Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis

Microscopía - Normas Técnicas

ARGENTINA 2000

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AUTORIDADES

PRESIDENTE DE LA NACION Dr. Fernando DE LA RÚA MINISTRO DE SALUD Dr. Héctor José LOMBARDO SECRETARIO DE ATENCIÓN SANITARIA Dr. Arnoldo Víctor CASTILLO SUBSECRETARIO DE PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN Dr. Javier Oscar VILOSIO DIRECCIÓN NACIONAL DE MEDICINA SANITARIA A/C Dr. Francisco MARTINI DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGÍA A/C Dr. Anibal REINALDO SUBSECRETARIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA Dr. Ernesto PODESTÁ ADMINISTRACIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS E INSTITUTOS DE SALUD “DR. CARLOS G. MALBRAN” A/C Dr. Andrés RUÍZ INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Dra. María Inès DEMITRI INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “DR. EMILIO CONI” A/C Dr. Alberto MARCHESE

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3 . Argentina. 2000.MICROSCOPÍA: NORMAS TÉCNICAS Documento elaborado sobre la base de un borrador preparado por: OMAR LATINI Comité de redacción: LUCÍA BARRERA OMAR LATINI MARÍA DELFINA SEQUEIRA ELSA ZERBINI Santa Fe.

4. EL ENVASE_____________________________________________________ 1. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN_____________________________ BIBLIOGRAFÍA _____________________________________________________ 22 22 22 23 23 25 27 4 . Inducción de esputo_____________________________________________ 1.3.2.5. Lavado bronquial_______________________________________________ 1.5. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS _______________ NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS ___________________________________________________ 3.INDICE INTRODUCCIÓN ____________________________________________________ LA MUESTRA ______________________________________________________ 1.4. CALIDAD DE LA MUESTRA _____________________________________ 1.3. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO __________________________ 1.2. Preparación ___________________________________________________ 2.4.1.1. PREPARACION DEL EXTENDIDO ________________________________ 2. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS ___ 3.3.1. Lavado gástrico ________________________________________________ 1. Hisopado laríngeo ______________________________________________ 1.7. REACTIVOS ____________________________________________________ 2.2.2.3.2. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO ___ 1. RECEPCION DE LA MUESTRA __________________________________ LA BACILOSCOPIA________________________________________________ 5 6 6 6 7 7 8 8 9 9 10 11 12 13 13 13 13 14 14 16 18 21 2.3.2. PERSONAL _____________________________________________________ 3.1. Precauciones con los colorantes ___________________________________ 2.2. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO _______________________ 3. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO 1.3.6.3. OBSERVACION MICROSCOPICA__________________________________ 2.4.1.3. LUGAR DE TRABAJO ___________________________________________ 2.6. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN _______________________________ 2. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO _ 1.

para ello desde hace varias décadas se ha ido conformando la Red Nacional de Laboratorios de Tuberculosis de la que participan más de 600 laboratorios de dependencia oficial: nacionales. seguro y accesible. Se estima que hay en promedio un laboratorio con microscopio cada 40. la baciloscopía aun sigue siendo la técnica de elección para el objetivo principal de cortar la cadena de transmisión mediante el diagnóstico de los casos bacilíferos. actualizó las normas a las nuevas necesidades de los países de América Latina. reunido en México en 1983.000 casos anuales. en sus cuatro capítulos. como paso previo a su curación. provinciales y municipales. a solicitud de la Organización Panamericana de la Salud en 1973. Si bien después de quince años los avances en la tecnología han introducido variantes en la bacteriología. 28 y ° 29/1988). convocado por el Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO). sino también que las técnicas que utilicen sus integrantes sean las más adecuadas a las necesidades de la población y que se realicen con la mejor calidad. Luis Herrera Malmsten. Sin embargo algunos cambios se han producido. su tratamiento efectivo y su curación y continúa siendo el método más rápido de diagnóstico. dos mil millones de personas. bacilo productor de la tuberculosis. En Argentina se notifican aproximadamente 13. de los cuales cerca de un millón mueren por la enfermedad. bacteriólogo chileno. de los cuales 6. especialmente con la asociación de TBC-SIDA. La estandarización de la baciloscopía se basa en normas que garantizan que las técnicas propuestas han sido el producto de amplios ensayos mundiales realizados por organizaciones internacionales como la OPS/OMS y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER).(Notas Técnicas CEPANZO N 26.000 son enfermos con formas pulmonares que eliminan bacilos con la expectoración y mantienen la transmisión del bacilo mientras no son diagnosticados y tratados adecuadamente. La baciloscopía es la técnica que mejor se adapta a las necesidades del Programa de Control ya que detecta los casos más infectantes. a los que se agregan laboratorios privados y de obras sociales. Esa adaptación fue utilizada durante más de una década en todos los laboratorios del país. Esta Red no sólo tiene por objetivo garantizar el acceso fácil al diagnóstico. estas nuevas normas fueron adoptadas por la Comisión Argentina de Bacteriología de la Tuberculosis y han sido utilizadas. especialmente en lo que respecta a la toma y conservación de algunas muestras y a la aplicación de normas básicas de bioseguridad que garanticen el trabajo confiado y seguro. aunque si se toman en cuenta los mayores de 15 años en quienes se aplica sistemáticamente la baciloscopía la oferta de servicio es mucho mayor. hasta el presente. 27. aún cuando se cuenta con técnicas de diagnóstico sencillas y tratamientos eficaces. 5 . El primer Manual de Laboratorio utilizado en nuestro país fue una adaptación del Manual de Bacteriología de la Tuberculosis escrito por el Dr. que hacen que se crea conveniente actualizar las normas. Se estima que alrededor de un tercio de la población mundial.000 habitantes. que deben asegurar que cualquier habitante del país pueda acceder al diagnóstico de la enfermedad. aproximadamente 8 millones de ellos enferman anualmente. El primer paso para cumplir estos objetivos es contar con laboratorios que le aseguren a los enfermos un diagnóstico rápido. El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis y los Programas Provinciales tienen como objetivo principal diagnosticar tempranamente los casos infectantes y tratarlos con esquemas eficaces y modalidades que aseguren una curación cercana al 100%.INTRODUCCIÓN Mycobacterium tuberculosis. hasta que un Comité Asesor de la OPS/OMS. puede realizarse en cualquier laboratorio que cuente con un microscopio. están infectadas con él. es sencilla. es económica y puede ser fácilmente estandarizada para garantizar la calidad en todo el territorio nacional. se transmite de persona a persona por medio de la tos de los enfermos con lesiones pulmonares abiertas que expectoran bacilos.

por otra parte.1. etc. del fondo del pecho. nariz o faringe.). bien identificada y conservada y transportada correctamente. faríngeas o la saliva no son buenas muestras. 1. pollo. (Ver Bioseguridad). tal como un espacio no concurrido del patio del Servicio de Salud. 1. líquido pleural. además de padecer casi siempre enfermedad severa. El Programa de Control de la Tuberculosis se centra prioritariamente en la detección temprana de estos enfermos. líquido cefalorraquídeo. de allí que las muestras que puedan procesarse para diagnóstico o control son muy variadas: esputo. No utilizar lugares cerrados o muy concurridos tales como consultorios médicos o baños. Las secreciones nasales. Estos datos deben ser escritos en la pared del frasco y no en la tapa para evitar errores.LA MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no sólo es necesario que ejecute las técnicas en forma correcta. con rótulos que no se despeguen o con lápiz indeleble. entendiéndose por tal la que proviene del sitio de la lesión que se investiga. es el primer lugar en el que se instala al infectar al hombre. - 6 . la persona que da las instrucciones debe usar el lenguaje que el paciente entienda. en este caso. la muestra de catarro mucopurulento proveniente de pulmón es la que más garantiza que si hay bacilos se puedan observar o aislar. estornudos o al hablar. orina. razón por la cual la muestra de mayor rendimiento y la que se procesa con mayor frecuencia en el laboratorio es el esputo. Elija un lugar adecuado para que el SR produzca la expectoración: por ejemplo una pequeña habitación bien ventilada y con mucho sol si se dispone de ella o algún lugar abierto que permita intimidad. gargajo. biopsias y otros. sangre. pus de cavidades abiertas. Entregue al SR el envase de recolección rotulado con su nombre o número de identificación y el servicio que lo solicita. aunque no deben desecharse pues siempre existe la posibilidad de que los bacilos hayan quedado en la boca. Cerca del 85% de las tuberculosis tienen localización pulmonar y estos enfermos. dejando la obtención de otras muestras para cuando se trate el cultivo. son a su vez los que mantienen la infección pues diseminan los bacilos con la tos. La localización pulmonar es la más frecuente debido a que el bacilo necesita una buena presión de oxígeno para desarrollar y lo consigue principalmente en ese órgano que. sino que cuente con una buena muestra.2. colocada en un envase adecuado. Mycobacterium tuberculosis se disemina por todo el organismo por lo que la enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano. OBTENCION ESPONTANEA DEL ESPUTO El hecho más importante es el de comunicar al Sintomático Respiratorio (SR) con mucha claridad qué debe obtener y cómo y dónde hacerlo . La palabra que define la buena muestra es diferente en cada región y en general el SR la identifica perfectamente (gallo. obtenida en cantidad suficiente. CALIDAD DE LA MUESTRA Para el éxito de cualquier análisis de laboratorio se debe contar con una buena muestra. líquido ascítico. Este capítulo se dedic ará a la toma de muestras de origen pulmonar. Para ello.

En caso de que esto último sucediera. Este procedimiento debe repetirlo otras dos veces. aconsejar que limpie el frasco con un papel y las manos con agua y jabón. tratando de arrastrar las secreciones del pulmón. Si es saliva o secreción nasal no la descarte porque aún así puede contener bacilos.3.1. enfermos siquiátricos o ancianos. - - Cuando reciba la muestra. observe por fuera del frasco si la misma es de buena calidad: mucopurulenta o mucosa. colocando todas las secreciones en el mismo frasco.3. Inducción de esputo . 1.Se debe nebulizar con soluciones normotónicas (solución fisiológica) o ligeramente hipertónicas. retenerlo un momento y luego expulsarlo violentamente desde el abdomen. 7 .- Instruya al SR indicándole que debe inspirar profundamente llenando sus pulmones de aire tanto como sea posible. en los casos poco frecuentes en que no pueda lograrse pueden utilizarse otras formas tales como la inducción de esputo o la recuperación de secreciones por otros medios. 1. Esta última no es tan buena como el esputo por lo que se aplica sólo a niños. METODOS ESPECIALES PARA OBTENER MUESTRAS DE ESPUTO Siempre se debe intentar conseguir expectoración espontánea. a fin de fluidificar las secreciones y ayudar a su eliminación. Debe recoger en el envase el esputo producido tratando de que entre en su totalidad sin mancharse las manos o las paredes externas del frasco. insista en las instrucciones e indique que recoja otra muestra. Registre esta característica en el Registro de Laboratorio. a temperatura apenas superior a la corporal.

ventiladas y soleadas que impidan la transmisión de bacilos por los aerosoles formados.Número de muestras: al menos tres.c. Si es un lactante es conveniente que no esté presente la madre en el momento de la toma de muestra porque su presencia puede incentivar los movimientos peristálticos.3. La baciloscopía de lavado gástrico tiene valor relativo ya que habitualmente contiene pocos bacilos y. ya que debe ser procesado en las 6 horas siguientes a la obtención para ser cultivado. se debe cultivar este tipo de muestras .500g. . de tal forma de facilitar el descenso de la expectoración. por otra parte. . es frecuente que contenga micobacterias ambientales que pueden estar alojadas en el estómago.3. Lavado bronquial La obtención de esta muestra está reservada a médicos especialistas. de agua destilada o solución fisiológica estéril y recoja inmediatamente.Se recoge la primera expectoración producida después de la nebulización y se entrega un segundo frasco para que la persona recoja las secreciones producidas en las 24 horas siguientes. . siempre que tenga el volumen adecuado. Una vez que la sonda llega al estómago.Momento de la recolección: por la mañana al despertar. Siempre que sea factible debe ser cultivada. Siempre que sea posible. . En caso de no obtenerse material inocule 10 a 15 c. con sonda nasal. .Procesamiento: Para realizar la baciloscopía es necesario centrifugar previamente la muestra durante 20 minutos a 2. 8 . Lavado gástrico Se utiliza para detectar bacilos en el esputo ingerido y alojado en el estómago. por lo menos. de longitud adecuada y de diámetro adecuado a la edad del niño.Técnica: sondeo gástrico realizado por médico o enfermera con experiencia.3.Se hace kinesioterapia o. de ser posible. 1.. . . razón por la que debe entregarse un frasco al enfermo para que las recoja y entregue en el laboratorio. debe neutralizar el material con una solución de bicarbonato de sodio al 10% o fosfato trisódico anhidro al 10% y conservarlo en heladera por no más de 24 horas hasta el momento del envío.2. drenaje postural acostando al paciente con la almohada debajo del tórax y la cabeza por fuera de la camilla y más baja. Las maniobras utilizadas suelen producir expectoración en las 24 horas posteriores.Envase: el aconsejado para esputo.Conservación: coloque el material en el frasco adecuado y envíelo inmediatamente al laboratorio. Por razones de bioseguridad no es aconsejable utilizar este método a menos que se cuente con sistemas de esterilización adecuados o máscaras descartables y salas de nebulizaciones aisladas. baciloscopías de al menos dos muestras espontáneas de esputo para intentar detectar la enfermedad sin procedimientos invasivos y evitar la contaminación innecesaria del broncofibroscopio con bacilos. (Ver Bioseguridad). 1. Antes de tomar la muestra deben realizarse. Normalmente es posible evitar demoras porque la toma de muestra se realiza en forma programada. con el paciente en ayunas dado que la ingesta de alimentos hace que la expectoración ingerida pase al intestino. Si por alguna causa inevitable no es posible. aspire con jeringa sin que la succión provoque daño.

La primera muestra debe ser tomada siempre en el momento de la consulta (muestra inmediata) cuando el médico u otro personal del equipo de salud identifican al SR. . Retire el hisopo tratando de no tocar las partes blandas de la boca e introdúzcalo en el tubo de ensayo. preferentemente en ayunas ya que suele provocar náuseas en el momento de la recolección. 1. 9 .Las salas de fibroscopía y el personal que la realiza deben contar con todos los requisitos de bioseguridad. las molestias que ocasiona al paciente y los riesgos potenciales para la persona que toma la muestra. Se deben aplicar rigurosos procedimientos de esterilización y lavado del broncoscopio para evitar la transmisión de tuberculosis con dispositivos contaminados y la generación de falsos resultados positivos por la presencia de bacilos remanentes. Es conveniente procesar esta muestra por cultivo siempre que sea posible para poder detectar el bajo número de bacilos y debido a que las fibras de algodón pueden producir resultados falsos positivos en la baciloscopia.Técnica: una vez sentado el paciente solicítele que levante la cabeza. ésta puede ser recogida en el momento en que el SR entrega la segunda o bien se debe solicitar una nueva muestra matinal. deben hacerse los mayores esfuerzos para que la persona regrese con la segunda muestra. Hisopado laríngeo A causa del escaso número de bacilos que suele contener esta muestra.Envase: tubo de ensayo con tapón de algodón conteniendo un hisopo de algodón montado en alambre de acero o varilla de madera flexibles de aproximadamente 30cm de longitud. guantes.Número de muestras: tres hisopados en días consecutivos. 1. La segunda muestra la debe conseguir el p aciente en su casa o en la internación por la mañana al despertar (muestra matinal). se debe pedir una tercera muestra y también. En las condiciones habituales del Programa de Control se considera suficiente obtener dos muestras por SR . pida al paciente que tosa e imprima al hisopo un movimiento circular suave tratando de recoger las secreciones de esa zona. NUMERO DE MUESTRAS Y MOMENTO DE LA RECOLECCION DE ESPUTO Como la eliminación de los bacilos por el esputo no es regular y permanente. El operador debe utilizar guardapolvo largo con mangas. . Introduzca el hisopo levemente humedecido con agua destilada o solución fisiológica estéril hasta la laringe. Debe ser enviado lo antes posible al laboratorio para su procesamiento. vivos o muertos. De todas formas.4.3. un cultivo. . en caso de que ambas fueran negativas y el médico tenga otros elementos para sospechar que puede tratarse de tuberculosis. Si bien la primera suele tener menor rendimiento que la segunda.Momento de la recolección: por la mañana. es conveniente analizar más de una muestra de cada SR para el diagnóstico de la tuberculosis. se aconseja utilizar esta técnica cuando no es posible obtener otro tipo de muestra. es decir a cualquier consultante que ha estado tosiendo por más de 15 días.4. . Si se decide tomar una tercera muestra. abra la boca y saque la lengua y tómesela con dos dedos de la mano izquierda cubierta con guantes o bien con un trozo de gasa. al tomarla asegura que al menos se pueda analizar una muestra del SR. barbijo o máscara rígida y en lo posible anteojos. de ser posible.

. sin ensuciar sus manos o las paredes del frasco y para que en el laboratorio se pueda seleccionar y tomar la partícula más adecuada para realizar el extendido. Lo ideal es entregar el informe dentro de 24 horas de recibida la muestra. . . El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis facilita generalmente frascos de recolección en cantidad suficiente. para evitar posibles errores y minimizar la manipulación de material potencialmente infeccioso. para facilitar su eliminación.Capacidad adecuada: entre 30 y 50 c.5. a las descriptas. para evitar derrames y facilitar la selección de la partícula útil.Descartable: preferentemente de plástico.Boca ancha: de no menos de 50 mm de diámetro. que han demostrado ser en general adecuados. EN EL MOMENTO MAS ADECUADO PARA EL PACIENTE. Es recomendable que el laboratorio no dé turnos de recepción de muestras. poniendo énfasis en las muestras del segundo y cuarto mes y en la del final del tratamiento.c. debe considerarse que la demora en la entrega de un resultado positivo puede demorar el inicio del tratamiento. PARA FACILITAR LA LOCALIZACION DE CASOS DE TUBERCULOSIS LAS MUESTRAS PRODUCIDAS POR LOS SR DEBEN PODER SER TOMADAS O ENTREGADAS A CUALQUIER HORA DEL DIA EN QUE EL SERVICIO ESTE ABIERTO. Aún así. con características similares. No se recomienda limpiar frascos de vidrio ya usados y volverlos a usar.Transparente: para poder observar la calidad de la muestra cuando la entrega el SR.Cierre hermético: en lo posible con tapa a rosca. Luego puede regular el momento en que las procesa ya que el esputo puede conservarse varios días. sobre todo si sólo va a ser examinado por baciloscopía. 1. 10 .Para control de tratamiento se aconseja examinar con baciloscopía una muestra por mes. dentro de una rutina lógica de trabajo. para evitar derrames durante el transporte y la producción de aerosoles cuando se abre en el laboratorio. Por lo tanto. Los envases se deben solicitar a lo s Responsables Provinciales de la Red de Laboratorio de Tuberculosis o al Responsable Provincial del Programa. . . el examen debe ser realizado con la mayor premura posible. aunque no siempre iguales. EL ENVASE El envase más adecuado debe tener las siguientes características: . prolongar el período durante el cual el paciente permanece infeccioso o determinar que pierda un enfermo. para que el paciente pueda depositar la expectoración con facilidad dentro del envase.

puede agregar unas 10 gotas de fenol al 5 % en el momento de recibirlas. En general. Cada envío debe ser acompañado por las hojas de solicitud de examen correspondiente o al menos por una lista de datos de los pacientes: nombre y apellido.acondicionamiento de tal forma que no haya riesgo de derrames. de no ser posible. las muestras pueden ser acondicionadas en cajas de cartón grueso. luego de lo cual se deben envolver en dos bolsas de polietileno. de alrededor de 15 por 40 cm. Es útil contar con un envase de plástico con tapa. pero aun así éstas se colorean por la técnica de Ziehl-Neelsen. encima de la tapa.6. el personal debe conocer a qué laboratorio debe enviar las muestras. se debe comprobar que los envases estén cerrados herméticamente (en algunos casos conviene sellarlos con tela adhesiva o cinta de enmascarar). . haciendo un nudo seguro con cada bolsa. Si no se dispone de cajas de plástico con divisiones interiores para el transporte. En el transporte de las muestras deben considerarse tres condiciones importantes: . Si las muestras van a ser procesadas sólo por baciloscopía y conservadas por varios días. Acondicionar los frascos así envueltos en la caja con relleno de papel de diario para mantenerlos firmes. aclaración sobre si es muestra para diagnóstico (1ª o 2ª) o para control de tratamiento indicando el mes. agitarlas levemente y dejarlas al menos 30 minutos. en cuyo interior se adapta una base de telgopor agujereada con círculos de diámetro ligeramente superior al de los envases. para conservar allí las muestras. se debe establecer días de la semana en que se efectuarán regularmente los envíos. Extendidos fijados En casos excepcionales puede ser necesario realizar extendidos de esputo sobre el portaobjetos para enviarlos al laboratorio para su coloración y lectura. con qué frecuencia y por cuál medio de transporte . En ese tiempo los 11 . de altura ligeramente superior a la de los envases utilizados. El responsable Provincial de la Red de Laboratorios de Tuberculosis lo ayudará a resolver estos problemas. tanto para baciloscopía como para cultivo se recomienda no dejar transcurrir más de siete días entre el momento de la recolección de la muestra y el del procesamiento en el laboratorio.protección de la luz solar. el medio de transporte y el horario de llegada. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS DE ESPUTO Es necesario que la muestra llegue lo antes posible al laboratorio que va a realizar la baciloscopía o el cultivo. De ser posible. servicio.protección del calor excesivo. e desinfectante mata a todos los gérmenes del esputo. incluyendo a las ste micobacterias. En un Servicio de Salud que no tiene laboratorio . . en un lugar fresco. Estos envases son útiles para conservar muestras en heladera o bien para su transporte.1. La muestra debe ser conservada de preferencia en heladera o. del tipo de los que se utilizan para conservar alimentos. En lo posible se debe elegir el medio de transporte que garantice mayor rapidez y confianza en la entrega. de manera que sujete firmemente cada frasco. en esa circunstancia se debe tomar a l precaución de tratar previamente el esputo con 10 gotas de fenol al 10% y después de una hora realizar el extendido siguiendo las indicaciones que se verán en el Capítulo de Baciloscopía. Es conveniente que se le anticipe al laboratorio que va a recibir las muestras el correspondiente envío.

en caso de ser necesario. especialmente en la calidad y cantidad de los esputos y en la forma de envío. 12 . . Después de 24 horas de contacto con fenol el material puede descartarse quemando el frasco en el pozo de incineración del servicio. RECEPCION DE LA MUESTRA Cada vez que en el laboratorio se reciben las muestras se debe: .Desinfectar el exterior de los envases con algodón con fenol al 5% si se han producido pequeños derrames durante el transporte.7. Si el derrame ha sido masivo esterilizar toda la caja en autoclave o incinerarla. 1. los inconvenientes que se observan.Comprobar que estén bien identificadas. Es conveniente hacer dos extendidos de cada muestra.bacilos habrán muerto pero mantienen su capacidad de teñirse con la fucsina. .Notificar al servicio que derivó las muestras.

000 ml 13 ...p. aplicadores de madera (o en su defecto ansas)..Fucsina básica fenicada.. Fucsina básica Alcohol 95° GL Fenol acuoso* Agua destilada c. La técnica se basa en la capacidad que poseen casi exclusivamente las micobacterias de incorporar la fucsina fenicada y retenerla frente a la acción de decolorantes como la mezcla de ácido y alcohol: ácido-alcohol resistencia. LUGAR DE TRABAJO La baciloscopía puede realizarse en laboratorios de cualquier complejidad. Sólo debe contarse con un mínimo de condiciones edilicias y de recursos y seguirse normas básicas sencillas que aseguren un trabajo de calidad y con riesgos mínimos. medio litro).. 2.1. cuando se pueda restringir el paso de personas y cerrar la puerta. (Colorante básico). en lo posible cubierta con material que pueda desinfectarse fácilmente con soluciones germicidas (cerámica o azulejos sin junturas evidentes. b.Microscopio con objetivo de inmersión en buenas condiciones. El equipo mínimo necesario para realizar los extendidos y la coloración es: a. c. receptáculo para descartar los envases con muestras y frascos para fraccionar reactivos. Preparación a. fórmica. El área de trabajo puede no ser exclusiva. principalmente ácidos micólicos.Material de vidrio aforado para preparar las soluciones. acero o materiales similares). donde existe un solo ambiente éste sirve para todas las actividades. que poseen las micobacterias en la pared celular.2. REACTIVOS 2. 2. Se debe contar con una mesa o mesada para realizar los extendidos de aproximadamente 1 x 0. Esta propiedad se debe al alto contenido en lípidos. pinza. mechero preferentemente de gas aunque puede utilizarse uno de alcohol. frascos para soluciones colorantes.2. 3 g 100 ml 55 ml 1. lápiz marcador de vidrio (graso.Envases para muestras.1.50m.s. Puede no ser necesario si el Laboratorio de Referencia envía los colorantes y reactivos fraccionados para preparar un volumen determinado (un litro. en caso de no contar con ellos se puede utilizar una bandeja de metal o vidrio de dimensiones aproximadas o bien cubrir el área de trabajo con papel de diario impregnado en fenol al 5%. portaobjetos.Pileta o recipiente y un soporte para colorear los extendidos. en esos casos se recomienda disponer de un horario especial para realizar los extendidos y coloraciones.LA BACILOSCOPIA El examen microscópico directo o baciloscopía es la técnica fundamental para el diagnóstico y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. que posean un microscopio con lente de inmersión en buenas condiciones. tinta indeleble o de diamante). habitualmente el momento de menor movimiento. d.

Azul de metileno . 2.3.Antes de comenzar a trabajar. frasco con arena y fenol o alcohol.Es conveniente preparar volúmenes que se han de consumir en no más de dos meses. Precauciones con los colorantes .Acido clorhídrico p. Tenga en cuenta las medidas de bioseguridad recomendadas más adelante. en baño maría. y no al revés porque es peligroso.Solución decolorante. c. PREPARACION DEL EXTENDIDO Antes de comenzar a trabajar debe lavarse las manos y colocarse el guardapolvo. para disolver los cristales que pudieran haberse formado.Los colorantes deben conservarse en frascos color caramelo o bien en envases comunes pero bien resguardados de la luz. etc).Alcohol 95° GL 970 ml Agregar siempre el ácido al alcohol.Se disuelve la fucsina básica en el alcohol.. téngalo en cuenta: . disponga en la mesada todo lo necesario para realizar el extendido en el espacio despejado de la misma o en la bandeja: mechero.Si se usan colorantes comerciales consultar a los Responsables Provinciales de la Red de Laboratorios sobre su calidad ya que es muy variable. Obsérvese que la pureza del colorante sea del 100%.Fraccionar pequeños volúmenes. en lo posible enjuagándolos con alcohol. . Se filtra. 30 ml . . turbio. lápiz para marcar los portaobjetos. especialmente la fucsina básica. de no ser así ajústense las cantidades teniendo en cuenta el grado de pureza. soporte para los extendidos. deben ser de buena calidad. . previamente filtrados. o conservado por más de 6 meses.Agua destilada 1 g 1. aplicadores o ansas.. se agita y filtra. De ser posible es conveniente que se realice una compra unificada para garantizar la misma calidad en todos los servicios de una provincia.Azul de metileno (Colorante de contraste). debe ser descartado. La mejor medida para evitar riesgos y errores es la sistematización de las actividades que se han de realizar. .000 ml Se disuelve el azul de metileno en el agua agitando suavemente.Los colorantes. . se agita suavemente y se agrega agua destilada para completar un litro.2. Lavar estos envases con frecuencia semanal. * El fenol acuoso se prepara fundiendo con cuidado.a. que se han de usar en la semana. de esta manera se mantiene líquido y debe conservarse al abrigo de la luz para evitar su oxidación. agitando suavemente y se agrega el fenol acuoso*. el fenol en cristales con 100 ml de agua destilada por cada Kg de fenol (preferentemente calentado con calentador eléctrico o con llama a baja intensidad y con la tapa del frasco ligeramente abierta). . 2. suavemente. Todo reactivo con características anormales (llamativamente precipitado. 14 . se lo deja reposar 24 horas.2. portaobjetos marcados con la numeración de las muestras a procesar. se deja reposar hasta el día siguiente. b.

. La selección de la partícula más purulenta de la muestra es uno de los pasos más importantes de la baciloscopía.Si usa palillo para realizar el extendido. parta el palillo en dos tratando de que las puntas queden ásperas y con las puntas de ambas mitades trate de levantar la partícula más purulenta de la muestra y enróllela en una de ellas. .. uno de ellos se utiliza para marcar el número correlativo de identificación y los dos restantes se dejan para realizar el extendido. déjela enfriar y luego seleccione la partícula más purulenta. . Si usa ansa no descartable.Es conveniente extender una hoja de papel absorbente en el área de trabajo donde realizará los extendidos. enrollándola en la punta de una de las mitades del palillo. quémela primero desde el mango hacia el aro. Se recomienda no procesar más de doce muestras por vez para evitar accidentes y errores por cambio de muestra. 15 . Si la muestra contiene varias porciones mucopurulentas trate de mezclarlas con movimientos suaves del palillo y luego tome una porción de la mezcla.Tome la primera muestra y el portaobjetos correspondiente y colóquelo entre usted y el mechero. tome el frasco con material y llévelo detrás de la llama de manera que ésta quede entre usted y el frasco y ábralo con cuidado.Si marca los portaobjetos con lápiz graso hágalo en la parte posterior de los mismos para evitar que se pierda la identificación durante la coloración. Esta posición lo protegerá de posibles formaciones de aerosoles al abrir el frasco.Disponga a su izquierda o derecha (siempre en la misma posición) las muestras de acuerdo a numeración creciente y los portaobjetos marcados delante de cada una de ellas. . al finalizar el trabajo. El portaobjetos se divide virtualmente en tres tercios. la que descartará con el material a esterilizar.

Deje el extendido en un soporte para que se seque a temperatura ambiente. Continúe de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. no lo queme ni lo sobrecaliente. COLORACIÓN DE ZIEHL-NEELSEN Esta es la técnica más empleada en el mundo y ha sido recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Unión Internacional Contra la Tuberculosis y Enfermedades Respiratorias (UICTER) por ser la que asegura resultados reproducibles con un entrenamiento sencillo. puede descartar las muestras colocándolas. pásela con movimientos circulares por la arena y luego quémela con cuidado comenzando desde el mango avanzando lentamente hacia el aro. para evitar confusiones. Si es demasiado fino. Puede utilizar un incinerador especial muy fácil de fabricar con elementos sencillos.Espere a que las láminas se hayan secado al aire y luego páselas rápidamente sobre la llama dos o tres veces para fijar el extendido.Cierre el envase y déjelo en el lado opuesto a los que aún no ha procesado. ya que los bacilos permanecen vivos cuando son fijados sólo con calor suave. si usó ansa introdúzcala en el frasco que contiene arena y fenol.Si utilizó palillos deséchelos en un frasco que contenga fenol al 5% o una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. junto con los palillos. en un recipiente para incineración o autoclavado o bien colocándoles fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% y dejándolas hasta el día siguiente. Coloque sólo un extendido en cada portaobjetos El extendido debe quedar de grosor homogéneo. Este procedimiento debe realizarse teniendo el mechero entre usted y el portaobjetos.. el material puede desprenderse durante la coloración. momento en que puede eliminarlas con los desechos habituales del laboratorio. cubriendo la mayor parte de los dos tercios del portaobjetos. del mismo modo que las muestras. FIJACIÓN DEL EXTENDIDO . sin llegar a los bordes.Coloque la partícula seleccionada sobre el portaobjetos cerca de la línea divisoria y extiéndala con el palillo o el ansa con movimientos circulares. . si los ha usado. es posible producir un resultado falso negativo. el extendido no debe calentarse a la llama mientras éste permanezca húmedo pues el calor fuerte deteriora los bacilos y no se colorean y puede generar aerosoles. en forma homogénea. . Los extendidos deben ser coloreados lo antes posible. si es muy grueso. 16 . no deben quedar sin colorear hasta el día siguiente . Descarte el barbijo o los guantes. Limpie la superficie de trabajo descartando los papeles con que pudiera haberla cubierto y pase fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10% sobre la superficie para desinfectarla. tratando de dispersarla por toda la superficie central. Cuando haya terminado. El grosor adecuado es el que permite leer un texto impreso a través del preparado.4. . - - 2. Conserve las muestras hasta que haya realizado las coloraciones y lecturas y esté seguro de que no necesitará realizar nuevos extendidos o enviarlas para cultivo.

También se puede cubrir previamente el extendido con un trozo de papel de filtro que no sobresalga del portaobjeto y luego cubrir con la fucsina. .En el término de aproximadamente cinco minutos debe calentar tres veces hasta emisión de vapores. .Cubra la superficie del extendido con fucsina básica fenicada recientemente filtrada. . Girando el extendido lave con cuidado también la parte posterior. lave cuidadosamente la superficie eliminando totalmente la solución de fucsina.Disponga dos varillas de vidrio sobre la pileta de lavado a una distancia de aproximadamente 5 cm entre una y otra.Con la llama de un hisopo embebido en alcohol caliente suavemente por debajo de los extendidos con movimientos de vaivén hasta que observe que se desprenden los primeros vapores.Levante cuidadosamente el portaobjetos desde el extremo más cercano a usted y con el frasco de agua o un chorro fino proveniente de una mangueraconectada a la canilla. 17 . este tiempo y estas temperaturas son suficientes para que la fucsina penetre adecuadamente en el bacilo y se fije a sus lípidos. . . Este papel evita que los posibles cristales de fucsina se asienten sobre el extendido. . Consta de tres tiempos: a. .Coloración.Es también la más económica y alcanza la misma sensibilidad que la técnica de fluorescencia si se le dedica tiempo suficiente a la lectura de cada frotis. Incline el portaobjetos tomándolo con una pinza para eliminar el exceso de agua y evitar diluir los reactivos que se utilizarán a continuación.Coloque las láminas fijadas conservando el orden numérico con el extendido hacia arriba y sin que se toquen entre ellas..Vierta los reactivos y el agua suavemente evitando salpicaduras que pueden transferir material de un portaobjetos a otro y pueden generar aerosoles. si por cualquier causa no desea colorear en la pileta puede utilizar alguna bandeja metálica o de vidrio. El calentamiento nunca debe ser tal que hierva la fucsina ya que a esta temperatura la pared de los bacilos se destruye y no se colorean.

libre de polvo.. c. . 2. Se considera decolorado cuando sus partes más gruesas conservan sólo un leve tinte rosado.Coloración de fondo. Pasado ese tiempo enjuague con abundante agua a baja presión. .. lo que da idea del grado de severidad e infecciosidad del paciente. OBSERVACION MICROSCOPICA La observación microscópica cumple principalmente dos objetivos: a..Decoloración. déjelo actuar un minuto y enjuague nuevamente.b. 18 . repita el procedimiento. Mantenga el microscopio limpio. b.Déjelas secar a temperatura ambiente. la riqueza en bacilos. en caso positivo. . . Enjuague las láminas en ambas caras con agua a baja presión y limpie la parte inferior con un algodón si ha quedado coloreada..5. Cubra todo el extendido con solución de azul de metileno dejándolo entre 45 segundos y un minuto. .Elimine el exceso de agua inclinando el portaobjetos.Cubra la totalidad del extendido con solución decolorante de alcohol-ácido y deje aproximadamente 3 minutos para que el decolorante actúe.Después de la última decoloración mantenga el extendido cubierto al menos un minuto con agua para rehidratar las células. restos de aceite y humedad. apoyándolas en forma vertical sobre un papel absorbente o en un soporte.determinar si en el extendido hay bacilos ácido-alcohol resistentes. Vuelva a cubrir con solución decolorante.A medida que las saque del soporte de coloración observe si la numeración está aun visible y en caso contrario vuelva a numerarlas. Si aún observa coloración rosada intensa.cuantificar aproximadamente.

19 . . . . b. . papel suave. absorbiendo el aceite sin frotar en exceso la lente. Esto contribuirá al cuidado de la lente y a evitar la transferencia de material al siguiente frotis que se va a leer. aislados o en grupo. . .Si no se encuentran bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) o se observa menos de un bacilo por campo en promedio deben examinarse como mínimo 100 campos útiles.Método de lectura. por ejemplo aceite de cedro).Si se encuentran más de 10 BAAR por campo bastará con leer 20 campos.Debe utilizarse un microscopio con condiciones adecuadas de óptica.Ubique cerca del microscopio todos los elementos que va a necesitar para la lectura: aceite de inmersión.Coloque el portaobjetos sobre la platina dejando la superficie cubierta por el aceite justo debajo de la lente de inmersión y baje ésta lentamente con el tornillo macrométrico hasta que toque ligeramente el aceite. (No es conveniente usar aceites naturales de mayor densidad y secantes. a. equipado con un objetivo de inmersión (100 x) y un ocular 8 ó 10 x.Siga una pauta uniforme de observación. generalmente con gránulos más coloreados en su interior. para evitar repetir la lectura de algunos campos.Enfoque en el microscopio .Si se encuentran entre uno y 10 BAAR por campo bastará con leer 50 campos. teñidos de rojo fucsia. una caja para guardar portaobjetos. leyendo de izquierda a derecha del extendido al menos 100 campos microscópicos útiles.Apoyando el portaobjetos sobre la mesa deposite una gota de aceite de inmersión sobre la parte del extendido coloreado cercana al número.De haber bacilos los observará como pequeños bastoncillos delgados. ligeramente curvos.. Cada campo microscópico debe ser observado en superficie y profundidad. continúe ajustando el tornillo micrométrico hasta ver una imagen nítida. En ese momento observe a través de los oculares y continúe bajando muy lentamente hasta ver el material coloreado del extendido. No se debe tocar el extendido con la punta del gotero o varilla para evitar pasar partículas de un extendido a otro y generar falsos resultados positivos. . Tenga en cuenta que este extendido positivo se va decolorando con los sucesivos lavados con xileno. el Registro del Laboratorio y una lapicera. Es conveniente tener un extendido positivo coloreado para evaluar periódicamente las buenas condiciones del microscopio. utilizando permanentemente el micrométrico. ..Terminada la observación limpie el aceite de inmersión del objetivo con una gasa o papel suave. . destacándose sobre un fondo azul.

La siguiente escala semicuantitativa ha sido adoptada por el país y es la utilizada en la mayoría de los países del mundo: Negativ o (-) : no se encuentran BAAR en los 100 campos observados. preparados con muestras a las que se les ha agregado fenol.No es conveniente usar xilol u otro disolvente en forma permanente para limpiar los objetivos pues deterioran rápidamente los objetivos y oculares.Ampliar la lectura a 200 campos. Positivo (++) : de 1 a 10 BAAR por campo en 50 campos observados Positivo (+++) : más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados Registre inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del laboratorio. Es conveniente marcar los resultados positivos en rojo. agregue toda observación que indique que la calidad de la muestra no fue adecuada.Control de calidad interno del laboratorio Es conveniente guardar extendidos fuertemente positivos. Si no puede decolorar bien el preparado. Escriba el resultado en el formulario correspondiente. . 20 . Si en una lámina se observan de uno a cuatro BAAR en 100 campos se recomienda: . De ser posible. Si no detecta bacilos ácido-alcohol resistentes. Positivo (+) : se observa en promedio menos de un bacilo por campo en 100 campos observados. el decolorante es defectuoso o la decoloración ha sido realizada en forma incompleta.. hacer otro extendido de la misma muestra. enviar estas muestras para cultivo. c. si corresponde..Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse como negativa. d.Informe de los resultados . tratando de elegir partículas purulentas. los reactivos son defectuosos o la coloración ha sido realizada en forma incorrecta. para controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes que se prepare. para identificarlos más rápidamente. consignando en el Libro de Registro el hallazgo y en lo posible solicitar una tercera muestra. Envíe el resultado lo más pronto posible al centro de salud o médico que solicitó el examen. . Los aceites sintétic os no secantes utilizados actualmente no requieren de limpieza frecuente con solventes.Si con esa lectura no se encuentran más bacilos.

se comprueba que se mantenga visible la numeración y se las guarda con sus resultados. 21 .2.Separe las láminas positivas de las negativas y lávelas por separado 2. La limpieza se realiza de la siguiente manera: 1.Lave con abundante agua de la canilla.Coloque las láminas en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 30% durante 48 horas. CONSERVACION Y ELIMINACION DE LAS LÁMINAS El sistema nacional de garantía de calidad de las baciloscopías requiere que las láminas se conserven al menos un mes hasta que puedan ser solicitadas para su relectura. 4. 3. Las láminas leídas se limpian con un algodón embebido en alcohol pasándolo por la superficie con leve presión.6. Luego del mes.Seque al calor seco o a temperatura ambiente y limpie con un paño antes de volverlas a usar. de no serles solicitadas puede limpiar las láminas dejando las negativas en las que no se observen rayaduras para preparar nuevos extendidos y enviando las positivas a otra sección del laboratorio.

3. 4. Atender al personal del centro de salud y pacientes fuera de este área. con otra enfermedad inmunosupresora. 4. NO BARRER EN SECO NI ENCERAR. Deben tener una evaluación médica clínica anual sistemática con placa de tórax y. Restringir el acceso al laboratorio de personal ajeno al área de trabajo para evitar movimientos. 3. Los trabajadores de salud no reactores a la tuberculina (PPD menor de 10 mm) deben vacunarse con BCG al ingresar a trabajar. limpiarlos diariamente con una solución de hipoclorito de sodio concentrado comercial al 10%. 2. En cada sección deben estar expuestas las normas básicas de bioseguridad específicas del área. 3. cuando tengan síntomas respiratorios. con tratamientos prolongados con medicamentos inmunosupresores o diabéticos no deben trabajar en áreas de riesgo. El Comité de Infecciones Hospitalarias es el responsable de reglamentar las normas de bioseguridad para todo el personal y de hacerlas cumplir. baciloscopía y cultivo de ser posible. Es menor el riesgo del personal del laboratorio que puede protegerse con medidas de precaución simples y no muy costosas. Toda manipulación de material potencialmente infeccioso debe ser realizada en áreas alejadas de la circulación general. distracciones y exposición de personas no involucradas. No utilizar ventiladores ni acondicionadores que generen flujos de aire mientras se está trabajando con material infeccioso. PERSONAL 1.NORMAS MINIMAS DE BIOSEGURIDAD PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS La información disponible en nuestro país indica que el personal de salud más expuesto a contraer tuberculosis es el que asiste directamente al paciente: médicos y enfermeras. 6. 2. 3. Los trabajadores de salud infectados con HIV. PRECAUCIONES GENERALES DE TRABAJO En todas las circunstancias tener presente que es necesario aplicar todas las medidas lógicas para evitar la generación y movimiento de aerosoles.1. NO USAR PLUMEROS PARA LA LIMPIEZA.2. Trabajar en áreas con pisos y paredes lavables. Aquéllos con enfermedades pulmonares crónicas deben consultar previamente con su médico. 5. 22 . Cada laboratorio debe contar con instrucciones escritas y difundidas sobre el manejo de pacientes con tuberculosis y de las muestras biológicas obtenidas de los mismos. 1. corrientes de aire. Es conveniente dictar a los ingresantes un curso con contenidos de historia natural de la tuberculosis y medidas de bioseguridad y reafirmar periódicamente los conocimientos.

8. 10. si existieran. el fenol mata el bacilo pero conserva su propiedad de tinción con fucsina. no sacarlo del centro de salud donde debe ser desinfectado y lavado (agua caliente y enjuague con agregado de hipoclorito). No es recomendable trabajar con más de 12 muestras simultáneamente. 4. PRECAUCIONES PARA LABORATORIOS QUE REALIZAN BACILOSCOPÍAS Todo laboratorio que cuente con un microscopio puede realizar una baciloscopía adoptando medidas de bioseguridad de sentido común. que no son costosas. Las muestras deben ser recolectadas al aire libre o en un lugar bien ventilado hacia el exterior y con puertas cerradas a áreas de circulación de público. Pueden utilizarse los de trabajadores que trabajan con asbestos o silicio. El filtro del barbijo o máscara debe ser de alta eficiencia (HEPA) que retenga partículas del orden de los 0. utilizar barbijos con buen ajuste alrededor de la boca y nariz para la toma. Los barbijos de cirugía no protegen contra los bacilos de la tuberculosis. Si el derrame hubiera sido masivo autoclavar o incinerar el frasco y el contenedor en el que fue trasladado al laboratorio. 11. manipulación y procesamiento de las muestras. En circunstancias normales no es indispensable el uso de guantes para el trabajo con muestras de esputo en tuberculosis aunque. Ubicar ésta en otra caja sin divisiones de tamaño ligeramente mayor. 23 . Las máscaras u otro material utilizado deben lavarse con detergente y abundante agua y el ambiente debe ser ventilado luego de cada paciente. Si se procesan un promedio diario de más de 5 muestras. 6. Al recibir la muestra comprobar que no haya derrames. 2. es conveniente mantenerla sin hacer excepciones. No beber. aun cuando se usan guantes. (Ver Baciloscopía) 2. 3. instalaciones o equipamiento del laboratorio. En enfermos sospechosos de tuberculosis deben evitarse en lo posible las nebulizaciones. sin antes lavarse las manos.3. Sistematizar el procesamiento de las muestras. No tocar. por ejemplo con papel. desinfectar el exterior del envase con algodón embebido en fenol al 5% o hipoclorito de sodio al 10%. Para el transporte acomodar los envases en cajas rígidas. si las hubiera. rellenando los espacios vacíos para evitar movimientos. Utilizar siempre guardapolvo de mangas largas y cerrado. 9. 1. 7. No ubicar en el área de trabajo elementos innecesarios ni sacar de la misma libros de registro o elementos allí utilizados. se harán en la sala de toma de muestras o en otra cuyas condiciones de ventilación sean similares. cubrir con vendaje y guantes. Controlar que no haya heridas o escoriaciones en las manos.4. de ser necesarias. con cierre hermético y divisiones interiores. resistentes. 3. 3. Las siguientes recomendaciones son generales para todos los operadores del laboratorio en cualquier procedimiento que se haga con una muestra de SR. Disponer siempre de un frasco con fenol al 5% y trabajar en el área delimitada cubierta con un papel embebido en fenol.5. Lavarse las manos con frecuencia. si existe una norma general de laboratorio de utilizarlos para protección. PRECAUCIONES EN LA TOMA Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS 1. Para el transporte de muestras que serán procesadas sólo por baciloscopía se les puede agregar 10 gotas de fenol al 5%. 3. comer ni fumar en el área de trabajo donde se procesa material potencialmente infeccioso.3 micrones que aseguren al menos 95% de protección. impermeables.

La ventana puede ser de vidrio doble o triple. 85 cm de altura. A continuación se sugiere un diagrama de una campana sencilla y económica. 33 cm en la parte superior y 20 cm de alto en la entrada de manos. Al realizar los extendidos. Abrir los envases con muestras teniendo un mechero entre la misma y el operador. teniendo en cuenta que la superficie interior no debe presentar rugosidades para permitir una buena desinfección. colocando antes del mismo filtros adecuados. El aire contaminado dentro de la cámara debe ser expulsado forzadamente por un extractor adecuado. 5. 6. Las dimensiones aproximadas son: 100 cm de largo. primero debe ser limpiada en un frasco con arena y fenol o alcohol y luego quemada en el mechero. que puede ser utilizada para técnicas básicas de bacteriología e incluso como campana de gases: - - - Puede construirse en madera u otro material (acero. La cámara puede ubicarse sobre la mesada del laboratorio. comenzando desde el mango hacia el aro. no pipetear nunca con la boca. 7. Si se usa ansa. Aunque no es imprescindible pueden utilizarse campanas de bioseguridad. Al regresar recoger el material con pinzas y depositarlo en un recipiente donde pueda ser incinerado o autoclavado.4. 60 cm de ancho en la base. Ante cualquier rotura del envase o tubo con material potencialmente contaminado cubrir inmediatamente la zona con papel y embeberlo con fenol al 5% o con hipoclorito al 10% y abandonar el área de trabajo por 30 minutos. De preferencia utilizar palillos para realizar los extendidos. conservar los bordes limpios. sin muestra. De igual manera proceder para seleccionar la partícula a ser extendida y al realizar el extendido. 24 . no es necesario que sean complejas. Colorearlos tan pronto estén secos para disminuir al mínimo el tiempo en que las micobacterias permanecen viables. el riesgo de concentración de contaminantes es superior al de fuera de la cámara. Si se usa pipeta cuidar que la punta superior esté protegida con algodón. etc…). melamina. Si la cámara no dispone de esta ventilación forzada. 8.

Éste debe permitir el conocimiento actualizado de la magnitud y tendencia de la situación epidemiológica y al mismo tiempo el grado de desarrollo y efic iencia de la Red de Laboratorios. Los instrumentos de registro y formularios con los que debe contar la Red son: Formulario de Solicitud de baciloscopía - Registro de Muestras para Investigación Bacteriológica de la Tuberculosis 25 .SISTEMA DE REGISTRO E INFORMACIÓN El sistema de información epidemiológica y operacional debe ayudar a administrar mejor la Red de Laboratorios de Tuberculosis a todos los niveles.

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2. 2000. Bull Int Union Tuberc 1978:4-16.S. Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. Role and Operation in a Low-Income Country. El exámen microscópico. Nota Técnica Nº26/Rev1. 27 . U. Emilio Coni”. The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network. 3. La muestra. 1997. 1-51. 7. editor. Technical guide for sputum examination for tuberculosis by direct microscopy . Center for Disease Control. installation and use of biological safety cabinets.BIBLIOGRAFÍA 1. International Union Against Tuberculosis and L ung Disease. Tuberculosis bacteriology. Oxford: Butterworth-Heinemann. US Department of Health . Yates MD. Primary Containment for biohazards: selection. Minimum Requirements. Francia. 6. International Union Against Tuberculosis and Lung Disease. Smithwick.S. Collins CH. National Institutes of Health. 1988. USA. 2nd . 2nd ed. Grange JM. Education and Welfare. ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD/ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE LA SALUD. 4. Argentina. Organization and Practice.ed. Bacteriología de la tuberculosis. Washington: U. 5. 1998. Normas técnicas del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. Laboratory Manual for Acid-fast Microscopy. Department of Health and Human Services. Centers for Disease Control and Prevention. Argentina. 1979. Goverment Printing Office 1995.