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UNIVERSIDAD TECNICA DE COTOPAXI U.A.

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M.Sc. PATRICIO CLAVIJO CEVALLOS

INGENIERIA GENETICA

La Ingeniera Gentica es la ciencia biolgica que trata de la manipulacin de los genes. La aplicacin de los conocimientos de la Ingeniera Gentica constituye la Biotecnologa. El ADN puede cortarse en fragmentos por medio de las enzimas de restriccin. Estos fragmentos quedan con unos extremos o bordes cohesivos, tambin llamados bordes pegajosos, que hacen que se puedan unir fragmentos de distinto origen, formando un ADN llamado recombinante. En Ingeniera Gentica es necesario la obtencin de muchas copias de fragmentos de ADN para su estudio y manipulacin. Se consigue mediante la clonacin, que puede ser "en vivo" utilizando clulas que actan como agentes replicativos, o "in vitro", mediante la PCR, (Reaccin en Cadena de la Polimerasa). Para introducir ADN recombinante en clulas hospedadoras, se recurre a elementos gnicos llamados vectores gnicos. Estos son los plsmidos, los bacterifagos y los csmidos. La localizacin de determinados segmentos de ADN se lleva a cabo mediante diversas tcnicas, entre las que destacan las sondas de hibridacin. La determinacin de la secuencia de nucletidos de un ADN se puede realizar por diversos mtodos, como el de Sanger o de los didesoxinucletidos. La Biotecnologa es importante en medicina, agricultura y ganadera y reporta una serie de provechos, entre ellos est la sntesis de productos necesarios para la vida, diagnosis y remedio de muchas enfermedades, la prevencin de enfermedades hereditarias y la consecucin de plantas y animales transgnicos. El estudio del genoma humano, gracias a la tecnologa de la ingeniera gentica, completado en junio de 2000 abre un campo imposible de predecir y cuya finalidad es producir mejoras en la humanidad. Todas estas investigaciones y aplicaciones, deben ser realizadas teniendo en cuenta las normas universales de la tica, la dignidad humana y la conservacin de la naturaleza, constituyendo un patrimonio comn a todos los pueblos. Ingeniera gentica en bacterias Son los seres vivos ms utilizados en Ingeniera Gentica. La ms utilizada es la Escherichia coli. Se usa prcticamente en todos los procesos de I.G. Ingeniera gentica en levaduras y hongos Son junto con las bacterias los sistemas ms utilizados. El Saccharomyces cerevisiae fue el primer sistema eucariota secuenciado completamente. Otra levadura importante es P. pastoris, utilizada para conseguir proinsulina en cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo continuo. En el campo de los hongos destaca por su labor mdica el Penicillium.

Ratones knockout. Ingeniera Gentica en animales

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La manipulacin gentica de los animales persigue mltiples objetivos: aumentar el rendimiento del ganado, producir animales con enfermedades humanas para la investigacin, elaborar frmacos, etc. Ingeniera Gentica en plantas Actualmente se han desarrollado plantas transgnicas de ms de cuarenta especies. Mediante ingeniera gentica se han conseguido plantas resistentes a enfermedades producidas por virus, bacterias o insectos. Estas plantas son capaces de producir antibiticos, toxinas y otras sustancias que atacan a los microorganismos. Tambin se han conseguido otro tipo de mejoras, como la produccin de distintas sustancias en los alimentos que aumentan su calidad nutricional, mejorar las cualidades organolpticas de un producto o que ciertas plantas sean ms resistentes a determinados factores ambientales, como el fro. Las tcnicas de ingeniera gentica tambin permiten el desarrollo de plantas que den frutos de maduracin muy lenta. As, es posible recoger tomates maduros de la tomatera y que lleguen al consumidor conservando intactos su sabor, olor, color y textura. La mejora de la calidad de las semillas es tambin un objetivo. Las aplicaciones farmacuticas son otro gran punto de inters. La biotecnologa permite desarrollar plantas transgnicas que producen sustancias de inters farmacolgico, como anticuerpos, ciertas protenas y hormonas, como la hormona del crecimiento. Aplicaciones de la Ingeniera Gentica en medicina e industria farmacutica Obtencin de protenas de mamferos Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de coagulacin, etc., tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de tejidos o fluidos corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina en los humanos. Obtencin de vacunas recombinantes El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por ingeniera gentica. Como la mayora de los factores antignicos son protenas lo que se hace es clonar el gen de la protena correspondiente. Diagnstico de enfermedades de origen gentico Artculo principal: Diagnstico gentico preimplantacional. Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta anomala, se puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un determinado individuo. Obtencin de anticuerpos monoclonales Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el cncer y diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas. Logros El 7 de marzo de 2010 fue publicado en lnea y rectificado el 25 de marzo del mismo ao en la revista Nature, una de las revistas cientficas ms prestigiosas del mundo, una investigacin del cinvestav Irapuato en colaboracin con cientficos de Estados Unidos y Francia en la cual hallaron una protena llamada argonauta 9 con la que se podra llegar a

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inducir la clonacin natural de las plantas, esto tendra un fuerte impacto en la industria de semillas, y algunos dicen que podra revolucionar la produccin agrcola internacional.

Alcances de la ingeniera gentica Cuando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la informacin que portaban se traduca en funciones o caractersticas, comenzaron a buscar la forma de aislarlos, analizarlos, modificarlos y hasta de transferirlos de un organismo a otro para conferirle una nueva caracterstica. Justamente, de eso se trata la ingeniera gentica, un conjunto de metodologas que permite transferir genes de un organismo a otro. Como consecuencia, la ingeniera gentica sirve para clonar fragmentos de ADN y para expresar genes (producir las protenas para las cuales estos genes codifican) en organismos diferentes al de origen. As, es posible no slo obtener las protenas recombinantes de inters sino tambin mejorar cultivos y animales. Hasta el momento se ha utilizado la ingeniera gentica para producir, por ejemplo: en Vacunas, como la de la hepatitis B Frmacos, como la insulina y la hormona del crecimiento humano Enzimas para disolver manchas, como las que se usan en los detergentes en polvo Enzimas para la industria alimenticia, como las empleadas en la elaboracin del queso y la obtencin de jugos de fruta. Plantas resistentes a enfermedades y herbicidas.

El desarrollo de la ingeniera gentica (tambin llamada metodologa del ADN recombinante) fue posible gracias al descubrimiento de las enzimas de restriccin y de los plsmidos. Las enzimas de restriccin reconocen secuencias determinadas en el ADN. De esta manera, conociendo la secuencia de un fragmento de ADN es posible aislarlo del genoma original para insertarlo en otra molcula de ADN. Hay muchas enzimas de restriccin obtenidas a partir de bacterias y que sirven como herramientas para la ingeniera gentica. Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4, 6 o ms bases y cortan generando extremos romos o extremos cohesivos. Estos extremos, generados en diferentes molculas de ADN, pueden sellarse con la enzima ADN ligasa y generar as una molcula de ADN nueva, denominada recombinante. Los plsmidos son molculas de ADN circulares, originalmente aisladas de bacterias y que pueden extraerse de las mismas e incorporarse a otras, a travs del proceso de transformacin. Los plsmidos fueron modificados por los investigadores para ser empleados como vectores. As, el gen de inters puede insertarse en el plsmido-vector e incorporarse a una nueva clula. Para seleccionar las clulas (bacterias o clulas animales o vegetales) que recibieron el plsmido, ste lleva, adems del gen de inters (por ej., el gen de la insulina humana), un gen marcador de seleccin (por. ej., de resistencia a un antibitico), que le otorga a la clula que lo lleva la capacidad de sobrevivir en un medio de cultivo selectivo (medio con antibitico, en este ejemplo). Las clulas que sobreviven se dividen y generan colonias, formadas por bacterias idnticas. Estas bacterias se denominan recombinantes o genticamente modificadas. El plsmido recombinante puede aislarse de estas colonias y transferirse a otras clulas.

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Por esta metodologa es posible introducir genes de inters en todo tipo de clulas, empleando los vectores y las tcnicas propias de cada sistema. Podemos entonces generalizar los pasos de la ingeniera gentica de la siguiente manera: 1. Identificar un carcter deseable en el organismo de origen. 2. Encontrar el gen responsable del carcter deseado (gen de inters). 3. Combinar dicho gen con otros elementos necesarios (vector) para que ste sea funcional en el organismo receptor. 4. Transferir el gen de inters, previamente introducido en el vector adecuado, al organismo receptor. 5. Crecer y reproducir el organismo receptor, ahora modificado genticamente. Por ejemplo, para el caso de la transferencia de un gen insecticida de una bacteria al maz: 1. Identificar la caracterstica resistencia a insectos en el organismo de origen, la bacteria del suelo Bacillus thuringiensis. 2. Encontrar al gen que lleva las instrucciones para esta caracterstica. 3. Combinar este gen con otros elementos genticos para que sea funcional ahora en una planta (ligarlo a un vector). 4. Transferir este gen a clulas de maz (organismo receptor). 5. Identificar las clulas de maz que recibieron el gen (clulas transformadas) y regenerar, a partir de estas clulas, una planta adulta. De los genes a la ingeniera gentica Cuando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la informacin que portaban se traduca en funciones o caractersticas, comenzaron a buscar la forma de aislarlos, analizarlos, modificarlos y hasta de transferirlos de un organismo a otro para conferirle una nueva caracterstica. Justamente, de eso se trata la ingeniera gentica, que se podra definir como un conjunto de metodologas que permite transferir genes de un organismo a otro y expresarlos (producir las protenas para las cuales estos genes codifican) en organismos diferentes al de origen. El ADN que combina fragmentos de organismos diferentes se denomina ADN recombinante. En consecuencia, las tcnicas que emplea la ingeniera gentica se denominan tcnicas de ADN recombinante. As, es posible no slo obtener protenas recombinantes de inters sino tambin mejorar cultivos y animales. Los organismos que reciben un gen que les aporta una nueva caracterstica se denominan organismos genticamente modificados (OGM) o transgnicos. A su vez, la ingeniera gentica es lo que caracteriza a la biotecnologa moderna que implementa estas tcnicas en la produccin de bienes y servicios tiles para el ser humano, el ambiente y la industria Etapas para la obtencin de un organismo transgnico La siguiente tabla resume los pasos bsicos de la ingeniera gentica empleados para transformar un organismo, y se ejemplifica con un caso concreto:

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Caso: obtencin de maz Bt que produce una protena recombinante que le confiere resistencia a determinados insectos 1.Identificar un 1. Identificar el carcter carcter deseable en el resistencia a insectos organismo de origen en el organismo de origen, la bacteria del suelo Bacillus thuringiensis (Bt) 2.Encontrar el gen 2. Encontrar al gen que responsable del lleva las instrucciones carcter deseado (gen para esta caracterstica, de inters), aislarlo y aislarlo y caracterizarlo. caracterizarlo. 3.Combinar dicho gen 3. Combinar este gen con otros elementos con otros elementos necesarios (vector) genticos para que sea para que ste sea funcional en una planta: funcional en el especialmente una organismo receptor secuencia promotora (y ligarlo a un vector adecuado para transformar plantas) 4.Transferir el gen de 4. Transferir este gen a inters, previamente clulas de maz introducido en el (organismo receptor). vector adecuado, al organismo receptor. 5. Crecer y reproducir 5. Identificar las clulas el organismo receptor, de maz que recibieron ahora modificado el gen (clulas genticamente. transformadas) y regenerar, a partir de estas clulas, una planta adulta resistente a insectos. Metodologa Tcnicas de Ingeniera Gentica o del ADN Recombinante

La obtencin de un organismo transgnico mediante tcnicas de ingeniera gentica implica la

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participacin de un organismo que dona el gen de inters y un organismo receptor del gen que expresar la nueva caracterstica deseada. Por ejemplo, para el caso particular de la produccin de una variedad de maz que resista el ataque de insectos, el organismo dador es la bacteria del suelo denominada Bacillus thuringiensis (Bt) de la cual se extrae el gen que determina la sntesis de la protena insecticida, y el organismo receptor del gen es la planta de maz. Las etapas y tcnicas involucradas en este proceso seran: 1.Corroborar que existe un gen que codifica para la caracterstica de inters. Cuando se encuentra una caracterstica en un organismo que resulta interesante para transferir a otro organismo debe verificarse que es producto de un gen. Se identifica el gen de inters por medio de cruzamientos a partir de una caracterstica que se expresa, y se verifican las proporciones mendelianas (ver Cuadernos 40 y 41). Si la caracterstica se atribuye a una protena, que es producto directo de un gen, ser ms sencillo transferir esa caracterstica a un organismo que no la tiene. 2.Clonar el gen de inters. Clonar un gen significa tenerlo puro en el tubo de ensayos, o mejor an, dentro de un vector (una molcula mayor de ADN que permite guardar fragmentos de ADN en forma estable y prctica por ms tiempo). La tarea de clonar un gen involucra varias tcnicas i) Extraccin de ADN; ii) Bsqueda de un gen entre la mezcla de genes del ADN; iii) Secuenciacin; iv) Construccin del vector recombinante. El ADN de inters se inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o circulares en las cuales se puede guardar (clonar) un fragmento de ADN. Los ms usados son los plsmidos de origen bacteriano.

Los plsmidos pueden extraerse de las bacterias e incorporarse a otras, a travs del proceso de transformacin. Los plsmidos fueron modificados por los investigadores para ser empleados

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como vectores (vehculos). As, el gen de inters puede insertarse en el plsmido-vector e incorporarse a una nueva clula.

El desarrollo de estas tcnicas fue posible en gran medida por el descubrimiento de las enzimas de restriccin. Las enzimas de restriccin reconocen secuencias determinadas en el ADN. De esta manera, conociendo la secuencia de un fragmento de ADN, es posible aislarlo del genoma original para insertarlo en otra molcula de ADN. Hay muchas enzimas de restriccin obtenidas a partir de bacterias y que sirven como herramientas para la ingeniera gentica.

Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4, 6 o ms bases y cortan generando extremos romos o extremos cohesivos. Estos extremos, generados en diferentes molculas de ADN, pueden sellarse con la enzima ADN ligasa y generar as una molcula de ADN nueva, denominada recombinante. Para tener gran cantidad y fcil disponibilidad del ADN de inters, el vector se inserta dentro de bacterias (E. coli), las cuales crecen fcil y rpidamente. O sea, la bacteria se utiliza como multiplicadora del vector, y por ende del inserto de inters. Esta es una etapa de amplificacin del ADN para poder tener gran cantidad para secuenciarlo, caracterizarlo, y luego poder hacer con l ADN recombinante.

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En placas de Petri se cultivan las bacterias. Se originan colonias de bacterias iguales (clones). Las bacterias transformadas, que incorporaron el plsmido y el gen de inters, se seleccionan por medio de antibiticos y por reacciones con indicadores de color. 3.Caracterizar el gen de inters. A partir de conocer la secuencia del gen se puede, mediante bioinformtica, comparar esta secuencia con las de genes ya conocidos para determinar a qu gen se parece, y se le asigna una posible funcin. Una vez predicha la funcin del gen clonado por medio de anlisis informtico, se debe proceder a confirmar la funcin real in vivo, o sea corroborar que en un sistema biolgico funciona acorde a lo que se prev. Para ello se suele transferir el gen a un organismo modelo, en el cual se pueda expresar el gen y medir su funcin. En el ejemplo del maz, el gen Bt se puede transferir primero a las especies modelo Arabidopsis thaliana y Nicotiana tabacum 4.Modificar el gen de inters. Si as se desea se puede agregar, deletar o mutar secuencias dentro de la regin codificante, y agregar secuencias (promotor, terminador, intrones) para que se pueda expresar en el sistema de inters. Por ejemplo: si se clona un gen Bt de una bacteria para luego ponerlo en maz, se debe agregar un promotor que funcione bien en plantas, es decir, que permita que las clulas vegetales expresen la protena Bt. El promotor es una regin fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar el gen.

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5. Transformacin de un organismo con el gen de inters. Una vez hecha la construccin gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo de transformacin ms indicado para el organismo que se desea hacer transgnico. 6. Caracterizacin del OGM. Una vez obtenido el OGM, se lo analiza desde el punto de vista molecular y biolgico. Para el anlisis molecular se debe demostrar, entre otras cosas, si tiene una (o ms) copias del transgn, y cmo y en qu tejidos se expresa el gen. Para analizar en qu tejido, momento y cantidad se expresa el gen se analiza la presencia del ARN mensajero y de la protena recombinante codificados por el transgn. Para la caracterizacin biolgica, el OGM se analiza desde el punto de vista del objetivo (en este ejemplo, si el maz resulta efectivamente resistente a los insectos) y desde el punto de vista que sea necesario acorde al OGM en cuestin. Si ser utilizado como alimento y se lo cultivar a campo, entonces se deber hacer el anlisis de riesgo alimentario y ambiental. Hasta el momento se ha utilizado la ingeniera gentica para producir, entre otras aplicaciones: Vacunas, por ejemplo contra la hepatitis B Frmacos, como la insulina y la hormona del crecimiento humano, tanto en clulas transformadas y crecidas in vitro como en bacterias recombinantes y animales transgnicos Enzimas para disolver manchas, como las que se usan en los detergentes en polvo, mayormente por medio de microorganismos recombinantes (transgnicos) que crecen en biorreactores. Enzimas para la industria alimenticia, como las empleadas en la elaboracin del queso y en la obtencin de jugos de fruta, entre otras. Plantas resistentes a enfermedades, entre otras caractersticas. TRABAJOS PRACTICOS Extraccin de ADN de levaduras Materiales taza de levadura (de la que se usa para hacer pan) 300 ml de agua fra 4 cucharaditas de sal fina dos chorros de jugo de limn colador de t tres cucharaditas de alcohol dos gotas de detergente Procedimiento 1. Mezclar media taza de levadura con 150 ml de agua fra, _ de cucharadita de sal y dos chorros de jugo de limn. 2. Agitar suavemente (para que se abran las paredes de las clulas). 3. Pasar la mezcla por un colador de t y conservar la pulpa. 4. Repetir el filtrado y conservar nuevamente la pulpa.

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5. Preparar 150 ml de agua fra con _ cucharadita de sal, tres cucharaditas de alcohol y dos gotas de detergente. 6. Agregar la pulpa y mezclar (el detergente disuelve el ADN). 7. Revolver suavemente durante 20 minutos. 8. Agregar 3 cucharaditas de sal y agitar 10 minutos ms. 9. Dejar reposar hasta que se forma un precipitado slido (se tira). Conservar el lquido. 10. Diluir el lquido con tres veces su volumen de alcohol. 11. El ADN precipita en el fondo del vaso en forma de finas hebras blancas. Sugerencia para el prctico: Si algn grupo quiere traer algn otro producto de la verdulera para extraer su ADN, se sugiere que no sea muy colorido (por ejemplo, repollo colorado, aj morrn) para que no opaque la visin del ADN ni muy duro (zanahoria cruda, poroto de soja, granos de trigo, etc), porque se dificultara

2. Extraccin de ADN vegetal Los estudiantes extraern ADN de bananas licuadas con agua. Una parte de esta mezcla de banana, luego es tratada con shampoo y sal, mezclada durante 5-10 minutos, y luego escurrida a travs de un filtro de caf. A lo filtrado se le agrega alcohol fro y es ste el momento cuando el ADN de la solucin de banana se precipita y se hace visible. El detergente disuelve los lpidos (molculas grasas) y las protenas de la membrana celular, rompiendo las uniones que mantienen la integridad de la misma. De esta forma se libera el contenido celular. Luego, el detergente forma complejos con los lpidos y las protenas, permitiendo que los mismos sean separados del ADN por filtracin. As se libera el ADN. La sal permite que el ADN precipite en una solucin fra de alcohol y que las cadenas de ADN no se corten. Nota: se recomienda que el material vegetal utilizado sea con poca coloracin para facilitar la observacin de los resultados, como ser, bananas o cebollas. En este caso se har extraccin de ADN de banana. Al final de la gua prctica se sugiere una serie de preguntas para analizar con los alumnos los resultados de la experiencia. Materiales: 1 tazas o vaso de plstico Licuadora Una cuchara plstica para medir y mezclar 2 filtros de papel de caf N 2 (conos) 20 ml de agua destilada Shampoo de color claro 1 banana Sal de mesa, con o sin Iodo

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1 pipeta de transferencia plstica o un gotero mdico 1 tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol o 91% de alcohol isoproplico 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur Procedimiento para la extraccin del ADN Preparar una solucin de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo (detergente) mediante los siguientes pasos: 1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml). 2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solucin se mezcle. 3. En una taza, preparar una solucin consistente en una cucharadita de t de shampoo y dos pizcas de sal. 4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada 5. Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de plstico evitando formar espuma. 6. A la solucin preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de t de la mezcla de banana del paso 1. 7. Mezclar la solucin con la cuchara por 5-10 minutos. 8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solucin de banana, otro miembro pondr el filtro N 2 de caf dentro de otra taza de plstico. Doblar el borde del filtro alrededor de la taza para que el filtro no toque el fondo de la taza. 9. Filtrar la mezcla vertindola dentro del filtro y dejar que la solucin drene por algunos minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear. 10. Tomar un tubo de ensayo con alcohol fro. Para mejores resultados el alcohol debe estar tan fro como sea posible. 11. Llenar la pipeta plstica con la solucin de banana y agregarla al alcohol. El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los componentes, excepto el ADN, permanecen en la solucin mientras el ADN precipita en la capa de alcohol. 12. Dejar la solucin reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el tubo de ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de alcohol. 13. Cuando se obtienen buenos resultados, habr suficiente ADN para levantar con una varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya sido calentada en la punta para formar un gancho, se puede recuperar (tomar) algo de ADN. El ADN tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso.

3. Clonacin de plantas en la escuela En esta actividad se propone realizar con los alumnos algunos ensayos de propagacin de plantas. Material de trabajo Plantas: Begonia, Hiedra, Bulbos y Tubrculos (tulipanes, cebollas,

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papas, batatas). Sustrato (turba, perlita) o tierra con nutrientes Recipientes (vasos, macetas) Hormona enraizante (se consigue en viveros) Agua Horquilla de alambre o estaca de madera Herramientas de jardinera Termmetro Procedimiento: Se recomienda dividir al curso en pequeos grupos y que cada unos de ellos realice la multiplicacin de algn vegetal a eleccin (pueden ser los aqu sugeridos u otros). Siempre es recomendable realizar varias rplicas del experimento para prever posibles dificultades que surjan, y para comparar resultados o probar diferentes variables (por ejemplo, luz o temperatura). Multiplicacin de Begonia: se puede realizar fcilmente por esquejes de hoja. 1. Cortar trozos de hojas (cada trozo debe llevar como mnimo un nervio principal) o emplear hojas enteras a las cuales se les da unos pequeos cortes en los nervios principales. 2. Colocar encima de un sustrato compuesto por turba y perlita. 3. Para el enraizamiento la temperatura debe ser de 25-28 C. Un esqueje puede dar de 1 a 4 brotes adventicios, y enrazan a 25 C en unas semanas. 4. Requiere abundante luz, pero no la insolacin directa. Fuente: http://www.terra.cl/ Multiplicacin de la Hiedra: Para la propagacin de esta planta 1. Cortar el segmento terminal de una rama (de entre 7 y 15 cm.) por debajo de un nudo. 2. Retirar las hojas de la rama excepto una o dos en el pice. 3. Colocar en un recipiente con agua. 4. Cuando aparecen races pasar la planta a maceta o a tierra directamente. Multiplicacin de Bulbos y Tubrculos: Los tulipanes, cebollas (bulbos), papas y batatas (tubrculos) pueden reproducirse a partir de estas estructuras de reserva. 1. Antes de plantar los bulbos lo mejor es colocarlos en el sitio deseado segn la separacin de plantacin que se quiera. 2. Despus de haber hecho un hoyo con una palita se pueden plantar los bulbos a la profundidad debida (que la base del bulbo quede a una profundidad que sea el doble del tamao del bulbo) con el punto de crecimiento hacia arriba. 3. A continuacin se echa tierra encima y se presiona ligeramente. Las papas y cebollas tambin echan races y tallos al colocarlas semisumergidas en un recipiente con agua, para luego poder transplantarlas a tierra.

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Resultados Se propone realizar un cuadro como el que sigue para el registro ordenado de los resultados: Tipo de planta Caractersticas de la planta Mecanismo de reproduccin asexual rgano vegetativo de origen Condiciones (medio de cultivo, luz, temperatura, etc.) Observaciones (Fecha, cambios observados, plantas sobrevivientes, etc.) Da 1 Da 2 - Da 3 Da 4 - Da 5 - Da 6 Conclusiones Realizar una puesta en comn de los diferentes grupos y analizar: a. en qu casos se logr la multiplicacin de la planta, cuntas plantas sobrevivieron b. cmo fue el proceso de desarrollo de la nueva planta (estructuras que se desarrollaron) c. cules fueron las dificultades en la realizacin de la experiencia d. cules son las condiciones ms adecuadas para el crecimiento de cada tipo de planta (comparar entre los diferentes tipos de plantas) e. qu caractersticas presenta la nueva planta respecto de la planta original f. cmo se explica la respuesta a la pregunta anterior? Se sugiere que cada grupo presente un Informe de Laboratorio para explicar la experiencia realizada, mostrar los registros de datos, los resultados y las conclusiones a las que llegaron.

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TRABAJO 1. Realizar un ensayo de 3 hojas de cada tema propuesto, para ello utilizar la informacin que se le enva como base: a. Clonacin b. Enzimas de restriccin c. ADN recombinante d. Aplicaciones prcticas de la ingeniera gentica 2. Realizar las practicas en el laboratorio de las tres practicas propuestas y entregar un informe con sus resultados. NOTA: EL TRABAJO SE ENTREGARA EL SABADO 07 DE JULIO DEL 2012 CON SU CORRESPONDIENTE EVALUACION ESCRITA.