Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis

Microscopía - Normas Técnicas

ARGENTINA 2000

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AUTORIDADES

PRESIDENTE DE LA NACION Dr. Fernando DE LA RÚA MINISTRO DE SALUD Dr. Héctor José LOMBARDO SECRETARIO DE ATENCIÓN SANITARIA Dr. Arnoldo Víctor CASTILLO SUBSECRETARIO DE PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN Dr. Javier Oscar VILOSIO DIRECCIÓN NACIONAL DE MEDICINA SANITARIA A/C Dr. Francisco MARTINI DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA A/C Dr. Anibal REINALDO SUBSECRETARIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA Dr. Ernesto PODESTÁ ADMINISTRACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS E INSTITUTOS DE SALUD “DR. CARLOS G. MALBRAN” A/C Dr. Andrés RUÍZ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Dra. María Inès DEMITRI INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “DR. EMILIO CONI” A/C Dr. Alberto MARCHESE

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Argentina. 3 . 2000.MICROSCOPÍA: NORMAS TÉCNICAS Documento elaborado sobre la base de un borrador preparado por: OMAR LATINI Comité de redacción: LUCÍA BARRERA OMAR LATINI MARÍA DELFINA SEQUEIRA ELSA ZERBINI Santa Fe.

3. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO 1.3. EL ENVASE_____________________________________________________ 1. RECEPCION DE LA MUESTRA __________________________________ LA BACILOSCOPIA________________________________________________ 5 6 6 6 7 7 8 8 9 9 10 11 12 13 13 13 13 14 14 16 18 21 2. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO _ 1. Precauciones con los colorantes ___________________________________ 2.6. PERSONAL _____________________________________________________ 3.2.2.4. REACTIVOS ____________________________________________________ 2. Hisopado laríngeo ______________________________________________ 1. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS ___ 3.4.5.1. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS _______________ NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS ___________________________________________________ 3.4. CALIDAD DE LA MUESTRA _____________________________________ 1. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN _______________________________ 2. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO ___ 1.1.2.5. Lavado gástrico ________________________________________________ 1.3. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN_____________________________ BIBLIOGRAFÍA _____________________________________________________ 22 22 22 23 23 25 27 4 .2.2.3. Lavado bronquial_______________________________________________ 1.6. Preparación ___________________________________________________ 2.3.1.3.4.3.2.1. PREPARACION DEL EXTENDIDO ________________________________ 2.INDICE INTRODUCCIÓN ____________________________________________________ LA MUESTRA ______________________________________________________ 1. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO _______________________ 3.3. LUGAR DE TRABAJO ___________________________________________ 2.1.7. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO __________________________ 1. Inducción de esputo_____________________________________________ 1. OBSERVACION MICROSCOPICA__________________________________ 2.2.

convocado por el Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO). aún cuando se cuenta con técnicas de diagnóstico sencillas y tratamientos eficaces. que hacen que se crea conveniente actualizar las normas. bacilo productor de la tuberculosis. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial. a los que se agregan laboratorios privados y de obras sociales. sino también que las técnicas que utilicen sus integrantes sean las más adecuadas a las necesidades de la población y que se realicen con la mejor calidad. Sin embargo algunos cambios se han producido. es sencilla. Se estima que hay en promedio un laboratorio con microscopio cada 40. de los cuales 6. especialmente con la asociación de TBC-SIDA. estas nuevas normas fueron adoptadas por la Comisión Argentina de Bacteriología de la Tuberculosis y han sido utilizadas. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis y los Programas Provinciales tienen como objetivo principal diagnosticar tempranamente los casos infectantes y tratarlos con esquemas eficaces y modalidades que aseguren una curación cercana al 100%. El primer paso para cumplir estos objetivos es contar con laboratorios que le aseguren a los enfermos un diagnóstico rápido.000 son enfermos con formas pulmonares que eliminan bacilos con la expectoración y mantienen la transmisión del bacilo mientras no son diagnosticados y tratados adecuadamente. La estandarización de la baciloscopía se basa en normas que garantizan que las técnicas propuestas han sido el producto de amplios ensayos mundiales realizados por organizaciones internacionales como la OPS/OMS y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER). se transmite de persona a persona por medio de la tos de los enfermos con lesiones pulmonares abiertas que expectoran bacilos. aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente. Luis Herrera Malmsten.INTRODUCCIÓN Mycobacterium tuberculosis.000 habitantes. La baciloscopía es la técnica que mejor se adapta a las necesidades del Programa de Control ya que detecta los casos más infectantes. aunque si se toman en cuenta los mayores de 15 años en quienes se aplica sistemáticamente la baciloscopía la oferta de servicio es mucho mayor. reunido en México en 1983. Si bien después de quince años los avances en la tecnología han introducido variantes en la bacteriología. la baciloscopía aun sigue siendo la técnica de elección para el objetivo principal de cortar la cadena de transmisión mediante el diagnóstico de los casos bacilíferos. para ello desde hace varias décadas se ha ido conformando la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis de la que participan más de 600 laboratorios de dependencia oficial: nacionales. seguro y accesible. dos mil millones de personas. hasta el presente. Esta Red no sólo tiene por objetivo garantizar el acceso fácil al diagnóstico. En Argentina se notifican aproximadamente 13. como paso previo a su curación. El primer Manual de Laboratorio utilizado en nuestro país fue una adaptación del Manual de Bacteriología de la Tuberculosis escrito por el Dr. Esa adaptación fue utilizada durante más de una década en todos los laboratorios del país. especialmente en lo que respecta a la toma y conservación de algunas muestras y a la aplicación de normas básicas de bioseguridad que garanticen el trabajo confiado y seguro. provinciales y municipales. actualizó las normas a las nuevas necesidades de los países de América Latina. 5 . es económica y puede ser fácilmente estandarizada para garantizar la calidad en todo el territorio nacional. en sus cuatro capítulos. su tratamiento efectivo y su curación y continúa siendo el método más rápido de diagnóstico. hasta que un Comité Asesor de la OPS/OMS.(Notas Técnicas CEPANZO N 26. puede realizarse en cualquier laboratorio que cuente con un microscopio. a solicitud de la Organización Panamericana de la Salud en 1973. están infectadas con él. 27. bacteriólogo chileno. 28 y ° 29/1988). que deben asegurar que cualquier habitante del país pueda acceder al diagnóstico de la enfermedad.000 casos anuales. de los cuales cerca de un millón mueren por la enfermedad.

Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo por lo que la enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO El hecho más importante es el de comunicar al Sintomático Respiratorio (SR) con mucha claridad qué debe obtener y cómo y dónde hacerlo . La palabra que define la buena muestra es diferente en cada región y en general el SR la identifica perfectamente (gallo. líquido ascítico. de allí que las muestras que puedan procesarse para diagnóstico o control son muy variadas: esputo. líquido cefalorraquídeo. Las secreciones nasales. 1.LA MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no sólo es necesario que ejecute las técnicas en forma correcta. colocada en un envase adecuado. del fondo del pecho. faríngeas o la saliva no son buenas muestras. 1. El Programa de Control de la Tuberculosis se centra prioritariamente en la detección temprana de estos enfermos. No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como consultorios médicos o baños. tal como un espacio no concurrido del patio del Servicio de Salud. con rótulos que no se despeguen o con lápiz indeleble. entendiéndose por tal la que proviene del sitio de la lesión que se investiga. sino que cuente con una buena muestra. líquido pleural. aunque no deben desecharse pues siempre existe la posibilidad de que los bacilos hayan quedado en la boca.1. además de padecer casi siempre enfermedad severa. Cerca del 85% de las tuberculosis tienen localización pulmonar y estos enfermos. son a su vez los que mantienen la infección pues diseminan los bacilos con la tos. Elija un lugar adecuado para que el SR produzca la expectoración: por ejemplo una pequeña habitación bien ventilada y con mucho sol si se dispone de ella o algún lugar abierto que permita intimidad. etc. Para ello. estornudos o al hablar. (Ver Bioseguridad). dejando la obtención de otras muestras para cuando se trate el cultivo. Entregue al SR el envase de recolección rotulado con su nombre o número de identificación y el servicio que lo solicita. en este caso. obtenida en cantidad suficiente. gargajo. la muestra de catarro mucopurulento proveniente de pulmón es la que más garantiza que si hay bacilos se puedan observar o aislar.2. biopsias y otros. pollo. Este capítulo se dedic ará a la toma de muestras de origen pulmonar. la persona que da las instrucciones debe usar el lenguaje que el paciente entienda. orina. CALIDAD DE LA MUESTRA Para el éxito de cualquier análisis de laboratorio se debe contar con una buena muestra. bien identificada y conservada y transportada correctamente. sangre. pus de cavidades abiertas.). La localización pulmonar es la más frecuente debido a que el bacilo necesita una buena presión de oxígeno para desarrollar y lo consigue principalmente en ese órgano que. - 6 . es el primer lugar en el que se instala al infectar al hombre. Estos datos deben ser escritos en la pared del frasco y no en la tapa para evitar errores. razón por la cual la muestra de mayor rendimiento y la que se procesa con mayor frecuencia en el laboratorio es el esputo. nariz o faringe. por otra parte.

observe por fuera del frasco si la misma es de buena calidad: mucopurulenta o mucosa. En caso de que esto último sucediera. 7 .Se debe nebulizar con soluciones normotónicas (solución fisiológica) o ligeramente hipertónicas. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO Siempre se debe intentar conseguir expectoración espontánea. Si es saliva o secreción nasal no la descarte porque aún así puede contener bacilos. Este procedimiento debe repetirlo otras dos veces.3. tratando de arrastrar las secreciones del pulmón. Esta última no es tan buena como el esputo por lo que se aplica sólo a niños. Inducción de esputo . Registre esta característica en el Registro de Laboratorio. 1. enfermos siquiátricos o ancianos. Debe recoger en el envase el esputo producido tratando de que entre en su totalidad sin mancharse las manos o las paredes externas del frasco. - - Cuando reciba la muestra. a temperatura apenas superior a la corporal. a fin de fluidificar las secreciones y ayudar a su eliminación. colocando todas las secreciones en el mismo frasco.- Instruya al SR indicándole que debe inspirar profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible.3. insista en las instrucciones e indique que recoja otra muestra. en los casos poco frecuentes en que no pueda lograrse pueden utilizarse otras formas tales como la inducción de esputo o la recuperación de secreciones por otros medios. retenerlo un momento y luego expulsarlo violentamente desde el abdomen. 1. aconsejar que limpie el frasco con un papel y las manos con agua y jabón.1.

.Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización y se entrega un segundo frasco para que la persona recoja las secreciones producidas en las 24 horas siguientes.2. (Ver Bioseguridad). Una vez que la sonda llega al estómago. . de longitud adecuada y de diámetro adecuado a la edad del niño. debe neutralizar el material con una solución de bicarbonato de sodio al 10% o fosfato trisódico anhidro al 10% y conservarlo en heladera por no más de 24 horas hasta el momento del envío. .Envase: el aconsejado para esputo.3. Si por alguna causa inevitable no es posible. Lavado bronquial La obtención de esta muestra está reservada a médicos especialistas. razón por la que debe entregarse un frasco al enfermo para que las recoja y entregue en el laboratorio. por lo menos. Las maniobras utilizadas suelen producir expectoración en las 24 horas posteriores.Conservación: coloque el material en el frasco adecuado y envíelo inmediatamente al laboratorio. Normalmente es posible evitar demoras porque la toma de muestra se realiza en forma programada. Si es un lactante es conveniente que no esté presente la madre en el momento de la toma de muestra porque su presencia puede incentivar los movimientos peristálticos. . . se debe cultivar este tipo de muestras .Número de muestras: al menos tres. es frecuente que contenga micobacterias ambientales que pueden estar alojadas en el estómago. . Por razones de bioseguridad no es aconsejable utilizar este método a menos que se cuente con sistemas de esterilización adecuados o máscaras descartables y salas de nebulizaciones aisladas.Se hace kinesioterapia o.3. En caso de no obtenerse material inocule 10 a 15 c. Lavado gástrico Se utiliza para detectar bacilos en el esputo ingerido y alojado en el estómago. ya que debe ser procesado en las 6 horas siguientes a la obtención para ser cultivado.. baciloscopías de al menos dos muestras espontáneas de esputo para intentar detectar la enfermedad sin procedimientos invasivos y evitar la contaminación innecesaria del broncofibroscopio con bacilos. de agua destilada o solución fisiológica estéril y recoja inmediatamente. aspire con jeringa sin que la succión provoque daño.Técnica: sondeo gástrico realizado por médico o enfermera con experiencia.Momento de la recolección: por la mañana al despertar.c. La baciloscopía de lavado gástrico tiene valor relativo ya que habitualmente contiene pocos bacilos y. Antes de tomar la muestra deben realizarse. . de tal forma de facilitar el descenso de la expectoración. de ser posible. con sonda nasal. 8 . Siempre que sea factible debe ser cultivada. por otra parte. drenaje postural acostando al paciente con la almohada debajo del tórax y la cabeza por fuera de la camilla y más baja.500g. 1. 1. ventiladas y soleadas que impidan la transmisión de bacilos por los aerosoles formados.3. Siempre que sea posible. siempre que tenga el volumen adecuado. con el paciente en ayunas dado que la ingesta de alimentos hace que la expectoración ingerida pase al intestino.Procesamiento: Para realizar la baciloscopía es necesario centrifugar previamente la muestra durante 20 minutos a 2.

Si se decide tomar una tercera muestra. Retire el hisopo tratando de no tocar las partes blandas de la boca e introdúzcalo en el tubo de ensayo. . se aconseja utilizar esta técnica cuando no es posible obtener otro tipo de muestra.Técnica: una vez sentado el paciente solicítele que levante la cabeza. pida al paciente que tosa e imprima al hisopo un movimiento circular suave tratando de recoger las secreciones de esa zona. de ser posible. ésta puede ser recogida en el momento en que el SR entrega la segunda o bien se debe solicitar una nueva muestra matinal.Las salas de fibroscopía y el personal que la realiza deben contar con todos los requisitos de bioseguridad. Si bien la primera suele tener menor rendimiento que la segunda. 1. preferentemente en ayunas ya que suele provocar náuseas en el momento de la recolección. Se deben aplicar rigurosos procedimientos de esterilización y lavado del broncoscopio para evitar la transmisión de tuberculosis con dispositivos contaminados y la generación de falsos resultados positivos por la presencia de bacilos remanentes. deben hacerse los mayores esfuerzos para que la persona regrese con la segunda muestra.4. Es conveniente procesar esta muestra por cultivo siempre que sea posible para poder detectar el bajo número de bacilos y debido a que las fibras de algodón pueden producir resultados falsos positivos en la baciloscopia.Momento de la recolección: por la mañana. En las condiciones habituales del Programa de Control se considera suficiente obtener dos muestras por SR . 9 . El operador debe utilizar guardapolvo largo con mangas. al tomarla asegura que al menos se pueda analizar una muestra del SR. abra la boca y saque la lengua y tómesela con dos dedos de la mano izquierda cubierta con guantes o bien con un trozo de gasa. . 1.4. barbijo o máscara rígida y en lo posible anteojos. es decir a cualquier consultante que ha estado tosiendo por más de 15 días. Introduzca el hisopo levemente humedecido con agua destilada o solución fisiológica estéril hasta la laringe. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO Como la eliminación de los bacilos por el esputo no es regular y permanente. La segunda muestra la debe conseguir el p aciente en su casa o en la internación por la mañana al despertar (muestra matinal).Envase: tubo de ensayo con tapón de algodón conteniendo un hisopo de algodón montado en alambre de acero o varilla de madera flexibles de aproximadamente 30cm de longitud. De todas formas. se debe pedir una tercera muestra y también. Debe ser enviado lo antes posible al laboratorio para su procesamiento. en caso de que ambas fueran negativas y el médico tenga otros elementos para sospechar que puede tratarse de tuberculosis. es conveniente analizar más de una muestra de cada SR para el diagnóstico de la tuberculosis. las molestias que ocasiona al paciente y los riesgos potenciales para la persona que toma la muestra. La primera muestra debe ser tomada siempre en el momento de la consulta (muestra inmediata) cuando el médico u otro personal del equipo de salud identifican al SR.Número de muestras: tres hisopados en días consecutivos.3. Hisopado laríngeo A causa del escaso número de bacilos que suele contener esta muestra. vivos o muertos. . . un cultivo. guantes.

No se recomienda limpiar frascos de vidrio ya usados y volverlos a usar. con características similares. para evitar derrames durante el transporte y la producción de aerosoles cuando se abre en el laboratorio. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis facilita generalmente frascos de recolección en cantidad suficiente. Es recomendable que el laboratorio no dé turnos de recepción de muestras. 1. Por lo tanto. Luego puede regular el momento en que las procesa ya que el esputo puede conservarse varios días. poniendo énfasis en las muestras del segundo y cuarto mes y en la del final del tratamiento. Aún así. debe considerarse que la demora en la entrega de un resultado positivo puede demorar el inicio del tratamiento. que han demostrado ser en general adecuados. para evitar posibles errores y minimizar la manipulación de material potencialmente infeccioso. .Boca ancha: de no menos de 50 mm de diámetro.c.Capacidad adecuada: entre 30 y 50 c. sobre todo si sólo va a ser examinado por baciloscopía. Lo ideal es entregar el informe dentro de 24 horas de recibida la muestra.Transparente: para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el SR. a las descriptas.5. EL ENVASE El envase más adecuado debe tener las siguientes características: . el examen debe ser realizado con la mayor premura posible. EN EL MOMENTO MAS ADECUADO PARA EL PACIENTE. aunque no siempre iguales. prolongar el período durante el cual el paciente permanece infeccioso o determinar que pierda un enfermo. . dentro de una rutina lógica de trabajo.Cierre hermético: en lo posible con tapa a rosca. PARA FACILITAR LA LOCALIZACION DE CASOS DE TUBERCULOSIS LAS MUESTRAS PRODUCIDAS POR LOS SR DEBEN PODER SER TOMADAS O ENTREGADAS A CUALQUIER HORA DEL DIA EN QUE EL SERVICIO ESTE ABIERTO. para facilitar su eliminación. para evitar derrames y facilitar la selección de la partícula útil.. para que el paciente pueda depositar la expectoración con facilidad dentro del envase. 10 .Descartable: preferentemente de plástico. Los envases se deben solicitar a lo s Responsables Provinciales de la Red de Laboratorio de Tuberculosis o al Responsable Provincial del Programa. . sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partícula más adecuada para realizar el extendido.Para control de tratamiento se aconseja examinar con baciloscopía una muestra por mes. .

La muestra debe ser conservada de preferencia en heladera o. en esa circunstancia se debe tomar a l precaución de tratar previamente el esputo con 10 gotas de fenol al 10% y después de una hora realizar el extendido siguiendo las indicaciones que se verán en el Capítulo de Baciloscopía. Cada envío debe ser acompañado por las hojas de solicitud de examen correspondiente o al menos por una lista de datos de los pacientes: nombre y apellido. tanto para baciloscopía como para cultivo se recomienda no dejar transcurrir más de siete días entre el momento de la recolección de la muestra y el del procesamiento en el laboratorio. Extendidos fijados En casos excepcionales puede ser necesario realizar extendidos de esputo sobre el portaobjetos para enviarlos al laboratorio para su coloración y lectura. Si las muestras van a ser procesadas sólo por baciloscopía y conservadas por varios días. encima de la tapa. incluyendo a las ste micobacterias. servicio.protección del calor excesivo. se debe establecer días de la semana en que se efectuarán regularmente los envíos. e desinfectante mata a todos los gérmenes del esputo. . De ser posible. El responsable Provincial de la Red de Laboratorios de Tuberculosis lo ayudará a resolver estos problemas. puede agregar unas 10 gotas de fenol al 5 % en el momento de recibirlas. Es útil contar con un envase de plástico con tapa.acondicionamiento de tal forma que no haya riesgo de derrames. de no ser posible. para conservar allí las muestras. agitarlas levemente y dejarlas al menos 30 minutos. pero aun así éstas se colorean por la técnica de Ziehl-Neelsen. En el transporte de las muestras deben considerarse tres condiciones importantes: . de manera que sujete firmemente cada frasco. Estos envases son útiles para conservar muestras en heladera o bien para su transporte. luego de lo cual se deben envolver en dos bolsas de polietileno. . Si no se dispone de cajas de plástico con divisiones interiores para el transporte. de alrededor de 15 por 40 cm. aclaración sobre si es muestra para diagnóstico (1ª o 2ª) o para control de tratamiento indicando el mes.1.6. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio que va a realizar la baciloscopía o el cultivo. en cuyo interior se adapta una base de telgopor agujereada con círculos de diámetro ligeramente superior al de los envases. haciendo un nudo seguro con cada bolsa. del tipo de los que se utilizan para conservar alimentos. Acondicionar los frascos así envueltos en la caja con relleno de papel de diario para mantenerlos firmes. En lo posible se debe elegir el medio de transporte que garantice mayor rapidez y confianza en la entrega. el personal debe conocer a qué laboratorio debe enviar las muestras. el medio de transporte y el horario de llegada. en un lugar fresco. En general. se debe comprobar que los envases estén cerrados herméticamente (en algunos casos conviene sellarlos con tela adhesiva o cinta de enmascarar).protección de la luz solar. con qué frecuencia y por cuál medio de transporte . En un Servicio de Salud que no tiene laboratorio . Es conveniente que se le anticipe al laboratorio que va a recibir las muestras el correspondiente envío. de altura ligeramente superior a la de los envases utilizados. las muestras pueden ser acondicionadas en cajas de cartón grueso. En ese tiempo los 11 .

los inconvenientes que se observan.Comprobar que estén bien identificadas. 1. 12 .bacilos habrán muerto pero mantienen su capacidad de teñirse con la fucsina. RECEPCION DE LA MUESTRA Cada vez que en el laboratorio se reciben las muestras se debe: .Desinfectar el exterior de los envases con algodón con fenol al 5% si se han producido pequeños derrames durante el transporte. en caso de ser necesario. especialmente en la calidad y cantidad de los esputos y en la forma de envío. Es conveniente hacer dos extendidos de cada muestra.Notificar al servicio que derivó las muestras. .7. Si el derrame ha sido masivo esterilizar toda la caja en autoclave o incinerarla. . Después de 24 horas de contacto con fenol el material puede descartarse quemando el frasco en el pozo de incineración del servicio.

50m. que posean un microscopio con lente de inmersión en buenas condiciones. frascos para soluciones colorantes. El equipo mínimo necesario para realizar los extendidos y la coloración es: a. c. El área de trabajo puede no ser exclusiva.2. Puede no ser necesario si el Laboratorio de Referencia envía los colorantes y reactivos fraccionados para preparar un volumen determinado (un litro. cuando se pueda restringir el paso de personas y cerrar la puerta.Pileta o recipiente y un soporte para colorear los extendidos. LUGAR DE TRABAJO La baciloscopía puede realizarse en laboratorios de cualquier complejidad. Sólo debe contarse con un mínimo de condiciones edilicias y de recursos y seguirse normas básicas sencillas que aseguren un trabajo de calidad y con riesgos mínimos. en caso de no contar con ellos se puede utilizar una bandeja de metal o vidrio de dimensiones aproximadas o bien cubrir el área de trabajo con papel de diario impregnado en fenol al 5%. pinza. acero o materiales similares). en esos casos se recomienda disponer de un horario especial para realizar los extendidos y coloraciones. 2.s.. principalmente ácidos micólicos.2. lápiz marcador de vidrio (graso. habitualmente el momento de menor movimiento.000 ml 13 . 3 g 100 ml 55 ml 1.1. aplicadores de madera (o en su defecto ansas). fórmica. Fucsina básica Alcohol 95° GL Fenol acuoso* Agua destilada c. mechero preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol..Material de vidrio aforado para preparar las soluciones.LA BACILOSCOPIA El examen microscópico directo o baciloscopía es la técnica fundamental para el diagnóstico y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. portaobjetos. Esta propiedad se debe al alto contenido en lípidos. b.Fucsina básica fenicada. tinta indeleble o de diamante).p. 2.. Preparación a. (Colorante básico). d.1. donde existe un solo ambiente éste sirve para todas las actividades. que poseen las micobacterias en la pared celular. La técnica se basa en la capacidad que poseen casi exclusivamente las micobacterias de incorporar la fucsina fenicada y retenerla frente a la acción de decolorantes como la mezcla de ácido y alcohol: ácido-alcohol resistencia..Envases para muestras. receptáculo para descartar los envases con muestras y frascos para fraccionar reactivos. medio litro).Microscopio con objetivo de inmersión en buenas condiciones. Se debe contar con una mesa o mesada para realizar los extendidos de aproximadamente 1 x 0.. REACTIVOS 2. en lo posible cubierta con material que pueda desinfectarse fácilmente con soluciones germicidas (cerámica o azulejos sin junturas evidentes.

De ser posible es conveniente que se realice una compra unificada para garantizar la misma calidad en todos los servicios de una provincia. se lo deja reposar 24 horas. suavemente.Es conveniente preparar volúmenes que se han de consumir en no más de dos meses.000 ml Se disuelve el azul de metileno en el agua agitando suavemente. o conservado por más de 6 meses. 14 . debe ser descartado. . se agita y filtra.Solución decolorante. Se filtra.a. aplicadores o ansas. que se han de usar en la semana. Obsérvese que la pureza del colorante sea del 100%.. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar.Fraccionar pequeños volúmenes. Lavar estos envases con frecuencia semanal. PREPARACION DEL EXTENDIDO Antes de comenzar a trabajar debe lavarse las manos y colocarse el guardapolvo.Los colorantes. etc).Se disuelve la fucsina básica en el alcohol. Todo reactivo con características anormales (llamativamente precipitado.2. de no ser así ajústense las cantidades teniendo en cuenta el grado de pureza. en baño maría. deben ser de buena calidad. téngalo en cuenta: . se agita suavemente y se agrega agua destilada para completar un litro. soporte para los extendidos. de esta manera se mantiene líquido y debe conservarse al abrigo de la luz para evitar su oxidación. La mejor medida para evitar riesgos y errores es la sistematización de las actividades que se han de realizar. se deja reposar hasta el día siguiente. 2. en lo posible enjuagándolos con alcohol.3. . . b. disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero. lápiz para marcar los portaobjetos.2.Acido clorhídrico p. para disolver los cristales que pudieran haberse formado.. . turbio. Tenga en cuenta las medidas de bioseguridad recomendadas más adelante. . el fenol en cristales con 100 ml de agua destilada por cada Kg de fenol (preferentemente calentado con calentador eléctrico o con llama a baja intensidad y con la tapa del frasco ligeramente abierta). 2.Alcohol 95° GL 970 ml Agregar siempre el ácido al alcohol. .Agua destilada 1 g 1.Azul de metileno .Los colorantes deben conservarse en frascos color caramelo o bien en envases comunes pero bien resguardados de la luz. especialmente la fucsina básica.Azul de metileno (Colorante de contraste). previamente filtrados. c. y no al revés porque es peligroso.Si se usan colorantes comerciales consultar a los Responsables Provinciales de la Red de Laboratorios sobre su calidad ya que es muy variable. * El fenol acuoso se prepara fundiendo con cuidado. agitando suavemente y se agrega el fenol acuoso*. Precauciones con los colorantes . frasco con arena y fenol o alcohol.Antes de comenzar a trabajar. 30 ml .

Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración.Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. 15 . El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios. La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes de la baciloscopía. al finalizar el trabajo. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco. quémela primero desde el mango hacia el aro. . enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo. . parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas. déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta. Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla. Se recomienda no procesar más de doce muestras por vez para evitar accidentes y errores por cambio de muestra.Si usa palillo para realizar el extendido. . Si usa ansa no descartable.. tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado. la que descartará con el material a esterilizar. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido. .Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero.Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos.

. junto con los palillos.Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente. Descarte el barbijo o los guantes. si es muy grueso. pásela con movimientos circulares por la arena y luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro.. Puede utilizar un incinerador especial muy fácil de fabricar con elementos sencillos. Los extendidos deben ser coloreados lo antes posible.Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el ansa con movimientos circulares. Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos El extendido debe quedar de grosor homogéneo. no lo queme ni lo sobrecaliente. Si es demasiado fino.Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido. Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo. 16 . del mismo modo que las muestras. en forma homogénea. si los ha usado. FIJACIÓN DEL EXTENDIDO . Cuando haya terminado. sin llegar a los bordes. puede descartar las muestras colocándolas. . para evitar confusiones. tratando de dispersarla por toda la superficie central. el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. Continúe de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Esta es la técnica más empleada en el mundo y ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo. Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos.4. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente.Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. si usó ansa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol. El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado. ya que los bacilos permanecen vivos cuando son fijados sólo con calor suave. es posible producir un resultado falso negativo. - - 2. no deben quedar sin colorear hasta el día siguiente . el material puede desprenderse durante la coloración.Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio. . cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos. Limpie la superficie de trabajo descartando los papeles con que pudiera haberla cubierto y pase fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% sobre la superficie para desinfectarla.

En el término de aproximadamente cinco minutos debe calentar tres veces hasta emisión de vapores. También se puede cubrir previamente el extendido con un trozo de papel de filtro que no sobresalga del portaobjeto y luego cubrir con la fucsina. .Coloque las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y sin que se toquen entre ellas.. . si por cualquier causa no desea colorear en la pileta puede utilizar alguna bandeja metálica o de vidrio.Disponga dos varillas de vidrio sobre la pileta de lavado a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra.Vierta los reactivos y el agua suavemente evitando salpicaduras que pueden transferir material de un portaobjetos a otro y pueden generar aerosoles. Girando el extendido lave con cuidado también la parte posterior. Consta de tres tiempos: a. Incline el portaobjetos tomándolo con una pinza para eliminar el exceso de agua y evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación. este tiempo y estas temperaturas son suficientes para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos. .Cubra la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recientemente filtrada.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol caliente suavemente por debajo de los extendidos con movimientos de vaivén hasta que observe que se desprenden los primeros vapores.Es también la más económica y alcanza la misma sensibilidad que la técnica de fluorescencia si se le dedica tiempo suficiente a la lectura de cada frotis. .Coloración. . lave cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina. El calentamiento nunca debe ser tal que hierva la fucsina ya que a esta temperatura la pared de los bacilos se destruye y no se colorean. .Levante cuidadosamente el portaobjetos desde el extremo más cercano a usted y con el frasco de agua o un chorro fino proveniente de una mangueraconectada a la canilla. 17 . . Este papel evita que los posibles cristales de fucsina se asienten sobre el extendido.

Si aún observa coloración rosada intensa. Cubra todo el extendido con solución de azul de metileno dejándolo entre 45 segundos y un minuto..5. repita el procedimiento. .. Enjuague las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpie la parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada.Déjelas secar a temperatura ambiente.Coloración de fondo.cuantificar aproximadamente. c. 2. restos de aceite y humedad.determinar si en el extendido hay bacilos ácido-alcohol resistentes.Cubra la totalidad del extendido con solución decolorante de alcohol-ácido y deje aproximadamente 3 minutos para que el decolorante actúe. déjelo actuar un minuto y enjuague nuevamente. 18 . Se considera decolorado cuando sus partes más gruesas conservan sólo un leve tinte rosado. Pasado ese tiempo enjuague con abundante agua a baja presión.. Mantenga el microscopio limpio. .Elimine el exceso de agua inclinando el portaobjetos. Vuelva a cubrir con solución decolorante.A medida que las saque del soporte de coloración observe si la numeración está aun visible y en caso contrario vuelva a numerarlas.. . apoyándolas en forma vertical sobre un papel absorbente o en un soporte. b.Después de la última decoloración mantenga el extendido cubierto al menos un minuto con agua para rehidratar las células. en caso positivo.Decoloración. lo que da idea del grado de severidad e infecciosidad del paciente.b. la riqueza en bacilos. . . OBSERVACION MICROSCOPICA La observación microscópica cumple principalmente dos objetivos: a. libre de polvo.

Si no se encuentran bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) o se observa menos de un bacilo por campo en promedio deben examinarse como mínimo 100 campos útiles. En ese momento observe a través de los oculares y continúe bajando muy lentamente hasta ver el material coloreado del extendido.De haber bacilos los observará como pequeños bastoncillos delgados. a. b. .Terminada la observación limpie el aceite de inmersión del objetivo con una gasa o papel suave. . teñidos de rojo fucsia. leyendo de izquierda a derecha del extendido al menos 100 campos microscópicos útiles. papel suave.Debe utilizarse un microscopio con condiciones adecuadas de óptica..Coloque el portaobjetos sobre la platina dejando la superficie cubierta por el aceite justo debajo de la lente de inmersión y baje ésta lentamente con el tornillo macrométrico hasta que toque ligeramente el aceite. para evitar repetir la lectura de algunos campos. equipado con un objetivo de inmersión (100 x) y un ocular 8 ó 10 x. 19 .Apoyando el portaobjetos sobre la mesa deposite una gota de aceite de inmersión sobre la parte del extendido coloreado cercana al número. una caja para guardar portaobjetos. absorbiendo el aceite sin frotar en exceso la lente. (No es conveniente usar aceites naturales de mayor densidad y secantes. . No se debe tocar el extendido con la punta del gotero o varilla para evitar pasar partículas de un extendido a otro y generar falsos resultados positivos.Enfoque en el microscopio . el Registro del Laboratorio y una lapicera. generalmente con gránulos más coloreados en su interior. . . Esto contribuirá al cuidado de la lente y a evitar la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer. por ejemplo aceite de cedro). . Cada campo microscópico debe ser observado en superficie y profundidad. . Es conveniente tener un extendido positivo coloreado para evaluar periódicamente las buenas condiciones del microscopio.Ubique cerca del microscopio todos los elementos que va a necesitar para la lectura: aceite de inmersión. aislados o en grupo.. ligeramente curvos.Si se encuentran más de 10 BAAR por campo bastará con leer 20 campos. continúe ajustando el tornillo micrométrico hasta ver una imagen nítida. .Si se encuentran entre uno y 10 BAAR por campo bastará con leer 50 campos. utilizando permanentemente el micrométrico.Método de lectura. Tenga en cuenta que este extendido positivo se va decolorando con los sucesivos lavados con xileno. .Siga una pauta uniforme de observación. destacándose sobre un fondo azul.

Envíe el resultado lo más pronto posible al centro de salud o médico que solicitó el examen. De ser posible. Si no detecta bacilos ácido-alcohol resistentes.. si corresponde. hacer otro extendido de la misma muestra. .No es conveniente usar xilol u otro disolvente en forma permanente para limpiar los objetivos pues deterioran rápidamente los objetivos y oculares. Positivo (++) : de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados Positivo (+++) : más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados Registre inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del laboratorio. Si no puede decolorar bien el preparado. Los aceites sintétic os no secantes utilizados actualmente no requieren de limpieza frecuente con solventes. Escriba el resultado en el formulario correspondiente. La siguiente escala semicuantitativa ha sido adoptada por el país y es la utilizada en la mayoría de los países del mundo: Negativ o (-) : no se encuentran BAAR en los 100 campos observados.Control de calidad interno del laboratorio Es conveniente guardar extendidos fuertemente positivos.. consignando en el Libro de Registro el hallazgo y en lo posible solicitar una tercera muestra.Informe de los resultados . . enviar estas muestras para cultivo. agregue toda observación que indique que la calidad de la muestra no fue adecuada.Si con esa lectura no se encuentran más bacilos. para identificarlos más rápidamente.Ampliar la lectura a 200 campos. d. tratando de elegir partículas purulentas.Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse como negativa. c. Es conveniente marcar los resultados positivos en rojo. Positivo (+) : se observa en promedio menos de un bacilo por campo en 100 campos observados. los reactivos son defectuosos o la coloración ha sido realizada en forma incorrecta. para controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes que se prepare. preparados con muestras a las que se les ha agregado fenol. el decolorante es defectuoso o la decoloración ha sido realizada en forma incompleta. 20 . Si en una lámina se observan de uno a cuatro BAAR en 100 campos se recomienda: .

Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la superficie con leve presión.Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado 2.Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30% durante 48 horas. 3.6.Lave con abundante agua de la canilla.Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas a usar. Luego del mes. se comprueba que se mantenga visible la numeración y se las guarda con sus resultados. 21 . 4. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscopías requiere que las láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su relectura.2. La limpieza se realiza de la siguiente manera: 1. de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las negativas en las que no se observen rayaduras para preparar nuevos extendidos y enviando las positivas a otra sección del laboratorio.

NO BARRER EN SECO NI ENCERAR. Es conveniente dictar a los ingresantes un curso con contenidos de historia natural de la tuberculosis y medidas de bioseguridad y reafirmar periódicamente los conocimientos.NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS La información disponible en nuestro país indica que el personal de salud más expuesto a contraer tuberculosis es el que asiste directamente al paciente: médicos y enfermeras. Restringir el acceso al laboratorio de personal ajeno al área de trabajo para evitar movimientos. 4. 2. 1. Toda manipulación de material potencialmente infeccioso debe ser realizada en áreas alejadas de la circulación general. Los trabajadores de salud infectados con HIV. 3. Aquéllos con enfermedades pulmonares crónicas deben consultar previamente con su médico. NO USAR PLUMEROS PARA LA LIMPIEZA. 3. baciloscopía y cultivo de ser posible. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO En todas las circunstancias tener presente que es necesario aplicar todas las medidas lógicas para evitar la generación y movimiento de aerosoles. Deben tener una evaluación médica clínica anual sistemática con placa de tórax y. PERSONAL 1. No utilizar ventiladores ni acondicionadores que generen flujos de aire mientras se está trabajando con material infeccioso. distracciones y exposición de personas no involucradas. 2.1. con tratamientos prolongados con medicamentos inmunosupresores o diabéticos no deben trabajar en áreas de riesgo. 5. Atender al personal del centro de salud y pacientes fuera de este área. cuando tengan síntomas respiratorios.2. 3. Es menor el riesgo del personal del laboratorio que puede protegerse con medidas de precaución simples y no muy costosas. con otra enfermedad inmunosupresora. corrientes de aire. 4. Trabajar en áreas con pisos y paredes lavables. Cada laboratorio debe contar con instrucciones escritas y difundidas sobre el manejo de pacientes con tuberculosis y de las muestras biológicas obtenidas de los mismos. 6. El Comité de Infecciones Hospitalarias es el responsable de reglamentar las normas de bioseguridad para todo el personal y de hacerlas cumplir. Los trabajadores de salud no reactores a la tuberculina (PPD menor de 10 mm) deben vacunarse con BCG al ingresar a trabajar. 3. En cada sección deben estar expuestas las normas básicas de bioseguridad específicas del área. 22 . limpiarlos diariamente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%.

no sacarlo del centro de salud donde debe ser desinfectado y lavado (agua caliente y enjuague con agregado de hipoclorito). 8. si las hubiera. 3. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS 1. Disponer siempre de un frasco con fenol al 5% y trabajar en el área delimitada cubierta con un papel embebido en fenol. 1. Controlar que no haya heridas o escoriaciones en las manos. por ejemplo con papel. Si se procesan un promedio diario de más de 5 muestras. Las siguientes recomendaciones son generales para todos los operadores del laboratorio en cualquier procedimiento que se haga con una muestra de SR. el fenol mata el bacilo pero conserva su propiedad de tinción con fucsina. No tocar. aun cuando se usan guantes. cubrir con vendaje y guantes. instalaciones o equipamiento del laboratorio. Lavarse las manos con frecuencia. No beber. de ser necesarias. Las muestras deben ser recolectadas al aire libre o en un lugar bien ventilado hacia el exterior y con puertas cerradas a áreas de circulación de público. No ubicar en el área de trabajo elementos innecesarios ni sacar de la misma libros de registro o elementos allí utilizados. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS Todo laboratorio que cuente con un microscopio puede realizar una baciloscopía adoptando medidas de bioseguridad de sentido común. sin antes lavarse las manos. 9. Pueden utilizarse los de trabajadores que trabajan con asbestos o silicio.3 micrones que aseguren al menos 95% de protección. Para el transporte acomodar los envases en cajas rígidas. 2. Para el transporte de muestras que serán procesadas sólo por baciloscopía se les puede agregar 10 gotas de fenol al 5%. Ubicar ésta en otra caja sin divisiones de tamaño ligeramente mayor. impermeables. comer ni fumar en el área de trabajo donde se procesa material potencialmente infeccioso.4. si existe una norma general de laboratorio de utilizarlos para protección. El filtro del barbijo o máscara debe ser de alta eficiencia (HEPA) que retenga partículas del orden de los 0. es conveniente mantenerla sin hacer excepciones. Utilizar siempre guardapolvo de mangas largas y cerrado. 3.5.3. 23 . 4. Los barbijos de cirugía no protegen contra los bacilos de la tuberculosis. En enfermos sospechosos de tuberculosis deben evitarse en lo posible las nebulizaciones. Al recibir la muestra comprobar que no haya derrames. con cierre hermético y divisiones interiores. 3. 11. (Ver Baciloscopía) 2. Sistematizar el procesamiento de las muestras. si existieran. resistentes. desinfectar el exterior del envase con algodón embebido en fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10%. Si el derrame hubiera sido masivo autoclavar o incinerar el frasco y el contenedor en el que fue trasladado al laboratorio. manipulación y procesamiento de las muestras. 6. No es recomendable trabajar con más de 12 muestras simultáneamente. 10. rellenando los espacios vacíos para evitar movimientos. Las máscaras u otro material utilizado deben lavarse con detergente y abundante agua y el ambiente debe ser ventilado luego de cada paciente. 3. se harán en la sala de toma de muestras o en otra cuyas condiciones de ventilación sean similares. que no son costosas. En circunstancias normales no es indispensable el uso de guantes para el trabajo con muestras de esputo en tuberculosis aunque. utilizar barbijos con buen ajuste alrededor de la boca y nariz para la toma. 7.

no pipetear nunca con la boca. 7. Si se usa ansa. el riesgo de concentración de contaminantes es superior al de fuera de la cámara. Al regresar recoger el material con pinzas y depositarlo en un recipiente donde pueda ser incinerado o autoclavado. De preferencia utilizar palillos para realizar los extendidos. A continuación se sugiere un diagrama de una campana sencilla y económica. Si la cámara no dispone de esta ventilación forzada. conservar los bordes limpios. 33 cm en la parte superior y 20 cm de alto en la entrada de manos. 8. 85 cm de altura. Al realizar los extendidos. etc…). sin muestra. 5. Colorearlos tan pronto estén secos para disminuir al mínimo el tiempo en que las micobacterias permanecen viables. La cámara puede ubicarse sobre la mesada del laboratorio. no es necesario que sean complejas. Las dimensiones aproximadas son: 100 cm de largo.4. Abrir los envases con muestras teniendo un mechero entre la misma y el operador. La ventana puede ser de vidrio doble o triple. 60 cm de ancho en la base. El aire contaminado dentro de la cámara debe ser expulsado forzadamente por un extractor adecuado. teniendo en cuenta que la superficie interior no debe presentar rugosidades para permitir una buena desinfección. 6. primero debe ser limpiada en un frasco con arena y fenol o alcohol y luego quemada en el mechero. colocando antes del mismo filtros adecuados. comenzando desde el mango hacia el aro. 24 . De igual manera proceder para seleccionar la partícula a ser extendida y al realizar el extendido. Aunque no es imprescindible pueden utilizarse campanas de bioseguridad. que puede ser utilizada para técnicas básicas de bacteriología e incluso como campana de gases: - - - Puede construirse en madera u otro material (acero. melamina. Ante cualquier rotura del envase o tubo con material potencialmente contaminado cubrir inmediatamente la zona con papel y embeberlo con fenol al 5% o con hipoclorito al 10% y abandonar el área de trabajo por 30 minutos. Si se usa pipeta cuidar que la punta superior esté protegida con algodón.

Los instrumentos de registro y formularios con los que debe contar la Red son: Formulario de Solicitud de baciloscopía - Registro de Muestras para Investigación Bacteriológica de la Tuberculosis 25 . Éste debe permitir el conocimiento actualizado de la magnitud y tendencia de la situación epidemiológica y al mismo tiempo el grado de desarrollo y efic iencia de la Red de Laboratorios.SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN El sistema de información epidemiológica y operacional debe ayudar a administrar mejor la Red de Laboratorios de Tuberculosis a todos los niveles.

26 .

6. Normas técnicas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. 3. Nota Técnica Nº26/Rev1.ed. Washington: U. U. Yates MD. 1997. Collins CH. Goverment Printing Office 1995. editor. Role and Operation in a Low-Income Country. Center for Disease Control. Laboratory Manual for Acid-fast Microscopy. 4. Bull Int Union Tuberc 1978:4-16. 1979. USA. 5. Emilio Coni”. US Department of Health . Francia. Tuberculosis bacteriology. Smithwick. 2000. 27 . Minimum Requirements. Technical guide for sputum examination for tuberculosis by direct microscopy . 2nd . Organization and Practice. Primary Containment for biohazards: selection. International Union Against Tuberculosis and L ung Disease. International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. Department of Health and Human Services. 2. 1988. Education and Welfare. 2nd ed. Oxford: Butterworth-Heinemann. Argentina. National Institutes of Health. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD/ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD. 1998. 1-51.S. installation and use of biological safety cabinets. Bacteriología de la tuberculosis. Centers for Disease Control and Prevention. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. 7.S. La muestra. Grange JM.BIBLIOGRAFÍA 1. Argentina. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. El exámen microscópico.

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