Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis

Microscopía - Normas Técnicas

ARGENTINA 2000

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AUTORIDADES

PRESIDENTE DE LA NACION Dr. Fernando DE LA RÚA MINISTRO DE SALUD Dr. Héctor José LOMBARDO SECRETARIO DE ATENCIÓN SANITARIA Dr. Arnoldo Víctor CASTILLO SUBSECRETARIO DE PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN Dr. Javier Oscar VILOSIO DIRECCIÓN NACIONAL DE MEDICINA SANITARIA A/C Dr. Francisco MARTINI DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA A/C Dr. Anibal REINALDO SUBSECRETARIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA Dr. Ernesto PODESTÁ ADMINISTRACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS E INSTITUTOS DE SALUD “DR. CARLOS G. MALBRAN” A/C Dr. Andrés RUÍZ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Dra. María Inès DEMITRI INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “DR. EMILIO CONI” A/C Dr. Alberto MARCHESE

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3 . Argentina. 2000.MICROSCOPÍA: NORMAS TÉCNICAS Documento elaborado sobre la base de un borrador preparado por: OMAR LATINI Comité de redacción: LUCÍA BARRERA OMAR LATINI MARÍA DELFINA SEQUEIRA ELSA ZERBINI Santa Fe.

2.1. Preparación ___________________________________________________ 2.6. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN _______________________________ 2.2.3. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO 1.1. EL ENVASE_____________________________________________________ 1. Lavado bronquial_______________________________________________ 1.3. OBSERVACION MICROSCOPICA__________________________________ 2.2.2. Lavado gástrico ________________________________________________ 1. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO _______________________ 3.3.3. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS _______________ NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS ___________________________________________________ 3. Precauciones con los colorantes ___________________________________ 2.6. Hisopado laríngeo ______________________________________________ 1. PERSONAL _____________________________________________________ 3. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO _ 1.1.3.1. LUGAR DE TRABAJO ___________________________________________ 2.4. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO ___ 1. RECEPCION DE LA MUESTRA __________________________________ LA BACILOSCOPIA________________________________________________ 5 6 6 6 7 7 8 8 9 9 10 11 12 13 13 13 13 14 14 16 18 21 2.4.2. PREPARACION DEL EXTENDIDO ________________________________ 2.4.4.7. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS ___ 3.5.2.3. CALIDAD DE LA MUESTRA _____________________________________ 1.3. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN_____________________________ BIBLIOGRAFÍA _____________________________________________________ 22 22 22 23 23 25 27 4 . REACTIVOS ____________________________________________________ 2. Inducción de esputo_____________________________________________ 1.3.2.INDICE INTRODUCCIÓN ____________________________________________________ LA MUESTRA ______________________________________________________ 1.5. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO __________________________ 1.1.

5 . El primer paso para cumplir estos objetivos es contar con laboratorios que le aseguren a los enfermos un diagnóstico rápido. a los que se agregan laboratorios privados y de obras sociales. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial. en sus cuatro capítulos.000 casos anuales.(Notas Técnicas CEPANZO N 26. 27. Sin embargo algunos cambios se han producido. como paso previo a su curación. La estandarización de la baciloscopía se basa en normas que garantizan que las técnicas propuestas han sido el producto de amplios ensayos mundiales realizados por organizaciones internacionales como la OPS/OMS y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER). aún cuando se cuenta con técnicas de diagnóstico sencillas y tratamientos eficaces. sino también que las técnicas que utilicen sus integrantes sean las más adecuadas a las necesidades de la población y que se realicen con la mejor calidad. bacilo productor de la tuberculosis. la baciloscopía aun sigue siendo la técnica de elección para el objetivo principal de cortar la cadena de transmisión mediante el diagnóstico de los casos bacilíferos. Si bien después de quince años los avances en la tecnología han introducido variantes en la bacteriología. hasta que un Comité Asesor de la OPS/OMS. aunque si se toman en cuenta los mayores de 15 años en quienes se aplica sistemáticamente la baciloscopía la oferta de servicio es mucho mayor.000 son enfermos con formas pulmonares que eliminan bacilos con la expectoración y mantienen la transmisión del bacilo mientras no son diagnosticados y tratados adecuadamente. provinciales y municipales. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis y los Programas Provinciales tienen como objetivo principal diagnosticar tempranamente los casos infectantes y tratarlos con esquemas eficaces y modalidades que aseguren una curación cercana al 100%. que hacen que se crea conveniente actualizar las normas. actualizó las normas a las nuevas necesidades de los países de América Latina. su tratamiento efectivo y su curación y continúa siendo el método más rápido de diagnóstico. de los cuales 6. estas nuevas normas fueron adoptadas por la Comisión Argentina de Bacteriología de la Tuberculosis y han sido utilizadas. se transmite de persona a persona por medio de la tos de los enfermos con lesiones pulmonares abiertas que expectoran bacilos.INTRODUCCIÓN Mycobacterium tuberculosis. hasta el presente. seguro y accesible. El primer Manual de Laboratorio utilizado en nuestro país fue una adaptación del Manual de Bacteriología de la Tuberculosis escrito por el Dr. Esta Red no sólo tiene por objetivo garantizar el acceso fácil al diagnóstico. que deben asegurar que cualquier habitante del país pueda acceder al diagnóstico de la enfermedad. dos mil millones de personas.000 habitantes. convocado por el Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO). En Argentina se notifican aproximadamente 13. Esa adaptación fue utilizada durante más de una década en todos los laboratorios del país. La baciloscopía es la técnica que mejor se adapta a las necesidades del Programa de Control ya que detecta los casos más infectantes. Luis Herrera Malmsten. puede realizarse en cualquier laboratorio que cuente con un microscopio. de los cuales cerca de un millón mueren por la enfermedad. especialmente en lo que respecta a la toma y conservación de algunas muestras y a la aplicación de normas básicas de bioseguridad que garanticen el trabajo confiado y seguro. especialmente con la asociación de TBC-SIDA. es sencilla. 28 y ° 29/1988). para ello desde hace varias décadas se ha ido conformando la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis de la que participan más de 600 laboratorios de dependencia oficial: nacionales. es económica y puede ser fácilmente estandarizada para garantizar la calidad en todo el territorio nacional. aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente. Se estima que hay en promedio un laboratorio con microscopio cada 40. a solicitud de la Organización Panamericana de la Salud en 1973. están infectadas con él. reunido en México en 1983. bacteriólogo chileno.

faríngeas o la saliva no son buenas muestras. entendiéndose por tal la que proviene del sitio de la lesión que se investiga. pollo. CALIDAD DE LA MUESTRA Para el éxito de cualquier análisis de laboratorio se debe contar con una buena muestra. obtenida en cantidad suficiente. es el primer lugar en el que se instala al infectar al hombre. - 6 . dejando la obtención de otras muestras para cuando se trate el cultivo. con rótulos que no se despeguen o con lápiz indeleble. bien identificada y conservada y transportada correctamente. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO El hecho más importante es el de comunicar al Sintomático Respiratorio (SR) con mucha claridad qué debe obtener y cómo y dónde hacerlo . Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo por lo que la enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano. biopsias y otros. La palabra que define la buena muestra es diferente en cada región y en general el SR la identifica perfectamente (gallo. La localización pulmonar es la más frecuente debido a que el bacilo necesita una buena presión de oxígeno para desarrollar y lo consigue principalmente en ese órgano que. No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como consultorios médicos o baños. líquido pleural. líquido ascítico. 1.1. Para ello. Cerca del 85% de las tuberculosis tienen localización pulmonar y estos enfermos. nariz o faringe. razón por la cual la muestra de mayor rendimiento y la que se procesa con mayor frecuencia en el laboratorio es el esputo. etc.2. aunque no deben desecharse pues siempre existe la posibilidad de que los bacilos hayan quedado en la boca. Elija un lugar adecuado para que el SR produzca la expectoración: por ejemplo una pequeña habitación bien ventilada y con mucho sol si se dispone de ella o algún lugar abierto que permita intimidad. gargajo. de allí que las muestras que puedan procesarse para diagnóstico o control son muy variadas: esputo. Entregue al SR el envase de recolección rotulado con su nombre o número de identificación y el servicio que lo solicita. estornudos o al hablar. en este caso. sangre. El Programa de Control de la Tuberculosis se centra prioritariamente en la detección temprana de estos enfermos. Las secreciones nasales. 1. pus de cavidades abiertas.LA MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no sólo es necesario que ejecute las técnicas en forma correcta. del fondo del pecho. líquido cefalorraquídeo. (Ver Bioseguridad). además de padecer casi siempre enfermedad severa. la persona que da las instrucciones debe usar el lenguaje que el paciente entienda. tal como un espacio no concurrido del patio del Servicio de Salud. Estos datos deben ser escritos en la pared del frasco y no en la tapa para evitar errores. sino que cuente con una buena muestra. son a su vez los que mantienen la infección pues diseminan los bacilos con la tos. Este capítulo se dedic ará a la toma de muestras de origen pulmonar. por otra parte. orina. colocada en un envase adecuado. la muestra de catarro mucopurulento proveniente de pulmón es la que más garantiza que si hay bacilos se puedan observar o aislar.).

colocando todas las secreciones en el mismo frasco. 1. Inducción de esputo . En caso de que esto último sucediera. a fin de fluidificar las secreciones y ayudar a su eliminación. 7 . insista en las instrucciones e indique que recoja otra muestra.1. Esta última no es tan buena como el esputo por lo que se aplica sólo a niños.Se debe nebulizar con soluciones normotónicas (solución fisiológica) o ligeramente hipertónicas.3. en los casos poco frecuentes en que no pueda lograrse pueden utilizarse otras formas tales como la inducción de esputo o la recuperación de secreciones por otros medios. observe por fuera del frasco si la misma es de buena calidad: mucopurulenta o mucosa. Debe recoger en el envase el esputo producido tratando de que entre en su totalidad sin mancharse las manos o las paredes externas del frasco. Si es saliva o secreción nasal no la descarte porque aún así puede contener bacilos. tratando de arrastrar las secreciones del pulmón. 1.3. a temperatura apenas superior a la corporal. Registre esta característica en el Registro de Laboratorio. - - Cuando reciba la muestra. Este procedimiento debe repetirlo otras dos veces. enfermos siquiátricos o ancianos. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO Siempre se debe intentar conseguir expectoración espontánea.- Instruya al SR indicándole que debe inspirar profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible. aconsejar que limpie el frasco con un papel y las manos con agua y jabón. retenerlo un momento y luego expulsarlo violentamente desde el abdomen.

La baciloscopía de lavado gástrico tiene valor relativo ya que habitualmente contiene pocos bacilos y..3. de agua destilada o solución fisiológica estéril y recoja inmediatamente. .Conservación: coloque el material en el frasco adecuado y envíelo inmediatamente al laboratorio. 1.3. Antes de tomar la muestra deben realizarse. siempre que tenga el volumen adecuado.Técnica: sondeo gástrico realizado por médico o enfermera con experiencia. razón por la que debe entregarse un frasco al enfermo para que las recoja y entregue en el laboratorio. ventiladas y soleadas que impidan la transmisión de bacilos por los aerosoles formados. . . Las maniobras utilizadas suelen producir expectoración en las 24 horas posteriores. 8 .500g.Procesamiento: Para realizar la baciloscopía es necesario centrifugar previamente la muestra durante 20 minutos a 2. ya que debe ser procesado en las 6 horas siguientes a la obtención para ser cultivado. de ser posible. Lavado gástrico Se utiliza para detectar bacilos en el esputo ingerido y alojado en el estómago. por otra parte. En caso de no obtenerse material inocule 10 a 15 c.Se hace kinesioterapia o. aspire con jeringa sin que la succión provoque daño. Normalmente es posible evitar demoras porque la toma de muestra se realiza en forma programada. de longitud adecuada y de diámetro adecuado a la edad del niño. Si es un lactante es conveniente que no esté presente la madre en el momento de la toma de muestra porque su presencia puede incentivar los movimientos peristálticos. (Ver Bioseguridad). . Siempre que sea factible debe ser cultivada.Envase: el aconsejado para esputo. Una vez que la sonda llega al estómago. . Por razones de bioseguridad no es aconsejable utilizar este método a menos que se cuente con sistemas de esterilización adecuados o máscaras descartables y salas de nebulizaciones aisladas. baciloscopías de al menos dos muestras espontáneas de esputo para intentar detectar la enfermedad sin procedimientos invasivos y evitar la contaminación innecesaria del broncofibroscopio con bacilos. Lavado bronquial La obtención de esta muestra está reservada a médicos especialistas. por lo menos.Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización y se entrega un segundo frasco para que la persona recoja las secreciones producidas en las 24 horas siguientes. debe neutralizar el material con una solución de bicarbonato de sodio al 10% o fosfato trisódico anhidro al 10% y conservarlo en heladera por no más de 24 horas hasta el momento del envío. 1. Si por alguna causa inevitable no es posible. es frecuente que contenga micobacterias ambientales que pueden estar alojadas en el estómago. de tal forma de facilitar el descenso de la expectoración.Número de muestras: al menos tres. . con sonda nasal.c. drenaje postural acostando al paciente con la almohada debajo del tórax y la cabeza por fuera de la camilla y más baja.Momento de la recolección: por la mañana al despertar.3.2. Siempre que sea posible. . se debe cultivar este tipo de muestras . con el paciente en ayunas dado que la ingesta de alimentos hace que la expectoración ingerida pase al intestino.

se debe pedir una tercera muestra y también. se aconseja utilizar esta técnica cuando no es posible obtener otro tipo de muestra. preferentemente en ayunas ya que suele provocar náuseas en el momento de la recolección. En las condiciones habituales del Programa de Control se considera suficiente obtener dos muestras por SR . ésta puede ser recogida en el momento en que el SR entrega la segunda o bien se debe solicitar una nueva muestra matinal. es decir a cualquier consultante que ha estado tosiendo por más de 15 días. . Hisopado laríngeo A causa del escaso número de bacilos que suele contener esta muestra.3. 1. . El operador debe utilizar guardapolvo largo con mangas. abra la boca y saque la lengua y tómesela con dos dedos de la mano izquierda cubierta con guantes o bien con un trozo de gasa. pida al paciente que tosa e imprima al hisopo un movimiento circular suave tratando de recoger las secreciones de esa zona. Debe ser enviado lo antes posible al laboratorio para su procesamiento. deben hacerse los mayores esfuerzos para que la persona regrese con la segunda muestra.Número de muestras: tres hisopados en días consecutivos. 9 . es conveniente analizar más de una muestra de cada SR para el diagnóstico de la tuberculosis. vivos o muertos. .4. Es conveniente procesar esta muestra por cultivo siempre que sea posible para poder detectar el bajo número de bacilos y debido a que las fibras de algodón pueden producir resultados falsos positivos en la baciloscopia. Si bien la primera suele tener menor rendimiento que la segunda. barbijo o máscara rígida y en lo posible anteojos. al tomarla asegura que al menos se pueda analizar una muestra del SR. guantes. La segunda muestra la debe conseguir el p aciente en su casa o en la internación por la mañana al despertar (muestra matinal). La primera muestra debe ser tomada siempre en el momento de la consulta (muestra inmediata) cuando el médico u otro personal del equipo de salud identifican al SR. las molestias que ocasiona al paciente y los riesgos potenciales para la persona que toma la muestra. un cultivo. Retire el hisopo tratando de no tocar las partes blandas de la boca e introdúzcalo en el tubo de ensayo. Si se decide tomar una tercera muestra. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO Como la eliminación de los bacilos por el esputo no es regular y permanente.4. . en caso de que ambas fueran negativas y el médico tenga otros elementos para sospechar que puede tratarse de tuberculosis. Introduzca el hisopo levemente humedecido con agua destilada o solución fisiológica estéril hasta la laringe.Técnica: una vez sentado el paciente solicítele que levante la cabeza.Momento de la recolección: por la mañana. De todas formas.Envase: tubo de ensayo con tapón de algodón conteniendo un hisopo de algodón montado en alambre de acero o varilla de madera flexibles de aproximadamente 30cm de longitud. 1. Se deben aplicar rigurosos procedimientos de esterilización y lavado del broncoscopio para evitar la transmisión de tuberculosis con dispositivos contaminados y la generación de falsos resultados positivos por la presencia de bacilos remanentes.Las salas de fibroscopía y el personal que la realiza deben contar con todos los requisitos de bioseguridad. de ser posible.

.Transparente: para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el SR.Capacidad adecuada: entre 30 y 50 c. . Es recomendable que el laboratorio no dé turnos de recepción de muestras. Lo ideal es entregar el informe dentro de 24 horas de recibida la muestra.Para control de tratamiento se aconseja examinar con baciloscopía una muestra por mes. prolongar el período durante el cual el paciente permanece infeccioso o determinar que pierda un enfermo.. Aún así. Los envases se deben solicitar a lo s Responsables Provinciales de la Red de Laboratorio de Tuberculosis o al Responsable Provincial del Programa.Descartable: preferentemente de plástico. para evitar posibles errores y minimizar la manipulación de material potencialmente infeccioso. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis facilita generalmente frascos de recolección en cantidad suficiente. Luego puede regular el momento en que las procesa ya que el esputo puede conservarse varios días.c.5. con características similares. EL ENVASE El envase más adecuado debe tener las siguientes características: . No se recomienda limpiar frascos de vidrio ya usados y volverlos a usar. para evitar derrames durante el transporte y la producción de aerosoles cuando se abre en el laboratorio.Boca ancha: de no menos de 50 mm de diámetro. sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partícula más adecuada para realizar el extendido. aunque no siempre iguales. 10 . . debe considerarse que la demora en la entrega de un resultado positivo puede demorar el inicio del tratamiento. EN EL MOMENTO MAS ADECUADO PARA EL PACIENTE. PARA FACILITAR LA LOCALIZACION DE CASOS DE TUBERCULOSIS LAS MUESTRAS PRODUCIDAS POR LOS SR DEBEN PODER SER TOMADAS O ENTREGADAS A CUALQUIER HORA DEL DIA EN QUE EL SERVICIO ESTE ABIERTO.Cierre hermético: en lo posible con tapa a rosca. Por lo tanto. . el examen debe ser realizado con la mayor premura posible. poniendo énfasis en las muestras del segundo y cuarto mes y en la del final del tratamiento. para que el paciente pueda depositar la expectoración con facilidad dentro del envase. a las descriptas. dentro de una rutina lógica de trabajo. para facilitar su eliminación. 1. para evitar derrames y facilitar la selección de la partícula útil. sobre todo si sólo va a ser examinado por baciloscopía. que han demostrado ser en general adecuados.

6. La muestra debe ser conservada de preferencia en heladera o. puede agregar unas 10 gotas de fenol al 5 % en el momento de recibirlas. Si las muestras van a ser procesadas sólo por baciloscopía y conservadas por varios días. Si no se dispone de cajas de plástico con divisiones interiores para el transporte. En el transporte de las muestras deben considerarse tres condiciones importantes: . encima de la tapa. el medio de transporte y el horario de llegada. del tipo de los que se utilizan para conservar alimentos. aclaración sobre si es muestra para diagnóstico (1ª o 2ª) o para control de tratamiento indicando el mes. En ese tiempo los 11 .protección del calor excesivo. e desinfectante mata a todos los gérmenes del esputo.1. para conservar allí las muestras. En un Servicio de Salud que no tiene laboratorio . las muestras pueden ser acondicionadas en cajas de cartón grueso. de altura ligeramente superior a la de los envases utilizados. Cada envío debe ser acompañado por las hojas de solicitud de examen correspondiente o al menos por una lista de datos de los pacientes: nombre y apellido. pero aun así éstas se colorean por la técnica de Ziehl-Neelsen. En lo posible se debe elegir el medio de transporte que garantice mayor rapidez y confianza en la entrega. Acondicionar los frascos así envueltos en la caja con relleno de papel de diario para mantenerlos firmes. En general. De ser posible. el personal debe conocer a qué laboratorio debe enviar las muestras. en cuyo interior se adapta una base de telgopor agujereada con círculos de diámetro ligeramente superior al de los envases. incluyendo a las ste micobacterias. haciendo un nudo seguro con cada bolsa. agitarlas levemente y dejarlas al menos 30 minutos. . se debe establecer días de la semana en que se efectuarán regularmente los envíos. de no ser posible. en esa circunstancia se debe tomar a l precaución de tratar previamente el esputo con 10 gotas de fenol al 10% y después de una hora realizar el extendido siguiendo las indicaciones que se verán en el Capítulo de Baciloscopía. se debe comprobar que los envases estén cerrados herméticamente (en algunos casos conviene sellarlos con tela adhesiva o cinta de enmascarar).protección de la luz solar. Es útil contar con un envase de plástico con tapa. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio que va a realizar la baciloscopía o el cultivo. tanto para baciloscopía como para cultivo se recomienda no dejar transcurrir más de siete días entre el momento de la recolección de la muestra y el del procesamiento en el laboratorio. con qué frecuencia y por cuál medio de transporte . en un lugar fresco. Estos envases son útiles para conservar muestras en heladera o bien para su transporte. de manera que sujete firmemente cada frasco. de alrededor de 15 por 40 cm. El responsable Provincial de la Red de Laboratorios de Tuberculosis lo ayudará a resolver estos problemas.acondicionamiento de tal forma que no haya riesgo de derrames. Es conveniente que se le anticipe al laboratorio que va a recibir las muestras el correspondiente envío. . Extendidos fijados En casos excepcionales puede ser necesario realizar extendidos de esputo sobre el portaobjetos para enviarlos al laboratorio para su coloración y lectura. servicio. luego de lo cual se deben envolver en dos bolsas de polietileno.

los inconvenientes que se observan.Notificar al servicio que derivó las muestras. Es conveniente hacer dos extendidos de cada muestra. 12 .Comprobar que estén bien identificadas. 1.bacilos habrán muerto pero mantienen su capacidad de teñirse con la fucsina. en caso de ser necesario. .7. Si el derrame ha sido masivo esterilizar toda la caja en autoclave o incinerarla. . RECEPCION DE LA MUESTRA Cada vez que en el laboratorio se reciben las muestras se debe: .Desinfectar el exterior de los envases con algodón con fenol al 5% si se han producido pequeños derrames durante el transporte. especialmente en la calidad y cantidad de los esputos y en la forma de envío. Después de 24 horas de contacto con fenol el material puede descartarse quemando el frasco en el pozo de incineración del servicio.

Fucsina básica fenicada. Sólo debe contarse con un mínimo de condiciones edilicias y de recursos y seguirse normas básicas sencillas que aseguren un trabajo de calidad y con riesgos mínimos. que posean un microscopio con lente de inmersión en buenas condiciones.2. 2. c. tinta indeleble o de diamante). mechero preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol.000 ml 13 . REACTIVOS 2. receptáculo para descartar los envases con muestras y frascos para fraccionar reactivos. (Colorante básico). d.LA BACILOSCOPIA El examen microscópico directo o baciloscopía es la técnica fundamental para el diagnóstico y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. El equipo mínimo necesario para realizar los extendidos y la coloración es: a. Preparación a. Fucsina básica Alcohol 95° GL Fenol acuoso* Agua destilada c. en esos casos se recomienda disponer de un horario especial para realizar los extendidos y coloraciones. en lo posible cubierta con material que pueda desinfectarse fácilmente con soluciones germicidas (cerámica o azulejos sin junturas evidentes. aplicadores de madera (o en su defecto ansas). 3 g 100 ml 55 ml 1..Microscopio con objetivo de inmersión en buenas condiciones.p.1.50m. fórmica. acero o materiales similares). habitualmente el momento de menor movimiento. La técnica se basa en la capacidad que poseen casi exclusivamente las micobacterias de incorporar la fucsina fenicada y retenerla frente a la acción de decolorantes como la mezcla de ácido y alcohol: ácido-alcohol resistencia. portaobjetos.Material de vidrio aforado para preparar las soluciones. LUGAR DE TRABAJO La baciloscopía puede realizarse en laboratorios de cualquier complejidad. lápiz marcador de vidrio (graso. Se debe contar con una mesa o mesada para realizar los extendidos de aproximadamente 1 x 0. 2. en caso de no contar con ellos se puede utilizar una bandeja de metal o vidrio de dimensiones aproximadas o bien cubrir el área de trabajo con papel de diario impregnado en fenol al 5%. Puede no ser necesario si el Laboratorio de Referencia envía los colorantes y reactivos fraccionados para preparar un volumen determinado (un litro. medio litro).Envases para muestras. principalmente ácidos micólicos. frascos para soluciones colorantes. b. pinza. Esta propiedad se debe al alto contenido en lípidos.s.1. que poseen las micobacterias en la pared celular. El área de trabajo puede no ser exclusiva.. donde existe un solo ambiente éste sirve para todas las actividades. cuando se pueda restringir el paso de personas y cerrar la puerta..Pileta o recipiente y un soporte para colorear los extendidos...2.

Si se usan colorantes comerciales consultar a los Responsables Provinciales de la Red de Laboratorios sobre su calidad ya que es muy variable. lápiz para marcar los portaobjetos.Solución decolorante. para disolver los cristales que pudieran haberse formado. y no al revés porque es peligroso. disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar. Tenga en cuenta las medidas de bioseguridad recomendadas más adelante.Acido clorhídrico p.Azul de metileno (Colorante de contraste). el fenol en cristales con 100 ml de agua destilada por cada Kg de fenol (preferentemente calentado con calentador eléctrico o con llama a baja intensidad y con la tapa del frasco ligeramente abierta).2. 14 . en baño maría.Se disuelve la fucsina básica en el alcohol. turbio. que se han de usar en la semana. especialmente la fucsina básica. aplicadores o ansas. téngalo en cuenta: .000 ml Se disuelve el azul de metileno en el agua agitando suavemente. suavemente. Lavar estos envases con frecuencia semanal. * El fenol acuoso se prepara fundiendo con cuidado. etc). en lo posible enjuagándolos con alcohol. frasco con arena y fenol o alcohol.Es conveniente preparar volúmenes que se han de consumir en no más de dos meses. deben ser de buena calidad. De ser posible es conveniente que se realice una compra unificada para garantizar la misma calidad en todos los servicios de una provincia. Precauciones con los colorantes .Fraccionar pequeños volúmenes.Los colorantes deben conservarse en frascos color caramelo o bien en envases comunes pero bien resguardados de la luz. Todo reactivo con características anormales (llamativamente precipitado. .3. .Azul de metileno . agitando suavemente y se agrega el fenol acuoso*. . Obsérvese que la pureza del colorante sea del 100%. se deja reposar hasta el día siguiente. de no ser así ajústense las cantidades teniendo en cuenta el grado de pureza..2. PREPARACION DEL EXTENDIDO Antes de comenzar a trabajar debe lavarse las manos y colocarse el guardapolvo.a.Antes de comenzar a trabajar. previamente filtrados. soporte para los extendidos. . 2. b. 2. . o conservado por más de 6 meses. se agita suavemente y se agrega agua destilada para completar un litro. se agita y filtra. de esta manera se mantiene líquido y debe conservarse al abrigo de la luz para evitar su oxidación. Se filtra.Los colorantes. se lo deja reposar 24 horas. c. La mejor medida para evitar riesgos y errores es la sistematización de las actividades que se han de realizar..Agua destilada 1 g 1.Alcohol 95° GL 970 ml Agregar siempre el ácido al alcohol. 30 ml . debe ser descartado. .

quémela primero desde el mango hacia el aro. .Si usa palillo para realizar el extendido. la que descartará con el material a esterilizar.. Si usa ansa no descartable.Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración. El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios. Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla. . enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo.Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco. parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas. . Se recomienda no procesar más de doce muestras por vez para evitar accidentes y errores por cambio de muestra. 15 .Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos. al finalizar el trabajo. La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes de la baciloscopía. tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido. déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta.Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero. .

Los extendidos deben ser coloreados lo antes posible. no lo queme ni lo sobrecaliente. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente. puede descartar las muestras colocándolas. es posible producir un resultado falso negativo.Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente. Limpie la superficie de trabajo descartando los papeles con que pudiera haberla cubierto y pase fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% sobre la superficie para desinfectarla. .Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado.Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el ansa con movimientos circulares. Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos. junto con los palillos. el material puede desprenderse durante la coloración. . Continúe de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. Puede utilizar un incinerador especial muy fácil de fabricar con elementos sencillos.Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido. FIJACIÓN DEL EXTENDIDO . el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. . sin llegar a los bordes. - - 2. en forma homogénea. tratando de dispersarla por toda la superficie central. si los ha usado. para evitar confusiones. cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio. del mismo modo que las muestras. no deben quedar sin colorear hasta el día siguiente . El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado. Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo.4. si es muy grueso.. Cuando haya terminado. Si es demasiado fino. si usó ansa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol. pásela con movimientos circulares por la arena y luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Esta es la técnica más empleada en el mundo y ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo. Descarte el barbijo o los guantes. Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos El extendido debe quedar de grosor homogéneo. ya que los bacilos permanecen vivos cuando son fijados sólo con calor suave. 16 .Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%.

lave cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina. 17 .Coloración. Este papel evita que los posibles cristales de fucsina se asienten sobre el extendido.En el término de aproximadamente cinco minutos debe calentar tres veces hasta emisión de vapores.Levante cuidadosamente el portaobjetos desde el extremo más cercano a usted y con el frasco de agua o un chorro fino proveniente de una mangueraconectada a la canilla. este tiempo y estas temperaturas son suficientes para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos. Girando el extendido lave con cuidado también la parte posterior. .Es también la más económica y alcanza la misma sensibilidad que la técnica de fluorescencia si se le dedica tiempo suficiente a la lectura de cada frotis. El calentamiento nunca debe ser tal que hierva la fucsina ya que a esta temperatura la pared de los bacilos se destruye y no se colorean.Disponga dos varillas de vidrio sobre la pileta de lavado a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra. . También se puede cubrir previamente el extendido con un trozo de papel de filtro que no sobresalga del portaobjeto y luego cubrir con la fucsina. Incline el portaobjetos tomándolo con una pinza para eliminar el exceso de agua y evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación. Consta de tres tiempos: a. si por cualquier causa no desea colorear en la pileta puede utilizar alguna bandeja metálica o de vidrio..Coloque las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y sin que se toquen entre ellas.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol caliente suavemente por debajo de los extendidos con movimientos de vaivén hasta que observe que se desprenden los primeros vapores.Vierta los reactivos y el agua suavemente evitando salpicaduras que pueden transferir material de un portaobjetos a otro y pueden generar aerosoles. . . .Cubra la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recientemente filtrada. . .

OBSERVACION MICROSCOPICA La observación microscópica cumple principalmente dos objetivos: a. b. 18 .cuantificar aproximadamente.. la riqueza en bacilos.b.Déjelas secar a temperatura ambiente. Cubra todo el extendido con solución de azul de metileno dejándolo entre 45 segundos y un minuto. déjelo actuar un minuto y enjuague nuevamente.5. . 2.Coloración de fondo. .Después de la última decoloración mantenga el extendido cubierto al menos un minuto con agua para rehidratar las células..determinar si en el extendido hay bacilos ácido-alcohol resistentes.. . libre de polvo. Vuelva a cubrir con solución decolorante..Elimine el exceso de agua inclinando el portaobjetos. Mantenga el microscopio limpio. c. Si aún observa coloración rosada intensa. . repita el procedimiento.A medida que las saque del soporte de coloración observe si la numeración está aun visible y en caso contrario vuelva a numerarlas. apoyándolas en forma vertical sobre un papel absorbente o en un soporte. en caso positivo.Cubra la totalidad del extendido con solución decolorante de alcohol-ácido y deje aproximadamente 3 minutos para que el decolorante actúe. Se considera decolorado cuando sus partes más gruesas conservan sólo un leve tinte rosado. . Pasado ese tiempo enjuague con abundante agua a baja presión.Decoloración. restos de aceite y humedad. Enjuague las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpie la parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada. lo que da idea del grado de severidad e infecciosidad del paciente.

Si se encuentran entre uno y 10 BAAR por campo bastará con leer 50 campos.Coloque el portaobjetos sobre la platina dejando la superficie cubierta por el aceite justo debajo de la lente de inmersión y baje ésta lentamente con el tornillo macrométrico hasta que toque ligeramente el aceite. .De haber bacilos los observará como pequeños bastoncillos delgados. No se debe tocar el extendido con la punta del gotero o varilla para evitar pasar partículas de un extendido a otro y generar falsos resultados positivos. . absorbiendo el aceite sin frotar en exceso la lente. por ejemplo aceite de cedro). utilizando permanentemente el micrométrico. ligeramente curvos.Siga una pauta uniforme de observación. 19 . b. papel suave. Es conveniente tener un extendido positivo coloreado para evaluar periódicamente las buenas condiciones del microscopio.. una caja para guardar portaobjetos. Tenga en cuenta que este extendido positivo se va decolorando con los sucesivos lavados con xileno. .Si no se encuentran bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) o se observa menos de un bacilo por campo en promedio deben examinarse como mínimo 100 campos útiles.Terminada la observación limpie el aceite de inmersión del objetivo con una gasa o papel suave. leyendo de izquierda a derecha del extendido al menos 100 campos microscópicos útiles. el Registro del Laboratorio y una lapicera.Si se encuentran más de 10 BAAR por campo bastará con leer 20 campos. teñidos de rojo fucsia.Enfoque en el microscopio .Método de lectura. . (No es conveniente usar aceites naturales de mayor densidad y secantes. . equipado con un objetivo de inmersión (100 x) y un ocular 8 ó 10 x. . . a. . continúe ajustando el tornillo micrométrico hasta ver una imagen nítida. . para evitar repetir la lectura de algunos campos.Debe utilizarse un microscopio con condiciones adecuadas de óptica.Ubique cerca del microscopio todos los elementos que va a necesitar para la lectura: aceite de inmersión. aislados o en grupo..Apoyando el portaobjetos sobre la mesa deposite una gota de aceite de inmersión sobre la parte del extendido coloreado cercana al número. Esto contribuirá al cuidado de la lente y a evitar la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer. generalmente con gránulos más coloreados en su interior. Cada campo microscópico debe ser observado en superficie y profundidad. destacándose sobre un fondo azul. En ese momento observe a través de los oculares y continúe bajando muy lentamente hasta ver el material coloreado del extendido.

Es conveniente marcar los resultados positivos en rojo.. Escriba el resultado en el formulario correspondiente. 20 . Positivo (+) : se observa en promedio menos de un bacilo por campo en 100 campos observados. d.Informe de los resultados . el decolorante es defectuoso o la decoloración ha sido realizada en forma incompleta. Positivo (++) : de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados Positivo (+++) : más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados Registre inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del laboratorio. Envíe el resultado lo más pronto posible al centro de salud o médico que solicitó el examen. Si no puede decolorar bien el preparado. enviar estas muestras para cultivo. para controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes que se prepare. hacer otro extendido de la misma muestra. si corresponde. De ser posible.Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse como negativa. Los aceites sintétic os no secantes utilizados actualmente no requieren de limpieza frecuente con solventes. para identificarlos más rápidamente. c. Si en una lámina se observan de uno a cuatro BAAR en 100 campos se recomienda: . . La siguiente escala semicuantitativa ha sido adoptada por el país y es la utilizada en la mayoría de los países del mundo: Negativ o (-) : no se encuentran BAAR en los 100 campos observados.Si con esa lectura no se encuentran más bacilos.No es conveniente usar xilol u otro disolvente en forma permanente para limpiar los objetivos pues deterioran rápidamente los objetivos y oculares. preparados con muestras a las que se les ha agregado fenol. los reactivos son defectuosos o la coloración ha sido realizada en forma incorrecta. Si no detecta bacilos ácido-alcohol resistentes.. agregue toda observación que indique que la calidad de la muestra no fue adecuada. . tratando de elegir partículas purulentas. consignando en el Libro de Registro el hallazgo y en lo posible solicitar una tercera muestra.Control de calidad interno del laboratorio Es conveniente guardar extendidos fuertemente positivos.Ampliar la lectura a 200 campos.

de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las negativas en las que no se observen rayaduras para preparar nuevos extendidos y enviando las positivas a otra sección del laboratorio. La limpieza se realiza de la siguiente manera: 1.Lave con abundante agua de la canilla. 3. 21 .Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas a usar. Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la superficie con leve presión. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscopías requiere que las láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su relectura.Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30% durante 48 horas. 4.6. se comprueba que se mantenga visible la numeración y se las guarda con sus resultados.2.Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado 2. Luego del mes.

Cada laboratorio debe contar con instrucciones escritas y difundidas sobre el manejo de pacientes con tuberculosis y de las muestras biológicas obtenidas de los mismos.NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS La información disponible en nuestro país indica que el personal de salud más expuesto a contraer tuberculosis es el que asiste directamente al paciente: médicos y enfermeras. Toda manipulación de material potencialmente infeccioso debe ser realizada en áreas alejadas de la circulación general.1. corrientes de aire. con tratamientos prolongados con medicamentos inmunosupresores o diabéticos no deben trabajar en áreas de riesgo.2. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO En todas las circunstancias tener presente que es necesario aplicar todas las medidas lógicas para evitar la generación y movimiento de aerosoles. Restringir el acceso al laboratorio de personal ajeno al área de trabajo para evitar movimientos. El Comité de Infecciones Hospitalarias es el responsable de reglamentar las normas de bioseguridad para todo el personal y de hacerlas cumplir. NO BARRER EN SECO NI ENCERAR. 3. 3. 1. 22 . con otra enfermedad inmunosupresora. cuando tengan síntomas respiratorios. 2. distracciones y exposición de personas no involucradas. Trabajar en áreas con pisos y paredes lavables. Los trabajadores de salud no reactores a la tuberculina (PPD menor de 10 mm) deben vacunarse con BCG al ingresar a trabajar. baciloscopía y cultivo de ser posible. 4. 3. Aquéllos con enfermedades pulmonares crónicas deben consultar previamente con su médico. Deben tener una evaluación médica clínica anual sistemática con placa de tórax y. 3. PERSONAL 1. 5. Es conveniente dictar a los ingresantes un curso con contenidos de historia natural de la tuberculosis y medidas de bioseguridad y reafirmar periódicamente los conocimientos. 6. Los trabajadores de salud infectados con HIV. NO USAR PLUMEROS PARA LA LIMPIEZA. 2. 4. Atender al personal del centro de salud y pacientes fuera de este área. No utilizar ventiladores ni acondicionadores que generen flujos de aire mientras se está trabajando con material infeccioso. limpiarlos diariamente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. Es menor el riesgo del personal del laboratorio que puede protegerse con medidas de precaución simples y no muy costosas. En cada sección deben estar expuestas las normas básicas de bioseguridad específicas del área.

En circunstancias normales no es indispensable el uso de guantes para el trabajo con muestras de esputo en tuberculosis aunque. Las máscaras u otro material utilizado deben lavarse con detergente y abundante agua y el ambiente debe ser ventilado luego de cada paciente. Si se procesan un promedio diario de más de 5 muestras. si existieran. por ejemplo con papel. de ser necesarias. se harán en la sala de toma de muestras o en otra cuyas condiciones de ventilación sean similares. Los barbijos de cirugía no protegen contra los bacilos de la tuberculosis. manipulación y procesamiento de las muestras. Las muestras deben ser recolectadas al aire libre o en un lugar bien ventilado hacia el exterior y con puertas cerradas a áreas de circulación de público. 3. con cierre hermético y divisiones interiores.4. Ubicar ésta en otra caja sin divisiones de tamaño ligeramente mayor. no sacarlo del centro de salud donde debe ser desinfectado y lavado (agua caliente y enjuague con agregado de hipoclorito). 2. instalaciones o equipamiento del laboratorio. 8. 3. Sistematizar el procesamiento de las muestras. rellenando los espacios vacíos para evitar movimientos. 4.3. 6. es conveniente mantenerla sin hacer excepciones. 3. No beber. Controlar que no haya heridas o escoriaciones en las manos. el fenol mata el bacilo pero conserva su propiedad de tinción con fucsina. 11. No tocar. 1. Para el transporte acomodar los envases en cajas rígidas. utilizar barbijos con buen ajuste alrededor de la boca y nariz para la toma. 3. si existe una norma general de laboratorio de utilizarlos para protección. sin antes lavarse las manos. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS 1. El filtro del barbijo o máscara debe ser de alta eficiencia (HEPA) que retenga partículas del orden de los 0. Utilizar siempre guardapolvo de mangas largas y cerrado. Lavarse las manos con frecuencia. Para el transporte de muestras que serán procesadas sólo por baciloscopía se les puede agregar 10 gotas de fenol al 5%. resistentes. No ubicar en el área de trabajo elementos innecesarios ni sacar de la misma libros de registro o elementos allí utilizados. aun cuando se usan guantes. Pueden utilizarse los de trabajadores que trabajan con asbestos o silicio.5. cubrir con vendaje y guantes. 7. No es recomendable trabajar con más de 12 muestras simultáneamente. Si el derrame hubiera sido masivo autoclavar o incinerar el frasco y el contenedor en el que fue trasladado al laboratorio. Disponer siempre de un frasco con fenol al 5% y trabajar en el área delimitada cubierta con un papel embebido en fenol. 10. Las siguientes recomendaciones son generales para todos los operadores del laboratorio en cualquier procedimiento que se haga con una muestra de SR. 23 . En enfermos sospechosos de tuberculosis deben evitarse en lo posible las nebulizaciones.3 micrones que aseguren al menos 95% de protección. que no son costosas. si las hubiera. Al recibir la muestra comprobar que no haya derrames. comer ni fumar en el área de trabajo donde se procesa material potencialmente infeccioso. desinfectar el exterior del envase con algodón embebido en fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10%. 9. impermeables. (Ver Baciloscopía) 2. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS Todo laboratorio que cuente con un microscopio puede realizar una baciloscopía adoptando medidas de bioseguridad de sentido común.

no es necesario que sean complejas. Al regresar recoger el material con pinzas y depositarlo en un recipiente donde pueda ser incinerado o autoclavado. Aunque no es imprescindible pueden utilizarse campanas de bioseguridad. primero debe ser limpiada en un frasco con arena y fenol o alcohol y luego quemada en el mechero. no pipetear nunca con la boca. colocando antes del mismo filtros adecuados. A continuación se sugiere un diagrama de una campana sencilla y económica. La cámara puede ubicarse sobre la mesada del laboratorio. 24 . melamina. 7. De igual manera proceder para seleccionar la partícula a ser extendida y al realizar el extendido. El aire contaminado dentro de la cámara debe ser expulsado forzadamente por un extractor adecuado. 33 cm en la parte superior y 20 cm de alto en la entrada de manos. Ante cualquier rotura del envase o tubo con material potencialmente contaminado cubrir inmediatamente la zona con papel y embeberlo con fenol al 5% o con hipoclorito al 10% y abandonar el área de trabajo por 30 minutos.4. comenzando desde el mango hacia el aro. Si se usa pipeta cuidar que la punta superior esté protegida con algodón. La ventana puede ser de vidrio doble o triple. 60 cm de ancho en la base. 5. 85 cm de altura. Colorearlos tan pronto estén secos para disminuir al mínimo el tiempo en que las micobacterias permanecen viables. 8. Si la cámara no dispone de esta ventilación forzada. Las dimensiones aproximadas son: 100 cm de largo. conservar los bordes limpios. sin muestra. 6. etc…). Al realizar los extendidos. Si se usa ansa. Abrir los envases con muestras teniendo un mechero entre la misma y el operador. el riesgo de concentración de contaminantes es superior al de fuera de la cámara. que puede ser utilizada para técnicas básicas de bacteriología e incluso como campana de gases: - - - Puede construirse en madera u otro material (acero. De preferencia utilizar palillos para realizar los extendidos. teniendo en cuenta que la superficie interior no debe presentar rugosidades para permitir una buena desinfección.

Éste debe permitir el conocimiento actualizado de la magnitud y tendencia de la situación epidemiológica y al mismo tiempo el grado de desarrollo y efic iencia de la Red de Laboratorios. Los instrumentos de registro y formularios con los que debe contar la Red son: Formulario de Solicitud de baciloscopía - Registro de Muestras para Investigación Bacteriológica de la Tuberculosis 25 .SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN El sistema de información epidemiológica y operacional debe ayudar a administrar mejor la Red de Laboratorios de Tuberculosis a todos los niveles.

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Goverment Printing Office 1995. 6.S. Laboratory Manual for Acid-fast Microscopy.BIBLIOGRAFÍA 1. International Union Against Tuberculosis and L ung Disease. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. Centers for Disease Control and Prevention. Center for Disease Control. 2nd . Francia. Bull Int Union Tuberc 1978:4-16. 1998. Minimum Requirements. 2nd ed. editor. Washington: U. Technical guide for sputum examination for tuberculosis by direct microscopy . Primary Containment for biohazards: selection. 4. Argentina. installation and use of biological safety cabinets. Tuberculosis bacteriology. Collins CH. U. 1988.ed. USA. Bacteriología de la tuberculosis. 27 . Department of Health and Human Services. Emilio Coni”. 1979. Smithwick. International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. National Institutes of Health. Role and Operation in a Low-Income Country. Organization and Practice. Normas técnicas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. Education and Welfare. 2. 2000. 5. 1-51. La muestra. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. Argentina. Yates MD. US Department of Health . 1997.S. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD/ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD. El exámen microscópico. Grange JM. 3. 7. Nota Técnica Nº26/Rev1. Oxford: Butterworth-Heinemann.

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