Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis

Microscopía - Normas Técnicas

ARGENTINA 2000

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AUTORIDADES

PRESIDENTE DE LA NACION Dr. Fernando DE LA RÚA MINISTRO DE SALUD Dr. Héctor José LOMBARDO SECRETARIO DE ATENCIÓN SANITARIA Dr. Arnoldo Víctor CASTILLO SUBSECRETARIO DE PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN Dr. Javier Oscar VILOSIO DIRECCIÓN NACIONAL DE MEDICINA SANITARIA A/C Dr. Francisco MARTINI DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA A/C Dr. Anibal REINALDO SUBSECRETARIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA Dr. Ernesto PODESTÁ ADMINISTRACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS E INSTITUTOS DE SALUD “DR. CARLOS G. MALBRAN” A/C Dr. Andrés RUÍZ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Dra. María Inès DEMITRI INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “DR. EMILIO CONI” A/C Dr. Alberto MARCHESE

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Argentina.MICROSCOPÍA: NORMAS TÉCNICAS Documento elaborado sobre la base de un borrador preparado por: OMAR LATINI Comité de redacción: LUCÍA BARRERA OMAR LATINI MARÍA DELFINA SEQUEIRA ELSA ZERBINI Santa Fe. 2000. 3 .

2. Hisopado laríngeo ______________________________________________ 1. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO 1. Lavado bronquial_______________________________________________ 1.1. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO _______________________ 3.3.3.4.3.6.2. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN _______________________________ 2. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO __________________________ 1.1.2. Preparación ___________________________________________________ 2. RECEPCION DE LA MUESTRA __________________________________ LA BACILOSCOPIA________________________________________________ 5 6 6 6 7 7 8 8 9 9 10 11 12 13 13 13 13 14 14 16 18 21 2.1.3.2. PREPARACION DEL EXTENDIDO ________________________________ 2. Precauciones con los colorantes ___________________________________ 2.1.3.3.INDICE INTRODUCCIÓN ____________________________________________________ LA MUESTRA ______________________________________________________ 1.5.1. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN_____________________________ BIBLIOGRAFÍA _____________________________________________________ 22 22 22 23 23 25 27 4 .2. EL ENVASE_____________________________________________________ 1. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS ___ 3.6. CALIDAD DE LA MUESTRA _____________________________________ 1.4. REACTIVOS ____________________________________________________ 2. Inducción de esputo_____________________________________________ 1. LUGAR DE TRABAJO ___________________________________________ 2.7.2. OBSERVACION MICROSCOPICA__________________________________ 2. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO _ 1. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS _______________ NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS ___________________________________________________ 3.4.3. PERSONAL _____________________________________________________ 3. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO ___ 1.3.5.4.2. Lavado gástrico ________________________________________________ 1.

Esta Red no sólo tiene por objetivo garantizar el acceso fácil al diagnóstico. La baciloscopía es la técnica que mejor se adapta a las necesidades del Programa de Control ya que detecta los casos más infectantes. provinciales y municipales. de los cuales 6. reunido en México en 1983. En Argentina se notifican aproximadamente 13. para ello desde hace varias décadas se ha ido conformando la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis de la que participan más de 600 laboratorios de dependencia oficial: nacionales. a solicitud de la Organización Panamericana de la Salud en 1973. de los cuales cerca de un millón mueren por la enfermedad. a los que se agregan laboratorios privados y de obras sociales. hasta que un Comité Asesor de la OPS/OMS. como paso previo a su curación. su tratamiento efectivo y su curación y continúa siendo el método más rápido de diagnóstico. 28 y ° 29/1988). hasta el presente. Sin embargo algunos cambios se han producido. El primer paso para cumplir estos objetivos es contar con laboratorios que le aseguren a los enfermos un diagnóstico rápido. aunque si se toman en cuenta los mayores de 15 años en quienes se aplica sistemáticamente la baciloscopía la oferta de servicio es mucho mayor. 5 . bacteriólogo chileno. puede realizarse en cualquier laboratorio que cuente con un microscopio. que hacen que se crea conveniente actualizar las normas. es económica y puede ser fácilmente estandarizada para garantizar la calidad en todo el territorio nacional. convocado por el Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO). Luis Herrera Malmsten.000 habitantes.000 son enfermos con formas pulmonares que eliminan bacilos con la expectoración y mantienen la transmisión del bacilo mientras no son diagnosticados y tratados adecuadamente. La estandarización de la baciloscopía se basa en normas que garantizan que las técnicas propuestas han sido el producto de amplios ensayos mundiales realizados por organizaciones internacionales como la OPS/OMS y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER). sino también que las técnicas que utilicen sus integrantes sean las más adecuadas a las necesidades de la población y que se realicen con la mejor calidad. es sencilla. Se estima que hay en promedio un laboratorio con microscopio cada 40. especialmente con la asociación de TBC-SIDA. en sus cuatro capítulos. estas nuevas normas fueron adoptadas por la Comisión Argentina de Bacteriología de la Tuberculosis y han sido utilizadas. Esa adaptación fue utilizada durante más de una década en todos los laboratorios del país. 27.(Notas Técnicas CEPANZO N 26. actualizó las normas a las nuevas necesidades de los países de América Latina. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial. seguro y accesible. bacilo productor de la tuberculosis. especialmente en lo que respecta a la toma y conservación de algunas muestras y a la aplicación de normas básicas de bioseguridad que garanticen el trabajo confiado y seguro.INTRODUCCIÓN Mycobacterium tuberculosis. la baciloscopía aun sigue siendo la técnica de elección para el objetivo principal de cortar la cadena de transmisión mediante el diagnóstico de los casos bacilíferos.000 casos anuales. aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente. están infectadas con él. Si bien después de quince años los avances en la tecnología han introducido variantes en la bacteriología. que deben asegurar que cualquier habitante del país pueda acceder al diagnóstico de la enfermedad. se transmite de persona a persona por medio de la tos de los enfermos con lesiones pulmonares abiertas que expectoran bacilos. dos mil millones de personas. aún cuando se cuenta con técnicas de diagnóstico sencillas y tratamientos eficaces. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis y los Programas Provinciales tienen como objetivo principal diagnosticar tempranamente los casos infectantes y tratarlos con esquemas eficaces y modalidades que aseguren una curación cercana al 100%. El primer Manual de Laboratorio utilizado en nuestro país fue una adaptación del Manual de Bacteriología de la Tuberculosis escrito por el Dr.

en este caso. de allí que las muestras que puedan procesarse para diagnóstico o control son muy variadas: esputo. Para ello. El Programa de Control de la Tuberculosis se centra prioritariamente en la detección temprana de estos enfermos. líquido pleural. la muestra de catarro mucopurulento proveniente de pulmón es la que más garantiza que si hay bacilos se puedan observar o aislar. sangre. Entregue al SR el envase de recolección rotulado con su nombre o número de identificación y el servicio que lo solicita. colocada en un envase adecuado.). 1. del fondo del pecho. (Ver Bioseguridad). además de padecer casi siempre enfermedad severa. con rótulos que no se despeguen o con lápiz indeleble. razón por la cual la muestra de mayor rendimiento y la que se procesa con mayor frecuencia en el laboratorio es el esputo. - 6 . Las secreciones nasales. pus de cavidades abiertas. obtenida en cantidad suficiente. La localización pulmonar es la más frecuente debido a que el bacilo necesita una buena presión de oxígeno para desarrollar y lo consigue principalmente en ese órgano que. Cerca del 85% de las tuberculosis tienen localización pulmonar y estos enfermos. Estos datos deben ser escritos en la pared del frasco y no en la tapa para evitar errores. La palabra que define la buena muestra es diferente en cada región y en general el SR la identifica perfectamente (gallo. líquido cefalorraquídeo. tal como un espacio no concurrido del patio del Servicio de Salud. la persona que da las instrucciones debe usar el lenguaje que el paciente entienda. estornudos o al hablar. por otra parte. entendiéndose por tal la que proviene del sitio de la lesión que se investiga. Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo por lo que la enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano. nariz o faringe. etc. faríngeas o la saliva no son buenas muestras. bien identificada y conservada y transportada correctamente. son a su vez los que mantienen la infección pues diseminan los bacilos con la tos. Este capítulo se dedic ará a la toma de muestras de origen pulmonar. orina. 1.LA MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no sólo es necesario que ejecute las técnicas en forma correcta. No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como consultorios médicos o baños. es el primer lugar en el que se instala al infectar al hombre. dejando la obtención de otras muestras para cuando se trate el cultivo.1. Elija un lugar adecuado para que el SR produzca la expectoración: por ejemplo una pequeña habitación bien ventilada y con mucho sol si se dispone de ella o algún lugar abierto que permita intimidad. aunque no deben desecharse pues siempre existe la posibilidad de que los bacilos hayan quedado en la boca. líquido ascítico. CALIDAD DE LA MUESTRA Para el éxito de cualquier análisis de laboratorio se debe contar con una buena muestra. biopsias y otros. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO El hecho más importante es el de comunicar al Sintomático Respiratorio (SR) con mucha claridad qué debe obtener y cómo y dónde hacerlo . sino que cuente con una buena muestra. gargajo.2. pollo.

enfermos siquiátricos o ancianos.1. tratando de arrastrar las secreciones del pulmón. a fin de fluidificar las secreciones y ayudar a su eliminación. en los casos poco frecuentes en que no pueda lograrse pueden utilizarse otras formas tales como la inducción de esputo o la recuperación de secreciones por otros medios. Registre esta característica en el Registro de Laboratorio. Debe recoger en el envase el esputo producido tratando de que entre en su totalidad sin mancharse las manos o las paredes externas del frasco. - - Cuando reciba la muestra. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO Siempre se debe intentar conseguir expectoración espontánea. aconsejar que limpie el frasco con un papel y las manos con agua y jabón. colocando todas las secreciones en el mismo frasco. insista en las instrucciones e indique que recoja otra muestra.Se debe nebulizar con soluciones normotónicas (solución fisiológica) o ligeramente hipertónicas. Si es saliva o secreción nasal no la descarte porque aún así puede contener bacilos.3. 7 . Inducción de esputo . a temperatura apenas superior a la corporal. 1. retenerlo un momento y luego expulsarlo violentamente desde el abdomen. Esta última no es tan buena como el esputo por lo que se aplica sólo a niños. Este procedimiento debe repetirlo otras dos veces. observe por fuera del frasco si la misma es de buena calidad: mucopurulenta o mucosa. En caso de que esto último sucediera. 1.- Instruya al SR indicándole que debe inspirar profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible.3.

baciloscopías de al menos dos muestras espontáneas de esputo para intentar detectar la enfermedad sin procedimientos invasivos y evitar la contaminación innecesaria del broncofibroscopio con bacilos. Lavado bronquial La obtención de esta muestra está reservada a médicos especialistas.Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización y se entrega un segundo frasco para que la persona recoja las secreciones producidas en las 24 horas siguientes. Antes de tomar la muestra deben realizarse. 1. con sonda nasal. razón por la que debe entregarse un frasco al enfermo para que las recoja y entregue en el laboratorio. Siempre que sea factible debe ser cultivada. Si por alguna causa inevitable no es posible. Una vez que la sonda llega al estómago. . . con el paciente en ayunas dado que la ingesta de alimentos hace que la expectoración ingerida pase al intestino. Siempre que sea posible. por lo menos..3. de ser posible.c. Por razones de bioseguridad no es aconsejable utilizar este método a menos que se cuente con sistemas de esterilización adecuados o máscaras descartables y salas de nebulizaciones aisladas.Procesamiento: Para realizar la baciloscopía es necesario centrifugar previamente la muestra durante 20 minutos a 2.3. Las maniobras utilizadas suelen producir expectoración en las 24 horas posteriores.500g. aspire con jeringa sin que la succión provoque daño. . (Ver Bioseguridad).Conservación: coloque el material en el frasco adecuado y envíelo inmediatamente al laboratorio.Envase: el aconsejado para esputo. de tal forma de facilitar el descenso de la expectoración. . . drenaje postural acostando al paciente con la almohada debajo del tórax y la cabeza por fuera de la camilla y más baja. . se debe cultivar este tipo de muestras . por otra parte.Técnica: sondeo gástrico realizado por médico o enfermera con experiencia.Se hace kinesioterapia o. La baciloscopía de lavado gástrico tiene valor relativo ya que habitualmente contiene pocos bacilos y. siempre que tenga el volumen adecuado. 8 . de agua destilada o solución fisiológica estéril y recoja inmediatamente. Normalmente es posible evitar demoras porque la toma de muestra se realiza en forma programada. ya que debe ser procesado en las 6 horas siguientes a la obtención para ser cultivado. ventiladas y soleadas que impidan la transmisión de bacilos por los aerosoles formados. es frecuente que contenga micobacterias ambientales que pueden estar alojadas en el estómago. de longitud adecuada y de diámetro adecuado a la edad del niño. debe neutralizar el material con una solución de bicarbonato de sodio al 10% o fosfato trisódico anhidro al 10% y conservarlo en heladera por no más de 24 horas hasta el momento del envío.Momento de la recolección: por la mañana al despertar. En caso de no obtenerse material inocule 10 a 15 c.3.Número de muestras: al menos tres.2. 1. Si es un lactante es conveniente que no esté presente la madre en el momento de la toma de muestra porque su presencia puede incentivar los movimientos peristálticos. Lavado gástrico Se utiliza para detectar bacilos en el esputo ingerido y alojado en el estómago. .

La segunda muestra la debe conseguir el p aciente en su casa o en la internación por la mañana al despertar (muestra matinal). al tomarla asegura que al menos se pueda analizar una muestra del SR. guantes.Número de muestras: tres hisopados en días consecutivos.Técnica: una vez sentado el paciente solicítele que levante la cabeza. preferentemente en ayunas ya que suele provocar náuseas en el momento de la recolección. ésta puede ser recogida en el momento en que el SR entrega la segunda o bien se debe solicitar una nueva muestra matinal.4. es decir a cualquier consultante que ha estado tosiendo por más de 15 días. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO Como la eliminación de los bacilos por el esputo no es regular y permanente. . Se deben aplicar rigurosos procedimientos de esterilización y lavado del broncoscopio para evitar la transmisión de tuberculosis con dispositivos contaminados y la generación de falsos resultados positivos por la presencia de bacilos remanentes. Si se decide tomar una tercera muestra. Es conveniente procesar esta muestra por cultivo siempre que sea posible para poder detectar el bajo número de bacilos y debido a que las fibras de algodón pueden producir resultados falsos positivos en la baciloscopia. se debe pedir una tercera muestra y también. un cultivo. pida al paciente que tosa e imprima al hisopo un movimiento circular suave tratando de recoger las secreciones de esa zona. .Las salas de fibroscopía y el personal que la realiza deben contar con todos los requisitos de bioseguridad. barbijo o máscara rígida y en lo posible anteojos. Debe ser enviado lo antes posible al laboratorio para su procesamiento.Momento de la recolección: por la mañana. En las condiciones habituales del Programa de Control se considera suficiente obtener dos muestras por SR . Introduzca el hisopo levemente humedecido con agua destilada o solución fisiológica estéril hasta la laringe. . 1.4. 1. De todas formas. La primera muestra debe ser tomada siempre en el momento de la consulta (muestra inmediata) cuando el médico u otro personal del equipo de salud identifican al SR. deben hacerse los mayores esfuerzos para que la persona regrese con la segunda muestra. Si bien la primera suele tener menor rendimiento que la segunda. Hisopado laríngeo A causa del escaso número de bacilos que suele contener esta muestra. El operador debe utilizar guardapolvo largo con mangas. Retire el hisopo tratando de no tocar las partes blandas de la boca e introdúzcalo en el tubo de ensayo.3. 9 . las molestias que ocasiona al paciente y los riesgos potenciales para la persona que toma la muestra. en caso de que ambas fueran negativas y el médico tenga otros elementos para sospechar que puede tratarse de tuberculosis. abra la boca y saque la lengua y tómesela con dos dedos de la mano izquierda cubierta con guantes o bien con un trozo de gasa. .Envase: tubo de ensayo con tapón de algodón conteniendo un hisopo de algodón montado en alambre de acero o varilla de madera flexibles de aproximadamente 30cm de longitud. es conveniente analizar más de una muestra de cada SR para el diagnóstico de la tuberculosis. vivos o muertos. se aconseja utilizar esta técnica cuando no es posible obtener otro tipo de muestra. de ser posible.

10 . para evitar derrames y facilitar la selección de la partícula útil. EN EL MOMENTO MAS ADECUADO PARA EL PACIENTE. que han demostrado ser en general adecuados. para evitar derrames durante el transporte y la producción de aerosoles cuando se abre en el laboratorio. . Lo ideal es entregar el informe dentro de 24 horas de recibida la muestra.Capacidad adecuada: entre 30 y 50 c. sobre todo si sólo va a ser examinado por baciloscopía. debe considerarse que la demora en la entrega de un resultado positivo puede demorar el inicio del tratamiento. el examen debe ser realizado con la mayor premura posible. dentro de una rutina lógica de trabajo.Descartable: preferentemente de plástico. Por lo tanto.5.Cierre hermético: en lo posible con tapa a rosca. PARA FACILITAR LA LOCALIZACION DE CASOS DE TUBERCULOSIS LAS MUESTRAS PRODUCIDAS POR LOS SR DEBEN PODER SER TOMADAS O ENTREGADAS A CUALQUIER HORA DEL DIA EN QUE EL SERVICIO ESTE ABIERTO. .Para control de tratamiento se aconseja examinar con baciloscopía una muestra por mes. 1.. Es recomendable que el laboratorio no dé turnos de recepción de muestras. EL ENVASE El envase más adecuado debe tener las siguientes características: . . Los envases se deben solicitar a lo s Responsables Provinciales de la Red de Laboratorio de Tuberculosis o al Responsable Provincial del Programa. No se recomienda limpiar frascos de vidrio ya usados y volverlos a usar. Aún así.Boca ancha: de no menos de 50 mm de diámetro.Transparente: para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el SR. poniendo énfasis en las muestras del segundo y cuarto mes y en la del final del tratamiento. para que el paciente pueda depositar la expectoración con facilidad dentro del envase. aunque no siempre iguales. para evitar posibles errores y minimizar la manipulación de material potencialmente infeccioso. Luego puede regular el momento en que las procesa ya que el esputo puede conservarse varios días. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis facilita generalmente frascos de recolección en cantidad suficiente. prolongar el período durante el cual el paciente permanece infeccioso o determinar que pierda un enfermo. con características similares. . para facilitar su eliminación. a las descriptas. sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partícula más adecuada para realizar el extendido.c.

acondicionamiento de tal forma que no haya riesgo de derrames. las muestras pueden ser acondicionadas en cajas de cartón grueso.protección del calor excesivo. En el transporte de las muestras deben considerarse tres condiciones importantes: . en un lugar fresco.6. se debe comprobar que los envases estén cerrados herméticamente (en algunos casos conviene sellarlos con tela adhesiva o cinta de enmascarar). se debe establecer días de la semana en que se efectuarán regularmente los envíos. El responsable Provincial de la Red de Laboratorios de Tuberculosis lo ayudará a resolver estos problemas. Estos envases son útiles para conservar muestras en heladera o bien para su transporte. luego de lo cual se deben envolver en dos bolsas de polietileno. Es útil contar con un envase de plástico con tapa. incluyendo a las ste micobacterias.protección de la luz solar.1. servicio. de altura ligeramente superior a la de los envases utilizados. encima de la tapa. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio que va a realizar la baciloscopía o el cultivo. e desinfectante mata a todos los gérmenes del esputo. Extendidos fijados En casos excepcionales puede ser necesario realizar extendidos de esputo sobre el portaobjetos para enviarlos al laboratorio para su coloración y lectura. con qué frecuencia y por cuál medio de transporte . el medio de transporte y el horario de llegada. En un Servicio de Salud que no tiene laboratorio . De ser posible. de manera que sujete firmemente cada frasco. de alrededor de 15 por 40 cm. Es conveniente que se le anticipe al laboratorio que va a recibir las muestras el correspondiente envío. Acondicionar los frascos así envueltos en la caja con relleno de papel de diario para mantenerlos firmes. haciendo un nudo seguro con cada bolsa. tanto para baciloscopía como para cultivo se recomienda no dejar transcurrir más de siete días entre el momento de la recolección de la muestra y el del procesamiento en el laboratorio. . en cuyo interior se adapta una base de telgopor agujereada con círculos de diámetro ligeramente superior al de los envases. puede agregar unas 10 gotas de fenol al 5 % en el momento de recibirlas. Si las muestras van a ser procesadas sólo por baciloscopía y conservadas por varios días. En general. . pero aun así éstas se colorean por la técnica de Ziehl-Neelsen. de no ser posible. En lo posible se debe elegir el medio de transporte que garantice mayor rapidez y confianza en la entrega. Si no se dispone de cajas de plástico con divisiones interiores para el transporte. aclaración sobre si es muestra para diagnóstico (1ª o 2ª) o para control de tratamiento indicando el mes. el personal debe conocer a qué laboratorio debe enviar las muestras. La muestra debe ser conservada de preferencia en heladera o. En ese tiempo los 11 . agitarlas levemente y dejarlas al menos 30 minutos. Cada envío debe ser acompañado por las hojas de solicitud de examen correspondiente o al menos por una lista de datos de los pacientes: nombre y apellido. en esa circunstancia se debe tomar a l precaución de tratar previamente el esputo con 10 gotas de fenol al 10% y después de una hora realizar el extendido siguiendo las indicaciones que se verán en el Capítulo de Baciloscopía. para conservar allí las muestras. del tipo de los que se utilizan para conservar alimentos.

bacilos habrán muerto pero mantienen su capacidad de teñirse con la fucsina. RECEPCION DE LA MUESTRA Cada vez que en el laboratorio se reciben las muestras se debe: . especialmente en la calidad y cantidad de los esputos y en la forma de envío. los inconvenientes que se observan. Si el derrame ha sido masivo esterilizar toda la caja en autoclave o incinerarla. 12 .Notificar al servicio que derivó las muestras.Comprobar que estén bien identificadas. . Es conveniente hacer dos extendidos de cada muestra.Desinfectar el exterior de los envases con algodón con fenol al 5% si se han producido pequeños derrames durante el transporte. . Después de 24 horas de contacto con fenol el material puede descartarse quemando el frasco en el pozo de incineración del servicio. 1. en caso de ser necesario.7.

2.Microscopio con objetivo de inmersión en buenas condiciones. donde existe un solo ambiente éste sirve para todas las actividades. frascos para soluciones colorantes. receptáculo para descartar los envases con muestras y frascos para fraccionar reactivos. Puede no ser necesario si el Laboratorio de Referencia envía los colorantes y reactivos fraccionados para preparar un volumen determinado (un litro. Esta propiedad se debe al alto contenido en lípidos.Pileta o recipiente y un soporte para colorear los extendidos. Preparación a.1..p.000 ml 13 . acero o materiales similares). pinza. LUGAR DE TRABAJO La baciloscopía puede realizarse en laboratorios de cualquier complejidad. fórmica.2. aplicadores de madera (o en su defecto ansas). Se debe contar con una mesa o mesada para realizar los extendidos de aproximadamente 1 x 0. d. que poseen las micobacterias en la pared celular. El equipo mínimo necesario para realizar los extendidos y la coloración es: a. habitualmente el momento de menor movimiento. principalmente ácidos micólicos..50m. (Colorante básico). medio litro).. tinta indeleble o de diamante). que posean un microscopio con lente de inmersión en buenas condiciones.Material de vidrio aforado para preparar las soluciones.1. Sólo debe contarse con un mínimo de condiciones edilicias y de recursos y seguirse normas básicas sencillas que aseguren un trabajo de calidad y con riesgos mínimos. 3 g 100 ml 55 ml 1.s. El área de trabajo puede no ser exclusiva.LA BACILOSCOPIA El examen microscópico directo o baciloscopía es la técnica fundamental para el diagnóstico y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. lápiz marcador de vidrio (graso.Fucsina básica fenicada. REACTIVOS 2.. portaobjetos. c. b. mechero preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol. cuando se pueda restringir el paso de personas y cerrar la puerta. en lo posible cubierta con material que pueda desinfectarse fácilmente con soluciones germicidas (cerámica o azulejos sin junturas evidentes. La técnica se basa en la capacidad que poseen casi exclusivamente las micobacterias de incorporar la fucsina fenicada y retenerla frente a la acción de decolorantes como la mezcla de ácido y alcohol: ácido-alcohol resistencia. Fucsina básica Alcohol 95° GL Fenol acuoso* Agua destilada c.Envases para muestras. en caso de no contar con ellos se puede utilizar una bandeja de metal o vidrio de dimensiones aproximadas o bien cubrir el área de trabajo con papel de diario impregnado en fenol al 5%. en esos casos se recomienda disponer de un horario especial para realizar los extendidos y coloraciones. 2.. 2.

aplicadores o ansas. . se deja reposar hasta el día siguiente. el fenol en cristales con 100 ml de agua destilada por cada Kg de fenol (preferentemente calentado con calentador eléctrico o con llama a baja intensidad y con la tapa del frasco ligeramente abierta).. Tenga en cuenta las medidas de bioseguridad recomendadas más adelante. en baño maría. Se filtra.Azul de metileno . 2. frasco con arena y fenol o alcohol. De ser posible es conveniente que se realice una compra unificada para garantizar la misma calidad en todos los servicios de una provincia. turbio. se lo deja reposar 24 horas. . etc). Precauciones con los colorantes . 14 . se agita y filtra.Los colorantes deben conservarse en frascos color caramelo o bien en envases comunes pero bien resguardados de la luz. . * El fenol acuoso se prepara fundiendo con cuidado. previamente filtrados. téngalo en cuenta: . y no al revés porque es peligroso. .2. Lavar estos envases con frecuencia semanal.Agua destilada 1 g 1. especialmente la fucsina básica.Acido clorhídrico p. se agita suavemente y se agrega agua destilada para completar un litro. para disolver los cristales que pudieran haberse formado. . 2.Los colorantes.Si se usan colorantes comerciales consultar a los Responsables Provinciales de la Red de Laboratorios sobre su calidad ya que es muy variable. b. que se han de usar en la semana.Fraccionar pequeños volúmenes.Alcohol 95° GL 970 ml Agregar siempre el ácido al alcohol. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar.2. 30 ml . La mejor medida para evitar riesgos y errores es la sistematización de las actividades que se han de realizar. disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero.Se disuelve la fucsina básica en el alcohol. en lo posible enjuagándolos con alcohol. PREPARACION DEL EXTENDIDO Antes de comenzar a trabajar debe lavarse las manos y colocarse el guardapolvo. agitando suavemente y se agrega el fenol acuoso*. .a. debe ser descartado. o conservado por más de 6 meses. lápiz para marcar los portaobjetos. de no ser así ajústense las cantidades teniendo en cuenta el grado de pureza.Solución decolorante.000 ml Se disuelve el azul de metileno en el agua agitando suavemente.3.Azul de metileno (Colorante de contraste).. deben ser de buena calidad. soporte para los extendidos.Antes de comenzar a trabajar. Obsérvese que la pureza del colorante sea del 100%. de esta manera se mantiene líquido y debe conservarse al abrigo de la luz para evitar su oxidación. Todo reactivo con características anormales (llamativamente precipitado.Es conveniente preparar volúmenes que se han de consumir en no más de dos meses. suavemente. c.

tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado.Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero. El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios. Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla.Si usa palillo para realizar el extendido. La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes de la baciloscopía.Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. . . parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas.Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración. Se recomienda no procesar más de doce muestras por vez para evitar accidentes y errores por cambio de muestra. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco. la que descartará con el material a esterilizar. al finalizar el trabajo. quémela primero desde el mango hacia el aro. . 15 .. déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta. Si usa ansa no descartable. .Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos. enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido.

. del mismo modo que las muestras. cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos.Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el ansa con movimientos circulares. . en forma homogénea. Continúe de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. si es muy grueso. Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos El extendido debe quedar de grosor homogéneo. puede descartar las muestras colocándolas. si los ha usado.Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado. . ya que los bacilos permanecen vivos cuando son fijados sólo con calor suave. el material puede desprenderse durante la coloración. es posible producir un resultado falso negativo. Cuando haya terminado. Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos. sin llegar a los bordes. junto con los palillos. Si es demasiado fino. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Esta es la técnica más empleada en el mundo y ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo. el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. no lo queme ni lo sobrecaliente. El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado.Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido. FIJACIÓN DEL EXTENDIDO . - - 2. si usó ansa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol.4. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente. 16 . pásela con movimientos circulares por la arena y luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro. tratando de dispersarla por toda la superficie central. no deben quedar sin colorear hasta el día siguiente .Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente.Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. para evitar confusiones. . Los extendidos deben ser coloreados lo antes posible. Limpie la superficie de trabajo descartando los papeles con que pudiera haberla cubierto y pase fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% sobre la superficie para desinfectarla. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio. Puede utilizar un incinerador especial muy fácil de fabricar con elementos sencillos. Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo. Descarte el barbijo o los guantes.

Girando el extendido lave con cuidado también la parte posterior. .Cubra la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recientemente filtrada. .Coloque las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y sin que se toquen entre ellas.Levante cuidadosamente el portaobjetos desde el extremo más cercano a usted y con el frasco de agua o un chorro fino proveniente de una mangueraconectada a la canilla. El calentamiento nunca debe ser tal que hierva la fucsina ya que a esta temperatura la pared de los bacilos se destruye y no se colorean. lave cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina. Este papel evita que los posibles cristales de fucsina se asienten sobre el extendido. . Incline el portaobjetos tomándolo con una pinza para eliminar el exceso de agua y evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación. . También se puede cubrir previamente el extendido con un trozo de papel de filtro que no sobresalga del portaobjeto y luego cubrir con la fucsina.Disponga dos varillas de vidrio sobre la pileta de lavado a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra.Es también la más económica y alcanza la misma sensibilidad que la técnica de fluorescencia si se le dedica tiempo suficiente a la lectura de cada frotis. .Vierta los reactivos y el agua suavemente evitando salpicaduras que pueden transferir material de un portaobjetos a otro y pueden generar aerosoles.. Consta de tres tiempos: a.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol caliente suavemente por debajo de los extendidos con movimientos de vaivén hasta que observe que se desprenden los primeros vapores. si por cualquier causa no desea colorear en la pileta puede utilizar alguna bandeja metálica o de vidrio.Coloración. . este tiempo y estas temperaturas son suficientes para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos. 17 . .En el término de aproximadamente cinco minutos debe calentar tres veces hasta emisión de vapores.

restos de aceite y humedad.b. Vuelva a cubrir con solución decolorante. Si aún observa coloración rosada intensa.Cubra la totalidad del extendido con solución decolorante de alcohol-ácido y deje aproximadamente 3 minutos para que el decolorante actúe.Déjelas secar a temperatura ambiente. b.Coloración de fondo. déjelo actuar un minuto y enjuague nuevamente. 18 .Elimine el exceso de agua inclinando el portaobjetos. Se considera decolorado cuando sus partes más gruesas conservan sólo un leve tinte rosado. Cubra todo el extendido con solución de azul de metileno dejándolo entre 45 segundos y un minuto.Después de la última decoloración mantenga el extendido cubierto al menos un minuto con agua para rehidratar las células. . . apoyándolas en forma vertical sobre un papel absorbente o en un soporte. en caso positivo. Mantenga el microscopio limpio.Decoloración.A medida que las saque del soporte de coloración observe si la numeración está aun visible y en caso contrario vuelva a numerarlas. 2. c..5. . . . Pasado ese tiempo enjuague con abundante agua a baja presión..determinar si en el extendido hay bacilos ácido-alcohol resistentes.cuantificar aproximadamente. la riqueza en bacilos.. Enjuague las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpie la parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada.. OBSERVACION MICROSCOPICA La observación microscópica cumple principalmente dos objetivos: a. repita el procedimiento. lo que da idea del grado de severidad e infecciosidad del paciente. libre de polvo.

ligeramente curvos.. . a. Tenga en cuenta que este extendido positivo se va decolorando con los sucesivos lavados con xileno. . . .Terminada la observación limpie el aceite de inmersión del objetivo con una gasa o papel suave. el Registro del Laboratorio y una lapicera. . . b.Si no se encuentran bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) o se observa menos de un bacilo por campo en promedio deben examinarse como mínimo 100 campos útiles. por ejemplo aceite de cedro).Ubique cerca del microscopio todos los elementos que va a necesitar para la lectura: aceite de inmersión. utilizando permanentemente el micrométrico. Es conveniente tener un extendido positivo coloreado para evaluar periódicamente las buenas condiciones del microscopio.Método de lectura. 19 .Siga una pauta uniforme de observación. Cada campo microscópico debe ser observado en superficie y profundidad. aislados o en grupo. . absorbiendo el aceite sin frotar en exceso la lente. . continúe ajustando el tornillo micrométrico hasta ver una imagen nítida. Esto contribuirá al cuidado de la lente y a evitar la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer.De haber bacilos los observará como pequeños bastoncillos delgados.Apoyando el portaobjetos sobre la mesa deposite una gota de aceite de inmersión sobre la parte del extendido coloreado cercana al número. teñidos de rojo fucsia. generalmente con gránulos más coloreados en su interior.Debe utilizarse un microscopio con condiciones adecuadas de óptica. No se debe tocar el extendido con la punta del gotero o varilla para evitar pasar partículas de un extendido a otro y generar falsos resultados positivos. destacándose sobre un fondo azul. .Si se encuentran más de 10 BAAR por campo bastará con leer 20 campos..Enfoque en el microscopio . para evitar repetir la lectura de algunos campos. equipado con un objetivo de inmersión (100 x) y un ocular 8 ó 10 x. En ese momento observe a través de los oculares y continúe bajando muy lentamente hasta ver el material coloreado del extendido. papel suave. una caja para guardar portaobjetos.Coloque el portaobjetos sobre la platina dejando la superficie cubierta por el aceite justo debajo de la lente de inmersión y baje ésta lentamente con el tornillo macrométrico hasta que toque ligeramente el aceite. leyendo de izquierda a derecha del extendido al menos 100 campos microscópicos útiles.Si se encuentran entre uno y 10 BAAR por campo bastará con leer 50 campos. (No es conveniente usar aceites naturales de mayor densidad y secantes.

para controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes que se prepare. si corresponde.Control de calidad interno del laboratorio Es conveniente guardar extendidos fuertemente positivos. agregue toda observación que indique que la calidad de la muestra no fue adecuada. . enviar estas muestras para cultivo.Informe de los resultados .. Los aceites sintétic os no secantes utilizados actualmente no requieren de limpieza frecuente con solventes. De ser posible. para identificarlos más rápidamente.Si con esa lectura no se encuentran más bacilos. .. 20 . Positivo (+) : se observa en promedio menos de un bacilo por campo en 100 campos observados.Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse como negativa. los reactivos son defectuosos o la coloración ha sido realizada en forma incorrecta. el decolorante es defectuoso o la decoloración ha sido realizada en forma incompleta. La siguiente escala semicuantitativa ha sido adoptada por el país y es la utilizada en la mayoría de los países del mundo: Negativ o (-) : no se encuentran BAAR en los 100 campos observados. c. Positivo (++) : de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados Positivo (+++) : más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados Registre inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del laboratorio. Es conveniente marcar los resultados positivos en rojo.No es conveniente usar xilol u otro disolvente en forma permanente para limpiar los objetivos pues deterioran rápidamente los objetivos y oculares. consignando en el Libro de Registro el hallazgo y en lo posible solicitar una tercera muestra. d. Escriba el resultado en el formulario correspondiente. Si no detecta bacilos ácido-alcohol resistentes.Ampliar la lectura a 200 campos. Envíe el resultado lo más pronto posible al centro de salud o médico que solicitó el examen. Si en una lámina se observan de uno a cuatro BAAR en 100 campos se recomienda: . Si no puede decolorar bien el preparado. hacer otro extendido de la misma muestra. tratando de elegir partículas purulentas. preparados con muestras a las que se les ha agregado fenol.

Lave con abundante agua de la canilla.2. Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la superficie con leve presión. Luego del mes. La limpieza se realiza de la siguiente manera: 1. 4. de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las negativas en las que no se observen rayaduras para preparar nuevos extendidos y enviando las positivas a otra sección del laboratorio. 21 . CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscopías requiere que las láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su relectura.6.Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30% durante 48 horas. se comprueba que se mantenga visible la numeración y se las guarda con sus resultados. 3.Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado 2.Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas a usar.

con otra enfermedad inmunosupresora. con tratamientos prolongados con medicamentos inmunosupresores o diabéticos no deben trabajar en áreas de riesgo. 2. Es conveniente dictar a los ingresantes un curso con contenidos de historia natural de la tuberculosis y medidas de bioseguridad y reafirmar periódicamente los conocimientos. Cada laboratorio debe contar con instrucciones escritas y difundidas sobre el manejo de pacientes con tuberculosis y de las muestras biológicas obtenidas de los mismos. 5. baciloscopía y cultivo de ser posible. 3. Restringir el acceso al laboratorio de personal ajeno al área de trabajo para evitar movimientos. Deben tener una evaluación médica clínica anual sistemática con placa de tórax y. 6. 1. limpiarlos diariamente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. El Comité de Infecciones Hospitalarias es el responsable de reglamentar las normas de bioseguridad para todo el personal y de hacerlas cumplir. 2. Los trabajadores de salud infectados con HIV. Atender al personal del centro de salud y pacientes fuera de este área. 4. Los trabajadores de salud no reactores a la tuberculina (PPD menor de 10 mm) deben vacunarse con BCG al ingresar a trabajar.2. 4.1. Aquéllos con enfermedades pulmonares crónicas deben consultar previamente con su médico. Trabajar en áreas con pisos y paredes lavables. distracciones y exposición de personas no involucradas. 3. corrientes de aire. Es menor el riesgo del personal del laboratorio que puede protegerse con medidas de precaución simples y no muy costosas. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO En todas las circunstancias tener presente que es necesario aplicar todas las medidas lógicas para evitar la generación y movimiento de aerosoles. En cada sección deben estar expuestas las normas básicas de bioseguridad específicas del área. Toda manipulación de material potencialmente infeccioso debe ser realizada en áreas alejadas de la circulación general. cuando tengan síntomas respiratorios. 3. 3. 22 . NO USAR PLUMEROS PARA LA LIMPIEZA.NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS La información disponible en nuestro país indica que el personal de salud más expuesto a contraer tuberculosis es el que asiste directamente al paciente: médicos y enfermeras. No utilizar ventiladores ni acondicionadores que generen flujos de aire mientras se está trabajando con material infeccioso. NO BARRER EN SECO NI ENCERAR. PERSONAL 1.

En enfermos sospechosos de tuberculosis deben evitarse en lo posible las nebulizaciones. Para el transporte acomodar los envases en cajas rígidas. Las máscaras u otro material utilizado deben lavarse con detergente y abundante agua y el ambiente debe ser ventilado luego de cada paciente. No es recomendable trabajar con más de 12 muestras simultáneamente. desinfectar el exterior del envase con algodón embebido en fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10%. no sacarlo del centro de salud donde debe ser desinfectado y lavado (agua caliente y enjuague con agregado de hipoclorito). aun cuando se usan guantes. Disponer siempre de un frasco con fenol al 5% y trabajar en el área delimitada cubierta con un papel embebido en fenol.3. Al recibir la muestra comprobar que no haya derrames. comer ni fumar en el área de trabajo donde se procesa material potencialmente infeccioso. que no son costosas. No ubicar en el área de trabajo elementos innecesarios ni sacar de la misma libros de registro o elementos allí utilizados. 2. instalaciones o equipamiento del laboratorio. 7. 8. se harán en la sala de toma de muestras o en otra cuyas condiciones de ventilación sean similares. manipulación y procesamiento de las muestras. Si el derrame hubiera sido masivo autoclavar o incinerar el frasco y el contenedor en el que fue trasladado al laboratorio. Utilizar siempre guardapolvo de mangas largas y cerrado. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS 1. En circunstancias normales no es indispensable el uso de guantes para el trabajo con muestras de esputo en tuberculosis aunque. 11. 23 . rellenando los espacios vacíos para evitar movimientos. 9. 6. Los barbijos de cirugía no protegen contra los bacilos de la tuberculosis. 10. 3. Pueden utilizarse los de trabajadores que trabajan con asbestos o silicio. Para el transporte de muestras que serán procesadas sólo por baciloscopía se les puede agregar 10 gotas de fenol al 5%. cubrir con vendaje y guantes. 3. Controlar que no haya heridas o escoriaciones en las manos. 3. Lavarse las manos con frecuencia. (Ver Baciloscopía) 2. Ubicar ésta en otra caja sin divisiones de tamaño ligeramente mayor. si existe una norma general de laboratorio de utilizarlos para protección. si existieran. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS Todo laboratorio que cuente con un microscopio puede realizar una baciloscopía adoptando medidas de bioseguridad de sentido común. impermeables. sin antes lavarse las manos. de ser necesarias. el fenol mata el bacilo pero conserva su propiedad de tinción con fucsina.3 micrones que aseguren al menos 95% de protección. resistentes. si las hubiera. No tocar.5. No beber. 3. con cierre hermético y divisiones interiores. 1. Las muestras deben ser recolectadas al aire libre o en un lugar bien ventilado hacia el exterior y con puertas cerradas a áreas de circulación de público. El filtro del barbijo o máscara debe ser de alta eficiencia (HEPA) que retenga partículas del orden de los 0. utilizar barbijos con buen ajuste alrededor de la boca y nariz para la toma. es conveniente mantenerla sin hacer excepciones.4. por ejemplo con papel. 4. Si se procesan un promedio diario de más de 5 muestras. Sistematizar el procesamiento de las muestras. Las siguientes recomendaciones son generales para todos los operadores del laboratorio en cualquier procedimiento que se haga con una muestra de SR.

6.4. colocando antes del mismo filtros adecuados. el riesgo de concentración de contaminantes es superior al de fuera de la cámara. 33 cm en la parte superior y 20 cm de alto en la entrada de manos. La ventana puede ser de vidrio doble o triple. El aire contaminado dentro de la cámara debe ser expulsado forzadamente por un extractor adecuado. no es necesario que sean complejas. La cámara puede ubicarse sobre la mesada del laboratorio. etc…). teniendo en cuenta que la superficie interior no debe presentar rugosidades para permitir una buena desinfección. 24 . sin muestra. 60 cm de ancho en la base. comenzando desde el mango hacia el aro. 7. melamina. primero debe ser limpiada en un frasco con arena y fenol o alcohol y luego quemada en el mechero. A continuación se sugiere un diagrama de una campana sencilla y económica. De preferencia utilizar palillos para realizar los extendidos. 8. Si se usa pipeta cuidar que la punta superior esté protegida con algodón. Si se usa ansa. no pipetear nunca con la boca. Ante cualquier rotura del envase o tubo con material potencialmente contaminado cubrir inmediatamente la zona con papel y embeberlo con fenol al 5% o con hipoclorito al 10% y abandonar el área de trabajo por 30 minutos. De igual manera proceder para seleccionar la partícula a ser extendida y al realizar el extendido. Si la cámara no dispone de esta ventilación forzada. Abrir los envases con muestras teniendo un mechero entre la misma y el operador. que puede ser utilizada para técnicas básicas de bacteriología e incluso como campana de gases: - - - Puede construirse en madera u otro material (acero. 85 cm de altura. conservar los bordes limpios. Las dimensiones aproximadas son: 100 cm de largo. 5. Colorearlos tan pronto estén secos para disminuir al mínimo el tiempo en que las micobacterias permanecen viables. Al regresar recoger el material con pinzas y depositarlo en un recipiente donde pueda ser incinerado o autoclavado. Al realizar los extendidos. Aunque no es imprescindible pueden utilizarse campanas de bioseguridad.

Los instrumentos de registro y formularios con los que debe contar la Red son: Formulario de Solicitud de baciloscopía - Registro de Muestras para Investigación Bacteriológica de la Tuberculosis 25 .SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN El sistema de información epidemiológica y operacional debe ayudar a administrar mejor la Red de Laboratorios de Tuberculosis a todos los niveles. Éste debe permitir el conocimiento actualizado de la magnitud y tendencia de la situación epidemiológica y al mismo tiempo el grado de desarrollo y efic iencia de la Red de Laboratorios.

26 .

ed. 7. 4. Yates MD. editor. Tuberculosis bacteriology. National Institutes of Health. Grange JM. Centers for Disease Control and Prevention. Washington: U. Emilio Coni”. International Union Against Tuberculosis and L ung Disease. 2000. Minimum Requirements. Technical guide for sputum examination for tuberculosis by direct microscopy . Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. Laboratory Manual for Acid-fast Microscopy. Nota Técnica Nº26/Rev1. 5. 1998. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Collins CH.S. Education and Welfare. Center for Disease Control. 2nd ed. La muestra. Smithwick.S. installation and use of biological safety cabinets. Primary Containment for biohazards: selection. Goverment Printing Office 1995. Francia. 1997. 1-51. 6. 1988. 3. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD/ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD. Argentina. 2. 1979. Argentina. 27 . Normas técnicas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. Bull Int Union Tuberc 1978:4-16. U.BIBLIOGRAFÍA 1. Bacteriología de la tuberculosis. Oxford: Butterworth-Heinemann. El exámen microscópico. International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. Department of Health and Human Services. 2nd . Organization and Practice. US Department of Health . Role and Operation in a Low-Income Country. USA.

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