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Cultivo de Protoplastos

Cultivo de Protoplastos

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Publicado porYessenia Leon
PRESENTACION DE EXPOSICION DE CULTIVO DE PROTOPLASTOS
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 Yessenia

León  Alexis Ortega  Horacio Santiago  Guillermo Méndez  Eduardo Guzmán

CULTIVO DE PROTOPLASTOS

por proceso mecánico o enzimático. Membrana plasmática completamente expuesta. .Protoplasto:      Célula vegetal desprovista de pared celular. Células vegetales que han sido separadas de su pared celular mediante un tratamiento enzimático o mecánico y adoptan forma esférica en el medio de cultivo. permite manipulación de esas células. Estado transitorio. Mantiene potencialidades de células vegetales completas.

   1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por métodos mecánicos. 1971 Regeneración de plantas a partir de protoplastos. Sabias que!! . 1960 Aislamiento de protoplastos de plantas superiores con degradantes de pared celular.

plantas adultas. de híbridos por fusión de .  Pueden multiplicarse y desarrollar estructuras similares a embriones y desde ellos.  Manipulaciones genéticas.  Estudio de procesos fisiológicos y bioquímicos.APLICACIONES  Producción protoplastos.

 Adecuada composición del medio.Para el éxito del cultivo  Tipo y edad del material de origen de los protoplastos.  Sistema de cultivo y la densidad de los protoplastos contenidos en él. .

. En células jóvenes es posible manejar fácilmente la inducción y el mantenimiento de la actividad mitótica que en las células altamente especializadas.

SISTEMAS DE CULTIVO  MEDIO LÍQUIDO  MEDIO SÓLIDO .

en las cajas petri. . en capas delgadas.MEDIO LÌQUIDO MEDIO SÓLIDO  Se usa colocándolo en capas delgadas de un medio de 50 a 250 uL.  Se usa mezclando en él los protoplastos cuando tenga de 3540°C. depositándolo.

.Frecuentemente los protoplastos se cultivan en medio líquido y las células en división o las microcolonias derivadas se cultivan en medios sólidos.

Se usan generalmente azúcares. y   Las auxinas también pueden ocasionar la vacuolización y ruptura de los protoplastos. . para la división celular.ESTABILIZADORES OSMOTICOS y REGULADORES DE CRECIMIENTO  Para evitar el estrés celular y como resultado una baja eficiencia del cultivo. Generalmente requieren auxinas citocininas.

METODOLOGÍA 1. Determinación de viabilidad 4. Aislamiento y factores que lo afectan 2. Cultivo 5. Regeneración . Purificación 3.

Las preparaciones comerciales de dichas enzimas contienen además proteasas.1. Método enzimático: Consiste en la incubación de las células en una mezcla de enzimas que degradan la pared celular: celulasas. es un procedimiento tedioso y presenta una aplicabilidad limitada. hemicelulasas y pectinasas.  . Consiste básicamente en un choque osmótico para producir plasmólisis celular y ruptura de la pared. nucleasas y lipasas. Los protoplastos se liberan de las células rotas mediante el restablecimiento de su nivel osmótico. Aislamiento de protoplastos  Método mecánico: Posee un bajo rendimiento.

.

Factores que afectan la producción y viabilidad de los protoplastos      El tipo de enzimas que se usaran. La composición del medio en que actuarán. Tratamientos pre-enzimáticos Osmolaridad . El material de origen de los protoplastos.

incluye la eliminación de los enzimas por lavado y el paso a un medio de cultivo para la recuperación de la pared y la promoción de las primeras divisiones celulares de las células individuales obtenidas de los protoplastos.2. . Purificación  Es la recuperación de los protoplastos.

Los protoplastos son capaces de regenerar su pared celular después de algunos días de cultivo del medio adecuado.Hibridación somática  En biotecnología. la hibridación somática es el proceso por el cual se obtienen plantas híbridas que contiene ambos núcleos y ambos citoplasmas a partir de la fusión de células o de protoplastos.  .

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.  Se realizan tratamientos y la selección del material frente a diversos agentes. Determinación de la viabilidad  Toma de oxigeno.  Actividad fotosintética  Tinciones  Medio de cultivo específico y complejo  Se incuba el material a 25°C en condiciones de oscuridad de 5 a 7 días.3.

Extractos naturales como:      Extracto de levadura Aminoácidos Vitaminas Ácidos orgánicos Azucares . Estabilizadores osmóticos.4. Cultivo      Medio de cultivo: MS. Reguladores del crecimiento. B5 (líquido o sólido) Osmolaridad Densidad de plaqueo Condiciones de almacenamiento Material vegetal     Sales inorgánicas.

 Se cultivan los microcallos obtenidos tras la división celular. la composición del medio de cultivo. se cambia en ella la densidad poblacional. se hace menos exigente y la incubación se hace con luz. .

5.  . Regeneración  Regeneración de plántulas a partir del tejido de callo. Por ultimo se trasplantan y aclimatan las plantas obtenidas en invernadero. mediante modificaciones de la composición hormonal-mineral del medio de cultivo.

.

*GRACIAS POR SU ATENCIÓN* .

http://webapp. et al (2001) Cultivos de tejidos vegetales: México.pdf  Cultivo . de protoplastos capitulo 10.org/biotechnology /cultivo_tejidos/capitulo10_parte1y2.ciat.cgiar. Editorial Trillas.Referencias  Daniel V. Hurtada.

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