MANIPULACION DE RATONES PARA USO EXPERIMENTAL Y DISECCION DE ORGANOS Universidad de Sonora; Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud; Departamento de Ciencias

Qumico Biolgicas; Qumico Bilogo Clnico; Laboratorio de Integracin de Biologa Celular; Durazo Molina Obedaid, Yon Verdugo Armando. ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ RESUMEN Se realizara la recoleccin de sangre de un ratn macho de uso experimental y su sacrificio para la posterior diseccin de sus rganos. INTRODUCCIN Muchos de los conocimientos de anatoma, fisiologa e histologa se adquirieron a travs de experimentaciones en animales. En el siglo XIX surgieron dudas acerca el derecho que tiene el hombre de someter a los animales a experimentos y a diversos procedimientos, muchas veces dolorosos. La primera ley que protege a los animales contra crueldad fue decretada en el Reino Unido en 1876 y posteriormente los gobiernos de otros pases aprobaron leyes similares. Durante la segunda mitad del siglo pasado se formaron grupos opuestos al uso de animales para fines experimentales y otros, representados en su mayora por cientficos y representantes de la industria farmacutica, que defienden el derecho de usarlos. Cada ao se utilizan millones de animales en el mundo para la experimentacin cientfica. Los animales son usados primordialmente en las siguientes areas: experimentacin cientfica, pruebas de constatacin, diagnostico, elaboracin de vacunas y enseanza. La Secretara de Agricultura, Ganadera, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin, public en el Diario Oficial del Gobierno Mexicano el 28 de junio de 2001 la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999: Especificaciones tcnicas para la Produccin, Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio. Entre los considerandos se especifica: Que para lograr resultados confiables en la investigacin cientfica, la docencia biomdica y el control de calidad, as como utilizar el menor nmero de animales posibles, es necesario contar con animales de laboratorio en condiciones optimas. Uno de los objetivos de esta norma es: Establecer y uniformar las especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Esta norma especfica las caractersticas que deben tener los bioterios privados e institucionales en cuanto a su ubicacin, ventilacin y reas de actividades; la adquisicin de los animales, el tamao de las jaulas para las diferentes especies; los ingredientes de los alimentos; las obligaciones de la institucin para vigilar el buen funcionamiento, la higiene y el bienestar animal; el tipo de personal con el que debe contar, la preparacin y los conocimientos que ste, tanto tcnico como acadmico debe tener. Tambin explica las indicaciones acerca del traslado de animales, caractersticas del confinamiento y del tipo de transporte, cuidados durante el mismo. En la norma se encuentran adems

lineamientos referentes a tcnicas experimentales, anestesia, analgesia, administracin de fluidos y de otras substancias, la obtencin de sangre y los mtodos permitidos de eutanasia. Finalmente explica los mtodos de bioseguridad y salud ocupacional para el personal. PROCEDIMIENTO Materiales y Reactivos - Microtubos de plstico (eppendorf) (6 tubos / equipo) - Guantes de ltex - Protectores de ojos - Equipo de diseccin (que contenga por lo menos dos tijeras y dos pinzas) - Sujetador para ratn - Bolsa de plstico - Base de poliestireno de aprox. 30 cm x 30 cm y 1 pulgada de grosor - Toallas de papel absorbente - 2 navajas (nuevas) con lomo de acero - Etanol al 70% Animales - Ratn macho por equipo (mnimo 8 semanas de edad) Manejo del ratn Los ratones usualmente son sostenidos por la base de la cola, especficamente en el rea de la parte media hacia la base. Con este sencillo mtodo de sujecin pueden ser transferidos de una jaula a otra, examinados y sexados. Obtencin de sangre de la cola del ratn Una vez sujetado el ratn, se realiza un corte pequeo de la cola del animal (no mayor a 1cm). Se mantendr en forma vertical al animal de tal manera que se facilite la recoleccin de la sangre. Se espera obtener de 200 a 300 L de sangre por ratn. Esperar a que se forme el coagulo (10 a 20 min) y centrifugar la sangre (2000 xg. x 10 min. a temperatura ambiente). El suero se trasfiere a un tubo limpio y se congela a -20 C hasta su uso. Eutanasia (tomado de NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la reproduccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio). 9.5.3.2. Dislocacin cervical. 9.5.3.2.1. La dislocacin cervical manual ejecutada apropiadamente induce inconsciencia rpidamente, se aplica porque no contamina los tejidos con sustancias qumicas. Se acepta su aplicacin en: ratones, ratas que pesen menos de 200gr. Y conejos que pesen menos de 1 kg. 9.5.3.2.2. En la rata y ratn, se toma al animal por la base de la cola con una mano para su acomodo y se coloca sobre una superficie donde el animal se sostenga, con los dedos ndice y pulgar de la otra mano o bien en su defecto un instrumento delgado pedo rgido,

se colocan sobre la base del crneo y se ejerce traccin hacia travs de la base de la cola, para ocasionar la dislocacin cervical. Diseccin de rganos Linfoides Se coloca al ratn sobre la base de poliestireno utilizando agujas para sujetarlo. Se desinfecta con etanol al 70% el rea abdominal del ratn. Utilizando el equipo de diseccin se realizara aproximadamente de 3 cm. En la piel y se retirara parte de la piel con la ayuda manual. Se realizara una incisin de 3cm en la pared peritoneal (musculo). Se proceder a identificar baso y timo. Posteriormente se identificara y se har la diseccin de ndulos linfticos poplteos y placas de Peyer. REULTADOS No se obtuvieron buenos resultados en la recoleccin de la sangre pues el ratn con el cual se realizo la practica era muy pequeo y no se obtuvo el sugerido para la prctica, tambin pudo haber sido que no recolectamos la sangre en el tiempo sugerido, tambin le colocamos la inyeccin intraperitoneal con colorante.Al momento de llevar a cabo el dislocamiento cervical nos dimos cuenta que no se necesitaba ya que con la manipulacin del ratn y su cuerpo tan pequeo, este fue asfixiado, hubo una buena diseccin y observacin de rganos del ratn ya que no se dao ningn rgano y se pudo diferenciar fcilmente.

DISCUSIN El sacrificio de animales es una prctica necesaria para hacer estudios cientficos y avanzar en conocimientos educativos, pero no por eso deja de ser menos polmica, ya que atentar contra animales no es una tcnica bien vista, desde cualquier enfoque. Se acudi a la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio, en donde se consultaron los medios de eutanasia apropiados para los animales, cuyo fin es provocar el menor sufrimiento posible en estos, adems de especificaciones al cuidado previo que se les debe dar. Si bien es cierto que el sacrificio de animales puede ser considerada una tcnica cruel, tambin debemos tener en cuenta que gracias a ello, los avances y conocimientos cientficos han sido considerables, a esta prctica debemos muchas de las explicaciones y curaciones de los diversos males que aquejan a la sociedad da con da. CONCLUSIONES Con la manipulacin del ratn el objetivo de la prctica fue cumplido, ya que conocimos algunas de las reglamentaciones para el uso y manejo de animales de laboratorio as como la eutanasia adecuada para ellos, especificadas en la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999. Adquirimos la habilidad de obtener muestras biolgicas del ratn, as como tambin, la tcnica de sacrificio apropiada del mismo para su posterior diseccin. Es importante mantener un ambiente propicio para el manejo de los animales, adems de saber tratar todos los residuos generados durante la prctica. Tambin, unos de los aspectos primordiales que debemos tener en cuenta son las medidas de higiene adecuadas, no solo para un buen resultado en el estudio, sino tambin, para nuestra propia seguridad. BIBLIOGRAFIA Artculo: Animales de laboratorio y la Norma Oficial Mexicana (NOM-062-ZOO1999); Aline S. de Aluja (Departamento de Patologa, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autnoma de Mxico); Gaceta Medica de Mxico, Vol. 138; Numero 3; Mayo-Junio 2002.