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8792836 Banco de Sangre Control de Calidad Sueros Hemoclasificadores[1]

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U.C.

S FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ

PRACTICA
CONTROL DE CALIDAD EN SUEROS HEMOCLASIFICADORES OBJETIVO • E l alumno identificará cual es el propósito de realizar a cabo un buen control de calidad de los reactivos antisueros hemoclasificadores en el banco de sangre. Fundamento: Avidez. Es la intensidad global de la interacción entre 2 moléculas, como el antígeno – anticuerpo, la avidez depende de la afinidad y la valencia de las interacciones, por consiguiente la avidez de la IgM por un antígeno multivalente puede ser muy superior a la avidez de una molécula de IgG dimérica por ese mismo antigeno. La especifidad se atribuye a los receptores para el antígeno de los linfocitos, que pueden unirse a una molécula, pero no a otra que presente tan sólo mínimnas diferencias estructurales respecto ala primera.( 1) GENERALIDADES: La calidad puede definirse como término subjetivo que se utiliza para señalar si una persona , objeto o servicio es bueno o malo, el término calidad se hace objetivo, si se fijan las especificaciones que deben llevar un producto o servicio, para decir si tiene calidad. A su vez el control de calidad se divide en: 1. Control de calidad interno: procedimiento que utiliza los resultados de un solo laboratorio con el propósito de controlar la calidad. 2. Control de calidad externo: procedimiento que utiliza los resultados de varios laboratorios que analizan la misma muestra, con el propósito de controlar la calidad. (2) CONTROL DE CALIDAD DE ANTISUEROS Y CÉLULAS DE FENOTIPO CONOCIDO: Dependiendo de la complejidad de las actividades que se realicen en los laboratorios de cada banco de sangre, así serán los antisueros y células de fenotipo conocido que se emplearán en cada jornada de trabajo, siendo las básicas: los antisueros y células de fenotipo conocido.

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Los reactivos son los elementos más importantes para llevar a cabo las pruebas que se realizan en inmunohgematologia y éstas serán tan exactas como lo sean los reactivos. El control de calidad para los sistemas ABO, Rho/Hr y para suero de coombs deben realizarse todos los días en cada jornada. Para estudios que no se realicen diariamente, se debe realizar los controles cada vez que esa prueba se lleve a cabo. Así mismo los medios de reacción en donde se empleen estos materiales, deben ser vigilados continuamente para asegurar la consistencia, sensibilidad y exactitud, lo que se logra con una vigilancia en control de calidad de los reactivos. NORMAS GENERALES: 1. Recepción de reactivos: 2. Verificar la apariencia física del empaque, en el sello de garantía y la caducidad: ¿presenta alteraciones durante el traslado y/o almacenamiento? 3. Verificar características físicas del reactivo: color, transparencia, presencia de hemólisis y volumen. 4. El almacenamiento debe ser de acorde con las indicaciones del productor. 5. Leer y almacenar los instructivos hasta terminar el lote. 6. Control de calidad de los diferentes sueros y células reactivo

AVIDEZ: • • Es una medida de la capacidad de unión y la velocidad con el cual el anticuerpo se combina con su correspondiente antígeno. Las pruebas de avidez se realizarán de rutina a los antisueros en uso diariamente antes de trabajar y a una muestra de antisuero de cada nuevo lote.

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TIEMPO PROMEDIO DE AVIDEZ PARA LOS DIFERENTES SUEROS Y CELULAS REACTIVO ANTISUERO células Tiempo promedio de reacción 15 seg 20 seg 15 seg 30 seg 60 seg 60 seg 30 seg 15 seg 15 seg 15 seg 15 seg 20 seg 15 seg 30 seg 45 seg 30 seg

Anti A

Anti lectina Coombs Anti lectina Anti B Anti AB

A1 A2 A1B A2B –H A2 Células sensibilizadas A1 A1 B A1B A2B A1 A2 B A1B A2B

Anti D

ESPECIFICIDAD: Es la reactividad selectiva de un anticuerpo con su correspondiente antígeno, evitando el que llegara a reaccionar con otras, por lo que cada antisuero se hace reaccionar con los diferentes células y se observara si hubo aglutinación inespecífica. El grado de reacción se califica como fuerte, débil o negativo. Esta técnica puede realizarse en placa o tubo empleando eritrocitos al 2-5% para determinar la especificidad del sistema ABO y Rho. Esta prueba se realizará diariamente a los antisueros de rutinas, antes de empezar a trabajar y a una muestra de cada nuevo lote que llegue. ESPECIFICIDAD PARA LOS DIFERENTES SUEROS Y CÉLULAS REACTIVO

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REACTIVO ANTI A ANTI A1 LECTINA ANTI B ANTI AB ANTI H ANTI D CONTROL Rho

CEL A1 + + + -

CEL.A2 + + +

CEL.B + + -

CEL O -

R1r

+ -

TITULACION: Esta prueba mide la máxima dilución del antisuero a la cual es capaz de reaccionar con sus respectivas células. El resultado se expresa como el recíproco de la máxima dilución que de una aglutinación de 1+ ante un volumen constante de eritrocitos al 2% de células . A1, A2, B , R1r células sensibilizadas y no sensibilizadas Se recomienda correr la prueba conjuntamente con antisueros de referencia. Se anota la lectura por grado de aglutinación de 1+ a 4+( 2)

VALORES REFERENCIA DE TITULACIÓN: ANTISUERO AntiA Anti A1 lectina GRUPO A1 A2 A1B A2B B A1B A2B TITULO MINIMO 1:256 1:128 1:128 1:64 1:256 1:256 1:256 1:256

ANTI B

ANTI AB

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A1 B A2 A1B A2B ANTI H LECTINA Coombs ANTI”RhO” Material: A2 CEL SENSIBILIZADAS R1R2

1:256 1:128 1:256 1:64 1:8 1:32 1:64

10 tubos de ensaye de 13x 100 30 tubos de ensaye 12 x 75 5 Pipetas pasteur Antisueros anti A,Anti-B, Anti-Rh Muestra biológico: Eritrocitos A y B. Técnica 1. 2. 3. 4. 5. AVIDEZ Marcar una placa de vidrio con la letra A, B, AB, Rh Colocar una gota de eritrocitos al 10% en solución salina isotónica del grupo A, B, AB que le corresponde y una gota de eritrocitos al 40% en albúmina bovina al 22% para Rh. Colocar una gota de antisuero con los eritrocitos con un aplicador de madera, al mismo tiempo accionar el cronometro. Enseguida, dar una placa un movimiento rotatorio con las manos y estar atento en que aparece la aglutinación, en ese momento detener el cronometro. Anotar el tiempo de avidez de cada antisuero visualizando los inicios de aglutinación.

TITULO Anti sueros ABO 1. hacer una suspensión al 2% en solución salina isotónica de células A, B, AB. 2. Colocar en una gradilla una serie de 11 tubos de ensaye por cada reactivo a probar 3. marcar los tubos como p, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024

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4. agregar acada uno de ellos, excepto el primero, 0.1 ml de diluyente de suero 5. agregar 0.1 ml del antisuero a probar al tubo y al P unicamente. 6. mezclar perfectamente el contenido del tubo 2 y transferir 0.1 ml de esa solución al tubo siguiente, repetir este procedimiento hasta el ultimo tubo. 7. desechar 0.1 ml del ultimo tubo 8. agregar 0.1 ml de células conocidas a todos los tubos 9. mezclar y centrifugar 25 segundos a 3500 rpm 10. leer y anotar los resultados 1. 2. 3. 4. 5. 6. Antisuero D Preparar una suspensión de eritrocitos Rh + al 2% con albúmina bovina Preparar una serie de 8 tubos de 12x75 marcados como p, 2, 4, 8, 16, 32, 64 y 128 respectivamente Agregar acada uno de ellos, excepto al tubo p, 0.1 ml de albumina bovina Proceder como se indica desde el paso 5 de la técnica para ABO Centrifugar 60 segundos a 3500 rpm Leer y anotar resultados. OBSERVACIONES Y RESULTADOS AVIDEZ

ERITOCITOS TIEMPO

A 10% 6 segundos

B 10% 5 segundos

A Rh+ (40%) B Rh+ 40% 7 segundos 12 segundos

TITULO

Antisueros ABO Características del reactivo A Nombre de la casa comercial: bio-rad Fecha de caducidad. 28-febrero-2002 Lote A

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B Características del reactivo B Nombre de la casa comercial:biorad Lote: Fecha de caducidad: 28-febrero-2003

Antisuero D Rh Nombre de la casa comercial:

Lote fecha de caducidad: 30-julio-2002

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CONCLUSIONES: • En esta practica verificamos el control de los sueros hemoclasisficadores como nos dimos cuenta algunos de los reactivos cuentan con un buen tipo de avidez y titulación excepto el a que presenta una fecha de caudicidad muy diferente al del antisuero anti- rh que conto con un tipo de titulación hasta, 1024 , tomando en cuenta que su titulo mínimo es 1: 64. El reactivo de suero anti- A presento un titulo hasta 1024, tomando en cuenta que su titulo mínimo es hasta 1: 256 . El caso de estos antisueros que pasan sus títulos mínimos, nos podrían causar falsos + en algún caso de urgencia a la hora de realizar un grupo sanguíneo, por eso es importante revisar el etiquetado del reactivo , observando si no presente alguna alteración , mantiene su estado de almacenamiento y conservación recomendado.

• •

REFERENCIAS:

1. Abbbas,, K. A, Inmunología celular y molecular, cuarta edición, 2002, Editorial Mc Graw Hill, paginas: 490,497. 2. Castañeda , L , La calidad la hacemos todos, quinta reimpresión , 1978, ediciones poder, paginas: 8 3. Radillo, G.A, Medicina Transfusional, Editorial prado,1999, México, pagina

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