes relativamente clidos, con rangos de temperatura del agua que oscilan entre 17 y 25C. La salinidad puede variar entre 34,8 y 35,3 UPS. La sardina tiene hbitos gregarios formando cardmenes.

Patrones de distribucin y abundancia La distribucin de esta especie es amplia en el Pacfico Sur oriental, desde Ecuador hasta Chile (0139' 3700'S), incluyendo los alrededores de las Islas Galpagos.

La distribucin longitudinal alcanza las 200 millas nuticas e incluso sobrepasa esta distancia. Verticalmente llegan hasta los 100 m de profundidad.

1.3.3. PMPANO:

NOMBRE CIENTFICO: P EPRILUS MEDIUS FAMILIA: STROMATEIDAE ORDEN: PERCIFORMES CLASE: ACTINOPTERYGII

Distribucin Geogrfica: Su distribucin va desde 32 437 N hasta 18 20' S en el Ocano Pacifico Oriental. Es una especie bentopelgica costera de aguas clidas y de fondos blandos, forma cardmenes y se distribuye desde el Golfo de California (Mxico) hasta Pisco (Per) (CHIRICHIGNO & CORNEJO 2001). Se ubica a profundidades de entre 10 y 40 m, y en varias zonas climticas: Subtropical Norteo, Tropical Norteo, Ecuatorial y Templado Sureo (DISCOVER LIFE 2009) Composicin qumica Anlisis proximal (%) Humedad: 74.1 Grasa: 8.0 Protena: 17.3

Talla mnima de captura

Mediante la R. M. N 371-2007-PRODUCE se estableci la talla mnima de captura (TMC) de esta especie en 23 cm LT, con una tolerancia mxima de ejemplares juveniles de 20 %, norma sustentada por el informe tcnico de IMARPE titulado Aspectos biolgico-pesqueros y talla mnima de captura de chiri Peprilus medius (Peters) en el norte del mar peruano.

1.3.4. CARITA: Nombre cientfico: Selene peruviana (Guichenot, 1866) Nombre comn: Espejo, jorobadito, pampanito Nombre en ingls : Peruvian moonfish Nombre FAO : [En] Pacific moonfish Orden: Perciformes Familia: Carangidae

Selene peruviana, tiene el cuerpo algo rectangular y muy comprimido, la cabeza moderadamente alta con la nuca redondeada, el perfil del hocico-frente es empinado y un poco cncavo, los lbulos de las aletas dorsal y anal son cortos en los adultos, las aletas plvicas son diminutas, los juveniles poseen las espinas dorsales anteriores alargadas, las espinas de las aletas dorsal y anal se hunden conforme crece el individuo, las aletas pectorales y la caudal son amarillentas. Su color es plateado, aunque los juveniles presentan una mancha negra en el costado. Es una especie de hbitos carnvoros, que se alimenta de peces seos y crustceos mviles bentnicos (camarones y cangrejos) BLASKOVIC et al

(2008), afirman que se alimenta preferentemente de crustceos (eufusidos) y poliquetos (espinidos). Los carngidos presentan desove pelgico y eliminan un gran nmero de huevos pequeos que flotan .La poca de mximo desove ocurre entre los meses de marzo y mayo (VERA 2007). Comercialmente, sus tallas varan entre 11 y 35 cm LT, y se encuentra asociado principalmente al chiri Peprilus medius y al pmpano Trachinotus paitensis (VERA 2007). Se ubica en toda la columna de agua, a profundidades de entre 1 y 50 m, y en varias zonas climticas (Templado Norte, Subtropical Norteo, Tropical Norteo, Ecuatorial y Templado Sureo). Es una especie endmica del Pacfico Oriental Tropical (POT) y del Pacfico.

Distribucin Es una especie costera que vive en toda la columna de agua, sobre fondos arenosos, formando cardmenes. Se distribuye desde Redondo Beach (EE.UU.), el Golfo de California (Mxico) hasta Baha Chilca (Per), aunque ocasionalmente se desplaza hasta Callao y norte de Chile (CHIRICHIGNO & CORNEJO 2001). Algunas veces, los juveniles se encuentran en esteros salobres o en agua dulce.

Segn Ma. Isabel Abdo de la Parra (2010) realizo un estudio en estudio en el pargo lunarejo Lutjanus guttatus es una especie con un alto valor comercial en el mercado mexicano y con potencial para su cultivo. Por esto, es necesario determinar sus requerimientos nutricionales para desarrollar dietas especficas y adecuadas para el desarrollo de esta especie, actualmente inexistentes en el mercado mexicano. En el presente estudio, se evalu el efecto de diferentes niveles de protena y lpidos totales en la dieta sobre el crecimiento y supervivencia de juveniles de pargo lunarejos producidos en laboratorio. Se formularon nueve dietas semipuras con tres niveles de protena (40, 45 y 50%) y tres niveles de lpidos (9, 12 y 15%), con las cuales se alimentaron durante 8 semanas a los juveniles de pargo luranejo (peso promedio = 2,2 0,1 g) producidos en criadero. Una vez finalizado el experimento, se determin el incremento en peso, tasa especfica de crecimiento, factor de condicin, consumo de alimento, tasa de conversin alimenticia y porcentaje de supervivencia de los organismos. Los peces alimentados con las dietas de 45 y 50% de protena y sus tres niveles de lpidos obtuvieron mayor incremento en peso corporal y mejores tasa de conversin alimenticia que los organismos alimentados con las dietas de 40% de protena y sus tres niveles de lpidos. La supervivencia, consumo de alimento y factor de condicin no fueron afectados por los diferentes tratamientos. Estos resultados indican que los juveniles de pargo lunarejo requieren por lo menos 45% de protena y 9% de lpidos totales en la dieta, para su mayor crecimiento y supervivencia. Segn Risco Orbe (2005) realiz un proyecto que tuvo como la finalidad de determinar el efecto del alimento extruido con tres niveles de protena (35, 40 y
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45%) en el crecimiento de alevinos de paiche en las instalaciones del Instituto de Investigaciones de la Amazona Peruana IIAP Quistococha. El estudio se realiz durante los meses de Agosto del 2005 a Enero del 2006 con una duracin de 104 das, utilizndose 45 alevinos de paiche (86.84 15.73 g). Se utilizaron tres dietas extrusadas (tratamientos) por triplicado con diferente nivel de protena. Los peces fueron alimentados diariamente con una tasa equivalente al 3% de la biomasa corporal, registrndose el crecimiento en peso y longitud en muestreos quincenales. Los resultados nos revelan que hubieron diferencias significativas (p<0,05) entre los tratamientos, siendo que los peces sometidos al T1 presentaron los niveles ms bajos de rendimiento que aquellos sometidos a los tratamientos T2 y T3, no existiendo diferencias significativas entre los dos ltimos, sin embargo los mejores resultados fueron obtenidos en los peces alimentados con el T2 (Peso final de 581,1 g y TCAA de 1,27).

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2. OBJETIVOS:

2.1. Objetivo General Comparar el nivel proteico existente en el hgado de 4 especies de peces comerciales, mediante mtodo de Bradford por espectrofotometra obteniendo la informacin estadstica necesaria del rgano estudiado de cada especie.

2.2. Objetivos especficos:

Determinar la concentracin proteica del tejido heptico de cada una de las especies mediante el mtodo de Bradford por Espectrofotometra. Aplicar las frmulas estadsticas relacionndolas con la

biometra,

concentracin de protenas de cada de las especies analizadas.

2.3. Hiptesis: Ho: Cada una de las especies estudiadas posee en su hgado la misma concentracin de protenas. Ha: Las especies estudiadas difieren en la concentracin proteica de su tejido heptico.

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3. METODOLOGA 3.1 rea de estudio:

Los especmenes fueron comprados en el mercado Central de la Libertad ubicado en la provincia de Santa Elena.

3.2. Tratamiento y anlisis de muestras:

Las muestras fueron analizadas

en el laboratorio de ciencias qumicas y

biolgicas de la Universidad Estatal Pennsula de Santa Elena

3.3. Materiales: 3 Matraz volumtrico de 1000 ml 6 matraces volumtricos de 100 ml 4 Cpsula de porcelana 4 Pipeta de 5 y 10 ml. Pipeta Pasteur 6 Vasos precipitacin de 50 ml 2 Peras de succin 3 Micropipetas 1 Balanza analtica 1 pHmetro 1 Centrfuga 1 Espectrofotmetro 5 cubetas 24 Puntas desechables 1 Caja de papel aluminio
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1 Hielera 1 Calentador

3.4. Mtodos:

Extraccin de protenas: Solucin Stock: buffer de extraccin alcalina pH 7.5 TRIZ BASE 50 mM EDTA 10 Mm ACIDO ASCRBICO 0.2% CLORURO DE SODIO 150 Mm MERCAPTO ETANOL 140 ul por cada 100 ml de buffer ( * ) PMSF 50 ul por cada ml de buffer ( * ) TTRITON AL 1.5% ( * ) El Mercapto etanol y el PMSF se adiciona en el momento de realizar la extraccin.

3.4.1 Procedimiento.

1. Maceramos las muestras 2. Adicionamos buffer de extraccin alcalina, segn la relacin 1:3 3. Incubamos por un da en hielo. 4. Centrifugamos a 13000 rpm por 10 minutos. 5. Recolectamos el sobrenadante

3.4.2 Determinacin de la concentracin Espectrofotometra a 595nm Mtodo de Bradford. 1. Preparamos el Bradford; relacin 1:4 (para 5ml), Donde: 1 = 1 ml Bradford concentrado. 4 =4 ml de agua destilada. 2. Preparamos lo suficiente para el nmero total de muestras.
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Preparacin de la muestra: 1. Pipeteamos 10 ul de muestra ms 500 ml de Bradford diluido 2. Mezclamos e incubamos por 20 minutos en la oscuridad Preparacin de solucin de tincin Coomassie para la curva estndar: AZUL DE COOMASSIE BLUE R-250 5mg ETANOL 2.3 ml ACIDO FOSFRICO 5 ml AGUA DESTILADA

4. RESULTADOS: Anlisis efectuado en las 4 especies de pescado Tabla 1.

CONTENIDO DE PROTEINAS EN EL HIGADO DE PESCADO EN mg/g Especmenes Carita Hojita Pmpano Sardina Diciembre 0,2483752 0,24448 0,215266 0,2602231 Enero 0,171445 0,182806 0,190921 0,189298 Febrero 0,181183 0,189298 0,169822 0,16333 Promedio 0,2003344 0,192003 0,2042837 0,205528

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Grfico 1.

0.3 0.25 Cantidades en mg 0.2 Diciembre 0.15 0.1 0.05 0 CARITA PAMPANO SARDINA HOJITA Enero Febrero

Grfico 2.

Promedio de proteinas por especies en mg/g

0.21 0.205 0.2 0.195 0.19 0.185 Selene peruviana Chloroscombrus orqueta Peprilus medius Sardinops sagax

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Grfico 3.

Relacin de talla de cada una de las especies

30 25 tallas en cm 20 15 10 5 0 1 2 3 CARITA HOJITA PAMPANO SARDINA

Grfico 4.

Relacin de masa de cada una de las especies

300 250 masa en g 200 150 100 50 0 1 2 3 CARITA PAMPANO SARDINA HOJITA

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Grfico 4. Curva de calibracin de la solucin de Bradford

Curva de calibracin
0.4 Absorvancia de la muestra 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 0.5 1

y = 0.1623x + 0.1471 R = 0.9983

1.5

Diluciones

5. CONCLUSIN: Fue de vital importancia comprobar la presencia de protenas en el hgado de los peces estudiados antes del anlisis, tanto cualitativa como

cuantitativamente, mediante la adicin del reactivo Ninhidrina especfico y muy determinante el cual nos dio positivo.

En base a los resultados obtenidos determinamos que las cuatro especies difieren en su contenido proteico, a lo cual nosotros relacionamos con su disminucin de peso y talla durante los anlisis. Analizando la hiptesis que menciona: Ho: Cada una de las especies estudiadas posee en su hgado la misma concentracin de protenas y la Ha: Las especies estudiadas difieren en la concentracin proteica de su tejido heptico; en la cual se acepta la hiptesis alternativa porque si existen diferencias, la especie con mayor

contenido proteico fue la sardina con un 20.6%, seguido por el pmpano con 20,4% y con unas dcimas de diferencia la hojita y la carita con 19% y 20% respectivamente.
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6. RECOMENDACIONES:

Al ser el hgado uno de los rganos menos estudiado de los peces, se recomienda analizar otros factores tales como lpidos, carbohidratos

totales un estudio microbiolgico entre otros con el fin de crear una informacin de contenido nutricional.

Se recomienda realizar

una tcnica especfica

para obtener

protenas totalmente puras, esto disminuir el margen de error al leer las muestras.

Realizar estudios comparativos con otros rganos internos de los peces estudiados para determinar el contenido proteico.

Analizar el contenido de protenas de otras especies comerciales para comparar los resultados actuales determinando cual es ms rico nutricionalmente.

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7. ANEXOS:

Chloroscombrus orqueta

Sardinops sagax

Selene peruviana

Peprilus medius

Preparacin de reactivos: Buffer de extraccin:

Reactivo de Bradford:

Primera etapa:

Extraccin del hgado en los peces capturados.

Cortamos la piel del pescado y extraemos el hgado

Pesamos el hgado

Obtuvimos cada una de las muestras del anlisis respectivo

Segunda etapa: Extraccin y conservacin de las protenas:

Colocamos la muestra de hgado en el mortero

Adicionamos 3ml de buffer de extraccin

Colocamos en un tubo eppendor

Maceramos hasta obtener una mezcla homognea

Incubamos en hielo durante 24 horas

Tercera etapa Anlisis de la concentracin de protenas

Centrifugamos durante 10 minutos 13000 rpm

Recolectamos el sobrenadante

Adicionamos 3ml del Bradford diluido

Extraimos 20ul y colocamos en una cubeta

Leimos la absorbancia en el espectro 595 nm.

Anlisis cualitativo de protenas en una muestra utilizando el reactivo de la Ninhidrina

8. BIBLIOGRAFAS:

Revista de Biologa Marina y Oceanografa Efecto de diferentes niveles de protena y lpidos totales en la dieta sobre el crecimiento y supervivencia de juveniles de pargo lunarejo Lutjanus guttatus Vol. 45, N3: 433-439, diciembre de 2010. Cervera Pilar, Claper Jaime, Rigolfas Rita. Alimentacin y dietoterapia. Segunda Edicin. Mc Graw Hill. Espaa 1993. Revista Bioanlisis. Diagnostico bioqumico. Numero 1. Editorial Khunz. Enero 2005. CRESCENCIO, R. 2001. Treinamento alimentar de alevinos de piraruc, Arapaima gigas (Cuvier, 1829), utilizando atrativos alimentares. Disertao de Maestrado. Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia. Manaus-Brasil. Cho C.Y. 1987. La energa en la nutricin de peces. pp 197-243. En: Nutricin en Acuicultura.Vol II. J. Espinosa de Los Monteros y U. Labarta Editores. FEUGA-CAICYT, Madrid, Espaa. 318 pp. Gracia-Lpez V, T Garca-Galano, G Gaxiola-Corts & J PachecoCampos. 2003. Efecto del nivel de protena en la dieta y alimentos comerciales sobre el crecimiento y la alimentacin en juveniles del robalo blanco, Centropomus undecimalis (Bloch, 1792) Ciencias Marinas 29(4B): 585-594. Morales-Nin B. 1991. Determinacin del crecimiento de peces seos en base a la microestructura de los otolitos. FAO Documento Tcnico de Pesca 322: 1-58. Tacon JA. 1989. Nutricin y alimentacin de peces y camarones cultivados. Manual de capacitacin. GCP/RLA/102/ITA Proyecto Aquila II. FAO Documento de Campo 4: 1-572.