Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis

Microscopía - Normas Técnicas

ARGENTINA 2000

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AUTORIDADES

PRESIDENTE DE LA NACION Dr. Fernando DE LA RÚA MINISTRO DE SALUD Dr. Héctor José LOMBARDO SECRETARIO DE ATENCIÓN SANITARIA Dr. Arnoldo Víctor CASTILLO SUBSECRETARIO DE PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN Dr. Javier Oscar VILOSIO DIRECCIÓN NACIONAL DE MEDICINA SANITARIA A/C Dr. Francisco MARTINI DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA A/C Dr. Anibal REINALDO SUBSECRETARIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA Dr. Ernesto PODESTÁ ADMINISTRACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS E INSTITUTOS DE SALUD “DR. CARLOS G. MALBRAN” A/C Dr. Andrés RUÍZ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Dra. María Inès DEMITRI INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “DR. EMILIO CONI” A/C Dr. Alberto MARCHESE

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MICROSCOPÍA: NORMAS TÉCNICAS Documento elaborado sobre la base de un borrador preparado por: OMAR LATINI Comité de redacción: LUCÍA BARRERA OMAR LATINI MARÍA DELFINA SEQUEIRA ELSA ZERBINI Santa Fe. Argentina. 2000. 3 .

4. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO 1.5. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS _______________ NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS ___________________________________________________ 3.3.3. REACTIVOS ____________________________________________________ 2.1. Inducción de esputo_____________________________________________ 1.2.3.2.3.4. OBSERVACION MICROSCOPICA__________________________________ 2.3.1.3. LUGAR DE TRABAJO ___________________________________________ 2.1. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN_____________________________ BIBLIOGRAFÍA _____________________________________________________ 22 22 22 23 23 25 27 4 . CALIDAD DE LA MUESTRA _____________________________________ 1. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO _______________________ 3. Precauciones con los colorantes ___________________________________ 2. PREPARACION DEL EXTENDIDO ________________________________ 2. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO ___ 1.2.6. RECEPCION DE LA MUESTRA __________________________________ LA BACILOSCOPIA________________________________________________ 5 6 6 6 7 7 8 8 9 9 10 11 12 13 13 13 13 14 14 16 18 21 2.7.4. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS ___ 3.6.INDICE INTRODUCCIÓN ____________________________________________________ LA MUESTRA ______________________________________________________ 1.2.1. Hisopado laríngeo ______________________________________________ 1. Lavado gástrico ________________________________________________ 1.1. PERSONAL _____________________________________________________ 3.2.5. Lavado bronquial_______________________________________________ 1.2.2.3. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO _ 1.3. Preparación ___________________________________________________ 2. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO __________________________ 1. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN _______________________________ 2. EL ENVASE_____________________________________________________ 1.4.

Se estima que hay en promedio un laboratorio con microscopio cada 40. de los cuales 6. se transmite de persona a persona por medio de la tos de los enfermos con lesiones pulmonares abiertas que expectoran bacilos. aún cuando se cuenta con técnicas de diagnóstico sencillas y tratamientos eficaces. El primer paso para cumplir estos objetivos es contar con laboratorios que le aseguren a los enfermos un diagnóstico rápido. para ello desde hace varias décadas se ha ido conformando la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis de la que participan más de 600 laboratorios de dependencia oficial: nacionales.(Notas Técnicas CEPANZO N 26. puede realizarse en cualquier laboratorio que cuente con un microscopio. especialmente con la asociación de TBC-SIDA. hasta el presente.INTRODUCCIÓN Mycobacterium tuberculosis. especialmente en lo que respecta a la toma y conservación de algunas muestras y a la aplicación de normas básicas de bioseguridad que garanticen el trabajo confiado y seguro. aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente. bacilo productor de la tuberculosis. hasta que un Comité Asesor de la OPS/OMS. Si bien después de quince años los avances en la tecnología han introducido variantes en la bacteriología. 28 y ° 29/1988). la baciloscopía aun sigue siendo la técnica de elección para el objetivo principal de cortar la cadena de transmisión mediante el diagnóstico de los casos bacilíferos. actualizó las normas a las nuevas necesidades de los países de América Latina. Sin embargo algunos cambios se han producido. están infectadas con él. que hacen que se crea conveniente actualizar las normas. La estandarización de la baciloscopía se basa en normas que garantizan que las técnicas propuestas han sido el producto de amplios ensayos mundiales realizados por organizaciones internacionales como la OPS/OMS y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER). es económica y puede ser fácilmente estandarizada para garantizar la calidad en todo el territorio nacional. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis y los Programas Provinciales tienen como objetivo principal diagnosticar tempranamente los casos infectantes y tratarlos con esquemas eficaces y modalidades que aseguren una curación cercana al 100%. 5 . a solicitud de la Organización Panamericana de la Salud en 1973. El primer Manual de Laboratorio utilizado en nuestro país fue una adaptación del Manual de Bacteriología de la Tuberculosis escrito por el Dr. Luis Herrera Malmsten. es sencilla. estas nuevas normas fueron adoptadas por la Comisión Argentina de Bacteriología de la Tuberculosis y han sido utilizadas. Esta Red no sólo tiene por objetivo garantizar el acceso fácil al diagnóstico. sino también que las técnicas que utilicen sus integrantes sean las más adecuadas a las necesidades de la población y que se realicen con la mejor calidad. su tratamiento efectivo y su curación y continúa siendo el método más rápido de diagnóstico.000 habitantes. La baciloscopía es la técnica que mejor se adapta a las necesidades del Programa de Control ya que detecta los casos más infectantes. En Argentina se notifican aproximadamente 13. reunido en México en 1983. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial. seguro y accesible. como paso previo a su curación. Esa adaptación fue utilizada durante más de una década en todos los laboratorios del país. que deben asegurar que cualquier habitante del país pueda acceder al diagnóstico de la enfermedad. en sus cuatro capítulos. aunque si se toman en cuenta los mayores de 15 años en quienes se aplica sistemáticamente la baciloscopía la oferta de servicio es mucho mayor. dos mil millones de personas. bacteriólogo chileno. provinciales y municipales.000 son enfermos con formas pulmonares que eliminan bacilos con la expectoración y mantienen la transmisión del bacilo mientras no son diagnosticados y tratados adecuadamente. a los que se agregan laboratorios privados y de obras sociales.000 casos anuales. de los cuales cerca de un millón mueren por la enfermedad. convocado por el Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO). 27.

faríngeas o la saliva no son buenas muestras. estornudos o al hablar.LA MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no sólo es necesario que ejecute las técnicas en forma correcta. razón por la cual la muestra de mayor rendimiento y la que se procesa con mayor frecuencia en el laboratorio es el esputo. del fondo del pecho. por otra parte. sangre.1. entendiéndose por tal la que proviene del sitio de la lesión que se investiga. 1. tal como un espacio no concurrido del patio del Servicio de Salud. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO El hecho más importante es el de comunicar al Sintomático Respiratorio (SR) con mucha claridad qué debe obtener y cómo y dónde hacerlo . aunque no deben desecharse pues siempre existe la posibilidad de que los bacilos hayan quedado en la boca. son a su vez los que mantienen la infección pues diseminan los bacilos con la tos. pus de cavidades abiertas. Entregue al SR el envase de recolección rotulado con su nombre o número de identificación y el servicio que lo solicita. líquido cefalorraquídeo. La palabra que define la buena muestra es diferente en cada región y en general el SR la identifica perfectamente (gallo. dejando la obtención de otras muestras para cuando se trate el cultivo. pollo. líquido ascítico.). Elija un lugar adecuado para que el SR produzca la expectoración: por ejemplo una pequeña habitación bien ventilada y con mucho sol si se dispone de ella o algún lugar abierto que permita intimidad. gargajo. es el primer lugar en el que se instala al infectar al hombre. la muestra de catarro mucopurulento proveniente de pulmón es la que más garantiza que si hay bacilos se puedan observar o aislar. CALIDAD DE LA MUESTRA Para el éxito de cualquier análisis de laboratorio se debe contar con una buena muestra.2. - 6 . 1. Este capítulo se dedic ará a la toma de muestras de origen pulmonar. Cerca del 85% de las tuberculosis tienen localización pulmonar y estos enfermos. sino que cuente con una buena muestra. La localización pulmonar es la más frecuente debido a que el bacilo necesita una buena presión de oxígeno para desarrollar y lo consigue principalmente en ese órgano que. en este caso. la persona que da las instrucciones debe usar el lenguaje que el paciente entienda. bien identificada y conservada y transportada correctamente. con rótulos que no se despeguen o con lápiz indeleble. Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo por lo que la enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano. colocada en un envase adecuado. etc. Para ello. obtenida en cantidad suficiente. El Programa de Control de la Tuberculosis se centra prioritariamente en la detección temprana de estos enfermos. líquido pleural. orina. Estos datos deben ser escritos en la pared del frasco y no en la tapa para evitar errores. (Ver Bioseguridad). No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como consultorios médicos o baños. además de padecer casi siempre enfermedad severa. nariz o faringe. Las secreciones nasales. de allí que las muestras que puedan procesarse para diagnóstico o control son muy variadas: esputo. biopsias y otros.

METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO Siempre se debe intentar conseguir expectoración espontánea. 1. Este procedimiento debe repetirlo otras dos veces. retenerlo un momento y luego expulsarlo violentamente desde el abdomen.1. Debe recoger en el envase el esputo producido tratando de que entre en su totalidad sin mancharse las manos o las paredes externas del frasco. - - Cuando reciba la muestra. Inducción de esputo . Esta última no es tan buena como el esputo por lo que se aplica sólo a niños. insista en las instrucciones e indique que recoja otra muestra.Se debe nebulizar con soluciones normotónicas (solución fisiológica) o ligeramente hipertónicas.3. Registre esta característica en el Registro de Laboratorio. aconsejar que limpie el frasco con un papel y las manos con agua y jabón. colocando todas las secreciones en el mismo frasco. 7 . a temperatura apenas superior a la corporal. tratando de arrastrar las secreciones del pulmón.- Instruya al SR indicándole que debe inspirar profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible. enfermos siquiátricos o ancianos. a fin de fluidificar las secreciones y ayudar a su eliminación. observe por fuera del frasco si la misma es de buena calidad: mucopurulenta o mucosa. en los casos poco frecuentes en que no pueda lograrse pueden utilizarse otras formas tales como la inducción de esputo o la recuperación de secreciones por otros medios.3. Si es saliva o secreción nasal no la descarte porque aún así puede contener bacilos. 1. En caso de que esto último sucediera.

3. Las maniobras utilizadas suelen producir expectoración en las 24 horas posteriores. de longitud adecuada y de diámetro adecuado a la edad del niño. ventiladas y soleadas que impidan la transmisión de bacilos por los aerosoles formados.Procesamiento: Para realizar la baciloscopía es necesario centrifugar previamente la muestra durante 20 minutos a 2.Conservación: coloque el material en el frasco adecuado y envíelo inmediatamente al laboratorio.. Por razones de bioseguridad no es aconsejable utilizar este método a menos que se cuente con sistemas de esterilización adecuados o máscaras descartables y salas de nebulizaciones aisladas. de tal forma de facilitar el descenso de la expectoración. es frecuente que contenga micobacterias ambientales que pueden estar alojadas en el estómago. con sonda nasal. aspire con jeringa sin que la succión provoque daño. por lo menos.2.Momento de la recolección: por la mañana al despertar. . 8 . debe neutralizar el material con una solución de bicarbonato de sodio al 10% o fosfato trisódico anhidro al 10% y conservarlo en heladera por no más de 24 horas hasta el momento del envío.3.Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización y se entrega un segundo frasco para que la persona recoja las secreciones producidas en las 24 horas siguientes. siempre que tenga el volumen adecuado.Envase: el aconsejado para esputo. se debe cultivar este tipo de muestras . Si es un lactante es conveniente que no esté presente la madre en el momento de la toma de muestra porque su presencia puede incentivar los movimientos peristálticos. .c. Normalmente es posible evitar demoras porque la toma de muestra se realiza en forma programada. En caso de no obtenerse material inocule 10 a 15 c. de ser posible. .Técnica: sondeo gástrico realizado por médico o enfermera con experiencia. Antes de tomar la muestra deben realizarse. Una vez que la sonda llega al estómago. . por otra parte. Si por alguna causa inevitable no es posible. de agua destilada o solución fisiológica estéril y recoja inmediatamente. razón por la que debe entregarse un frasco al enfermo para que las recoja y entregue en el laboratorio. Siempre que sea posible. . Siempre que sea factible debe ser cultivada. 1. Lavado bronquial La obtención de esta muestra está reservada a médicos especialistas. con el paciente en ayunas dado que la ingesta de alimentos hace que la expectoración ingerida pase al intestino. . (Ver Bioseguridad). La baciloscopía de lavado gástrico tiene valor relativo ya que habitualmente contiene pocos bacilos y. baciloscopías de al menos dos muestras espontáneas de esputo para intentar detectar la enfermedad sin procedimientos invasivos y evitar la contaminación innecesaria del broncofibroscopio con bacilos. Lavado gástrico Se utiliza para detectar bacilos en el esputo ingerido y alojado en el estómago.500g. ya que debe ser procesado en las 6 horas siguientes a la obtención para ser cultivado. .3. drenaje postural acostando al paciente con la almohada debajo del tórax y la cabeza por fuera de la camilla y más baja.Se hace kinesioterapia o. 1.Número de muestras: al menos tres.

1. se aconseja utilizar esta técnica cuando no es posible obtener otro tipo de muestra. La segunda muestra la debe conseguir el p aciente en su casa o en la internación por la mañana al despertar (muestra matinal). es decir a cualquier consultante que ha estado tosiendo por más de 15 días. abra la boca y saque la lengua y tómesela con dos dedos de la mano izquierda cubierta con guantes o bien con un trozo de gasa.Momento de la recolección: por la mañana. El operador debe utilizar guardapolvo largo con mangas. . De todas formas. las molestias que ocasiona al paciente y los riesgos potenciales para la persona que toma la muestra. . ésta puede ser recogida en el momento en que el SR entrega la segunda o bien se debe solicitar una nueva muestra matinal.Envase: tubo de ensayo con tapón de algodón conteniendo un hisopo de algodón montado en alambre de acero o varilla de madera flexibles de aproximadamente 30cm de longitud. al tomarla asegura que al menos se pueda analizar una muestra del SR.4. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO Como la eliminación de los bacilos por el esputo no es regular y permanente. barbijo o máscara rígida y en lo posible anteojos.4. . un cultivo. Introduzca el hisopo levemente humedecido con agua destilada o solución fisiológica estéril hasta la laringe. 9 . Retire el hisopo tratando de no tocar las partes blandas de la boca e introdúzcalo en el tubo de ensayo. Debe ser enviado lo antes posible al laboratorio para su procesamiento. deben hacerse los mayores esfuerzos para que la persona regrese con la segunda muestra. 1. guantes. Hisopado laríngeo A causa del escaso número de bacilos que suele contener esta muestra. Se deben aplicar rigurosos procedimientos de esterilización y lavado del broncoscopio para evitar la transmisión de tuberculosis con dispositivos contaminados y la generación de falsos resultados positivos por la presencia de bacilos remanentes.Número de muestras: tres hisopados en días consecutivos. Es conveniente procesar esta muestra por cultivo siempre que sea posible para poder detectar el bajo número de bacilos y debido a que las fibras de algodón pueden producir resultados falsos positivos en la baciloscopia. En las condiciones habituales del Programa de Control se considera suficiente obtener dos muestras por SR .Técnica: una vez sentado el paciente solicítele que levante la cabeza. . Si bien la primera suele tener menor rendimiento que la segunda. preferentemente en ayunas ya que suele provocar náuseas en el momento de la recolección.Las salas de fibroscopía y el personal que la realiza deben contar con todos los requisitos de bioseguridad. en caso de que ambas fueran negativas y el médico tenga otros elementos para sospechar que puede tratarse de tuberculosis. Si se decide tomar una tercera muestra. pida al paciente que tosa e imprima al hisopo un movimiento circular suave tratando de recoger las secreciones de esa zona. La primera muestra debe ser tomada siempre en el momento de la consulta (muestra inmediata) cuando el médico u otro personal del equipo de salud identifican al SR. es conveniente analizar más de una muestra de cada SR para el diagnóstico de la tuberculosis.3. vivos o muertos. de ser posible. se debe pedir una tercera muestra y también.

prolongar el período durante el cual el paciente permanece infeccioso o determinar que pierda un enfermo. Lo ideal es entregar el informe dentro de 24 horas de recibida la muestra. Aún así. PARA FACILITAR LA LOCALIZACION DE CASOS DE TUBERCULOSIS LAS MUESTRAS PRODUCIDAS POR LOS SR DEBEN PODER SER TOMADAS O ENTREGADAS A CUALQUIER HORA DEL DIA EN QUE EL SERVICIO ESTE ABIERTO. . que han demostrado ser en general adecuados. debe considerarse que la demora en la entrega de un resultado positivo puede demorar el inicio del tratamiento. para que el paciente pueda depositar la expectoración con facilidad dentro del envase.Para control de tratamiento se aconseja examinar con baciloscopía una muestra por mes. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis facilita generalmente frascos de recolección en cantidad suficiente. sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partícula más adecuada para realizar el extendido. para facilitar su eliminación. 10 . el examen debe ser realizado con la mayor premura posible. 1.Cierre hermético: en lo posible con tapa a rosca. para evitar derrames y facilitar la selección de la partícula útil. a las descriptas. Luego puede regular el momento en que las procesa ya que el esputo puede conservarse varios días. Por lo tanto. para evitar derrames durante el transporte y la producción de aerosoles cuando se abre en el laboratorio. EL ENVASE El envase más adecuado debe tener las siguientes características: . . .Transparente: para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el SR. poniendo énfasis en las muestras del segundo y cuarto mes y en la del final del tratamiento. para evitar posibles errores y minimizar la manipulación de material potencialmente infeccioso. sobre todo si sólo va a ser examinado por baciloscopía. dentro de una rutina lógica de trabajo. Los envases se deben solicitar a lo s Responsables Provinciales de la Red de Laboratorio de Tuberculosis o al Responsable Provincial del Programa.. EN EL MOMENTO MAS ADECUADO PARA EL PACIENTE. Es recomendable que el laboratorio no dé turnos de recepción de muestras.5.Capacidad adecuada: entre 30 y 50 c.Boca ancha: de no menos de 50 mm de diámetro. con características similares.c. aunque no siempre iguales. No se recomienda limpiar frascos de vidrio ya usados y volverlos a usar. .Descartable: preferentemente de plástico.

del tipo de los que se utilizan para conservar alimentos. Estos envases son útiles para conservar muestras en heladera o bien para su transporte. Es útil contar con un envase de plástico con tapa. En el transporte de las muestras deben considerarse tres condiciones importantes: . Cada envío debe ser acompañado por las hojas de solicitud de examen correspondiente o al menos por una lista de datos de los pacientes: nombre y apellido. . agitarlas levemente y dejarlas al menos 30 minutos. se debe comprobar que los envases estén cerrados herméticamente (en algunos casos conviene sellarlos con tela adhesiva o cinta de enmascarar). incluyendo a las ste micobacterias. haciendo un nudo seguro con cada bolsa. pero aun así éstas se colorean por la técnica de Ziehl-Neelsen. se debe establecer días de la semana en que se efectuarán regularmente los envíos.protección del calor excesivo. en cuyo interior se adapta una base de telgopor agujereada con círculos de diámetro ligeramente superior al de los envases. Extendidos fijados En casos excepcionales puede ser necesario realizar extendidos de esputo sobre el portaobjetos para enviarlos al laboratorio para su coloración y lectura. e desinfectante mata a todos los gérmenes del esputo.1. de alrededor de 15 por 40 cm. . De ser posible. de no ser posible. En un Servicio de Salud que no tiene laboratorio . aclaración sobre si es muestra para diagnóstico (1ª o 2ª) o para control de tratamiento indicando el mes. tanto para baciloscopía como para cultivo se recomienda no dejar transcurrir más de siete días entre el momento de la recolección de la muestra y el del procesamiento en el laboratorio. encima de la tapa. de altura ligeramente superior a la de los envases utilizados.6. La muestra debe ser conservada de preferencia en heladera o. en un lugar fresco.acondicionamiento de tal forma que no haya riesgo de derrames. Si no se dispone de cajas de plástico con divisiones interiores para el transporte. El responsable Provincial de la Red de Laboratorios de Tuberculosis lo ayudará a resolver estos problemas. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio que va a realizar la baciloscopía o el cultivo. Es conveniente que se le anticipe al laboratorio que va a recibir las muestras el correspondiente envío.protección de la luz solar. las muestras pueden ser acondicionadas en cajas de cartón grueso. En ese tiempo los 11 . el medio de transporte y el horario de llegada. con qué frecuencia y por cuál medio de transporte . el personal debe conocer a qué laboratorio debe enviar las muestras. Acondicionar los frascos así envueltos en la caja con relleno de papel de diario para mantenerlos firmes. servicio. para conservar allí las muestras. puede agregar unas 10 gotas de fenol al 5 % en el momento de recibirlas. luego de lo cual se deben envolver en dos bolsas de polietileno. En general. de manera que sujete firmemente cada frasco. en esa circunstancia se debe tomar a l precaución de tratar previamente el esputo con 10 gotas de fenol al 10% y después de una hora realizar el extendido siguiendo las indicaciones que se verán en el Capítulo de Baciloscopía. Si las muestras van a ser procesadas sólo por baciloscopía y conservadas por varios días. En lo posible se debe elegir el medio de transporte que garantice mayor rapidez y confianza en la entrega.

Comprobar que estén bien identificadas. 1. Si el derrame ha sido masivo esterilizar toda la caja en autoclave o incinerarla. Después de 24 horas de contacto con fenol el material puede descartarse quemando el frasco en el pozo de incineración del servicio. . los inconvenientes que se observan.Desinfectar el exterior de los envases con algodón con fenol al 5% si se han producido pequeños derrames durante el transporte. especialmente en la calidad y cantidad de los esputos y en la forma de envío.7. 12 . RECEPCION DE LA MUESTRA Cada vez que en el laboratorio se reciben las muestras se debe: . .Notificar al servicio que derivó las muestras. en caso de ser necesario.bacilos habrán muerto pero mantienen su capacidad de teñirse con la fucsina. Es conveniente hacer dos extendidos de cada muestra.

Material de vidrio aforado para preparar las soluciones. 3 g 100 ml 55 ml 1. b. (Colorante básico).Pileta o recipiente y un soporte para colorear los extendidos.2. 2. LUGAR DE TRABAJO La baciloscopía puede realizarse en laboratorios de cualquier complejidad.LA BACILOSCOPIA El examen microscópico directo o baciloscopía es la técnica fundamental para el diagnóstico y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. tinta indeleble o de diamante).000 ml 13 .2. Fucsina básica Alcohol 95° GL Fenol acuoso* Agua destilada c. frascos para soluciones colorantes.Envases para muestras. La técnica se basa en la capacidad que poseen casi exclusivamente las micobacterias de incorporar la fucsina fenicada y retenerla frente a la acción de decolorantes como la mezcla de ácido y alcohol: ácido-alcohol resistencia. que poseen las micobacterias en la pared celular. c. en lo posible cubierta con material que pueda desinfectarse fácilmente con soluciones germicidas (cerámica o azulejos sin junturas evidentes. El equipo mínimo necesario para realizar los extendidos y la coloración es: a. d. donde existe un solo ambiente éste sirve para todas las actividades. Sólo debe contarse con un mínimo de condiciones edilicias y de recursos y seguirse normas básicas sencillas que aseguren un trabajo de calidad y con riesgos mínimos.s.50m. Se debe contar con una mesa o mesada para realizar los extendidos de aproximadamente 1 x 0. El área de trabajo puede no ser exclusiva. acero o materiales similares). aplicadores de madera (o en su defecto ansas). portaobjetos.. Esta propiedad se debe al alto contenido en lípidos.Fucsina básica fenicada.. en esos casos se recomienda disponer de un horario especial para realizar los extendidos y coloraciones. que posean un microscopio con lente de inmersión en buenas condiciones. en caso de no contar con ellos se puede utilizar una bandeja de metal o vidrio de dimensiones aproximadas o bien cubrir el área de trabajo con papel de diario impregnado en fenol al 5%.p. medio litro).1.1.. Preparación a. principalmente ácidos micólicos. mechero preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol. pinza. habitualmente el momento de menor movimiento.Microscopio con objetivo de inmersión en buenas condiciones. lápiz marcador de vidrio (graso. cuando se pueda restringir el paso de personas y cerrar la puerta. fórmica. 2. REACTIVOS 2.. Puede no ser necesario si el Laboratorio de Referencia envía los colorantes y reactivos fraccionados para preparar un volumen determinado (un litro.. receptáculo para descartar los envases con muestras y frascos para fraccionar reactivos.

De ser posible es conveniente que se realice una compra unificada para garantizar la misma calidad en todos los servicios de una provincia. Todo reactivo con características anormales (llamativamente precipitado.Fraccionar pequeños volúmenes. 14 .Es conveniente preparar volúmenes que se han de consumir en no más de dos meses. * El fenol acuoso se prepara fundiendo con cuidado. Tenga en cuenta las medidas de bioseguridad recomendadas más adelante. disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero. el fenol en cristales con 100 ml de agua destilada por cada Kg de fenol (preferentemente calentado con calentador eléctrico o con llama a baja intensidad y con la tapa del frasco ligeramente abierta). de esta manera se mantiene líquido y debe conservarse al abrigo de la luz para evitar su oxidación. La mejor medida para evitar riesgos y errores es la sistematización de las actividades que se han de realizar. b.Si se usan colorantes comerciales consultar a los Responsables Provinciales de la Red de Laboratorios sobre su calidad ya que es muy variable. suavemente.Azul de metileno . deben ser de buena calidad.Alcohol 95° GL 970 ml Agregar siempre el ácido al alcohol.2. en baño maría. etc).2. 30 ml . . que se han de usar en la semana.Los colorantes.3. se agita suavemente y se agrega agua destilada para completar un litro. . aplicadores o ansas. .Los colorantes deben conservarse en frascos color caramelo o bien en envases comunes pero bien resguardados de la luz. o conservado por más de 6 meses.Azul de metileno (Colorante de contraste).Antes de comenzar a trabajar. c. en lo posible enjuagándolos con alcohol. frasco con arena y fenol o alcohol. Obsérvese que la pureza del colorante sea del 100%.. se lo deja reposar 24 horas. previamente filtrados. para disolver los cristales que pudieran haberse formado. Lavar estos envases con frecuencia semanal. 2. soporte para los extendidos.Agua destilada 1 g 1.Solución decolorante. PREPARACION DEL EXTENDIDO Antes de comenzar a trabajar debe lavarse las manos y colocarse el guardapolvo.000 ml Se disuelve el azul de metileno en el agua agitando suavemente. se agita y filtra. agitando suavemente y se agrega el fenol acuoso*. . de no ser así ajústense las cantidades teniendo en cuenta el grado de pureza.a. se deja reposar hasta el día siguiente.Acido clorhídrico p. turbio. y no al revés porque es peligroso. lápiz para marcar los portaobjetos. Precauciones con los colorantes . especialmente la fucsina básica. debe ser descartado. ..Se disuelve la fucsina básica en el alcohol. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar. 2. Se filtra. . téngalo en cuenta: .

. tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado.Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos. .Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero. parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas.Si usa palillo para realizar el extendido. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido. La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes de la baciloscopía. la que descartará con el material a esterilizar. Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla. 15 . quémela primero desde el mango hacia el aro. enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo. . déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta. Se recomienda no procesar más de doce muestras por vez para evitar accidentes y errores por cambio de muestra. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco. al finalizar el trabajo. .Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración. Si usa ansa no descartable.Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios..

tratando de dispersarla por toda la superficie central. si los ha usado. Limpie la superficie de trabajo descartando los papeles con que pudiera haberla cubierto y pase fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% sobre la superficie para desinfectarla. no deben quedar sin colorear hasta el día siguiente . - - 2. pásela con movimientos circulares por la arena y luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro.Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido. el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. . . Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos. sin llegar a los bordes. para evitar confusiones. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente. Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos El extendido debe quedar de grosor homogéneo. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Esta es la técnica más empleada en el mundo y ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo. puede descartar las muestras colocándolas.. Si es demasiado fino. si usó ansa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol. . Descarte el barbijo o los guantes. del mismo modo que las muestras. Puede utilizar un incinerador especial muy fácil de fabricar con elementos sencillos. ya que los bacilos permanecen vivos cuando son fijados sólo con calor suave. Continúe de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. Cuando haya terminado. El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado. en forma homogénea. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio.4. FIJACIÓN DEL EXTENDIDO . Los extendidos deben ser coloreados lo antes posible.Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%.Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente.Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado. cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos. el material puede desprenderse durante la coloración. Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo. si es muy grueso. no lo queme ni lo sobrecaliente.Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el ansa con movimientos circulares. 16 . es posible producir un resultado falso negativo. junto con los palillos.

Vierta los reactivos y el agua suavemente evitando salpicaduras que pueden transferir material de un portaobjetos a otro y pueden generar aerosoles. . Este papel evita que los posibles cristales de fucsina se asienten sobre el extendido. El calentamiento nunca debe ser tal que hierva la fucsina ya que a esta temperatura la pared de los bacilos se destruye y no se colorean. 17 ..Coloración. Incline el portaobjetos tomándolo con una pinza para eliminar el exceso de agua y evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación. . este tiempo y estas temperaturas son suficientes para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos.En el término de aproximadamente cinco minutos debe calentar tres veces hasta emisión de vapores.Cubra la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recientemente filtrada. . . Girando el extendido lave con cuidado también la parte posterior. . lave cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina.Disponga dos varillas de vidrio sobre la pileta de lavado a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra. si por cualquier causa no desea colorear en la pileta puede utilizar alguna bandeja metálica o de vidrio. También se puede cubrir previamente el extendido con un trozo de papel de filtro que no sobresalga del portaobjeto y luego cubrir con la fucsina.Es también la más económica y alcanza la misma sensibilidad que la técnica de fluorescencia si se le dedica tiempo suficiente a la lectura de cada frotis. Consta de tres tiempos: a. . .Levante cuidadosamente el portaobjetos desde el extremo más cercano a usted y con el frasco de agua o un chorro fino proveniente de una mangueraconectada a la canilla.Coloque las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y sin que se toquen entre ellas.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol caliente suavemente por debajo de los extendidos con movimientos de vaivén hasta que observe que se desprenden los primeros vapores.

Mantenga el microscopio limpio. Se considera decolorado cuando sus partes más gruesas conservan sólo un leve tinte rosado.5. en caso positivo. repita el procedimiento.Decoloración.Cubra la totalidad del extendido con solución decolorante de alcohol-ácido y deje aproximadamente 3 minutos para que el decolorante actúe. .. 18 .. b. . Cubra todo el extendido con solución de azul de metileno dejándolo entre 45 segundos y un minuto.Déjelas secar a temperatura ambiente. c. . libre de polvo. . la riqueza en bacilos. Pasado ese tiempo enjuague con abundante agua a baja presión.determinar si en el extendido hay bacilos ácido-alcohol resistentes.. 2. .A medida que las saque del soporte de coloración observe si la numeración está aun visible y en caso contrario vuelva a numerarlas. OBSERVACION MICROSCOPICA La observación microscópica cumple principalmente dos objetivos: a. Si aún observa coloración rosada intensa..Elimine el exceso de agua inclinando el portaobjetos. restos de aceite y humedad. Enjuague las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpie la parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada. déjelo actuar un minuto y enjuague nuevamente. Vuelva a cubrir con solución decolorante.Después de la última decoloración mantenga el extendido cubierto al menos un minuto con agua para rehidratar las células. lo que da idea del grado de severidad e infecciosidad del paciente.Coloración de fondo. apoyándolas en forma vertical sobre un papel absorbente o en un soporte.b.cuantificar aproximadamente.

Si se encuentran entre uno y 10 BAAR por campo bastará con leer 50 campos.De haber bacilos los observará como pequeños bastoncillos delgados.Enfoque en el microscopio . ligeramente curvos. para evitar repetir la lectura de algunos campos. papel suave. absorbiendo el aceite sin frotar en exceso la lente.. continúe ajustando el tornillo micrométrico hasta ver una imagen nítida. a. destacándose sobre un fondo azul. .. . leyendo de izquierda a derecha del extendido al menos 100 campos microscópicos útiles. (No es conveniente usar aceites naturales de mayor densidad y secantes. . b. generalmente con gránulos más coloreados en su interior. utilizando permanentemente el micrométrico.Ubique cerca del microscopio todos los elementos que va a necesitar para la lectura: aceite de inmersión. por ejemplo aceite de cedro). Es conveniente tener un extendido positivo coloreado para evaluar periódicamente las buenas condiciones del microscopio. aislados o en grupo. En ese momento observe a través de los oculares y continúe bajando muy lentamente hasta ver el material coloreado del extendido. Cada campo microscópico debe ser observado en superficie y profundidad. teñidos de rojo fucsia.Coloque el portaobjetos sobre la platina dejando la superficie cubierta por el aceite justo debajo de la lente de inmersión y baje ésta lentamente con el tornillo macrométrico hasta que toque ligeramente el aceite. 19 . No se debe tocar el extendido con la punta del gotero o varilla para evitar pasar partículas de un extendido a otro y generar falsos resultados positivos. .Si se encuentran más de 10 BAAR por campo bastará con leer 20 campos. .Siga una pauta uniforme de observación. .Método de lectura.Terminada la observación limpie el aceite de inmersión del objetivo con una gasa o papel suave. .Apoyando el portaobjetos sobre la mesa deposite una gota de aceite de inmersión sobre la parte del extendido coloreado cercana al número. equipado con un objetivo de inmersión (100 x) y un ocular 8 ó 10 x. Tenga en cuenta que este extendido positivo se va decolorando con los sucesivos lavados con xileno.Debe utilizarse un microscopio con condiciones adecuadas de óptica. . . Esto contribuirá al cuidado de la lente y a evitar la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer. una caja para guardar portaobjetos. el Registro del Laboratorio y una lapicera.Si no se encuentran bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) o se observa menos de un bacilo por campo en promedio deben examinarse como mínimo 100 campos útiles.

20 . Positivo (+) : se observa en promedio menos de un bacilo por campo en 100 campos observados. La siguiente escala semicuantitativa ha sido adoptada por el país y es la utilizada en la mayoría de los países del mundo: Negativ o (-) : no se encuentran BAAR en los 100 campos observados. Si en una lámina se observan de uno a cuatro BAAR en 100 campos se recomienda: . . para controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes que se prepare. Si no puede decolorar bien el preparado. preparados con muestras a las que se les ha agregado fenol. los reactivos son defectuosos o la coloración ha sido realizada en forma incorrecta. Positivo (++) : de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados Positivo (+++) : más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados Registre inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del laboratorio. enviar estas muestras para cultivo. . Si no detecta bacilos ácido-alcohol resistentes. si corresponde. c. hacer otro extendido de la misma muestra. para identificarlos más rápidamente.Si con esa lectura no se encuentran más bacilos.Ampliar la lectura a 200 campos.Control de calidad interno del laboratorio Es conveniente guardar extendidos fuertemente positivos. Envíe el resultado lo más pronto posible al centro de salud o médico que solicitó el examen. agregue toda observación que indique que la calidad de la muestra no fue adecuada. Escriba el resultado en el formulario correspondiente.. d..No es conveniente usar xilol u otro disolvente en forma permanente para limpiar los objetivos pues deterioran rápidamente los objetivos y oculares.Informe de los resultados . Los aceites sintétic os no secantes utilizados actualmente no requieren de limpieza frecuente con solventes. Es conveniente marcar los resultados positivos en rojo. De ser posible. el decolorante es defectuoso o la decoloración ha sido realizada en forma incompleta. tratando de elegir partículas purulentas. consignando en el Libro de Registro el hallazgo y en lo posible solicitar una tercera muestra.Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse como negativa.

21 . Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la superficie con leve presión.Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado 2. Luego del mes. La limpieza se realiza de la siguiente manera: 1. se comprueba que se mantenga visible la numeración y se las guarda con sus resultados.Lave con abundante agua de la canilla. de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las negativas en las que no se observen rayaduras para preparar nuevos extendidos y enviando las positivas a otra sección del laboratorio.2.6. 3. 4.Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas a usar. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscopías requiere que las láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su relectura.Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30% durante 48 horas.

3.2. Es conveniente dictar a los ingresantes un curso con contenidos de historia natural de la tuberculosis y medidas de bioseguridad y reafirmar periódicamente los conocimientos. PERSONAL 1. 4. con otra enfermedad inmunosupresora. 5. 4. 1. distracciones y exposición de personas no involucradas. NO BARRER EN SECO NI ENCERAR. 3.1. Los trabajadores de salud infectados con HIV.NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS La información disponible en nuestro país indica que el personal de salud más expuesto a contraer tuberculosis es el que asiste directamente al paciente: médicos y enfermeras. 3. Restringir el acceso al laboratorio de personal ajeno al área de trabajo para evitar movimientos. Cada laboratorio debe contar con instrucciones escritas y difundidas sobre el manejo de pacientes con tuberculosis y de las muestras biológicas obtenidas de los mismos. 3. 2. Trabajar en áreas con pisos y paredes lavables. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO En todas las circunstancias tener presente que es necesario aplicar todas las medidas lógicas para evitar la generación y movimiento de aerosoles. Aquéllos con enfermedades pulmonares crónicas deben consultar previamente con su médico. Atender al personal del centro de salud y pacientes fuera de este área. baciloscopía y cultivo de ser posible. Deben tener una evaluación médica clínica anual sistemática con placa de tórax y. NO USAR PLUMEROS PARA LA LIMPIEZA. limpiarlos diariamente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. corrientes de aire. cuando tengan síntomas respiratorios. Es menor el riesgo del personal del laboratorio que puede protegerse con medidas de precaución simples y no muy costosas. Toda manipulación de material potencialmente infeccioso debe ser realizada en áreas alejadas de la circulación general. Los trabajadores de salud no reactores a la tuberculina (PPD menor de 10 mm) deben vacunarse con BCG al ingresar a trabajar. con tratamientos prolongados con medicamentos inmunosupresores o diabéticos no deben trabajar en áreas de riesgo. En cada sección deben estar expuestas las normas básicas de bioseguridad específicas del área. 6. El Comité de Infecciones Hospitalarias es el responsable de reglamentar las normas de bioseguridad para todo el personal y de hacerlas cumplir. No utilizar ventiladores ni acondicionadores que generen flujos de aire mientras se está trabajando con material infeccioso. 22 . 2.

no sacarlo del centro de salud donde debe ser desinfectado y lavado (agua caliente y enjuague con agregado de hipoclorito). es conveniente mantenerla sin hacer excepciones. 11.3. resistentes. comer ni fumar en el área de trabajo donde se procesa material potencialmente infeccioso. No beber. Sistematizar el procesamiento de las muestras. 7. cubrir con vendaje y guantes. desinfectar el exterior del envase con algodón embebido en fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10%. Utilizar siempre guardapolvo de mangas largas y cerrado. Las siguientes recomendaciones son generales para todos los operadores del laboratorio en cualquier procedimiento que se haga con una muestra de SR. (Ver Baciloscopía) 2. No tocar. 9. Al recibir la muestra comprobar que no haya derrames. impermeables. Las muestras deben ser recolectadas al aire libre o en un lugar bien ventilado hacia el exterior y con puertas cerradas a áreas de circulación de público. sin antes lavarse las manos. 3. 6.4. Si se procesan un promedio diario de más de 5 muestras. aun cuando se usan guantes. rellenando los espacios vacíos para evitar movimientos. 10. Los barbijos de cirugía no protegen contra los bacilos de la tuberculosis. si existieran. Ubicar ésta en otra caja sin divisiones de tamaño ligeramente mayor. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS Todo laboratorio que cuente con un microscopio puede realizar una baciloscopía adoptando medidas de bioseguridad de sentido común. Si el derrame hubiera sido masivo autoclavar o incinerar el frasco y el contenedor en el que fue trasladado al laboratorio. de ser necesarias. Pueden utilizarse los de trabajadores que trabajan con asbestos o silicio. Para el transporte de muestras que serán procesadas sólo por baciloscopía se les puede agregar 10 gotas de fenol al 5%. 3. En enfermos sospechosos de tuberculosis deben evitarse en lo posible las nebulizaciones. 3. manipulación y procesamiento de las muestras. que no son costosas. No ubicar en el área de trabajo elementos innecesarios ni sacar de la misma libros de registro o elementos allí utilizados. El filtro del barbijo o máscara debe ser de alta eficiencia (HEPA) que retenga partículas del orden de los 0. 3.3 micrones que aseguren al menos 95% de protección. 4. si las hubiera. 2. 23 . Disponer siempre de un frasco con fenol al 5% y trabajar en el área delimitada cubierta con un papel embebido en fenol. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS 1. con cierre hermético y divisiones interiores. En circunstancias normales no es indispensable el uso de guantes para el trabajo con muestras de esputo en tuberculosis aunque. Las máscaras u otro material utilizado deben lavarse con detergente y abundante agua y el ambiente debe ser ventilado luego de cada paciente. Para el transporte acomodar los envases en cajas rígidas. No es recomendable trabajar con más de 12 muestras simultáneamente. Lavarse las manos con frecuencia. si existe una norma general de laboratorio de utilizarlos para protección.5. 8. se harán en la sala de toma de muestras o en otra cuyas condiciones de ventilación sean similares. 1. por ejemplo con papel. utilizar barbijos con buen ajuste alrededor de la boca y nariz para la toma. el fenol mata el bacilo pero conserva su propiedad de tinción con fucsina. Controlar que no haya heridas o escoriaciones en las manos. instalaciones o equipamiento del laboratorio.

Al regresar recoger el material con pinzas y depositarlo en un recipiente donde pueda ser incinerado o autoclavado. De igual manera proceder para seleccionar la partícula a ser extendida y al realizar el extendido. teniendo en cuenta que la superficie interior no debe presentar rugosidades para permitir una buena desinfección. sin muestra. La cámara puede ubicarse sobre la mesada del laboratorio. 7. colocando antes del mismo filtros adecuados. no es necesario que sean complejas. Al realizar los extendidos. Si se usa ansa.4. La ventana puede ser de vidrio doble o triple. 33 cm en la parte superior y 20 cm de alto en la entrada de manos. melamina. El aire contaminado dentro de la cámara debe ser expulsado forzadamente por un extractor adecuado. 85 cm de altura. conservar los bordes limpios. comenzando desde el mango hacia el aro. primero debe ser limpiada en un frasco con arena y fenol o alcohol y luego quemada en el mechero. Abrir los envases con muestras teniendo un mechero entre la misma y el operador. Si la cámara no dispone de esta ventilación forzada. 5. Si se usa pipeta cuidar que la punta superior esté protegida con algodón. 60 cm de ancho en la base. Aunque no es imprescindible pueden utilizarse campanas de bioseguridad. no pipetear nunca con la boca. etc…). De preferencia utilizar palillos para realizar los extendidos. que puede ser utilizada para técnicas básicas de bacteriología e incluso como campana de gases: - - - Puede construirse en madera u otro material (acero. A continuación se sugiere un diagrama de una campana sencilla y económica. 6. 8. Las dimensiones aproximadas son: 100 cm de largo. 24 . Ante cualquier rotura del envase o tubo con material potencialmente contaminado cubrir inmediatamente la zona con papel y embeberlo con fenol al 5% o con hipoclorito al 10% y abandonar el área de trabajo por 30 minutos. el riesgo de concentración de contaminantes es superior al de fuera de la cámara. Colorearlos tan pronto estén secos para disminuir al mínimo el tiempo en que las micobacterias permanecen viables.

SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN El sistema de información epidemiológica y operacional debe ayudar a administrar mejor la Red de Laboratorios de Tuberculosis a todos los niveles. Los instrumentos de registro y formularios con los que debe contar la Red son: Formulario de Solicitud de baciloscopía - Registro de Muestras para Investigación Bacteriológica de la Tuberculosis 25 . Éste debe permitir el conocimiento actualizado de la magnitud y tendencia de la situación epidemiológica y al mismo tiempo el grado de desarrollo y efic iencia de la Red de Laboratorios.

26 .

2000. Role and Operation in a Low-Income Country. National Institutes of Health. Grange JM. 1997. USA. Collins CH. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD/ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD. 2.BIBLIOGRAFÍA 1. Bacteriología de la tuberculosis. 4. Argentina. 7. 27 . Emilio Coni”. Washington: U. 2nd . Education and Welfare. Smithwick. Centers for Disease Control and Prevention. International Union Against Tuberculosis and L ung Disease. 2nd ed. 1979. Bull Int Union Tuberc 1978:4-16. Center for Disease Control. Laboratory Manual for Acid-fast Microscopy. La muestra. Minimum Requirements. U.ed. editor. Normas técnicas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. US Department of Health . Argentina. 1-51. Yates MD. El exámen microscópico. Nota Técnica Nº26/Rev1. Department of Health and Human Services. Oxford: Butterworth-Heinemann. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. 1998. 3. Organization and Practice. installation and use of biological safety cabinets. 5.S. 1988.S. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. Primary Containment for biohazards: selection. Technical guide for sputum examination for tuberculosis by direct microscopy . 6. Goverment Printing Office 1995. International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. Tuberculosis bacteriology. Francia.

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