Suplemento Ram

N2 VOL 42 2010
REVISTA ARGENTINA DE MICROBIOLOGA
PUBLICACIN DE LA ASOCIACIN ARGENTINA DE MICROBIOLOGA
PUBLICACION DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE MICROBIOLOGIA

Aparece en Biological Abstracts, Chemical Abstracts, Veterinary Bulletin, Index Veterinario, EMBASE (Excerpta Medica) Medline (Index Medicus), Tropical Diseases Bulletin, Abstracts on Hygiene and Communicable Diseases, Literatura Latinoamericana en Ciencias de la Salud (LILACS), Peridica, LATINDEX, SciELO y Science Citation Index Expanded. DIRECTORA Silvia Carla Predari
Instituto de Investigaciones Mdicas Alfredo Lanari - UBA
SECRETARIO DE REDACCIN Gerardo A. Leotta

Facultad de Ciencias Veterinarias - UNLP - CONICET
COMIT EDITOR Alicia I. Arechavala

Hospital Francisco J. Muiz - GCBA
Claudia I. Menghi
Hospital de Clnicas - Facultad de Farmacia y Bioqumica - UBA
Jos A. Di Conza
Facultad de Farmacia y Bioqumica - UBA - UNL - CONICET
Elsa C. Mercado
Instituto de Patobiologa - INTA
Ana M. Jar
Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA
Hctor R. Morbidoni
Facultad de Ciencias Mdicas - UNR - CIUNR
ASESORES CIENTFICOS C. Bantar J. C. Basilco M. I. Berra H. M. Bianchini N. Binsztein M. M. Bracco R. Campos G. Carballal A. Cataldi J. J. Cazzulo S.R. Costamagna C. Coto M. D Aquino R. de Torres A. H. Frade A. Gentile A. Giri J. E. Gonzlez S. Gonzlez Ayala N. Leardini H. Lopardo W. P. Mac Cormack D. Masih M. Mollerach R. Negroni F. Nicola T. Orduna R. Raya V. Ritacco H. R. Rodrguez A. P. de Ruiz Holgado A. Schudel L. Scolaro F. Sesma R. Soloaga H. Terzolo G. Vaamonde
ASESORES EN EL EXTERIOR A. Amoroso (Blgica) J. Arbiza (Uruguay) J. A. Ayala (Espaa) P. Feng (EE.UU.) E. Garca Lpez (Espaa) M. Gottschalk (Canad) R. Guerrero (Espaa) M.J.Mendes Giannini (Brasil) M. Philipp (EE.UU.) F. Queiroz Telles (Brasil) A. Restrepo (Colombia) G. San Blas (Venezuela) G. Schmunis (EE.UU.) A. Steinbchel (Alemania) M. Tolmasky (EE.UU.) J. Vila Estape (Espaa)
Secretara: Den Funes 472, C1214AAD Buenos Aires; Tel/FAX: 54-11-4932-8858, 54-11-4932-8948; E-mail: info@aam.org.ar, http://www.aam.org.ar
SUSCRIPCIN (cuatro nmeros anuales) Socios AAM U$ 120 Argentina no socios U$ 240 Amrica Latina U$S 100 Otros pases U$S 200
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Suc. 4 - B
Correo Argentino
Franqueo Pagado Concesin N 4195 Tarifa Reducida Concesin N 628
AAM INFORMA
CURSOS Y TALLERES
Para mas informacin visite nuestra pagina web (www.aam.org.ar), seccin Cursos y Talleres MTODOS MICROBIOLGICOS RPIDOS: SU VALIDACIN
21 de Octubre 2010 Organiza: Subcomisin de Buenas Practicas-DAMyC

TALLER INTERNACIONAL DE RIZOSFERA, BIODIVERSIDAD Y AGRICULTURA SUSTENTABLE (TIRBAS 2010)
21 y 22 de Octubre 2010 Organiza: DiMAyA

ACTUALIZACION SOBRE BOTULISMO DEL LACTANTE Y ALIMENTARIO. USOS DE LA TOXINA BOTULINICA
5 de Noviembre 2010 Organiza: DAMyC

XVIII CURSO DIAGNOSTICO VIROLOGICO RAPIDO
8 al 26 de Noviembre 2010 Organiza: SAV

IX CURSO DE ACTUALIZACIN EN INTEGRONES
1 al 10 de Noviembre 2010 Organiza: Microbiologa General

CURSO BIOSEGURIDAD
4 al 11 de Noviembre 2010 Organiza: Filial Rosario

SONRELE A LOS PAPERS EN INGLS
5-12-19 Y 26 de Abril 2011 Organiza: Comisin Directiva AAM
CONGRESOS Y JORNADAS
Para mas informacin visite nuestra pagina web (www.aam.org.ar), seccin Congresos y JornadasCongresos y Jornadas VI REUNIN CIENTFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICAS: BACTERIEMIAS, FUNGUEMIAS Y PARASITEMIAS
22 de Noviembre 2010
XXX REUNIN CIENTFICA ANUAL DE SAV 2010
8 al 11 de Diciembre 2010
BRUCELLOSIS 2011 INTERNATIONAL RESEARCH CONFERENCE
21 al 23 de Septiembre 2011
X CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGA, III SIMPOSIO DE VIROLOGA CLNICA
26 al 29 de Septiembre 2011
XIV JORNADA ARGENTINA DE MICROBIOLOGA 3 JORNADA DE MICROBIOLOGA E INFECTOLOGA DEL NEA - MINEA 2011. RESISTENCIA CHACO
29 de Septiembre al 1 de Octubre 2011
XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGA

VI CONGRESO DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICA (SADEBAC) I CONGRESO DE MICROBIOLOGA AGRCOLA Y AMBIENTAL (DiMAyA)
17 al 20 de octubre de 2010 Palais Rouge
Jernimo Salguero 1433/49 (C1177AFA) Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina
COMIT ORGANIZADOR DEL XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGA

Presidente: Ricardo Negroni Vicepresidentes: Marta Tokumoto Jorge Reinheimer Isabel Bogado Secretarias Generales: Alicia Arechavala Mara Alejandra Picconi Prosecretaria: Cristina Iovannitti Tesorera: Adriana De Paulis Protesorera: Paula Gagetti Secretaria de Relaciones Institucionales: Daniela Centrn Secretaria Tcnica: Adriana Sucari Colaboradores Secretaria Tcnica: Mara Soledad Ramrez Mara Paula Quiroga Secretarios Cientficos: Liliana Guelfand Horacio Salomn Comit Cientfico Divisin DiMAyA: Susana Vzquez e Ins Garca Divisin DAMYC: Virginia Fernndez Pinto y Guillermo Guirn Divisin SADEBAC: Carlos Vay y Magdalena Pennini Divisin SAV: Victoria Preciado, Viviana Mbayed y Oscar Taboga Vocales: Filial Crdoba: Marina Bottiglieri Filial Cuyo: Alejandro Sturniolo Filial NOA: Ada Surez Filial NEA:Luis Merino Filial Sur: Ana Paris de Baeza Filial Rosario: Perla Hermida Lucena Filial Santa Fe: Francisco Salamone Comit Organizador VI Congreso de SADEBAC Presidente: Jorgelina Smayevsky Vicepresidente: Mara I. G. de Fernndez Secretarios Cientficos: Horacio Lopardo, Carlos Vay Comit Cientfico: Magdalena Penini, Paula Gagetti, Angela Famiglieti, Viviana Ritaco, Sonia Arduino, Marta Rocchi, Emilce Mnze, Rodolfo Casero, Gabriela Santiso, Comit Organizador I Congreso de Microbiologa Agrcola y Ambiental Presidente: Fabricio Cassan Vicepresidente: Claudio Penna Comit Cientfico Asesor: Susana Vzquez, Ins Garca de Salamone, Diego Sauka, Lucas Ruberto
XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010
VII
COMISIN DIRECTIVA ASOCIACIN ARGENTINA DE MICROBIOLOGA
Presidente Manuel Gmez Carrillo Vicepresidente Marta Rocchi Secretaria Mara Cecilia Freire Secretaria de actas Mara I. G. Fernndez Prosecretaria Mara Alejandra Picconi Tesorera Adriana De Paulis Protesorero Claudio Penna Vocal Titular 1 Jorge Santoianni Vocal Titular 2 Mara Jos Gallego Vocal Titular 3 Marta Rivas Vocal Titular 4 Mara Soledad Ramrez Vocal Suplente 1 Adriana Sucari Vocal Suplente 2 Diego Sauka Vocal Suplente 3 Manuel Boutureira Vocal Suplente 4 Gustavo Giusiano
VIII
Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1
COMISIN DIRECTIVA SOCIEDAD ARGENTINA DE BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICA - SADEBAC Presidente Horacio Lopardo Vicepresidente Angela Famiglietti Secretaria general Nora A. Gmez Prosecretario Marcelo Galas Secretaria de actas Patricia Vidal Tesorera Mara Adelaida Rosetti Protesorera Mara Jos Rial Vocal Titular 1 Adriana Sucari Vocal Titular 2 Paula Gagetti Vocal Titular 3 Magdalena Pennini Vocal Titular 4 Gabriela Santiso Vocal Suplente 1 Marta Rocchi Vocal Suplente 2 Marta Hofman Vocal Suplente 3 Patricia Paulin Vocal Suplente 4 Ana Mara Togneri
COMISIN DIRECTIVA DIVSIN AGRCOLA Y AMBIENTAL - DiMAyA
Presidente Fabricio Cassn Vicepresidente Claudio Penna Secretario Diego Sauka Tesorera Ins Garca de Salamone Secretaria de actas Susana Vzquez Vocal Titular 1 Lucas Ruberto Vocal Titular 2 Rosana Massa Vocal Suplente 1 Mnica Baldini Vocal Suplente 2 Diego Libkind
VOLUMEN 40
SUPLEMENTO 1 2010
XII Congreso Argentino de Microbiologa VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriologa, Micologa y Parasitologa Clnica (SADEBAC) I Congreso de Microbiologa Agrcola y Ambiental (DiMAyA)
INDICE
Comit Organizador Comisin Directiva de la Asociacin Argentina de Microbiologa Comisin Directiva SADEBAC y DiMAyA Mensaje del Presidente de la Asociacin Argentina de Microbiologa Mensaje de la Presidente del VI Congreso de SADEBAC Mensaje del Presidente del XII Congreso Argentino de Microbiologa Mensaje del Presidente del I Congreso Agrcola y Ambiental Comunicaciones Orales Posters ndice de Autores Instrucciones para Autores
1 25 263 281
VOLUMEN 42
SUPLEMENTO 1 2010
XII Congreso Argentino de Microbiologa VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriologa, Micologa y Parasitologa Clnica (SADEBAC) I Congreso de Microbiologa Agrcola y Ambiental (DiMAyA)
INDEX
Conference Organizing Committee Executive Board of the Argentine Society for Microbiology Executive Board of SADEBAC and DiMAyA Argentine Association for Microbiology Presidents Message VI SADEBAC Conference Presidents Message XII Argentine Microbiology Conference Presidents Message I DiMAyA Conference Presidents Message Oral Sessions Poster Sessions Author Index Instructions for Authors
1 25 263 281
XII Congreso Argentino de Microbiologa
Mensaje del Presidente de la Asociacin Argentina de Microbiologa

Estimados Colegas Es para m un gran honor, en nombre de la Asociacin Argentina de Microbiologa, darles la bienvenida a nuestro XII Congreso Argentino de Microbiologa que desarrollaremos en la Ciudad de Buenos Aires. Como ocurre cada tres aos, la AAM organiza un congreso de carcter nacional de nuestra especialidad con el firme objetivo de brindar un escenario que permita la expresin de la produccin cientfica y tcnica ms destacada de la microbiologa. Fundada en 1948, la AAM incorpor siete filiales desde 1961, logrando hoy en da una amplia representacin en todo nuestro territorio nacional. Al comenzar la dcada de los ochenta se incorpor como divisin la Sociedad Argentina de Virologa (SAV) y se crearon las divisiones Sociedad Argentina de Bacteriologa Clnica (SADEBAC) y Alimentos, Medicamentos y Cosmticos (DAMyC). Desde el 2005, la microbiologa agrcola y ambiental se ve representada en la divisin DiMAyA. La AAM tiene una larga historia en la capacitacin continua de microbilogos no solo a travs de sus cursos y talleres sino tambin por medio de sus congresos y jornadas. El primer congreso de la AAM, organizado en 1976 tuvo este objetivo y desde ese momento se viene organizando de manera ininterrumpida. Para una Asociacin que rene diversas disciplinas como la nuestra, que crece da a da y que tiene representacin en amplias regiones del pas, nuestros congresos deben ser tambin un marco para conocernos, intercambiar conocimiento y propiciar colaboraciones. Sin duda es una oportunidad de crecimiento y progreso para todos nosotros. Hace casi tres aos la Comisin Directiva confi al Dr. Ricardo Negroni la presidencia y conformacin del Comit Organizador de nuestro congreso, invitando adems a nuestras Divisiones a sumarse y compartir este mismo escenario en la medida de sus posibilidades. El inters mostrado por todas las Divisiones, Filiales, Subcomisiones y Grupos de Trabajo, que han contribuido con la labor de sus integrantes, sus ideas y participacin, ha culminado con la conformacin de un programa cientfico que no dudo har de este congreso un encuentro especial. Quiero agradecer al Dr. Negroni, a las Divisiones SADEBAC y DiMAyA que estn organizando sus congresos de manera conjunta y a todos los miembros que integran sus Comits Organizadores por haber desarrollado un magnfico marco para alcanzar nuestro objetivo. Slo nos queda aprovecharlo. Manuel Gmez Carrillo
Presidente Asociacin Argentina de Microbiologa
IX
Mensaje de la Presidente del VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriologa, Micologa y Parasitologa Clnica (SADEBAC)
La Sociedad Argentina de Bacteriologa, Micologa y Parasitologa Clnica, divisin de la Asociacin Argentina de Microbiologa, convoca nuevamente a los profesionales involucrados en el diagnstico, tratamiento y prevencin de las enfermedades infecciosas a participar de nuestra actividad cientfica ms importante del ao 2010, el VI Congreso de SADEBAC. Este evento tiene una significacin especial ya que se realiza en el marco del XII Congreso de la Asociacin Argentina de Microbiologa, con el espritu de poder brindar a nuestros asistentes una visin global de la Microbiologa en nuestro pas. Pese a los continuos avances de la ciencia, las infecciones continan siendo en el mundo, una de las causas ms frecuentes de morbi-mortalidad. En muchos casos, estas muertes seran evitables mediante diagnsticos rpidos, certeros, polticas eficientes de prevencin y uso adecuado de los antimicrobianos. Esta funcin es atributo del microbilogo clnico integrado en el equipo multidisciplinario de salud. El comit cientfico ha planificado un ambicioso programa enfocado desde las patologas a los microorganismos, en el cual conviven en un mismo nicho ecolgico las bacterias, los hongos, los virus y los parsitos, peleando palmo a palmo con los nuevos y viejos antimicrobianos, los inmunomoduladores, las vacunas y los programas de control de infecciones y de mejora continua de la calidad. Les agradecemos a todos por acompaarnos a transitar estos primeros 29 aos de nuestra sociedad y los invitamos a participar y colaborar activamente en la misma. Sus inquietudes y aportes sern bienvenidos y su invalorable presencia contribuir al xito de este Congreso. Cordialmente, Jorgelina Smayevsky Presidente VI Congreso SADEBAC
Mensaje del Presidente del XII Congreso Argentino de Microbiologa
La Comisin Directiva de la Asociacin Argentina de Microbiologa (AAM) me ha conferido el alto honor de designarme Presidente del prximo Congreso Argentino de Microbiologa, que tendr lugar en la ciudad de Buenos Aires entre los das 17 y 20 de octubre de 2010. Es la reunin cientfica ms importante organizada por la AAM y se lleva a cabo cada tres aos. La AAM ha sobrepasado ya las seis dcadas de existencia y su finalidad es mejorar y difundir los conocimientos microbiolgicos en las ms diversas reas. Durante este prolongado lapso su desarrollo ha sido constante y hoy agrupa a ms de 2000 cultores de las distintas ramas de la Microbiologa. La AAM es una organizacin federal, que cuenta con siete filiales en el interior del pas y posee cuatro divisiones: la Sociedad Argentina de Virologa, la Sociedad Argentina de Bacteriologa Clnica (que recientemente incluy a miclogos y parasitlogos), la Divisin de Microbiologa de Alimentos, Medicamentos y Cosmticos (DAMyC) y la nueva Divisin de Microbiologa Agrcola y Ambiental. Tanto las filiales como las divisiones gozan de una cierta autonoma y organizan diversas actividades cientficas propias. La AAM publica la Revista Argentina de Microbiologa que ha editado ya 41 volmenes, emite cuatro nmeros por ao y su nivel cientfico ha permitido que sea citada por las ms prestigiosas organizaciones dedicadas a la recopilacin de bibliografa como Chemical Abstract, Science Citation Index Expanded, Medline (Index Medicus), etc. Es la segunda vez que me toca organizar un Congreso Argentino de la especialidad. En esta oportunidad, la propia complejidad de la Asociacin y la evolucin de los conocimientos de la microbiologa, ha tornado indispensable contar con una Comisin Organizadora amplia, laboriosa y capaz, que sirva a la vez de rgano consultor y de ejecutor de las acciones necesarias para que el Congreso pueda llegar a buen fin. Es as como he elegido un plantel de colaboradores que, a primera vista, puede parecer muy extenso, pero que es representativo de las distintas reas de nuestra especialidad y cuya capacidad individual y colectiva estoy seguro que ser probada en esta oportunidad. Debe tenerse en cuenta adems que en esta oportunidad se llevarn a cabo, simultneamente
con esta reunin cientfica general, los Congresos Argentinos de dos de nuestras divisiones, SADEBAC y Microbiologa Agrcola y Ambiental. Sobre el Programa Cientfico, procuramos organizar las actividades de forma tal que no existan sesiones simultneas de asuntos relacionados, para ello procuramos que las actividades de cada divisin estn dispuestas en el tiempo de una forma lineal, sin superposiciones y que existan a la vez conferencias plenarias en donde se junten miembros de distintas divisiones para considerar temas de inters general. Estas conferencias estarn a cargo de personalidades cientficas de reconocido prestigio y procurarn mostrar el impacto social de la microbiologa en sus distintas facetas. La situacin econmica del pas y del mundo, as como la de la propia AAM, no va a permitir contar con un nmero elevado de invitados extranjeros. Hemos procurado sin embargo, que los expositores locales sean del ms alto nivel y traer al mayor nmero de personalidades internacionales para las cuales podamos conseguir financiacin de sus gastos. El local seleccionado para la realizacin de este evento cientfico es cmodo y adecuado a las necesidades de un Congreso de la magnitud del que estamos organizando. Estoy seguro que dejar satisfecho a los concurrentes en cuanto a la comodidad de sus ambientes, aislamiento acstico y servicios esenciales. Deseo agradecer muy especialmente la cooperacin del Sr. Presidente de la Asociacin Argentina de Microbiologa y a su Comisin Directiva durante este proceso de organizacin del Congreso. En nombre del Comit Organizador del Congreso Argentino de Microbiologa invito a todos los interesados en la Microbiologa a participar de esta Reunin Cientfica para contribuir al xito de la misma. Por ltimo nuestro reconocimiento las entidades oficiales de la Repblica Argentina y del exterior, as como a las empresas comerciales que apoyaron econmicamente esta reunin cientfica, sin cuya decidida colaboracin este Congreso no podra realizarse. Dr. Ricardo Negroni
Presidente del XII Congreso Argentino de Microbiologa
XI
Mensaje del Presidente del I Congreso de Microbiologa Agrcola y Ambiental (DiMAyA)
Estimados colegas: La Comisin Organizadora del I Congreso Argentino de Microbiologa Agrcola y Ambiental, as como la Comisin Directiva de la Divisin de Microbiologa Agrcola y Ambiental (DiMAyA), quieren darles la bienvenida al primer congreso nacional en la especialidad, en el Marco del XIII Congreso de Argentino de Microbiologa (XIII CAM). Para tal fin, hemos asumido un altsimo compromiso de trabajo y desde hace ms de dos aos hemos esculpido lenta y detalladamente cada una de las facetas de nuestro Congreso, que esperamos sea de la calidad y del nivel acadmico-cientfico que todos ustedes anhelan. Las actividades que se desarrollarn en el marco de nuestro Congreso fueron acordadas sobre la base de dos grandes reas de conocimiento de la Microbiologa General, hoy altamente demandantes y en plena emergencia en nuestro pas. Dentro de la especialidad de la Microbiologa Agrcola hemos planificado el desarrollo de dos conferencias plenarias y dos mesas redondas que abar-
caran principalmente las comunidades microbianas en suelos agrcolas, las bacterias promotoras del crecimiento vegetal y la microbiologa dentro de un esquema de agricultura sustentable. En el rea de la Microbiologa Ambiental, hemos planificado dos conferencias plenarias y cinco mesas redondas que abarcaran la microbiologa de aguas y suelos, la bioremediacin de ambientes contaminados y el estudio de la estructura y funcionalidad de comunidades microbianas en el medio ambiente. Adicionalmente, hemos considerado la presentacin de trabajos cientficos seleccionados, que sern expuestos y defendidos por sus autores, en el marco de dos mesas redondas, una de cada especialidad. Nuestra joven Divisin les da la bienvenida y los invita a participar de nuestras actividades en el marco del XIII CAM y permanentemente, en el marco institucional de la Asociacin Argentina de Microbiologa. Fabricio Dario Cassn Presidente I Congreso de DiMAyA
XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales
PRESENTACIONES ORALES
LUNES 18/10/2009
ALIMENTOS, MEDICAMENTOS Y COSMTICOS
O1 - 27110 INFLUENCE OF GROWTH CONDITIONS AND THE FOOD MATRIX ON THE FUNCTIONALITY OF Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1. VINDEROLA, GABRIEL (1); BOCKELMANN, WILHEM (2); NEVE, HORST (2); ZACARIAS, MARIA FLORENCIA (1); REINHEIMER, JORGE (1); HELLER, KNUT (2)
(1) Instituto de Lactologa Industrial (UNL-CONICET), (2) MRI, KIEL, Alemania Introduction: Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 is a probiotic strain isolated from human breast milk with the capacity of enhancing the gut defences through the increase of the number of IgA+ cells in the small and large intestine of mice. Recent studies suggest that cell viability might not always be a full indicator of cell functionality when strains undergo technological treatments like biomass production and drying for storage. Aim: To study, as a criterion of cell functionality, the influence of growth conditions and storage in different food matrixes of Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 on its resistance to simulated gastric digestion. Materials and Methods: The strain was grown in MRS broth in a biofermentor at 37 C at pH 6.5 and pH 5 for 12 h and 22 h with the influx of CO2. Cells were harvested, washed twice with PBS buffer, resuspended in 10% lactose and freeze-dried for 22 h in a Christ Beta 2-16 freezedrier. Scanning electron microscopy studies were carried out for the freeze-dried cultures obtained. Freeze-dried cultures were added (ca. 108 CFU/ml) to six different commercial dairy and non-dairy food products: orange juice (1), banana-carrot juice (2), mixed-fruits juice + fiber (3), vanilla milk drink (4), apple-banana puree (5) and applepeach puree (6). Samples were kept at 5 C for 4 weeks. Cell viability and resistance to simulated gastric digestion (pH 2 + 0.5% NaCl + 0.3% pepsin, 37 C for 90 min) was assessed at time 0 and at the end of the storage period. Results: No significant differences were observed in cell viability for cultures grown for 12 or 22 h at pH 6.5 or 5. However, cell losses after 90 min of exposure to simulated gastric acidity were higher than 4 log cycles for cultures grown at pH 6.5 compared to the negligible cell losses observed for cultures grown at pH 5. Scanning electron microscopy studies showed that only cultures grown at pH 6.5 for 22 h presented an exopolysaccharide-like matrix around freeze-dried cells. No significant differences in cell counts were observed among food products after 4 weeks of storage compared to counts at zero time. However, resistance to simulated gastric digestion differed among the commercial food products analyzed by the end of the shelf life: after 90 min of digestion, reductions in cell counts were negligible for products 2 and 4, for products 3 and 6 cell losses were around 1 log order, whereas for products 5 and 1 cell losses were 2 and 3 log orders, respectively. For the development of functional foods, appropriate conditions for biomass production must be chosen and a careful selection of food matrix must be performed in order to preserve not only viability but also cell functionality of probiotic strains. Antecedentes: La lisogenia se encuentra muy difundida en cepas de Lactobacillus. Los profagos no son entidades inertes y pueden contribuir o dar origen a fagos que pueden ser virulentos an para la cepa de la cual derivan. En la industria lctea fermentativa, los ataques fgicos pueden tener consecuencias muy graves, siendo el impacto econmico especialmente alto contra bacterias probiticas que por sus propiedades especficas resultan de difcil o casi imposible reemplazo. Objetivo. Determinar la presencia de profagos inducibles por mitomicina C en cepas de Lactobacillus del grupo casei de diverso origen, con nfasis en aqullas actualmente usadas en la industria lctea. Materiales y Mtodos: Se realiz la induccin con mitomicina C de 30 cepas de Lactobacillus del grupo casei: 11 comerciales, 11 de coleccin, 7 aisladas de quesos y 1 de heces. Las cepas fueron reclasificadas mediante reacciones de PCR especficas para cada especie que conforma el grupo casei (casei, paracasei, rhamnosus, zeae), y se determinaron sus perfiles de RAPD-PCR con 3 primers; los perfiles se analizaron construyendo un dendrograma con el software BioNumerics. De los sobrenadantes de induccin filtrados se extrajo ADN el cual, en los casos positivos (presencia de profagos), se someti a restriccin con BglII. Los perfiles se analizaron utilizando BioNumerics, y se compararon con el dendrograma obtenido por RAPD-PCR. Los sobrenadantes de induccin filtrados se enfrentaron con cepas de Lactobacillus del presente estudio en tests de turbidez, con el fin de evidenciar fagos virulentos derivados de las cepas lisgenas. Resultados: Aproximadamente la mitad de las cepas presentaron muy alta homologa (>80% por RAPD-PCR), entre ellas la mayora de las cepas comerciales. Numerosas cepas de Lb. casei fueron reclasificadas como Lb. paracasei o Lb. rhamnosus. La correlacin entre perfiles de RAPD-PCR y especie fue muy buena considerando la nueva clasificacin. En 25 de las 30 cepas estudiadas se encontraron profagos, demostrando su amplia distribucin dentro del grupo casei. Adems, 10 de las 11 cepas comerciales contenan profagos, con el mismo perfil de restriccin para 6 de ellas (5 muy relacionadas y 1 moderadamente por RAPDPCR). Otra cepa comercial homloga a las anteriores contena otro profago con perfil de restriccin igual que 3 cepas de coleccin (2 ATCC y 1 del INLAIN), mientras otras 3 cepas comerciales contenan profagos diversos. Esto seala que los lactobacilos del grupo casei utilizados en la industria estn, en general, muy emparentados entre s y poseen profagos de ms de un tipo, con el riesgo de recombinaciones y generacin de nuevos fagos virulentos que esto implica. Por otro lado, a partir de los sobrenadantes de induccin se aislaron 2 nuevos fagos lticos que fueron capaces de lisar la mayora de las cepas comerciales. Los resultados obtenidos evidencian un factor de riesgo de infecciones fgicas latente pero potencialmente muy peligroso para los lactobacilos probiticos del grupo casei usados industrialmente en la actualidad.
O3 - 27231 EVALUACIN DE LA DINMICA DE LA POBLACIN MICROBIANA DURANTE LA ELABORACIN Y MADURACIN DEL QUESO ITALIANO GRANA PADANO. SANTARELLI, MARCELA; BOTTARI, BENEDETTA; GATTI, MONICA; NEVIANI, ERASMO
Universit Di Parma Introduccin: El Grana Padano (GP) es un queso duro, cocido y de lenta maduracin reconocido con la Denominacin de Origen Protegida. Es elaborado con leche de vaca cruda y con
O2 - 27124 DISTRIBUCIN DE LISOGENIA EN CEPAS COMERCIALES, DE COLECCIN Y SALVAJES DE Lactobacillus DEL GRUPO casei. MERCANTI, DIEGO (1); ROSSETTI, LIA (2); REINHEIMER, JORGE (1); QUIBERONI, ANDREA (1)
(1) Instituto de Lactologa Industrial, UNL-CONICET, (2) CRA-FLC
suero fermento natural compuesto por distintas cepas de bacterias lcticas termfilas fuertemente acidificantes. La microflora secundaria (NSLAB) originaria principalmente de la leche cruda y aquella del suero fermento (SLAB) constituyen la compleja microflora que contribuyen al desarrollo de sus caractersticas organolpticas. Diversos trabajos han estudiado la composicin microbiana de los fermentos naturales, mientras se conoce poco sobre las dinmicas durante la elaboracin y maduracin. Objetivos: Estudio de la dinmica de la poblacin microbiana de SLAB y NSLAB durante la produccin y maduracin del queso GP a travs de un enfoque independiente de cultivo. Materiales y Mtodos: Fueron involucradas 6 diferentes queseras de 6 provincias de la zona de produccin del GP (norte de Italia). Por cada quesera fueron colectadas 6 muestras constituidas por: leche cruda, suero fermento natural, cuajada a las 48 horas y quesos a distintos tiempos de maduracin (2, 6 y 9 meses). Cada muestra fue analizada mediante la tcnica Length heterogeneity-PCR a travs de un analizador gentico. Para los quesos de 2, 6 y 9 meses la metodologa se desarroll de manera de distinguir la fraccin de clulas enteras y autolisadas. Resultados y Conclusiones: La composicin de las diferentes muestras de leche cruda result ser variable en relacin a la composicin de especies. L. delbrueckii subsp. lactis y S.thermophilus fueron identificadas en todas las muestras. Las especies L. helveticus, L. delbrueckii subsp. lactis y S.thermophilus fueron identificadas en todos los suero fermentos, mientras las cuajadas y quesos no dieron la seal correspondiente a S.thermophilus. En los quesos de 2, 6 y 9 meses L. helveticus y L. delbrueckii subsp. lactis fueron encontradas ya sea como clulas enteras y lisadas. En algunas muestras de cuajadas se observ la presencia de la especie heterofermentante L. fermentum, que adems fue revelada solo como clulas lisadas en la totalidad de las muestras de queso de 2 meses. A partir del segundo mes de maduracin se detect la presencia de la especie mesfila L. rhamnosus predominante en la fraccin de clulas enteras. Adems algunos quesos de 6 y 9 meses mostraron, en la fraccin de clulas enteras, la presencia de la especie P. acidilactici. Fue observada una continua evolucin de las caractersticas de la microflora en examen en el interior de cada matriz analizada. La dinmica de las especies del suero fermento, L. helveticus y L. delbrueckii subsp. lactis en las primeras horas de produccin y sus permanencias hasta el queso de 9 meses de maduracin ya sea como clulas enteras como lisadas, evidencia el rol de dicho fermento en la fase de acidificacin de la cuajada como en la maduracin del queso. El desarrollo y la presencia de clulas enteras de NSLAB como L. rhamnosus y P. acidilactici subrayan el aporte de la leche cruda y del ambiente de produccin a la definicin del ecosistema microbiano del GP y por consiguiente a las caractersticas del producto final.
Servicio Antgenos y Antisueros del Instituto Nacional de Produccin de Biolgicos, ANLIS Carlos G. Malbrn. La diversidad gentica se determin por electroforesis en campo pulsado (PFGE) con las enzimas XbaI y BlnI segn el protocolo de la Red PulseNet Internacional. Los perfiles obtenidos fueron analizados con el programa BioNumerics (Applied Maths), aplicando el coeficiente de Dice y UPGMA. Para SE, se identificaron 13 patrones de XbaI-PFGE entre 164 aislamientos de origen humano, de alimentos y animales, de 16 provincias. El patrn ARJEGX01.0001 agrup 137 (83,5%) de los aislamientos, encontrndose en todas las provincias y tipos de muestra y a travs de los aos. Todos los brotes estudiados en este perodo (n=11) fueron causados por este subtipo, que present adems un mismo patrn con BlnI. Entre los subtipos restantes de XbaI-PFGE, 7 se encontraron slo en aislamientos de origen humano, 3 en aislamientos humanos y de alimentos y 1 en alimentos. Para STM, se identificaron 94 patrones de XbaI-PFGE entre 543 aislamientos de 16 provincias. Se encontraron tres patrones predominantes, distribuidos en todas las provincias: ARJPXX01.0007, con 32 aislamientos (5,9%); ARJPXX01.0065, con 43 (7,9%) y ARJPXX01.0194, con 19 (3,5%). Estos dos ltimos estuvieron asociados a dos brotes cada uno. De los 94 patrones, 30 se identificaron en los cinco aos, mientras que el resto slo se presentaron en alguno de los aos. Los aislamientos de STM mostraron una alta diversidad gentica. En el caso de SE, la clonalidad de esta serovariedad es conocida mundialmente y se identific tambin en el pas. La Base Nacional de PFGE de Salmonella spp. crece continuamente y el anlisis de subtipos circulantes y su distribucin provee una herramienta fundamental para la vigilancia basada en el laboratorio, permitiendo identificar cepas emergentes, detectar y confirmar brotes, fuentes de infeccin y vas de transmisin. La aplicacin de los protocolos estandarizados de la Red PulseNet permite adems comparar los subtipos circulantes en el pas con aquellos identificados en otros pases, para la vigilancia de Salmonella spp. a nivel global.
O5 - 7821 EFECTO DE INTERMEDIARIOS BIOSINTETICOS SOBRE LA PRODUCCION DE VITAMINA B12 EN BACTERIAS LACTICAS. VANNINI, MV; DE CARVALHO, K; FONT DE VALDEZ, G; TARANTO, MP; SESMA, F
Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA La cobalamina (vitamina B12 o CBL) es una macromolcula no polimrica cuya estructura contiene un anillo tetrapirrlico ligado a un tomo de cobalto, denominado anillo de corrina. Adems presenta una base como ligando axial inferior, el dimetilbenzaimidazol (DMB), y un ligando superior (adenosil), ambos ligados al tomo de cobalto. Su sntesis es compleja, e involucra al menos 25 enzimas diferentes y se halla restringida a ciertas especies bacterianas y arqueas. Estudios previos en nuestro laboratorio demostraron que Lactobacillus (Lb.) reuteri CRL 1098 es capaz de producir cobalamina (y su variante pseudo-CBL) y se caracteriz el opern Cob involucrado en su sntesis. Asimismo los extractos celulares (EC) de Lb. curvatus CRL 1000, Lb. coryniformis CRL 1001 y Lb. murinus CRL 1104 presentaron actividad de tipo cobalamina. En base a los resultados previos, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de varios intermediarios de la va biosinttica de B12 en su produccin, por las diferentes cepas de lactobacilos previamente mencionados. Se evalu la produccin de CBL por las cepas lcticas CRL 1098, CRL 1000, CRL 1001 y CRL 1104, en presencia de diferentes precursores de su sntesis: ac. aminolevulinico (ALA) (25ng/ul), porfobilingeno (25ng/ul), uroporfiringeno III (25ng/ul), CoCl2 (25ng/ul), DMB (20ng/ul) y O-fosfotreonina (50ug/ul) y en medios de cultivo libres de la vitamina. Una estimacin del contenido en B12 se llev a cabo inicialmente mediante un ensayo biolgico utilizando la cepa mutante en la enzima metionina sintasa independiente de cobalamina, Salmonella enterica serovar Typhimurium AR2680 (metE cbiB) y a continuacin se cuantific el nivel de la vitamina obtenida en cada una de las condiciones ensayadas empleando un inmunoensayo enzimtico (RIDASCREEN-FAST Vitamin B12, R-Biopharm). Todos los ensayos fueron realizados por triplicado. Los resultados indican que Lb. reuteri CRL 1098 y Lb. coryniformis
O4 - 27469 VIGILANCIA DE ENFERMEDADES DE TRANSMISIN ALIMENTARIA BASADA EN LABORATORIO: BASE DE DATOS NACIONAL DE SUBTIPOS DE Salmonella spp. CAMPOS, J; PICHEL, M; CAFFER, MI; BINSZTEIN, N
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS Carlos G. Malbrn Salmonella spp. es uno de los agentes causales de enfermedades de transmisin alimentaria ms frecuentes del mundo. El uso de tcnicas de subtipificacin molecular permite identificar grupos de aislamientos relacionados, para la deteccin y confirmacin de brotes desde el laboratorio. En el marco de la Red PulseNet Amrica Latina y Caribe se ha establecido en Argentina la Base Nacional de Subtipos de Salmonella spp., con 1019 aislamientos de 2005 a 2010. En el Laboratorio Nacional de Referencia se realiza la subtipificacin de Salmonella enterica ser. Typhimurium (STM) y S. enterica ser. Enteritidis (SE), junto con una seleccin de aislamientos de otras serovariedades menos frecuentes. El objetivo de este trabajo es presentar la relacin gentica y distribucin de subtipos de STM y SE circulantes en Argentina entre 2005 y 2010 contenidos en la Base de Datos Nacional. Los aislamientos fueron serotipificados siguiendo el esquema de Kauffmann-White, con antisueros provistos por el
CRL 1001 presentan los mayores niveles de produccin de cobalamina (25-35 ug/L y 20-30 ug/L respectivamente) y con relacin a los intermediarios, se observ que la adicin de Ofosfotreonina increment la produccin de la vitamina en ambas cepas, mientras que el agregado de ALA y CoCl2 afectaron positivamente la produccin de este compuesto por CRL 1098. El porfobilingeno tuvo un efecto negativo en la sntesis de esta vitamina para ambas cepas. Los dems intermediarios no presentaron efectos significativos sobre la biosntesis de esta vitamina. Las cepas Lb. murinus CRL 1104 y Lb. curvatus CRL 1000 presentaron valores de B12 entre 0,5 y 2 ug/L. No se observ diferencia significativa en la produccin de vitamina B12 con el agregado de los intermediarios ensayados, lo cual podra deberse a los bajos niveles en la produccin. En vista de los resultados expuestos, podemos concluir que Lb reuteri CRL 1098 y Lb coryniformis CRL 1001 son cepas potencialmente aplicables en el desarrollo de alimentos bio-enriquecidos en vitamina B12.
presentan un desafo por la magnitud de la prevalencia y la importancia que adquiere este patgeno en Salud Pblica.
O7 - 28008 Lactobacillus kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens DE GRNULOS DE KFIR ARGENTINOS. AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN REOLGICA DEL PRODUCTO FERMENTADO. HAMET, MARIA FERNANDA(1,2); LONDERO, ALEJANDRA(1); PIERMARIA, JUDITH(1,2); GARROTE, GRACIELA LILIANA(1,2); ABRAHAM, ANALIA GRACIELA(1,2)
(1) Centro de Investigacin y Desarrollo en Criotecnologa de Alimentos. (2) Facultad de Ciencias Exactas, UNLP El grnulo de kefir est constituido en un 8 % por kefiran, un exopolisacrido (EPS) producido por Lactobacillus kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens. Este EPS posee propiedades funcionales comprobadas, acta como gelificante, espesante y forma pelculas comestibles. Adems posee capacidad de proteger el epitelio y actividad inmunomodulatoria. El aislamiento de Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens es dificultoso ya que es anaerobio estricto y de crecimiento lento. El objetivo del trabajo fue aislarlo de grnulos de kefir argentinos y analizar las propiedades reolgicas de sus cultivos en leche. La presencia del Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens en 9 grnulos de kefir se analiz mediante electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE). Se extrajo ADN de grnulos de kefir y de las cepas de referencia Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens JCM 6985 y subsp. kefirgranum JCM 8572 y se amplific con los oligunucletidos sintticos 518r y GC-338f. Los productos obtenidos fueron analizados por DGGE (urea/formamida 40-60%, 16 horas, 100 Voltios y 60 C). Las bandas coincidentes con la cepa JCM 6985 fueron cortadas, amplificadas y secuenciadas. Luego, se procedi al aislamiento mediante tres tcnicas de disgregacin de los grnulos: ruptura con ultraturrax, congelamiento y corte mecnico y disolucin del grnulo en agua a 40 C. A partir de cada una de las suspensiones se realizaron aislamientos directos y con previo enriquecimiento (MRS pH 5 en anaerobiosis). Se obtuvieron 23 aislados que fueron caracterizados mediantes coloracin de Gram, presencia de catalasa, crecimiento en leche, produccin de gas a partir de glucosa y perfil de protenas totales. En base a los perfiles de protenas se construy un dendrograma en el cual 8 aislados provenientes de los grnulos AGK1, 2, 3, 5 y 6 agruparon con el microorganismo buscado. Su identidad se confirm mediante DGGE, secuenciacin y contraste con una base de datos. Como resultado de su secuenciacin se obtuvo una homologa de 98 a 100% con Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens. La distancia relativa recorrida por ambas susbespecies en los perfiles de DGGE es diferente, mostrando todos los aislados un perfil equivalente a Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens. La evaluacin reolgica de las leches fermentadas se realiz en un remetro Haake Rheostress 600 en modo rotacional. Todas presentaron un comportamiento pseudoplstico con importantes reas de histresis. Los valores de viscosidad aparente a 300s-1 variaron entre 17,82 1,05 y 35,96 10,15 mPa.s y las reas de histresis entre 745,2 35,64 y 1861 613,77 Pa/s. Slo dos de las cepas presentaron viscosidad equivalente a la cepa de referencia. Es importante destacar que es la primera vez que se aisla Lb. kefiranofaciens subsp. kefiranofaciens de grnulos de kefir argentinos que son capaces de fermentar la leche obtenindose productos con diferentes caractersticas reolgicas. Estas cepas podran presentar potencialidad para su aplicacin en nuevos desarrollos tecnolgicos.
O6 - 27871 PREVALENCIA Y DIVERSIDAD DE Escherichia coli NO-O157 EN ARGENTINA 2000-2008. CARBONARI, C; CHINEN, I; DEZA, N; MILIWEBSKY, E; BASCHKIER, A; MANFREDI, E; D ASTEK, B; RIVAS, M
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS Carlos G. Malbrn Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patgeno emergente, asociado a enfermedad severa en humanos. STEC O157:H7 es el serotipo prevalente a nivel mundial, siendo en Argentina el principal agente causante de sndrome urmico hemoltico (SUH). Sin embargo, existen ms de 200 serotipos descriptos, y en nuestro pas cepas de diferentes serotipos noO157 producen alrededor del 30% de los casos de SUH que se registran por ao. Los serogrupos O26, O103, O145, O111 y O121 han sido reconocidos como un grupo de riesgo para la salud pblica ya que poseen el mismo potencial patognico que O157. Con el fin de destacar la importancia de los serogrupos de relevancia en el pas, se compararon todos los patrones de cepas STEC no-O157 obtenidos por electroforesis de campo pulsado e incorporados a la Base de Datos Nacional (n=1203) entre los aos 2000 y 2008. En total, ms de 50 serogrupos se encuentran incorporados a la Base. Los cinco serogrupos prevalentes fueron los siguientes: a) O145, con 157 aislamientos que presentaron un 64,9% de similitud. El serotipo prevalente fue O145:NM (95,5%) y en menor frecuencia a O145:HNT y O145:H25, con el mismo perfil de virulencia stx2/eae/ehxA. El 97,5% de los aislamientos correspondieron a casos clnicos, y el resto a reservorios, algunas cepas de ambos orgenes presentaron el mismo patrn. En Argentina, STEC O145 est generalmente asociado a casos espordicos. Sin embargo, se describieron dos brotes y un conglomerado de casos asociados a O145:NM. b) O8: con 58 aislamientos con 65% de similitud. El serotipo ms frecuente fue O8:H19 (72,4%), seguido de O8:H16, O8:H21, O8:H25, O8:H7 y O8:HNT. Los aislamientos fueron de origen bovino, alimentos y humanos. Los perfiles de virulencia en orden de frecuencia fueron stx1/stx2/ ehxA/saa, stx1/stx2/ehxA y stx2/ehxA. c) O26 con 46 aislamientos con 65,7% de similitud. El principal serotipo fue O26:H11 (65,2%), seguido por O26:HNT, O26:NM, O26:H2, y O26:H21. El perfil gentico ms frecuente fue stx1/eae/ehxA. Algunas cepas aisladas de casos de SUH portaron un perfil poco frecuente: stx2/ stx2c(vh-a)/eae/ehxA. Los aislamientos fueron de origen clnico, alimentos y bovinos. Se describi un brote asociado a O26:H11. d) O113: con 36 aislamientos con 69,1% de similitud. El serotipo prevalente fue O113:H21 (83%) seguido por O113:NM, O113:HNT y O113:H7. Los aislamientos fueron de origen bovino, alimentos y casos clnicos incluyendo SUH. El perfil gentico ms frecuente fue stx2/ehxA/saa. e) O103 con 35 aislamientos con 70,5% de similitud. El principal serotipo fue O103:NM (74%) y le siguen O103:H2, O103:H25 y O103:HNT. Los aislamientos son de origen bovino y casos clnicos incluyendo SUH. El perfil gentico ms frecuente fue stx1/eae/ehxA. Se describi adems un brote asociado a O103:H2. Los resultados obtenidos hasta el momento en cuanto a deteccin en enfermedad severa, reservorios y alimentos, indicaran que en Argentina los serotipos STEC no-O157 re-
O8 - 28068 FACTORES DE VIRULENCIA ASOCIADOS A Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA. ANGEL VILLEGAS, N(1); POLIFRONI, R(2); ETCHEVERRIA, AI(2); PADOLA, NL(2); PARMA, AE(2); ALBESA, I(1); BECERRA, MC(1); PARAJE, MG(1)
(1)Departamento de Farmacia. Facultad de Ciencias Qumicas, UNC. (2)Laboratorio de Inmunoqumica y Biotecnologa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires
Introduccin: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) se asocia a brotes de diarrea, colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH). La patogenicidad est asociada con varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la produccin de la toxina Shiga (vt1, vt2). Las cepas ms virulentas de STEC adems poseen otros como enterohemolisina (ehxA) e intimina (eae). Un nuevo factor de virulencia podra ser la capacidad que poseen las STEC para formar biofilms, lo cual se encuentra menos caracterizado. Entre los factores importantes para la formacin del biofilms se pueden mencionar a la fimbria tipo I curlina. Objetivo: Determinar genotpica y fenotpicamente la presencia de distintos factores de virulencia en cepas productoras de toxina Shiga aislada de pacientes con SUH. Materiales y Mtodos: En este estudio se analizaron ocho cepas clnicas (siete E.coli O157:H7 y una O111:H-) provistas por Hospitales peditricos de Crdoba y una cepa de referencia (EDL 933). Anlisis Genotpico: la presencia de los genes que codifican para los factores de virulencia (vt1, vt2, ehxA, eae) y para la protena curlina (csgD, csgA y crl) se estudiaron mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Anlisis Fenotpico: mediante un Inmunoensayo ptico (OIA SHIGATOX) se estudi la expresin de las toxinas Shiga 1 y/o 2. La expresin de la curlina se analiz mediante Rojo Congo. La capacidad de formar biofilms de las cepas de E.coli se determin mediante la adhesin a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloracin con cristal violeta determinando la densidad ptica a 595 nm. Resultados: Mediante el anlisis genotpico se observ la presencia de los genes vt1, vt2, ehxA, eae, csgD, csgA y crl en todas las cepas estudiadas, excepto en la E.coli O111 que no present el gen vt2 que codifica para la toxina Shiga 2. En cuanto al anlisis fenotpico, todas las cepas expresaron ambas toxinas en el sobrenadante de cultivo, excepto E.coli O111 (solo Shiga 1). Cuando se realiz la determinacin de curlina se apreci el desarrollo de colonias lisas y rosadas, interpretndose este resultado como negativo. Todas las cepas estudiadas fueron dbiles formadoras de biofilms, presentando valores entre 0,15 y 0,25 de densidad ptica. Conclusiones: las cepas regionales aisladas de pacientes con SUH presentaron la co-expresin de diversos factores de virulencia, tanto genotpica como fenotpicamente. En cuanto a la capacidad de las cepas de formar biofilms, si bien se observ la presencia de los genes que codifican para la fimbria tipo I, no se obtuvieron las caractersticas colonias negras indicativas de la expresin de la protena. Asociado a lo antes mencionado, todas las cepas en estudio mostraron una dbil formacin de biofilms in vitro lo que parece indicar que los genes que codifican la formacin necesitan condiciones in vitro no requeridas para que otros factores de virulencia se expresen.
niveles de expresin de diversas protenas ABC. Materiales y Mtodos: Se transfectaron transitoriamente clulas HeLa y Huh7 con plsmidos que codificaban para la protena X salvaje y mutada (K130M/V131I) de HBV. Al cabo de 24 h se les evalu mediante RT-PCR en tiempo real la variacin en la expresin relativa de los genes que codifican para las protenas ABC BCRP, MDR1, MRP1 y MRP2. La deteccin de la expresin de dichas protenas se realiz mediante Western blot utilizando anticuerpos monoclonales especficos. Resultados: En las clulas HeLa se evidenci: 1) una disminucin en la expresin del gen mrp1 debido a la expresin de la protena X salvaje; 2) un incremento en la expresin de los genes bcrp y mrp2 debido a la expresin de la protena X mutada; 3) No se document variacin en la expresin de mrp1 debido a la protena X mutada, ni de bcrp y mrp2 debido a la protena X salvaje. En las clulas Huh7 se evidenci: 1) un aumento en la expresin de los genes mrp1 y mrp2 debido a la expresin de la protena X mutada; 2) un incremento en la expresin del gen bcrp debido a la expresin de la protena X salvaje; 3) no se observ variacin en la expresin del gen mdr1 por la protena X salvaje ni por la mutada, ni de bcrp por la mutada ni de mrp1 y mrp2 por la salvaje. Los resultados en el Western blot se correlacionaron con los de RT-PCR en tiempo real. Conclusiones: Al estudiar el efecto de las protenas X salvaje y mutada sobre los niveles de ARNm correspondientes a los genes bcrp, mdr1, mrp1 y mrp2 por RT-PCR en tiempo real, se observ un comportamiento dependiente de la estirpe celular estudiada (hepatocitaria vs epitelial) y de la naturaleza salvaje o mutada de la protena X. Merece especial consideracin la observacin de un aumento en los niveles de expresin de los genes mrp1, mrp2 y bcrp en clulas Huh7, con potenciales nuevas implicancias en la oncognesis heptica y en la resistencia a drogas antivirales y antitumorales.
O10 - 27686 ORIGEN Y DIVERSIFICACIN DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C GENOTIPO 2C EN CRDOBA, REPBLICA ARGENTINA. CULASSO, ACA(1); RE, V(2); CONTINGIANI, M(2); CAMPOS, RH(1)
(1) Ctedra de Virologa Fac. de Farmacia y Bioqumica, UBA. (2) Instituto de Virologa Dr. J. M. Vanella Fac. Ciencias Mdicas, UNC La infeccin crnica con el virus de la hepatitis C (HCV) est asociada a patologas hepticas severas. El HCV se clasifica taxonmicamente en genotipos 1 a 6 y subtipos a, b, c, etc. Los HCV-1, 2 y 3 son cosmopolitas. Los subtipos de HCV-2 son comunes en frica occidental y en el sur de Europa. El HCV-2c es ubicuo como genotipo minoritario pero en Italia es el segundo en prevalencia (despus del 1b). En la provincia de Crdoba se detecta HCV-2c en 50% de las infecciones e incluso en Cruz del Eje es el principal genotipo (90%). El objetivo de este trabajo es el estudio del origen y la diversificacin del HCV-2c en la provincia de Crdoba utilizando anlisis filogenticos y de coalescencia. Se analizaron 92 muestras de suero de personas de Cruz de Eje (positivas para HCV) en un estudio epidemiolgico previo (ao 2004) y 53 muestras de suero de pacientes concurrentes al Servicio de Virologa del Instituto Dr J. M. Vanella desde distintos puntos de la provincia de Crdoba. A partir del ARN viral del suero se realiz una reaccin de RT-PCR anidada para amplificar un fragmento de 367 pb de la regin NS5B que luego fue secuenciado de manera directa. Anlisis filogenticos: las secuencias obtenidas y otras provenientes de frica y Europa (Genbank) se analizaron por mtodos de Distancia (MEGA 4), Mxima Verosimilitud (PhyML 3.0) y Parsimonia (TNT). Anlisis de Coalescencia: se infiri por mtodos Bayesianos la edad del ancestro comn ms reciente y la demografa del HCV-2c (BEAST 1.4.8) calibrando un reloj molecular relajado con una tasa de 5x10-4 sustituciones por sitio por ao. Como resultado, los tres mtodos filogenticos reprodujeron una topologa en donde todas las muestras cordobesas junto con las europeas (Francia e Italia, principalmente) y las africanas conforman un nico grupo sin subgrupos internos. El anlisis de coalescencia se realiz sobre tres grupos de secuencias: Cruz del Eje (CdE), otras ciudades cordobesas (OCC) y Francia. La edad estimada de los ancestros comunes
VIROLOGA
O9 - 27088 EFECTO DE LA PROTENA X DEL VIRUS HEPATITIS B (HBV) SOBRE LA SUPERFAMILIA DE TRANSPORTADORES ABC: UN NUEVO ROL EN LA PATOGNSIS VIRAL. CUESTAS, ML(1); RIVERO, C(1); ROSSO, N(2); GENTILE, E(3); CASTILLO, A(3); MINASSIAN, ML(1); ANDREETTA, A(1); TRINKS, J(1); TIRIBELLI, C(2); OUBIA, JR(1); MATHET, V(1)
(1) CONICET, (2) Centro Studi Fegato, (3) Laboratorio De Hepatitis Introduccin: Los carcinomas hepatocelulares (HCC) representan el 4% de los tumores de todo el mundo siendo la quinta causa de cncer en el hombre. Cerca del 80% de los pacientes con este cncer se encuentran crnicamente infectados con HBV. La protena X de HBV desempea un rol principal en la oncognesis heptica. Las mutantes K130M y V131I exhiben una actividad transactivadora mayor que la salvaje, contribuyendo significativamente a la hepatocarcinognesis. Las protenas ABC son bombas transmembrana que transportan sustratos en contra del gradiente de concentracin, utilizando la hidrlisis de ATP. Su sobreexpresin est asociada a la resistencia a mltiples drogas, a la inhibicin de la va intrnseca de la apoptosis y al cncer. Objetivo: Analizar el efecto de la expresin de las protenas X salvaje y mutada de HBV sobre los niveles de ARNm y sobre los
para los tres grupos fue de ~150 aos (~1860 D.C.) y en todos los casos el modelo demogrfico present su fase exponencial entre 1890 y 1950. La filogenia sugiere la ausencia de diversidad asociada al espacio geogrfico (no hubo subgrupos de secuencias de CdE, de OCC ni de Francia o de Italia), compatible con un proceso de diversificacin reciente. El crecimiento exponencial observado en la demografa de los tres grupos de secuencias analizados coincide con la emergencia mundial de otras infecciones, como HCV-1b y con el proceso de globalizacin de principios del siglo XX (transfusiones, uso de inyectables, migraciones masivas, trnsito, drogadiccin). El anlisis filogentico y de coalescencia, la epidemiologa y la historia inmigratoria sugieren que los HCV-2c detectados en CdE y OCC seran el resultado de la introduccin del virus desde Italia durante el proceso migratorio de 1880-1920. Luego de la migracin de los ancestros, se produjo un fenmeno de diversificacin simultneo en cada espacio geogrfico como consecuencia del proceso de globalizacin. Sin embargo, se observ la falta de identidad geogrfica debido a la intensa corriente migratoria Italia-Argentina o a que an no se ha cumplido el tiempo necesario para producir este fenmeno.
ca, indujo respuestas inmunes humorales especficas de tipo IgA en muestras de lavados nasales y broncopulmonares y de tipo IgG en muestras de suero. Los virus recombinantes MVA-gDs pueden ser utilizados como inmungenos en animales de experimentacin con el propsito de desencadenar respuestas inmunes especficas a nivel sistmico y de mucosas. En el futuro, su utilizacin como vacuna contra el virus BoHV-1 se evaluar en bovinos.
O12 - 27596 DETERMINACIN DE LINAJES MITOCONDRIALES EN MUJERES CAUCSICAS RESIDENTES DE LA PROVINCIA DE MISIONES Y SU RELACIN CON LA INFECCIN POR VIRUS PAPILOMA HUMANO (HPV). BADANO, INES(1); RUBINSTEIN, SAMARA(2); SCHURR, THEODORE(2); PICCONI, ALEJANDRA(3); CAMPOS, RODOLFO(4); LIOTTA, JAVIER(1)
(1) Laboratorio de Biologa Molecular Aplicada. Universidad Nacional de Misiones; (2) Department of Anthropology, University of Pennsylvania. EEUU; (3) Servicio Virus Oncognicos, INEI-ANLIS Dr. Carlos Malbran; (4) Ctedra de Virologa, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA. La relacin entre el origen tnico, la infeccin genital por virus papiloma humano (HPV) y el desarrollo del cncer cervical ha sido sugerida por algunos autores. Estudios epidemiolgicos en comunidades multitnicas de los EEUU atribuyeron estas diferencias a la baja cobertura mdica en minoridades socio-culturales (principalmente afroamericanos y amerindios). Sin embargo estos trabajos clasificaron las pacientes en base a los apellidos, la coloracin de la piel y la auto-denominacin tnica. El valor predictivo de estas caractersticas puede ser bajo en poblaciones mezcladas, como las latinoamericanas. Los marcadores moleculares ofrecen una herramienta til para identificar el componente tnico de los individuos, siendo el ADN mitocondrial (ADNmt) uno de los ms ampliamente utilizados. La provincia de Misiones posee una de las tasas de mortalidad por cncer ms altas del pas y una prevalencia de infeccin por HPV del 40% para poblacin femenina asintomtica. Estas diferencias han sido atribuidas a un menor acceso al sistema de salud por parte de las mujeres de la regin, y a sus rasgos socio-culturales y demogrficos especiales. Sin embargo las caractersticas genticas no han sido exploradas. Con el fin de identificar potenciales marcadores moleculares de susceptibilidad, se procedi a la caracterizacin gentica (ADNmt) de mujeres caucsicas de la regin. Se analizaron 140 mujeres (66 infectadas y 74 negativas) que no manifestaron ascendencia indgena. Los linajes mitocondriales se determinaron por PCR y secuenciacin de la (HVS-1) de la mitocondria. Como blanco de amplificacin se emple ADN extrado de cepillados cervicales. El posible rol del ADNmt como factor de riesgo en la infeccin por HPV fue establecido mediante anlisis de OR. Resultados: Los linajes mitocondriales indicaron un patrn tri-hbrido para la muestra, con un 72% de aporte amerindio; 23% europeo y 5% africano. Las infecciones por HPV fueron ms frecuentes en mujeres portadoras de ADNmt amerindio comparadas con aquellas que presentaban ADNmt europeo (OR 1.8 IC95% 0,84). Los linajes africanos fueron excluidos del anlisis debido a sus bajas frecuencias. Una de las caractersticas ms significativas de Misiones es su composicin poblacional multitnica; esto se atribuye a factores diversos, entre ellos su ubicacin geogrfica, la presencia de indgenas Guaranes, las sucesivas corrientes inmigratorias europeas y ms recientemente los fenmenos de migraciones internas y con pases vecinos. Este escenario se constituye en un modelo epidemiolgico particular, que permite evaluar marcadores genticos asociados a su poblacin. En este contexto, la frecuencia de linajes amerindios de ADNmt ha sido mayor que la reportada para ciudades como La Plata y Crdoba (40%). La potencial asociacin entre el linaje amerindio y la infeccin cervical por HPV deber ser confirmada mediante un diseo de casos y controles. Financiado por ANPCyT (PICTR 311/2).
O11 - 27276 DESARROLLO DE UN CANDIDATO VACUNAL CONTRA HERPESVIRUS BOVINO BASADO EN UN VIRUS VACCINIA ANKARA RECOMBINANTE. FERRER, M FLORENCIA (1,2); DEL MEDICO ZAJAC, M PAULA (1); CALAMANTE, GABRIELA(1)
(1) Instituto de Biotecnologa CICVyA-INTA Castelar, (2) CONICET Los poxvirus se utilizan eficientemente como vacunas seguras y efectivas contra enfermedades infecciosas. En particular, los poxvirus recombinantes se evaluaron en numerosos ensayos clnicos de vacunas contra el cncer, malaria, tuberculosis y sida. La cepa MVA (virus vaccinia Ankara modificado) es una cepa del virus vaccinia altamente atenuada, que no replica en la mayora de las clulas de mamferos, siendo un buen candidato para el desarrollo de vacunas a virus vivo no replicativo. El fenotipo atenuado de MVA es el resultado de numerosas mutaciones que particularmente afectaron a las protenas que interactan con el hospedador, a los genes con motivos tipo anquirina y a algunas protenas estructurales. La infeccin con herpesvirus bovino de tipo 1 (BoHV-1) puede producir conjuntivitis, neumona, desrdenes genitales, abortos y una infeccin en el tracto respiratorio superior denominada fiebre del transporte. Para controlar las enfermedades causadas por BoHV-1 es necesario disponer de vacunas efectivas y que permitan diferenciar animales naturalmente infectados de animales vacunados. El objetivo de este trabajo es la evaluacin de un inmungeno basado en MVA capaz de expresar in vivo la glicoprotena D de BoHV-1. Primeramente, se construy un vector de transferencia (VT) que porta las secuencias de inters (genes gDs y uidA bajo regulacin de promotores tempranos de poxvirus) flanqueadas por regiones correspondientes al gen viral MVA086R. Los virus MVA-gDs se obtuvieron por recombinacin homloga in vitro entre el VT y el genoma viral, y se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato X-Gluc. Mediante anlisis molecular se confirm la correcta expresin, antigenicidad y N-glicosilacin de la glicoprotena D expresada a partir de dichos virus. posteriormente, se evalu la capacidad inmunognica de los virus MVAgDs en animales de experimentacin, determinando la presencia de anticuerpos especficos anti-gD mediante ELISA. En el modelo de ratn, se observ que los virus MVA-gDs desencadenaron una respuesta inmune humoral especfica que se mantuvo en niveles similares durante un perodo de siete meses. Adems, se demostr que la sntesis de novo de la glicoprotena D a partir del vector viral no replicativo MVA-gDs fue la responsable de la induccin de dicha respuesta. La inoculacin de conejos con MVAgDs desencaden una respuesta inmune humoral especfica observndose la mxima respuesta a los 9 das post dosis refuerzo. En un ensayo de desafo de conejos con BoHV-1, se observ que la inmunizacin por va intramuscular con virus MVA-gDs disminuy la cantidad de animales que excretaron el virus de desafo. Finalmente, se demostr que la inmunizacin de ratones por va intranasal con virus MVA-gDs, combinado con toxina colri-
O13 - 27600 ACTIVIDAD ANTI-HIV DE NUEVAS PRODROGAS DE DIDANOSINA (DDI). TURK, GABRIELA(1); DECANDIA, CRISTIAN(1); RAVETTI, SOLEDAD(2); GUALDASI, MARIA SOLEDAD(2); PAMPURO, SANDRA(1); BRION, MARIA CRISTINA(2); SALOMON, HORACIO(1)
(1) Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Fac de Medicina (UBA), Bs As. (2) FCQ, UNC. Introduccin. El diseo de nuevos inhibidores del HIV es un objetivo de inters, considerando el problema de la toxicidad y resistencia a los antiretrovirales existentes. Debido a que el ddI (2,3-dideoxiinosina) presenta algunos efectos indeseados tales como bajo grado de unin a protenas plasmticas (< 5%) y un tiempo de vida media de eliminacin de 1,4 hs., se plante el diseo de nuevos 5-O-carbonatos de ddI. De este modo, se esperan propiedades farmacocinticas ms favorables que garantizarn una concentracin adecuada del antiviral en el sitio de accin. Por ello, se sintetizaron prodrogas de ddI por conjugacin del grupo 5-OH de ddI con n-butanol, n-pentanol y n-hexanol, utilizando N,N-carbonildiimidazol (CDI) en condiciones anhidras. MTODOS. Clulas: se utilizaron clulas mononucleares de sangre perifrica (PBMC) activadas, cultivadas en RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino. Virus: stock de HTLVIIIB obtenido a partir de clulas H9 crnicamente infectadas. Se infectaron PBMC con una moi de 6,45x103 TCID50/106 clulas. Al da 7 se cosech el sobrenadante y se evalu la produccin de antgeno p24 mediante el ensayo de ELISA para calcular el IC50. Los ensayos de citotoxicidad se realizaron sobre clulas no infectadas, mediante recuento de clulas viables, para calcular la CCID50. Finalmente se calcul el ndice de Selectividad (IS=CCID50/ IC50). RESULTADOS. Se obtuvieron nuevas prodrogas de ddI con buenos rendimientos. Tanto los derivados obtenidos como su precursor, fueron caracterizados por tcnicas de RMN tales como COSY (homo y heteronucleares) y DEPT. Los derivados de ddI estudiados mostraron, en PBMC, poseer un IS similar al de la droga madre excepto el derivado ddIPenta el cul mostr un IS 100X mayor, principalmente mediado por su baja toxicidad.
R H -O-C(O)-(CH2)-CH3 -O-C(O)-(CH2)3-CH3 -O-C(O)-(CH2)4-CH3 -O-C(O)-(CH2)5-CH3 -O-C(O)-(CH2)6-CH3 Compuesto ddI ddI-Eta ddI-Buta ddI-Penta ddI-Hexa ddI-Hepta
Diagnostics; rango de deteccin: (2,7x10-2,7x108 copias/ml) como medida de la capacidad replicativa. Adicionalmente se dispuso de parmetros bioqumicos de funcionalidad heptica (ALT, ALT, GGT). El anlisis de la heterogeneidad de cuasiespecies del HBV a nivel del gen pol implic la extraccin de DNA viral mediante lisis alcalina, amplificacin genmica por PCR, con posterior clonado y secuenciacin nucleotdica de 20 clones. Cada una de las secuencias nucleotdicas se inspeccion visualmente para verificar la presencia de mutaciones de resistencia a anlogos ncleosidos. Resultados. En ausencia de presin por IFN o drogas antivirales, no se observaron mutaciones primarias de resistencia. Tras tres aos de exposicin a LMV, se detect la mutante M204I presente en todos los clones de la poblacin a expensas de una ostensible prdida de la capacidad replicativa (carga viral: 5,4x10 copias/ml). Posteriormente y concomitante con el surgimiento de la mutacin L180M mayoritaria y sostenidamente en el tiempo, se advierte una recuperacin del fitness viral (carga viral: 4,5 x105 copias/ml). Ambas mutaciones (M204I, L180M) se establecen a pesar del cambio en la terapia. No se evidenciaron mutaciones primarias de resistencia a ADF, ETV o TDF. Desde la muestra basal, se observa la mutacin L217R en todas las cuasiespecies virales. No se evidencia la presencia de mutaciones primarias de resistencia a ADV, ETV o TDF ante su administracin. La expresin del HBeAg evidenci conversin/ reversin hacia/desde anti-HBe con fluctuaciones paralelas en los niveles de carga viral, que persisten detectables. CONCLUSIONES. Las mutaciones primarias a LMV M204I/L180M se establecieron en la poblacin del HBV an luego de interrumpido su uso. Se identifica la presencia de la mutacin L217R recientemente asociada a resistencia a adefovir, irrespectivamente de la presin de seleccin. El estudio de la dinmica de cuasiespecies de HBV por ms de una dcada deja ver el impacto la composicin de cuasiespecies de HBV ante la presin ejercida por el tratamiento antiviral y sus implicancias en el perfil serolgico y capacidad replicativa viral.
O15 - 27933 DETECCIN DE LOS PRIMEROS PERODOS DE VENTANA EN DONANTES DE SANGRE CON EL ENSAYO PROCLEIX ULTRIO. ACEVEDO, ME; OTERO, A; FRANCESCHI, V; PALACIOS, G; NEIROT, R; RODRIGUEZ, E; FERNANDEZ, RJ
F. Hemocentro Buenos Aires Introduccin. La deteccin de cidos nucleicos virales en donantes de sangre por NAT disminuye el riesgo residual, acortando el perodo de ventana serolgica. En nuestro centro se testean por NAT para HIV y HCV todas las unidades a transfundir desde junio de 2004. A partir de septiembre de 2008 comenzamos a testear las unidades con el ensayo Procleix Ultrio de Chiron que detecta simultneamente HIV-1, HCV y HBV. Objetivo. Detectar y descartar precozmente las unidades de sangre de donantes con viremia para HIV, HCV o HBV con pruebas serolgicas no reactivas. Materiales y Mtodos. Los ensayos de NAT HIV-1/HCV/ HBV se realizaron en muestras de plasma de donantes en paralelo con las tcnicas de serologa. La metodologa NAT utilizada detecta simultneamente ARN de HIV-1 y HCV; y ADN de HBV en plasma humano. La amplificacin de cidos nucleicos se realiz por TMA (transcription mediated amplification) con reactivos Procleix Ultrio de Chiron. Todas las unidades reactivas por NAT fueron estudiadas con ensayo discriminatorio para identificar el virus presente en la muestra. El ensayo de carga viral de HBV se llev a cabo en el Hospital Italiano de Buenos Aires por el mtodo COBAS Taq Man HBV (Real Time). La carga viral de HIV se realiz en el Centro Nacional de Referencia para el SIDA con Versant HIV-1 RNA 3.0 ASSAY (bDNA) Bayer. Resultados. Desde la implementacin de Procleix Ultrio (Novartis-Chiron, USA) se testearon por NAT en nuestro centro 68.654 donantes, entre propios y derivaciones externas. Se obtuvieron en este perodo 5 unidades NAT reactivas con serologa no reactiva para los marcadores HBcAc, HBsAg, HCV y HIV/P24. Al realizar los test discriminatorios correspondientes se detectaron 3 unidades reactivas para HBV, 1 HCV y 1 HIV. Todas las pruebas serolgicas y moleculares fueron repetidas de bolsa de plasma obtenindose idntico resultado.. Slo pudimos realizar el seguimiento de dos
La introduccin de un grupo carbonato (alcoxicarbonilo), en nuclesidos activos, resulta de inters tanto por su utilidad como grupo protector como por la capacidad de otorgarle ventajas fisicoqumicas y farmacocinticas, lo que redundar en una mayor capacidad para atravesar membranas lipdicas y optimizar su llegada al receptor. El mejoramiento de estas propiedades es un aspecto fundamental en el diseo de nuevas prodrogas de compuestos farmacolgicamente activos.
O14 - 27662 DINMICA DE CUASIESPECIES A NIVEL DEL GEN DE LA POLIMERASA DEL VIRUS DE HEPATITIS B (HBV) TRAS 11 AOS DE SEGUIMIENTO EN UN PACIENTE CRNICAMENTE INFECTADO EXPUESTO A DIVERSAS ALTERNATIVAS TERAPUTICAS. CASSINO, L(1); BENETTI, S(2); FAY, F(2); TANNO, H(3); QUARLERI, J(1)
(1) Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Fac de Medicina (UBA), Bs As. (2) Centro de Diagnstico Mdico de Alta Complejidad (CIBIC), Rosario. (3) Servicio de Gastroenterologa y Hepatologa del Htal. Provincial de Centenario, Rosario. Introduccin. La infeccin por HBV es un proceso dinmico en el que diferentes variantes virales se seleccionan en respuesta a la presin ejercida por la terapia. Objetivo: Analizar la dinmica de cuasiespecies virales a lo largo de 11 aos (1998-2009) desde un paciente crnicamente infectado que recibi secuencialmente tratamiento con interfern (IFN) como monoterapia, luego se le adiciona lamivudina (LMV). Se reemplaza por adefovir (ADV) y, finalmente se trata con entecavir (ETV) solo y asociado a tenofovir (TDF). Mtodos. Se seleccionaron 4 muestras de suero colectadas a lo largo del perodo de estudio de un paciente con historia de infeccin por HBV, genotipo A2. Para cada punto de anlisis se determin la expresin del HBeAg (EIA, Roche) y, los niveles de carga viral plasmtica (COBAS TaqMan HBV, Roche
donantes NAT HBV reactivos y del donante NAT HIV reactivo. De los donantes HBV reactivos uno de ellos fue retesteado a los 17 das de la muestra ndice con un resultado HBsAg reactivo y HBcAc negativo. El otro donante a los 28 das tuvo serologa no reactiva, seroconvirtiendo recin 17 das despus, pero slo para HBcAc y HBsAc. Este donante fue vacunado para hepatitis B entre la primera y la segunda muestra. Las cargas virales de HBV fueron 30 UI/ml y 146 UI/ml respectivamente. La segunda muestra del donante NAT HIV reactivo fue no reactiva a los 7 das y la tercera fue reactiva a los 14 das con ELISA cuarta generacin HIV Ag/Ac. La carga viral de HIV fue de 297 copias/ml. CONCLUSIONES. A partir de estos casos detectados con viremia para HBV, HIV y HCV y serologa no reactiva, toma relevancia la importancia de la inclusin de NAT dentro del testeo de rutina de unidades a transfundir y la ampliacin del screening incluyendo el HBV para aumentar la seguridad transfusional. Al no tener registros anteriores en nuestro pas de HBV en ventana serolgica en donantes de sangre podemos concluir que son los primeros casos de perodo de ventana de HBV detectados en Argentina y que exitosamente se evit su transfusin gracias a las tcnicas de Biologa molecular a pesar de no existir normas para su implementacin en nuestro pas.
intersubtipo a nivel de la protena Vpu y la funcionalidad de la misma. Los cambios presentes en la variante recombinante intersubtipo BF de Vpu son suficientes para manifestarse a corto plazo como una ventaja biolgica durante la replicacin viral en clulas susceptibles, sugiriendo que cambios en su estructura podran desempear un papel fundamental en la diseminacin de una variante recombinante intersubtipo, como se observa en varias regiones del mundo, incluyendo Amrica del Sur.
BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICA

O17 27426 - Neisseria gonorrhoeae RESISTENTE A CIPROFLOXACINA EN ARGENTINA ENTRE 1996-2006: UNA COMPARACIN DE ANLISIS FENOTPICO Y GENOTPICO. GALARZA, P (1); VACCHINO, M (1); ENRIQUEZ, R(2); PAGANO, I(1); ACCARINO, C(1); OVIEDO, C(1); VAZQUEZ, J(2); RED, ITS(3)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas -INEI-ANLIS Dr. CG Malbrn, (2) Instituto de Salud Carlos III (ISCIII), (3) Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Gonococo (PROVSAG) En 1996 se detecta la 1 cepa con sensibilidad disminuida a ciprofloxacina (Cip). Durante los 10 aos posteriores fueron derivados por el PROVSAG 3837 aislamientos (ais) de los cuales 51 presentaron cambios en las regiones determinantes de resistencia a quinolonas (QRDR) mostrando un incremento paulatino, alcanzando el 8% en el ao 2006. El objetivo fue caracterizar los ais con reducida sensibilidad y resistentes a Cip derivados al CNR, entre 1996-2006 por mtodos fenotpicos y genotipicos de tipeo y describir la epidemiologa de la gonorrea con resistencia a Cip. Los ais fueron caracterizados por axotipo, serogrupo, sensibilidad antibitica, perfil plasmdico, N. gonorrhoeae multiantigen sequence typing (NG-MAST) y por secuenciacin de QRDRs para gyrA, parC, parE, y mtrR de la bomba de eflujo. En aquellos ais con CIM a Cip <1g/ml (n=6) se encontr una nica mutacin en gyrA; una sustitucin de un aminocido, de Asp95-Gly en aquellos ais con CIM de 0.12g/ml (n=4) y en los ais con CIM de 0.25g/ml (n=2) una sustitucin de Ser91-Phe. La presencia de dos mutaciones en gyrA con o sin alteraciones en parC pueden asociarse a valores de CIM>1. Las sustituciones ms frecuente en gyrA con 43 ais fueron Ser91-Phe y Asp95-Gly, de las cuales 23 contenan una mutacin en parC de Ser87-Arg con valores de CIM entre 2 y 32g/ml, seguida por 11 ais con una sustitucin de Asp86-Asn con valores de CIM entre 2 y 16g/ml. Cabe destacar que 9 ais con dos mutaciones en parC de Gly85-Asp y Ser87-Arg presentaron CIM entre 8 y 16g/ml. Las mutaciones en parC fueron encontradas nicamente en aquellas cepas conteniendo mutaciones en gyrA. Dos ais con mutaciones en gyrA Ser91-Tyr, Asp95-Asn mostraron una mutacin en parE Pro456-Ser sin mutaciones en parC. Se encontraron 28 ST, 16 no descriptos. Estos ltimos abarcan 24 ais (47%). Los ST ms prevalentes fueron el 225 (16%), 4444 (10%) y el 292 (8%). Considerando las regiones del pas, en la zona centro se detectaron 6 ST distribuidos en 10 ais; en Buenos Aires y CABA 16 ST en 22 ais; en el NEA un solo ais con ST caracterstico, todos propios de cada regin. Seis QRNG fueron beta-lactamasa positiva y presentaron el mismo perfil plasmdico 2,6+3,05+24,5 MDal distribuidos en 4 provincias. En la tabla siguiente se muestra la caracterizacin auxotipo/ serotipo (A/S) segn las distintas concentraciones inhibitorias.
A/S N (%) de aislamientos 5 (9,8) 17 (33,3) 3 (5,9) 18 (35,3) 8 (15,7) 51 (100) 0.125 N (%) de aislamientos con CIM (g/ml) a CIP 0.25 2 4 8 16 1 (20,0) 5 (29,4) 1 (33,3) 1 (5,6) 8 (15,7) 1 (20,0) 1 (5,9) 3 (17,6) 1 (33,3) 4 (22,2) 3 (16,7) 7 (13,7) 6 (11,7) 3 (60,0) 4 (23,5) 1 (33,3) 8 (44,4) 5 (62,5) 21 (41,2) 32 Total
O16 - 27938 EFECTO DE VARIACIONES ESTRUCTURALES DE LA PROTENA VPU DE HIV-1 SOBRE LA CAPACIDAD REPLICATIVA VIRAL. DE CANDIA, C; ESPADA, C; TURK, G; SALOMON, S; CAROBENE, M
Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Facultad de Medicina, UBA, Argentina Introduccin. La protena Vpu de HIV-1 cumple con dos funciones biolgicas diferentes durante el ciclo replicativo viral: incrementar la produccin de partculas virales e inducir la degradacin de CD4. Aunque una gran diversidad de secuencias entre subtipos virales ha sido extensamente documentada, poco se sabe acerca de variaciones funcionales relacionadas con esta diversidad y menos sobre la inherente a variantes recombinantes intersubtipo de dicha protena. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de variaciones en la protena Vpu sobre la replicacin viral. Para ello se realiz un ensayo in vitro de evaluacin de la capacidad replicativa relativa o fitness de un variante viral quimrica portadora de Vpu recombinante BF, respecto de una variante viral tipo salvaje subtipo B. Materiales y Mtodos. El vector pNL4-3, que contiene el genoma completo de una variante subtipo B de HIV-1, se utiliz para la generacin de una quimera viral portadora de la secuencia codificante para Vpu proveniente de un aislado viral recombinante intersubtipo BF (CRF_12BF). Mediante mutagnesis sitio-dirigida, se generaron sitios de restriccin en el genoma viral tipo salvaje, lo que permiti el reemplazo de la regin codificante para Vpu de un subtipo por otro. Los stocks virales se prepararon por transfeccin de cultivos de la lnea 293T y posterior propagacin en la lnea MT2. El ensayo de competicin in vitro fue realizado infectando cultivos de la lnea CEM, con la variante viral subtipo B de referencia (NL4-3 Vpu B) y la variante quimrica mencionada anteriormente (NL4-3 Vpu BF), en una relacin de MOI 1:1. Las infecciones fueron mantenidas durante 21 das, realizndose toma de muestra de clulas y sobrenadante de cultivo a das 1, 12 y 21 post-infeccin. El DNA genmico celular fue extrado usando un kit comercial, y se amplific por PCR la regin proviral codificante para Vpu. Se clon y secuenci el amplicn obtenido, para luego establecer la proporcin de cada variante presente en cada muestra, y la variacin de dicha proporcin en funcin del tiempo. Las infecciones fueron realizadas por duplicado. Las diferencias estadsticas fueron calculadas por t-student. Resultado. El anlisis de la composicin de la poblacin en cada da analizado mostr un predominio de la variante subtipo B al D1 (relacin B/BF: 1.52), sin embargo dicha relacin vari con el tiempo en favor de la variante quimrica portadora de la secuencia Vpu recombinante BF, en donde la relacin a D12 y D21 fue B/BF: 1.16 y B/BF: 0.99, respectivamente. Conclusin. El resultado obtenido en el presente trabajo proporciona clara evidencia de la relacin existente entre los cambios genmicos introducidos por la recombinacin
A/IB NR/IB NR/IA P/IB PA/IB Total
2 (11,8) 2 (11,1) 4 (7,8)
2 (11,8)
2 (3,9)
5 (100) 17 (100) 3 (100) 18 (100) 3 (37,5) 8 (100) 3 (5,9)
Se observa una gran variedad de ST distribuidos en todo el territorio, si bien se vio predominancia de algunos por regiones. El ST 225 predominante, se ha descripto en Inglaterra, Escocia, Francia y Suecia entre otros. Segun el GeneBank, obtuvimos dos mutaciones no descriptas en parC y parE y una combinacion de
mutaciones nunca asociadas. Las mutaciones en parE no se pueden relacionar con el aumento de la CIM. Se descarta que el A/S PA/IB englobe las CIMs a Cip ms elevadas.
O18 27471 - Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DE SERINCARBAPENEMASA TIPO KPC (KPKPC): COMUNICACIN DE 4 AISLAMIENTOS. EVALUACIN DEL CHROMAGAR KPC (CHROM) PARA ESTUDIOS DE PORTACIN RECTAL. ERRECALDE, LAURA(1); TUTZER, SILVIA(1); JORDA VARGAS, LILIANA(1); COGUT, SANDRA(1); CATTANI, EUGENIA(1); ELBERT, GABRIELA(2); PASTERAN, FERNANDO(3); CORSO, ALEJANDRA(3); KAUFMAN, SARA(1)
(1)Seccin Microbiologa y (2) Divisin Infectologa- Hospital General de Agudos J. Fernndez. (3) Servicio Antimicrobianos. INEIANLIS Dr C. G. Malbrn Introduccin: las KpKPC representan un serio problema para el sistema de salud debido a que presentan pocas opciones teraputicas y rpida diseminacin. Los estudios de colonizacin rectal permiten identificar y aislar a los pacientes portadores para prevenir la transmisin. Objetivos: describir los 4 primeros aislamientos de KpKPC en nuestro hospital. Reportar los resultados de los estudios de vigilancia de colonizacin rectal. Comparar el desempeo del CHROM con el mtodo propuesto por el Centers for Disease Control and Prevention (CDC) para el estudio de colonizacin rectal. Materiales y mtodos: los 4 aislamientos fueron estudiados mediante sistema automatizado Phoenix y difusin en agar segn CLSI. Se realiz la prueba de inhibicin de imipenem con cido 3-aminofenil bornico (APB) reconocido como inhibidor de carbapenemasas de clase A. Las cepas fueron caracterizadas en el INEI para blaKPC por PCR. Para el estudio de colonizacin se tomaron 2 hisopados rectales de pacientes de: clnica mdica (37), terapia intensiva e intermedia (29), ginecologa (2), ciruga (12) y cardiologa (1) y se sembraron respectivamente en CHROM (preparado segn instrucciones del fabricante) y caldo triptena soya (5ml) con el agregado de un disco de meropenem (mtodo CDC). Se incubaron 24 h a 37. Se estudiaron las colonias azules del CHROM y se repic 0,1 ml del caldo a medio Levine. Se incub 24 h a 37. A las 24 h se estudiaron las colonias mucosas fermentadoras del medio Levine. Resultados: se aislaron 4 KpKPC: 1 en abril, 1 en mayo y 2 en junio de 2010. Los aislamientos slo presentaron sensibilidad a fosfomicina, tigeciclina, minociclina y tetraciclina, 2 aislamientos fueron sensibles a colistina. Todos fueron aislados de orina y pertenecientes a un hombre y 3 mujeres. Edades: 25, 68, 75 y 88 aos. Todos presentaron co-morbilidades: diabetes (2), SIDA (1), hipertensin arterial (1), hiperplasia prosttica benigna (1) y como factores de riesgo se identificaron: sonda urinaria (4), catteres (4), tratamiento antibitico previo (4), postracin (1), intervenciones quirrgicas (2), internacin prolongada (mayor a 1 mes) (4), asistencia respiratoria mecnica (1). Los hisopados rectales fueron positivos en 9/81 (11,1%) pacientes (3 de clnica mdica y 6 de terapia intensiva). El CHROM detect los 9 positivos y el CDC detect slo 6/ 9. El CHROM present 2 falsos positivos por Acinetobacter spp. y K. pneumoniae sensible a carbapenemes. El CDC tuvo desarrollo de colonias en 29/81 en su mayora Acinetobacter spp., lo que dificult la observacin de otras colonias. Describimos la emergencia de KpKPC en un hospital general de agudos de la CABA. Los hisopados rectales revelaron que varios pacientes estaban colonizados lo que permiti aislarlos tempranamente. El CHROM mostr mejor rendimiento que el mtodo del CDC, menor porcentaje de contaminaciones y una disminucin de 24 h para obtener el resultado.
Introduccin: en las ltimas dcadas se ha reportado, con creciente frecuencia a nivel mundial, la adquisicin de plsmidos portadores de -lactamasas de tipo AmpC en bacterias que naturalmente carecen de dicho mecanismo de resistencia (MR) codificado a nivel cromosomal o lo expresan en muy bajo nivel. La prevalencia de este mecanismo en enterobacterias de nuestro pas no es bien conocida, en parte por lo dificultoso de su deteccin. Hasta la fecha, la resistencia (R) a cefoxitina (FOX), era el principal marcador de la presencia de este MR. Objetivo: caracterizar el mecanismo de resistencia responsable de un fenotipo inusual en aislamientos de P. mirabilis y evaluar la relacin clonal entre estos. Mtodos: entre agosto de 2007 y julio de 2008 se aislaron 8 P. mirabilis de pacientes internados en el Hospital Fernndez a partir de muestras de urocultivo (7) y lavado bronco alveolar (1). El estudio de sensibilidad por difusin (CLSI) de todos los aislamientos mostr R a cefalotina (CTN) y cefpodoxima (POD), sensibilidad (S) a cefotaxima (CTX) y ceftacidima (CAZ), test confirmatorio de B-lactamasa de espectro extendido (BLEE) negativo y valores entre 18-20mm para FOX (S=18mm; CLSI). Estos aislamientos fueron derivados al CNR para su caracterizacin. Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) por dilucin en agar a -lactmicos solos y con el agregado de cido 3aminofenil-bornico (APB). Se realiz ensayo microbiolgico con FOX para evaluar la actividad enzimtica de los aislamientos y se ensayaron sinergias entre los discos de FOX y APB (300ug). Se emple una PCR-multiplex para la deteccin de distintas familias de AmpC-plasmdico. La relacin gentica de los aislamientos se determin por electroforesis en campo pulsado (PFGE) con la enzima de restriccin SmaI. Resultados: se confirm la S a CTX (1-2mg/l) y CAZ (1-4mg/l) por CIM, el agregado de APB redujo los valores de CIM entre 3-5 diluciones. En 7 aislamientos la CIM a FOX fue S (8mg/l) y en el restante intermedio (I) (16mg/l). Los ensayos microbiolgicos fueron positivos para FOX, confirmando la actividad enzimtica y se observ efecto sinrgico entre los discos de FOX y APB. En todos los aislamientos se obtuvo amplificacin para la familia de AmpC tipo CMY-2. Por SmaI-PFGE se discriminaron 4 clones (n), A (3), B (3), C (1) y D (1). Conclusiones: a pesar de que la presencia de la enzima plasmdica tipo CMY-2 en enterobacterias confiere usualmente un fenotipo de resistencia a FOX, estamos reportando los primeros aislamientos de P. mirabilis portadores de esta enzima con fenotipo inusual de S a FOX. Frente al fenotipo de alto nivel de resistencia a CTN y POD, S a CTX y CAZ y test negativo para BLEE, se recomienda la bsqueda de AmpC plasmdico independientemente de la S a FOX, empleando los ensayos de sinergia entre los discos de FOX y APB y el microbiolgico para FOX. Este hallazgo estuvo asociado a 4 clones, sugiriendo la diseminacin horizontal intrahospitalaria de los plsmidos involucrados. La aparicin de este MR con un fenotipo inusual requiere de la atencin y el seguimiento por parte de los integrantes del sistema de salud.
O20 27553 - DISEMINACIN DE Enterococcus faecium CON RESISTENCIA A GLICOPPTIDOS (VREFM) DEL COMPLEJO CLONAL 17 EN ARGENTINA. FACCONE, DIEGO (1); ABEL, SOFIA (1); LOPEZ RUITTI, PAULA (1); GAGETTI, PAULA (1); CORSO, ALEJANDRA (1) (1) Servicio Antimicrobianos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. INEI-ANLIS Dr. CG Malbrn Introduccin: los enterococos son patgenos causantes de infeccin nosocomial que han adquirido resistencia a casi todos los antibacterianos, incluyendo los glicopptidos. Las infecciones nosocomiales por VREfm se han asociado con la diseminacin de aislamientos genticamente relacionados al complejo clonal 17 (CC17). Actualmente el CC17 est integrado por aislamientos con diversos Sequence Type (ST) definidos por MLST, pero conserva dos caractersticas fuertemente asociadas a este complejo clonal: i) el alelo 1 del gen purK (segn MLST) y ii) la presencia del gen esp (protena de superficie). En un estudio previo caracterizamos molecularmente los primeros 189 VREfm de Argentina
O19 27488 - Proteus mirabilis PRODUCTOR DE AmpC-PLASMDICO CON FENOTIPO INUSUAL DE SENSIBILIDAD A CEFOXITINA. COGUT, SANDRA (1); FACCONE, DIEGO (2); RAPOPORT, MELINA (2); ERRECALDE, LAURA (1); KAUFMAN, SARA (1); PASTERAN, FERNANDO (2); CORSO, ALEJANDRA (2)
(1) Hospital Fernndez, (2) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-INEI- ANLIS Dr. CG Malbrn
y determinamos que la resistencia a VAN estaba mediada primariamente por el gen vanA. Por SmaI-PFGE se discriminaron 35 tipos clonales, sin embargo el 57% de los aislamientos se agrup en un nico clon dominante A. Objetivo: el presente trabajo tuvo como finalidad evaluar la posible relacin gentica entre los clones de VREfm de Argentina y el CC17. Materiales y mtodos: los 189 VREfm estudiados procedan de 30 hospitales, 20 de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires (n: 125/66.1%), 6 de la provincia de Buenos Aires (n: 52/27.5%) y 4 de Crdoba, Santa Fe y Chaco (n: 12/6.4%). Las cepas fueron colectadas de muestras de hisopado rectal (n/%) (145 /77), orina (17/9), sangre (9/5) y otros (18/9); 186/189 aislamientos portaban el gen vanA y los 3 restantes el gen vanB. Los VREfm fueron resistentes: 98% ampicilina, 100% vancomicina, 98% teicoplanina, 100% eritromicina, 99% ciprofloxacina, 96% estreptomicina, 77.2% gentamicina, 6.3% tetraciclina y 3.7% cloranfenicol. El gen esp se detect por PCR (Leavis H., et al. JCM 44:1059-64, 2006). La secuenciacin de los genes purK, atpA, ddl, gdh, gyd, pstS y adk se realiz segn el esquema definido para la tcnica de MLST para esta especie. Resultados: analizando un aislamiento representativo del clon mayoritario A y uno de cada uno de los 34 tipos clonales restantes, se determin que 25 de estos clones portaban el gen esp, representando el 92,3% del total de los aislamientos. Al secuenciar el gen purK de los dos clones mayoritarios A (57%) y B (7%) y comparar con la base de datos de MLST (http://efaecium.mlst.net/) se confirm que las secuencias presentaban 100% de homologa con la correspondiente al alelo 1, asociada al CC17. Las secuencias de los 6 genes restantes del esquema de MLST en los mismos clones confirm que ambos pertenecen al ST=17. Conclusin: el anlisis de los resultados de los genes esp y purK en los 2 clones mayoritarios, A y B (64%), sugiere que el CC17 es el principal responsable de la emergencia y diseminacin de VREfm en Argentina. Estos resultados fueron confirmados al determinar que ambos clones corresponden al ST=17, genotipo fundador del CC17. En el mismo sentido, la presencia del gen esp en la mayora de los VREfm (>90%) indicara que estos clones hospitalarios tienen como origen comn el CC17. Nuestros resultados concuerdan con la hiptesis de que todos los aislamientos de VREfm causantes de infeccin hospitalaria circulantes en la actualidad comparten un origen ancestral con el CC17. O21 27636 - METICILINO RESISTENCIA Y SENSIBILIDAD A VANCOMICINA EN Staphylococcus COAGULASA-NEGATIVA (SCN): EVALUACIN DE DISTINTAS METODOLOGAS. GAGETTI, P (1); CERIANA, P (1); SOLOAGA, R (2); RODRIGUEZ, M (1); CORSO, A (1) (1)Servicio Antimicrobianos. INEI-ANLIS Dr. CG Malbrn. (2) Hospital Naval de Buenis Aires Introduccin: SCN ha emergido como agente causal de bacteriemia en inmunocomprometidos y en nios. El aumento en la meticilino resistencia (MR) y la resistencia a otras drogas, convirtieron a vancomicina (VAN) en el ltimo recurso para el tratamiento de infecciones por SCN. La deteccin precisa de MR y sensibilidad a VAN mediante las pruebas de sensibilidad de rutina en SCN es un desafo desde hace aos. En 2004, el CLSI estandariz la difusin con disco de cefoxitina (FOX) como predictor de MR en S. aureus (SAU) y SCN. En 2008 se publicaron los puntos de corte de CIM para FOX en SAU, pero an no se han establecido para SCN. En 2009, se eliminaron los puntos de corte de difusin para VAN en SAU y SCN. A la fecha el disco de FOX y la CIM a VAN seran los nicos mtodos disponibles en los laboratorios clnicos para evaluar de rutina MR y sensibilidad a VAN en SCN. Los sistemas automatizados podran evaluar la sensibilidad a VAN, pero se desconoce el desempeo de los equipos en la deteccin de MR en SCN. Objetivos: 1-Evaluar el desempeo del disco de FOX y el sistema Vitek2 en la deteccin de MR en SCN, 2-Establecer puntos de corte para FOX por el mtodo de agar dilucin (AD) en SCN y 3- Evaluar la concordancia de la CIM a VAN entre Vitek2 y AD. Materiales y mtodos: se estudiaron 100 SCN de la coleccin del INEI, representados por 10 especies: 49 S. epidermidis, 14 S. saprophyticus, 13 S.
hominis, 7 S. haemolyticus, 6 S. simulans, 4 S. auricularis, 3 S. capitis, 2 S. warneri, 1 S. cohnii y 1 S. xylosus. Se incluyeron 54 mecA positivos y 46 mecA negativos. Se realiz difusin con disco de FOX (30 ug), CIM a FOX y VAN por AD segn CLSI y sensibilidad por Vitek2 (AST-P577) segn recomendaciones del fabricante. Se us la PCR del gen mecA como mtodo de referencia para MR. Se compar la sensibilidad a VAN por Vitek2 con respecto al AD usado como referencia. Las discrepancias con el mtodo de referencia fueron confirmadas. Resultados: 1-La sensibilidad (SE) del disco de FOX fue 96% (2 cepas con 25mm) y la especificidad (ES) 100%, con valor predictivo positivo (VPP) 100% y valor predictivo negativo (VPN) 96%. El resultado de Vitek2 (considerando CIM a oxacilina, screening con FOX y sistema experto) dio una SE y ES de 100% para MR. 2- El mejor punto de corte para FOX y SCN por AD se estableci en d 2 para sensible y e 4mg/l para MR con SE 94%, ES 91%, VPP 93% y VPN 94%. 3-El rango de CIMs a VAN fue 0,12-2 mg/l por AD y d 0,5-4 mg/l por Vitek2. La CIM50 y CIM90 de VAN por ambos mtodos fue 1 mg/l y 2 mg/l, respectivamente. La concordancia en la categora de interpretacin y la concordancia esencial (CIM1dil) entre Vitek2 y AD fue 100% para VAN. De acuerdo a lo previamente descripto, el disco de FOX present muy buena SE y ES para la deteccin de MR en SCN. El sistema Vitek2 mostr ser altamente SE y ES para Ia deteccin de MR en todas las especies de SCN ensayadas. Si bien se evaluaron SCN con CIM VAN 4 mg/l, Vitek2 mostr 100% de concordancia con AD. El punto de corte de CIM de FOX propuesto para SCN de 2 y 4mg/l, present una buena SE y ES pero no logr superar al disco de FOX en el diagnstico de MR en SCN.
O22 27726 - PREVALENCIA NACIONAL DE Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA (MRSA) ASOCIADO A LA COMUNIDAD (CA-MRSA) EN ARGENTINA: ESTUDIO 2009. SOLA, C(1); LAMBERGHINI, R(2); PAGANINI, H(3); GAGETTI, P(4 ); EGEA, A L(5); LUCERO, C(4); FACCONE, D(4); GRUPO CA MRSA, ARGENTINA; BOCCO, JL(5); CORSO, A(4)
(1) CIBICI-CONICET-UNC, (2) Hospital Militar de Crdoba, (3) Hospital Nacional de Pediatra Dr. JP Garrahan, (4) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. INEI-ANLIS Dr. CG Malbrn, (5) CIBICI-CONICET-UNC En los ltimos aos, CA-MRSA emergi y se disemin, produciendo infecciones desde leves a muy graves, en diferentes pases del mundo, con valores de prevalencia variables, alcanzando el 50% o ms en algunas regiones. Estas cepas son sensibles a la mayora de los antibiticos no -lactmicos (AN) adems de ser genticamente distintas a los MRSA asociados al hospital. En los pases de alta prevalencia, estas cepas transmisibles y virulentas, comenzaron a introducirse en los hospitales. En Argentina, se reportaron valores regionales de CA-MRSA de 16% en Crdoba (2005) y un rango entre 30% y 75% en pediatra, en provincias del norte, este y centro (2007). Objetivo: establecer la prevalencia nacional de MRSA en infecciones asociadas al mbito hospitalario (HA-MRSA) y a la comunidad (CAMRSA). Materiales y mtodos: se analizaron todas las infecciones por S. aureus [MRSA o S. aureus meticilino-sensible (MSSA)] producidas durante el mes de noviembre del ao 2009 en 66 hospitales distribuidos en 21 provincias y CABA. Se defini como infeccin de inicio en el hospital (HO), a aquellas que no estaban presentes al ingreso del paciente y que se diagnosticaron luego de las primeras 48 h de internacin. Se utiliz el criterio microbiolgico para diferenciar CA-MRSA (MRSA con resistencia (R) a no ms de un AN) de HA-MRSA. Resultados: se obtuvieron 591 aislamientos de S. aureus, de los cuales el 54% fueron MRSA, 37% CA-MRSA y 17% HA-MRSA. La prevalencia de CA-MRSA vari entre el 5% y el 81%, con una tendencia a los valores ms altos en el norte (Formosa, Jujuy, Salta y Catamarca) disminuyendo hacia el centro y sur del pas. Se diagnosticaron 373 infecciones de inicio en la comunidad (CO), 53 % producidas por CAMRSA, 5% por HA-MRSA y 44% por MSSA. Las restantes 218 fueron infecciones HO, 37% producidas por HA-MRSA, 11% por CA-MRSA y 52 % por MSSA. La mayora (76%) de las infecciones por CA-MRSA fueron de piel y tejidos blandos. El 24%, 60%
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y 43% de las infecciones por CA-MRSA, HA-MRSA y MSSA respectivamente fueron infecciones invasivas (Iinv). El tipo de muestras en IInv producidas por CA-MRSA/HA-MRSA fue (en %): sangre 55/57, lquido pleural: 12/18, tejido seo: 18/3 y LCR: 8/1. El 34% de los CA-MRSA present R acompaante a un AN: 21% ERY-CLI, 1.5% CIP, el 1.2% GEN, 0.6% RFA, y 0.3% CMP. Entre los HA-MRSA la R fue: 84% ERY-CLIN, 90% GEN, 74% CIP, 25% RFA, 8% TMS y 6% CMP. La prevalencia de MRSA en Argentina ha alcanzado el 54%, con predominio del fenotipo CAMRSA (37%) sobre HA-MRSA (17%). Las cepas CA-MRSA estn diseminadas por todo el pas, alcanzando los valores mayores de prevalencia en las provincias del norte. Una cuarta parte de las infecciones por CA-MRSA son invasivas. El 11% de las infecciones de inicio en el hospital son producidas por CA-MRSA. La epidemiologa de las infecciones por MRSA esta cambiando drsticamente en nuestro pas y en el mundo. Evaluar las estrategias para el control de la diseminacin de MRSA tanto en el medio hospitalario como en la comunidad es el gran desafo de los efectores de salud.
regulen la expresin de este gen, la presencia de mecanismos concomitantes y los mecanismos que median la resistencia en otras especies diferentes a B. fragilis.
O24 27947 - RESISTENCIA A CARBAPENEMES EN Pseudomonas aeruginosa: UN EJEMPLO DE COOPERACIN. SANTELLA, GISELA (1); POLLINI, SIMONA (2); GUTKIND, GABRIEL (1); ROSSOLINI, GIAN MARIA (2); RADICE, MARCELA (1)
1. Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA, Argentina, 2. Dpto. Biologia Molecolare, Universit di Siena, Italia La expresin de carbapenemasas, la sobreexpresin de enzimas de tipo AmpC, el aumento en la expresin de las bombas de eflujo, la disminucin en la permeabilidad de la membrana y la presencia conjunta de estos mecanismos pueden ser reponsables de la multirresistencia en Pseudomonas aeruginosa (Pae). En este trabajo se analiz la contribucin a la resistencia de los distintos mecanismos mencionados. Mtodos: se incluyeron 20 aislamientos de Pae recuperados en el perodo 20042005, en un hospital de Buenos Aires. Si bien todos los aislamientos presentaron el mismo nivel de expresin de la enzima IMP-13 y pertenecieron al mismo tipo clonal, slo 5/20 fueron resistentes a carbapenemes (grupo-R), resultando el resto sensibles (grupo-S). La identificacin de las protenas de la membrana externa fue realizada por SDS-PAGE y MALDI-TOF. Se secuenciaron en forma completa OprD y AmpC y se compararon con bases de datos. Se determinaron los niveles de expresin de los genes codificantes de OprD, de AmpC y de los sistemas de eflujo de tipo Mex por RT-PCR. Se determin la frecuencia de obtencin de mutantes resistentes a carbapenemes en el grupo-S, en Pae ATCC 9027 y en aislamientos clnicos no productores de metalo beta lactamasas (MBL) por crecimiento en concentraciones crecientes de carbapenemes. Resultados: la ausencia de OprD observada por SDS-PAGE fue confirmada por espectrometra de masa en todos los aislamientos del grupo-R, sin embargo no se observaron variaciones en los niveles de expresin de los genes codificantes. La secuencia de OprD en el grupo-S fue idntica a la variante OprD-TS. Por el contrario las secuencias de OprD en 2/5 aislamientos del grupo-R presentaron una delecin puntual que se traduce en una terminacin prematura de la protena, mientras que 3/5 presentaron una delecin de 27 pb que origina una protena de menor tamao afectando probablemente su conformacin funcional. La frecuencia de seleccin de mutantes resistentes a carbapenemes en los aislamientos del grupo-S fue de 2 x 108 a 1.6 x 107; no se obtuvieron mutantes a partir de Pae ATCC 9027 ni de aislamientos clnicos no productores de MBL. En todos los aislamientos (grupo-S y grupo-R) se observ el mismo nivel de produccin de una enzima de tipo AmpC, PDC-5, que correspondi a una variante que presenta una dbil actividad de carbapenemasa. Con respecto a la expresin de sistemas de eflujo slo se observ un ligero aumento en el sistema de eflujo MexAB-OprM en el grupo-R. Conclusiones: diversas mutaciones responsables de la ausencia de OprD en membrana externa, as como la sobreexpresin de MexAB-OprM y la presencia de la enzima PDC-5, contribuyen a la resistencia a carbapenemes en aislamientos productores de IMP-13. El aumento en la frecuencia de seleccin de mutantes en los microorganismos productores de MBL respecto de los no productores pone de manifiesto el riesgo de falla teraputica en presencia de aislamientos productores de IMP-13 categorizados como sensibles de acuerdo a los puntos de corte del CLSI.
O23 27753 - DETECCIN Y CARACTERIZACIN DE CARBAPENEMASAS EN Bacteroides grupo fragilis EN ARGENTINA. LITTERIO, M(1); FERNANDEZ CANIGIA, L(1); CEJAS, D(2); LEGARIA, MC(1); CASTELLO, L(1); PREDARI, SC(1); DI MARTINO, A(1); ROSSETTI, A(1); ROLLET, R(1); CARLONI, G(1); BIANCHINI, H(1); RADICE, M(2); GUTKIND, G(2); OTROS PARTICIPANTES DE LA VIGILANCIA(3)
(1) Subcomisin de Bacterias Anaerobias - SADEBAC (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica - UBA (3) Bottiglieri M, Rocchi M, Mrquez MI, Machain M, Mauro MC, Nez MR, Ballester D. Introduccin: Bacteroides grupo fragilis (BGF) son los bacilos gram-negativos anaerobios ms frecuentemente implicados en infecciones en humanos. Se destacan del resto de los anaerobios por su amplia resistencia a los antibiticos de uso habitual. Aunque la actividad de algunos antibacterianos se ha mantenido inalterable a lo largo de los diferentes relevamientos efectuados en nuestro pas, en estudios recientes hemos detectado la emergencia de aislamientos con resistencia o sensibilidad reducida a los carbapenemes [imipenem (IMI), ertapenem (ERT) y doripenem (DOR)]. La produccin de una metalo--lactamasa codificada por el gen cfiA ha sido descripta en la literatura como la responsable de la resistencia a estos antibiticos. Objetivos: evaluar fenotpicamente la presencia de metalo-carbapenemasas en aislamientos de BGF resistentes o con sensibilidad disminuida a los carbapenemes (CIM =4 ug/ml) y detectar genotpicamente la presencia de cfiA. Materiales y mtodos: se determin la sensibilidad a ERT, IMI y DOR de 363 aislamientos de BGF por el mtodo de dilucin en agar segn las normas del CLSI. En los aislamientos que mostraron resistencia o sensibilidad disminuida a IMI, ERT o DOR (CIM= 4 ug/ml) se determin la CIM a IMI con el agregado de EDTA (0,4 mM) para evaluar la posible presencia de metalo-carbapenemasas del grupo 3 de K. Bush. Se investig la presencia del gen cfiA por amplificacin por PCR empleando genes especficos en dichos aislamientos. Resultados: en 20 aislamientos se observ una CIM = 4 ug/ml para los carbapenemes. El gen cfiA codificante de la metalo--lactamasa se detect en 8 aislamientos de Bacteroides fragilis: tres de ellos presentaron alta resistencia a los tres carbapenemes, la cual revirti por el agregado de EDTA (disminucin de la CIM de IMI = 3 ttulos). En los 5 restantes, con sensibilidad disminuida a ERT y DOR, pero sensibles a IMP, la inhibicin con EDTA slo se observ en 3 de ellos. No se detect la presencia de cfiA en otras especies de Bacteroides grupo fragilis, ni en una cepa de Bacteroides ovatus/ thetaiotaomicron resistente a los tres carbapenemes en el cul tampoco se observ inhibicin con EDTA. Conclusiones: el ensayo de deteccin fenotpica empleando EDTA permiti la deteccin de metalo-carbapenemasas en 6/8 microorganismos productores de la enzima cfiA (en todos aquellos que presentaron resistencia y en 3/5 que presentaron sensibilidad disminuida). La deteccin del gen codificante de dicha metaloenzima no siempre correlaciona altos valores de CIM para los carbapenemes, por lo tanto, es necesario determinar la presencia de elementos que
MICROBIOLOGA AGRICOLA Y AMBIENTAL

O25 - 27080 DIVERSIDAD Y ABUNDANCIA DE BACTERIAS PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO VEGETAL EN SUELOS URUGUAYOS CON ROTACIN DE CULTIVOS Y SIEMBRA DIRECTA. BAJSA, NATALIA(1,2); AZZIZ, GASTON(1); COUTINHO, HEITOR DA C(3); ROSADO, ALEXANDRE S(4); ARIAS, ALICIA(1)
(1) Instituto de Investigaciones Biolgicas Clemente Estable, Uruguay, (2) Universidad de la Repblica, Uruguay, (3) Empresa
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Brasileira de investigacin Agropecuria, Brasil, (4) http:// www.ufrj.br/Universidade Federal do Rio de Janeiro La rotacin de cultivos y la siembra directa son prcticas agrcolas que han sido adoptadas por los productores uruguayos como alternativas ms sustentables que el cultivo continuo y el laboreo convencional, debido a sus efectos sobre la productividad y parmetros fisicoqumicos del suelo. Sin embargo, poco se sabe sobre el impacto de estos sistemas de manejo sobre las bacterias edficas promotoras del crecimiento vegetal (PGPB). El objetivo de este trabajo fue evaluar el impacto del cultivo continuo de granos o su rotacin con pasturas sobre comunidades de PGPB. Se utiliz un ensayo de larga duracin instalado en INIATreinta y Tres (Instituto Nacional de Investigacin Agropecuaria, Uruguay), que cuenta con tratamientos con diferentes intensidades de uso del suelo bajo siembra directa. Se tomaron muestras de suelo en otoo y primavera, durante 2 aos y se analizaron las poblaciones cultivables por tcnicas clsicas de recuento, as como la estructura de la comunidad por mtodos moleculares independientes de cultivo. La poblacin de actinobacterias fue ms abundante en campo natural y en las rotaciones con mayor presencia de pasturas que bajo agricultura continua. La abundancia de Pseudomonas fluorescentes y esporulados aerobios (principalmente Bacillus spp.) no present diferencias significativas entre los tratamientos. Se analiz la diversidad del dominio Bacteria por DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) de fragmentos del gen del ARNr 16S. Se observ una clara relacin entre la estructura de la comunidad y el tratamiento agronmico. Las muestras de campo natural resultaron ms similares a las muestras con pasturas que a las de cultivo continuo de granos. Los patrones correspondientes a las rotaciones fueron intermedios entre el tratamiento de mejoramiento permanente y el de agricultura continua. Los resultados de este trabajo aportaron conocimiento sobre la abundancia y diversidad de bacterias presentes en suelos uruguayos, y permitieron establecer que los sistemas de manejo agrcola alteran la estructura de las comunidades bacterianas edficas. Financiacin: PDT-DICYT, UNU-BIOLAC, PEDECIBA.
diluciones de muestras de suelo se plaquearon en medio NBRIP para cuantificar y aislar microorganismos con capacidad de solubilizar Ca3PO4; aquellas colonias con halo que adems crecieron en medio S1, se confirmaron como Pseudomonas spp. mediante PCR-RFLP, y se evalu su capacidad solubilizadora en medio lquido. Resultados: Se observ una correspondencia absoluta entre el crecimiento en medio S1 y la deteccin de los marcadores oprF y gacA, lo que permite la comparacin directa de recuentos y de diversidad del grupo en las muestras. El anlisis conjunto de carga (UFC/g) de Pseudomonas y de diversidad molecular permitieron revelar: a) efectos cuantitativos y cualitativos de enriquecimiento en rizosfera en comparacin a suelo entre lneas de siembra; b) efectos de las prcticas agrcolas sobre la diversidad. Se obtuvo un conjunto de aislamientos de Pseudomonas a partir de suelo y rizosfera, con capacidad de inhibir in vitro el desarrollo de fitopatgenos, y de solubilizar Ca 3PO4 en cultivo lquido. El monitoreo de los sitios de muestreo a lo largo de varios ciclos de cultivo mediante estas tcnicas microbiolgicas y moleculares, permitir evaluar la influencia de la estacionalidad y del manejo agrcola sobre las poblaciones de Pseudomonas y analizar su correlacin con otras variables edficas y agronmicas dentro del consorcio BIOSPAS. Asimismo, se comenz a generar una coleccin de aislamientos de Pseudomonas spp. con potenciales propiedades PGP que debern ser evaluados in planta.
O27 - 27566 CONSTRUCCIN DE UN NUEVO TRANSPOSN MINI-Tn5 PORTADOR DE UN ORIGEN DE REPLICACIN BACTERIANO PARA SU USO EN ESTUDIOS RIVET EN RIZOBIOS. SALAS, M EUGENIA; LOZANO, MAURICIO; MARTINI, CARLA; SALTO, ILEANA; TORRES TEJERIZO, GONZALO; GIUSTI, ANGELES; DEL PAPA, FLORENCIA; PISTORIO, MARIANO; LAGARES, ANTONIO
Instituto de Biotecnologa y Biologa Molecular, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata Introduccin: Los rizobios son bacterias gram-negativas que habitan el suelo y se caracterizan por fijar nitrgeno atmosfrico cuando se asocian en simbiosis con plantas leguminosas. Dicha asociacin es el resultado de un conjunto de eventos de sealizacin cuyos genes asociados no han sido aun del todo caracterizados. La tcnica RIVET (Recombination based In Vivo Expression Technology) permite identificar genes que, en una condicin particular, se expresan de modo diferencial respecto de una condicin fisiolgica de referencia. En nuestro laboratorio se ha desarrollado una variante de la tcnica RIVET que usa un transposn derivado del Tn5 como herramienta para generar fusiones transcripcionales a lo largo del genoma al gen de una resolvasa (tnpR) localizada en un extremo del transposn. La expresin de TnpR en clones especficos resultar en la escisin de un cassette de DNA que cambiar el fenotipo de la bacteria indicando que el gen fusionado a la resolvasa en dicho clon se ha expresado. Objetivos: Construccin de un nuevo mini-Tn5 portador de un origen de replicacin (oriV) bacteriano funcional en Escherichia coli que facilite la recuperacin de secuencias flanqueantes al transposn en clones que resulten de inters luego de la aplicacin de la tcnica RIVET. Materiales y Mtodos: Medios de cultivo complejos TY, LB. Conjugaciones bacterianas siguiendo protocolos clsicos. Tcnicas moleculares segn Maniatis et al. (1982). Resultados: Se clon un origen de replicacin funcional en E. coli proveniente del plsmido pSM10 dentro del sitio NotI presente en un transposn mini-Tn5, haciendo uso de oligonucletidos como adaptadores, dando como resultado el plsmido llamado pRIVET-miniTn5-ori. Teniendo en cuenta que el vector pRIVET-miniTn5 no posee capacidad de replicarse en cepas de E. coli que no poseen la protena pi, la recuperacin de clones que poseen el oriV clonado dentro del sitio NotI del vector se realiz mediante la seleccin de aquellos clones que posean la capacidad de crecer en un medio selectivo conteniendo tetraciclina, resistencia codificada por el vector. Los clones obtenidos fueron verificados por su fenotipo, su patrn de restriccin y su secuencia. Para la nueva herramienta RIVET analizamos la capacidad de transposicin en Sinorhizobium meliloti y la funciona-lidad de la resolvasa codificada por el transposn. Conclusio-
O26 - 27332 CARACTERIZACIN MICROBIOLGICA Y MOLECULAR DE Pseudomonas EN SUELO Y RIZOSFERA DE LOTES AGRCOLAS CULTIVADOS BAJO SIEMBRA DIRECTA. ORIGEN DE NUEVOS AISLAMIENTOS PGPR. AGARAS, BETINA(1); FERNANDEZ, LETICIA A(2); WALL, LUIS G(1); VALVERDE, CLAUDIO(1)
(1) Universidad Nacional de Quilmes, (2) Universidad Nacional del Sur Antecedentes: Con el fin de evaluar los efectos de prcticas agrcolas en siembra directa sobre la biologa del suelo y su productividad, se ha constituido el consorcio de investigacin pblico-privado BIOSPAS (Biologa del Suelo y Produccin Agraria Sustentable). Entre los microorganismos con reconocidas propiedades promotoras del desarrollo vegetal (PGP), se encuentran especies del gnero Pseudomonas. Comprender los efectos de las prcticas agrcolas, del cultivo, de sitio geogrfico y tipo de suelo sobre la diversidad de Pseudomonas, as como su correlacin con otras variables fsicas, qumicas y biolgicas, podra contribuir a la identificacin de indicadores biolgicos de calidad de suelo. Por otra parte, estas muestras constituyen fuentes invaluables de aislamientos adaptados localmente a condiciones de suelo y a la rizosfera de las variedades cultivadas. Objetivos: 1) Analizar la carga y diversidad de Pseudomonas spp. en muestras de suelo y rizosfera; 2) obtener aislamientos del mismo gnero con potenciales actividades PGP. Material y Mtodos: Muestras de suelo (0-10 cm) y de sistemas radiculares de plantas sanas de lotes con historia de siembra directa y diferentes manejos, y de ambientes naturales vecinos, en Crdoba, Entre Ros y Buenos Aires. Se cuantific la carga de Pseudomonas totales y fluorescentes por plaqueo en medio selectivo Goulds S1. La diversidad se analiz mediante PCR-RFLP de marcadores gnicos oprF y gacA. Sobre aislamientos en medio S1, se realizaron ensayos de actividad en placa (antagonismo, produccin de exoproteasas y HCN, solubilizacin de Ca3PO 4). Por otra parte,
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nes: Hemos construido un nuevo transposn portador de un oriV funcional en E. coli. Hemos verificado que la nueva construccin mantiene la capacidad de transponer en S. meliloti y que, como es esperable, en muchas de sus inserciones da lugar a escisiones del cassette de DNA blanco de TnpR. El sistema presentado es el primero en su tipo, y constituye una herramienta prctica muy eficiente para generar fusiones gnicas a tnpR para estudios RIVET evitando la construccin de bibliotecas genmicas de fusin en vectores plasmdicos.
O28 - 27671 ANLISIS FENOTPICO DE UNA BIBLIOTECA DE TRANSFORMANTES INSERCIONALES POR ADN-T DEL HONGO MICORRCICO MODELO Laccaria bicolor. ALVAREZ CRESPO, M CECILIA; KEMPPAINEN, MINNA J; PARDO, ALEJANDRO G
Laboratorio de Micologa Molecular, Departamento de Ciencia y Tecnologa, Universidad Nacional de Quilmes Laccaria bicolor es el primer hongo micorrcico cuyo genoma ha sido secuenciado completamente. Contando con esta til informacin, es posible desarrollar estudios de anlisis funcional en este organismo modelo, gracias a la aplicacin de metodologas previamente desarrolladas en nuestro laboratorio. En estudios previos realizados sobre la cepa dicaritica S238N, se demostr que L. bicolor es susceptible a la transformacin mediada por Agrobacterium tumefaciens, obtenindose un patrn de integracin azaroso en copia nica en el genoma fngico. Por otra parte, no se encontr homologa o microhomologa entre las secuencias de los bordes del ADN-T y los sitios de integracin. Si bien, en principio, la integracin no parece estar dirigida, se observ que de las secuencias obtenidas 71% correspondan a genes y 29% a regiones intergnicas. Esto podra sugerir un direcciona-miento de integracin hacia regiones gnicas o ser un reflejo directo de la alta proporcin de genes que contiene el genoma de Laccaria. A la luz de estos resultados, surge la posibilidad de utilizar esta metodologa para la generacin de mutantes por perdida de funcin en la cepa monocaritica S238N-H82. Esto permitira analizar los mutantes fenotpicos obtenidos, as como evaluar si el patrn de insercin en el monocarin concuerda o no con el observado en la cepa dicaritica. Para ello, se construy una biblioteca de 1000 mutantes insercionales independientes de L. bicolor con la finalidad de caracterizar funcionalmente genes de importancia biolgica. El rendimiento obtenido durante la transformacin fue del 90%. La cepas transgnicas fueron obtenidas por transformacin con el vector binario de rescate gnico pHg/pBks, lo que permite la posterior recuperacin del transgen para analizar el sitio de insercin en el genoma. Las cepas obtenidas fueron evaluadas en medio completo y en medio mnimo para la bsqueda de fenotipos. Aquellas cepas que difirieron en su crecimiento respecto a la cepa silvestre (7% de la biblioteca), fueron cruzadas con la cepa compatible S238N-H107 y la suficiencia del dicarin fue evaluada en medio completo y medio mnimo. La transferencia de ADN-T por medio de A. tumefaciens a mono-cariones de L. bicolor permite la obtencin de cepas mutantes fenotpicas.
culadas con Azospirillum brasilense a los 7 y 14 das despus de la inoculacin (DDI). Materiales y Mtodos: Se utilizaron semillas de Solanum lycopersicum CvF36 que se cultivaron en frascos de vidrio conteniendo 40 mL de medio Hoagland agarizado al 0,8%. Cada planta se inocul con 50 L de la suspensin bacteriana de A. brasilense (2x105 UFC). Las plantas se mantuvieron en cmara de cultivo a 25 C hasta el momento de la cosecha para la extraccin de ARN (7 y 14 DDI). Se asignaron 25 plantas a cada uno de los tratamientos. Para la extraccin de ARN, sntesis de ADNc y marcacin e hibridacin de micromatrices se siguieron protocolos detallados en http://ted.bti.cornell.edu/cgi-bin/array/ basicsearch.cgi. Para la amplificacin de los genes de inters se utilizaron los pares de cebadores diseados en base a secuencias depositadas en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/. Las muestras se sometieron a electroforesis en geles de agarosa al 1% en buffer TAE. Se utilizaron 8 micromatrices de ADNc Tom 1, Cornell USA. Resultados: Finalizados los procesos de filtrado y normalizacin quedaron para el anlisis 5494 ADNcs. De los genes que fueron estadsticamente expresados en forma diferencial se eligieron algunos que resultaron especialmente interesantes para nuestro estudio y se confirm su expresin diferencial por RT-PCR. Se identificaron 224 genes que fueron diferencialmente regulados al menos dos veces, en respuesta a la inoculacin con A. brasilense. De estos, 33 aparecieron diferencialmente expresados a los 7 DDI y 191 a los 14 DDI. Los genes se clasificaron en 10 categoras funcionales de acuerdo a la similitud de secuencias con genes conocidos: asociados a pared celular, PRs, relacionados con la defensa, con el metabolismo, con la biosntesis de hormonas, con el transporte, genes de factores de transcripcin, genes desconocidos, genes relacionados con la fotosntesis y con la sealizacin. En la respuesta de la planta a la inoculacin participan varios genes descriptos en interacciones planta/patgeno como Pti 4, pero a diferencia de estas interacciones, se ha visto un apagado en forma secuencial de los genes involucrados en la repuesta HR. El uso de la tcnica de micromatrices permiti el anlisis simultneo de los genes cuya expresin cambia en plantas de tomate como resultado de la interaccin con A. brasilense. Pese a la respuesta defensiva que la inoculacin provoc, tiene lugar una colonizacin beneficiosa y fructfera por esta bacteria. De alguna forma an no conocida, la planta puede diferenciar un microorganismo patgeno de otro que no lo es, generando respuestas defensivas ms dbiles y tardas.
O30 - 27918 INFLUENCIA DE LOS EXUDADOS DE SEMILLAS DE ALFALFA SOBRE LOS LPS, PROTENAS EXTRACELULARES Y MOLCULAS SEALES DE DOS CEPAS DEL GNERO Pseudomonas. GUIAZU, LORENA BELEN(1); ROVERA, MARISA(1); ROSAS, SUSANA(1); ESPINAR MARCHENA, FRANCISCO(2); BELLOGIN IZQUIERDO, RAMON(2); ESPUNY GOMEZ, MARIA DEL ROSARIO(2)
(1) Universidad Nacional de Rio Cuarto, Crdoba, (2) Universidad de Sevilla, Espaa Numerosas investigaciones reportan un efecto positivo en el crecimiento de las leguminosas por la inoculacin con bacterias de vida libre del gnero Pseudomonas. Las cepas P. aurantiaca SR1, P. putida SP22 fueron aisladas de la rizosfera de soja (Glycine max L.) y son capaces de solubilizar compuestos insolubles de fsforo, movilizar hierro a travs de la produccin de siderforos e inhibir el crecimiento de diferentes especies fngicas. El objetivo de nuestro trabajo fue ampliar el estudio de estas cepas en caractersticas claves en el establecimiento de la relacin planta-bacteria y estudiar la influencia de los exudados de semillas de alfalfa (Medicago sativa L.) sobre estas caractersticas. Para ello se realiz el anlisis electrofortico de lipopolisacridos (LPS) de la pared mediante la extraccin y anlisis de los mismos en medio TY y en medio TY suplementado con exudados de semillas de alfalfa y con el flavonoides luteolina (caracterstico de los exudados de alfalfa). El perfil electrofortico de protenas extracelulares se obtuvo a partir del cultivo de las bacterias en presencia y ausencia de exudados axnicos de semillas de alfalfa o de luteolina y se determin la existencia del sistema de se-
O29 - 27677 RESPUESTA SISTMICA DE Solanum lycopersicum INOCULACIN CON Azospirillum brasilense. RIBAUDO, C(2); HUESO, G(1); PONDS, C(1); GRANELL, A(1); CURA, J(2); CANTORE, M(2)
(1) Instituto de Biologa Molecular y Celular de Plantas, Valencia, Espaa, (2) Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires La capacidad de las PGPRs para desencadenar procesos benficos para el desarrollo de las plantas o para el gatillado de mecanismos de resistencia frente a diferentes generadores de estrs, depende de que las bacterias puedan colonizar a la planta. Para que esta relacin benfica planta/bacteria se establezca es necesario que la compleja red de reacciones defensivas de la planta discrimine de alguna forma, no conocida por el momento, a las PGPRs como no patgenos. Con el objetivo de profundizar en la comprensin de los mecanismos moleculares y bioqumicos involucrados en esta interaccin se llev a cabo un anlisis global de los transcriptos en la parte area de plantas de tomate ino-
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crecin Tipo III en ambas cepas por hibridacin en heterologa con una sonda de genes conservados. En los ensayos de percepcin de qurum se emple como biosensor Agrobacterium tumefaciens NT1 pZLR4 y los sobrenadantes de bacterias de 1, 2 y 3 das de crecimiento en TY (adicionado con flavonoides o exudados de semillas). Se observ un perfil de LPS en escalera, distinto entre P. aurantiaca y P. putida, pero similar al que presentan las especies de Salmonella. No se observaron cambios significativos en este modelo de perfil por la adicin de exudado o de luteolina. No se detect ninguna alteracin significativa en el perfil de protenas extracelulares de P. putida SP22 cuando fue cultivada en presencia de exudados de semillas de alfalfa o de luteolina, pero s en el caso de P. aurantiaca SR1, donde apareci una nueva banda y se intensificaron otras dos. La secrecin de estas protenas no se realizara a travs del sistema de secrecin de Tipo III, dado que ninguna de las cepas present seal tras la hibridacin con una sonda de genes conservados de este aparato de secrecin. Las cepas fueron productoras de seales tipo Acil Homoserino Lactonas (AHLs), destacndose P. aurantiaca SR1. Cuando se emplearon flavonoides o exudados, no se observaron cambios destacables. La cepa P. aurantiaca SR1 present cambios en los perfiles de secrecin de protenas cuando fue cultivada en presencia de exudados de semillas de alfalfa. Futuros estudios nos permitirn determinar si estos han sido propiciados por la planta hospedadora o sus derivados.
10 y 20%, mientras que no se observ captura por S.boularddii.El cultivo en PS indujo un cambio en el % de captura, la cual aument para S.cerevisiae 81103, 8116 y K.marxianus 8154 (entre 50 y 60%),disminuy alrededor del 20% para K.lactis y no present variacin significativa para S.cerevisiae 8112 (p<0.05). L.plantarum 83114 cultivado en MRS captur entre 30 y 40% y en PS secuestr entre 50-60%. Las cepas evaluadas secuestraron AFB1, excepto S.boularddii. La mayor captura en MRS la presentaron L. kefir CIDCA 8348,83115,8325,JCM 5818;L.plantarum CIDCA 83114;S.cerevisiae CIDCA 8112 y K. lactis y en PS S.cerevisiae CIDCA 81103, 8116 y K.marxianus CIDCA 8154. La capacidad de captura de los microorganismos vari significativamente con el medio de cultivo empleado, lo que puede deberse a cambios a nivel de la expresin de componentes superficiales.
O32 - 27381 PROPIEDADES DE HIDRATACIN DE MICELIOS FNGICOS SECADOS BAJO DIFERENTES CONDICIONES. CANEL, ROMINA; LUDEMANN, VANESA; DE LA OSA, ORLANDO; WAGNER, JORGE
Universidad Nacional de Quilmes Una de las lneas principales de trabajo de nuestro grupo, est vinculada a la caracterizacin de diversos hongos filamentosos no txicos, aislados de diferentes matrices alimentarias, para su potencial empleo como ingredientes alimentarios nutritivos y funcionales. Si bien existe una vasta bibliografa en el uso de hongos unicelulares como suplemento dietario, no es difundido el uso de hongos filamentosos para tal fin. As, surge una nueva oportunidad para el empleo de hongos filamentosos que se extiende ms all de su tradicional uso en las fermentaciones alimentarias. El objetivo del trabajo es evaluar el efecto del secado sobre las capacidades de hidratacin de micelios fngicos, los cuales en trabajos anteriores demostraron ser los mejores respecto a otros siete gneros evaluados. Se trabaj con cepas de las especies: Penicilium nalgiovense y Paecilomyces variotii. Los hongos se cultivaron durante 7 das en YES a 25 C y 135 rpm. Transcurrido dicho tiempo los micelios se lavaron, se filtraron y fueron expuestos a tres condiciones de secado (50 C, 80 C y liofilizacin). Las muestras secas fueron molidas y tamizadas por malla de 0,5 mm. A estas muestras se les determin la capacidad de retencin de agua (CRA) y la capacidad de absorcin de agua (CAA). La CAA de los micelios fngicos liofilizados fue la que present los mejores resultados en comparacin con las otras dos condiciones. Las prdidas relativas fueron de 17% a 50 C y de 75% a 80 C para Paecilomyces y para Penicillium de 55% a 50 C y de 75% a 80 C. En cuanto a la CRA, los micelios fngicos secados a 80 C en ambos gneros arrojaron valores considerablemente menores que en las dems condiciones. En cuanto a la liofilizacin tambin fue mejor para Penicillium, no obstante para Paecilomyces el secado a 50 C obtuvo similares valores a esta. De los resultados se puede concluir que el mtodo de secado influye en las capacidades de hidratacin. Si bien hubo un comportamiento generalizado para cada especie analizada, se observan importantes diferencias para cada cepa. Esto podra deberse a la diferencia en contenido proteico y de polisacridos estructurales, ya que en la capacidad de hidratacin, las protenas y los beta glucanos juegan un papel preponderante. Las primeras, una vez desnaturalizadas, pierden en gran proporcin esta capacidad. El anlisis por calorimetra diferencial de barrido (DSC) muestra que en los cultivos frescos, existe una endoterma de desnaturalizacin proteica a una temperatura promedio de 59 C, con un rango total entre 45 y 75 C. En los termogramas obtenidos para los micelios secos sta endoterma tiene una entalpa menor para todas las condiciones de secado, siendo drstica sta disminucin a 80 C, esto explica en parte, el comportamiento obtenido por las muestras en los anlisis de CRA y CAA.
MARTES 19/10/2009
O31 - 27224 DETERMINACION DE LA CAPACIDAD SECUESTRANTE DE AFLATOXINA B1 POR MICROORGANISMOS AISLADOS DE KEFIR. LEON, A(1); GAMBA, R(1); SERNA, C(2); QUINTERO, E(2); CARASI, P(1); SEDAN, D(1); ANDRINOLO, D(1); SERRADELL, M(1); GARROTE, G(1); GIANNUZZI, L(1); DE ANTONI, G(1)
(1) Universidad Nacional de La Plata, (2) UDEA Las Aflatoxinas (AFs) son metabolitos secundarios de hongos filamentosos Aspergillus flavus, A.parasiticus y A.nomius que contaminan los alimentos, siendo la aflatoxina AFB1 (AFB1) el mutgeno y carcingeno natural mas potente conocido. Se ha demostrado que las bacterias cido lcticas (BAL) capturan AFs de forma cepa dependiente y que esto ocurre en la superficie celular, donde participan componentes celulares como peptidoglicano, polisacridos y protenas. El kefir es una leche fermentada proveniente del Cucaso euroasitico y se ha demostrado la capacidad de sus sobrenadantes y de sus microorganismos de prolongar la fase de adaptacin (Lag) de A.flavus a pH entre 3.5 y 3.3 y de inhibir su crecimiento a pH 3.0. El objetivo del presente trabajo fue Investigar la capacidad de captura de AFB1 por bacterias cido lcticas y levaduras aisladas de grnulos de kefir y determinar si la misma vara al cultivar los microorganismos en dos medios diferentes: caldo MRS y permeado de suero comercial (Ilolay) al 5%(PS). Los microorganismos cultivados en MRS o en PS, por 18 h a 30 C, se lavaron con PBS y agua bidestilada y se resuspendieron en PBS. Una mezcla 2.5ml:2.5ml de suspensin de microorganismos y AFB1 se incub durante 4 h agitando a 30C. La mezcla se centrifug a 2500 g, 10 min y se determin la concentracin AFB1 en el sobrenadante en un equipo HPLC Shimadzu LC-20 ATcon detector UV de arreglo de diodos, columna de reparto C18 HYPERSIL flujo:1.2 ml/min de acetonitrilo 30%,metanol 10% y agua 60 %. El % de captura se calcul con la frmula: 100%(1rea del pico del sobrenadante AFB1/rea del pico de AFB1 control). Se evaluaron cepas de Lactobacillus kefir; L.plantarum; Saccharomyces cerevisiae; Kluyveromyces marxianus; S. boularddii(comercial) y K. lactis. Resultados: L. kefir CIDCA 83111,83113 y 8321 capturaron entre 10 y 20% de AFB1; L. kefir CIDCA 8348, 83115,8325 y L. kefirJCM 5818 capturaron entre 30 y 40%. S.cerevisiae CIDCA 8112 y K. lactis cultivadas en MRS capturaron entre 40 y 50%; S.cerevisiae CIDCA 81103 y 8116 capturaron entre 20 y 30%;K .marxianus CIDCA 8154 entre
O33 - 27393 BROTE DE INTOXICACION ALIMENTARIA EN UN JARDIN DE INFANTES DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. MANFREDI, EDUARDO ALBERTO; RIVAS, MARTA
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS Carlos G. Malbrn
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Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) constituyen uno de los principales desafos para la Salud Pblica. En algunos jardines y comedores comunitarios muchas veces personal eventual poco capacitado, contribuye a reforzar el funcionamiento de la cocina, lo que determina un aumento del riesgo de contaminacin de los alimentos. En el presente trabajo se describe la investigacin de un brote de ETA ocurrido el 27 de noviembre del 2008 en un Jardn de Infantes de la ciudad de Hurlingham, Provincia de Buenos Aires. De los 117 nios, docentes y auxiliares que almorzaron ese da, 47 presentaron vmitos (95%), y diarrea (5%). Las personas afectadas fueron 37 nios de 2-6 aos y 10 adultos. La tasa de ataque fue estimada en 43%, y el perodo de incubacin en una media de 6 h. Cinco nios fueron internados con signos de deshidratacin, y uno de ellos derivado a terapia intensiva del Hospital Posadas. Se tomaron muestras de materia fecal de 5 pacientes, del alimento consumido e hisopados de nariz y manos de 5 manipuladores. Las cepas aisladas de narinas del manipulador 1 (M1), de manos del manipulador 2 (M2) y 3 (M3), de 4 muestras de materia fecal, y del alimento, fueron tipificadas como Staphylococcus aureus subespecie aureus, que portaban los genes que codifican para las enterotoxinas SEA y SED. Los patrones de restriccin obtenidos por SmaI-PFGE presentaron una similitud del 100%. La investigacin del brote estableci que durante la preparacin del alimento, los manipuladores M1 y M2 fueron los encargados del trozado y picado del pollo, mientras que M3 trabaj con el producto ya procesado. M1 y M2 eran personal eventual con baja capacitacin, utilizado como refuerzo en la cocina. Hubo adems factores que favorecieron el desarrollo del Staphylococcus enterotoxignico, como ser las altas temperaturas fuera y dentro de la cocina, y el tiempo que se tard en completar toda la operacin de picado, mezclado, fraccionamiento y distribucin para el consumo. Como consecuencia del brote se extremaron las medidas de higiene y se realiz la capacitacin de todo el personal eventual junto al personal estable, confirmndose que las estrategias de prevencin y control requieren fundamentalmente de la educacin de todos los actores relacionados con la preparacin de los alimentos. Adems se enfatiz la importancia de la toma de muestra, y aplicacin de tcnicas de Biologa Molecular como herramientas bsicas no solo para la deteccin del agente causal, sino tambin para esclarecer el origen de la fuente de intoxicacin con el fin de establecer medidas correctivas.
virulencia ail, y yst y secuencias de especie 16S rRNA por PCR. Resultados: La identificacin por PCR tuvo buena correlacin con la identificacin bioqumica. La mayora de los aislamientos de origen humano, 20 de 22 (90,9%) perteneci al biotipo 4 y present los genes de virulencia ail, y yst, mientras que los dos restantes fueron de biotipo 1A, negativo para los genes de virulencia y biotipo 2, portador de ail y yst. Entre los 23 aislamientos de alimentos, 19 (82,6%) fueron del biotipo 1A y no presentaron los genes ail y yst; tres, de biotipo 1B portadores del gen ail y uno del biotipo 2, positivo para ambos genes de virulencia. Los dos aislamientos ambientales fueron biotipo 1A, negativos para ambos genes de virulencia. En concordancia con otros estudios, los aislamientos de Y.e. de origen humano fueron mayoritariamente de biotipo 4 y contenan genes asociados a virulencia, mientras que aquellos recuperados de alimentos y de ambiente pertenecan predominantemente al biotipo 1A y carecan de los genes ail, y yst. Los resultados indican la dificultad en recuperar aislamientos virulentos de Y.e. a partir de alimentos. Esto podra deberse a la posible presencia de inhibidores en los alimentos y/ a la presencia de ms de una poblacin de Y.e. en dichas muestras, resultando en la inhibicin de las cepas virulentas por accin bactericida de las no virulentas; o simplemente por la seleccin de colonias avirulentas debido a su presencia en mayor nmero en los medios de cultivo utilizados para el aislamiento.
O35 - 27564 CARACTERIZACIN GENOTPICA Y RELACIN CLONAL DE CEPAS DE Escherichia coli O178:H19 DE DISTINTOS ORGENES. PALLADINO, M(); DASTEK, B(); CARBONARI, C(); BENTANCOR, A(); RUMI, MV(); TANARO, J(4); IRINO, K(5); MASANA, M(); RIVAS, M()
(1) ITA, CIA, INTA, (2) INEI-ANLIS MALBRN, (3) Facultad de Ciencias.Veteriarias - UBA, (4) Facultad de Bromatologa - UNER, (5) I.A.LUTZ,SP,BRAZIL Algunos serotipos de Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) causan enfermedad humana grave como diarrea, colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH). Su reservorio son los rumiantes, principalmente el ganado bovino, aunque pueden aislarse de otras especies animales. Los alimentos de origen bovino constituyen su principal va de transmisin. STEC O178:H19 ha sido aislado del reservorio animal, de alimentos y casos clnicos, tanto en Argentina como en otros pases, aunque su reconocimiento como patgeno humano es reciente. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar genotpicamente cepas STEC O178:H19 de diversos orgenes aisladas en Argentina, y establecer su relacin clonal. Un total de 50 cepas aisladas de heces bovinas (30), carcasas bovinas en frigorficos (10), carne bovina (6), heces caninas (3), y SUH (1), detectadas en distintos relevamientos, fueron estudiadas. La caracterizacin genotpica de las cepas, previamente identificadas como STEC O178:H19 por serotipificacin, pruebas bioqumicas, ensayo de citotoxicidad en clulas Vero y Ridascreen ELISA, incluy la deteccin mediante PCR de los genes stx1, stx2, ehxA, eae y saa. Por PCR-RFLP se determinaron las variantes stx1, stx1c, stx2, stx2c (vh-a), stx2c (vh-b) y stx2dactivable. La relacin clonal se estableci por electroforesis en campos pulsados (PFGE) con la enzima de restriccin XbaI. Todas las cepas fueron eae negativas, y 22 (44%) fueron positivas para ehxA y saa. Treinta (60%) cepas portaron stx2, y las otras 20 (40%) stx1/stx2. La combinacin de los factores de virulencia gener 11 perfiles genotpicos: stx2c (vh-a) (30%), stx1/stx2/ehxA/saa (22%), stx2d2activable (18%), stx1/stx2dactivable/ehxA/saa (16%), y stx2/stx2c(vh-a), stx2NT, stx2c(vh-a)/stx2c(vh-b), stx2c(vh-b), stx2dactivable/ stx2d2activable/ehxA/saa, stx2dactivable/ehxA/saa, stx1/ stx2d2activable/ehxA/saa (2% cada uno). El 22% de las cepas presentaron genotipos con mayor potencial patognico, entre ellas cepas aisladas de SUH (1), materia fecal bovina (6), carcasas bovinas (3) y carne bovina (1). Por XbaI-PFGE, se obtuvieron 32 patrones diferentes con 69% de similitud, 28 cepas se agruparon en 10 clusters (#I a #X) con 2 a 4 cepas cada uno, mientras que 22 cepas mostraron patrones nicos. En el cluster #III se agruparon dos cepas, una aislada de un caso de SUH y la otra de una carcasa bovina, que presentaron idntico perfil gentico (stx1/
O34 - 27562 CARACTERIZACIN GENOTIPICA DE AISLAMIENTOS DE Yersinia enterocolitica RECUPERADOS EN ARGENTINA MORONI, M; PICHEL, M; VIAS, MR; BINSZTEIN, N; TERRAGNO, R
Servicio Enterobacterias, Departamento Bacteriologa, INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Introduccin: Yersinia enterocolitica (Y.e.) est obteniendo cada vez ms reconocimiento como un patgeno transmitido por alimentos de importancia para la salud humana. La ubicuidad de este microorganismo y su capacidad de crecer a temperaturas de 4 C en carnes y productos lcteos hace que sea un microorganismo de preocupacin. Pero no todos los aislamientos causan enfermedad; las cepas patgenas para el hombre son las portadoras de los factores de virulencia: virF de localizacin plasmdica y los factores cromosmicos ail (locus de invasin) y yst (toxina termoestable). La ubicacin en un plsmido del factor virF hace necesario buscar otros marcadores cromosmicos como ail, y yst para establecer la virulencia de los aislamientos. Objetivos: Determinar los biotipos de Y.e. circulantes en Argentina y la presencia de factores de virulencia en aislamientos provenientes de humanos y de alimentos. Materiales y Mtodos: Se analizaron 47 aislamientos conservados en la coleccin del Laboratorio Nacional de Referencia, obtenidos entre los aos 1982 y 2010, provenientes de humanos (n=22); de alimentos, cerdo y derivados, pollo, huevo y vacunos (n= 23) y de ambiente (n=2). Estos aislamientos fueron identificados por pruebas bioqumicas y se determinaron los biotipos por las siguientes pruebas: fermentacin de xilosa, trehalosa, sorbita, salicina y sacarosa, hidrlisis de esculina y produccin de indol. Se determin la presencia de los genes de
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stx2dactivable/ehxA/saa) y patrn de macrorestriccin (AREXSX01.0157). Los clusters V (AREXSX01.0323), VI (AREXSX01.0320), VIII (AREXSX01.0326), y IX (AREXSX01.0324) agruparon cepas aisladas de carne picada y ganado bovino. Las cepas STEC O178:H19 estudiadas presentaron un perfil de virulencia con potencial patognico para el hombre, fundamentalmente las cepas portadoras de ehxA y stx2dactivable.La tipificacin por PFGE mostr la clonalidad de aislamientos de distintos orgenes, evidenciando la importancia que implica su control para las autoridades de Salud Pblica no solo a nivel de establecimientos elaboradores de alimentos sino tambin en reservorios animales.
O37 - 27824 DISEO DE UN EQUIPO RADIANTE DE UV-C Y ACCION DE LA RADIACION SOBRE CONIDIOS CON DIFERENTES CONTENIDOS DE MELANINA. BASILICO, JUAN CARLOS; CHIERICATTI, CAROLINA; BAISETTO, MARIANELA; ZAPATA DE BASILICO, MARIA L
Facultad de Ingeniera Qumica, Universida Nacional Del Litoral Las radiaciones UV-C son comnmente usadas para control ambiental, sin embargo se han realizado pocos estudios sistemticos sobre la influencia de la energa radiante frente a mohos con diferente contenido de melanina. Se construy un equipo a escala de laboratorio formado por 2 lmparas de 254,3 nm (TUV15 WT8, Philips) ubicadas en paralelo a 5 cm entre ambas. Se midi la Emitancia radiante expresada en mili watts. cm-2 (mW. cm2) a diferentes alturas, con un radimetro (IL1700 Inter Light, USA) con un sensor con filtro NS254 con difusor W N11187. El diseo del equipo permite medir a diferentes distancias de las lmparas (2-20 cm) la Energa radiante en Joules (J), pudindose variar el factor tiempo y tipo de superficies a irradiar. Se obtuvieron niveles mximos y mnimos de Emitancia radiante (4,02 - 0.50 mW.cm2). Se estudiaron en una primera etapa 2 especies contaminantes frecuentes de la industria alimentaria zonal. Alternaria alternata, con alto contenido de melanina en las paredes de sus conidios y Geotrichum candidum, con artroconidios de paredes finas y hialinas, irradindolas sobre superficies de plstico (P) y aluminio (A). Se parti de cultivos en fase exponencial y se prepararon suspensiones de conidios ajustando las concentraciones a 106 conidios/mL en Tween 20 (0,1% en agua estril). Se distribuyeron 0,1 mL de las suspensiones en las superficies de P y A de 5 cm2 c/u, por triplicado, tanto para los controles como para las superficies a irradiar. Se estudiaron diferentes tiempos (1-40 min) y distancias de la fuente de irradiacin (2-20 cm). Para lograr una reduccin de 3log10 con una Emitancia de 3,99 mW. cm2, para G. candidum fue necesario irradiarlo 2 min (1,176 J); en cambio para A. alternata fueron necesarios 40 min (9,576 J). La accin de UV-C result fuertemente dependiente de la presencia o no de melanina en las paredes conidiales, ya que fue necesario una radiacin 20 veces superior, para disminuir el mismo nmero de log10, para A. alternata que para G. candidum. Por otra parte no se observ diferencia de comportamiento para los conidios sobre las superficies plstico y aluminio.
O36 - 27582 SELECCIN DE LEVADURAS VNICAS PROVENIENTES DE LA PROVINCIA DE MENDOZA. BERNARDI, MARCELA (1,2); SANCHEZ, MARIA LAURA (1,2); MARTINENGO, NORA(1)
(1) Universidad Nacional de Cuyo, (2) FCA El uso de levaduras seleccionadas asegura el mantenimiento de las propiedades sensoriales tpicas de los vinos producidos. Existe una tendencia a seleccionar levaduras provenientes de las mismas regiones en donde se realizarn las vinificaciones debido a que estn preadaptadas al contexto agroclimtico. Es por esto que su uso como iniciadoras de las fermentaciones vnicas resulta ser una valiosa herramienta para la diferenciacin del vino, a la vez que protege a la biodiversidad microbiana propia de cada ecosistema vitcola. El objetivo del siguiente trabajo fue seleccionar cepas de levaduras para uso enolgico mediante mtodos simples aplicables en laboratorios bsicos de enologa. La Facultad de Ciencias Agrarias, UNCuyo, cuenta con un cepario de levaduras provenientes de diferentes viedos de Departamentos vitcolas de la Provincia de Mendoza: Lujn de Cuyo, Tupungato, Maip y Junn. Se tom una muestra representativa de 40 levaduras. En cada levadura se evaluaron caractersticas tecnolgicas que establecen la eficiencia de la misma en el proceso de fermentacin y cualitativas que ayudan a determinar la composicin qumica y la participacin en las cualidades sensoriales de los vinos. Las primeras incluyen tolerancia al etanol, poder de fermentacin, cintica de fermentacin, resistencia el anhdrido sulfuroso, formacin de sedimento, factor killer, preferencia de fermentacin: glucosa y fructosa, produccin de espuma, formacin de film o anillo, uso de alcohol como fuente de carbono y dentro de las segundas se evala actividad -glucosidasa, formacin de cido actico y produccin de cido sulfhdrico. Los ensayos se realizaron por triplicado. Los parmetros estadsticos descriptivos fueron calculados en el programa InfoStat, para el agrupamiento de datos se utiliz el programa NTSyS 2.0 mediante el coeficiente UPGMA. Del anlisis de los resultados se concluy que la levadura nmero 523.4 de de Junn, es adecuada para la produccin de vinos tintos ya que presenta escasa produccin de acidez voltil y compuestos sulfurados, baja formacin de espuma (menor a 2mm), resiste elevadas concentraciones de alcohol (15%), asegura fermentaciones limpias debido a su capacidad de formar sedimento, proporciona fermentaciones alcohlicas elevadas por su alto poder de fermentacin (media=22,31), expresa actividad -glucosidasa y tolera 100 ppm de anhdrido sulfuroso. Las levaduras 9.1, 16.1 y 6.2 de Tupungato son adecuadas para la obtencin de vinos blancos ya que poseen carcter killer, toleran graduaciones alcohlicas mayores a 15%, producen enzimas glicosidsicas, forman escasa cantidad de compuestos sulfurados, resisten 100 ppm de anhdrido sulfuroso, no forman film o anillo y sedimentan rpidamente. La cepa 525.4 de Junn es apta para fermentaciones lentas o reanudacin fermentativa debido a su preferencia en el consumo de fructosa, adems es resistente al alcohol (15) y al anhdrido sulfuroso (100 ppm). Solamente cuatro de cuarenta cepas fueron seleccionadas luego de la aplicacin de ciertos criterios enolgicos para ser utilizadas en fermentaciones a mayor escala. Estas cepas pueden ser empleadas para lograr objetivos particulares de vinificacin como obtener vinos tintos o blancos aromticos o como reactivadotes en caso de fermentaciones detenidas.
O38 - 28119 ACCION DE AG-MORDENITA SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS CONTAMINANTES DE ALIMENTOS. ZAPATA DE BASILICO, MARIA L; CHIERICATTI, CAROLINA(1); BASILICO, JUAN CARLOS (1); ZAMARO, JUAN MANUEL(2)
(1) Facultad de Ingeniera Qumica, Universida Nacional Del Litoral, (2) INCAPE CONICET U.N.L Las zeolitas son aluminosilicatos hidratados cristalinos con propiedades de adsorcin y de intercambio inico. Se ha reportado actividad antibacteriana de partculas de Ag-zeolita, vinculado probablemente tanto a la hidrofobicidad/hidrofilicidad de la zeolita, como a las caractersticas del in plata intercambiado. El objeto de este trabajo es evaluar Ag-zeolitas en el control de hongos habitualmente encontrados en la industria alimentaria. Esto es una primera etapa en el desarrollo de superficies antifngicas basadas en recubrimiento de Ag-zeolitas sobre materiales de uso habitual en equipos y envases de la industria alimentaria. Se utiliz mordenita (Mor), con una relacin Si/Al= 6,5, intercambiada con Ag+. Para la obtencin de Ag-Mor intercambiada (Ag-Mor-I), se trat la zeolita con solucin de AgNO3, logrndose una concentracin de Ag de 14% p/p (equivalente a una solucin 4mM de Ag). Posteriormente, con porciones del slido intercambiado, se obtuvo Ag-Mor oxidada (Ag-Mor-O) por calcinacin a 350 C en flujo de aire y Ag-Mor reducida (Ag-Mor-R) mediante exposicin a radiacin con UV-C con una emitancia de 3,99 mWcm-2 durante 1 h. En esta etapa se estudiaron Geotrichum candidum, Zygosaccharomyces rouxii y Debaryomyces hansenii aislados e identificados a partir de alimentos contaminados. Se estudiaron
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2 condiciones diferentes de cultivo por las caractersticas fisiolgicas que presentan estas especies: extracto de malta agar (MEA) a 28 C y un medio con menor actividad acuosa (aw) Czapek extracto de levadura 20% sacarosa (CY20S) a 36 C, cultivados hasta 7 das. Se midi, por sextuplicado, el crecimiento radial de las colonias de los cultivos sobre ambos medios sin agregado alguno (Controles), con Mor, solucin de AgNO3 1, 2 y 4 mM, y con Ag-Mor-I, Ag-Mor-O y Ag-Mor-R. Se observ que Mor sin plata incorporada, no presenta actividad antifngica con los microorganismos estudiados. Para G. candidum (MEA-28 C) se observ una reduccin en el crecimiento de las colonias para el in Ag+ en solucin (1, 2 y 4 mM), del 80, 90 y 95% respectivamente. AgMor-I present una inhibicin similar a Ag+ 4 mM, mientras que Ag-Mor-O inhibi el 98% y Ag-Mor-R solo permiti la germinacin del microorganismo. Asimismo Z. rouxii y D. hansenii tuvieron un comportamiento similar, mostrando una fuerte accin inhibitoria en todos los casos. En los ensayo con CY20S a 36 C no se observ efecto inhibitorio ni para las 3 concentraciones de solucin de AgNO3 ni para los 3 estados de Ag-Mor. De acuerdo a los resultados obtenidos resulta promisorio el uso de Ag-zeolitas (y en particular Ag-mordenita), para el control de hongos contaminantes de alimentos, pero los resultados obtenidos muestran una dependencia con la composicin del medio de cultivo utilizado.
cual concuerda con lo reportado en bibliografa. Por western blot se detect la presencia de LPS de Brucella spp. La preincubacin con 10 mg/ml de VME de Brucella spp. inhibi en un 91, 95 y 74 % la secrecin de TNF- en la lnea macrofgica humana THP-1 frente a los estmulos de LPS, Pam3cys y flagelina respectivamente y disminuy levemente la de IL-8 en la lnea bronquial humana Calu-6 aunque en esta ltima las diferencias no alcanzaron significacin estadstica. Las VME de Brucella spp. reducen la secrecin de TNF- inducida por agonistas de TLR en macrfagos humanos.
O40 - 27226 TRANSLOCACIN DEL EFECTOR SOPB DE Salmonella typhimurium EN EL GANGLIO LINFTICO MESENTRICO DURANTE LA SALMONELLOSIS MURINA. GIACOMODONATO, MONICA (1); NOTO LLANA, MARIANGELES (1); SARNACKI, SEBASTIAN (1); CERQUETTI, M CRISTINA (1).
(1) Centro de Estudios Farmacolgicos y Botnicos (CEFYBO)Depto. Microbiloga, Facultad de Medicina - UBA Los sistemas de secrecin tipo tres (SSTT) de Salmonella typhimurium codificados por las islas de patognesis 1 y 2 (SPI-1 y SPI-2) son esenciales para la invasin de clulas epiteliales y para la replicacin en macrfagos, respectivamente. El SSTT-1 participa en eventos tempranos de la infeccin (ej: invasin) mientras que el SSTT-2 media procesos post invasivos (ej: replicacin). En contraposicin a este modelo, algunos efectores SPI-1 se inducen tardamente. En este trabajo se analiz la expresin y translocacin de SopB in vitro, en cultivos celulares e in vivo durante los estadios tardos de la infeccin sistmica murina. Con este objetivo, se construy una cepa de S. typhimurium con el efector de inters marcado con el epitope FLAG (SopB::3xFLAG) mediante la tcnica de epitope tagging. Dicha cepa se incub bajo condiciones de cultivo que imitan el ambiente intestinal (condiciones SPI-1) y bajo condiciones que imitan el ambiente intracelular (condiciones SPI-2). Los pellets y los sobrenadantes de los cultivos bacterianos se utilizaron para analizar la expresin y secrecin de SopB, respectivamente mediante western blot utilizando anticuerpos anti FLAG. Como era de esperar la expresin de SopB se observ bajo condiciones SPI-1. Este efector tambin se sintetiz bajo condiciones intracelulares. Sin embargo, la secrecin slo tuvo lugar bajo condiciones que imitan el ambiente intestinal. Para los experimentos in vivo, monocapas de clulas HEp-2 y ratones BALB/c fueron inoculados con la cepa SopB-FLAG con una m.o.i de 10:1 mediante un ensayo de proteccin a genta-micina e intraperitonealmente con una dosis de 1E +07 UFC /ratn, respectivamente. Las clulas infectadas y los ganglios linfticos mesentricos (GLM) murinos fueron procesados a las 24 hs post infeccin de manera de obtener una fraccin insoluble (protenas expresadas en las bacterias infectantes) y una fraccin soluble (protenas translocadas al citosol). El anlisis de las protenas bacterianas mediante western blot revel que SopB se expresa en bacterias que se encontraban infectando las clulas HEp-2 y el GLM a las 24 hs post infeccin. Interesantemente, se observ la translocacin tarda de SopB al citosol de dichas clulas. En resumen, nuestros hallazgos indican que la expresin y translocacin de SopB in vivo no se encuentra limitada a los primeros estadios de la infeccin tal como se ha descripto previamente.
MICROBIOLOGA GENERAL
O39 - 27092 VESCULAS DE MEMBRANA EXTERNA DE Brucella abortus MODULAN LA RESPUESTA MACROFGICA. POLLAK, CORA (1); DELPINO, M VICTORIA (1); BALDI, PABLO (1).
(1) Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Profesor Ricardo A. MARGNI (IDEHU) Las variantes lisa y rugosa de Brucella spp. liberan espontneamente vesculas de membrana externa (VME) que contienen protenas de membrana, LPS y otros componentes. Las VME son liberadas por diversas bacterias gram-negativas y consisten en un subconjunto de la membrana externa y componentes solubles del periplasma. Este sistema de secrecin extracelular participa en la estrategia utilizada por bacterias patgenas para modular la respuesta inmunolgica y perjudicar la funcin celular del husped. Se desconoce si factores de virulencia asociados a VME tienen efectos citotxicos dentro de las clulas invadidas. La interaccin de las VME de Brucella spp. con clulas de mamfero y su impacto sobre la funcin celular no han sido abordados. Se ha demostrado que la lnea macrofgica humana THP-1 presenta una reducida produccin de TNF- en respuesta a la infeccin con distintas especies del gnero Brucella y que existe algn factor liberado por Brucella spp. al espacio extracelular que inhibe la expresin de TNF- en macrfagos humanos activados por LPS de E. coli. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es comenzar a caracterizar el efecto de las VME de Brucella spp. vinculado a la inhibicin de la secrecin de TNF- sobre macrfagos estimulados con distintos agonistas de receptores de tipo toll (TLR) (LPS, Pam3cys, flagelina). Tambin se investigaron efectos similares sobre otros tipos celulares que pueden ser infectados por Brucella spp. (clulas bronquiales humanas). Las VME fueron obtenidas a partir de la concentracin del medio de cultivo en el que crecieron bacterias B. abortus S2308. Luego se les cuantificaron protenas por el mtodo de Bradford. Las VME fueron analizadas por SDS-PAGE y western blot revelado con anticuerpos contra LPS de Brucella spp. y adems visualizadas por microscopa electrnica. Los ensayos de inhibicin de la secrecin de citoquinas fueron realizados mediante la co-incubacin de las clulas (lnea monoctica humana THP-1 y bronquial humana Calu-6) con diferentes concentraciones de VME durante 4 horas, seguido de un lavado y un estmulo de la secrecin de 24 horas de duracin con LPS de E. coli (agonista de TLR-4), Pam3cys (agonista de TLR2) o Flagelina (agonista de TLR-5). La cuantificacin de las citoquinas secretadas fue realizada por ELISAs comerciales. De acuerdo a la observacin de las VME a travs de microscopa electrnica, se calcularon los dimetros de las vesculas, siendo las ms pequeas de 30 nm y las ms grandes de 178 nm, lo
O41 - 27733 Giardia intestinalis INDUCES ALTERATIONS ON STRUCTURAL AND FUNCTIONAL COMPONENTS, IN A CULTURED HUMAN ENTEROCYTE-LIKE CACO-2/TC7 CELLS MODEL. HUMEN, MARTIN(1,2,3); LIEVIN LE MOAL, VANESSA(1,2); SERVIN, ALAIN(1,2); PEREZ, PABLO(3,4)
(1) INSERM. UMR-S756, Pars, France, (2) Universit Paris-Sud 11, Facult de Pharmacie. Pars, France, (3) Centro de Investigacin y Desarrollo en Criotecnologa de Alimentos. CIDCA-CCT La Plata, CONICET, Argentina, 4) Ctedra de Microbiologa. Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata. Argentina. Giardia intestinalis is the etiological agent of giardiasis, one of the most frequent intestinal diseases in both developing and de-
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veloped countries, leading to severe and protracted diarrhea. The mechanisms used by G. intestinalis to induce structural and functional alterations in host epithelia still remain unknown. In the present work, we sought to gain insight in the specific and directed alterations on structural and functional components induced by the parasite in host epithelia, and the activation of relevant signaling pathways. In order to evaluate the cellular damage of infected enterocytes, we assessed different markers related to cellular architecture (F-actin cytoskeleton and intermediate filaments, cytokeratin 18), distribution of brush border enzymes (sucraseisomaltase (SI), dipeptidylpeptidase IV (DPP IV) and the fructose transporter GLUT 5), as well as distribution of intercellular junctional proteins and adhesion molecules (occludin, claudin-1 and E-cadherin). Transferrin receptor and focal adhesion kinases (FAK) were also analyzed. Immunofluorescence labeling of fixed post-confluent Caco-2/TC7 cells was conducted and samples were examined by confocal microscopy. In addition, we assessed, by a pharmacological approach, phosphorilation processes and cell signaling pathways activated upon infection. Cells incubated in the presence or absence of different inhibitors of signaling pathways, were lysated and analysed by SDS-PAGE. Detection of occludin, mitogen-activated protein kinases (ERK1/2, p38 and JNK) and Srckinases was carried out by western blot. Parasite-epithelia interaction promoted the disorganization of the apical F-actin cytoskeleton, and leads to an uneaven distribution of the brush borderassociated sucrase-isomaltase and fructose transporter, GLUT5. Nevertheless, DDPIV and the transferrin receptor did not modify their distribution in the surface of the enterocyte. Furthermore, the epithelial barrier was altered as the result of dramatic rearrangements in the pattern of tight junction-associated proteins, occludin and claudin-1. In addition, Giardia infection promoted the phosphorylation of occludin in Caco-2/TC7 cells. Cytokeratin 18, FAK and E-cadherins were not modified. G. intestinalis induced a strong activation of the mitogen-activated protein kinase Erk1/2 in a PI3-kinase dependent manner, and a moderate activation of JNK and p38. No activation of Src kinase was observed. Our findings are relevant to understand the mechanisms associated with Giardia induced intestinal disorders. Noteworthy a generalized cellular damage did not occurred and only specific signalling cascades are activated. These results disclose novel aspects of the pathogenesis of Giardia infection that could contribute to improve our understanding of this parasite in the context of preventive and therapeutic strategies.
parativa e inmunoblots. Materiales y mtodos: Para la evaluacin de la expresin diferencial de protenas entre la cepa vacunal Tohama y un aislamiento circulante representativo de la poblacin bacteriana circulante, se emple la tcnica de electroforesis 2D acoplada a Espectrometra de Masa del tipo Maldi Tof. En base a los datos obtenidos de la aplicacin de esta metodologa se realizaron inmunoblots empleando antisueros obtenidos de las protenas diferenciales identificadas. En particular, se emple el antisuero anti una protena efectora del sistema de secrecin tipo III (TTSS), Bsp22. Las determinaciones se realizaron sobre protenas extracelulares, obtenidas de sobrenadantes de cultivos lquidos de 16 aislamientos clnicos de nuestra coleccin obtenidos durante el perodo 1969-2008. Se realizaron ensayos comparativos con las cepas vacunales. Resultados: En los estudios protomicos comparativos se detect la expresin diferencial de 13 protenas en el aislamiento clnico, ausentes en la cepa vacunal Tohama I. Entre ellas se detect una protena estructural del TTSS. Mediante ensayos de inmunoblot empleando antisuero especfico se detect la expresin de una protena efectora del TTSS, la protena Bsp22, slo en los aislamientos clnicos estando ausente en cepas vacunales y de referencia. Conclusiones: En este trabajo demostramos la expresin funcional del TTSS en aislamientos clnicos de nuestro pas y no en las cepas vacunales. Dicha expresin parecera ser una caracterstica inherente de los aislamientos clnicos y podra responder al hecho de que no han sufrido la adaptacin a las condiciones de cultivo prolongado en el laboratorio. El TTSS permite la liberacin de protenas efectoras de origen bacteriano dentro de clulas eucariotas. En patgenos en particular, dichas protenas constituyen factores de virulencia capaces de alterar distintas funciones de las clulas del husped.
O43 - 28064 MOTILITY, VIRULENCE AND BIOFILM FORMATION BY THE HUMAN PATHOGEN Acinetobacter baumannii ARE AFFECTED BY BLUE LIGHT. MUSSI, ALEJANDRA; GADDY, JEN(2); CABRUJA, MATIAS(1); VIALE, ALEJANDRO(1); RASIA, RODOLFO(1); ACTIS, LUIS(2)
(1) Instituto de Biologa Molecular y Celular de Rosario- CONICET, Rosario, Argentina. (2) Miami University, Oxford, USA. Introduction: Light is a ubiquitous environmental signal that many organisms sense and respond to by modulating their physiological responses accordingly. While this is an expected response among phototrophic microorganisms, the ability of chemotrophes to sense and respond to light has become a puzzling and novel issue in bacterial physiology, particularly among bacterial pathogens. In bacteria, response to light has been ascribed to the production of photoreceptors, with those harboring the blue-light sensing using flavin (BLUF), the light, oxygen or voltage (LOV) or the photoactive yellow protein (PYP) domains being the most prevalent. Objectives: The unexpected finding made in our laboratory that A. baumannii strain ATCC 17978 motility is regulated by blue light at 24 C prompted us to further characterize the microorganism response to this signal. Specifically, since motility affects biofilm formation in other bacteria, we decided to study whether blue light also affects biofilm formation on abiotic surfaces. Moreover, we tested the effect of blue light on the ability of A. baumannii to interact with eukaryotic cells using the Candida albicans model. Finally, we evaluated whether the BLUF domain-containing product of A1S_2225 gene is involved in photoresponse both by genetics and biophysical means. Materials and Methods: Motility was evaluated in swimming plates containing 0.3% agarose, which were inoculated on the surface with bacteria lifted from LB agar overnight cultures using sterile sticks, and incubated in the dark or blue light. For biofilm assays, one milliliter of LB broth was inoculated in glass tubes with 0.01 ml of an overnight shaking culture, and incubated for four days stagnantly at 24 C either in darkness or blue light. A A1S_2225 mutant was generated by insertion of a kanamycin resistance cassette. Besides, a His6-tagged derivative of the product of this gene was overexpressed in E. coli, purified and used to obtain spectra in the dark or light. Results: Motility and formation of biofilms and pellicles were observed only when bacterial cells were incubated in darkness, while inhibited under
O42 - 28048 CARACTERIZACIN FUNCIONAL DE AISLAMIENTOS CLNICOS ARGENTINOS DE Bordetella pertussis MEDIANTE ESTRATEGIAS INMUNO-PROTEMICAS EN COMPARACIN CON CEPAS VACUNALES EN USO. HOZBOR, DANIELA (1); GAILLARD, MARA EMILIA (1); BOTTERO, DANIELA (1); FRITZ, MARIANA (1); CASTUMA, CELINA (1); GRAIEB, AUGUSTO (1); FINGERMANN, MATIAS (1).
(1) Instituto de Biotecnologia y Biologia Molecular (IBBM), Facultad de Ciencias Exactas UNLP Antecedentes: La tos convulsa o pertussis es una enfermedad respiratoria agudacausada por Bordetella pertussis. Esta enfermedad inmunoprevenible ha sido fuertemente controlada a partir de la implementacin de planes de inmunizacin masiva en los aos 50. Sin embargo, en los ltimos 20 aos se ha detectado un resurgimiento sostenido de la misma an en poblaciones altamente inmunizadas. Hoy pertussis constituye la 5ta causa de muerte infantil causada por una enfermedad inmunoprevenible. Para explicar esta resurgencia se han propuesto diferentes causas, entre otras: mejoras en la vigilancia y metodologa diagnstica, prdida de la inmunidad inducida por las vacunas y disminucin de la eficacia de la vacuna debido a una variacin antignica del agente causal. Respecto de esta ltima, se ha demostrado en distintos pases la circulacin de bacterias que divergen a nivel genmico de las cepas vacunales en uso. El conocimiento del impacto funcional de dicha divergencia, sin embargo es escaso. Objetivos: Evaluar la relevancia funcional de la divergencia antignica a travs del anlisis de expresin diferencial de protenas mediante el empleo de estrategias del tipo protemica com-
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blue light. In contrast, the killing of Candida albicans filaments was enhanced when co-cultured with bacteria under light. These bacterial responses depend on the expression of the A. baumannii ATCC 17978 A1S_2225 gene, which codes for an 18.6-kDa protein that contains an N-terminal BLUF domain and lacks any detectable output regulatory signals. Spectral analyses of purified recombinant protein showed its ability to sense light by a red shift upon illumination. Therefore, the A1S_2225 gene, which is conserved among several members of the Acinetobacter genus, was named blue-light sensing A (blsA). Interestingly, we show that temperature plays a role in the ability of A. baumannii to sense and respond to light via the BlsA photoreceptor protein. Conclusions: This work shows the unexpected ability of the opportunistic pathogen A. baumannii to sense and respond to blue light by differentially expressing cellular functions that could play a role in its virulence properties.
O45 - 28095 ROL DEL FACTOR SIGMA ALTERNATIVO DE LA ARN POLIMERASA SIGMA B EN LA FORMACIN DE BIOFILMS EN Bacillus subtilis. COSTAS, JUAN PABLO(1); PEDRIDO, MARIA EUGENIA(1); GOI, ANIBAL(1); COULLERY, ROMINA(1); STEIL, LEIF(2); VOLKER, UWE(2); GRAU, ROBERTO(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional de Rosario. Laboratorio de Microbiologa Bsica y Aplicada. CONICET-Rosario. (2) Greifswald University, School of Medicine, Germany El desarrollo de biofilms representa un modo de vida ampliamente utilizado por los microorganismos y la forma ms frecuente de crecimiento de los mismos en la naturaleza. Bacillus subtilis, modelo de estudio de diferenciacin celular y adaptacin al estrs en bacterias gram-positivas, es capaz de formar esporas y biofilms. Para responder a las diversas fluctuaciones del medio, B. subtilis induce la expresin del factor alternativo de la ARN polimerasa Sigma B, el cual dirige la expresin de unos 200 genes. La prdida de Sigma B conduce a un incremento en la sensibilidad de la bacteria ya que Sigma B le confiere a la misma una proteccin general, defensiva y/o preventiva frente a mltiples tipos de estrs. En este trabajo nos formulamos el interrogante sobre qu rol tendra Sigma B en el desarrollo del biofilm en B. subtilis? Mediante la utilizacin de fusiones reporteras transcripcionales lacZ dependientes de Sigma B y el empleo de fusiones transcripcionales PsigB-gfp y microscopia de fluorescencia, pudo determinarse que sigB es expresado durante la formacin del biofilm. La expresin del mismo fue transciente y tuvo lugar en etapas avanzadas del desarrollo del biofilm. La ausencia de actividad de Sigma B condujo a una notable disminucin en la viabilidad de la poblacin celular del biofilm, lo cual seala un nuevo e importante rol de esta protena reguladora para el mantenimiento de la homeostasis dentro del biofilm maduro. Cepas mutantes en sigB fueron capaces de formar biofilms con dimensiones mayores a las que presentan los biofilms desarrollados por las cepas silvestres, lo cual sugiere que Sigma B est participando en la regulacin negativa del crecimiento y desarrollo del biofilm. Mediante mediciones de actividad -galactosidasa de fusiones reporteras transcripcionales a diferentes promotores de genes de inters, por su participacin en el comportamiento multicelular de B. subtilis, descubrimos que en cepas deficientes en Sigma B, la expresin de sinR, que codifica para el regulador maestro (negativo) del desarrollo del biofilm, se encuentra notablemente disminuida. Debido al rol opuesto (positivo) que SinR ejerce sobre la motilidad de B. subtilis decimos extender nuestro estudio y analizar qu ocurre con este fenmeno en cepas sigB. Ensayos de movilidad sobre placas con agar 0,7% permitieron descubrir que Sigma B contribuye a regular, positivamente, los fenmenos de movilidad tipo swarming y sliding en B. subtilis. Es posible proponer un modelo sobre el desarrollo de biofilms en B. subtilis, que podra ser extendido a patgenos gram-positivos que expresan ortlogos a Sigma B, donde Sigma B cumplira un rol clave en la eleccin del momento ms adecuado entre dos estilos de vida diferentes para la bacteria: (i) quedarse en el lugar y formar estructuras comunitarias estables como los biofilms (regulados negativamente por Sigma B) (ii) inducir el swarming y/o sliding para avanzar y colonizar otros hbitats a travs de induccin de la movilidad celular (regulada positivamente por Sigma B).
O44 - 28094 EL FACTOR TRANSCRIPCIONAL, ESPECFICO DE LA CLULA-MADRE, SPO0A VINCULA LA BIOGNESIS DE MEMBRANA CON LA ASIMETRA EN LA EXPRESIN GNICA DURANTE LA DIFERENCIACIN CELULAR EN Bacillus subtilis. RAMIREZ, WALTER(1); PEDRIDO, MARIA EUGENIA(1); LOMBARDIA, ESTEBAN(1); GRAU, ROBERTO(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional de Rosario. Laboratorio de Microbiologa Bsica y Aplicada. CONICET-Rosario La formacin de esporas en la bacteria gram-positiva B. subtilis constituye un modelo para el estudio de la diferenciacin celular en bacterias. Diferentes seales ligadas a la escasez de nutrientes impactan sobre la actividad de un sistema de dos componentes expandido, el Phosphorelay, que lleva a la activacin, por fosforilacin, del regulador de respuesta Spo0A. Una vez formado Spo0A-Pi la clula encaminada hacia la formacin de la espora (el esporangio) se divide asimtricamente generando dos clulas de diferente tamao y destino celular separadas entre s por un septum polar formado por dos membranas (interna y externa). La clula pequea (forespora) dar lugar a la espora madura, mientras que la clula ms grande (clula madre) estar encargada del proceso de maduracin y resistencia de la primera. La expresin gnica compartamentalizada es establecida primero en la forespora a travs de la activacin del factor sigma alternativo de la ARN polimerasa Sigma F por medio de la fosfatasa SpoIIE ubicada en el septum asimtrico. La razn por la cual SpoIIE no es capaz de activar a Sigma F del lado de la clula madre representa un misterio. En este trabajo, mediante ensayos in vitro e in vivo de sntesis de lpidos a partir de cultivos proficientes y deficientes en la sntesis de Spo0A marcados con acetato-C14, reportamos que Spo0APi re-activa durante la fase estacionaria la sntesis de cidos grasos, glicolpidos y fosfolpidos necesarios para la formacin de las membranas (interna y externa) de la espora. Spo0A-Pi reactiv, a nivel transcripcional, la expresin del opern que codifica el componente carboxilasa de la enzima acetil-CoA carboxilasa. Esta enzima cataliza el paso limitante de la sntesis de novo de cidos grasos: la formacin de malonil-CoA. La funcin reguladora del malonil-CoA como inductor negativo de FapR, el represor global de la sntesis de lpidos en bacterias gram-positivas, ubica a Spo0A-Pi como el regulador maestro de la sntesis de lpidos, vinculando los niveles de malonil-CoA con la actividad de FapR, durante la esporulacin. La sntesis mxima de lpidos durante la esporulacin coincidi con los estadios del desarrollo (T2 a T4) en que se produce la distribucin asimtrica de SpoIIE. La exclusin transciente de todos los genes involucrados en la sntesis de lpidos de la forespora inmediatamente despus de la formacin del septum asimtrico junto a la compartamentalizacin de Spo0A en la clula madre, sugiere que la sntesis de lpidos durante la esporulacin se produce exclusivamente en el compartimiento de la clula madre y que la misma podra tener un rol regulador. Avalando esta hiptesis descubrimos, por medio de fusiones reporteras fluorescentes, que la ubicacin de SpoIIE en el septum de esporulacin y su actividad fosfatasa compartamentalizada depende de una sntesis activa y compartamentalizada de lpidos.
O46 - 28155 MULTILOCUS SEQUENCE TYPING (MLST) PARA LA TIPIFICACIN MOLECULAR DE Anaplasma marginale. GUILLEMI, ELIANA (1); PRINCIPI, DARIO (1); DELFINO, SANTIAGO (1); WILKOWSKY, SILVINA (1); FARBER, MARISA (1); RUYBAL, PAULA (1).
(1) Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA). Para el estudio epidemiolgico de Anaplasma marginale (bacteria intraeritroctica del orden de los Rickettsiales) es necesario contar con un sistema de tipificacin altamente reproducible y discriminativo. Solo dos marcadores moleculares han sido descriptos y aplicados en este tipo de anlisis (filogeogrfico MSP4 y de genotipo MSP1). El objetivo de este trabajo fue desarrollar
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un esquema MLST para lograr obtener una descripcin ms precisa de la diversidad genotpica de este patgeno en bovinos infectados. Los genes seleccionados para este esquema fueron: dnaA, ftsz, groEL, lipA, recA, secY y sucB. Estos genes estn distribuidos en el genoma, son de copia nica y son selectivamente neutros de acuerdo a la relacin dN/dS menor a uno. Se verific la especificidad para A. marginale de todos los iniciadores utilizando ADN heterlogo. La variabilidad fue estudiada a travs del anlisis de SNPs (single nucleotide polymorphisms) de estos 7 fragmentos gnicos concatenados y se estableci un haplotipo o sequence type (ST) a la combinacin nica de alelos para estos 7 genes. Se analizaron los 5 secuencias genmicas disponibles (Saint Marie, Mississippi, Puerto Rico, Florida y Virginia), 2 aislamientos de E.E.U.U. (Oklahoma y South Idaho), 5 aislamientos argentinos de referencia (Mercedes, Virasoro, Salta, Rosali y Quitilipi) y 26 aislamientos de campo del norte argentino. Dichos aislamientos provienen de bovinos crnicamente infectados distribudos en la regin enzotica para la enfermedad. En un total de 38 aislamientos estudiados se obtuvieron 35 STs diferentes lo que indica que si bien los genes seleccionados son conservados, la variabilidad a nivel de SNPs es muy alta. El anlisis de los dendogramas para cada gen por Neighbour-Joining y Mxima Parsimonia mostr que no existe concordancia en la topologa de los rboles entre s. Esto sugiri la existencia de eventos de recombinacin intragnica, lo que fue posteriormente confirmado para los genes ftsz, recA y sucB utilizando el test de Mximo Chi Cuadrado con un p menor o igual a 0.05. A partir de esta comprobacin, se aplic un estudio de asociacin de STs utilizando el software eBurst V3. Como resultado de este anlisis se obtuvieron tres grupos, dos de los cuales se constituyeron con un ST fundador. Uno de estos dos grupos est conformado por STs de aislamientos norteamericanos y el otro por STs de aislamientos argentinos. Estos grupos no incluyeron 7 de los 35 STs obtenidos pudiendo deberse a la dispersin geogrfica de los aislamientos. Se estableci un esquema de tipificacin por secuenciacin multilocus para A. marginale de alto poder discriminatorio. Por medio de esta tcnica se pudieron establecer dos grupos pertenecientes a dos regiones geogrficas distantes. Por otra parte, los resultados obtenidos concuerdan con el anlisis genmico de las 5 cepas secuenciadas en donde se observ que A.marginale posee un core genmico altamente conservado y una alta tasa de variabilidad a nivel de SNPs. Esto ltimo respalda el uso del esquema MLST para el estudio de la dinmica poblacional de A.marginale.
segn R.Facklam (CMR 2002; 15:613-630) en base a: hemlisis en agar sangre ovina al 5%, sensibilidad a bacitracina, test de PYR, Voges-Proskawer, -glucuronidasa, acidez de manitol y sorbitol. Se ensay la sensibilidad a penicilina (PEN), eritromicina, clindamicina y vancomicina por mtodo de difusin (CLSI). Las muestras clnicas correspondieron a: sangre 17 (31%), piel y partes blandas (PPB) 15 (27,3%), pie diabtico 6 (11%), exudado de fauces 5 (9,1%), hueso 2 (3,6%), lquido sinovial 2 (3,6%), lquido abdominal 2 (3,6%), absceso de crnea 2 (3,6%), orina 2 (3,6%), otras 2 (3,6%). La infeccin fue monomicrobiana (MM) en 34 pacientes (62%) y polimicrobiana (PM) en 21(38%). Las comorbilidades asociadas fueron: diabetes (14%), infeccin por VIH (7%), neoplasia (9%), otros (25%), ninguna (10%) y desconocido (35%). De los 17 episodios de bacteriemias (BAC), 16 fueron MM y 1PM presentaron diagnstico presuntivo de: sindrome febril 11, sepsis 3, celulitis 6; sindrome febril+celulitis y/o lesiones de piel 3; sepsis+celulitis 1; mordedura de perro+celulitis1; 14/17episodios correspondieron a pacientes A que ingresaron al servicio de emergencia. Los tres pacientes H presentaban compromiso severo (neutropenia, carcinoma de prstata y mama, respectivamente). Todos los aislamientos de SDSE fueron sensibles a PEN y un 5,4% (3/55) present resistencia a macrlidos (fenotipo MLSb). En nuestro medio y en pacientes adultos la mayora de las infecciones por SDSE: * prevalecen en pacientes A y son MM, pero en un porcentaje importante son PM; * afectaron de forma similar en ambos sexos en un amplio rango de edades; * la BAC es la presentacin clnica ms frecuente, afecta a pacientes con todo tipo de co-morbilidades y en especial a los que padecen una enfermedad subyacente severa; * las infecciones de PPB ocupan el segundo lugar en prevalencia, seguidas por las de pie diabtico y farngeas. Todas las cepas son uniformemente sensibles a PEN y la resistencia a macrlidos es baja. Es necesario que se realice una correcta identificacin a nivel de especie de todos los estreptococos -hemolticos para tener un mejor conocimiento de los cambios epidemiolgicos y patognicos de las infecciones por SDSE.
O48 - 27210 - CITODIAGNSTICO DE TZANCK, UN ANTIGUO MTODO DIAGNSTICO FRENTE A NUEVOS DESAFOS. BIANCHI, MARIO HORACIO; SANTISO, GABRIELA M; LEHMANN, ERICA; WALKER, LAURA; ARECHAVALA, ALICIA; MAIOLO, ELENA; NEGRONI, RICARDO
Hospital Muiz. Buenos Aires Introduccin: en 1947 Tzanck public un trabajo cientfico donde se emplea la tcnica como mtodo diagnstico diferencial en lesiones ampollares. En la actualidad es til, adems, para el diagnstico en pacientes inmunocomprometidos donde los patrones de respuesta son aberrantes y desbordan los cnones de la medicina tradicional. Permite el diagnstico diferencial de enfermedades infecciosas y/o inmunolgicas con manifestaciones cutneas, tales como herpes y las ocasionadas por Molluscum contagiosum, leishmaniosis, histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, malasseziosis, candidiasis, criptococosis, pnfigo, dermatitis de Duhring, estafilococias, estreptococias, sospecha de sfilis (presencia de clulas plasmticas), tuberculosis, etc. Tambin se pueden diagnosticar asociaciones mrbidas como herpes + histoplasmosis, herpes + pnfigo, etc. Objetivo: presentar los resultados obtenidos utilizando el citodiagnstico de Tzanck durante un perodo de 4 aos (2006-2009). Materiales y mtodos: previo a una limpieza de la zona con alcohol al 70%, el material se extrae con bistur descartable y se extiende sobre 2 o ms portaobjetos. En el caso de vesculas, ampollas o pstulas se realiza una incisin de la lesin y toma de muestra de la base; si se trata de lesiones erosivas se remueve la costra y se toma material de la base. Se colorea con Giemsa, Gram y/o Ziehl-Neelsen. Se observa al microscopio con aumentos de 100, 400 y 1000 X. Resultados: se realizaron 1304 escarificaciones de las siguientes localizaciones: piel 930 (71,3%), cavidad oral 185 (14,1%), genital 128 (9,8%) y perianal 62 (4,8%). Los resultados obtenidos de 1304 citodiagnsticos de Tzanck se presentan en la tabla

O47 27117- INFECCIONES POR Streptococcus dysgalactiae subespecie equisimilis EN PACIENTES ADULTOS EN UN HOSPITAL UNIVERSITARIO: ANALISIS DE 10 AOS. ROMERO, V; MONTERISI, A; AVILES, N; MOLLO, V; CARILLO, N; ROSSO, G; OCAA, V; GASPAROTTO, A; ROCCHI, M
Hospital de Clnicas. Crdoba Streptococcus dysgalactiae subespecie equisimilis (SDSE) pertenece al grupo de los estreptococos piognicos humanos, referidos comnmente como estreptococos -hemolticos grupo C y G. ltimamente, la patogenicidad de SDSE est siendo reconocida ya que causa un espectro de enfermedades que vara de infecciones superficiales de piel a formas invasivas severas asemejndose a las infecciones causadas por S. pyogenes. El objetivo de este estudio retrospectivo es proveer informacin epidemiolgica de las infecciones en adultos causadas por SDSE y estudiar la sensibilidad a los antibacterianos. Entre enero 2000 y diciembre de 2009 se estudiaron 55 aislamientos consecutivos (uno por paciente) de diferentes muestras clnicas, de 52 pacientes ambulatorios (A) (95%) y 3 hospitalizados (H) (5%), provenientes de 23 mujeres y 32 varones, con edades comprendidas entre 20 y 84 aos (media 50). La identificacin bioqumica se realiz
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Resultado Malassezia spp. Histoplasma spp. Candida spp. Paracoccidioides spp. Cryptococcus spp. Hifas de Eumycete
N (%) 59 (4,5) 56 (4,2) 18 (1,4) 17 (1,3) 5 (0,4) 3 (0,2)
Resultado Sincicios virales Molluscum contagiosum Clulas acantolticas Amastigotes de Leishmania spp. Asociaciones mrbidas Negativo
N (%) 170 (12,9) 86 (6,6) 82 (6,3) 17 (1,3) 9 (0,7) 782 (60,0)
(1) Laboratorio de Micologa y Diagnstico Molecular, Facultad Bioqumica y Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional del Litoral (2) Public Health Research Institute, University of Medicine and Dentistry of New Jersey, Newark, USA. (3) CONICET. Introduccin: las equinocandinas (caspofungina, micafungina y anidulafungina) inhiben la biosntesis de la pared celular a travs de la inhibicin no competitiva del complejo 1,3--D glucansintasa (CGS). En C. albicans, la resistencia clnica a estas drogas ha sido asociada a mutaciones en las regiones denominadas hot spots del gen FKS1, que codifica la fraccin cataltica (Fks1p) del CGS que es la diana de las equinocandinas. La incidencia de la resistencia a estas drogas aumenta ao a ao. Objetivos: conocer la capacidad de diseminacin de C. albicans resistentes a equinocandinas en la comunidad mediante el estudio del impacto de las mutaciones en FKS1 en la actividad de la CGS y en la virulencia. Materiales y mtodos: se utilizaron 2 pares isognicos de C. albicans identificados por Multilocus Sequencing Typing (MST). Cada par estaba formado por una cepa sensible (S) y otra resistente (R) a las equinocandinas con distintas sustituciones de aminocidos en Fks1p (S645F y S645P). La evaluacin de la sensibilidad a las equinocandinas se realiz por triplicado siguiendo el protocolo del CLSI M27-A3. La actividad enzimtica y las propiedades cinticas de los CGS purificados fueron determinadas por un ensayo de polimerizacin de glucanos y usando grficos de Lineweaver-Burk, respectivamente. Para determinar si las mutaciones en FKS1 alteran la virulencia de C. albicans, se utiliz un modelo murino de candidiasis diseminada subletal. Se utilizaron inculos simples (106 UFC/ratn de las cepas S o R) e inculos mixtos (5x105 UFC de la cepa S + 5x105 UFC de la cepa R/ratn). La carga fngica total se evalu a los 4 das post-infeccin por recuento de UFC/gr rin. Por ltimo, se utiliz PCR en tiempo real multiplex con molecular beacons para evaluar cuanti y cualitativamente las infecciones nicas y mixtas. La extraccin de ADN a partir de cultivos y de riones infectados por C. albicans se realiz por el mtodo de fenol cloroformo isoamlico. Los primers para amplificar y secuenciar los FKS1 y los molecular beacons utilizados para cuantificar diferencialmente la capacidad de infeccin de cada una de las cepas se disearon a partir de la secuencia de GenBank n XM_716336. Resultados: las cepas R presentaron CIMs 16 a 64 veces mayores que las cepas S para todas las equinocandinas. Los CGS aislados de las cepas R mostraron una menor velocidad de catlisis (< Vmax) y necesitaron al menos 700 veces ms droga para ser inhibidas. Las cepas R presentaron una capacidad de infeccin in vivo levemente menor que las S cuando se inocularon individualmente (P = 0.04). En cambio, cuando se utiliz el modelo de infeccin mixto, la cepa S prevaleci claramente sobre la R (P < 0.0001). Estos resultados demuestran que las mutaciones en FKS1 confieren resistencia cruzada a las equinocandinas pero que concomitantemente reducen la actividad del CGS. sto trae aparejado un costo sobre la vitalidad y virulencia de las cepas R que podra limitar el impacto clnico y epidemiolgico de estas cepas.
Conclusiones: est tcnica permiti orientar el diagnstico en el 40% de los casos, 32,5% correspondieron a infecciones, en tanto que las enfermedades ampollares autoinmunes se evidenciaron en el 6,3% de los casos. La tcnica de Tzanck es una herramienta til como complemento del diagnstico clnico presuntivo. Es rpida, de fcil implementacin y econmica y en muchas ocasiones puede ser el primer hallazgo diagnstico. Supera en la relacin costo/beneficio a otras tcnicas ms complejas y novedosas. Permite minimizar la toxicidad y el costo de la politerapia antimicrobiana. El requisito ms importante es contar con personal capacitado para realizar la toma y la observacin de las muestras.
O49 27316 - ENFERMEDAD CAUSADA POR MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS EN LA REGIN NORTE DEL GRAN BUENOS AIRES. IMPERIALE, BELEN(1); DI GIULIO, BEATRIZ(2); ZUMARRAGA, MARTIN(3); MORCILLO, NORA(1)
(1) Hospital Cetrngolo, (2) Hospital Cordero, (3) INTA Introduccin: las micobacterias no tuberculosas (MNT) han emergido en las ltimas dcadas como patgenos frecuentemente asociados a la co-infeccin por el VIH. El aislamiento y la identificacin de especies encontradas en muestras clnicas as como la relacin entre el aislamiento y la enfermedad es muy importante en sitios donde la prevalencia de enfermedad causada por MNT es desconocida. Objetivo: describir la carga y la importancia clnica de MNT en pacientes de la regin norte del gran Buenos Aires (BAN), los perfiles de droga-resistencia en relacin con los esquemas teraputicos aplicados y el grado de xito de los mismos. Materiales y mtodos: aislamientos clnicos de 2205 casos ocurridos durante el perodo de estudio 2004-2009. Los aislamientos fueron identificados mediante pruebas bioqumicas y moleculares (PRA: PCR- RFLP). La sensibilidad bacteriana se determin por medio de los mtodos colorimtrico y de proporciones en Middlebrook 7H11. Resultados: en total 2118 (96.0%) casos fueron causados por Mycobacterium tuberculosis y 87 (4.0%) por MNT, 42,0% mujeres, 44,3% co-infectados con el VIH. La identificacin se complet en 74 (85.1%) de los aislamientos de MNT. Doce pacientes (13,8%) presentaron ms de un episodio de micobacteriosis. Las especies predominantemente encontradas fueron: M. avium (35.1%), M. intracelullare (16.2%), M. gordonae y M. kansasii (5.4%); M. fortuitum (4.1%); M. simiae, M. sherrissi y M. flavescens (2.7%); M. chelonae, M. vaccae, M. xenopi, M. nonchromogenicum I, M. scrofulaceum, M. lentiflavum y M. kumemamotonense fueron encontrados en un caso cada uno. Seis (8.1%) de los aislamientos mostraron patrn indefinido de PRA y de 3 no se obtuvieron resultados interpretables. Infecciones mixtas por micobacterias fueron encontradas en 4 casos; en 3 pacientes diferentes episodios con distintas especies fueron confirmadas. Las pruebas de sensibilidad a drogas mostraron aproximadamente 80.0% de los aislamientos sensibles a macr-lidos, 70,0% a aminoglucsidos y fluoroquinolonas y 60,0% a rifabutina. La evaluacin del tratamiento fue realizada en 62 casos (71.3%): 64.5% curaron o finalizaron la terapia, 19.4% murieron, 6.5% permanecen todava bajo tratamiento, 8.0% recayeron y 1.6% de los casos se perdieron. Estos resultados mostraron que la deteccin de MNT como agentes etiolgicos es clnicamente importante aun en sitios con alta incidencia de tuberculosis. Esta enfermedad afecta a pacientes con o sin co-infeccion con VIH y la terapia apropiada pudo disminuir la muerte y recada.
O51 27543 - RELACIN GENTICA DE AISLAMIENTOS DE Shigella sonnei ASOCIADOS A TRES BROTES COMUNITARIOS EN RO NEGRO. BRENGI, SP(1); VIAS, MR(1); NOBILE, M(2); BLAZQUEZ, N(3); DE BUNDER, S(3); ML, ALVAREZ(4); ARELLANO, O(5); CAFFER, MI(1); BINSZTEIN, N(1); PICHEL, M(1)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn, (2) Red de Laboratorios de Ro Negro, (3) Hospital R. Carrillo. Bariloche, (4) Hospital A. Zatti. Viedma, (5) Ministerio de Salud. Ro Negro Shigella spp. es uno de los principales patgenos bacterianos asociados a diarrea en Argentina. Se transmite de persona a persona, por ingesta de alimentos o aguas contaminadas o por vectores, especialmente en condiciones de hacinamiento y falta de higiene. En el marco de la Red de Laboratorios de Diarreas y Patgenos Bacterianos de Transmisin Alimentaria, el Laboratorio Nacional de Referencia recibe aislamientos para su caracterizacin y subtipificacin. En 2006 se estableci una Base de Datos Nacional de perfiles genticos obtenidos por electroforesis en campo pulsado (PFGE) de aislamientos de S. sonnei de casos
O50 27410 - LA RESISTENCIA A LAS EQUINOCANDINAS REDUCE LA VIRULENCIA DE Candida albicans. GAMARRA, SOLEDAD (1); PERLIN, DAVID S (2); GARCIA EFFRON, GUILLERMO (1, 3)
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espordicos y brotes. El objetivo de este trabajo es describir tres brotes causados por S. sonnei en diferentes localidades de la provincia de Ro Negro en 2008 y las relaciones genticas entre los aislamientos de los eventos. La relacin gentica se determin por PFGE con las enzimas xbaI y blnI segn el protocolo de PulseNet Internacional. Los perfiles genticos se analizaron con el programa BioNumerics (Applied Maths) aplicando el coeficiente de Dice y UPGMA. Se realizaron investigaciones epidemiolgicas para cada brote. Brote 1: se estudiaron 4 aislamientos de S. sonnei recuperados en Maquinchao entre febrero y marzo, perodo en que se registr un aumento en los casos de diarrea de 5 por semana a un mximo de 68. Brote 2: se estudiaron 18 aislamientos recuperados entre marzo y abril en Viedma, donde se registr un aumento en los casos de diarrea desde la semana epidemiolgica 1. Brote 3: se estudiaron 5 aislamientos recuperados en Los Menucos, donde el nmero de casos de diarrea entre marzo y abril se cuadruplic con respecto a 2007. Los resultados de PFGE permitieron identificar un mismo patrn de XbaIPFGE en 3 de 4 aislamientos de Maquinchao; otro en 11 de 18 aislamientos de Viedma y otro entre los 5 aislamientos de Los Menucos. Los restantes aislamientos de cada lugar estuvieron muy relacionados al patrn predominante correspondiente, sugiriendo que tambin eran parte del brote. A su vez, se encontraron subtipos genticos compartidos entre las localidades. Estos resultados se confirmaron por BlnI-PFGE Los resultados de PFGE sealan que los aislamientos de cada uno de los brotes podran derivar de una fuente comn de infeccin. La cercana temporal y la presencia de subtipos genticos iguales o muy relacionados en las tres ciudades sugieren la posible existencia de fuentes de infeccin comunes y/o vas de diseminacin del patgeno entre las localidades. Sin embargo, no se pudieron confirmar, ya que no se recuperaron aislamientos de posibles alimentos involucrados, incluyendo muestras de agua del Ro Negro y agua de red, que fueron sealadas como posibles fuentes en los estudios epidemiolgicos. Es necesario fortalecer la vigilancia de Shigella spp. en el pas a travs del desarrollo de mtodos ms sensibles para su deteccin en agua y alimentos y mediante la investigacin oportuna e integrada desde las reas de laboratorio, clnica y epidemiologa.
Supervivencia en agua post-smosis (AP) y en bao de dilisis (BD) (conteo de colonias en UFC/ml): genoespecie [A] tiempo 0= 3,85 x 108. A los 21 das en el AP= 4,2 x 108 y en el BD= 1,3 x 107. Genoespecie [B] tiempo 0= 4,3 x 107. A los 21 das en el AP= 8,5 x 107 y en el BD= 1,8 x 10 6. Genoespecie [C] tiempo 0= 3,7 x 108. A los 21 das en AP= 1,2 x 10 9 y en BD= 5 x 10 8. Se observaron diferencias muy significativas en la supervivencia tanto en el BD (p< 0,0007) como en el AP (p <0,005, Kruskal-Wallis). Se observ un efecto inhibitorio de las sales en el BD (disminucin de 1 log del inculo inicial) entre las 4, 8 y 24 h con respecto al AP. Conclusiones. 1- Se destaca la extraordinaria habilidad de supervivencia de las 3 genoespecies tanto en condiciones ptimas como en los medios hostiles. 2- La sumatoria de la capacidad de formar biofilm, resistir la desecacin sin alcanzar bactericidia hasta los 12 das y mantener el potencial replicativo tanto en el agua post-smosis como en el bao de dilisis hasta por lo menos 21 das, permite comprender la permanencia de estos microorganismos en los distintos componentes de la red de hemodilisis. 3- Estos resultados demuestran la necesidad de mantener un riguroso control de la calidad del agua de todo el sistema, para minimizar los posibles reservorios de estos u otros microorganismos.
O53 27882 - ESTUDIO MULTICNTRICO DE CRIPTOCOCOSIS EN ARGENTINA ESTADO DE AVANCE DEL PRIMER AO. BOSCO BORGEAT, ME (1); TAVERNA, CG (1); MURISENGO, O (1); MAZZA, M (1); CANTEROS, CE (1); DAVEL, G (1); GECA (2)
(1) Departamento Micologa, INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrn, (2) Grupo de Estudio de Criptococosis en Argentina En una encuesta realizada en la Red Nacional de Laboratorios de Micologa de Argentina en el ao 2004 se observ que la criptococosis ocupaba el segundo lugar entre las micosis profundas diagnosticadas. Con el objetivo de conocer la frecuencia y distribucin de las especies del complejo Cryptococcus neoformans asociadas a infecciones humanas en Argentina, comenz en abril de 2009 un estudio prospectivo de 2 aos de duracin. En el presente trabajo se comunican los resultados obtenidos hasta mayo de 2010. Adhirieron al estudio 102 laboratorios distribuidos en todo el pas quienes realizaron los aislamientos, recolectaron los datos clnicos y los derivaron al Laboratorio Nacional de Referencia (Departamento Micologa, INEI). Los datos fueron volcados a una base de datos ad hoc para su posterior anlisis. Se recolectaron 268 aislamientos provenientes de 190 pacientes. La provincia que registr mayor cantidad de aislamientos fue Buenos Aires (104) seguido de CABA (51), Crdoba (26), Jujuy (17), Santa Fe (15), Chaco (12), Tucumn (8), Corrientes (4), Formosa (3), La Pampa (2), La Rioja (2), Catamarca (1) y Mendoza (1). Diez laboratorios no registraron aislamientos. Los pacientes fueron en su mayora VIH positivo (78,4%), en menor proporcin tuvieron enfermedades autoinmunes (5,3%) y otras enfermedades debilitantes del sistema inmune (13,1%). Slo 3,2% no tuvieron enfermedad de base aparente. La edad de los pacientes oscil entre 11 y 86 aos (mediana 38). El 65% fue de gnero masculino. En el laboratorio de referencia los aislamientos fueron fenotipificados y genotipificados mediante PCR-RFLP del gen URA5 y se determin el tipo sexual por PCR. De los 268 aislamientos, 264 fueron C.neoformans y 4 C.gattii. Estos ltimos se recuperaron de LCR; 3 de una mujer de 41 aos VIH positiva y 1 de un varn de 42 aos sin enfermedad de base aparente. Se genotipificaron 153 aislamientos: el 90,9% fue C.neoformans var. grubii, 83,7% genotipo VNI (n=128) y 7,2% VNII (n=11). Un aislamiento fue C.neoformans var. neoformans VNIV. Nueve aislamientos (5,8%) fueron hbridos VNIII: 8 de ellos hbridos VNII-VNIV y el restante VNI-VNII-VNIV. Entre los aislamientos de C.gattii 3 fueron VGI (de un mismo paciente) y uno VGII. De los 155 aislamientos en los que se determin el tipo sexual 99,3% fue Alfa (n=154) y uno a/Alfa que correspondi al hbrido VNI-VNII-VNIV. La distribucin de genotipos y tipos sexuales coincide con la descripta a nivel mundial. Es la primera vez que se encuentra en Argentina una cepa hbrida VNI-VNII-VNIV, tipo sexual a/Alfa. Esta podra ser un triploide, sin embargo, otros estudios son necesarios para confirmarlo. La presencia de C.gattii genotipo VGII, den-
O52 27549 - COMPLEJO Burkholderia cepacia: FITNESS Y HEMODILISIS. DE PAULIS, AN (1); FERNANDEZ, DA (1); SANTOIANNI, JE (1); GUTIERREZ, MA (1); CASTAEDA, NC (2); CENTRON, D (2); PREDARI, SC (1)
(1) Instituto de Investigaciones Mdicas A. Lanari-UBA; (2) Facultad de Medicina-UBA. Introduccion: las genoespecies del complejo Burkholderia cepacia (CBC) son patgenos oportunistas con capacidad para sobrevivir en el medio ambiente. Objetivo: ante la recuperacin de genoespecies del CBC en el agua de red, en el agua postsmosis, en el bao de dilisis y en los hemocultivos de algunos pacientes en hemodilisis se decidi realizar el estudio del fitness de 3 aislamientos del CBC. Dos provenientes de pacientes con bacteriemia intradilisis: 1 genoespecie B. cepacia RAPD I [A]; 1 genoespecie B. cepacia RAPD II [B] y una genoespecie B. lata RAPD III [C] aislada del agua post-smosis. Se evalu y compar el comportamiento de las mismas. Materiales y mtodos: para determinar el fitness se utilizaron los siguientes modelos in vitro: 1. Crecimiento planctnico, 2. Formacin de biofilm, 3. Supervivencia a la desecacin, 4. Supervivencia en agua post-smosis y 5. Supervivencia en el bao de dilisis (Pope y col, 2010). Al modelo de desecacin se adicion el posterior cultivo en caldo para evidenciar la bactericidia del proceso. Resultados.1- Crecimiento planctnico: los valores de las constantes de velocidad de crecimiento (K) y tiempo de generacin (G) fueron para [A] = 0,46 y 0,65; [B] = 0,41 y 0,73 y [C] = 0,60 y 0,50 (p > 0,9999, KruskalWallis). 2- Los 3 aislamientos fueron productores de biofilm (p > 0,9999, Kruskal-Wallis). 3- Desecacin: se parti de un inculo promedio = 2,4 x 1010 UFC/ml. A las 24 h la genoespecie [C] no resisti el proceso (0 UFC/ml), mientras que las genoespecies [A] y [B] dejaron de ser viables a las 48 h (p= 0,8693, Kruskal-Wallis). Sin embargo, la bactericidia se logr recin a los 12 das. 4 y 5-
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tro del cual se han descripto cepas hipervirulentas, reafirma la importancia de vigilar los genotipos circulantes en nuestro pas de manera de poder anticiparnos a la aparicin de posibles brotes epidmicos. Estos resultados preliminares nos permiten tener un panorama de la epidemiologa de la criptococosis y de la distribucin de especies y genotipos del complejo C.neoformans en Argentina.
O54 28135 - EMERGENCIA DE BACILOS GRAM-POSITIVOS QUE OCASIONAN INFECCIONES URINARIAS CON UROCULTIVO FALSAMENTE NEGATIVO. CITTADINI, ROXANA (1); BARBERIS, CLAUDIA (2); MAZZEI, JUAN (1); ALMUZARA, MARISA (2); RAMIREZ, MARIA SOLEDAD (3); FEINSILBERG, ALEJANDRO (1); VAY, CARLOS (1,2)
(1) Sanatorio Mater Dei. CABA, (2) Instituto de Fisiopatologa y Bioqumica Clnica. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA. (3) Departamento de Microbiologa, Inmunologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. U.B.A. La litiasis renal o vesical, los procesos neoplsicos (tumor renal, cncer de vejiga), las anomalas del tracto urinario (obstruccin ureteral o plvica, estenosis uretral, divertculos uretrales) y el tratamiento antibitico previo, entre otras, son causas de piuria abacteriana; no obstante, la infeccin urinaria (IU) debida a microorganismos fastidiosos de muy lento desarrollo, puede simular un cultivo negativo. Se describen 3 casos de IU por bacilos gram-positivos (BGP) exigentes: dos de los 3 pacientes gerontes eran de sexo masculino. Los 3 presentaron como antecedente, IU a repeticin y dos o ms sntomas tales como disuria, polaquiuria, dificultad en el comienzo de la miccin y/o incontinencia. Los sedimentos de la segunda porcin de la miccin de dos pacientes y de la orina tomada por cateterismo intermitente en otro, presentaron marcada leucopiocituria (> 5 leucocitos/campo 40X). En primera instancia, los cultivos en los medios de CLDE y CPS resultaron negativos. La coloracin de Gram en los 3 casos mostr la presencia de BGP (> 5/cpo 1000x). Las muestras fueron sembradas en agar sangre y agar chocolate con atmsfera de 5% de CO2 y en agar sangre en atmsfera anaerobia. Al 5 da desarrollaron en aerobiosis colonias puntiformes mientras que en anaerobiosis, las mismas presentaban mayor tamao. Los microorganismos fueron identificados fenotpica y genotpicamente como Bifidobacterium/Alloscardovia en 2 de los casos y Actinobaculum schaalii en el otro. Sendos aislamientos fueron sensibles a penicilina. El tratamiento con amoxicilina fue favorable en los tres pacientes y los urocultivos de control resultaron negativos. Se destaca la necesidad de realizar la coloracin de Gram sin excepcin en orinas con sedimento patolgico y cultivo negativo y la siembra en medios y atmsferas especiales con incubacin prolongada para detectar la presencia de patgenos urinarios emergentes. Dado el lento desarrollo y las caractersticas fenotpicas similares a las de los gneros Lactobacillus/Gardnerella/ Actinomyces es comn que estos agente se interpreten como microbiota genital habitual sin atribuirle su verdadero significado clnico.
cin. Compuestos recalcitrantes como hidrocarburos aromticos policclicos de alto peso molecular (HAPs con ms de tres anillos bencnicos), alcanos pesados (fraccin aliftica saturada, rango C30-C40) y fraccin saturada no resuelta, suelen permanecer despus de la biorremediacin en concentraciones superiores a los valores lmites exigidos por diferentes regulaciones. La utilizacin de hongos productores de enzimas ligninolticos constituye una alternativa complementaria para la biorremediacin de suelos con este tipo de contaminantes. En este estudio se presentan resultados de ensayos de bioestimulacin y bioaumentacin fngica para evaluar el potencial de la degradacin por hongos sobre un suelo contaminado con una matriz compleja de hidrocarburos del petrleo, rica en fracciones saturadas pesadas y HMW-PAHs, previamente biorremediado. Se aislaron e identificaron 19 cepas fngicas, la mayora de ellas pertenecientes a la divisin Ascomycota, que se emplearon como inculo fngico para bioaumentacin. Cepas de Fusarium oxysporium y Alternaria alternata presentaron actividad polifenoloxidasa (lacasa), capaz de oxidar compuestos aromticos sin necesidad de cofactores. Se realiz una caracterizacin qumica (GC-MS y GC-FID), microbiolgica (perfilado de genes ribosomales mediante DGGE) y ecotoxicolgica (Microtox) en diversos ensayos de biorremediacin. Usando bioaumentacin fngica se logr una degradacin de hidrocarburos totales del petrleo del 39,90% y de HAPs 86,03% a 28,27% en los compuestos de 3 a 6 anillos respectivamente, causando una disminucin de la toxicidad de los lixiviados del suelo (Microtox) y un cambio en las poblaciones eubacteriana y fngica, determinada por DGGE. Las diferencias con respecto a los ensayos de bioestimulacin demuestran las potenciales ventajas que ofrece la utilizacin de hongos para la biorremediacin de suelos con HMW-HAPs.
O56 - 27392 MICROBIODETERIORO DEL PATRIMONIO DOCUMENTAL DE ARCHIVOS DE ARGENTINA Y CUBA. GUIAMET, PATRICIA(1, 2, 6); LAVIN, PAOLA(1, 3, 6); BORREGO, SOFIA(4); PERDOMO, IVET(4); GOMEZ DE SARAVIA, SANDRA(1, 5, 6)
(1) INIFTA, Dto. de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP, CCT La Plata-CONICET, (2) Facultad de Ciencias Veterinarias, CONICET, (3) Facultad de Ciencias Exactas, CONICET (4) Laboratorio de Conservacin Preventiva, Archivo Nacional de la Repblica de Cuba, (5) Facultad de Ciencias Naturales y Museo, CICBA, (6) Universidad Nacional de La Plata Introduccin: El patrimonio documental est expuesto a factores extrnsecos e intrnsecos, los que pueden causar alteraciones fsicas, qumicas y/o biolgicas, las cuales inciden en su estado de conservacin. Entre los daos de carcter biolgico, el microbiodeterioro puede definirse como cambios indeseables en las caractersticas de un material, provocados por la actividad de microorganismos (bacterias y hongos), los cuales son capaces de adherir a diferentes sustratos formando biofilms. Estos afectan al acervo documental, constituido por materiales higroscpicos, como el caso del papel. En condiciones ambientales ptimas, la microbiota del aire puede coexistir con las colecciones de valor histrico y artstico sin causar grandes daos. Sin embargo, a medida que se producen cambios en las condiciones ambientales, los microorganismos pueden ejercer efectos negativos, tanto desde el punto de vista del microbiodeterioro como de la patogenicidad. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue evaluar el microbiodeterioro del material documental y la calidad del aire en cuatro archivos: i) Archivo Histrico del Museo de La Plata, ii) Archivo del Colegio de Escribanos de la Provincia de Buenos Aires, iii) Archivo de Geodesia, Ministerio de Obras Pblicas, ubicados en La Plata, Argentina y iv) Archivo Nacional de la Repblica de Cuba (ARNAC), ubicado en La Habana, Cuba. Metodologa: Las muestras del aire fueron obtenidas por la tcnica de sedimentacin en agar y mediante hisopado en los documentos. Los recuentos microbianos, los aislamientos de los microorganismos y su posterior tipificacin se realizaron sembrando en medios de cultivo apropiados. La formacin de biofilms fue ensayada sobre el sustrato (papel) inoculndolo con Bacillus sp., Scopulariopsis sp., entre otros, a diferentes tiempos de contacto. Las muestras se analizaron mediante MET (microscopa electrnica de transmisin)
MICROBIOLOGA AGRICOLA Y AMBIENTAL

O55 - 27383 UTILIZACIN DE HONGOS PARA LA BIODEGRADACIN DE HAPs Y FRACCIONES PESADAS REMANENTES EN SUELOS DESPUS DE LA BIORREMEDIACIN. MEDAURA, MARIA CECILIA(1); GUIVERNAU, MIRIAM(2); PRENAFETA BOLDU, FRANCESC (2); MORENO VENTAS, XABIER(3); ERCOLI, EDUARDO(1); VIAS CANALS, MARC(2)
(1) Universidad Nacional de Cuyo, Mendoza (2) GIRO, (3) Universidad de Cantabria, Espaa La presencia de compuestos de estructura compleja y concentraciones extremas, as como la diversidad en las condiciones climticas y heterogeneidad de caractersticas texturales en suelos contaminados con petrleo, hace que muchos de los procesos de biorremediacin actuales se vean limitados en su aplica-
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y MEB (microscopa electrnica de barrido). Resultados: En los archivos i) ii) y iii), los gneros ms comnmente aislados fueron Aspergillus y Penicillium. En el ARNAC estos gneros predominaron en los meses secos y Cladosporium prevaleci en los meses ms lluviosos. Sobre los documentos el gnero predominante fue Bacillus sp. Staphylococcus sp. fue detectado en dos de los cuatro archivos investigados. Ensayos de laboratorio permitieron comprobar a travs de MEB y MET la formacin de biofilms y los daos estructurales producidos sobre el papel por los microorganismos aislados de los archivos. Algunos de los gneros fngicos aislados, Aspergillus, Alternaria, Fusarium y Penicillium pueden actuar como alergenos que afectan la salud de las personas que trabajan en archivos.
O58 - 27842 ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA DEL BACTERIOPLANCTON EN AGUAS DEL MAR ARGENTINO MEDIANTE EL MTODO DE PIROSECUENCIACIN 454 TAG. PERESSUTTI, SR(1); HOZBOR, MC(1); COSTAGLIOLA, MC(1); ARTIGAS, F(2)
(1) Instituto Nacional de Investigacin y Desarrollo Pesquero (INIDEP), Mar del Plata, Argentina, (2) Universit Lille Nord de France, Universit du Littoral Cte dOpale, Wimereux, France. Las tcnicas metagenmicas, basadas en el anlisis de fragmentos de ADN de microorganismos ambientales, representan herramientas poderosas para analizar la estructura de los ecosistemas microbianos. Dentro de ellas, la pirosecuenciacin ribosomal tag (tecnologa 454, Roche), basada en la secuenciacin y anlisis de cientos de pequeos fragmentos del 16S rRNA, brinda informacin detallada de la diversidad microbiana, detectando y cuantificando tanto los miembros ms abundantes de la comunidad como aquellos minoritarios, escasamente recuperados por cultivos tradicionales o clonacin y secuenciacin. El presente estudio muestra los primeros resultados sobre diversidad y abundancia relativa bacteriana, por pirosecuenciacin, en una estacin marina permanente de estudios ambientales (3828S-5741W) y en otra del estuario del Ro de la Plata (3610,9S-5523,9W). En ambos sitios los recuentos bacterianos determinados por DAPI (46- diamino-2fenil-indol) fueron del orden de 106. Dentro del dominio Bacteria se encontraron ms de 4.600 secuencias nicas a partir de 36.188 amplicones de tags, generando 280 filotipos. Adems, en el dominio Archaea se detectaron cerca de 2.700 secuencias nicas a partir de ms de 47.700 tags, definiendo slo 5 filotipos diferentes. Las curvas de rarefaccin no alcanzaron totalmente la fase plateau, demostrando la gran complejidad en la diversidad bacteriana. Sin embargo, el elevado nmero de secuencias nicas indic una adecuada cobertura de muestreo. En arqueas, las curvas se vuelven asintticas revelando la eficiencia del muestreo. El ndice de similitud de Jaccard fue de 0,6 en bacterias y de 0,2 en arqueas, indicando mayor diferencia entre las bacterias en ambos sitios. Los anlisis taxonmicos revelaron que la diversidad en el estuario fue superior que en el ambiente marino. Los filotipos ms dominantes en el sitio marino fueron Bacteroidetes, Flavobacteriaceae, Proteobacteria-Gammaproteobacteria, Proteobacteria Rhodobacteriaceae y Proteobacteria Rickettsiales SAR11; mientras que en el estuario predominaron Pseudoalteromonadaceae Pseudoalteromonas, Proteobacteria Gammaproteobacteria, Proteobacteria Shewanella, Proteobacteria Rickettsiales SAR11. Los 2 filotipos de arqueas encontrados en mayor proporcin fueron Archaea Euryarchaeota y Archaea Crenarchaeota. Las secuencias tag ms numerosas representaron taxones caracterizados previamente, aunque tambin se hallaron filotipos de baja abundancia que forman parte de la biosfera rara, an no explorada. Estos microorganismos pueden tener un rol clave, constituyendo un banco de reserva con el potencial de volverse dominantes en respuesta a cambios ambientales. Este trabajo ha sido importante para determinar la eficiencia del muestreo y la identificacin exhaustiva de comunidades microbianas en estos ambientes acuticos. Asimismo, brinda una base para futuros estudios dirigidos a detectar variaciones en la estructura de las comunidades en respuesta a cambios ambientales locales y globales.
O57 - 27420 DESARROLLO DE CULTIVOS HETEROTRFICOS DE MICROALGAS EN ALTA DENSIDAD PARA LA PRODUCCIN DE ACEITE UNICELULAR. SUEN, ELISA(1); MARQUEZ, VANINA(1); SELUY, EDUARDO(2); BECCARIA, ALEJANDRO(1)
(1) Laboratorio de Fermentaciones, Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas, UNL, Santa Fe, Argentina, (2) LESSEL SH, Glvez, Santa Fe, Argentina Introduccin: El cido docosahexaenoico (DHA) es un cido graso poliinsaturado (PUFA) omega-3, que posee reconocidos efectos benficos para la salud humana. Crypthecodinium cohnii, microalga marina heterotrfica capaz de acumular aceites con alto contenido de DHA y bajo contenido de otros PUFAs, es un microorganismo adecuado para su obtencin, destinada a la industria alimenticia, farmacutica y nutracutica. Objetivos: Optimizar la composicin de un medio de cultivo para la obtencin de altas densidades celulares y la acumulacin de aceite unicelular. Implementar el medio optimizado en el desarrollo de cultivos en biorreactor. Materiales y mtodos: Se realizaron cultivos de C. cohnii ATCC 30772 en placas policubetas. Se tomaron muestras a diferentes tiempos para la determinacin de biomasa -mediante densidad ptica (DO) a 492 nm- y lpidos totales (LT) intracelulares -por espectroscopia de fluorescencia-. Se aplicaron diseos factoriales completos para la evaluacin del efecto y seleccin de los siguientes factores: sales de mar, hidrolizado de casena, extracto de levadura y fuentes de carbono (glucosa, glicerol, acetato de sodio y etanol). Para la optimizacin de la composicin del medio se emple un diseo central compuesto. Adems, se realizaron cultivos en un biorreactor tanque agitado (1 L), operado en modo batch, empleando un medio descripto en la bibliografa (control) y el medio optimizado. Resultados: Para los rangos de concentraciones estudiados, la glucosa (G) fue la fuente de carbono que permiti alcanzar mayores DO respecto a las otras fuentes ensayadas. Este nutriente y el extracto de levadura (YE) fueron los factores que presentaron efectos significativos (p<0,05) sobre la DO y la velocidad de crecimiento. Mediante la aplicacin del diseo central compuesto se obtuvieron los modelos que describen los efectos de estos ingredientes para un nivel de confianza del 95%: DO = 2,98 + 0,35 * YE 0,36 * YE; LT (URF/cl) = 0,0005427 + 0,000005433 * G - 0,0001823 * G. Finalmente, aplicando la funcin deseabilidad se establecieron las concentraciones ptimas de G, YE y sales de mar. En el cultivo realizado en el medio optimizado se verificaron los valores de DO y LT predichos por el modelo. Adems, en este medio, se intensificaron los rendimientos de biomasa y contenido celular de lpidos respecto del control, en 6,5 y 1,6 veces, respectivamente; segn los resultados obtenidos en el biorreactor. La velocidad especfica de crecimiento fue similar: 0,024 y 0,027 1/h, en el medio control y optimizado, respectivamente. La glucosa result ser la fuente de carbono ms adecuada para la obtencin de altas densidades celulares en cultivos de C. cohnii. Tanto esta fuente de carbono como el extracto de levadura tuvieron una incidencia significativa sobre el rendimiento de los cultivos. Se pudieron establecer las concentraciones ptimas de estos componentes con las que se maximizaron la produccin de biomasa y lpidos. Las predicciones de los modelos fueron validadas experimentalmente en los cultivos. Los resultados obtenidos pudieron reproducirse en cultivos en biorreactor.
O59 - 27941 ANLISIS DE PIROSECUENCIACIN PARA CARACTERIZAR LAS POBLACIONES BACTERIANAS EN SUELOS SOMETIDOS A DIFERENTES CONDICIONES DE MANEJO BAJO RGIMEN DE SIEMBRA DIRECTA. FIGUEROLA, E L M(1); GUERRERO, L D(1); WALL, L G(2); ERIJMAN, L(1)
(1) INGEBI-CONICET, (2) Universidad Nacional de Quilmes - R. Sanz El presente estudio se realiz en el marco del proyecto interdisciplinario BIOSPAS (www.biospas.org), cuyo objetivo general es identificar indicadores biolgicos de calidad de suelo. Los microorganismos del suelo participan en funciones de vital importancia para la sustentabilidad de los agroecosistemas, tales como
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la descomposicin y mineralizacin de materia orgnica, el ciclado de nutrientes y la modificacin de la estructura edfica. Los mtodos de secuenciacin masiva de fragmentos variables del ADNr 16S permiten el estudio de la diversidad microbiana con una cobertura que supera en tres rdenes de magnitud la de los mtodos moleculares tradicionales. El muestreo se llev a cabo en junio de 2009. Se seleccionaron 4 localidades a lo largo de una lnea oeste-este en la zona agrcola ms productiva de la Argentina: Bengolea (Crdoba), Monte Buey (Crdoba), Pergamino (Bs As) y Viale (Entre Ros). En cada localidad se tomaron muestras por triplicado de la fraccin entre 0-10 cm de profundidad para los 3 tratamientos: 1- Ambiente Natural (AN): ambiente natural con mnima actividad antrpica, Ej.: reserva natural, montes, parques. 2Malas Prctias Agrcolas en Siembra Directa (MP): campos manejados con mnima rotacin o monocultivo y deficiente nutricin. 3Buenas Prcticas Agrcolas (BP): Manejo permanente en sistema de siembra directa con rotacin intensiva, fertilizacin de reposicin, manejo integral de plagas, malezas y enfermedades, incluyendo conceptos bsicos de Agricultura Certificada. Sobre ADN extrado se amplificaron las regiones variables V1+V2+V3 del ADNr 16S del dominio Bacteria. Cada uno de los triplicados fue procesado independientemente y mezclados antes del anlisis. Las muestras correspondientes a cada sitio y tratamiento fueron etiquetadas por medio de un fragmento adicional de 12 bases presente ambos cebadores (27F-538R), con el objeto de secuenciarlas simultneamente en formato multiplex (GS-FLX Platinum, Macrogen). La pirosecuenciacin gener un total de 398832 secuencias de ms de 100 b (promedio 390 b). El anlisis bioinformtico se realiz con los pipelines del Ribosomal Database Project y PANGEA. En todas las muestras los Phyla dominantes resultaron ser Proteobacteria y Actinobacteria, con abundancias entre 25 y 58% y 15 y 50% respectivamente. Dentro de estos, las clases predominantes fueron Actinobacteria (13-35%) y Alfaproteobacteria (1138%). A este nivel no se detectaron diferencias significativas (<alpha 0,005) entre tratamientos o entre sitios. Las abundancias obtenidas para Phylum y Clase fueron confirmadas utilizando primers especficos por PCR cuantitativo. A nivel Familia, el anlisis de correspondencia cannica (CCA) indica un agrupamiento de las muestras por sitio. Sin embargo, en algunos casos, la presencia y/ o abundancia de ciertos grupos bacterianos a distintos grados de resolucin taxonmica resultan caractersticas del rgimen de manejo del suelo. Estos resultados, confirmados por PCR cuantitativo utilizando cebadores especficos, indica la presencia de potenciales indicadores bacterianos de calidad de suelo.
Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, UNT, (4) Universidad del Norte Santo Toms de Aquino. El lindano, uno de los insecticidas ms utilizado en el mundo, es un compuesto muy txico y persistente que ocasiona graves problemas de contaminacin de agua y suelo. Dicho plaguicida fue detectado en la provincia de Tucumn, en concentraciones superiores a las permitidas. El empleo de actinomycetes y exudados radiculares de plantas para que lleven a cabo procesos de biorremediacin y fitorremediacin, son una buena alternativa para la descontaminacin de estos ambientes. En tal sentido, Streptomyces sp. M7 posee capacidad para crecer en lindano y removerlo del medio de cultivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de exudados radiculares de plantas de maz, sobre el crecimiento y capacidad de remocin de lindano por Streptomyces sp. M7. Los exudados radiculares fueron obtenidos desde plantas cultivadas en solucin de Hoagland y agua estril (Luo et al. 2006) y posteriormente liofilizados. Las determinaciones de carbono orgnico y azcares totales en las muestras de exudados, fueron realizadas segn la metodologa descripta por Mingorance et al. (2007) y Dubois et al. (1956), respectivamente. Streptomyces sp. M7 fue cultivada en medio mnimo (MM) (1 g/L), suplementado con lindano (1,66 mg/L), exudados radiculares y/o glucosa (0,8 g/L). Previamente a la inoculacin, los exudados liofilizados fueron resuspendidos en agua bidestilada y esterilizados por filtracin. El crecimiento microbiano fue evaluado como peso seco. La determinacin de lindano residual en los cultivos se realiz mediante cromatografa gaseosa. Resultados. Los exudados de plantas de maz presentaron una composicin de 40,0 mg de carbono orgnico y 41,6 mg de hidratos de carbono, por g de exudado liofilizado, indicando que la mayor parte del carbono orgnico provena de azcares. El crecimiento de Streptomyces sp. M7 en MM suplementado con diferentes fuentes de carbono y los porcentajes de plaguicida removido detectados en cada condicin, se observan en la Tabla.
Fuente de carbono Lindano y exudados Lindano Lindano y glucosa Exudados Glucosa Peso seco (mg/L DS) 18,4 9,0 5,3 4,8 31,5 7,7 10,8 7,8 41,7 7,1 Lindano removido (% DS) 30,7 0,7 18,5 1,7 10,4 1,2
O60 - 28028 EFECTO DE LOS EXUDADOS RADICULARES DE PLANTAS DE MAZ EN LA REMOCIN DE LINDANO POR LA CEPA DE ACTINOMYCETES NATIVA Streptomyces sp. M7. ALVAREZ, A(1,2); BENIMELI, C(1,4); SESTO CABRAL, ME(3); AMOROSO, MJ(1,3,4)
(1) PROIMI-CONICET. Av. Belgrano y Pje. Caseros. San Miguel de Tucumn, (2) Facultad de Ciencias Naturales e IML, UNT, (3)
Se puede concluir que Streptomyces sp. M7 fue capaz de remover mayores concentraciones de plaguicida del medio de cultivo, cuando ste fue suplementado con exudados radiculares de plantas de maz. Aunque el crecimiento microbiano alcanz su valor mximo en glucosa, el porcentaje de lindano removido fue bajo en esta condicin. El empleo de exudados radiculares abre un nuevo camino en el uso de los actinomycetes en procesos de biorremediacin.
XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010 - Posters
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POSTERS
LUNES 18/10/2010
P1 - 27129 EVALUACIN DEL EFECTO PROTECTOR DE UN EXTRACTO ACUOSO DE SOJA FERMENTADO FRENTE AL DAO OXIDATIVO. MARAZZA, JA (1); NAZARENO, MA (2); GIORI, GS DE(1,3); GARRO, MS(1)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET) (2) Instituto de Ciencias Qumicas, Facultad de Agronoma y Agroindustrias, Universidad Nacional de Santiago del Estero. (3) Ctedra de Microbiologa Superior. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumn (UNT) En condiciones de estrs oxidativo, se generan radicales txicos que provocan la oxidacin del ADN y protenas causando daos en los tejidos. Estos cambios predisponen al desarrollo de diferentes patologas crnicas como la enfermedad de Alzheimer, entre otras. El control de la formacin de estos radicales libres mediante el uso de antioxidantes es una estrategia utilizada para prevenir enfermedades asociadas al estrs oxidativo. Numerosos antecedentes indican que las isoflavonas (IS), compuestos fenlicos presentes en soja, poseen propiedades antioxidantes y atribuyen a la forma agliconada como responsable de la actividad biolgica. Sin embargo, la concentracin de agliconas en soja es relativamente baja. El uso de bacterias lcticas con actividad -glucosidasa permite incrementar la disponibilidad de las IS al hidrolizar el enlace -1-4 del glucsido liberando agliconas. El objetivo del trabajo fue determinar las propiedades antioxidantes de un extracto acuoso de soja (EAS) fermentado con Lactobacillus (L.) rhamnosus CRL981 y evaluar su potencial efecto protector frente al dao oxidativo a nivel del ADN. El EAS fue inoculado con L. rhamnosus CRL981 e incubado a 37C durante 24h. Se tomaron muestras a distintos tiempos (0, 3, 6, 9, 12 y 24h) para evaluar la hidrlisis de las IS en la forma glucosilada, mediante HPLC y las propiedades antioxidantes. Las actividades antiradicalaria (AAR%) y antioxidante (AAO%) se determinaron espectrofotomtricamente empleando el radical libre DPPH y el sistema -caroteno-acido linoleico, respectivamente. El poder reductor (PR) se determin colorimtricamente. El efecto protector del EAS frente al dao oxidativo inducido se evalu a nivel del ADN usando una mezcla oxidante. El EAS, luego de 24h de fermentacin, present una AAR% y AAO% mxima de 29,50,9% y 71,24,0%, respectivamente; por el contrario el PR increment solo 7% respecto al control (EAS sin fermentar). Sin embargo, el EAS fermentado fue capaz de inhibir (59,2%) la oxidacin del ADN. Los resultados evidencian que, el EAS fermentado con L. rhamnosus CRL981 present actividad antioxidante siendo capaz de proteger al ADN del dao oxidativo a travs del barrido de los radicales libres presentes en el medio. El consumo del mencionado EAS, enriquecido en las IS agliconadas con propiedades antioxidantes favorecera la eliminacin de radicales txicos previniendo el dao tisular y el desarrollo de enfermedades crnicas asociadas al estrs oxidativo.
GERBINO, ESTEBAN(1); SOSA, NATALIA(2); SCHEBOR, CAROLINA(2); ILLANES, ANDRES(3); ANDREA, GOMEZ ZAVAGLIA(1)
(1) CIDCA UNLP, (2) DPTO INDUSTRIAS- UBA, (3) PUCV CHILE Las bacterias lcticas y bifidobacterias probiticas son ampliamente utilizadas en preparaciones farmacuticas y alimentos funcionales debido a sus efectos benficos sobre la salud. Por otro lado, los prebiticos se definen como ingredientes alimenticios que favorecen el crecimiento y/o actividad de una bacteria especfica o de un nmero de especies bacterianas que tienen efecto benfico en la salud. Entre ellos se destacan la lactulosa, los fructooligosacridos, la inulina y los galacto-oligosacaridos (GOS). El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto protector de los GOS en la preservacin de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CIDCA 333, una cepa particularmente sensible a los procesos de preservacin. Cultivos en fase estacionaria de Lactobacillus bulgaricus fueron desecados sobre silica-gel o liofilizados en presencia de 3 diferentes GOS comerciales, en un rango de concentraciones de 0 a 38% m/m. La capacidad protectora de los GOS se evalu a travs del recuento de bacterias viables antes y despus del proceso de deshidratacin. La capacidad protectora de cada GOS comercial se correlacion con su composicin en di, tri y tetrasacridos, determinada por HLPC, y con las temperaturas de transicin vtrea (Tg) de dichos compuestos a distintas humedades relativas. De acuerdo a los resultados obtenidos, todos los GOS utilizados demostraron ser efectivos protectores de L. bulgaricus expuestos a deshidratacin. La mayor capacidad protectora se correlacion con el mayor porcentaje de galacto-oligosacaridos en la mezcla, en particular con el contenido de trisacaridos, respecto de otros componentes como la lactosa y monosacridos. En cuanto a las propiedades fsicas de estos sistemas, la informacin provista por las isotermas de sorcin de agua y las transiciones de fase indican que se puede conservar el estado vtreo a temperatura ambiente a humedades relativas por debajo de 33%. Los GOS son ampliamente conocidos por sus propiedades prebiticas, pero su rol como agentes protectores y sus propiedades termofsicas no han sido an estudiada. Este nuevo rol de los GOS como protectores es de gran importancia para el desarrollo de nuevos alimentos funcionales deshidratados. La suple-mentacin de probiticos con GOS servira para la elaboracin de productos simbiticos, donde los GOS cumplen la doble funcin de actuar como prebiticos y como sustancias protectoras de los microorganismos probiticos.
P3 - 27145 IDENTIFICACIN, CARACTERIZACIN Y SELECCIN DE CEPAS DE LEUCONOSTOC PARA FUTURAS APLICACIONES BIOTECNOLGICAS. GUGLIELMOTTI, DANIELA; CARDAMONE, LUISINA; MERCANTI, DIEGO; REINHEIMER, JORGE; QUIBERONI, ANDREA.
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Introduccin: Leuconostoc presenta gran importancia en la industria lctea fermentativa debido a su capacidad de producir compuestos de aroma, CO2, entre otros. Sin embargo, la produccin de CO2 puede conducir a la formacin de ojos en quesos de masa cerrada, derivando en el detrimento de la calidad del producto. En los ltimos aos, varias industrias queseras de nuestra zona informaron graves problemas relacionados al desarrollo
P2 - 27140 EFECTO PROTECTOR DE LOS GALACTOOLIGOSACARIDOS EN LA PRESERVACIN DE Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. YMCZYSZYN, ELIZABETH (1);
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indeseado de Leuconostoc. Objetivos: Identificar y caracterizar las cepas de Leuconostoc previamente aisladas, para conocer la diversidad de las cepas responsables de defectos gasgenos en quesos, y seleccionar cepas con propiedades beneficiosas para nuevos alimentos funcionales. Metodologa y Resultados: 14 cepas de Leuconostoc fueron aisladas de insumos usados en elaboraciones queseras (leche pasteurizada, concentrado de protenas de suero, suero de quesera, crema de suero) y de quesos con defectos gasgenos. Las cepas fueron identificadas mediante tcnicas tradicionales y genticas (RAPD, secuenciacin ADNr 16S), clasificndolas como Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteoides (n=6), L. pseudomesenteroides (n=5), L. garlicum/ lactis (n=2) y L. citreum (n=1). Se estudiaron sus propiedades tecnolgicas (acidificacin en leche, desarrollo a 8 C y 45 C, resistencia a NaCl, acidez y pasteurizacin). Algunas cepas fueron capaces de desarrollar y coagular la leche (32 C - 24 h). En general, revelaron buen desarrollo en presencia NaCl (3% y 4%), pero disminuido en medios acidificados (pH 3 y 4). Un porcentaje importante de la poblacin bacteriana fue capaz de sobrevivir luego de ser sometida a 63 C durante 30 min (pasteurizacin), demostrando su elevada termorresistencia. Todas las cepas fueron capaces de desarrollar a 8 C (temperatura de refrigeracin en cmara). La actividad antibacteriana contra patgenos fue moderada, y se debi principalmente a la produccin de cidos, aunque una de las cepas demostr elevada capacidad inhibitoria frente a Listeria monocytogenes, mediante la produccin de un compuesto con las caractersticas de bacteriocina. La presencia de genes de resistencia a antibiticos es una caracterstica indeseable en cepas usadas en la industria alimenticia, ya que los mismos podran ser transmitidos a otros microorganismos, incluso a patgenos. Se teste la susceptibilidad de las cepas de Leuconostoc frente a un grupo de antibiticos de importancia clnica y veterinaria. Las cepas demostraron ser sensibles frente a gentamicina, eritromicina y ampicilina. - La elevada termorresistencia de las cepas de Leuconostoc estudiadas, y su capacidad de desarrollar a bajas temperaturas podran explicar la existencia y multiplicacin indeseada en ciertos tipos de quesos. - Aquellas cepas con propiedades interesantes a nivel industrial (desarrollo en leche, inhibicin de bacterias patgenas, sensibilidad a antibiticos), podran aprovecharse para constituir fermentos mixtos a ser utilizados en nuevos alimentos funcionales.
riantes con el agregado de nuevas dosis de fagos. Nivel de fagorresistencia (EOP - efficiency of plaquing): relacin entre el ttulo fgico logrado sobre el mutante resistente y el correspondiente a la cepa sensible. Nivel de adsorcin fgica: determinacin de la tasa de fagos adsorbidos luego de 30 min a 37C sobre las variantes fago resistentes, en comparacin con la cepa sensible. Liberacin espontnea de fagos: centrifugacin de un cultivo de los mutantes, y posterior titulacin del sobrenadante (fagos potencialmente liberados) sobre la cepa sensible. Resultados: - La tcnica de aislamiento en medio agarizado permiti mayor recuperacin de mutantes. - El comportamiento durante los ensayos de estabilidad fue variable dependiendo del sistema estudiado. - Los mutantes presentaron resistencia media (<10-4) y elevada (<10-7) de acuerdo a los valores de EOP obtenidos. - En general los mutantes fueron resistentes por bloqueo en la etapa de adsorcin. - Se observ liberacin espontnea de fagos para 7 mutantes. Este estudio demostr que es posible obtener variantes resistentes a fagos a partir de cepas sensibles de L. plantarum.
P5 - 27179 ADSORCIN DE FAGOS TEMPERADOS SOBRE CEPAS DE LACTOBACILLUS DELBRUECKII Y FAGO RESISTENCIA LIGADA A HETEROGENEIDAD MORFOLGICA. TRUCCO, VERONICA; BINETTI, ANA; REINHEIMER, JORGE; QUIBERONI, ANDREA; SUAREZ, VIVIANA.
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Los fagos temperados perturban el normal proceso de fermentacin superando la inmunidad lisognica de la cepa que lo liber, atacndola, o encontrando otras cepas sensibles constituyentes del fermento utilizado. Por otra parte, la heterogeneidad morfolgica en cultivos puros, particularmente de Lactobacillus delbrueckii, es bien conocida, pero no existen reportes que relacionen esta diversidad morfolgica con la fago resistencia en mutantes con buenas propiedades tecnolgicas. Los objetivos de este trabajo fueron: a- estudiar la etapa de adsorcin de dos fagos temperados (Cb1/204 y Cb1/342) de L. delbrueckii, en funcin de distintas variables. b- aislar mutantes con buenas propiedades tecnolgicas y relacionarlos con variantes morfolgicas obtenidas para cada cepa sensible. Caracterizacin de la Adsorcin: a-Influencia del Ca2+: cultivos de las cepas se llevaron hasta una DO 560nm aprox. 0.5 y el pellet se resuspendi en Caldo MRS, con y sin el agregado de Ca2+ (10mM). Las clulas se infectaron con el fago y se incubaron a 37 C. Se graficaron las cinticas de adsorcin para cada caso. b-Influencia del pH: los pellets se suspendieron en Caldo MRS-Ca llevado a diferentes valores de pH (3, 4, 5, 6, 7 y 8). Las tasas de adsorcin se midieron a los 30 min. c-Influencia de la temperatura: los pellets se suspendieron en Caldo MRS-Ca y se incubaron a distintas temperaturas (0, 10, 20 30 y 40 C). Las tasas de adsorcin se midieron a los 30 min. d-Influencia del estado fisiolgico celular: Idem a-, utilizando clulas viables y no viables, estas ltimas obtenidas sometindolas 10 min a 100 C. Se graficaron las cinticas de adsorcin para cada caso. Mutantes fago resistentes y variantes morfolgicas: Se aislaron variantes morfolgicas de ambas cepas sensibles, obtenindolas de Agar MRS. Se obtuvieron mutantes fago resistentes utilizando el mtodo del cultivo secundario. A los mutantes estables (resistentes hasta 7 repiques en presencia de alta concentracin del fago) se les estudi la actividad acidificante (pH en LDR 10%, 24h a 37C) y proteoltica (OPA Test). La influencia del calcio dependi del fago estudiado ya que Cb1/204 no necesit de este in en esta etapa del ciclo ltico, mientras que Cb1/342 si. Ambos fagos resistieron bien los pHs cidos (hasta 3), pero no los alcalinos (pH 8). El proceso de adsorcin de ambos fagos dependi de la temperatura de incubacin, y los valores mximos se observaron entre 30 y 40 C (85-99%). La viabilidad celular modific el nivel de adsorcin solamente para el fago Cb1/342 (menor para clulas no viables). Para cada variante morfolgica obtenida (dos para cada cepa sensible), se obtuvo un 100% de mutantes fago resistentes verdaderos. Algunos presentaron muy buenas propiedades tecnolgicas y se los pudo correlacionar siempre con una de las variantes morfolgicas encontradas. Se caracteriz la etapa de adsorcin de los primeros fagos temperados de L. delbrueckii aislados en el pas. Se aislaron
P4 - 27147 MUTANTES ESPONTNEOS FAGO RESISTENTES DE LACTOBACILLUS PLANTARUM. AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE LA FAGORRESISTENCIA. BRIGGILER MARCO, MARIANGELES; REINHEIMER, JORGE; QUIBERONI, ANDREA
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Introduccin: Lactobacillus plantarum es una especie bacteriana capaz de desarrollar en diferentes matrices alimentarias, y para algunas cepas han sido demostradas propiedades probiticas. Sin embargo, su empleo como starter/ probitico en la elaboracin de alimentos funcionales podra ser afectado por infecciones fgicas, lo cual podra generar productos de baja calidad adems de importantes prdidas econmicas. Entre las estrategias disponibles para disminuir los ataques fgicos, la obtencin de mutantes espontneos fagorresistentes se plantea como una excelente alternativa, simple y natural, ya que no presenta restricciones reglamentarias para su uso en alimentos. Objetivos: Obtener mutantes espontneos fagorresistentes a partir de cepas sensibles de Lactobacillus plantarum, utilizando dos metodologas diferentes. Caracterizar el fenotipo fagorresistencia de dichos mutantes. Materiales y Mtodos: cepas y fagos utilizados: se utilizaron dos cepas de Lactobacillus plantarum (ATCC 8014 y PLN), dos fagos de coleccin (ATCC 8014-B1 y ATCC 8014-B2) y un fago aislado de grnulos de kefir (f3). Aislamiento de mutantes espontneos fagorresistentes: fueron ensayadas dos metodologas: aislamiento en medio agarizado y a partir de cultivos secundarios, utilizando los fagos individualmente o ccteles de ellos. Caracterizacin del fenotipo fagorresistencia en los mutantes: estabilidad de la fagorresitencia: repiques sucesivos de las va-
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mutantes fago resistentes con buenas propiedades tecnolgicas y se relacionaron estos mutantes con las variantes morfolgicas encontradas.
P6 - 27180 ESTUDIOS IN VIVO DE LA SEGURIDAD Y FUNCIONALIDAD DE UN ADITIVO ALIMENTARIO EN POLVO OBTENIDO POR FERMENTACIN CONTROLADA DE SUERO DE MANTECA. HAAG, ELIANA; REINHEIMER, JORGE; BECCARIA, ALEJANDRO; PAEZ, ROXANA; VINDEROLA, GABRIEL; BINETTI, ANA
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Ciertas fracciones libres de clulas de leches fermentadas contienen componentes bioactivos capaces de estimular la respuesta inmune intestinal y de prevenir infecciones entricas. En trabajos previos determinamos que el suero de manteca, un subproducto de bajo costo de la industria lctea, es adecuado para el desarrollo de bacterias lcticas en diferentes condiciones (concentracin de sustrato, tiempo de fermentacin, agente neutralizante). El objetivo de este trabajo fue desarrollar un aditivo funcional en polvo (secado spray) a partir de la fraccin libre de clulas de suero de manteca fermentado. Se utiliz la cepa L. delbrueckii subsp. lactis 209 (altamente proteoltica, aislada a partir de un fermento natural de suero y perteneciente a la coleccin INLAIN) para fermentar suero de manteca (16% p/v) a pH 6,0 controlado (Ca(OH)2 como control externo de pH) en un biorreactor de tanque agitado, durante 48 h. A partir del suero de manteca fermentado se recuper la fraccin libre de clulas (FLC) por centrifugacin. Una fraccin del mismo se acidific (pH 3,6, cido lctico) para estudiar (HPLC fase reversa) la presencia de fracciones peptdicas en el sobrenadante. Se determin el contenido de slidos totales, lactosa residual, Na y Ca. La otra fraccin, sin acidificar, se sec en un secadero spray Buchi de laboratorio (T de entrada: 119 C, T de salida: 64 C). Ratones BALB/ c recibieron (intubacin intragstrica, 3, 6 y 10 das) la FLC (200 l/da/ratn) o el equivalente del polvo secado spray disuelto en agua. Al final de cada perodo de alimentacin, los animales fueron anestesiados y sacrificados por dislocacin cervical. Se aislaron macrfagos peritoneales para determinar su capacidad fagoctica. Los hgados se sembraron en agar ABRV (determinacin de la seguridad, estudio de translocacin). En cortes histolgicos de intestino delgado se determin el N de clulas productoras de IgA (inmunohistoqumica) como indicador de la funcionalidad (capacidad de aumentar las defensas innatas). El aditivo en polvo desarrollado demostr poseer capacidad de aumentar la capacidad fagoctica de macrfagos peritoneales (16 5%, control 9,5 2%) y el nmero de clulas productoras de IgA (279 42, control 195 34 cl. IgA+/10 campos) en intestino delgado al ser administrado durante 10 das consecutivos. A partir de la fermentacin controlada de suero de manteca se obtuvo un polvo de origen lcteo, con bajo contenido en Na y lactosa y alto contenido en Ca, enriquecido con pptidos liberados por fermentacin controlada y con seguridad oral y funcionalidad demostradas en un modelo animal. El producto desarrollado podra ser agregado a alimentos que no aptos para ser vehculos de bacterias probiticas (barras de cereal, galletitas, bebidas, etc.) de forma tal de conferirles propiedades benficas hacia la salud y expandir as el mercado de alimentos funcionales.
bacterial surfaces likely via an electrostatic interaction leading to pores formation and dissipation of the proton motive force, resulting in an efflux of amino acids, potassium ions and inorganic phosphate. Objective: The aim of this study was to isolate bacteriocinogenic LAB from commercial smoked salmon samples and characterize the bacteriocin produced by one of the strains, and check for its antibacterial and antiviral properties. Materials and methods: Bacteriocinogenic strains were isolated using the triple layer and agar spot tests. Strain ST3Ha produced bacteriocin and was identified using biomolecular techniques (PCR). The strain was tested for antimicrobial activity against a variety of LAB, Listeria spp, human and food pathogens and HSV-1 virus. Some aspects of the mode of action against Listeria ivanovii subsp. ivanovii ATCC19119 were also studied. The synergetic effect of the bacteriocin with sub-lethal doses of ciprofloxacin was evaluated. The genetic determinants for known bacteriocins in the genomic DNA of strain ST3Ha were also investigated. Results: Strain ST3Ha was identified as Pediococcus acidilactici. This strain produced a pediocin-like bacteriocin with activity against several LAB, Listeria spp, and some human and food pathogens and remarkably against HSV-1 virus. Bacteriocin ST3Ha was produced at high levels in MRS broth at 30 C and 37oC and had reached, after 27h, its maximum production (1640000 AU/ml) against Listeria ivanovii subsp. ivanovii ATCC19119, a surrogate of pathogenic strain L. monocytogenes. Addition of bacteriocin ST3Ha to a 3-h-old culture of L. ivanovii subsp. ivanovii ATCC19119 has severely inhibited growth of this strain for 24 h. The molecular weight of this bacteriocin was estimated to be 4.5 kDa according to tricine-SDS-PAGE data. Strain ST3Ha harbours a 1.044 kb DNA fragment fitting in size and DNA homology to pediocin PA-1/AcH (98 %). The combined application of low levels (below MIC) of ciprofloxacin and bacteriocin ST3Ha resulted in a synergistic effect in the inhibition of target strain L. ivanovii subsp. ivanovii ATCC19119. The antiviral activity of bacteriocin ST3Ha against HSV-1, presented CE50 (50% effective concentration) of 800 g/mL and CC50 (50% cytotoxic concentration) of 4030 g/ mL. Significance: To the best of our knowledge, this is the first report on P. acidilactici, producer of pediocin-like bacteriocin with activity against HSV-1.
P8 - 27199 EVALUATION OF THE PROBIOTIC POTENTIAL OF BACTERIOCINOGENIC Lactobacillus sakei subsp. sakei 2A. SVETOSLAV, TODOROV; DANIELLE, FURTADO; MATHEUS, BARBOSA; MARTHA, VILLARREAL; BERNADETTE, FRANCO.
U.S. Pharmacopeia Introduction: According to the definition of the World Health Organization, probiotics are live microorganisms which, when administrated in adequate amounts, confer health benefits to the host such as reduction of gastrointestinal infections and inflammatory bowel disease, and modulation of the immune system. Production of bacteriocins is considered an advantage for the probiotics strains because facilitates their competitiveness in the human gastrointestinal tract. Bacteriocins are ribosomally synthesized antibacterial peptides and are usually active against genetically related species. Objective: This work aimed to evaluating the probiotic features of the bacteriocin producing L. sakie subsp. sakei 2a strain and determination of some aspects of bacteriocin mode of action. Effect of selected commercial drugs from different generic groups and antibiotics on growth of L. sakei subsp. sakei 2a was also determined. Material and methods: Mode of action of bacteriocin produced by L. sakei subsp. sakei 2a against L. monocytogenes ScottA was studied. Aggregation and co-aggregation properties of L. sakei subsp. sakei 2a were explored. The effects of ox-bile, pH, presence of commercial drugs and antibiotics on growth of L. sakei subsp. sakei 2a were determined. Results: The bacteriocin produced by L. sakei subsp. sakei 2a is active against L. monocytogenes ScottA, L. innocua and different serological types of L. monocytogenes. Addition of bacteriocin produced by L. sakei subsp. sakei 2a to a 3 h-old culture of L. monocytogenes repressed cell growth in the following 8h. Treatment of stationary phase cells of L. monocytogenes (7 8 logCFU/ ml) by the bacteriocin resulted in growth inhibition. Good growth
P7 - 27198 BACTERIOCIN PRODUCTION BY Pediococcus acidilactici ST3HA, ISOLATED FROM NORWEGIAN SMOKED SALMON AND SOME ASPECTS OF ITS MODE OF ACTION AGAINST Listeria monocytogenes AND Enterococcus faecium. SVETOSLAV, TODOROV(1); MONICA, WACHSMAN(2); MANUELA, VAZVELHO (3); BERNADETTE, FRANCO(1)
(1) U.S.Pharmacopeia; (2) Universidad de Buenos Aires (UBA); (3) ESTG Introduction: Bacteriocins of lactic acid bacteria (LAB) are ribosomally synthesized antimicrobial peptides. Studies on their mode of action indicate that bacteriocins must first be attracted to
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of L. sakei subsp. sakei 2a was recorded in MRS broth supplemented with 0.2% or 0.4% (w/v) ox-bile or in MRS broth adjusted to pH 5.0 - 9.0. Auto-aggregation of L. sakei subsp. sakei 2a was 62.59%. Different levels of co-aggregation were recorded between L. sakei subsp. sakei 2a and E. faecalis ATCC 19443, Lactobacillus sakei ATCC 15521 and L. monocytogenes ScottA. Growth of L. sakei subsp. sakei 2a was not inhibitetd by commercial drugs from different generic groups. The inhibitory effect on growth of L. sakei subsp. sakei 2a was recorded only in presence of Arotin [selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI) antidepressant] Minimal Inhibition Concentration (MIC) 1.0 mg/ml, Atlansil [Antiarrhythmic] MIC 0.625 mg/ml, Diclofenac potassium [Nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID)] MIC 2.5 mg/ml and Spidufen [NSAID] MIC 15.0 mg/ml. Only two antibiotics tested in this study (Amoxil and Urotrobel) inhibited growth of L. sakei subsp. sakei 2a with a MIC of < 0.5 mg/ml and 5.0 mg/ml respectively. Significance: Besides being active against L. monocytogenes from different serological types and showing high co-aggregation properties with this foodborne pathogen, the survival of L. sakei subsp. sakei 2a in presence of ox-bile and low pH and resistance to several drugs used in human therapeutics evidences the probiotic potential of this bacteriocinogenic strain.
P10 - 27208 EFECTO DEL SECADO SPRAY Y EL PERODO DE ALMACENAMIENTO SOBRE LA CAPACIDAD FUNCIONAL DE Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1. ZACARIAS, MARIA FLORENCIA; BURNS, PATRICIA; BINETTI, ANA; VINDEROLA, GABRIEL; REINHEIMER, JORGE.
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 es una cepa aislada de leche materna con tolerancia a procesos tecnolgicos de la industria lctea, particularmente el secado spray (SS). Esta cepa sobrevive al SS en leche 20% sin prdidas de viabilidad celular durante el SS y conservacin a 5 C. Sin embargo, existen estudios que sugieren que los recuentos celulares garantizan slo parvialmente la funcionalidad de una cepa sometida a tratamientos tecnolgicos de uso comn en alimentos. Objetivo: estudiar el efecto del SS y del almacenamiento en la capacidad de esta cepa de activar la respuesta inmune en intestino delgado (ID) y grueso (IG) y tejido bronquial. Ratones BALB/c recibieron (de forma intragstrica por 3, 6 y 10 d), 5x10Exp(7) UFC de la cepa en estudio como cultivo fresco (overnight 18 hs, 37 C) resuspendido en leche descremada al 20% o como cultivo secado spray (SS) e inmediatamente administrado o SS y almacenado 6 meses a 5C antes de su administracin oral. El SS fue realizado en leche descremada al 20% en un mini-secadero Buchi. El grupo control recibi, de igual forma, leche descremada al 20%. Al finalizar los perodos de alimentacin, los animales fueron anestesiados y sacrificados por dislocacin cervical. El hgado homogeneizado se plaque en agar ABRV (estudio de traslocacin). El ID e IG y los pulmones se incluyeron en parafina. El N de clulas productoras de IgA (cl.+) se determin en cortes histolgicos mediante inmunohistoqumica. La administracin oral de B. animalis subsp. lactis INL1, tanto como cultivo fresco, SS fresco y SS almacenado durante 6 meses fue segura (ausencia de traslocacin) e indujo un aumento significativo en el nmero de clulas productoras de IgA en IG respecto al control (327 17 cl.+/10 campos), sin diferencias significativas entre las condiciones en que la cepa fue administrada (cultivo fresco, SS fresco o SS y almacenado 6 meses a 5 C) ni para los diferentes perodos de administracin (los valores se ubicaron en el rango de 414 a 476 cl.+/10 campos). Sin embargo, el ID fue capaz de poner en evidencia diferencias en la capacidad funcional de la cepa por el SS aplicado. Para el cultivo fresco se observ aumento significativo (control 289 29 cl.+/10 campos) para todos los perodos de administracin, con un mximo para 10 d (494 27 cl.+/10 campos). Para el cultivo SS fresco se observ aumento slo para los 10 d de administracin (389 27 cl.+/10 campos) mientras que para el cultivo SS y administrado luego de 6 meses de almacenamiento a 5 C el aumento significativo se observ slo para el perodo de 6 d de administracin (377 39 cl.+/10 campos). No se observaron diferencias en el N cl. IgA+ en tejido bronquial respecto al control. B. animalis subsp. lactis INL1 demostr capacidad inmunomoduladora in vivo, siendo esta fuertemente influenciada, a nivel de ID, por el SS y el almacenamiento por 6 meses. El tratamiento trmico y el almacenamiento podran haber ejercido modificaciones en los determinantes antignicos de la superficie celular, lo que result en los diferentes perfiles de inmunoestimulacin observados.
P9 27200 APPLICATION OF BACTERIOCINOGENIC STRAINS Enterococcus mundtii CRL35 AND Enterococcus faecium ST88CH FOR CONTROL OF Listeria monocytogenes IN MINAS CHEESE. ESTEBAN, PINGITORE(1); DANIELLE, FURTADO(2); SVETOSLAV, TODOROV(2); FERNANDO, SESMA(1); BERNADETTE, FRANCO(2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, (2) U.S. Pharmacopeia. Introduction: Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by several lactic acid bacteria. For control of Listeria monocytogenes in foods, they can be supplemented with bacteriocins, or inoculated with bacteriocinogenic strains for in situ production of bacteriocins. Objective: The aim of this study was to evaluate the capability of two bacteriocinogenic strains Enterococcus mundtii CRL35 (bac+) and Enterococcus faecium ST88Ch (bac+), isolated from cheeses, to control the growth of Listeria monocytogenes 426 in experimentally contaminated Minas cheese over 10 days of storage at 8C. The study included an evaluation of some aspects of bacteriocins mode of action against L. monocytogenes 426. Material and methods: Cheeses were prepared with pasteurized bovine milk, lactic acid, calcium chloride and commercial rennet. Four sets were prepared: two made with milk containing one of the two bac+ strains (6 logCFU/ml), one with milk containing a bac- strain (E. faecium ATCC19443) and one added of nisin (12,5mg/l). Other appropriate control cheeses were also prepared. L. monocytogenes 426 was added to cheeses during the manufacturing, in order to obtain 3 logUFC/g. Counts of lactic acid bacteria and L. monocytogenes in the cheeses stored at 8 C were done every other day for 10 days. Effect of temperature, pH and selected chemicals on adsorption of bacteriocins produced by E. mundtii CRL35 and E. faecium ST88Ch to L. monocytogenes was determined. Results: Low pH and temperature favored the adsorption of bacteriocins CRL35 and ST88Ch to L. monocytogenes. The adsorption depended on presence of milk and NaCl. After 10 days at 8 C, counts of L. monocytogenes 426 in the cheeses containing the bac+ and the bac- strains of E. faecium decreased in a similar manner (2.63-log and 2.87-log, respectively), showing that inhibition might have occurred due to another factor than the production of bacteriocin. In the cheeses prepared with E. mundtii CRL35 bac+, the counts of L. monocytogenes decreased 4.69-log, and in those containing nisin, only a 0.75-log reduction was observed. Significance: The study showed that the strain E. mundtii CRL35 bac+ was more effective than E. faecium ST88Ch bac+ for the control of growth of L. monocytogenes in cheeses stored at 8 C. E. mundtii CRL35 bac+ was even more effective than nisin. This research underlines the potential of application of different bacteriocins in the control of nisin-resistant variants of L. monocytogenes in cheese.
P11 - 27212 ANTIMICROBIAL SPECTRUM OF Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 AND THE INFLUENCE OF DRYING ON FUNCTIONALITY. COSTA SOUZA, TASSIA(1); ZACARIAS, MARIA FLORENCIA(2); CARMONA, DENISE; VIEIRA, LEDA; NICOLI, JACQUES; REINHEIMER, JORGE; VINDEROLA, GABRIEL.
(1) ICB UFMG BRASIL, (2) INLAIN, UNL-CONICET. Introduction: Bifidobacterium animalis subsp. lactis INL1 is a strain isolated from human breast milk with resistance to technological processes of interest for the dairy industry such as freezing, freeze-drying, spray-drying and mild heating (50 C). The functional properties of this strain to be considered as a probiotic
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(immunomodulation capacity, antimicrobial activity, etc.) are under study. Recent studies suggest that technological treatments like those described above could modify cell functionality of probiotic bacteria without affecting cell viability. Aim: To study the in vitro antimicrobial capacity of B. lactis INL1 against enteropathogenic indicators and the in vivo effect of freeze-drying and spraydrying on its immune properties, estimated as the capacity to enhance s-IgA production in intestinal fluid and proliferation of Kpffer cells in liver. Materials and Methods: For the study of antimicrobial activity, the well-diffusion and agar-spot assays were compared using the following pathogens: Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium FUNED, Vibrio cholerae LEFM, Shigella sonnei ATCC 11060, Shigella flexneri LEFM, Enterococcus faecalis ATCC 19433, Listeria monocytogenes ATCC 15313, Escherichia coli ATCC 25922 and Clostridium perfringens type A ATCC 3624. Swiss NIH mice received, by daily gavage and for 10 consecutive days, 10% skim milk (control group) or 10Exp(8) CFU of B. lactis INL1 as fresh, spray-dried or freeze-dried cultures in 10% skim milk. Liver was removed for Kpffer cells count by histological examination and small intestinal fluid was used for determination of s-IgA contents by capture-ELISA. Results: An antimicrobial activity against V. cholerae, S. flexneri and E. coli was detected using the agar-spot assay but not by well-diffusion assay. Only the oral administration of bifidobacteria as fresh culture significantly increased (P < 0.05) the number of Kpffer cells (45.98.6 cel.+/100 hepatocytes) when compared to control mice (30.22.5 cel.+/100 hepatocytes). Administration of bifidobacteria as fresh (59.916.7 pg/ml), freeze-dried (29.33.1 pg/ml) and spray-dried (25.60.7 pg/ml) cultures significantly increased the concentration of s-IgA in the intestinal fluid when compared to control mice (18.61.1 pg/ml). Conclusions: In vitro antimicrobial activity against some pathogenic bacteria was detected for the strain studied only by the agar-spot assay. The reason why one methodology was effective compared to the other one remains unknown but should be taken into account for other studies. B. lactis INL1 displays in vivo immunomodulatory properties, being this capacity significantly modified by the technological treatments applied to the strain. It was confirmed that plate counts may offer just a partial view of cell functionality since technological treatments affected the immunomodulating capacity of the strain without this fact being noticed by the enumeration of viable cells by plate counts.
medio comercial BTC12 obtenindose (24h) valores de acidez Dornic (D) superiores a 110 D y en general, similar comportamiento de mutantes y su cepa sensible. Durante las elaboraciones, el crecimiento del mutante infectado y sin infectar fue similar al de la cepa sensible sin fago, logrndose (7,5h) recuentos superiores a 10e8 ufc/ml e inferiores a 10e6 ufc/ml para cepas sensibles infectadas, que propagaron al fago (10e7-10e8 ufp/ml). La viabilidad del fago propagado sobre ATCC 27092 se mantuvo (1 mes, 12C), y los recuentos celulares de la cepa sensible y el mutante infectado y sin infectar, disminuyeron 1,4; 0,8 y 1 rdenes logartmicos, respectivamente. Todas las cepas mostraron cierto poder inhibitorio sobre los patgenos usados, especialmente para Salmonella. La hidrofobicidad fue baja para ATCC 27092 y mutantes (1,51,2% y 7,52,5%, respectivamente). No se produjo deconjugacin de las sales biliares ensayadas, observndose en algunos casos parcial o total inhibicin en el crecimiento. Los mutantes mostraron entre s ciertas diferencias en la resistencia a las barreras biolgicas. Para ambas familias, la prdida de viabilidad celular ms notable (en torno a 4 rdenes log) se registr luego de la incubacin con pepsina a pH 2,5. Las cepas madres y sus mutantes, mostraron prcticamente idnticas actividades enzimticas: elevada actividad -galactosidasa en general y en todos los casos, reaccin negativa para -glucuronidasa (participa en la formacin de carcingenos). Los estudios realizados revelaron similitud de comportamiento dentro de cada familia estudiada lo cual, sumado a la fagorresistencia, posiciona a los mutantes como cultivos alternativos a sus cepas probiticas de origen.
P13 - 27301 EFECTO PROTECTOR DE Lactobacillus fermentum L23 EN VAGINA DE RATONES BALB/C FRENTE A Streptococcus agalactiae. RUIZ, F; GERBALDO, G; ASURMENDI, P; GARCIA, M; PASCUAL, L; BARBERIS, I
Universidad Nacional de Ro Cuarto Streptococcus agalactiae o estreptococos del grupo B (SGB) de acuerdo a la clasificacin de Lancenfield es un reconocido microorganismo patgeno humano involucrado principalmente en enfermedades perinatales. Si bien la penicilina es el antibitico de eleccin para la profilaxis y el tratamiento de infecciones producidas por SGB, en los ltimos aos se ha registrado un aumento en la resistencia a este antibitico como as tambin a otros grupos de agentes antimicrobianos. Es sabido que los lactobacilos colaboran en el mantenimiento de un ecosistema estable, en la proteccin y prevencin del ingreso de patgenos, incluyendo aquellos que causan infecciones genitourinarias, por ello podran constituirse en una alternativa biolgica para el control de procesos infecciosos. Objetivo: Evaluar el efecto preventivo y curativo de L. fermentum L23 sobre la colonizacin de SGB en vagina de ratones BALB/c. Mtodos. Se estudi la microbiota vaginal de 20 ratones hembras BALB/c. La cepa con caractersticas benficas L23 (GenBank accession no. GQ 455406) y el SGB seleccionado, se cultivaron en agar MRS y agar sangre de carnero al 5% respectivamente y fueron incubados en ptimas condiciones. Para los ensayos de colonizacin, efecto preventivo y curativo se inocul en la vagina de los ratones una concentracin de lactobacilos de 108 UFC/ml y para los estudios de infeccin y curativo se inocul SGB a una concentracin de 107 UFC/ml. Se tomaron muestras de la vagina de los ratones diariamente durante 8 das (t0t8), se realizaron recuentos diarios en placas con el medio de cultivo adecuado para cada microorganismo y las UFC/ml se transformaron a log10. El estudio del efecto preventivo de L23 se realiz inoculando una nica dosis de lactobacilos, a las 48 h posteriores se reinocul cada animal con SGB. En el efecto curativo, primero se inocul el SGB y 48 h pos-inoculacin se administr L23 a una concentracin de 108 UFC/ml. Todas las experiencias se realizaron por triplicado. Resultados. La microbiota vaginal de los ratones BALB/c mostr una biota heterognea variando entre cocos Gram positivos y bacilos Gram negativos del tipo enterobacterias. Es de destacar en estos lotes de animales estudiados la ausencia de SGB y lactobacilos. La colonizacin de L23 se logr con una nica dosis a t0 de 8,40 (log10UFC/ml) permaneciendo en vagina al t8 con valores de logaritmo superiores a 2,96, in-
P12 - 27240 CARACTERIZACIN TECNOLGICA, BIOLGICA Y PROBITICA DE MUTANTES ESPONTNEOS FAGORRESISTENTES DE Lactobacillus casei/paracasei. CAPRA, MARIA LUJAN; TIBALDO, MAXIMILIANO M; REINHEIMER, JORGE A; QUIBERONI, ANDREA
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET Los mutantes espontneos fago-resistentes son opcin vlida para reemplazo de cepas sensibles originales y especialmente significativa para bacterias probiticas con caractersticas nicas. Para ser candidatos tiles, los mutantes debern presentar adems caractersticas tecnolgicas, biolgicas y probiticas similares a la cepa de origen. En este trabajo se evaluaron caractersticas tecnolgicas, biolgicas y probiticas de mutantes fago-resistentes, obtenidos de las cepas sensibles Lactobacillus paracasei ATCC 27092 y Lactobacillus casei ATCC 27139. Sobre diez mutantes, resistentes al fago MLC-A (primero de L. paracasei en Sudamrica, aislado en industria argentina) especfico de la cepa comercial L. paracasei A, se estudi: desarrollo en distintos medios, actividad proteoltica y acidificante y uso de prebiticos. Se simul elaboracin de un producto fermentado usando cepas sensibles y un mutante por cada una, con y sin fago, y se monitore viabilidad celular y fgica en el tiempo durante el almacenamiento refrigerado (12 C) del producto. Para todas las cepas, se investig in vitro la capacidad de inhibir patgenos y naturaleza del inhibidor, hidrofobicidad, deconjugacin de sales biliares, resistencia a barreras biolgicas y actividades enzimticas (API Zym). Las cepas mostraron muy escasa actividad proteoltica y fueron ineficientes en el uso de los prebiticos ensayados. Los mejores desarrollos se obtuvieron en
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dicando ptima colonizacin. Mientras que SGB en cada grupo de ratones se mantuvo a 2,08 a los 8 das de haber comenzado el estudio. En el efecto preventivo de L23 no se observ desarrollo de SGB a las 96 h de ser inoculado este ltimo microorganismo, mientras L23 permaneci en vagina hasta el final de la experiencia con un log10UFC/ml de 2,73. De igual modo en el ensayo del efecto curativo L23 elimin a SGB al cuarto da de inoculada la cepa de lactobacilo. Conclusiones. Los resultados demostraron que la cepa L. fermentum L23 fue capaz de colonizar el nicho ecolgico vaginal de ratones y elimin a SGB en las experiencias de efecto preventivo y curativo muy eficazmente. Estos hallazgos promisorios tienen mucha importancia en mujeres embarazadas como una forma de prevencin a la colonizacin de SGB evitando de esta manera una posterior infeccin neonatal.
P15 - 27315 EFECTO DEL SECADO SPRAY Y LA MATRIZ SOBRE LA VIABILIDAD Y RESISTENCIA GSTRICA DE LACTOBACILOS PROBITICOS. PAEZ, ROXANA (1); VINDEROLA, GABRIEL (2); LAVARI, LUISINA (1); ZARITZKY, NOEMI (3); REINHEIMER, JORGE (2)
(1) INTA, Rafaela, (2) Instituto de Lactologa Industrial INLAIN, UNL-CONICET, (3) CIDCA, UNLP-CONICET El secado spray (SS) de lactobacilos probiticos en leche descremada (LD) permite obtener polvos con altos recuentos de clulas viables que se mantienen hasta 1 ao a 5 C. Estos polvos poseen adems baja humedad y adecuada dispersabilidad en agua, siendo una alternativa de menor costo respecto a la liofilizacin para desarrollar cultivos probiticos deshidratados. En nuestro laboratorio fue tambin comprobado que los recuentos celulares brindan slo informacin parcial sobre la funcionalidad de una cepa sometida a tratamientos tecnolgicos como el SS. El objetivo del trabajo fue estudiar el efecto del SS en diversas matrices alimentarias sobre la viabilidad y resistencia gstrica (RG), considerada como indicador de funcionalidad, de lactobacilos probiticos. Se emplearon cultivos frescos de lactob. comerciales probiticos (L. paracasei Nad y A13, L. acidophilus A9) suspendidos en LD al 20% (L), LD 10% + protenas de suero de leche 10% (L-WPC) y LD 10% + almidn 10% (L-A). Las suspensiones se secaron en un mini-secadero spray (Buchi B-290, T ent. 170 C, T sal. 85 C flujo: 600 lt/h). Se control viabilidad antes y despus del SS. Se fotografiaron los polvos obtenidos (sin rehidratarse) por microscopa electrnica de barrido (SEM) y trasmisin (TEM). Las cepas SS en L se sometieron a digestin gastrointestinal simulada (pH = 2,5, 90 min y exposicin a 0,5% de bilis, 60 min, 37 C). Se realiz tambin esta digestin gastrointestinal para L.p. Nad SS en las 3 matrices ensayadas. No se observaron diferencias en viabilidad antes y despus del SS para las cepas en las 3 matrices. La microscopia electrnica evidenci la formacin de glbulos que entramparon a las cepas, sin observarse clulas fuera de stos (SEM), sino clulas enteras dentro de los glbulos, inmersas en una matriz proteica (TEM). No se observaron diferencias en la resistencia gastrointestinal de L.a. A9 como cultivo fresco o SS, obtenindose una reduccin de viabilidad de 5,84 0,70 y 5,25 0,19 rdenes log., respectivamente, luego de la exposicin a acidez gstrica y bilis. Sin embargo, para L.p. A13 se observ un aumento de RG debido al tratamiento trmico experimentado durante el SS. La cepa experiment una prdida de viabilidad celular de 6,61 1,03 rdenes log como cultivo fresco, mientras que para el cultivo SS en LD este valor fue de 5,27 0,13 ord. log. Para L.p. Nad se observ aumento de RG debido al tratamiento trmico experimentado durante el SS y debido tambin a la matriz en la cual se llev a cabo este proceso. El recuento final (luego de la digestin gastrointestinal) de esta cepa como cultivo fresco fue de 2,0 log UFC/ml, mientras que para el cultivo SS en LD fue de 3,84 0,35 log UFC/ml y para el mismo cultivo secado en L-A fue de 5,3 log UFC/ml. El SS produjo efectos cepa-dependientes sobre la RG en funcin de la matriz empleada, induciendo una mayor RG en L.p. Nad cuando fue secado en L-A respecto a LD. Se confirma la necesidad de realizar pruebas de funcionalidad para poner en evidencia el efecto de tratamientos tecnolgicos sobre parmetros de inters (RG) en probiticos, ms all del recuento de clulas viables.
P14 - 27306 ACTIVIDADES AMINOTRANSFERASA Y GLUTAMATO DEHIDROGENASA EN CEPAS DE LACTOBACILOS AISLADAS DE QUESO. PERALTA, GUILLERMO; BERGAMINI, CARINA; SUAREZ, VIVIANA; HYNES, ERICA
Instituto de Lactologa Industrial INLAIN UNL / CONICET La generacin de aroma y sabor en el queso est relacionada al catabolismo de los aminocidos que se produce fundamentalmente por accin de las bacterias lcticas, las cuales ponen en juego actividades enzimticas clave, tales como la aminotransferasa (AT) y la glutamato dehidrogenasa (GDH). La caracterizacin de dichas capacidades enzimticas es una herramienta til para la seleccin de fermentos adjuntos para quesos. En efecto, se ha demostrado que el perfil de especificidad de las AT hacia los diferentes aminocidos influye en los compuestos de aroma producidos en queso. Asimismo, la GDH cataliza la reaccin que produce -cetoglutarato, utilizado como aceptor de grupo amino en la reaccin de transaminacin. En el presente trabajo, ocho cepas de bacterias lcticas, previamente aisladas de queso Tybo de buena calidad e identificadas como Lactobacillus plantarum 33, 87 y 91, L. rhamnosus 73, 75, 77 y 78 y L. casei 90, fueron evaluadas por sus actividades GDH y AT. Se estudiaron las AT especficas hacia ocho aminocidos: Asp, Met, aminocidos ramificados (Leu, Ile, Val) y aromticos (Tyr, Phe, Trp). Las actividades enzimticas fueron estudiadas en extractos libres de clulas. Para ello, cultivos en fase logartmica tarda de las cepas en estudio se sometieron a disrupcin mecnica con el uso de perlas de vidrio en un disruptor celular. Las actividades GDH y AT fueron determinadas acoplando las reacciones enzimticas correspondientes a un ensayo colorimtrico. Todas las cepas estudiadas presentaron actividad GDH, siendo las cepas L. rhamnosus 73, 75 y 77, L. plantarum 87 y 91 y L. casei 90 las que mostraron los mayores niveles. Asimismo, las cepas de lactobacilos ensayadas demostraron actividad AT hacia todos los aminocidos en estudio, presentndose algunas diferencias en los niveles hacia los distintos aminocidos. Todas las cepas demostraron una mayor especificidad hacia el Asp, siendo las cepas L. casei 90, L. rhamnosus 73 y L. plantarum 33, 87 y 91 las que presentaron los mayores niveles. La nica excepcin a esta situacin fue la cepa L. rhamnosus 78, que se caracteriz por niveles similares de actividad AT hacia tres aminocidos: Asp, Phe y Trp. Adems de su especificidad hacia Asp, las cepas L. rhamnosus 73 y L. casei 90 demostraron los mayores niveles de AT hacia otros aminocidos. En particular, L. casei 90 mostr especificidad para los aminocidos ramificados, mientras que la actividad AT de L. rhamnosus 73 fue ms elevada para Leu, Phe, Met y Trp. Por su parte, L. rhamnosus 77 y L. plantarum 87 mostraron valores intermedios para las AT especficas para aminocidos distintos de Asp, observndose los mayores niveles hacia los aromticos y Leu. Finalmente, las cepas L. rhamnosus 75 y L. plantarum 33 y 91 exhibieron bajos niveles de AT frente a otros aminocidos distintos de Asp. Las cepas de lactobacilos estudiadas demostraron capacidades enzimticas de gran inters para su uso como cultivos adjuntos en queso, que variaron de una cepa a otra. Esta diversidad permitir seleccionar fermentos adjuntos en vistas al incremento de determinados compuestos de aroma en el queso.
P16 - 27611 EFECTO DEL AGREGADO DE ADITIVOS SOBRE LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE SANGRE DE MATADERO AVIAR. BONANSEA, EMANUEL(1); ALTINA, MELISA(1); ZBRUN, VIRGINIA(1); SOTO, LORENA(1); FRIZZO, LAUREANO(1); ROSMINI, MARCELO (1); SIGNORINI, MARCELO(2)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias, UNL, (2) INTA, EEA Rafaela Introduccin: la sangre animal representa una fuente potencial de aminocidos esenciales que le confieren a sus protenas un alto valor biolgico, razn por la cual podra ser incorporada en la formulacin de alimentos para consumo humano y animal.
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Actualmente los mataderos desechan la mayor parte, convirtindose en un efluente altamente contaminante debido al elevado nmero de bacterias aerobias presente en ella. El uso de bacterias cido lcticas (BAL) como cultivo protector representa una interesante alternativa para la conservacin de la sangre, en razn de su capacidad de producir sustancias inhibitorias. Para mejorar el desarrollo de las BAL en sangre, es factible agregar sustancias que favorezcan el crecimiento de las mismas evitando que aquellas deteriorantes puedan provocar la putrefaccin del producto. Objetivos: Evaluar el efecto del agregado de aditivos a la sangre de matadero aviar, sobre los recuentos de los principales grupos microbianos que conforman la poblacin de dicho producto. Materiales y mtodos: Se analizaron microbiolgicamente tres muestras de sangre obtenidas de un frigorfico de aves. Cada muestra fue fraccionada en cuatro tubos: un control refrigerado (CR) a 5 C, un control (CT) incubado a 22 C (ambos sin el agregado de aditivos), otro con el agregado de Citrato de amonio, extracto de carne, lactosa, Na2HPO3 y NaH2PO3 (T1) y otro con ClNa, extracto de carne, lactosa, Na2HPO3 y NaH2PO3 (T2) ambos conservados a 22 C. Los aditivos fueron seleccionados con base a la formulacin de medios de cultivos que favorecen el desarrollo de las BAL y podran evitar el crecimiento de los alterantes. De cada tubo se realizaron diluciones en Ringer 1/4 a tiempo 0h y 24h para estudiar las distintas poblaciones. Para el recuento de mesfilos totales se utilizaron placas de agar PCA, para enterobacterias totales y coliformes se utilizaron placas de agar VRBG y VRBL respectivamente. La poblacin fngica fue evaluada utilizando agar HyL y se utilizaron dos medios para el estudio de las BAL, agar MRS y agar LAMVAB. La evaluacin del efecto de los aditivos se analiz utilizando un anlisis factorial de los recuentos mediante el software estadstico SPSS. Resultados: Se hallaron diferencias significativas (p<0.05) en los recuentos de mesfilos totales donde el CR y el T2 fueron los que presentaron menores recuentos de dicha poblacin durante el ensayo (CR: 5.08 UFC/ml; T2: 6.57 UFC/ml, T1: 6.95 UFC/ml y CT: 7.68 UFC/ ml). Lo mismo sucedi con los coliformes donde CR y T2 se diferenciaron (p<0.05) del resto de los tratamientos (CR: 3.95 UFC/ ml, T2: 5.34 UFC/ml, T1: 6.06 UFC/ml y CT: 6.42 UFC/ml). En la poblacin de BAL estudiada en agar MRS tambin hubo diferencias significativas (p<0.05) del CR respecto al resto (CR: 4.65 UFC/ml, T1: 5.54 UFC/ml, T2: 5.74 UFC/ml y CT: 6.15 UFC/ml). Conclusiones: De acuerdo con los valores hallados, el T2 produjo una disminucin significativa en el recuento de mesfilos totales y coliformes sin alterar de manera sustancial el recuento de BAL. Podramos considerar a los aditivos utilizados en el T2 como adecuados en nuestra estrategia para favorecer el desarrollo de un cultivo protector en sangre de matadero aviar.
cias bibliogrficas existentes, se aislaron bacterias coliformes, bacterias lcticas heterofermentativas y levaduras fermentativas, a partir de las rajaduras de los frutos. Las bacterias coliformes se aislaron y purificaron en agar eosina azul de metileno, adicionado de pimaricina, a 37 C. Las bacterias lcticas heterofermentativas se aislaron en agar MRS con pimaricina, a 28 C; el carcter heterofermentativo se investig en caldo MRS con tapn de vaspar y se verific que fueran catalasa negativo. Las levaduras fermentativas se aislaron en medio para levaduras y mohos (Britania) a 28 C; el carcter heterofermentativo se investig en caldo levadura glucosado con campana de Durham. Las mismas muestras de aceitunas anilladas se enriquecieron en caldo lactosado o caldo MRS con 6% NaCl a 28 C. Se aislaron las cepas enriquecidas en los medios de cultivo diferenciales antes mencionados. Las cepas purificadas se sembraron en aceitunas enteras en salmuera esterilizadas obtenidas al inicio de la temporada de produccin, en abril de 2010, y se incubaron a 28 C para comprobar que los microorganismos aislados fueran los agentes causales del deterioro. Del primer aislamiento se obtuvieron 10 cepas de bacterias coliformes y 8 cepas de bacterias lcticas heterofermentativas. De las muestras de aceitunas enriquecidas se aislaron 3 cepas de levaduras fermentativas. Las bacterias coliformes o lcticas sembradas no reprodujeron el fenmeno de rasgado de los frutos en esta variedad de aceitunas mientras que las cepas de levaduras aisladas de los enriquecimientos causaron mltiples lesiones a los frutos inoculados. Se identificaron a dos de las cepas de levaduras como Cryptococcus albidus de acuerdo a los criterios bioqumicos y morfolgicos de Kurtzman and Fell (1998).
P18 - 27646 SECADO EN SPRAY DE LACTOBACILOS AISLADOS DE KEFIR: EFECTO SOBRE LA MEMBRANA PLASMTICA, ACTIVIDAD METABLICA Y PROPIEDADES PROBITICAS. GOLOWCZYC, MARINA A(1); GEREZ, CARLA L(2); SILVA, JOANA(3); PAULA, TEIXEIRA(3); DE ANTONI, GRACIELA L(1); ABRAHAM, ANALIA G(1)
(1) CIDCA, (2) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, (3) ESB, Portugal. El secado en spray (SD) es una tecnologa que produce grandes cantidades de producto deshidratado a bajo costo, estos productos pueden ser transportados fcilmente y almacenados por largos perodos de tiempo de forma estable. Esta metodologa se ha empleado para deshidratar y conservar bacterias lcticas para ser usadas como cultivos starters (para yogurt o queso), cultivos productores de bacteriocinas y cultivos probiticos. La principal limitacin de esta metodologa es la prdida de viabilidad que ocurre durante el proceso y el posterior almacenamiento de los productos deshidratados debido a stress por calor, osmtico u oxidativo. Se seleccionaron tres lactobacilos con conocidas propiedades probiticas: L. kefir CIDCA 8321, L. kefir CIDCA 8348 y L. plantarum CIDCA 83114. El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto del SD sobre la membrana plasmtica, la actividad metablica y ciertas propiedades probiticas de estos microorganismos. Los microorganismos fueron cultivados en MRS a 30 C, se lavaron y se resuspendieron en leche en polvo reconstituida (11%). Los microorganismos fueron secados en un atomizador de pequea escala (T salida 70 C, T de entrada 160 C y presin 3 Bar). Se estudiaron los microorganismos luego del secado en spray mediante los siguientes ensayos: evaluacin del dao en la membrana a travs de la resistencia a lisozima, sales biliares, cloruro de sodio y penicilina; capacidad de adhesin a clulas intestinales en cultivo Caco-2/TC-7; capacidad de produccin de cidos en MRS y leche y capacidad de inhibicin de la invasin de Salmonella en clulas en cultivo. Los tres microorganismos mostraron resistir muy bien el proceso de SD. La resistencia a los distintos agentes antes y despus del SD se mantuvo inalterada, esto indicaran que no se produce dao en la membrana durante el proceso de secado. La capacidad de produccin de cidos de L. plantarum 83114 deshidratada no mostr diferencias significativas comparada con la cepa fresca en ambos medios, mientras que las dos cepas de L. kefir mostraron
P17 - 27625 INICIADORES LCTICOS SELECCIONADOS PARA FERMENTACIN DE ACEITUNAS VERDES. ETAPA III: IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS GASIFICANTES. SFREDDO, ELIZABETH SUSANA; DEDIOL, CORA; NACIF, NORMA; ANDRE, SILVIA; SANCHEZ, ML
Universidad Nacional de Cuyo Durante el proceso de produccin de aceitunas verdes fermentadas es posible que ocurran desvos en la fermentacin o que aparezcan zonas en los recipientes con condiciones favorables para el desarrollo de microorganismos gasificantes que suelen llevar a la prdida total o parcial de la produccin como fruto entero. Los microorganismos pueden crecer en las lenticelas de los frutos como colonias visibles o no y producir la rasgadura en varios sitios por acumulacin de gas entre la epidermis y la pulpa. El objetivo del presente trabajo fue identificar a los microorganismos causantes del deterioro de aceitunas verdes fermentadas de la variedad Arauco, conocido en la industria como anillado, que se presenta en las primeras etapas de fermentacin y en la poca de primavera donde se reactivan las fermentaciones por efecto del aumento de la temperatura del medioambiente. Se tomaron muestras de aceitunas anilladas de establecimientos olivcolas de distintos orgenes de la provincia de Mendoza, se lavaron con agua estril, y basados en las referen-
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un retraso en la acidificacin en MRS. Los resultados de adhesin a clulas en cultivo de las cepas deshidratadas no mostraron diferencias significativas con respecto al control, excepto la cepa L. kefir 8348. L. kefir 8321 mantuvo la capacidad de inhibir la invasin de Salmonella a clulas luego del proceso de secado aunque en menor medida que la cepa fresca. En conclusin, los microorganismos seleccionados sobrevivieron bien al proceso, no demostraron sufrir daos en la membrana, mantuvieron su actividad metablica y su capacidad de adhesin a clulas en cultivo as tambin como su antagonismo frente a Salmonella. Estos resultados indicaran que estos microorganismos aislados de kefir deshidratados mediante SD podran ser aplicados como starters o comercializados como un producto deshidratado probitico.
FRANCO(1,2); VALLEJO, MARISOL(3); MARGUET, EMILIO(3); CASTRO, MARCELA(1,2); CAMPOS, CARMEN(2,4)

(1) Universidad Nacional del Chaco Austral. (2) CONICET.(3) Fac. de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de la Patagonia Chubut.(4) Depto. Industrias, FCEN, UBA Las bacterias cido lcticas (BAL) pueden ser utilizadas en la bioconservacin de alimentos debido a su capacidad de producir varias sustancias antimicrobianas incluidas las bacteriocinas. El gnero Enterococcus, perteneciente a las BAL, se encuentra presente en varios alimentos fermentados de elaboracin artesanal, tal como los quesos de leche de oveja. En este trabajo se utilizaron dos cepas de Enterococcus faecium, aisladas de estos productos artesanales, con el objetivo de caracterizar la produccin de bacteriocinas en presencia de distintas concentraciones de NaCl. Las cepas utilizadas fueron E. faecium ETw15 y E. faecium ETw20. Los sistemas en estudio se constituyeron con caldo MRS, agregando 0, 3 6% p/v de NaCl en cada caso. El pH inicial de los mismos se ajust a 6,2 previo a la esterilizacin. Cada sistema estril se inocul con un cultivo activo de la cepa en estudio al 1% v/v y se almacen a 30 C por un perodo de 36 h. Durante el almacenamiento se tomaron alcuotas a intervalos definidos a fin de determinar el crecimiento microbiano, la produccin de bacteriocinas y la acidificacin del medio. El crecimiento microbiano se monitore midiendo la absorbancia de los sistemas a 600 nm. La produccin de bacteriocinas se determin mediante el mtodo de la dilucin crtica, por difusin en agar, empleando Listeria innocua ATCC 33090 y Staphylococcus aureus FBUNT como microorganismos indicadores. La acidificacin del medio se determin mediante lecturas de pH. Las velocidades de crecimiento se determinaron por ajuste de los datos experimentales a la ecuacin de Gompertz modificada y se compararon estadsticamente mediante anlisis de varianza. La velocidad de crecimiento decreci significativamente en el siguiente orden, correspondiente a las concentraciones de NaCl: 3%, 0% y 6% p/v. Consecuentemente, ambas cepas presentaron un perfil de acidificacin mayor en los sistemas que contenan 3% NaCl. Las sustancias del tipo bacteriocina producidas por las dos cepas ensayadas presentaron una marcada inhibicin contra L. innocua con ttulos superiores a 3000 unidades arbitrarias por ml (UA/ml) en los sistemas sin NaCl, mientras que estos valores fueron ocho veces menores frente a S. aureus para los mismos sistemas. El agregado de 3% NaCl produjo una reduccin en la produccin de bacteriocina. Este fenmeno se observ frente a los dos microorganismos indicadores. La presencia de 6% NaCl invalid completamente la produccin de bacteriocinas para la cepa ETw15, mientras que la cepa ETw20 produjo inhibicin frente a L. innocua (200 UA/ml) pero no as frente a S. aureus. Los resultados presentados dan cuenta de la significativa influencia del NaCl sobre el crecimiento de las cepas estudiadas y permitieron establecer que la presencia de 3% de NaCl, si bien optimiza las velocidades de crecimiento y el perfil de acidificacin, afecta la produccin de bacteriocinas en el medio estudiado.
P19 - 27660 EVALUACIN DE LA MEJORA AL PROCESO DE ELABORACIN DE ACEITUNAS VERDES POR AGREGADO DE UN INICIADOR LCTICO EN CONDICIONES QUE PERMITAN ASEGURAR LA CALIDAD DEL PRODUCTO. FARRANDO, SILVINA; SFREDDO, E; STOCCO, A; ENGLER, S; HERRERA, C; MIRABILE, M; DA SILVA, S.
Universidad Nacional de Cuyo Para mejorar la calidad de aceitunas verdes estilo Espaol se propone la utilizacin de un cultivo iniciador, cuyos requisitos incluyen rpido y predominante crecimiento, metabolismo homofermentativo, desarrollo a bajas temperaturas, tolerancia a la sal, al cido y a los polifenoles. En la bibliografa hay poca informacin sobre el momento oportuno de inoculacin en la variedad Arauco. Las caractersticas fsico-qumicas iniciales de la salmuera influyen en el desarrollo de la fermentacin y en la seleccin de los microorganismos que la conducen. A nivel industrial, para inhibir a microorganismos alterantes, es frecuente el uso de sal a alta concentracin, a pesar que esto puede favorecer el predominio de levaduras sobre bacterias lcticas. El objetivo del trabajo es evaluar el efecto de un inoculante lctico sobre el proceso fermentativo de aceitunas verdes variedad Arauco y establecer las condiciones que aseguren su implantacin y la calidad del producto final. Se escogieron 4 cepas de Lactobacillus plantarum (L199, L256, L259 y L310) del cepario regional de la Ctedra de Microbiologa, segn sus propiedades competitivas tales como produccin de inhibicin sobre un gran nmero de bacterias lcticas cohabitantes, alta velocidad de crecimiento, produccin de -glucosidasa, entre otras. Se realiz control de pureza, Gram y catalasa. Se determin la capacidad de crecimiento en concentraciones crecientes de sal en caldo MRS en un rango de 5 a 11% de sal. Se evalu el efecto del NaCl sobre la viabilidad bacteriana en frascos con caldo MRS a 8, 9 y 10% de sal. El nmero de clulas viables se obtuvo por cultivo en placa en agar MRS a las 48 y 120 hs. Se analiz el efecto simultneo del pH (5, 6 y 7), NaCl (7, 8 y 10 %) y temperatura (15 y 20 C) sobre el crecimiento y acidificacin de las cepas bacterianas. El seguimiento se realiz midiendo pH, acidez titulable (% cido lctico) y nmero de bacterias viables (ufc/ml) en agar MRS a 28 C; al 4 y 10 da de incubacin. Todos los anlisis se hicieron por triplicado. Se observaron bastones Gram positivos, catalasa negativos. Ninguna cepa creci a 11% de sal y L199 no lo hizo a 10%, por lo que fue descartada. El recuento de bacterias viables fue <100000 ufc/ml a pH 10 y de las 3 cepas analizadas L259 present los menores recuentos, por lo que tambin se descart. Se hall diferencias significativas (p<0.05) en el crecimiento y porcentaje de acidificacin en las condiciones ensayadas para cada cepa respecto al contenido de sal y al pH. El porcentaje de acidificacin fue mayor a 7% NaCl, pH 5 y a 25 C para ambas cepas. El recuento fue mayor a 8% y pH 7 para L256 y a 7% y pH 5 para L310. El nmero de bacterias fue mayor para L310 que L256. Se escogi L310 como inoculante lctico, por su mayor capacidad de multiplicacin y mejor adaptacin a las condiciones de la salmuera a nivel industrial.
P21 - 27707 IDENTIFICACIN DE BACTERIAS ACIDO LCTICAS AISLADAS DE SANGRE DE MATADERO AVIAR. ZBRUN, M VIRGINIA; ALTINA, MELISA; BONANSEA, EMANUEL; FRIZZO, LAUREANO; SOTO, LORENA; ROSMINI, MARCELO; SIGNORINI, MARCELO
Facultad de Ciencias. Veterinarias, UNL. Introduccin: la sangre es una materia prima muy rica en protenas de alto valor biolgico que puede aprovecharse por una gran variedad de industrias. Por otra parte, la sangre siempre ha sido un grave problema para los mataderos ya que es uno de los residuos con mayor poder contaminante. El principal inconveniente que presenta este subproducto es la calidad microbiolgica, debido a que es colectada usando sistemas abiertos de recoleccin. Una posibilidad para conservar la sangre podra ser mediante cultivos bioprotectores, es decir, aprovechar la capacidad de bacterias cido lcticas (BAL) presentes en dicho medio para inhibir
P20 - 27694 PRODUCCIN DE BACTERIOCINAS EN PRESENCIA DE NACL POR DOS CEPAS DE Enterococcus faecium AISLADAS DE QUESOS ARTESANALES DE LECHE OVINA. RIVAS,
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o controlar el crecimiento y actividad potencial de microorganismos deteriorantes o patgenos. Objetivo: estudiar la diversidad de las BAL presentes en sangre aviar para la posterior seleccin de cepas que conformarn un cultivo bioprotector. Materiales y mtodos: se analizaron microbiolgicamente 8 muestras de sangre aviar obtenidas de dos mataderos las cuales fueron recolectadas en recipientes estriles durante la faena. De cada muestra se realizaron diluciones en Ringer para efectuar el aislamiento de BAL. Se utilizaron dos medios: agar MRS y agar LAMBAV. La siembra se realiz en superficie y se incubaron 48 h a 37 C en anaerobiosis. Las colonias aisladas se repicaron en caldo MRS e incubaron a 37 C por 24 h. Para estudiar los distintos microorganismos aislados se llevaron a cabo pruebas fenotpicas como: tincin de gram, morfologa, prueba de la catalasa, forma y cantidad de crecimiento en caldo, prueba de homo-heterofermentacin e hidrlisis de arginina. Luego se realizaron pruebas genotpicas mediante la extraccin de ADN y amplificacin del gen 16S. El producto amplificado de 1500pb fue digerido con tres enzimas de restriccin: Hinf I, Msp I y Hae III. Las cepas con patrones distintos fueron secuenciadas para su identificacin. Resultados: Se aislaron 98 cepas catalasa negativa y gram positivas, de las cuales se seleccionaron 46 que presentaron distinta morfologa y caractersticas de crecimiento en caldo. La combinacin de la presencia de homo/heterofermentacin, hidrlisis de arginina y la digestin enzimtica permiti detectar 13 patrones distintos dentro de las 46 cepas. Los resultados de la secuenciacin e identificacin de dichos microorganismos mediante comparacin de sus secuencias en el BLAST (NCBI) fueron los siguientes: 2 cepas de Lactobacillus salivarius, 2 cepas de Lactobacillus reuteri, Lactobacillus brevis, Lactobacillus crispatus, Pediococcus acidilactici, 2 cepas de Enterococcus faecium, 2 cepas de Enterococcus faecalis, Enterococcus durans, Weissella paramesenteroide. Estos resultados demuestran la presencia de una compleja diversidad de BAL en sangre de matadero aviar, dentro de las cuales podran surgir cepas con potencialidad bioprotectora. Las mismas aplicadas en la sangre reduciran los costos de procesamiento mejorando sus caractersticas microbiolgicas.
de halos de inhibicin alrededor de las colonias. El ensayo de gelatinasa se realiz en agar Todd-Hewitt, suplementado con gelatina (30 g/l). Luego de 48 h de incubacin a 37C se determin si eran gelatinasa positiva por la prdida de turbidez alrededor de las colonias al revelar las placas con la solucin de desarrollo (15%v/v HgCl2 en HCl 20%v/v). Resultados: Los resultados obtenidos mostraron que el 95% de las cepas estudiadas fueron sensibles a vancomicina, y solo dos cepas presentaron resistencia. De las 40 cepas analizadas slo 3 presentaron actividad hemoltica. El ensayo de gelatinasa arroj resultados negativos. El anlisis de la sntesis de sustancias antimicrobianas revel que de ambas cuencas lecheras se aislaron y seleccionaron cepas productoras de sustancias con efecto inhibitorio sobre L. monocytogenes, S. aureus ATCC29213 y B. cereus C1. Cabe destacar que las cepas con mayor potencial antimicrobiano procedieron de la cuenca lechera del Valle de Lerma (8 cepas) y en menor cuanta (3) de Amblayo. Ninguna de ellas present algunos de los factores de virulencia analizados. Conclusin: Los resultados obtenidos permitirn realizar una seleccin de cepas con potencial tecnolgico e inocuas, tiles para disear un fermento lcteo cuidando la salud humana.
P23 - 27853 CO-APLICACIN NASAL DE UN ANTGENO DE NEUMOCOCO Y UNA CEPA PROBITICA: EFECTO PROTECTIVO FRENTE A UNA INFECCIN RESPIRATORIA POR S. pneumoniae. VINTII, ELISA (1,2); MEDINA, MARCELA (1,3)
(1) CERELA, (2) Facultad de Agronoma - UNT, (3) Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia - UNT. Streptococcus pneumoniae contina siendo causa de una elevada morbi-mortalidad a nivel mundial a pesar de la existencia de antibiticos y de vacunas. Las vacunas disponibles, a polisacrido23 valente (PPV) y conjugadas (PCV, 7 13 valente), no constituyen una solucin definitiva debido a su baja inmunicidad (PPV) o a su elevado costo (PCV).La va de ingreso del patgeno es a travs de mucosa nasal, por ello las vacunas de mucosas representan una alternativa promisoria para lograr una proteccin efectiva del husped. El empleo de protenas serotipo independientes constituye una interesante opcin para el desarrollo de nuevas vacunas contra el neumococo. La protena protectora A (PppA) es una protena conservada en varios serotipos que demostr ser efectiva en la prevencin de una infeccin respiratoria por el patgeno en ratones inmunizados nasalmente. El empleo de adyuvantes asociados a protenas es necesario para lograr una proteccin adecuada. Las bacterias lcticas con propiedades inmunomoduladoras podran ser empleadas como adyuvantes y, en combinacin con protenas especficas, resultaran efectivas en la prevencin de infecciones neumocccicas. Objetivo: Evaluar la inmunidad especfica a nivel nasal y pulmonar y el efecto protectivo inducido por la co-administracin nasal de PppA y Lactobacillus casei (Lc) frente a una infeccin respiratoria con S. pneumoniae. Ratones (r) albino-suizos de 3 semanas fueron inmunizados por va nasal (N) con Lc (109UFC/d/r)+PppA, en 3 dosis sucesivas con intervalos de 2 semanas entre s. Los das 0, 28, 42, 58 y 73 se tomaron muestras de lavado broncoalveolar (BAL) y nasal (LN).Los controles recibieron PBS, PppA y Lc. Determinaciones:1) Deteccin de anticuerpos especficos anti-PppA de tipo IgA e IgG. 2) Citoquinas:IL-4 e INF-gamma por ELISA.3) Colonizacin nasal, pulmonar y sistmica: Ratones inmunizados con Lc+PppA fueron desafiados por va nasal con neumoccoco serotipo 14 a los 15 das posteriores a la 3 inmunizacin. Al cabo de 48 h los animales fueron sacrificados y se evalu la colonizacin nasal (CN) y pulmonar (CP) con el patgeno; adems se realizaron hemocultivos. Resultados: La co-administracin de PppA+Lc redujo la CN y CP y evit el pasaje a sangre del neumococo. Ello estara asociado a los niveles de anticuerpos anti-PppA en LN y BAL significativamente mayores en el grupo PppA+Lc en comparacin con el control que recibi PppA sola (Da 42=IgA:BAL:p<0,01;NAL:p<0.01; IgG:BAL p<0,01; NAL:p<0.05). Adems, PppA+Lc increment la produccin de IL4 (respuesta Th2) e INF-gamma (respuesta Th1) en BAL y LN en comparacin a los controles (BAL:da42, pg/ml=IL-4: PBS: 65,44,2;PppA:89,55,7; PppA+Lc:278,215,3;Lc:115,97,9; INF-
P22 - 27813 ANLISIS DEL ESPECTRO ANTIMICROBIANO Y DE LA INOCUIDAD DE BACTERIAS LCTICAS CON POTENCIAL TECNOLGICO DE DOS CUENCAS LECHERAS CAPRINAS. TORRES, NANCY (1); AUDISIO, M CARINA (2); CHAVEZ, MONICA (1)
(1) INTA EEA SALTA, (2) CONICET-INIQUI, FAC. Introduccin. Las bacterias lcticas son ampliamente utilizadas para la fermentacin y preservacin de una gran variedad de productos lcteos ya que no solo condicionan su aroma, sabor y textura, sino que tambin pueden prevenir el desarrollo de microorganismos contaminantes. El grupo de trabajo seleccion previamente cepas de bacterias lcticas por su capacidad tecnolgica. Estas, provenientes de dos cuencas de ecosistemas diferentes: Amblayo y Valle de Lerma (Salta), produjeron compuestos de aroma y generaron propiedades deseables para la elaboracin de quesos. Objetivo. Determinar el espectro antimicrobiano y la inocuidad de bacterias lcticas seleccionadas para la elaboracin de fermentos. Materiales y Mtodos. Se estudiaron 40 cepas de bacterias lcticas con inters tecnolgico, aisladas de leche de cabra de dos cuencas lecheras (Valles Templados y Valles ridos y Quebradas). La presencia de sustancias antimicrobianas se detect mediante la tcnica de difusin en agar frente a cepas de Listeria monocytogenes, Stpahylococcus aureus y Bacillus cereus como bacterias indicadoras. La inocuidad de las cepas se determin segn las siguientes pruebas: susceptibilidad a vancomicina, actividad hemoltica e hidrlisis de gelatina. La respuesta a diferentes concentraciones de vancomicina (20 mg/ ml a 1,2 g/ml) se analiz por el mtodo de difusin en agar de acuerdo con las indicaciones de CLSI y los resultados se evaluaron dos de acuerdo con los patrones de prueba de susceptibilidad antimicrobiana M2-A7 de la agencia NCCLS. La actividad hemoltica se analiz en agar Columbia adicionado con 5% (v/v) de sangre ovina, las placas se incubaron durante 48 h a 37 C y la produccin de -hemlisis se visualiz mediante la presencia
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gamma: PBS:70,43,8; PppA:78,454,8; PppA+Lc: 245,417,2; Lc:123,8 6,5). Conclusiones: La co-aplicacin nasal de una cepa probitica con la protena PppA de neumococo, induce la estimulacin de la respuesta inmune adaptativa a nivel de mucosa respiratoria con produccin de anticuerpos protectores y activacin de clulas Th1 y Th2. La combinacin de PppA con Lc como adyuvante de mucosas, resultara una alternativa efectiva para el desarrollo de vacunas nasales destinadas a la prevencin de las infecciones por neumococo
PAULA(1); MINNAARD, JESSICA(1); PEREZ, PABLO(1,2); SERRADELL, MARIA(1)

(1) Ctedra de Microbiologa, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata. (2) CIDCA - CCT CONICET. El kefir es una leche fermentada probitica que contiene microorganismos de diferentes gneros y especies. Nuestro laboratorio cuenta con cepas de Lactobacillus kefir aisladas de grnulos de kefir, las cuales estn siendo estudiadas desde el punto de vista de sus caractersticas probiticas, entre las que se encuentra la capacidad de inhibir la accin de microorganismos patgenos. Bacillus cereus es un patgeno que produce tanto infecciones intestinales como extra intestinales y parte de su virulencia se debe a la secrecin de factores extracelulares que afectan la estructura y funcin de las clulas eucariticas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la capacidad de diferentes cepas de L. kefir (CIDCA 83115, CIDCA 8345 y CIDCA 8348) de inhibir la accin de los factores extracelulares de B. cereus sobre clulas en cultivo. Los ensayos de citotoxicidad se realizaron sobre monocapas de clulas Vero (fibroblastos de rion de mono) y Caco-2 (clulas epiteliales intestinales humanas), empleando el sobrenadante estril de cultivo de la cepa T1 en fase estacionaria temprana. El mismo fue preincubado en presencia o no de las 3 cepas de L. kefir (DO=4.0 y 8.0) durante 1 hora a 37 C. Posteriormente las bacterias fueron separadas por centrifugacin 10 min a 13000 rpm. Diluciones seriadas de los sobrenadantes fueron incubadas sobre las clulas durante 1 h a 37C. El efecto citotxico se evalu cuantificando el desprendimiento celular mediante la tcnica de tincin con cristal violeta. Los sobrenadantes de B. cereus preincubados con L. kefir presentaron una menor actividad biolgica. Este efecto fue dependiente de la cepa de L. kefir estudiada y de la concentracin de bacterias presentes. Las tres cepas estudiadas mostraron efecto antagnico de la accin de los sobrenadantes sobre ambas lneas celulares, siendo mayor la inhibicin al emplear suspensiones bacterianas de DO=8.0. En estas condiciones, las cepas CIDCA 8345 y CIDCA 8348 mostraron un efecto antagnico mayor que la cepa CIDCA 83115 (aumento de entre el 75-90% en la concentracin de sobrenadante necesaria para producir el 50% de desprendimiento celular). Los resultados obtenidos hasta el momento sugieren que estas cepas de L. kefir interactan con los factores de virulencia extracelulares de B. cereus de manera de disminuir el efecto nocivo sobre las clulas eucariticas. El efecto podra deberse a la adsorcin de toxinas o a la modificacin de la actividad debido a componentes o actividades metablicas bacterianas.
P24 - 27854 LIOFILIZACIN Y PROPIEDADES BENFICAS DE CEPAS POTENCIALMENTE PROBITICAS, PARA SU INCLUSIN EN EL DISEO DE PRODUCTOS PARA PREVENCIN DE MASTITIS EN BOVINOS. ESPECHE, M CAROLINA; NADER MACIAS, M ELENA
Centro de Referencia para Lactobacilos CERELA - CONICET Mastitis (MB) es una de las enfermedades de mayor relevancia y consecuencias econmicas que afectan al ganado bovino. Su prevencin y tratamiento se basan principalmente en el uso de antimicrobianos, lo que lleva a la aparicin de sus residuos en leche y a un incremento de resistencia cruzada. Una alternativa novedosa frente al uso de antibiticos es la aplicacin de productos probiticos (PP) conteniendo microorganismos benficos. En el diseo de un PP, adems del estudio de las propiedades benficas (PB) y funcionales de las bacterias probiticas, es necesario evaluar sus propiedades tecnolgicas, que incluyen la obtencin de biomasa, la resistencia a la liofilizacin y la conservacin de las PB luego de la aplicacin de los diferentes procesos. Por ello, los objetivos del presente trabajo fueron determinar la resistencia al proceso de liofilizacin de cuatro cepas potencialmente probiticas aisladas de glndula mamaria usando tres lioprotectores diferentes y determinar si se mantienen sus PB luego del proceso. Lactococcus lactis CRL1655 (productor de nisina) Enterococcus mundtii CRL1656 (productor de mundticina), Lactobacillus plantarum CRL1716 y L. perolens CRL1724 (cepas hidrofbicas) aisladas previamente de muestras de leche cruda y seleccionadas en base a sus propiedades fueron subcultivadas en caldo MRS a 37 C. El grado de hidrofobicidad se determin por particin en hexadecano y el ttulo de las bacteriocinas por difusin en placa de los sobrenadantes de L. lactis y E. mundtii usando como indicadoras L. plantarum CRL691 y L. innocua 7 respectivamente. El pellet obtenido por centrifugacin de los cultivos activos fue lavado con agua destilada estril, y resuspendido en los lioprotectores (volumen 10 veces menor que el original). Los protectores usados fueron leche descremada 6%, leche descremada 6% con 12% de lactosa (LL) y concentrado proteico lcteo (CPL) 10%. Se us agua destilada como control. Las suspensiones fueron luego liofilizadas y se registr el peso y las caractersticas fsicas de los productos. Los liofilizados se resus-pendieron en agua peptona durante 10 minutos y fueron subcul-tivados en MRS a 37 C durante 24h para cuantificar el grado de hidrofobicidad de las cepas y el ttulo de bacteriocina. El nmero de microorganismos se determin antes y despus de la liofi-lizacin por el mtodo de diluciones sucesivas y plaqueo en MRS agar. Los ensayos se realizaron por duplicado. El nmero de microorganismos despus de la liofilizacin fue diferente segn la cepa y el lioprotector empleado, registrndose diferencias de entre una y cuatro unidades logartmicas. No se detectaron cambios en las PB evaluadas despus del proceso de liofilizacin. Las mejores caractersticas de los slidos fueron obtenidas con LL y CPL. Los resultados obtenidos permiten avanzar en el diseo de un PP preventivo de MB y seleccionar las mejores condiciones de liofilizacin de cada microorganismo, lo que resulta caracterstico de cepa. Se evaluar su sobrevida durante periodos ms prolongados de tiempo y a diferentes temperaturas de conservacin, a fin de disponer de un producto aplicable en el campo.
P26 - 27891 EFECTO INHIBITORIO DE PROTENAS DE CAPA-S DE Lactobacillus kefir SOBRE LA ACCIN IN VITRO DE TOXINAS DE Clostridium difficile. CARASI, PAULA (1); TREJO, FERNANDO(2); DE ANTONI, GRACIELA(1,2); PEREZ, PABLO(2); SERRADELL, MARIA(1)
La Plata, Buenos Aires, Argentina La Capa-S es una estructura cristalina macromolecular (glico)proteica que recubre la superficie de bacterias de diferentes gneros y especies. Se le han atribuido diferentes funciones, entre las que se encuentra la participacin en procesos de adhesin y en la proteccin contra patgenos. Nuestro laboratorio cuenta con cepas potencialmente probiticas de Lactobacillus kefir, cuyas protenas de Capa-S muestran una gran heterogeneidad estructural y confieren diferentes propiedades superficiales a las clulas enteras. Clostridium difficile es un bacilo Gram-positivo causante de diarreas asociadas al uso de antibiticos, y sus principales factores de virulencia son las toxinas A y B. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la capacidad inhibitoria de protenas de Capa-S provenientes de cepas de Lactobacillus kefir sobre la accin de las toxinas de Clostridium difficile sobre clulas en cultivo. Se realizaron ensayos de citotoxicidad sobre monocapas de clulas Vero (fibroblastos de rin de mono), empleando el sobrenadante de cultivo de una cepa de C. difficile como fuente
P25 - 27857 EFECTO ANTAGNICO DE CEPAS Lactobacillus kefir SOBRE LA ACCIN CITOTXICA DE Bacillus cereus SOBRE CLULAS EN CULTIVO. ROLNY, IVANNA(1,2); CARASI,
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de toxinas A y B. Las clulas fueron incubadas con diluciones seriadas del sobrenadante de C. difficile durante 16 h a 37 C y 5% de CO2 en presencia o no de protenas de Capa-S provenientes de 4 cepas de L. kefir (0,05-0,15 mg/ml) o de las respectivas bacterias enteras (DO=4 y 8). El efecto citotxico se determin cuantificando el desprendimiento celular mediante la tcnica de tincin con cristal violeta. Se evalu la influencia de la preincubacin sobrenadante C. difficile - Capa S/bacteria durante 1 hora a 37 C sobre la capacidad inhibitoria. La capacidad de unin de toxinas por las bacterias enteras se analiz mediante dotblot con anticuerpos especficos anti-toxinas A y B. En primer lugar, slo las protenas de Capa-S fueron capaces de ejercer un efecto antagnico, mientras que no se observ inhibicin al realizar los ensayos de citotoxicidad con las bacterias enteras. Sin embargo, se observ interaccin entre las bacterias y las toxinas A y B mediante dot-blot. De las 4 protenas de Capa-S estudiadas, la cepas CIDCA 83115 y CIDCA 8348 fueron las que ejercieron un efecto antagnico mayor (se duplica la concentracin de sobrenadante necesaria para producir el 50% de desprendimiento celular), mientras que las protenas provenientes de las cepas CIDCA 8321 y CIDCA 8345 no fueron capaces de inhibir significativamente el efecto citotxico. A su vez, la preincubacin del sobrenadante de C. difficile con las protenas de Capa-S potenci el efecto inhibitorio ejercido. Estos resultados sugieren que las protenas de superficie (Capa-S) estn implicadas en los mecanismos de inhibicin de la accin citotxica de C. difficile por cepas probiticas de L. kefir, los que a su vez dependen de la estructura de dichas protenas.
diferencias significativas entre el G-C y los grupos inoculados con BAL. As, durante el da 13 del experimento, el G-C mostr un promedio de 520,6 g/ml, mientras el G-BAL mostr 159,3 g/ml y el G-BAL-L 109,4 g/ml. La concentracin de haptoglobina mostr un pico despus de 2 d de la inoculacin con el patgeno reflejando as la severidad de la infeccin. Todos los terneros fueron negativos a Salmonella en heces tanto antes de comenzar el ensayo como antes de la infeccin. La deteccin de Salmonella en los rganos del medio interno no estuvo relacionada con la administracin del inculo probitico. La haptoglobina fue una buena herramienta para discriminar entre los grupos experimentales. Aunque la administracin del probitico no fue capaz de retrasar la llegada del patgeno a los rganos diana, es evidente que el inculo alter la respuesta de los animales frente al ataque del patgeno debido a la menor severidad de la infeccin indicada por los valores menores de haptoglobina en los grupos tratados con BAL.
P28 - 27903 ISOLATION OF BACTERIOCIN-PRODUCING Lactobacillus sakei WITH ANTI-LISTERIAL ACTIVITY FROM ITALIAN TYPE SALAMI. SOUZA BARBOSA, MATHEUS; JUNQUEIRA DE CAMARGO, RITA; DIMITROV TODOROV, SVETOSLAV; D G M FRANCO, BERNADETTE
Universidad de San Pablo Introduction: Bacteriocins produced by lactic acid bacteria (LAB) are ribosomally-synthesized peptides usually active against closely related species. They have been applied for control of pathogenic bacteria such as Listeria monocytogenes, isolated from a wide range of sources, including meat products, in particularly dry-fermented products. Application of bacteriocinogenic LAB can be an alternative to increase the safety of products, as they are normally consumed raw. Objective: The purpose of this work was to isolate new bacteriocin producing LAB from Italian type salami with activity to L. monocytogenes. Materials and methods: Bacteriocinogenic strains were isolated using the triple layer and agar spot tests. Strains MBSa1 and MBSa4 were identified using biomolecular techniques (PCR). Both strains were tested for antimicrobial activity against a variety of LAB, Listeria spp, human and food pathogens. Stability of produced bacteriocins were studied in presence of enzymes, 1% Tween 20, Tween 80, Triton X-100 or urea, 1% to 10% NaCl, various pH and temperatures levels. Results: Two isolates named MBSa1 and MBSa4 were isolated from Italian type salami produced in Brazil and identified as Lactobacillus sakei based on 16S rDNA sequencing. For both strains the complete inactivation of antimicrobial activity were observed after treatment of the cell-free supernatant with proteinase type XIV, a-chymotrypsin and pepsin, but not when treated with 1% Tween 20, Tween 80, TritonX-100 or urea. No changes in bacteriocins activity were recorded after 1h or 2h of incubation in the temperatures of 4-100 C or at 121 C by 15 min. The values of pH 2.0 to 6.0 did not influence the activity, but the two bacteriocins were affected when exposed to pH 8.0 and 10.0. The presence of 1% to 10% NaCl did not influence the antimicrobial activity of bacteriocins produced by MBSa1 and MBSa4. The bacteriocins produced by L. sakei MBSa1 and L. sakei MBSa4 inhibit the growth of Listeria welshimeri, L. monocytogenes, Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Enterococcus faecium and Lactobacillus sakei subsp. sakei 2a, in addition bacteriocin MBSa4 inhibited the growth of Staphylococcus aureus. Maximal production (1600 AU/mL) was obtained at 25 C in MRS broth after 20 h and after 22 h of incubation for MBSa1 and MBSa4, respectively. Conclusion: Results suggest that this strain has a potential application as an additional hurdle for ensuring the safety of salami. Further purification of the produced bacteriocins will help to evaluate its effectiveness for the control of pathogens in this product.
P27 - 27893 LA HAPTOGLOBINA COMO MARCADOR DE LA HABILIDAD DE LAS BACTERIAS CIDO LCTICAS PARA INTERFERIR FRENTE A LA INFECCIN DE Salmonella Dublin EN UN MODELO HIPERAGUDO EN TERNEROS JVENES. FRIZZO, LAUREANO SEBASTIN; SOTO, LORENA PAOLA; ZBRUN, MARIA VIRGINIA; MARTI, LUIS ENRIQUE; SEQUEIRA, GABRIEL JORGE; DALLA SANTINA, RODOLFO; ROSMINI, MARCELO RAUL
Facultad de Ciencias Veterinarias - UNL El uso de los microorganismos indgenas con propiedades probiticas es una alternativa preventiva y teraputica frente a las enfermedades de los animales. El modelo experimental de enfermedad intestinal puede ser utilizado para evaluar el efecto probitico frente a la accin de un patgeno. La haptoglobina podra ser un indicador apropiado para medir el efecto probitico y aunque su utilidad como marcador de severidad de infeccin ha sido estudiada en modelos experimentales de Salmonella, el beneficio que puede tener en los terneros suplementados con bacterias cido lcticas (BAL) y desafiados con Salmonella no ha sido estudiado. El objetivo de este estudio fue evaluar la utilidad de la haptoglobina como marcador de la habilidad de las BAL y la lactosa para interferir frente a una infeccin de Salmonella dublin en un modelo hiperagudo en terneros jvenes. Se utilizaron 15 terneros divididos en 3 grupos: un grupo control (G-C), un grupo inoculado con BAL (G-BAL) y un grupo inoculado con BAL y lactosa (G-BAL-L). El inculo probitico experimental formado por Lactobacillus casei DSPV 318T, L. salivarius DSPV 315T y Pediococcus acidilactici DSPV 006T fue administrado junto con el sustituto lcteo. Los dos grupos inoculados con BAL recibieron una dosis diaria de 109 UFC/kg de peso vivo de cada una de las cepas a lo largo del experimento. La lactosa fue otorgada al G-BAL-L a una dosis de 100 g/d. El patgeno fue administrado a todos los animales al da 11 del experimento a una dosis nica de 2 1010 UFC. Se realizaron determinaciones de Salmonella en heces al inicio del experimento, antes de la infeccin con el patgeno y en los rganos diana (hgado, bazo, ndulo linftico mesentrico e ileocecal). Despus de 10 das de administradas las BAL y antes de la infeccin con el patgeno los animales de todos los grupos tuvieron niveles de haptoglobina dentro de los valores normales (<100 ng/ml). Aunque 2 d despus de la introduccin del patgeno los terneros de todos los grupos tenan niveles anormales de haptoglobina en suero, fueron encontradas
P29 - 27942 PROCEDIMIENTOS PARA DETECCIN DE PRODUCCIN DE EXOPOLISCARIDOS MICROBIANOS. APLICACIN A SELECCIN DE BACTERIAS LCTICAS DE USO ALIMENTARIO. ARZAC, MARCELA ALEJANDRA; ERASO, JOSE ALBERTO; GONZALEZ, RUBEN DARIO
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Facultad de Ciencias Mdicas, Universidad Nacional de Crdoba Los microorganismos pueden sintetizar y almacenar polisacridos en su citoplasma, para formar parte de la estructura de la pared, o secretarlos por fuera de la membrana como cpsula o dispersos a partir de sta hacia el medio. Estos polmeros microbianos tienen inters industrial como espesantes, gelificantes, agentes de suspensin o coloides protectivos. Los exopolisacridos (EPS) producidos por bacerias lcticas (BAL) son utilizados en la industria alimentaria como aditivo, a fines de otorgar caractersticas reolgicas deseables. Algunos EPS merecen tambin atencin por sus efectos benficos a la salud humana. En este trabajo se ensayaron tcnicas cualitativas y cuantitativas para seleccin de cepas BAL como potenciales productoras de EPS, a los fines de una posible aplicacin a la seleccin de cepas. Se utilizaron 39 aislados, que se incubaron en medio APTGm (24 h; 37 C) y se inocularon en medio leche (48 h; 37 C). Los ensayos se efectuaron por triplicado. Se ensayaron los siguientes procedimientos: deteccin de cpsula con la coloracin de Muir, tincin de colonias crecidas en APTG con rojo Rutenio, tincin de biopelcula con cristal violeta y observacin de sinresis, consistencia o filancia en cultivos en leche. Estos precedimientos se compararon respecto al resultado de produccin de EPS expresado como peso seco, mediante el procedimiento de precipitacin alcohlica y secado a 37 C, de muestras de cultivos en leche, previamente desproteneizadas con solucin de TCA 10%. Este procedimiento se consider de referencia dado su carcter cuantitativo. A los fines de la comparacin con los ensayos cualitativos, los valores obtenidos de concentracin EPS fueron distribudos en las siguientes categorias: < 20, 21 a 40 y > 40 mg/ml. Cada una de las metodologas ensayadas se correlacion con los valores obtenidos con el procedimiento de referencia, aplicndose anlisis estadstico de Chi Cuadrado con un nivel de significancia de 0,05 y valor de p de 0,45. El mayor nmero de cepas tuvo un valor de EPS menor que 20 mg/ml (92,5% del total). Se concluye que para los aislados ensayados no hubo correlacin entre la concentracin de EPS expresado como peso seco y el resultado de los procedimientos de deteccin mencionados y los cambios reolgicos de los cultivos en leche. A los fines prcticos de aplicacin a screening, se propone realizar el cultivo de los aislados en leche para observar la formacin de filancia, seguido de determinacin cuantitativa de EPS usando el procedimiento de referencia mencionado.
viabilidad luego de ser sometidos a condiciones cidas (pH 2,5) durante 2 hs a 37 C, resultando 28 de ellos capaces de mantener el 60% de su concentracin inicial. A estas cepas se las desarroll en presencia de sales biliares (bilis de buey al 1%) y el 75% mostraron ser altamente resistentes. En base a estas caractersticas, que le permitiran resistir el pasaje por el tracto gastrointestinal se seleccino Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154 y se realizaron ensayos in vivo que demostraron que dicha levadura se recupera viable despus de atravesar el tracto gastrointestinal tanto de ratones BALB/c como de hmsters. Se estudi la capacidad de modulacin de la respuesta innata en mucosas. Se demostr que distintas especies inhiben el efecto de la activacin de clulas Caco-2 con flagelina, la cual usualmente genera una respuesta proinflamatoria. Esta observacin fue realizada tanto en un sistema reportero (Caco-2 ccl20:luciferasa), como por determinacin de la expresin del mRNA de las quemoquinas CCL20, CXCL-8 y CXCL-2. Se analiz la capacidad de sobrenadantes de cultivo de K. marxianus CIDCA 8154 y Saccharomyces cerevisiae CIDCA 8112 y CIDCA 81103 para inhibir el desarrollo de Clostridium diffcile, no observndose disminucin del crecimiento del patgeno. S pudo detectarse que la preincubacin de enterocitos en cultivo con las levaduras disminuye entre un 55-75% la capacidad de adhesin del patgeno. Se observ tambin una disminucin del dao producido en clulas Vero en cultivo al ser tratadas con sobrenadantes de C. difficile desarrollado en medio condicionado por el crecimiento de levaduras. Conclsin: En funcin de los resultados obtenidos podemos afirmar que dentro de las coleccin de cepas de levaduras aisladas de grnulos de kefir, existen candidatos con cualidades interesantes para ser empleados como microorganismos probiticos.
P31 - 27951 ANALISIS DE CEPAS AISLADAS DE FERMENTACION NATURAL DE ACEITUNAS. SEGUIMIENTO DE FERMENTACION CONTROLADA. DE LA FUENTE, AC(1); FONT DE VALDEZ, G (1,2); GARRO, MS(1)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET), (2) Ctedra de Microbiologa Superior. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia, Universidad Nacional de Tucumn (UNT) La fermentacin de aceitunas es una prctica tradicional en diferentes regiones de nuestro pas. La fermentacin natural ocurre espontneamente por las bacterias lcticas (BAL) presentes en la epidermis de los frutos, la microflora es muy variada en la primera etapa de fermentacin, por lo cual la proliferacin de microorganismos no deseados atentaran contra la calidad del producto final y una considerable proporcin de la produccin podra terminar deteriorndose debido a stos microorganismos y a una fermentacin lctica incompleta. En Argentina prcticamente no se usan cultivos iniciadores y los escasamente disponibles son extranjeros, los cuales no se adaptan favorablemente al ecosistema, por lo que es de gran importancia el desarrollo de fermentos regionales. En estudios previos aislamos cepas de BAL de diferentes fases de fermentaciones naturales de aceitunas provenientes de La Rioja; seleccionamos seis cepas de lactobacilos en base a criterios tecnolgicos. El objetivo de este trabajo fue identificar las cepas seleccionadas, evaluar compatibilidad entre ellas, produccin de enzimas (beta-glucosidasa) y comportamiento en diferentes medios econmicos con el objeto de disear y aplicar un fermento en la produccin de aceitunas de mesa. Para la identificacin se usaron mtodos bioqumicos y moleculares. La produccin de enzimas fue evaluada por el test de API Zym y betaglucosidasa mediante el test de arbutina en placas agarizadas. Se evalu el comportamiento de las cepas en medio de cultivo con diferentes fuentes de carbohidratos. Se formularon y evaluaron distintos medios de cultivos econmicos teniendo en cuenta los nutrientes necesarios para el desarrollo de las cepas seleccionadas y la obtencin de mayor biomasa. El fermento seleccionado fue inoculado en un cultivo en lote tamao laboratorio, usando una proporcin de aceituna /salmuera de 62,5% / 37,5%. Se midieron parmetros fisicoqumicos (pH, NaCl, temperatura, azcar residual, acidez titulable y combinada (o leja residual) y microbiolgicos (microscopa directa de la salmuera y recuento de
P30 - 27944 ESTUDIO DE LA POTENCIALIDAD PROBIOTICA DE LEVADURAS AISLADAS DE KEFIR. ROMANIN, DAVID(1); DIOSMA, GABRIELA(2); RUMBO, MARTIN(1); GARROTE, GRACIELA(2)
(1) Laboratorio de Investigaciones del Sistema Inmune (LISIN). (2) Centro de Investigacin y Desarrollo en Criotecnologa de Alimentos (CIDCA, UNLP-CONICET) Las levaduras han sido utilizadas por el hombre durante miles de aos para la fabricacin de pan y bebidas alcohlicas, antes que se supiera que eran microorganismos y se conocieran las particularidades del proceso de la fermentacin. En la actualidad, constituyen uno de los grupos de microorganismos ms empleados en la industria alimentaria y farmacutica. Existe experiencia en el uso de levaduras como suplemento alimentario con el fin de mejorar el crecimiento y salud de animales, sin embargo, la utilizacin de levaduras como probiticos es un concepto relativamente nuevo. Se conoce que los probiticos pueden actuar por diversos mecanismos pero al momento de seleccionar nuevas cepas se establecen dos condiciones importantes: debe sobrevivir en el ambiente gastrointestinal y presentar por lo menos una funcin beneficiosa. Entre estas, pueden mencionarse produccin de compuestos antimicrobianos, competencia con patgenos por los nutrientes, modulacin de clulas inmunes, efectos antimutagnico y/o antitumoral, reduccin del colesterol srico y adsorsin de micotoxinas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la potencialidad probitica de una coleccin de 40 levaduras aisladas de kefir e identificadas previamente en nuestro laboratorio. Se estudi in vitro la capacidad de los aislados de mantener su
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la microbiota presente) durante el tiempo de fermentacin. Cuatro cepas fueron identificadas como Lactobacillus (L) pentosus, y las otras dos como L plantarum y L paracasei subsp paracasei. Las cepas de L pentosus y L plantarum fueron las que presentaron mayor actividad beta-glucosidasa. Todas las cepas fueron compatibles entre si. La evaluacin de los cultivos en diferentes fuentes de carbono y el diseo de diferentes medios de cultivos para la produccin de biomasa permiti seleccionar un cultivo iniciador. La evolucin de los microorganismos durante la fermentacin fue similar en el ensayo y en el control, los parmetros fsico-qumicos mostraron un mayor ajuste en el caso del cultivo inoculado. El uso de un cultivo iniciador y condiciones controladas de fermentacin permiti obtener un producto fermentado con mejores caractersticas fsico-qumicas y microbiolgicas que el control sin inocular.
P32 - 27980 MASAS CIDAS DE TRIGO-CENTENO. INFLUENCIA DE LA PRODUCCIN DE CIDOS DE Pediococcus pentosaceus Y Lactobacillus fermentum SOBRE EL GLUTEN. SAIZ, IVONE; IURLINA, MIRIAM; FRITZ, ROSALIA
Universidad Nacional Mar del Plata La utilizacin de bacterias lcticas en la elaboracin de masas panificables a travs del mtodo conocido como sourdough o masa cida mejora las caractersticas organolpticas y propiedades de preservacin. La produccin de cidos lctico y/o actico es la caracterstica principal de la flora lctica, y se sabe del impacto que puede tener sobre la conformacin de las protenas del gluten. El medio cido favorece la reduccin de enlaces disulfuro intra e intermoleculares y contribuye a solubilizar las protenas del gluten. Pediococcus pentosaceus y Lactobacillus fermentum fueron evaluados en su capacidad para afectar la red de gluten. Se prepar una masa harina de trigo-harina de centeno 50:50% y se ferment durante un perodo de 19 horas. A intervalos de tiempo de 6 horas fueron extradas muestras de masa. Se midieron el pH y la acidez titulable (TTA) por potenciometra y las concentraciones de cidos lctico y actico y de etanol por cromatografa gaseosa con detector de ionizacin de llama (FID) y columna polar ECTM1000 (Alltech). Las modificaciones sobre el gluten al final de la fermentacin fueron evaluadas usando microscopa electrnica de barrido (SEM). Pediococcus pentosaceus fue el acidificador ms rpido alcanzando un pH de 4,5 a las 6 horas de fermentacin, en tanto Lactobacillus fermentum alcanz este pH luego de 12 horas. Las cantidades de cidos lctico y actico fueron respectivamente 4,17 y 0,297 g/kg de masa para Pediococcus pentosaceus y 5,86 y 1,04 g/kg de masa para Lactobacillus fermentum. Las micrografas mostraron que las masas fermentadas con Pediococcus pentosaceus tuvieron una matriz de gluten con una conformacin estructural tridimensional en forma de hebras. Las masas fermentadas con Lactobacillus fermentum en cambio no mostraron una matriz cohesiva observndose una pelcula de gluten sin continuidad. Las caractersticas de acidificacin de diferentes bacterias lcticas favorecen distintas conformaciones de gluten. El descenso rpido de pH y una produccin de cidos moderada promueven una matriz de gluten cohesiva con mayores propiedades de elasticidad.
el potencial probitico de cepas lcteas del gnero Propionibacterium usadas comnmente como cultivos iniciadores para la industria quesera. El Centro Regional de Estudios en Alimentos Saludable (CREAS) y la EIB-PUCV, estudian actualmente la recuperacin de compuestos bioactivos y extractos de oligosacridos con potencial prebitico a partir de diferentes tipos de berries propios de la regin, buscando desarrollar un proceso biotecnolgico innovador para la recuperacin de estos compuestos a partir de los descartes de su procesamiento industrial. En este contexto, el objetivo del trabajo fue evaluar el efecto de oligosacridos usados comercialmente como prebiticos y extractos de berries de la industria chilena a los fines de desarrollar un posible simbitico. La obtencin de extractos se realiz usando como materia prima, pomasa de berries (frambuesa), la cual corresponde al residuo generado en el proceso de extraccin del jugo (comprende restos de pulpa, semillas, cscara). La composicin proximal de esta materia se determin mediante los ensayos establecidos por la AOAC. Extractos hemicelulsicos y pectnicos se obtuvieron a partir de este material mediante tratamientos secuenciales con diferentes enzimas (amiloglucosidasa, tripsina, pectinasa). El crecimiento y fermentacin de estas fracciones y otros polmetros con potencial prebitico (inulina, polidextrosa, goma) por P. freudenreichii CRL 757 y P. acidipropionici Q4 y ATCC 4875 fue determinado turbidimtricamente, por recuento de microorganismos en placa y cromatografa gaseosa respectivamente. Los microorganismos ensayados, fueron capaces, en diferente medida, de fermentar fibras dietarias insolubles (hemicelulosa) y fibras solubles de cadena corta (polidextrosa, inulina) y de cadena larga (pectina, goma). En todos los casos la mayor biomasa final se obtuvo en presencia de glucosa (control), seguido por un buen crecimiento en los medios adicionados con inulina y pectina (aprox 109 UFC/mL). Un crecimiento ms bajo y similar en ambos, se observ a expensas de polidextrosa y hemicelulosa (aprox 108 UFC/mL). La menor biomasa final se observ para todos los microorganismos en presencia de goma como fuente de carbono. En cuanto a la fermentacin, las proporciones de cidos propinico y actico producidos variaron en funcin del sustrato; observndose una relacin aproximada de 2-2,5:1 para la fermentacin de polidextrosa y goma, pero una mayor proporcin de propinico: actico cuando se consumi glucosa (4:1); pectina (3,5:1) hemicelulosa e inulina (3:1). En base a los resultados obtenidos se estudia actualmente el efecto de pectinas de otros frutos sobre propionibacterias y componentes de la flora intestinal.
P34 - 28090 EL FACTOR TRANSCRIPCIONAL SPO0A DE Bacillus subtilis POSEE UN ROL CENTRAL EN LA ACTIVACIN DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO Y EXCLUSIN COMPETITIVA DE PATGENOS BACTERIANOS. GOI, ANIBAL; SABALL, ESTRE; SALVARREY, MARCELA; ROVETTO, ADRIAN; GRAU, ROBERTO
Facultad de Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional de Rosario. Laboratorio de Microbiologa e Inmunologa. CONICETRosario. El inters en las esporas bacterianas, ms all de los aspectos bsico y clnico, se ha orientado recientemente a su utilizacin como probiticos no-refrigerados para humanos y animales. La bacteria Gram positiva, formadora de esporas, categora GRAS, Bacillus subtilis representa el paradigma de estudio en estos aspectos. En nuestro laboratorio tratamos de elucidar el mecanismo molecular del efecto probitico de B. subtilis, en particular su rol en la activacin de la inmunidad innata. En este trabajo presentamos los resultados obtenidos in vitro en cultivos celulares y modelo animal (rata y pollo) sobre la regulacin del sistema del complemento y exclusin de patgenos por B. subtilis. La medicin in vitro de la actividad de las tres vas (clsica, alternativa y lectinas) del complemento evidenciaron que el regulador transcripcional Spo0A es esencial para la activacin del complemento por cualquiera de sus vas. Mutantes spo0A de B. subtilis (obtenidas por transformacin con ADN genmico de clulas competentes) fueron incapaces de activar C3, primer evento bioqumico de la activacin del complemento. Por su parte cepas de B.
P33 - 28041 CRECIMIENTO Y FERMENTACIN DE OLIGOSACRIDOS CON POTENCIAL PREBITICO POR PROPIONIBACTERIAS LCTEAS. ZARATE, G (1); PALACIOS, J(1); VALENZUELA AVILA, A(2); GENTINA, JC(2); POIRRIER, P(2); ZUIGA HANSEN, ME(2); PEREZ CHAIA, A(2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, (2) Escuela de Ingeniera Bioqumica - PUCV En las ltimas dcadas el desarrollo de alimentos prebiticos, probiticos y simbiticos ha crecido significativamente debido a la alta demanda de alimentos saludables. El Laboratorio de Ecofisiologa Tecnolgica de CERELA cuenta con una extensa trayectoria en el estudio de microorganismos probiticos para consumo humano y animal. En este sentido, hemos demostrado
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subtilis proficientes en la produccin de Spo0A activaron las 3 vas del complemento llegando hasta la instancia de la formacin del complejo C5-convertasa pero no a la unin de la protena C9 ni del complejo de ataque. Estos resultados sugieren que B. subtilis es opsonizado e incorporado en macrfagos como clulas presentadoras de antgenos (APC) para inducir una proteccin inmunolgica. Estudios in vitro de cultivo celular con macrfagos peritoneales de ratas e in vivo, en modelo animal, pollos y ratas, alimentados con y sin suplementos de esporas de B. subtilis (1x1010 esporas/kg de alimento), confirmaron el rol de esta bacteria como promotora del crecimiento (mayor aumento en peso, menor morbi-mortalidad, mejor conversin alimentaria) y estimuladora del sistema inmunolgico (mayor produccin de anticuerpos naturales). Clulas de B. subtilis proficientes en la produccin de Spo0A, pero no aquellas deficientes en Spo0A, fueron capaces de excluir competitivamente la adherencia a protenas de la matriz extracelular (fibornectina, colgeno, mucina) de diversos patgenos de relevancia mdica: S. aureus, S. enterica, V. cholerae, P. aeruginosa, L. monocytogenes. Estos resultados de exclusin competitiva de patgenos fueron corroborados por la medicin in vitro de las constantes de disociacin a fibronectina utilizando anticuerpos monoclonales anti-Fn y tcnicas de ELISA. Este estudio seala por primera vez el rol fundamental del regulador transcripcional bacteriano Spo0A sobre la activacin del sistema del complemento sugiriendo un rol clave del mismo en la comunicacin intercelular bacteria (probitico) -hospedador (mamfero). Asimismo se ha puesto de manifiesto la importancia de Spo0A en la expresin de las propiedades de superficie que permiten la exclusin competitiva de la adherencia de patgenos bacterianos a protenas de matriz extracelular, un evento temprano en el desarrollo de la infeccin y colonizacin por patgenos.
los resultados obtenidos por ambos mtodos. Resultados: Los recuentos de P. acidipropionici y L. bulgaricus determinados mediante FISH mantuvieron la misma proporcin que la obtenida por el mtodo tradicional de recuento en medios slidos. Por otro lado, las concentraciones de P. freudenreichii en queso obtenidas mediante FISH y por crecimiento en medio slido (1,42 0,1 109 bacteria/g y 1,02 0,4 109 UFC/g, respectivamente) no presentaron diferencias significativas, encontrndose tales resultados en el mismo orden que los reportados previamente por otros autores. Conclusin: El mtodo de FISH con las sondas usadas permite la enumeracin precisa de propionibacterias en queso Gruyre, a pesar de constituir una matriz sumamente compleja, disminuyendo el tiempo para obtener resultados y evitando adems la incubacin en anaerobiosis estricta.
P36 - 28140 EVALUACIN POR CITOMETRA DE FLUJO DE LA VIABILIDAD DE BACTERIAS LCTICAS VNICAS EXPUESTAS A UNA FRACCIN INHIBITORIA PEPTDICA DE Saccharomyces cerevisiae. MENDOZA, LUCIA(1); FARIAS, MARTA(1,2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, (2) Universidad Nacional de Tucumn La fermentacin malolctica (FML) en vinos es conducida por bacterias lcticas (BL), siendo Oenococcus oeni la principal especie involucrada. Esta fermentacin secundaria es importante en la elaboracin de vinos por disminuir la acidez, lograr la estabilidad microbiana y mejorar el sabor del producto fermentado. La FML generalmente ocurre al finalizar la fermentacin alcohlica conducida por Saccharomyces cerevisiae. An cuando diversas cepas de O. oeni estn adaptadas a crecer y sobrevivir en los vinos, la viabilidad de la bacteria depende de su capacidad para tolerar factores de estrs como acidez, etanol, SO 2 y otros metabolitos producidos por las levaduras. En estudios previos determinamos que S. cerevisiae mc2 ejerce una marcada actividad antagnica sobre el crecimiento de O. oeni X2L y Lactobacillus hilgardii 5w, a travs de un efecto sinrgico del etanol, SO2 y compuestos peptdicos de peso molecular 3-10 kDa. Objetivo: Evaluar mediante anlisis por citometra de flujo el efecto de los compuestos peptdicos inhibitorios producidos por S. cerevisiae mc2 sobre la integridad celular de BL vnicas. La levadura se cultiva en medio jugo de uva durante 6 das a 25 C. El sobrenadante se utiliza como medio fermentado y como control se usa medio sin fermentar. Las BL se cultivan (10^6 ufc/ml) a 30 C en medios sin fermentar y fermentados hasta alcanzar la fase exponencial (24 h para O. oeni X2L y 12 h para L. hilgardii 5w). Asimismo, las BL se exponen a la fraccin inhibitoria peptdica de S. cerevisiae, obtenida por fraccionamiento y concentracin (membranas Amicon de 3 kDa) de los caldos fermentados por la levadura. El recuento de clulas vivas, daadas y muertas se realiza por citometra de flujo empleando el kit de viabilidad BD mediante el cual se obtiene una tincin diferencial de acuerdo a la integridad de la membrana celular (sonda naranja de tiazol (TO): tincin de clulas totales y una solucin de ioduro de propidio (PI): colorea las clulas muertas). El porcentaje de clulas daadas y muertas de ambas BL es mayor en los medios fermentados en relacin al control. Sin embargo, la intensidad de los fluorocromos vara de acuerdo a la especie de BL, presentando O. oeni mayor nmero de clulas teidas con PI en relacin con L. hilgardii. Cuando las clulas se exponen a la fraccin inhibitoria peptdica, se observa un efecto ms pronunciado (el nmero de clulas vivas disminuye 66,5 y 34,2% para O. oeni y L. hilgardii, respectivamente). La mayora de las clulas de O. oeni se tien con PI, indicando un predominio de clulas muertas; mientras que el tamao de la sub-poblacin de clulas en un estado intermedio de dao de membrana (clulas con doble tincin TO-PI) es mayor para L. hilgardii, indicando que el compuesto inhibitorio peptdico ejerce una alteracin progresiva del estado fisiolgico de esta bacteria. La heterogeneidad de las subpoblaciones de clulas observada entre O. oeni y L. hilgardii podra revelar diferentes respuestas fisiolgicas de acuerdo a la especie bacteriana a los compuestos peptdicos antimicrobianos producidos por S. cerevisiae.
P35 - 28123 APLICACIN DE SONDAS FLUORESCENTES PARA EL RECUENTO DE PROPIONIBACTERIAS LCTEAS EN CULTIVOS MIXTOS Y MUESTRAS AMBIENTALES MEDIANTE UN PROTOCOLO DE FISH. BABOT, JAIME DANIEL(1); APELLA, MARIA CRISTINA (1,2); PEREZ CHAIA, ADRIANA(1,2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos CERELA CONICET, (2) Universidad Nacional de Tucumn Antecedentes: las propionibacterias clsicas cumplen un importante papel en la industria lctea. Algunas especies, principalmente Propionibacterium freudenreichii, se usan como cultivos iniciadores en la produccin de quesos de tipo suizo como Gruyre y Emmental. En dichos quesos, son las principales responsables de la formacin de los ojos por la liberacin de CO2 y del flavor caracterstico por la produccin de cidos grasos voltiles tales como cido propinico y cido actico, productos de su fermentacin. La enumeracin de propionibacterias mediante mtodos tradicionales es lenta y requiere incubacin en anaerobiosis estricta, lo que dificulta el proceso. La Hibridacin Fluorescente In Situ (FISH) combina la precisin de la gentica molecular con la informacin visual de la microscopa que permite la identificacin y recuento de microorganismos en su micro hbitat natural. Objetivo: Determinar la eficiencia de sondas oligonucleotdicas marcadas fluorescentemente en la deteccin y enumeracin de propionibacterias de una suspensin mixta con lactobacilos y muestras de queso Gruyre comercial. Materiales y mtodos: Se mezclaron partes iguales de cultivos activos de P. acidipropionici CRL1198 y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CRL958 y se determin el nmero de UCF/mL mediante su recuento en medios de cultivo slidos. La suspensin de clulas fue fijada con paraformaldehdo. Posteriormente, se llev a cabo la hibridizacin utilizando las sondas Pap446 y Lb158, especficas para P. acidipropionici y el gnero Lactobacillus, respectivamente. Para determinar si la matriz compleja de un queso interfiere en el recuento por la tcnica de FISH, se realiz la determinacin de propionibacterias en suspensiones de queso Gruyre filtradas, fijadas con paraformaldehido e hibridizadas con la sonda Pfr435. Paralelamente se estudi el nmero de estas bacterias en el mismo queso mediante el mtodo tradicional de recuento en medios de cultivo slidos, comparndose finalmente
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P37 - 28153 EVALUACIN DE PROPIEDADES PROBITICAS EN PROPIONIBACTERIAS DE ORIGEN AVIAR. ARGAARAZ MARTINEZ, ELOY(1); APELLA, MARIA CRISTINA(1,2); PEREZ CHAIA, ADRIANA(1,2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, CONICET (2) Universidad Nacional de Tucumn Antecedentes: tradicionalmente, los antibiticos han sido usados como promotores de crecimiento en aves de corral, cerdos y otros animales de granja para incrementar la produccin, con el beneficio adicional que, en dosis subteraputicas, tienen efectos preventivos frente a patgenos. Esto ha llevado a su uso indiscriminado, generando as la aparicin de cepas resistentes, por lo que esta prctica fue recientemente prohibida. Debido a ello, nuevas reas de investigacin se han enfocado en el estudio de la microbiota de estos animales, centrndose en la bsqueda de microorganismos probiticos como una alternativa a los promotores de crecimiento. En los ltimos aos, el gnero Propionibacterium ha sido centro de numerosas investigaciones, siendo algunas especies estudiadas como potenciales probiticos para humanos y animales. Objetivo: Evaluar diferentes propiedades probiticas para la seleccin de cepas de propionibacterias aisladas del tracto gastrointestinal de gallinas ponedoras y reproductoras. Materiales y Mtodos: Nueve cepas de propionibacterias aisladas del tracto gastrointestinal de gallinas fueron identificadas a travs del anlisis del ADNr 16S. Las mismas, denominadas consecutivamente LET101 a LET109, fueron estudiadas en relacin a: viabilidad luego de su exposicin a condiciones de acidez (3 h a 37 C, pH igual a 3); crecimiento en presencia de sales biliares (0,1 y 0,4% de Oxgall, medio LAPTg a 37 C, 24 y 48 h); capacidad de adhesin a fragmentos de tejido intestinal en presencia y ausencia de mucus. En todos los ensayos el nmero de clulas viables se determin por recuento en medio LAPTg agar (5 das, 37 C, condiciones anaerbicas). Los resultados fueron analizados estadsticamente (ANOVA). Resultados: Todas las cepas de propionibacterias toleraron la acidez, siendo LET101, LET106 y LET108 las cepas ms sensibles, las cuales disminuyeron su viabilidad en 2 unidades logartmicas. La resistencia a sales biliares fue variable. Todas las cepas fueron capaces de tolerar 0,1% de Oxgall durante 24 h y 48 h de incubacin. En presencia de 0,4% de Oxgall y 24 h de incubacin, el nmero de microorganismos viables disminuy en promedio, 2 unidades logartmicas. Sin embargo, a las 48 h las cepas LET102, LET103, LET105, LET107 y LET109 mostraron recuentos semejantes a su control, indicando as su capacidad de adaptacin al ambiente. Todas las cepas mostraron un aumento significativo de la habilidad de adhesin en presencia de mucus. Conclusin: Este trabajo representa un avance en la bsqueda de propionibacterias especficas de husped con propiedades probiticas para su uso en la industria avcola.
bacterias potencialmente patgenas y pueden estimular el crecimiento de flora benfica en el colon. Por este motivo, se han ideado diferentes estrategias para influir sobre los niveles de las poblaciones intestinales autctonas y sus productos de fermentacin. Estas tcticas se basan en la administracin de cepas probiticas y/o de carbohidratos no digeribles que favorezcan el desarrollo especfico de la flora deseable. En este sentido, resulta atractivo el uso de propionibacterias clsicas, productoras naturales de AGCC por fermentacin, un adecuado balance de fibras dietarias o una combinacin de ambas estrategias. Objetivo: Evaluar el crecimiento y actividad metablica de Propionibacterium acidipropionici CRL1198 en agua cecal estril y en homogenatos cecales de ratones con su microbiota autctona, utilizando en ambos casos, suplementos de mezclas de carbohidratos dietarios. Materiales y Mtodos: El contenido cecal de ratones Balb/C se obtuvo en condiciones de asepsia y se suspendi al 5% en PBS estril. Para la obtencin de agua cecal, algunas suspensiones cecales se centrifugaron y esterilizaron por filtracin. Tanto a homogentos como muestras de agua cecal se les adicion Propionibacterium acidipropionici CRL1198 (10^9 bacterias/mL) y/ o carbohidratos (oligofructosa, polidextrosa, goma arbiga) al 1% final. Los mismos se ensayaron individualmente, o en combinaciones (2 3 en iguales proporciones). Las muestras se incubaron a 37 C en anaerobiosis durante 10 h y la produccin de AGCC se evalu por HPLC. Resultados: Propionibacterium acidipropionici CRL1198 no utiliz ninguno de los hidratos de carbono ensayados en agua cecal. Sin embargo, se observaron modificaciones en la fermentacin en homogenatos cecales. Las muestras suplementadas con polidextrosa u oligofructosa mostraron la mayor produccin de cido lctico en ausencia de propionibacterias y de cidos propinico y actico, en presencia de las mismas. Las muestras con mezclas de hidratos de carbono y bacterias lograron produccin equilibrada de todos los cidos orgnicos durante la fermentacin. En el caso particular de mezclas con polidextrosa y goma la produccin de cido propi-nico fue significativamente diferente. Conclusin: un balance en la produccin de cidos orgnicos en el intestino se puede lograr mediante la incorporacin en la dieta de mezclas equilibradas de carbohidratos y bacterias productoras de AGCC.
VIROLOGA
P39 - 27059 PROPAGACIN DE EPIDEMIAS EN UN MODELO ESTOCSTICO DE AUTMATAS CELULARES GUALTIERI, ARIEL FELIX; HECHT, JUAN PEDRO
Facultad de Odontologa. UBA Los modelos de autmatas celulares son diseos computacionales dinmicos que brindan representaciones espaciales explcitas. Se visualizan como grillas de celdas, que evolucionan en el tiempo de acuerdo a reglas preestablecidas. En los modelos epidemiolgicos, cada una de estas celdas representa el rea ocupada por un conjunto de individuos. A diferencia de los modelos deterministas, los modelos estocsticos consideran la influencia del azar en la dinmica de propagacin, esto los hace ms adecuados para el estudio de poblaciones pequeas. Recientemente, hemos investigado un modelo epidemiolgico de autmatas celulares determinista. En el presente trabajo, nuestro objetivo ha sido desarrollar y explorar un modelo original de autmatas celulares estocstico. Diseamos el modelo en plataforma de programacin visual. El sistema se basa en una grilla de 900 celdas. Se representa una dinmica general de tipo SIR, donde se consideran tres estadios sucesivos: susceptible (S), infectado (I) y recuperado con inmunidad (R). El esquema SIR es utilizado frecuentemente para representar la propagacin de algunas enfermedades virales, como la influenza. En cada celda se consideran los siguientes procesos: infeccin, recuperacin, natalidad, mortalidad y desplazamiento hacia celdas vecinas. Cada uno de estos procesos depende de un parmetro fijo y de un componente aleatorio introducido por mtodo Monte Carlo. El programa permite fijar el nmero inicial de individuos en cada estadio por celda. Exploramos la dinmica del sistema mediante simulacio-
P38 - 28161 PRODUCCIN DE CIDOS ORGNICOS POR FERMENTACIN DE MEZCLAS DE CARBOHIDRATOS DIETARIOS EN HOMOGENATOS CECALES DE RATN SUPLEMENTADOS CON Propionibacterium acidipropionici CRL1198. LORENZO PISARELLO, MARIA JOSE(1,2); ZARATE, GABRIELA(1); PEREZ CHAIA, ADRIANA(1,2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA, CONICET (2) Universidad Nacional de Tucumn Antecedentes: el intestino grueso contiene ms de 1011 bacterias por gramo de contenido, predominando las anaerbicas. El principal sustrato para el crecimiento bacteriano son los carbohidratos de la dieta que escapan a la digestin en el tracto gastrointestinal superior. Los productos finales de esta fermentacin incluyen cidos grasos de cadena corta (AGCC), especialmente acetato, propionato y butirato, y menor cantidad de otros cidos orgnicos. Los AGCC son absorbidos rpidamente, estimulando la absorcin de agua y sodio y actuando como combustibles oxidativos de las clulas colnicas. Tambin disminuyen el pH colnico, ejercen control de enzimas perjudiciales, inhiben
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nes. El programa proporciona un registro del nmero de individuos en cada estadio, para cada celda y en la poblacin total, en funcin del tiempo. Tambin brinda representaciones visuales de la dinmica de propagacin sobre la grilla mediante mapas de bits. Los resultados obtenidos muestran como la prevalencia aumenta exponencialmente hasta llegar a un pico mximo a partir del cual comienza a descender, esto coincide con el comportamiento esperado para un esquema SIR. Tambin pudimos observar como la disminucin del parmetro fijo de infeccin reduce y retrasa el pico de prevalencia. Adems, se observa como la dinmica de todo el sistema y de cada celda dependen de la distribucin inicial de infectados y de los parmetros fijos de desplazamiento poblacional entre celdas. Para un mismo conjunto de condiciones iniciales y parmetros fijos, de acuerdo a lo esperado por la incorporacin de efectos aleatorios, los resultados obtenidos por diferentes simulaciones no presentan coincidencia exacta. Este modelo permitira capturar la dinmica de propagacin de epidemias en un escenario espacial influenciado por factores estocsticos. Por otro lado, de la misma manera que nuestro modelo previo de autmatas celulares determinista, resalta la importancia de considerar la movilidad y la distribucin espacial de la poblacin en modelos epidemiolgicos dinmicos. Estudios futuros se orientarn a complejizar este modelo bsico.
(85,6 93,6%), MGT 13,1 (11,5 14,7). La elevada seroprevalencia encontrada en el total de la poblacin estudiada sera un indicador de la alta inmunidad poblacional. Los porcentajes de seropositividad y las MGT obtenidas no muestran una diferencia estadsticamente significativa (p>0,05). Por lo tanto se considera, que en el grupo analizado, la edad no es una variable que influye en la seropositividad de la poblacin a pesar que los grupos estn integrados por mujeres que han adquirido sus Acs especficos por inmunizacin o por padecer la infeccin natural.
P41 - 27334 BROTE DE DENGUE EN EL AREA OPERATIVA XI (ORAN-SALTA AO 2009). CACACE, ML(1); ISABEL, I(1); REYNOSO, X(2); DIAZ, O(2); GEREZ , M(3); CORTADA, P(4); DIAZ, L(1); PARADA, R(1)
(1)Laboratorio, (2) Residencia Peditrica, (3) Residencia Medicina Familiar, (4) Epidemiologa - Hospital San Vicente de Paul Orn-Salta El dengue es un serio problema de salud pblica en muchos pases de Amrica Latina. En Argentina los primeros casos se detectaron en Salta en 1997, siendo DEN-2 el virus circulante. En Orn (Pcia. de Salta), distante 50 Km de la frontera con Bolivia y 280 Km de Salta se reportan los primeros casos autctonos de DEN-2 en 1998 y durante el perodo 1998-2008 han circulado los serotipos DEN 1,2 y 3. A mediados de enero 2009, se producen casos de dengue en Orn como consecuencia de una epidemia que comenz en Bolivia los ltimos meses del ao 2008. Objetivos. El objetivo del presente trabajo, fue estudiar el brote de dengue que se produjo en el rea operativa XI (Orn-Salta) durante el perodo 1/1/09 al 30/05/09. Materiales y Mtodos. Se estudiaron los casos probables de dengue que concurrieron al Laboratorio del Hosp de Orn (1/1-30/5/09). Se analizaron las fichas clnicoepidemiolgicas y se incorporaron al programa SIVILA. Se determinaron los casos de infeccin reciente a partir de Elisa de captura de Ig M (UMElisa) para lo cual se tomaron muestras a partir de 5 das de evolucin y se conservaron los sueros a -20C hasta su procesamiento. Los sueros de muestras de pacientes de hasta 4 das de evolucin se tomaron en crioviales estriles y se derivaron al INEVH para aislamiento viral y PCR. Resultados. Se recibieron 1280 muestras de casos probables de dengue correspondientes a la ciudad de Orn. Se derivaron 43 muestras tempranas al INEVH. De la prueba de UMElisa se obtuvo el 76,4% de positividad. Por aislamiento viral y PCR se caracteriz el serotipo circulante como DEN-1. Se observ que el mayor nmero de casos se dio en la poblacin mayor de 15 aos (81%) y 53% sexo femenino. La poblacin analizada present: cefalea, fiebre, artromialgias, dolor retroocular, rash cutneo; algunos casos con manifestaciones hemorrgicas y otros con diarrea. Se observaron por primera vez casos de dengue hemorrgico y un caso de dengue congnito. De los parmetros hematolgicos, la mayora present leucopenia con plaquetopenia. La epidemia se extendi de enero a mayo alcanzando un pico en marzo. Los primeros casos estuvieron vinculados a pacientes que concurrieron a Santa Cruz de la Sierra (Bolivia) donde se inici el brote. Durante el brote del 2009 circul el serotipo DEN-1 y se produjo un caso de dengue congnito y casos de dengue hemorrgico. Esto ltimo era previsible dado que ya haban circulado en la regin tres serotipos. Con la aparicin de este brote, nuestra regin tuvo acceso directo al anlisis serolgico de dengue. Es fundamental contar con esta herramienta diagnstica en zonas endmicas a fin de detectar precozmente los casos y tomar las acciones preventivas.
P40 - 27163 PREVALENCIA DE ANTICUERPOS ESPECFICOS PARA VIRUS DE SARAMPIN EN MUJERES EMBARAZADAS DE LA CIUDAD DE CRDOBA. ZITTA, MARIA EUGENIA; NATES, SILVIA VIVIANA; ISA, MARIA BEATRIZ
Instituto de Virologa Universidad Nacional de Crdoba El sarampin es una enfermedad viral altamente contagiosa y distribuida mundialmente. Actualmente, Argentina es un pas en el que se ha reducido drsticamente el nmero de casos de sarampin. Este cambio epidemiolgico comienza con la creacin del Programa de Control, Eliminacin y Erradicacin del sarampin en el ao 1993. Dicho Programa implement una serie de acciones que permitieron alcanzar una inmunidad poblacional superior al 95%, como consecuencia de altas coberturas de vacunacin. En nuestro pas el esquema establece la primera dosis a los 12 meses y un refuerzo a los 6 aos de edad. Se sabe que, luego del nacimiento, los nios estn protegidos por anticuerpos (Acs) maternos especficos. No obstante, en la actualidad, debido a que casi la totalidad de las mujeres en edad gestacional se encuentran vacunadas y en general la fuente vacunal induce menores ttulos de Acs que la infeccin natural, se espera que una menor cantidad de Acs especficos sean transferidos pasivamente al hijo y que su cada sea rpida en el tiempo. Como consecuencia de ello, existira la posibilidad de que estos nios presenten un perodo de susceptibilidad a la infeccin por el virus antes de ser vacunados por primera vez. Es por ello que sera importante conocer el estado inmune de las mujeres embarazadas frente al virus de sarampin. Objetivo. Determinar la seroprevalencia y el ttulo de Acs especficos para el virus del sarampin en embarazadas de la Clnica Reina Fabiola de Crdoba. Material y Mtodo. Se analizaron 243 muestras de suero de embarazadas de la Clnica Reina Fabiola de Crdoba. Las muestras sricas se dividieron en tres grupos etarios: grupo 1: 16 - 25 aos, 48 muestras, se presume inmunidad por fuente vacunal; grupo 2: 26 - 30 aos, 80 muestras, se presume inmunidad por fuente natural o vacunal; grupo 3: 31 - 41 aos, 115 muestras, se presume inmunidad por infeccin natural. Prueba de laboratorio: tcnica de seroneutralizacin viral. Se realizaron diluciones seriadas desde 1:2 hasta 1:128. La reaccin se consider vlida cuando los sueros problemas fueron enfrentados a una suspensin viral con 100 DICC 0,5 log. Se consideraron positivos los sueros con ttulos iguales o mayores a 1:2. Anlisis estadstico: se aplic el test de Student considerndose diferencia significativa una p< 0,05 y con un nivel de confianza del 95%. Resultados. Se detect una seroprevalencia global del 93,0% (90,0 96,0%). El porcentaje de seropositividad y Media Geomtrica de los Ttulos (MGT) de Acs anti sarampin para cada grupo fue el siguiente: Grupo 1: 98.0% (92,0 100%), MGT 20,9 (19,1 - 22,7); Grupo 2: 95% (90 100%), MGT 14,3 (12,8 15,8); Grupo 3: 89,6%
P42 - 27448 ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LA DEHIDROEPIANDROSTERONA (DHEA), LA ANISOMICINA Y EL UO126 FRENTE A VIRUS DE IMPORTANCIA SANITARIA. TORRES, NICOLAS IGNACIO; CASTILLA, VIVIANA; WACHSMAN , MONICA BEATRIZ
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA La dehidroepiandrosterona (DHEA) es una de las hormonas esteroidales ms abundantes en el torrente sanguneo producida
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por la glndula adrenal. Se ha demostrado que DHEA presenta una gran variedad de actividades biolgicas tales como: actividad antitumoral, reduccin de las complicaciones del envejecimiento, prevencin de la diabetes y del estrs, as como actividad antiviral. La anisomicina es un antibitico producido por Streptomyces guiseolus que inhibe sntesis de protenas y acta como activador del sistema de sealizacin de las MAPKs (mitogen-activated protein kinase) de la clula, mientras que el UO126 es un inhibidor de ERK (extracellular signal regulated kinase) perteneciente a la cascada de las MAPKs. En este trabajo hemos estudiado la actividad antiviral de la DHEA, la anisomicina y el UO126, frente a virus con genoma a DNA (adenovirus (AdV), herpes simplex tipo 1 (HSV-1)) y RNA (sarampin (MV), poliovirus (PV), dengue (DENV)). Se determin la concentracin citotxica 50 de los compuestos, utilizando el mtodo del MTT en clulas A549, Vero o BHK-21 dependiendo del virus utilizado. Los porcentajes de inhibicin se calcularon para cada virus y cada compuesto, por el mtodo de reduccin del rendimiento viral. Dado que se sabe que algunos virus requieren la activacin y otros la inhibicin de la cascada de MAPKs y que DHEA modula este sistema de sealizacin, se decidi analizar si existe alguna relacin entre la actividad antiviral de DHEA y su capacidad de inhibir o activar la va de sealizacin mediada por ERK. Para ello, se estudi el efecto del UO126 y de la anisomicina, sobre la multiplicacin de los distintos virus ensayados. UO126 (50 M) produjo una inhibicin de alrededor del 98% de la multiplicacin de AdV y MV semejante a DHEA (150 M). El tratamiento combinado de UO126 y DHEA mostr tambin un efecto inhibidor de la replicacin viral. Por el contrario, UO126 no afect la multiplicacin de PV y DENV, mientras que la anisomicina (0,1 M) produjo una inhibicin superior al 90 % para ambos virus. El tratamiento combinado con DHEA no revirti la inhibicin producida por anisomicina. En el caso de DENV los resultados son controvertidos dado que UO126 no inhibe la multiplicacin del virus a diferencia de DHEA y anisomicina que producen una inhibicin superior al 98%. Hemos encontrado tambin que la accin de DHEA, UO126 y anisomicina depende del sistema celular utilizado especialmente en el caso de HSV-1. Por otro lado se determin que los tres compuestos no presentan actividad virucida para ninguno de los virus ensayados. El anlisis mediante la tcnica de Western blot, mostr una disminucin de la sntesis de protenas virales en las clulas infectadas y tratadas con DHEA para AdV, MV y DENV. Es posible que la accin de DHEA sobre el sistema de las MAPKs de la clula husped sea la responsable de la disminucin de la sntesis de protenas virales en clulas infectadas y tratadas con DHEA. Este efecto sobre las vas de sealizacin explicara su amplio espectro de actividad antiviral.
cencia Directa (IFD) y conjuntamente los casos sospechados de gripe (en paralelo) por la tcnica de PCR en Tiempo Real (rt RT PCR). Los datos fueron obtenidos del Sistema de Vigilancia de Laboratorios (SIVILA). El registro 2009 mostr: total de muestras respiratorias analizadas 3706, de las cuales 81,89% fueron menores de 4 aos. Total de muestras con resultados positivos 1530 (41%). La mayor circulacin viral respecto a positivos/muestras analizadas fue: FLUA entre el 20 de junio y 10 de julio (165/669); para RSV desde 8 de agosto a 25 de setiembre (531/1073), y en el caso de PARA desde 12 de setiembre al 2 de octubre (43/391). A partir del 13 de julio los casos sospechados de gripe fueron procesados adems por rt RT PCR para la deteccin del H1N1 en el Laboratorio Central de la provincia de Neuqun, total muestras procesadas 857 con 56 positivos (6,5%) mientras que por IFD slo 21 lo fueron. Si bien conforme transcurran los meses se confirmaba que, globalmente, el virus tena consecuencias moderadas y que su tasa de mortalidad era menor a la de la gripe estacional, nos permiti a pesar de tratarse de un muestreo sesgado dado que cerca del 80% eran menores de 4 aos, conocer la distribucin temporal de los virus en donde el RSV fue el de mayor duracin, el FLU A pandmico present un pico agudo para luego desaparecer bruscamente y el aumento del PARA que coincidi con la tendencia en baja del RSV, adems posibilit incorporar y poner a punto tcnicas de biologa molecular en el diagnostico primario. El estudio comparativo IFD vs rt RT PCR, concluy que la sensibilidad de IFD fue baja (44,4%), inferior a las informadas en Argentina sobre metodologas similares de deteccin del virus A H1N1 fuera del perodo pandmico. Como corolario queda mostrar la relevancia de la Salud Pblica, quien asumi un rol protagnico en el diagnstico y tratamiento de los casos que cumplieran la definicin de caso optimizando la razn costo/beneficio.
P44 - 27510 VACUNA A PARTCULAS VIRALES SINTTICAS: RESULTADOS PROMISORIOS EN EL MODELO SARS-COV. MORTOLA, EDUARDO(1); ROY, POLLY(2)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias Uiversidad Nacional de La Plata, (2) LSHTM, UK. Introduccin. Las vacunas a partculas virales sintticas (PVS) imitan la estructura general de la partcula viral y de esta manera preservan la conformacin antignica nativa de las protenas estructurales. Las PVS se han desarrollado en una amplia variedad de virus y poseen una distintiva ventaja en trminos de seguridad e inmunogenicidad sobre otras vacunas tradicionales. El sndrome respiratorio agudo severo (SARS) es una enfermedad zoontica emergente causada por un coronavirus (SARS-CoV) que provoc un brote epidmico global en el ao 2003. Una vacuna efectiva contra el virus del SARS, necesita inducir anticuerpos neutralizantes. La protena S del virus es la protena de unin al receptor, y por lo tanto el principal objetivo para una respuesta inmune humoral y obviamente de eleccin para una potencial vacuna. Sin embargo, una proteccin eficiente es difcil de obtener con una vacuna a subunidades formada por una sola protena, por eso combinando la protena S con otras dos protenas estructurales del virus (M y E) en una vacuna a subunidades mltiple debera inducir una mejor y ms efectiva respuesta inmune de proteccin. Objetivo. En la actualidad el SARS no posee una vacuna ni un tratamiento efectivo, por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue la utilizacin de partculas virales sintticas del virus de SARS para inducir una respuesta inmune de proteccin. Para tal fin, desarrollamos PVS no replicativas al carecer de material gentico, para su uso como inmungeno. Materiales y Mtodos. Estas partculas fueron realizadas en el sistema de expresin de baculovirus mediante la creacin de un solo baculovirus recombinante que expresa, en forma conjunta, las tres protenas estructurales ms importantes del virus del SARS (S, M y E). Resultados. El nivel de expresin y la autenticidad de las protenas, analizados por tcnicas de SDS-PAGE y Western blot, demostraron que las protenas virales que conforman la PVS se expresaron en las clulas de insecto en niveles eficientes, que conservaron la proporcin molecular y mantuvieron sus caractersticas inmunognicas intactas. La purificacin de la PVS a par-
P43 - 27456 LAS OPORTUNIDADES Y DEBILIDADES QUE MOSTR LA PRIMER PANDEMIA DEL SIGLO XXI EN EL SISTEMA DE SALUD DE NEUQUN: EXPERIENCIA 2009 HOSPITAL DR. HORACIO HELLER NEUQUN. GONZLEZ CAP, DIEGO
Hospital Dr. Horacio Heller Neuqun El 2009 fue un ao, desde un punto de vista cientfico y social, lleno de incertidumbre marcado por la primera pandemia del siglo XXI generada por el virus influenza A nuevo sub tipo (H1N1). La Organizacin Mundial de la Salud adopt polticas y medidas sanitarias para controlar y contener la propagacin viral. Las mismas permitieron, entre otras cosas: 1.Estudiar el comportamiento de los distintos grupos etarios respecto a la definicin de caso de IRAG (insuficiencia respiratoria aguda grave) e IRAB (insuficiencia respiratoria aguda baja) emitida por el Ministerio de Salud de Argentina y conocer los periodos de mayor circulacin en relacin a los virus respiratorios ms frecuentes: adenovirus, virus sincicial respiratorio (VSR), influenza A (FLUA), influenza B (FLUB), parainfluenza 1, 2 y 3 (PARA), 2. Aplicar nuevas tcnicas y herramientas diagnsticas, 3.Comparar metodologas y definir sus eficiencias. El Laboratorio Referente en Virus Respiratorios de la Provincia de Neuqun, cita en Hospital Horacio Heller, proces las muestras respiratorias obtenidas por aspiracin e hisopado de nasofaringe de todos los grupos etarios que cumplieran la definicin de caso, mediante la tcnica de Inmunofluores-
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tir de las clulas de insectos por gradientes de sucrosa y su posterior caracterizacin morfolgica por microscopa electrnica demostraron que conservaban las caractersticas del virus entero. Los anticuerpos policlonales generados por la inoculacin de PVS a animales de laboratorio, fueron utilizados en pruebas de seroneutralizacin con resultados muy promisorios, observndose ttulos neutralizantes significativos comparados con los controles. Conclusiones. Utilizando como modelo al virus SARS, las PVS carentes de material gentico y sin representar un riesgo para la salud humana, podran representar no slo un exitoso mtodo para el diseo de una vacuna contra el SARS, sino tambin como biotecnologa de punta extrapolable a otras virosis de inters.
P46 - 27919 INFLUENCIA DE LA MUTACIN NATURAL D240G EN EL PERFIL DE RESISTENCIA CONFERIDO POR CEFOTAXIMASAS PERTENECIENTES AL GRUPO CTX-M-1. GHIGLIONE, BARBARA(1); DI CONZA, JOSE(1); RADICE, MARCELA(1); RODRIGUEZ, MARIA MARGARITA(1); POWER, PABLO(1); GUTKIND, GABRIEL(1)
(1)Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires Introduccin: A diferencia de otras -lactamasas de espectro extendido (BLEE), las cefotaximasas hidrolizan ceftazidima de manera menos efectiva que otras enzimas de espectro extendido (TEM, SHV o PER, por ejemplo). Varias sustituciones aminoacdicas en las -lactamasas de tipo CTX-M se han propuesto como responsables del aumento en la tasa de hidrlisis frente a ceftazidima (ej.: D240G), denominandolas ceftazidimasas. Objetivos: El objetivo de este trabajo fue evaluar el papel de la mutacin D240G en el perfil de resistencia de las mutantes naturales CTX-M-15 y CTX-M-96, frente a sus respectivas enzimas parentales CTX-M-3 y CTX-M-12. Materiales y Mtodos: Los genes codificantes de las -lactamasas fueron amplificados por PCR a partir de aislamientos salvajes, clonados en pK19 y transformados en E. coli DH5. Las construcciones obtenidas fueron verificadas por secuenciacin. El screening de BLEE y los ensayos de susceptibilidad fueron realizados por difusin y dilucin segn recomendaciones del CLSI. Resultados: Se obtuvieron clones portadores de los genes parentales blaCTX-M-3 y blaCTXM-12 y de sus respectivas mutantes naturales blaCTX-M-15 y blaCTX-M-96, todos en un mismo entorno gentico y con idntico pptido seal. Se observ sinergia con cido clavulnico en todos los clones recombinantes obtenidos. Los clones productores de CTX-M-15 y CTX-M-96 mostraron valores de CIM a ceftazidima 8 veces mayores que sus respectivos clones productores de CTX-M-3 y CTX-M-12, si bien los valores de CIM no superaron a aquellos obtenidos para cefotaxima. No se observ diferencia en los valores de CIM frente a cefotaxima en los clones analizados. Conclusiones: Aunque la mutacin D240G lleva a un aumento en los valores de CIM frente a ceftazidima en cepas productoras, el incremento en la afinidad de las variantes enzimticas por dicho antibitico debera ser confirmado por estudios cinticos. Dado que los valores de CIM a cefotaxima fueron al menos 8 veces mayores que los correspondientes a ceftazidima, el trmino ceftazidimasas acuado actualmente para estas nuevas variantes de CTX-M debera ser aplicado cuidadosamente y posiblemente reservado solo para aquellas variantes (de existir) en las que la cintica de hidrlisis de ceftazidima y cefotaxima sean al menos equivalentes.
P45 27869 ANLISIS DE INTEGRONES CROMOSMICOS EN AISLAMIENTOS DE Vibrio cholerae O1 DE ARGENTINA. QUIROGA, MP(1); VIAS, MR(2); PICHEL, M(2); GONZALEZ FRAGA, S(2); CENTRON, D(1)
(1) Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires, (2) Servicio Enterobacterias, INEI- ANLIS Carlos G. Malbrn Entre 1992 y 1999 se produjeron siete brotes de clera en Argentina. Vibrio cholerae O1 (VC O1), el agente etiolgico del clera posee integrones cromosmicos que son estructuras genticas localizadas en el genoma del microorganismo, que codifican un sistema de recombinacin compuesto bsicamente por el gen intI4 que codifica una integrasa que es una recombinasa sitio especfica capaz de insertar y escindir genes cassettes en el integrn, un sitio de recombinacin attI4, y una serie de cassettes compuestos por un marco de lectura abierto y un sitio de recombinacin VCR. La integrasa IntI4 reconoce al gen cassette por su VCR y cuando lo inserta en la primera posicin del integrn, este queda localizado adyacente al attI4. Los integrones cromosmicos de Vibrio cholerae pueden contener ms de 150 cassettes, algunos otorgndole resistencia a antibiticos, funciones adaptativas y otros incluso con funciones aun desconocidas. El objetivo de este trabajo fue caracterizar aislamientos de VC O1 recuperados durante los perodos epidmicos a travs del estudio de los genes cassettes localizados en primera posicin en los integrones cromosmicos y sus variaciones en el sitio attI4. Se tomaron 14 cepas representantes por caracterizacin previa por electroforesis en campo pulsado (PFGE), del clon epidmico asociado a los brotes de clera y de otros aislamientos de diferentes subtipos, no productores de toxina de clera (CT). Se realiz la extraccin de ADN genmico total y la amplificacin de los primeros cassettes de los integrones cromosmicos por PCR utilizando un primer especfico para intI4 y otro degenerado con sitio blanco en los VCR. Posteriormente se purific la banda de menor peso molecular de cada cepa y se secuenciaron. El anlisis de las secuencias se realiz utilizando Los programas Bioedit, BLASTN y CLUSTALW2. Se observaron diferentes ordenamientos de genes cassettes en las cepas analizadas, encontrndose en primera posicin los genes cassettes VC_A0294, VC_A0302, VC_A0437, VC_A0411, VC_A0325, qacE-like; algunos de los cuales no se haban descripto anteriormente e incluso se evidenci la presencia de genes cassettes que no haban sido encontrados anteriormente asociados a los integrones cromosmicos de Vibrio cholerae. Los aislamientos toxignicos asociados a los brotes de clera se agruparon principalmente en el perfil VC_A0294. A partir del estudio de los sitios attI4, se observ que haba variaciones entre los aislamientos estudiados y que se encontraban asociados a diferentes genes cassettes. Los aislamientos de VC O1 analizados presentaron una variedad de ordenamientos de genes cassettes e incluso algunos nunca antes asociados a los mismos y presentaron variaciones en sus sitios attI4, encontrndose la mayor variabilidad entre las cepas CT-negativas, en concordancia con el agrupamiento observado por PFGE. Se evidenci una vez ms la plasticidad genmica de esta especie que la hace tan verstil.
P47 - 27984 ANTIGENICIDAD DE PROTENAS DE MEMBRANA EXTERNA DE Acinetobacter baumannii EN EL HOSPEDADOR HUMANO. MUSSI, A(1); GUARDATI, C(2); LIMANSKY, A(1); CABRUJA, M(1); HEREDIA, O(2); GARCIA, M(2); JUANIZ, A(2); ROSSIGNOL, G(2); ESTERLIZZI, R(2); PITTET, C(2); BECHERUCCI, A(3); RONDINA, C(3); VIALE, A(1)
(1) IBR (CONICET), FCByF, UNR; (2) Lab Microbiol Hospital Emergencias Clemente Alvarez (HECA), Sec Salud Pblica, Municipalidad de Rosario, (3) Terapia Intensiva, HECA, Rosario Acinetobacter baumannii (A. baumannii) es reconocido en la actualidad como uno de los patgenos oportunistas ms frecuentemente asociado a infecciones nosocomiales. La emergencia de cepas de A. baumannii con resistencia a mltiples antimicrobianos complica el tratamiento debido a las limitaciones resultantes en las opciones teraputicas, derivando as en una elevada morbimortalidad de los pacientes infectados. Poco se conoce an sobre mecanismos de virulencia, factores de interaccin con el hospedador humano, y estrategias de persistencia exhibidas por este microorganismo. Tampoco han sido reconocidos al presente antgenos candidatos para el desarrollo de vacunas tiles para
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el control de infecciones causadas por este microorganismo. El objetivo de este trabajo ha sido determinar la capacidad de protenas de membrana externa (PME) de A. baumannii de constituirse como antgenos principales de este patgeno. Se estudiaron 5 pacientes que reunieron los siguientes criterios de inclusin: i) internados en UTI del HECA, ii) mayores de 12 aos, iii) que presentaron infeccin de tejidos blandos (post-ciruga y quemados) y hemocultivos positivos para A. baumannii. Todos los aislamientos de A. baumannii fueron multirresistentes. Fracciones de membrana externa de distintas cepas de A. baumannii fueron separadas en geles SDS-PAGE y transferidas a membranas de nitrocelulosa a fin de ser utilizadas como antgenos. La presencia de anticuerpos contra las mismas en muestras de suero de cada paciente extradas a los 30 das de cultivo positivo por A. baumannii fue determinada mediante inmunodeteccin, utilizando como segundo antisuero anticuerpos anti-IgG humanos conjugados con fosfatasa alcalina. Los ensayos de inmunodeteccin efectuados mostraron bandas inmunoreactivas para al menos una PME en sueros de 4 de los 5 pacientes incluidos en el estudio, indicando la presencia de anticuerpos especficos capaces de reconocer ciertos epitopes de las mismas. Globalmente, el anlisis revel que PME de 95, 75 y 40 kDa presentaron los epitopes prevalentes en las cuatro muestras de suero mencionadas. La PME mayoritaria de 40 kDa fue identificada como el homlogo de OmpA, cuya funciones propuestas en A. baumannii abarcan desde la interaccin con el hospedador, formacin de biofilm e induccin de apoptosis. Por su parte CarO, PME tambin mayoritaria propuesta como canal de carbapenemes y aminocidos bsicos en este patgeno, no result un antgeno relevante a juzgar por los datos obtenidos. Estos resultados demuestran la capacidad de ciertas PME de A. baumannii de inducir respuesta inmune en el hospedador humano durante la infeccin. La incorporacin de una cantidad significativa de sueros de pacientes infectados contribuir a aportar evidencias sobre los antgenos prevalentes de A. baumannii, los cuales podran brindar herramientas de utilidad en la prevencin de infecciones por este patgeno.
ta actividad metablica que les permitira sobrevivir hasta tanto cese el estado de estrs. Se determin in vitro que la cepa de C. pseudotuberculosis permaneci viable por al menos 178 das frente al congelamiento. El estudio de la resistencia frente a bajas temperaturas resulta importante debido a que estas condiciones son caractersticas de la regin patagnica.
P49 - 28069 CARACTERIZACIN FUNCIONAL DE ISABA825, UNA SECUENCIA DE INSERCIN ACTIVA QUE MODULA LA PLASTICIDAD GENMICA EN Acinetobacter baumannii. RAVASI, P; LIMANSKY, A; VIALE, A; MUSSI, MA
Instituto de Biologa Molecular y Celular de Rosario (IBR, CONICET), FBIOyF, UNR, Rosario, Argentina Introduccin: Hemos reportado recientemente que la prdida del canal de membrana externa para aminocidos bsicos de A. baumannii, CarO, como resultado de la inactivacin insercional natural de su gen codificante por secuencias de insercin (IS), se correlaciona con la susceptibilidad reducida a carbapenemes. Una de estas IS, ISAba825, previamente no reportada y recientemente asignada a la familia IS982, gener una duplicacin de 7-pb (ATCGTTA) en el sitio blanco de insercin en el gen carO. Objetivos: Evaluar la funcionalidad de ISAba825 as como su potencial rol modulador de plasticidad genmica en A. baumannii. Materiales y Mtodos: A fin de evaluar la funcionalidad de ISAba825, generamos una nueva IS recombinante (ISAba825:Kn) conteniendo un gen de resistencia a kanamicina. Los eventos de transposicin fueron evaluados utilizando como hospedadores las cepas de A. baumannii ATCC 17978, E. coli DH5 y Acinetobacter baylyi ADP1, las cuales fueron transformadas con un plsmido suicida conteniendo ISAba825::Kn. Los eventos de transposicin se evaluaron mediante seleccin de clones resistentes a kanamicina, PCR usando cebadores especficos y confirmacin de la presencia de la IS mediante secuenciacin. Resultados: ISAba825::Kn present un estrecho rango de hospedador para la transposicin, detectndose este tipo de eventos slo en A. baumannii ATCC 17978. En esta bacteria, el blanco preferencial de ISAba825::Kn result ser el plsmido endgeno pAB2, encontrndose en todos los casos insertada en un sitio AACCCT. Por otra parte, encontramos en la cepa clnica Ab880 la presencia de ISAba825 corriente arriba del gen blaOXA-58, el cual codifica para una oxacilinasa capaz de hidrolizar carbapenemes. Estudios de southern blot y secuenciacin mostraron que ISAba825- blaOXA58 se encontraba en una sola copia en un plsmido al que denominamos pAb880. Estudios de RACE 5 indicaron en esta cepa la expresin de un transcripto resultante de la generacin de un promotor hbrido alternativo entre ISAba825 y secuencias flanqueantes al sitio de insercin corriente arriba de blaOXA-58. La transformacin de la cepa ATCC 17978 con pAb880 mostr el aumento de 32 veces el valor de CIM a imipenem, y de 16 veces a meropenem en relacin a la cepa sin transformar. Finalmente, el anlisis de la distribucin de ISAba825 dentro del gnero Acinetobacter mostr la presencia de la misma slo en cepas resistentes a carbapenemes de A. baumannii. Conclusiones: La presencia de ISAba825 en cepas resistentes a carbapenemes, sumado a su proximidad al gen blaOXA-58, y la inactivacin de carO mediada por ISAba825, nos lleva a proponer un rol para ISAba825 en la modulacin del incremento de la resistencia a carbapenemes en A. baumannii.
P48 - 28029 ESTUDIO DE VIABILIDAD FRENTE AL CONGELAMIENTO DE UN AISLAMIENTO DE Corynebacterium pseudotuberculosis. ALVAREZ, LAURA A; ESTEVAO BELCHIOR, SILVIA
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco (UNPSJB) - Centro Regional de Investigaciones y Desarrollo Cientfico-Tecnolgico (CRIDECIT) Corynebacterium pseudotuberculosis es un bacilo Gram positivo no esporulado causante de linfoadenitis caseosa (LAC) en pequeos rumiantes. Pertenece al grupo de los actinomicetes y se han descripto, al igual que para otros miembros del grupo, largos perodos de supervivencia en condiciones de estrs ambiental, como desecacin y bajas temperaturas. La resistencia del microorganismo frente a condiciones ambientales adversas, le permitira permanecer viable para infectar a animales susceptibles. Dado que en la Patagonia durante los meses de invierno se alcanzan temperaturas bajo cero, el objetivo de este trabajo fue estudiar la supervivencia de una cepa de C. pseudotuberculosis autctona frente al congelamiento. Los ensayos se realizaron bajo condiciones controladas de laboratorio. Se trabaj con una cepa identificada como C. pseudotuberculosis biovar ovis, aislada de un ovino de la zona de Rio Gallegos, Santa Cruz. Se realiz una suspensin de la cepa en solucin fisiolgica, y se distribuy en alcuotas que se conservaron a -20 C. Se determin a distintos tiempos el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) mediante la tcnica de diseminacin en superficie en agar Triptena Soya. Los recuentos se realizaron por triplicado y se obtuvieron los porcentajes de supervivencia con sus respectivas desviaciones estndar (DS). Se observ que la cepa sobrevivi durante 178 das en estas condiciones. Durante los primeros 14 das mostr una disminucin de aproximadamente un 30% en la supervivencia; luego los recuentos se mantuvieron relativamente constantes hasta el da 178, con un porcentaje de supervivencia final de 66,6% respecto del inoculo inicial. Estos resultados permitiran demostrar que frente al enfriamiento, se generara una adaptacin en los microorganismos, en la que conservaran cier-
P50 - 28088 IDENTIFICACIN DE NUEVOS FACTORES BACTERIANOS REGULADOS POR EL SISTEMA DE DOS COMPONENTES BVGAS DE Bordetella spp. FERNANDEZ, JULIETA (1); SISTI, FEDERICO (1); ORMAZABAL, MAXIMILIANO (1); HOZBOR, DANIELA (1)
(1) Instituto de Bioqumica y Biologa Molecular Introduccin: Dentro del gnero Bordetella se encuentran tres especies bacterianas, B. pertussis, B. parapertussis y B. bronchiseptica que son capaces de inducir enfermedades respiratorias con relevancia epidemiolgica en diferentes huspedes
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incluido el hombre. En estas especies un sistema de dos componentes denominado BvgAS regula la expresin de los factores indispensables para el desarrollo del proceso infeccioso inducido por ellas. La actividad de este sistema involucra no slo la activacin de la expresin de ciertos componentes denominados de virulencia sino tambin la represin de otros denominados de avirulencia. Frente a determinadas seales del entorno el sistema BvgAS est activo mientras que frente a otras como lo son la baja temperatura, el cido nicotnico y el sulfato de magnesio, el sistema deja de estar activo por lo que la expresin de los factores de virulencia no se activa mientras que s lo hacen los factores de avirulencia. As BvgAS est involucrado en el cambio de estado de virulencia/avirulencia del microorganismo. La represin de los factores de avirulencia durante la fase virulenta se realiza a travs de la protena BvgR. Si bien ya han sido identificados numerosos factores de virulencia cuya participacin en la infeccin ha sido ampliamente demostrada, la identificacin y el rol de los factores de avirulencia an no ha sido determinado de manera acabada. Objetivo: Identificar nuevos factores reprimidos por el sistema BvgAS. Materiales y Mtodos: Para la identificacin de factores regulados por el sistema de dos componentes se emple la estrategia del tipo protemica comparativa empleando geles 2D asociados a espectrometra de masa del tipo Maldi Tof sobre extractos bacterianos de la cepa parental de Bordetella bronchiseptica y de un mutante defectivo en la expresin de BvgR obtenido en nuestro laboratorio (BbBvgR-), ambos en fase virulenta. Resultados: De la aplicacin de la estrategia protemica sobre los extractos bacterianos de la cepa parental y del mutante defectivo BbBvgR- hemos detectado una protena diferencial identificada como una probable hidrolasa (BB0826) presente nicamente en la cepa BbBvgR-, y ausente en la cepa parental. Con el fin de corroborar este resultado decidimos clonar y purificar a la protena BB0826 para obtener un suero especfico y enfrentarlo a preparaciones proteicas correspondientes a diferentes fases fenotpicas. Los ensayos de western blot as diseados permitieron verificar la expresin nica de BB826 en la fase avirulenta. Ms an, mediante ensayos de RT PCR pudimos corroborar que los niveles de RNA de BB0826 son superiores en la cepa BbBvgRque en la cepa parental (2.86 0.22 vs. 1.00 0.07). Conclusiones: Hemos identificado un nuevo factor caracterstico de la fase avirulenta de Bordetella, BB0826, probable hidrolasa cuyo peso molecular estimado es 32,7 kDa y su pI es de 5,62.
los genes tatA, B y C en A. marginale; mientras que para B. abortus fue de 1:1:1, consistente con la transcripcin policistrnica. Estos resultados sugieren que independientemente de la organizacin de los genes tat, el sistema conserva la funcionalidad. Por otra parte, la relacin estequiomtrica de las tasas transcripcionales en A. marginale coinciden con la relacin estequiomtrica propuesta para el complejo proteico en membrana; esto podra sugerir la existencia de mecanismos alternativos de regulacin en organismos con un patrn disperso. El proceso de fragmentacin de operones fue descripto previamente en bacterias con genomas reducidos. Estudiando la distribucin de operones en genomas de la clase a-proteobacterias encontramos una correlacin positiva entre el nmero de operones y el tamao del genoma. Sin embargo, la proporcin de genes que se encuentran en organizacin de opern se mantiene constante en los organismos (60-80%) independientemente del tamao. Por otro lado observamos que genomas reducidos poseen mayor proporcin de operones pequeos (=2 genes) respecto a los dems genomas (= o ms 3 genes). Considerando que la prdida masiva de genes y los rearreglos genmicos son fenmenos frecuentes en el proceso de reduccin genomica de las bacterias intracelulares, proponemos que estos procesos afectan de manera directa los patrones de organizacin de genes en el grupo de las bacterias del orden Rickettsiales. Esto pone de manifiesto la importancia de estudiar en profundidad los casos de fragmentacin y su impacto en la conservacin de la funcionalidad de los sistemas, a fin de comprender los mecanismos biolgicos de patognesis e interaccin con hospedadores y su evolucin, de modo de fortalecer el conocimiento en este grupo de patgenos.
P52 - 28160 ELEVADA FRECUENCIA DE MOVILIZACIN DEL INTRN DE GRUPO II BACTERIANO S.MA.I2 DE Serratia marcescens. QUIROGA, MP(1); NARDELLI, M(1); QUIROGA, C(2); CENTRON, D(1)
(1) Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires, (2) MCGILL UNIVERSITY Los intrones del grupo II son ribozimas capaces de autoescindirse mediante el mecanismo de splicing y movilizarse a nuevas regiones de un genoma. Los intrones del grupo II codifican en su secuencia una protena que acta como cofactor. Esta protena, conocida como IEP, posee tres actividades: maturasa, transcriptasa reversa y endonucleasa. La IEP se asocia al ARN del intrn formando el complejo ribonucleoproteico (RNP), el cual reconoce nuevas regiones de un genoma mediante el apareamiento de los sitios EBS en el intrn con los sitios IBS en el ADN. Una vez apareados las RNPs con el ADN, el intrn del grupo II se introduce en el ADN blanco utilizando un mecanismo ARN dependiente. El intrn del grupo II de la clase C-attC S.ma.I2 fue encontrado en un integrn de clase 1 del aislamiento clnico Serratia marcescens SCH909. S.ma.I2 interrumpe el sitio de recombinacin, o attC, del cassette de resistencia a antibiticos aadB localizado en la regin variable del integrn. Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que S.ma.I2 invade diferentes attCs mediante un mecanismo de recombinacin sitio especfica ARN dependiente. Este mecanismo no solo requiere de los sitios de unin EBS y los sitios de unin IBS si no que tambin necesita de la estructura secundaria provista por el attC. Por otro lado, estudios evolutivos sugieren que el intrn S.ma.I2 comparte un ancestro con intrones de la clase C-attC localizados en el genero Shewanella, el cual reconoce estructuras secundarias similares a los attCs. El objetivo de este trabajo es comparar la capacidad de movilizacin del intrn S.ma.I2 a sitios blanco provenientes de diferentes entornos genticos mediante ensayos de movilidad realizados in vivo. Se seleccionaron como sitio blanco a diferentes attC y estructuras secundarias y se realizaron ensayos de movilidad in vivo para el intrn S.ma.I2 mediante PCR de colonia. Los productos obtenidos fueron secuenciados. Se observ que el intrn S.ma.I2 invade los sitios blanco propuestos pero a muy diferentes frecuencias. Para el attCsat2 se obtuvo una frecuencia de invasin del 1% mientras que para el sitio shSAR1, encontrado en el genoma de Shewanella spp., se alcanz una frecuencia del 15%. Nuestros resultados demuestran que el intrn
P51 - 28133 ESTUDIO DEL SISTEMA DE TRASLOCACIN DE PROTENAS TAT EN BACTERIAS INTRACELULARES Y SU RELACIN CON LA FRAGMENTACIN DE OPERONES EN GENOMAS REDUCIDOS. NUEZ, PABLO(1); SORIA, MARCELO(2); ROMERO, HECTOR(3); FARBER, MARISA(1)
(1) INTA-CONICET, (2) UBA, (3) UDELAR-URUGUAY El sistema Twin Arginine Translocation (Tat) es un sistema de secrecin de proteinas plegadas a travs de la membrana interna de las bacterias gram negativas. El sistema est constituido por 3 genes (tat A, B y C) que se encuentran en forma de opern en la mayora de los organismos. En la clase aproteobacterias, analizando la organizacin y el orden de los genes (sintenia), identificamos diferentes patrones: mientras la mayora de los rdenes presenta la organizacin de opern, el orden Rickettsiales presenta una organizacin dispersa de los componente en el genoma. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar funcionalmente el sistema tat para estudiar su potencial rol biolgico en el orden Rickettsiales. Seleccionamos organismos con diferentes patrones (Anaplasma marginale, Brucella abortus 2308) con el objetivo de estudiar si la desorganizacin de la estructura de opern afecta la funcionalidad del sistema. Utilizando RT-PCR verificamos la transcripcin de tatA, B y C en ambos organismos y la transcripcin policistrnica en el caso de B. abortus. La complementacin con los genes tatA y tatB de A.marginale en cepas E. coli sin tatA/tatE y sin tatB, respectivamente, restaur la funcionalidad del sistema; a diferencia de TatC. En el caso de B. abortus, las tres subunidades restauraron la funcionalidad. Utilizando qRT-PCR con el objetivo de estudiar las tasas de transcripcin, se verific una relacin de 23:1:1 para
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S.ma.I2 no slo reconoce diferentes sitios attC sino que tambin es capaz de invadir sitios en los que se haban encontrado insertos otros intrones del GII de clase C-attC y los reconoce con frecuencias muy dispares. Asimismo, la elevada frecuencia de invasin al sitio shSAR-1 aporta nuevas evidencias que sugieren que el intrn S.ma.I2 est ligado desde el punto de vista evolutivo a los intrones del gnero Shewanellaceae.
P53 - 27143 INTI1 PROVISTA EN TRANS POSEE LA CAPACIDAD DE ESCINDIR TODOS LOS CASSETTES, INCLUYENDO A LOS CASSETTES INUSUALES ATTC-CATB2-ATTI2 Y ORFXYBFA-YBFB-YBGA, ENCONTRADOS EN EL INTEGRN DE CLASE 2 IN2-8. RAMIREZ, MARIA SOLEDAD; QUIROGA, MARIA PAULA; CENTRON, DANIELA.
Facultad de Medicina Universidad de Buenos Aires El transposn Tn7::In2-8, contiene un integrn de clase 2 el cual posee un arreglo inusual siendo su estructura: sat2-aadBcatB2attI2-dfrA1-sat2-aadA1-orfX-ybfA-ybfB-ybgA. Dicho integrn tiene la particularidad que ro abajo del codn de terminacin del gen catB2, el sitio attC esperado ha sido reemplazado por una secuencia de 244 pares de bases (pb) 100% idntica a una porcin del sitio de recombinacin de los integrones de clase 2 denominado attI2, convirtindolo as en un cassette inusual al cual indicaremos como attC-catB2-attI2. Asimismo, localizada ro abajo del gene ORFX se encuentra una secuencia parcial del attI (13 bp). Con el propsito de explorar desde un punto de vista funcional cuales cassettes y/o cassettes inusuales podan ser movilizados por la integrasa de tipo 1, se llevaron a cabo ensayos de recombinacin in vivo segn lo descripto por Gravel et al, de todas las posibles estructuras movilizables encontradas en el In2-8 utilizando los diferentes plsmidos recombinantes construidos para dicho fin. Todos los cassettes y cassettes inusuales localizados en el In2-8 pueden ser movilizados por la IntI1 provista en trans arrojando valores variables de frecuencia de escisin. La regin que contiene attC-catB2attI2-dfrA1-attC es reconocida por la IntI1 como un cassette fusionado, pero tambin IntI1 posee la capacidad de escindir al cassette inusual attC-catB2-attI2 con alta eficiencia. Para confirmar la escisin del cassette inusual, se disearon cebadores especficos para poner en evidencia la presencia del cassette circularizado, obteniendo amplificacin positiva para dos productos, lo cual esta indicando que la IntI1 reconoce dos sitios para mediar la escisin. El anlisis de secuencia mostr que los sitios de reconocimiento de la IntI1 para mediar dicha movilizacin se corresponden uno de ellos a la G del propuesto sitio core GTTAACC del attI2, mientras que el otro sitio es la G de la secuencia GTTATGA localizada a 62 pb del TAA del gen catB2. Resultados experimentales tambin revelaron que la estructura ORFX-ybfA-ybfB-ybgA es un elemento movilizable. La escisin del ORFX y del ybfB fueron identificadas. A su vez la estructura ORFX-ybfA-ybfB-ybgA puede ser movilizada por la IntI1 reconociendo dos sitios diferentes. Tanto la escisin del attCcatB2-attI2, como de los elementos contenidos en el modulo ORFX-ybfA-ybfB-ybgA, muestran la plasticidad del sistema de recombinacin mediado por la integrasa de tipo 1.
horizontal de genes. Estudios previos de nuestro laboratorio han identificado la alta dispersin del integrn In35 portador del gen blaCTX-M-2, localizado en el plsmido pDCMSR1, en aislamientos de enterobacterias, no encontrndose presente en los aislamientos de Ab estudiados. Nuestro objetivo fue clarificar el resultado arriba mencionado evaluando la capacidad de Ab A118, aislamiento de Ab competente natural, de adquirir y mantener la replicacin del plsmido pDCMSR1. Materiales y Mtodos: Los ensayos de competencia natural y estabilidad plasmdica fueron realizados segn Ramrez et al. 2010. La expresin fenotpica de blaCTXM-2 se evidencio mediante la realizacin de la CIM utilizando tiras de E-test en medio slido. Se llevo a cabo la extraccin plasmdica utilizando el kit QIAfilter midi kit (QIAGEN). Se determin la presencia de los genes e integrones presentes en pDCMSR1 a travs de diferentes PCRs utilizando primers especficos. Resultados: Ab A118 mostr la capacidad de adquirir y replicar establemente al plsmido pDCMSR1, al menos hasta la generacin 40. Los resultados de CIM mostraron un aumento en la CIM a CTX en aquellas clulas que portan el plsmido (32-48 g/ml vs 8 g/ml), la determinacin de la CIM a CAZ tambin mostr un aumento de 3 diluciones. Se confirm por PCR la presencia del In35 como as tambin se identific otro integrn portador de los cassettes aadB-aadA1. Conclusiones: Ab es capaz de adquirir y mantener al plsmido responsable de la adquisicin del principal mecanismo de resistencia a cefalosporinas de 3era generacin en enterobacterias en nuestro pas. Asimismo se demostr que la adquisicin de dicho plsmido aumenta tanto la CIM a CTX como a CAZ. Una posible explicacin que justificara los estudios epidemiolgicos donde no se encuentra dicho plsmido en los aislamientos de Ab podra deberse a que el nicho ecolgico que comparten no es propicio para la transferencia y adquisicin de dicho determinante de resistencia.
P55 - 27156 DISPERSIN DE INTEGRONES DE CLASE 1 Y CLASE 2 EN CLONES MULTIRESISTENTES DE Acinetobacter baumannii (AB). RAMIREZ, MARIA SOLEDAD(1); STIETZ, MARIA SILVINA (1); VILACOBA, ELIZABET (1); JERIC, PAOLA (1); LIMANSKY, ADRIANA(2); CATALANO, MARIANA (1); CENTRON, DANIELA(1)
(1) Facultad de medicina - Universidad de Buenos Aires, (2) Universidad de Rosario Ab es un patgeno oportunista de importancia clnica en nuestro medio hospitalario, siendo en nuestro pas una problemtica de larga data. En los ltimos aos ha comenzado a tomar destacada relevancia a nivel internacional dado que ha ocurrido un incremento de aislamientos de Ab multirresistentes (AbMR) en todo el mundo. Los integrones de clase 1 (In1) y clase 2 (In2) se encuentran directamente vinculados con cassettes de resistencia en aislamientos clnicos multiresistentes. Resultados previos de nuestro laboratorio relevaron una dispersin particular de In2 en dicha especie. Es importante mencionar que los aislamientos utilizados en dicho estudio provenan todos de centros localizados en Buenos Aires. En el presente trabajo se estudi la presencia de In1 e In2 en 20 aislamientos de AbMR recolectados durantes los aos 2005-2009 en diferentes centros de la ciudad de Rosario a fin de contribuir en la epidemiologa de dichos elementos en nuestro Pas. El gen intI1 fue evidenciado en 11 aislamientos, estando presente el gen intI2 en 14. En contraste a resultados previos de nuestro laboratorio, en los cuales pocos aislamientos resultaron portadores de ambos genes, 7 aislamientos posean intI1 e intI2. Se emple la tcnica de PFGE para identificar la clonalidad de los aislamientos, evidenciando la presencia de 4 clones diferentes, indicando una diseminacin policlonal de dichos elementos. El clon III result ser el predominante, lo cual es otra caracterstica distintiva con respecto a las aislamientos previamente analizados donde los clones ms predominantes son el clon I y IV. Se llev a cabo la caracterizacin de los In1 mediante el empleo de la tcnica de cartografa por PCR y posterior secuenciacin evidenciando que la estructura predominante entre los In1 encontrados (8/11) es el arreglo correspondiente a los cassettes aacC1orfP-orfQ-aadA1, arreglo ampliamente distribuido entre los AbMR documentados en la literatura. Se ha encontrado una elevada dis-
P54 27144 EL PLSMIDO PDCMSR1, AMPLIAMENTE DISTRIBUIDO EN LOS AISLAMIENTOS DE ENTEROBACTERIAS DE ARGENTINA, PUEDE SER ADQUIRIDO Y REPLICAR ESTABLEMENTE EN Acinetobacter baumannii (AB). RAMIREZ, MARIA SOLEDAD; MERKIER, ANDREA KARINA; QUIROGA, MARIA PAULA; CENTRON, DANIELA.
Facultad de Medicina - Universidad de Buenos Aires Introduccin: Ab es considerado un patgeno intrahospitalario importante no solo en nuestro pas sino en todo el mundo. Es bien conocida su capacidad de evolucionar hacia la multiresistencia antibitica, existiendo reportes de aislamientos resistentes a todos los antibiticos disponibles para su tratamiento. Entre uno de los mecanismos mas importantes para la adquisicin de determinantes de resistencia antibitica se encuentra la transferencia
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persin de In1 e In2 en los diferentes clones de AbMR estudiados, resultando 7 de ellos ser portadores de ambos integrones y mostrando el predominio del clon III entre los aislamientos estudiados. Este resultado muestra una caracterstica distintiva de dichos aislamientos recuperados en la ciudad de Rosario respecto a nuestros resultados previos documentados. Dado que la mayora de los aislamientos son portadores de integrones, consideramos que es importante el estudio constante y el conocimiento de la frecuencia de diseminacin de dichos elementos como tambin de los genes de resistencia asociados a ellos a fin de contribuir en el control de infecciones de dicha especie.
P56 - 27194 Corynebacterium pseudotuberculosis: PERFIL ENZIMTICO DE CEPAS AISLADAS DE PEQUEOS RUMIANTES. GALLARDO, ADRIANA(1); AZEVEDO, VASCO(2); ESTEVAO BELCHIOR, SILVIA(1)
1-Centro Regional de Investigaciones y Desarrollo Cientfico-Tecnolgico (CRIDECIT), Facultad de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco (UNPSJB). Comodoro Rivadavia, Chubut, Argentina. 2-Dto. de Biologia General, Instituto de Ciencias Biologicas-Universidad Federal de Minas Gerais, ICB/UFMG. Brasil. Corynebacterium pseudotuberculosis es el agente etiolgico de linfoadenitis caseosa (LC), una enfermedad crnica que afecta a cabras y a ovejas, ocasionando inflamacin de los ndulos linfticos, anorexia y muerte. Esta patologa causa prdidas econmicas importantes, en la industria ganadera a nivel mundial. Las propiedades invasoras, de esta bacteria, son atribuidas a la elaboracin de enzimas extracelulares y al contenido lipdico de su pared celular. El objetivo del presente trabajo fue analizar y comparar los perfiles enzimticos y la actividad hemoltica entre aislamientos de C. pseudotuberculosis provenientes de distintos lugares geogrficos. Se estudiaron 38 cepas, 6 de origen caprino y 32 de ovinos, aislados de distintos sitios de lesin y procedentes de la Regin Patagnica (desde la provincia de Tierra del Fuego hasta la provincia de Ro Negro) y Brasil (estado de San Pablo Aracatuba y estado de Baha). Para determinar la produccin enzimtica, se empleo agar base adicionado con diferentes sustratos de acuerdo a la prueba a desarrollar. La actividad proteoltica se demostr en agar triptena soya (TS) adicionado con 20% de leche descremada y en medio gelatina. Para actividad lipoltica se adicion 1% Tween 80 en agar TS, para lecitinasas un 5% de solucin yema de huevo y para amilasas un 1% de almidn. El agar yema de huevo permiti evidenciar adems actividad proteoltica y lipoltica. La coagulasa libre se determin mediante la prueba en tubo y DNAsas en agar-DNA. Adems, se ensayo la hidrlisis de urea y fenil alanina. Por otra parte se observ la capacidad hemoltica en medios de cultivo utilizando agar TS suplementado con 5% de sangre de carnero, de caballo y humana. Todas las pruebas se incubaron a 37C hasta 10 das con observaciones diarias. Las cepas estudiadas mostraron actividad proteoltica en agar yema de huevo (100%) y agar leche descremada (65%); actividad lipoltica en agar yema de huevo y Tween 80 (100%) y ureasa (100%). Todas las cepas fueron dbilmente positivas para la produccin de amilasas. El 98% de los aislamientos mostraron hemlisis en agar sangre humana y el 100% en agar sangre de carnero. Fueron negativas para la produccin de coagulasas, DNAsas, lecitinasas, gelatinasas, fenil alanina deaminasas y capacidad hemoltica en sangre de caballo. Los aislamientos estudiados, de diferentes zonas geogrficas, presentaron un perfil enzimtico semejante a excepcin de la produccin de caseinasas y la actividad hemoltica en agar sangre humana que determinaron diferentes biotipos entre las cepas.
La protena FtsZ es un anlogo bacteriano de la tubulina, altamente conservada en el dominio bacteria y cuyo correcto dosaje es clave para la divisin celular. Una disminucin del mismo es suficiente para imposibilitar la supervivencia de la clula. La ARNasa P es capaz de mediar el corte de una molcula de ARN en presencia de un oligorribonucletido complementario, conocido como External Guide Sequence (EGS). Para que cumpla dicha funcin, el EGS debe poseer ciertas caractersticas que determinan la estructura adecuada cuando interacciona con el ARN blanco. La tecnologa EGS se ha empleado con xito para silenciar diversos genes bacterianos. Recientemente, hemos determinado que oligonucletidos hbridos que contienen residuos de ADN y cidos nucleicos cerrados (LNA) son resistentes a nucleasas bacterianas pero de todas maneras son capaces de inducir la actividad de ARNasa P. Estas propiedades les permiten generar el silenciamiento del gen de resistencia a amikacina aac(6)Ib en clulas naturalmente permeables cuando son administrados exgenamente. La aplicacin de dicha tecnologa al silenciamiento de ftsZ podra llevar a la identificacin de EGSs con la capacidad de actuar sinrgicamente con antibiticos existentes o, si el efecto es lo suficientemente potente, de constituirse en antimicrobianos de accin independiente. A partir de un modelado in silico (mfold webserver) se disearon EGSs complementarios a regiones potencialmente accesibles. Estos EGSs marcados radiactivamente en el extremo 5 fueron analizados para determinar su capacidad de unin al ARNm ftsZ as como de inducir su degradacin. La unin se determin por ensayos de cambio de movilidad electrofortica (EMSA) y la capacidad de inducir degradacin se ensay por incubacin del mensajero radiactivamente marcado con las dos subunidades de la ARNasa P (ARN M1 y la protena C5). Se disearon EGSs complementarios a las dos regiones ms extensas predichas como simple cadena. De los dos EGSs diseados se determin que slo el dirigido contra una de dichas regiones (EGS2) fue capaz de unirse al ARN mensajero ftsZ y de inducir el corte en presencia ARNasa P. Dado que pequeas diferencias en la posicin relativa del EGS pueden resultar en grandes diferencias de actividad, se llev a cabo un estudio de optimizacin generando EGSs de la misma longitud, pero corridos solapadamente en una, dos o tres bases hacia cada extremo con respecto a la secuencia de EGS2. Se determin que todos los EGSs fueron capaces de unirse con alta eficiencia y de inducir el corte in vitro del mensajero, uno de ellos con una eficiencia superior al resto. Nuestros resultados indican que existe al menos una regin en el mensajero ftsZ capaz de interactuar productivamente con EGSs. Los ensayos de optimizacin en el diseo de los EGSs permitieron identificar una secuencia con actividad lo suficientemente alta para llevar a cabo futuros estudios de silenciamiento de ftsZ in vivo.
P58 - 27353 EMPLEO DE MICROSCOPA DE FUERZA ATMICA PARA CUANTIFICAR PROPIEDADES ELSTICAS DE SUPERFICIE DE Bordetella pertussis. RELACIN CON LA EXPRESIN DE FACTORES DE VIRULENCIA A NIVEL DE MEMBRANA. ARNAL, LAURA(1); VELA, M ELENA(2); SERRA, DIEGO O(1); CATTELAN, NATALIA(1); SALVAREZZA, ROBERTO(2); YANTORNO, OSVALDO M(1)
(1) Centro de Investigacin y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI), (2) Instituto de Investigaciones Fisicoqumicas Tericas y Aplicadas (INIFTA). La tos convulsa o pertussis es una enfermedad altamente infecciosa del tracto respiratorio causada por Bordetella pertussis (Bp), un patgeno estrictamente humano. En el siglo XX pertussis fue una de las enfermedades ms comunes en nios. Se ha reportado que los adolescentes y adultos constituyen un nicho donde estas bacterias persisten y desde el cual se transmiten a infantes. Recientemente hemos reportado que este organismo puede crecer como biofilm adherido a superficies (1) y que el biofilm podra constituir la forma en que B. pertussis persiste en su hospedador. Las propiedades adhesivas y viscoelsticas de las bacterias tienen un rol importante en las distintas etapas del desarrollo en biofilm. La microscopa de fuerza atmica (MFA) constituye una nueva herramienta para caracterizar propiedades fsi-
P57 - 27233 SILENCIAMIENTO DEL GEN ftsZ MEDIANTE TECNOLOGA ANTISENTIDO: IMPLICANCIAS EN EL DESARROLLO DE NUEVAS ESTRATEGIAS TERAPUTICAS. DAVIES SALA, CAROL G (1); SOLER BISTUE, ALFONSO J C (1); ZORREGUIETA, ANGELES (1); TOLMASKY, MARCELO E (2)
(1) Fundacin Instituto Leloir UBA, (2) California State University Fullerton (CSUF), USA.
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cas de clulas microbianas, posibilitando cuantificar propiedades namomecnicas de bacterias creciendo en biofilm (2). En el presente estudio nosotros reportamos el uso de MFA para cuantificar el modulo de elasticidad de superficie de distintas cepas de B. pertussis. Se estudiaron una cepa salvaje de referencia B. pertussis Tohama I, y dos mutantes, uno deficiente en el factor de virulencia hemaglutinina filamentosa (FHA) (FHA-), y otro avirulento (Bp539), el cual no expresa ningn factor de virulencia conocido. Para determinar las propiedades elsticas de estas bacterias se realizaron curvas de fuerza sobre su superficie y luego se transformaron en curvas de fuerza vs. indentacin. Estas se ajustaron posteriormente con un modelo de Hertz apropiado y a partir de estos datos se calcul el mdulo de Young o mdulo de elasticidad para las distintas cepas. Los valores encontrados fueron: 0.24 0.03, 0.14 0.02 y 0.07 0.03 MPa para Tohama I, Bp FHA- y Bp 539 respectivamente. Los resultados obtenidos permiten relacionar propiedades de elasticidad de la cubierta bacteriana con el nivel expresin de protenas en su superficie. La MFA demostr ser una metodologa adecuada para cuantificar la contribucin de factores de virulencia a las propiedades elsticas de las clulas bacterianas. Esta tecnologa se est aplicando para monitorear cambios en las propiedades viscoelsticas durante la formacin del biofilm de B. pertussis, tratando de relacionar las mismas con la persistencia de la poblacin en su hospedador.
P60 - 27593 IDENTIFICACIN DE PROTENAS PERIPLASMTICAS INVOLUCRADAS EN LA BIOGNESIS DE MLS EN BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS. BRAMBILLA, LUCIANO(1); VIALE, ALEJANDRO(1)
(1) Instituto de Biologa Molecular y Celular de Rosario (IBR, CONICET), Departamento de Microbiologa, FCByF, UNR, Rosario, Argentina. La produccin de metalo--lactamasas (ML) por parte de bacterias gram-negativas es uno de los mecanismos de resistencia a antibiticos -lactmicos mas comunes. GOB-18 es una ML dependiente de zinc (Zn) identificada en el patgeno oportunista Elizabethkingia meningoseptica. Una vez sintetizada en el citoplasma bacteriano es secretada de manera desplegada al espacio periplasmtico donde ocurre la adquisicin del in Zn (II) y su plegado final al estado nativo. Nosotros estamos estudiando factores proteicos que intervienen en la biognesis/ensamble de MLs y recientemente hemos determinado que la secrecin de GOB en Escherichia coli requiere la cooperacin del sistema DnaK con la maquinaria de secrecin Sec. Hemos identificado tambin que la ausencia de la protena periplasmtica DacD disminuye la resistencia a cefotaxima sugiriendo que DacD coopera en la biognesis de GOB en el periplasma. El objetivo de este trabajo ha sido elucidar el rol de DacD en este proceso. Con este fin se obtuvieron a travs de shock hiposmtico las fracciones de protenas periplasmticas de las cepas parental de E. coli y mutante por delecin en dacD y se analizaron por western blot con antiGOB lo cual revel menores cantidades de la enzima en la cepa mutante. Utilizando fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) como inhibidor de proteasas se observ un aumento en las cantidades de GOB en los extractos as como la restitucin de los niveles de resistencia en la mutante, sealando a la degradacin como destino final de GOB secretada en la cepa mutante. Estos resultados sugieren que DacD participa en la estabilidad de la ML GOB en el periplasma bacteriano.
P59 - 27373 EFECTO DE ALTAS TEMPERATURAS SOBRE UN AISLAMIENTO DE Corynebacterium pseudotuberculosis. ALVAREZ, LAURA ALEJANDRA; GALLARDO, ADRIANA A; ABALOS, ANDREA; ESTEVAO BELCHIOR, SILVIA
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco (UNPSJB) - Centro Regional de Investigaciones y Desarrollo Cientfico-Tecnolgico (CRIDECIT). Corynebacterium pseudotuberculosis es un bacilo gram-positivo causante de linfoadenitis caseosa (LAC) en ovejas y cabras. El contagio entre animales suele producirse por va cutnea, principalmente durante la esquila. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto antibacteriano de altas temperaturas sobre una cepa autctona de C. pseudotuberculosis. Se trabaj con un aislamiento, en cultivo puro, identificado metablica y genticamente como C. pseudotuberculosis biovar ovis, recuperado de un absceso en un ganglio de un ovino de la zona de Ro Gallegos, Santa Cruz. El mismo se someti a temperaturas comprendidas entre 40 y 65 C en tres sistemas de distintas caractersticas: en suspensin en solucin fisiolgica estril; en agua dura con presencia de materia orgnica y sobre la superficie de peines de esquila de acero inoxidable. En los dos primeros ensayos se llev a cabo un recuento de colonias por triplicado a distintos tiempos y se calcul el tiempo de reduccin decimal (D); el ltimo ensayo se realiz de manera cualitativa debido a la superficie irregular de los peines. La recuperacin de la cepa se realiz en agar Triptena Soya, a 37 C por 48 hs. Se observ que al cabo de 3 min a 65 C la cepa fue inactivada efectivamente en condiciones limpias. Para los ensayos con materia orgnica se emplearon altos niveles de sustancias interferentes para asemejarse a las condiciones de campo, observndose que su incorporacin prolonga el tiempo de contacto hasta 5 min. Se presentan en la tabla los tiempos D obtenidos para las suspensiones. En los soportes contaminados con la cepa la inactivacin trmica se produjo en las mismas condiciones. A temperaturas inferiores el tratamiento fue inefectivo.
Temperatura Condiciones Tiempo D (min) 50C Limpias 21,74 50C con materia orgnica 39,7 65C Limpias 0,61 65C con materia orgnica 0,93
P61 - 27644 EFECTO INHIBITORIO DE LIPOSOMAS SOBRE EL CRECIMIENTO DE Trypanosoma cruzi. DIBLASI, LORENA(1); HERMIDA, LAURA(2); PAVETO, CRISTINA(3); ROSI, PABLO(1) (4)
(1) Departamento de Ciencia y Tecnologa - Universidad Nacional de Quilmes; (2) Laboratorio de Liberacin Controlada - INTI; (3) Instituto de Investigacin en Ingeniera Gentica y Biologa Molecular - CONICET; (4) Facultad de Farmacia y Bioqumica IQUIFIB - UBA. Introduccin: El protozoario flagelado Trypanosoma cruzi en su estado de epimastigote posee actividad endoctica, adems esta forma replicativa puede cultivarse en condiciones de laboratorio en medio lquido por lo que es la ms adecuada para estudiar la accin de liposomas (LP) en el crecimiento celular. Los LP son estructuras lipdicas capaces de encapsular diversos compuestos. Son ampliamente utilizados para vehiculizar compuestos polares a travs de la membrana celular. Objetivo: Evaluar el efecto de liposomas con distintas composiciones lipdicas y distintos tamaos como inhibidores del crecimiento de epimastigotes, clulas endocticas de Trypanosoma cruzi. Materiales y Mtodos: Se prepararon suspensiones de fosfatidilcolina de huevo (EPC) y fosfatidilcolina de soja (SPC) a concentraciones finales de 13 mg/ml en bffer HEPES 10 mM pH=7,4 conteniendo: 100% SPC, 100% EPC y 50% EPC-50% SPC. Cada suspensin fue sometida a los siguientes tratamientos sucesivos: 1) disolucin en HEPES; 2) sonicado por 60'; 3) extrusin 5 veces por membrana de acetato de celulosa de 800 nm de dimetro de poro (dp); 4) idem 400 nm dp; 5) idem 200 nm dp; 6) idem 100 nm dp; adems se hizo una extrusin por membrana de 800 nm dp, sin sonicacin previa. Luego de cada tratamiento se tomaron alcuotas de 2 ml para su uso en cultivos celulares. En todos los casos estas alcuotas fueron conservadas en atmsfera de N2 y a 8 C. El tamao de partcula en las suspensiones se determin por Dynamic Light Scattering en un Malvern Zetasizer NanoS. Resultados Y Conclusiones: Se observ que el origen de la fostatidilcolina utilizada en la obtencin de los LP influye en la inhibicin del creci-
La aplicacin de temperaturas de 65C por tres minutos sobre superficies y/o lquidos contaminados con C. pseudotuberculosis permitira eliminar el microorganismo. En caso de encontrarse materia orgnica los tiempos de contacto deben aumentarse. El uso de altas temperaturas se considera una herramienta apropiada y de fcil aplicacin para la disminuir la trasmisin de C. pseudotuberculosis, evitando los perjuicios en la produccin ganadera por LAC.
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miento de epimastigotes. En el caso de la suspensin 100% EPC se observ un claro efecto inhibitorio correlacionado positivamente con el aumento de la concentracin de LP. Por el contrario, los LP formados a partir de 100% SPC muestran un efecto inhibitorio mximo a concentraciones determinadas (0,16 mg/ml), por encima y por debajo de las cuales el efecto es menor. Los LP obtenidos a partir de 50% EPC- 50% SPC presentaron efectos sinrgicos positivos con un comportamiento similar al de LP 100% SPC. Cuando la suspensin original de los lpidos, sin sonicar ni extrudar, es probada, tanto 100% EPC, como 50% EPC-50% SPC muestran una clara actividad inhibitoria, mientras que 100% SPC no muestra actividad inhibitoria alguna en el rango de concentraciones evaluadas. La mxima accin inhibitoria fue detectada para LP de 100 nm de dimetro de composicin 50% EPC-50% SPC.
P62 - 27734 ANLISIS POR MAPEO PTICO DE LAS REGIONES RELEVANTES AL FENOTIPO DE SUSCEPTIBILIDAD A ANTIBITICOS EN Acinetobacter baumannii A118. RAMIREZ, MARIA SOLEDAD; CENTRON, DANIELA (1); TOLMASKY, MARCELO E(2)
(1) Depto. Microbiologa, Facultad de Medicina UBA, (2) California State University of Fullerton, CSUF, USA. Acinetobacter baumannii (Ab) es un patgeno oportunista emergente responsable de un creciente nmero de infecciones nosocomiales. Los aislamientos de Ab son usualmente multirresistentes, siendo en algunos casos resistentes a todos los antibiticos disponibles para su tratamiento. Dicha caracterstica no solo complica su tratamiento y erradicacin sino que tambin crea dificultades para el desarrollo de estudios genticos. La cepa A118, aislada de una muestra de hemocultivo de un paciente internado en la unidad de cuidados intensivos de un hospital de la Ciudad de Buenos Aires, es susceptible a un gran numero de antibiticos por lo cual fue propuesta como un modelo ideal para estudios genticos. El objetivo del presente trabajo fue identificar la presencia y/o ausencia de regiones relevantes al fenotipo de susceptibilidad evidenciado en Ab A118 mediante el empleo de mapeo ptico. El mapa ptico de Ab A118 se realiz en OpGen, Inc. Se utiliz el software MapSolver software 2.1.para llevar a cabo la comparacin y anlisis del mapa ptico de Ab A118 con los generados electrnicamente a partir de los genomas de Ab conocidos. Se realiz amplificacin por PCR utilizando primers apropiados para confirmacin del anlisis. Se encontr una delecin de alrededor unos 300 pb en un gen que codifica para un protena transmembrana, la cual se encuentra presente en todos los genomas de Ab secuenciados. Dicha protena pertenece a la superfamilia de transportadores y actuara como bomba de eflujo de drogas. El gen que codifica para la PBP2 present una delecin de aproximadamente 240 pb. Asimismo, la regin de resistencia denominada AbaR, que normalmente se encuentra insertada en el gen comM de un gran numero de Ab multirresistentes, esta ausente en el Ab A118. En cambio se observ que el gen comM est intacto. La susceptibilidad del Ab A118 podra ser explicada, al menos en parte, por las ausencia o delecin de las regiones estudiadas, que son parcialmente responsables de los fenotipos de multiresistencia observados en la mayora de las cepas de Ab.
genes cassettes. Los genes cassettes consisten de un marco de lectura abierto y un sitio de recombinacin attC, que es reconocido por la integrasa para escindir del integrn el gen cassette e insertarlo en el attI1 o en otro attC. En nuestro laboratorio, encontramos ordenamientos atpicos dentro de la regin variable de integrones de clase 1 y 2, donde los sitios attC esperados fueron reemplazados por una delecin de los sitios de recombinacin attI1 o attI2, generando genes cassettes inusuales. El objetivo de este trabajo fue evaluar la variabilidad del gen intI1 y del sitio attI1 de aislamientos clnicos e investigar la dispersin del attI1 en los genomas bacterianos. Utilizamos el algoritmo Blastn del programa de herramientas de bsqueda de alineamiento bsico local (BLAST) del sitio web PubMed [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pubmed/]. Cuando fue necesario, se utiliz la base de datos de microbios BLAST, optimizando la bsqueda incluyendo slo los genomas completos y ajustando los parmetros del algoritmo. Encontramos que dentro de las 212 muestras clnicas que presentaban el gen intI1 completo y el sitio attI1 en la base de datos GenBank, hay 16 alelos del gen intI1, con mutaciones puntuales. El sitio attI1 tambin mostr mutaciones puntuales pero en pocos casos y no siempre asociadas con el mismo intI1. De la bsqueda del sitio attI1 en los genomas, encontramos que en su versin completa siempre se encontr asociado al gen intI1. Tambin encontramos deleciones, comprendiendo la porcin de 13 pares de bases de este sitio que fue encontrada previamente asociada a algunos genes cassettes inusuales y en este estudio fueron identificadas en 115 de 696 genomas analizados. Mientras que hay una variedad de alelos de intI1 entre las muestras clnicas, el attI1 muestra una estabilidad remarcable mostrando que esta asociacin fue seleccionada y est bien establecida. La dispersin de las deleciones del attI1 (comprendiendo la porcin que se encontr asociada a algunos genes cassettes inusuales) en los genomas bacterianos pertenecientes a grupos bacterianos distantes, mostr que la integrasa IntI1 tiene numerosas oportunidades de recombinar en la naturaleza.
P64 - 27875 COLECCIONES DE CULTIVOS MICROBIANOS EN ARGENTINA. DAVEL, GRACIELA(1); MARTOS, GLADYS(1); TERRAGNO, RAQUEL(1); FLOCCARI, MIRTHA(1); LEVIS, SILVANA (1); LEARDINI, NELIDA(1); PERTICARI, ALEJANDRO(1); SFREDDO, ELIZABETH(1)
(1) Subcomisin de Colecciones de Cultivos Microbianos, S.C.C.M., Asociacin Argentina de Microbiologa. A lo largo de dcadas, distintas instituciones cientficas se avocaron con dedicacin y mucho esfuerzo a la conservacin ex situ de una amplia variedad de microorganismos. El desconocimiento de la situacin y el nmero de las mismas, ha impulsado a la Subcomisin de Colecciones de Cultivos Microbianos perteneciente a la Asociacin Microbiolgica Argentina, a realizar un relevamiento de colecciones de cultivo en Argentina. Hasta el momento, se han registrado 25 centros, de los cuales 15 estn registrados en la Federacin de Colecciones de Cultivos Microbianos para Amrica Latina y El Caribe (FELACC), ocho solamente en la WFCC y 3 en ambas federaciones. Las colecciones argentinas incluyen microorganismos de variados orgenes y aplicaciones: de inters biomdico, tales como la coleccin de hongos miceliales y levaduras, las de bacterias de origen humano, alimentario y ambiental del Instituto Malbrn. Algunas colecciones conservan microorganismos aislados de nichos especficos de inters agrcola, industrial o alimentario como las colecciones de las universidades de Cuyo, de Buenos Aires y del Comahue; de bacterias simbiticas y microorganismos promotores de crecimiento agrcola, de hongos miceliales y levaduras de las universidades de Buenos Aires, Rosario y La Plata; de bacterias de inters veterinario como INTA-EEA. Otras mantienen grupos taxonmicos nicos aislados de distintos nichos como la coleccin de CERELA, exclusiva de bacterias lcticas. Algunos centros se dedican a la preservacin de hongos comestibles y medicinales en institutos del CONICET, o de hongos entomopatgenos, en la Universidad de La Plata, o bacterias de ambientes extremos en PROIMI, Tucumn. La mayora de estas colecciones surgieron como resultado de proyectos de investigacin de universi-
P63 - 27849 ESTUDIO DE LA VARIABILIDAD DEL GEN intI1 Y EL SITIO attI1 PRESENTES EN AISLAMIENTOS CLNICOS Y LA DISPERSIN DE ESTE LTIMO EN LOS GENOMAS BACTERIANOS. QUIROGA, MP; NARDELLI, M; RAMIREZ, MS; CENTRON, D.
Depto. Microbiologa, Facultad de Medicina UBA. Los integrones de clase 1 son elementos genticos que contienen los componentes de un sistema de recombinacin sitio especfico y generalmente estn asociados a multirresistencia antibitica en aislamientos clnicos. Estn compuestos por el gen intI1, que codifica la recombinasa IntI1, el sitio de recombinacin attI1, y la regin promotora Pc que permite la expresin de los
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dades o centros pertenecientes a organismos oficiales con atencin a problemas especficos en diferentes reas como agricultura, salud, medio ambiente, industria, alimentacin, etc. El estado de conservacin de las colecciones es variable y depende de la disponibilidad de recursos financieros en la institucin, o de fondos secundarios derivados de proyectos de investigacin, excepto las que realizan servicios a la industria o trabajan con entidades privadas. No hay financiamiento oficial especfico. Muchas cuentan con personal capacitado en gestin de calidad pero muy pocas lo aplican. En general, no cuentan con personal especfico designado y el trabajo de mantenimiento lo realizan investigadores, docentes o profesionales como actividad secundaria a la que desempean habitualmente. Estas colecciones constituyen un registro de la biodiversidad microbiana de nuestro pas, son fuente potencial de germoplasma y materia prima indispensable para investigacin y el desarrollo biotecnolgico de Argentina.
tantes aislamientos no pudieron ser identificados con precisin mediante este mtodo y se consideraron como desconocidos.
P66 - 27128 RESPUESTA AL ESTRS SALINO Y EXPRESIN DE ACUAPORINAS EN PLANTAS DE CEBADA INOCULADAS CON Azospirillum. ZAWOZNIK, M; AMENEIROS, M; BENAVIDES, M; GROPPA, M
Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA Azospirillum es una PGPR que incrementa el rendimiento de diversos cultivos a travs de distintos mecanismos. Se ha documentado que las plantas inoculadas con esta PGPR exhiben mayor tolerancia a estreses abiticos, como el hdrico y el osmtico. En el contexto de los mecanismos de resistencia al estrs hdrico y salino, se ha informado que la regulacin de la expresin de las acuaporinas sera un mecanismo para evitar la prdida de agua de las clulas. Sin embargo, hasta el momento no hay trabajos en los que se haya investigado la expresin de acuaporinas en races de plantas colonizadas por Azospirillum. El objetivo de este trabajo fue investigar la respuesta al estrs salino y la expresin de acuaporinas en plantas de cebada inoculadas con Azospirillum. Para ello se cultivaron plantas de cebada sin inocular o inoculadas con la cepa de A. brasilense Az39 (A1) o con una cepa presente en un inoculante comercial (A2). Todas ellas se hicieron crecer en vermiculita. Al quinto da de la emergencia se inici el tratamiento salino adicionando a la solucin de riego 200 mM NaCl. A los 0, 3, 7, 12 y 19 das de tratamiento se evalu la biomasa total y de races, la altura de las plantas, el peso seco de la parte area y el contenido relativo de agua. Asimismo, se determin el contenido de poliaminas y el nivel de expresin del gen que codifica la acuaporina de raz de cebada HvPIP2,1. Tambin se midi la concentracin de sodio y de potasio. El tratamiento salino produjo en todas las plantas una significativa reduccin de la biomasa total, atribuible fundamentalmente a la cada de la biomasa radical; sin embargo, en las plantas inoculadas con la cepa A1 esta merma fue significativamente inferior que en las plantas sin inocular y que en las plantas inoculadas con A2. A los 12 das de tratamiento salino, la biomasa de la parte area disminuy 57%, 52% y 31% en las plantas sin inocular, inoculadas con A2 o con A1, respectivamente. A ese tiempo, la biomasa radical de las plantas expuestas a estrs salino e inoculadas con A1 fue 20% mayor que la del testigo sin inocular. El tratamiento salino ocasion un aumento de la putrescina a partir del da 12 slo en las plantas no inoculadas. Los niveles de espermina de las plantas inoculadas se mantuvieron por debajo de los niveles de las plantas control. La espermidina no mostr mayores variaciones. No se encontr cadaverina en ninguna de las muestras analizadas. En las plantas control no se detectaron transcriptos del gen HvPIP2,1 a ninguno de los tiempos evaluados. Tanto el tratamiento salino como la inoculacin con Azospirillum indujeron la expresin del gen citado. La cantidad de transcripto detectada fue significativamente mayor en las races de plantas inoculadas con la cepa A1. De hecho, las races de las plantas inoculadas con esta ltima cepa y sometidas a estrs salino fueron las que presentaron el mayor nivel de expresin. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que las plantas inoculadas con la cepa A1 fueron ms tolerantes al tratamiento salino que las plantas sin inocular y que las plantas inoculadas con la cepa A2. Esa mayor tolerancia podra estar relacionada con un menor aumento de putrescina desencadenado frente a la exposicin a la sal, como as tambin con la sntesis de novo de acuaporinas en la raz.
MICROBIOLOGA AGRCOLA Y AMBIENTAL

P65 - 27055 NUEVOS MICROORGANISMOS RIZOSFRICOS, CON POTENCIALIDAD COMO COINOCULANTES DEL GNERO Bradyrhizobium EN SOJA. MANEIRO, MARIA LAURA(1); GONZALEZ, NORMA(2); ANDREOLI, YOLANDA(2)
(1) FCA, Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) Unidad Integrada Balcarce Se buscaron microorganismos capaces de promover el crecimiento y/o nodulacin del cultivo de soja (PGPR y NPR, respectivamente), en suelos sin historia de cultivo de soja (SS) y con historia sojera, bajo siembra directa (SD) y convencional (LC). Los muestreos fueron realizados en los estadios V1 y V4. Se aislaron 616 microorganismos de la rizosfera de plntulas de soja a partir de tres medios de cultivo: Plate Count Agar (PCA), King B (KB), para aislamiento de Pseudomonas y medio de cultivo adicionado con Rojo Congo (RC), para el aislamiento de Azospirillum. Cincuenta y cuatro aislamientos fueron seleccionados y evaluados en ensayos de compatibilidad con Bradyrhizobium japonicum cepa E109, in vitro; ninguno de ellos result antagonista de E109. Se prob su crecimiento en medio de cultivo con 1 amino ciclopropano 1 cido carboxlico (ACC) como nica fuente de N, donde los aislamientos 10, 11, 13, 16, 17, 19, 32. 33 y 34 mostraron un considerable crecimiento, que evidenci la presencia de la enzima ACC deaminasa, responsable, en los organismos, de la descomposicin del ACC, que es precursor del etileno; esta caracterstica les confiere, eventualmente, propiedades PGPR. Asimismo, se los evalu por su capacidad de promover la elongacin de radcula de colza, en ocho experimentos segn diseos completamente aleatorizados con n=60, resultando mejorar significativamente el comportamiento del testigo los aislamientos 6, 10, 13, 33, 36, 38 y 40. Se seleccionaron los siete de mejor y dos de peor comportamiento, segn su capacidad de promocin de crecimiento de radcula de colza y se los integr a un experimento de coinoculacin de plantas de soja en condiciones controladas, en cmara de cra. En el mismo se incluyeron, adems, un testigo inoculado solamente con B. japonicum E109, un testigo absoluto (sin inocular) y un tratamiento con Azospirillum brasilense Az39, como referencia. Se emple un diseo completamente aleatorizado con diez repeticiones. Se midieron nmero de ndulos en corona, nmero y peso de ndulos totales, largo de raz principal y laterales, nmero de races laterales, peso total de races, peso de parte area y peso total de planta. Los resultados fueron sometidos al anlisis de la varianza empleando INFOSTAT versin 2005 e.1. No se encontraron diferencias significativas entre los nueve aislamientos probados, excepto para nmero total de ndulos, variable para la cual, el aislamiento 10 super significativamente a la cepa de referencia A. brasilense Az39 y a los aislamientos 6 y 36. Este aislamiento exhibi, asimismo, crecimiento positivo en un medio con ACC como nica fuente de N. Los siete aislamientos seleccionados por promover la elongacin de la radcula de colza fueron analizados por el mtodo rpido API BioMerieux, con el cual se identific que el aislamiento 13 corresponde a Pseudomonas fluorescens, los res-
P67 - 27214 SUPERVIVENCIA DE BACTERIAS EXPUESTAS A LA RADIACIN SOLAR Y MODELOS APLICABLES A SU ESTUDIO. OPPEZZO, OSCAR JUAN
Comisin Nacional de Energa Atmica - Centro Atmico Constituyentes En el desarrollo de tcnicas para mejorar la calidad microbiolgica de aguas utilizando luz solar, la interpretacin de curvas de supervivencia mediante modelos tericos permitira evaluar
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mejor la eficacia de los procedimientos ensayados. En este campo se han empleado modelos empricos, de aplicacin general. El objetivo de este trabajo fue poner a prueba el uso de un modelo alternativo, ampliamente aplicado en el estudio de efectos biolgicos de radiaciones ionizantes, para interpretar curvas de supervivencia de bacterias expuestas a la radiacin solar. Suspensiones de Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC14028, burbujeadas con aire o nitrgeno, se irradiaron en celdas de cuarzo colocadas en un dispositivo que permiti mantenerlas orientadas hacia el sol y a temperatura constante durante las exposiciones. En distintos momentos se determin el nmero de bacterias viables. Los parmetros de las ecuaciones correspondientes a los modelos en estudio se ajustaron por regresin no lineal a las curvas de supervivencia obtenidas mediante este procedimiento. Estas curvas parecieron seguir una funcin exponencial, pero para las bacterias burbujeadas con aire la velocidad de muerte aument cuando la fluencia super los 7 megaJ/ m, resultando el modelo exponencial inadecuado para este caso. Estos resultados podran explicarse asumiendo que: i) en las bacterias existen al menos dos tipos de blancos que son afectados la luz solar, ii) en uno de estos tipos de blanco el efecto de la radiacin es independiente del oxgeno y produce prdida de viabilidad con una cintica tpica de procesos que requieren un nico impacto en un nico blanco por clula, iii) afectando otro tipo de blanco la radiacin lleva a la prdida de viabilidad por acumulacin de dao dependiente de oxgeno con una cintica semejante a la esperable en procesos que requieren impactos nicos en mltiples blancos por clula. El primer tipo de blanco dara lugar a la cada exponencial observada con nitrgeno y al inicio de las irradiaciones con aire, y el segundo al cambio de pendiente observado en las irradiaciones con aire. Con este modelo, que permite asignar sentido fsico a los parmetros estimados, el ajuste fue mejor que el obtenido con el modelo de cada exponencial precedida por un hombro o el de tipo Weibull para curvas convexas, previamente aplicados al anlisis de la supervivencia de ATCC14028 durante exposiciones a la luz solar. Los modelos sencillos muestran limitaciones cuando se los aplica al estudio de los efectos de la luz solar en bacterias. Es necesario identificar estructuras blanco y eventuales mecanismos de fotoproteccin para elaborar modelos capaces de describir, y en lo posible predecir, estos efectos. Las tcnicas empleadas en este trabajo, aplicadas a mutantes deficientes en el control de stress ambiental, podran contribuir a este fin.
al azar con 3 repeticiones. Los datos se analizaron mediante un ANOVA y las medias se compararon por el test de Duncan (p=0,05) utilizando INFOSTAT. Se evalu: altura, peso seco (PS) y longitud de parte area, peso fresco (PF) y PS radicular y rea de superficie radicular, nmero, PF y PS de ndulos y contenido de leghemoglobina a los 20 y 45 das despus de la siembra (dds). Los resultados indican que a los 20 dds la concentracin de coinoculacin E109 105 + Az39 107 fue la que present mejor respuesta en la longitud total del sistema radical (61% ms que el T) y contenido de leghemoglobina en ndulos (47% ms que el tratamiento E109 10 5) siendo stas significativas. En volumen radicular tambin present la mejor respuesta (14,8% ms que el T) pero sin llegar a ser significativa. No se observaron diferencias entre tratamientos en PF radicular, PS de parte area y todas las variables medidas en nodulacin. A los 45 dds el tratamiento que mejor respuesta present fue E109 105 + Az39 105 observndose diferencias significativas con respecto al T en los parmetros PF de parte area (25%), nodulacin en raz primaria (133%), volumen radicular (42%), contenido de leghemoglobina (42%) y PF de ndulos totales (8%) siendo la diferencia significativa slo en los primeros cuatro parmetros evaluados. En longitud y PS de parte area el tratamiento que mejor performance tuvo fue E109 105 + Az39 107, siendo esta diferencia significativa con respecto al T slo en el primer parmetro evaluado (24%). El resto de los parmetros evaluados no mostr diferencias significativas entre tratamientos. El efecto de la co-inoculacin pudo observarse cuando se utilizaron dosis bajas a medias de Azospirillum modificando positivamente gran parte de los parmetros medidos en ambos momentos del muestreo.
P69 - 27245 EFECTO DEL COBRE EN LA SECRECIN DE ENZIMAS LIGNINOLTICAS DE Ganoderma applanatum CEPA A DE IMPORTANCIA BIOTECNOLGICA. TEJERINA, MARCOS R; FONSECA, MARIA I; VILLALBA, LAURA L; ZAPATA, PEDRO D
Laboratorio de Biotecnologa Molecular, Mdulo de Bioqumica y Farmacia. Facultad de Ciencias, Exactas, Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones Introduccin: Ganoderma applanatum, es un hongo ligninoltico, que presenta un amplio espectro de enzimas como, la lacasa (Lac) y manganeso peroxidasa (MnP), aplicables en diversos procesos como lo son el bioblanqueo, biopulpado y generacin de biocombustible. Objetivo: Analizar el efecto del cobre sobre la actividad enzimtica (Lac y MnP), el crecimiento en biomasa y la secrecin de protenas totales en G. applanatum. Materiales y mtodos: la cepa A de G. applanatum BAFC1168 fue inoculada en medio de cultivo lquido (extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de maz 5 g/L) durante 7, 10 y 14 das; con 0,2 mM, 0,5 mM y sin CuSO4. La cuantificacin de la actividad enzimtica de Lac y MnP fue determinada por espectrofometra, utilizando como sustrato DMP (2,6-dimetoxifenol) y MnSO4 respectivamente. Las protenas totales se cuantificaron mediante la tcnica de Bradford, utilizando como solucin patrn la albmina srica bovina. El crecimiento en biomasa se determin como peso seco del micelio. El anlisis estadstico se realiz mediante el programa estadstico GraphPad Prism 5. Para la deteccin de isoenzimas Lac fueron sembrados 20 g de protena por muestra en zimogramas no desnaturalizante (ND-PAGE al 7,5%). El revelado se realiz sumergiendo el gel en una solucin conteniendo DMP 5 mM en buffer acetato 0,1 M, pH 3,6 hasta la aparicin de bandas. El peso molecular de las isoenzimas fue determinado en geles desnaturalizante SDS-PAGE. Resultados: el efecto del cobre fue significativo (p<0,001) tanto en el crecimiento en biomasa como en la secrecin de protenas, produciendo un efecto negativo con el transcurso de los das. El cobre produjo un incremento de actividad enzimtica Lac (p<0,001) en concentraciones de 0,2 mM, mientras que en la actividad MnP no produjo un efecto significativo (p>0,05). Se determin que el cobre induce isoenzimas Lac que van desde los 70 hasta los 127 kDa. Conclusiones: el cobre produjo un efecto negativo en el crecimiento en biomasa y secrecin proteica, mientras que produjo un efecto positivo en la actividad enzimtica Lac, no as en la actividad MnP. El agregado de cobre tambin produjo la induccin de isoenzimas
P68 - 27229 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN PTIMA DE Azospirillum brasilense CO-INOCULADO CON Bradyrhizobium japonicum EN SOJA [Glycine max (L.) MERR]. PUENTE, MARIANA(1); ZAWOZNIK, MYRIAM(2); PERTICARI, ALEJANDRO(1); CARLETTI, SUSANA(3)
(1) BPCV INTA CASTELAR, (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA, (3) Universidad Nacional de Lujn Un gran nmero de bacterias no simbiticas promueve la nodulacin en cultivos de leguminosas cuando son co-inoculadas con bacterias del gnero Rhizobium. La produccin de fitohormonas por parte de Azospirillum modifica la morfologa vegetal, la captacin de agua y nutrientes minerales por la planta husped, promueve la nodulacin y el contenido de leghemoglobina en ndulos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la concentracin ptima de Azospirillum brasilense Az39 capaz de promover el crecimiento vegetal, la nodulacin y contenido de leghemoglobina en los ndulos de soja cuando se co-inocula con Bradyrhizobium japonicum. Los microorganismos utilizados fueron B. japonicum cepa E109 y A. brasilense cepa Az39. La cepa E109 se cultiv en medio YEM y la cepa Az39 en medio lquido de Sadasivan y Neyra, en un agitador rotatorio de 180 rpm a 30C durante 4 das. Para los tratamientos se combinaron tres concentraciones de Az39 (105, 107, 109 UFC/semilla) con E109 a una concentracin de 105 UFC/semilla, se incluyeron un testigo absoluto (T), un testigo inoculado con E109 105 y un testigo inoculado con Az39 autoclavada. La semilla utilizada fue DM 4670 (DON MARIO Semillas). Las semillas se sembraron en macetas plsticas con vermiculita estril. El diseo fue de 4 bloques completos
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Lac. Estos resultados motivan a profundizar los estudios incluyendo otras variables para obtener produccin enzimtica a gran escala y aplicarlas biotecnolgicamente a la industria celulsicapapelera o a la primera fase de fabricacin de biocombustible.
P70 - 27252 EFECTO DE INDUCTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Y LA EXPRESIN DE ISOENZIMAS DE LACASA. FONSECA, MARIA(1); RAMOS H, ANA(1); FARIA, JULIA(2); VILLALBA, LAURA(1); ZAPATA, PEDRO(1)
(1) Facultad de Ciencias, Exactas, Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones, (2) PROIMI-CONICET-T4001, Tucumn Introduccin: los hongos de pudricin blanca son los nicos organismos capaces de degradar eficientemente la lignina debido a que poseen un sistema enzimtico oxidativo que ataca la molcula de lignina, una de las ms importantes es la Lacasa (Lac). Se sabe que, factores tales como metales pesados o compuestos aromticos, influyen en la produccin de Lac, esto ha sido estudiado en varias especies. Con la utilizacin de estos sistemas enzimticos, manipulados para su sobreexpresin, la industria celulsico-papelera podra favorecerse logrando optimizar los procesos tecnolgicos con un menor impacto ambiental. Objetivo: detectar y cuantificar la produccin de Lac inducida tanto por sulfato de manganeso (MnSO4) como por cido sinpico y el efecto de dichos compuestos sobre el crecimiento y la secrecin proteica en Peniophora sp BAFC 633. Materiales y mtodos: el hongo se cultiv a 29 C, pH 4,5 en 50 mL de medio (extracto de malta 12,7 g/L, extracto soluble de maz 0,5 %) suplementado al da cero con MnSO4 y al tercer da de cultivo con cido sinpico, ambos a concentraciones finales de 0,3 mM, 0,1 mM y de 0,02 mM, en ensayos por separado durante 7, 10 y 14 das, en presencia de un control sin inductor. Cada da especificado se separ el micelio, para determinar biomasa, del sobrenadante utilizado para cuantificar protenas mediante el mtodo de Bradford. Adems con el sobrenadante se cuantific actividad Lac por espectrofotometra a 469 nm usando como sustrato 2,6dimetoxifenol (DMP). La enzima se caracteriz mediante geles de poliacrilamida desnaturalizantes y no desnaturalizantes revelados con DMP. Con el programa GraphPad Prism 5.0 se realiz el anlisis estadstico. Resultados: en los ensayos con MnSO4, no se observaron diferencias significativas (p>0,05) sobre la biomasa, secrecin proteica y la actividad enzimtica de Lac en ninguno de los tratamientos. Sin embargo, se detectaron dos isoenzimas, una constitutiva de 60 kDa que aparece en todos los tratamientos y otra inducida de 75 kDa presente nicamente en el ensayo con 0,1 mM de MnSO4 del da 14 de cultivo. Respecto a los tratamientos con cido sinpico, el mximo crecimiento se produjo el da 14 en los ensayos con 0,02 mM y 0,3 mM de cido sinpico (p<0,01). En cuanto a la secrecin proteica, no se observ diferencias significativas en ninguno de los tratamientos (p>0,05). Por otro lado, no se observaron diferencias significativas en la actividad enzimtica en ninguno de los tratamientos ensayados (p>0,05) y fue posible detectar una isoenzima constitutiva de 60 kDa en todos los tratamientos y otra inducida de 75 kDa presente nicamente en el ensayo con 0,02 mM de cido sinpico en el da 14 de cultivo. Conclusiones: en los ensayos con MnSO4, los resultados obtenidos parecen indicar que dicho compuesto no actuara como inductor enzimtico. Aunque la presencia de isoenzimas inducibles podra indicar otro tipo de regulacin. En el caso del inductor aromtico, el cido sinpico podra estar involucrado en la induccin de Lacasa, aunque no es posible conocer el mecanismo subyacente. Por lo que es fundamental avanzar sobre el conocimiento de la regulacin a nivel gentico de la transcripcin y la traduccin de enzimas ligninolticas.
Introduccin: La campylobacteriosis bovina es una enfermedad infecciosa causada por la psilon-proteobacteria Campylobacter fetus. Existen dos subespecies de esta bacteria: Campylobacter fetus fetus, que causa abortos espordicos y Campylobacter fetus venerealis, que infecta el aparato genital causando infecciones crnicas que provocan infertilidad. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un mtodo molecular, basado en Real Time PCR, para el diagnstico de la subespecie de C. fetus venerealis. Materiales y mtodos: para este estudio se utilizaron aislamientos de ambas subespecies obtenidas de ganado bovino uruguayo. Estos aislamientos fueron previamente tipificados como C. fetus venerealis o C. fetus fetus por mtodos bacteriolgicos tradicionales (ensayos de crecimiento en 1% de glicina y produccin de SH2 en medio TSI), segn las recomendaciones internacionales de deteccin de este patgeno. Adems se us ADN de Escherichia coli, Campylobacter sputorum bubulus y Campylobacter jejuni como controles negativos. El desarrollo del ensayo de Real Time PCR se bas en el diseo de una sonda de hidrlisis (TaqMan) y un par de cebadores que hibridan en una regin de 103 pares de bases en el gen virB11. Se seleccion este gen debido a que se encuentra dentro de una isla de patogenicidad presente en C. fetus venerealis y no en C. fetus fetus, lo que hace de virB11 un buen blanco de diagnstico. Todas las reacciones de Real Time PCR se llevaron a cabo en un equipo ABI7500. Resultados: en el ensayo desarrollado slo se observaron amplificaciones en las cepas caracterizadas como C. fetus venerealis. En las cepas identificadas como C. fetus fetus no se observ un resultado positivo, como era de esperarse. Adems, tampoco se observaron amplificaciones cuando se utiliz ADN de E. coli, Campylobacter sputorum bubulus y Campylobacter jejuni como controles negativos. Los resultados obtenidos sugieren que la metodologa funciona correctamente, aunque es necesario el anlisis de un mayor nmero de cepas para confirmar su aplicabilidad a nivel clnico. De todas formas, la aplicacin de Real Time PCR para la deteccin de ste patgeno es un paso importante, debido a que esta tecnologa, una vez estandarizada, aventaja en rapidez y confiabilidad a otras metodologas de diagnstico.
P72 - 27307 INDUCCIN DE LA HEMOOXIGENASA EN DOS ESTADIOS DE CRECIMIENTO DE PLANTAS DE SOJA INOCULADAS CON Bradyrhizobium japonicum Y SU RELACIN CON EL ESTRS OXIDATIVO. ZILLI, CARLA G(1); SANTA CRUZ, DIEGO M(1); TOMARO, MARIA L(1); BALESTRASSE, KARINA B(1)
(1) Departamento de Qumica Biolgica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA La hemooxigenasa-1 (HO-1) es una de las principales enzimas inducidas por diversas condiciones de estrs. Sus productos finales en plantas, la biliverdina y el monxido de carbono, pueden actuar como antioxidantes fisiolgicos ya que el primero es un eficiente atrapante de especies reactivas del oxgeno (ROS) y el segundo un conocido modulador en la produccin de ROS. En nuestro laboratorio hemos demostrado por primera vez que la HO1 es inducida en hojas y ndulos de plantas de soja sometidas a estrs oxidativo provocado por el tratamiento con cadmio y radiacin UV-B. En el presente trabajo analizamos la induccin de la HO-1 en los estadios iniciales de crecimiento de plantas de soja y su relacin con el estrs oxidativo y posteriormente su ubicacin histolgica en ndulos de soja sometidos a estrs salino. Acorde al modelo experimental 1 se inocularon las plantas con Bradyrhizobium japonicum , y siete das despus se observo en raz un 70% de incremento en sustancias reactivas al cido tiobarbitrico, junto con un marcado aumento en los niveles de expresin gnica, proteica y actividad de HO-1. Por otro lado se analiz la expresin gnica de la catalasa y superxido dismutasa, consideradas ambas enzimas antioxidantes clsicas, observndose un patrn similar al anteriormente descripto. En trabajos previos utilizando como material de estudio ndulos de plantas de soja sometidas a estrs salino (modelo experimental 2) observamos resultados igualmente concordantes con el anterior modelo en cuanto a la peroxidacin lipdica y expresin gnica de HO-1. Recientes estudios realizados mediante estrategias inmunolgicas
P71 - 27292 DESARROLLO DE UN MTODO MOLECULAR BASADO EN REAL TIME PCR PARA EL DIAGNSTICO DE Campylobacter fetus venerealis. IRAOLA, GREGORIO; HERNANDEZ, MARTIN; CALLEROS, LUCIA; CARRETTO, LUIS; PEREZ, RUBEN
Facultad de Ciencias, Universidad de la Repblica, Uruguay
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(inmunogold-microscopa electrnica) demostraron que la HO-1 se encuentra solo presente en la membrana peribacteroide de los ndulos. Materiales y mtodos: Modelos experimentales: las semillas de soja fueron esterilizadas superficialmente con hipoclorito de sodio, se germinaron en vermiculita y se inocularon con Bradyrhizobium japonicum. Modelo experimental 1: las plntulas se transfirieron el da 3 a recipientes hidropnicos y se cosecharon las radculas da 7 post inoculacin. Modelo experimental 2: las plantas fueron regadas con medio nutritivo Hoagland sin nitrgeno. El da 30 fueron regadas durante 10 das con una solucin de NaCl (100mM). Determinacin de sustancias reactivas al cido tiobarbitrico (TBARS): Se determin segn el mtodo de Heath and Packer, 1968. Extraccin de RNA y RT-PCR: se realiz segn Yannarelli et al. 2006. Actividad y expresin de protena HO-1: se realiz segn Yannarelli et al. 2006. Inmunodeteccin de la HO-1: Cortes delgados de los tejidos se utilizarn segn fue descripto por Marchalonis y col., 2001; Anderson y col., 2003. De acuerdo con los resultados obtenidos en ambos modelos experimentales podemos concluir en primer lugar que la HO-1 se induce en dos estadios del crecimiento de la planta consistentes con situaciones de estrs oxidativo y en segundo lugar que la hemooxigenasa se ubica en el tejido vegetal del ndulo y no as en el simbionte bacteriano.
en ausencia de Fe la cepa salvaje mostr un mayor contenido de este metal. Los resultados presentados indican que la deficiente produccin de NO en la cepa mutante Faj164 altera las respuesta frente a la deficiencia de Fe en A. brasilense. Por otro lado, se reporta por primera vez la presencia de actividad Fe Fe3+-reductasa en esta bacteria. Estos resultados se apoyan adems en el hallazgo in silico de una Fe Fe3+-reductasa putativa en el genoma de A. brasilense Sp245. La mayor actividad Fe Fe3+-reductasa observada en la mutante Faj164 podra constituir un mecanismo compensatorio a la deficiencia en la sntesis de siderforos en esta cepa.
P74 - 27355 POLIAMINAS Y XIDO NTRICO PARTICIPAN EN LA FORMACIN DE BIOPELCULAS EN Azospirillum brasilense. PEREYRA, CINTIA(*1,2); ARRUEBARRENA DIPALMA, ANDRES(*1,2); PEREYRA, ALEJANDRA(1); CREUS, CECILIA(1)
(1) rea Biomolecular, FCA, Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) Becarios CONICET, (*) ex aequo Las biopelculas bacterianas se definen como un conjunto mono- o multi- especfico de microorganismos unidos a una superficie bitica o abitica. Tanto las poliaminas (PAs) como el xido ntrico (NO) modulan la formacin de biopelculas en diferentes especies bacterianas y participan en la regulacin de importantes procesos fisiolgicos en plantas, animales y bacterias. En el caso de las bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR), la formacin de la biopelcula es necesaria para una exitosa colonizacin de las races y posterior promocin del crecimiento. Azospirillum brasilense constituye una de las PGPR ms estudiadas, posee la capacidad de formar agregados y produce PAs y NO. Los objetivos de este trabajo fueron: a) estudiar la formacin de agregados celulares en A. brasilense Sp245 wt y la cepa mutante isognica Faj164 (nitrato reductasa periplsmica negativa) que produce 95% menos NO que la wt en presencia de NO3-; b) determinar la capacidad de formar biopelculas para cada cepa; c) analizar la produccin de PAs por la biopelcula y el efecto del agregado exgeno de PAs. La formacin de agregados se estudi en medio OAB con fructosa y NO3- o NH4+. Los cultivos fueron crecidos 16 h a 32 C y 100 rpm. La formacin de biopelculas fue estudiada en placas de cultivo multipocillo por tincin con cristal violeta. Se us medio NFB con NO3-o NH4+ como fuente nitrogenada, con o sin agregado de 1 mM de putrescina, espermidina (Spd) o espermina (Spm). Los cultivos crecieron sin agitacin por 120 h a 32 C. Los sobrenadantes fueron utilizados para la determinacin de PAs libres por HPLC. Los resultados mostraron que la cepa mutante form ms agregados celulares que la cepa salvaje al crecer en NO3-, sin observarse diferencias en medio con NH4+. La formacin de biopelcula en el tratamiento control NH4+ fue similar en ambas cepas, mientras que en NO3- la cepa wt produjo menos biopelcula. El agregado de las tres PAs redujo notablemente la formacin de biopelcula en la cepa wt y en menor medida en la mutante. Las diferencias observadas en el proceso de agregacin entre las cepas wt y mutante, ponen en evidencia que la deficiente produccin de NO podra modificar la sntesis de EPS, principal factor que afecta la formacin de agregados. Por otro lado, se demostr por primera vez la produccin de Spd (~1,5 g/mL cultivo) en ambas cepas tanto en medio con NO3- como con NH4+. En suma, los resultados presentados indican que en A. brasilense Sp245 tanto las PAs como el NO poseen un rol en la formacin de biopelculas in vitro.
P73 - 27340 RESPUESTA DE Azospirillum brasilense A LA DEFICIENCIA DE HIERRO Y EL ROL DEL OXIDO NTRICO COMO REGULADOR DE ESTE PROCESO. ARRUEBARRENA DIPALMA, ANDRES(*1,3); AMENTA, MELINA(*1,3); LAMATTINA, LORENZO(2,3); CREUS, CECILIA(1)
(1) rea Biomolecular, FCA, Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) IIB, FCEyN, Universidad Nacional de Mar del Plata, (3) CONICET, (*) ex aequo El hierro (Fe) es un nutriente esencial para todos los organismos. A pesar de su gran abundancia en el suelo, la biodisponibilidad de este micronutriente en ambientes aerbicos y a pH neutro es limitada. Los microorganismos han desarrollado diversos mecanismos para obtener Fe, siendo la produccin de siderforos y la actividad Fe3+-reductasa de membrana o extracelular los ms importantes. El oxido ntrico (NO) es una molcula gaseosa presente en animales, plantas y bacterias, involucrada en la regulacin de numerosos procesos fisiolgicos. Se ha demostrado que el NO modifica la actividad de fur, regulador transcripcional global de la absorcin del Fe en bacterias, aunque el rol exacto de esta molcula seal sobre los sistemas de adquisicin y almacenaje de Fe aun no ha sido dilucidado. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el crecimiento, la produccin de siderforos, la actividad Fe3+-reductasa y el contenido total de Fe en la bacteria promotora del crecimiento vegetal Azospirillum brasilense Sp245 y en una cepa mutante isognica en la nitrato reductasa periplsmica (A. brasilense Faj164) que produce un 95% menos de NO en presencia de NO3- como nica fuente de nitrgeno. Ambas cepas fueron cultivadas en medio NFB suplementado con NO3- y con tres niveles de Fe: 1) suficiencia (37 M FeCl3), 2) deficiencia (3 M FeCl3) y 3) ausencia (sin FeCl3). Se realizaron curvas de crecimiento para las dos cepas, se analiz la produccin de siderforos en medio indicador NFB-CAS y la respuesta frente a dadores y secuestrantes de NO, GSNO y cPTIO, respectivamente. Se estudi la actividad Fe reductasa in vivo utilizando el reactivo ferrozina y se determin el contenido total de Fe por el mtodo Fish. En presencia de Fe, no se observaron diferencias en el crecimiento entre ambas cepas. Sin embargo, en ausencia total de Fe ambas cepas presentaron una disminucin similar en el crecimiento. La produccin de siderforos en la cepa salvaje fue mayor que en la mutante y disminuy con el agregado del secuentrante de NO (cPTIO). Por el contrario, la cepa mutante no respondi en la produccin de siderforos frente al agregado de dadores de NO, o del intermediario NO2- que puede ser metabolizado a NO. La actividad Fe Fe3+reductasa fue mayor en la cepa mutante para las tres condiciones de disponibilidad de Fe. El contenido de Fe total de ambas cepas fue similar para los tratamientos de suficiencia y deficiencia, pero
P75 - 27418 PROMOCIN DEL CRECIMIENTO POR INOCULACIN CON -RIZOBIOS DE Parapiptadenia rigida, UNA LEGUMINOSA NATIVA CON ALTO POTENCIAL FORESTAL. ZABALETA, MARIA(1); TAULE, CECILIA(1); ROSCONI, FEDERICO(1); MAREQUE, CINTIA(1); SANJURJO, LUCIA(1); RODRIGUEZ, ANDREA(2); SICARDI, MARGARITA(3); FRIONI, LILIAN(2); BATTISTONI, FEDERICO(1); FABIANO, ELENA(1)
(1) Laboratorio de Bioqumica y Genmica Microbiana,IIBCE-MEC, (2) Ctedra de Microbiologa, Facultad de Agronoma, (3) Laboratorio de Microbiologa de Suelos, CIN, Montevideo, Uruguay
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La leguminosa arbrea uruguaya Parapiptadenia rigida (angico) es una de las especies ms promisorias para la agroforestacin como integrante de montes multipropsito. Su madera pesada, de alto contenido energtico, es apreciada en trabajos de carpintera fina. Muy poco se conoce sobre el comportamiento de nuestras leguminosas nativas arbreas a nivel de vivero con fines de propagacin masiva o industrial. Numerosos microorganismos han sido descriptos como promotores del crecimiento vegetal, entre ellos los rizobios, quienes contribuyen a captar el nitrgeno atmosfrico. En nuestro laboratorio se gener una coleccin de 53 rizobios aislados de ndulos de angico, pertenecientes al gnero Burkholderia, Cupriavidus y Rhizobium. Algunas de estas cepas fueron evaluadas en su capacidad de promover el crecimiento vegetal de cultivos de angico en solario e invernculo. A partir de los resultados obtenidos se seleccionaron las cepas Burkholderia sp. 4.13 y Cupriavidus sp. 5V12 para ser evaluadas en ensayos de campo, en los departamentos de Rivera y Lavalleja. El objetivo de este trabajo es lograr establecer una simbiosis efectiva planta-rizobio en condiciones de vivero que permita una implantacin exitosa del angico en campo. Se sembraron semillas de angico en macetas conteniendo tierra: arena: compost (1:1:1). Las plantas se inocularon con aproximadamente 1x107 UFC de la cepa Burkholderia sp. 4.13 o de la cepa Cupriavidus sp. 5V12. Como testigo positivo se agreg KNO 3 0,05% (p/v). Se realizaron 60 repeticiones por condicin. Tambin se inocularon 60 plantas con una mezcla de las 2 cepas anteriores y otras 60 plantas con la mezcla bacteriana y micorrizas. Como control negativo se us agua. Las plantas se mantuvieron en el invernculo durante aproximadamente 3 meses. En cada una de las localidades se plantaron 300 plntulas de angico, 30 de ellas inoculadas previamente con la cepa Burkholderia sp. 4.13, 30 plantas con Cupriavidus sp. 5V12, 30 plantas con una mezcla de estas dos cepas de rizobio, 30 plantas con la mezcla de rizobios y con hongos micorrcicos, 30 plantas fertilizadas en invernculo con KNO3 y 150 plantas testigo sin ningn tratamiento de fertilizacin. Los parmetros de crecimiento evaluados en las plantaciones fueron el dimetro basal y la altura del vstago. Los resultados obtenidos hasta la fecha, indican que las plantas inoculadas con la cepa Cupriavidus sp 5V12 muestran un crecimiento significativamente mayor en altura y en el dimetro del tallo a la base con respecto a los valores obtenidos para las plantas testigo, indicando que estos aislamientos pueden ser considerados como potenciales inoculantes comerciales. Se observ que el dimetro es un indicador ms confiable que la altura ya que se correlaciona mejor con el crecimiento global de la planta. Financiacin: INIA-FPTA (216), PDT S/C/OP/67/03 y PEDECIBA
sencia-ausencia de estructuras caractersticas del hongo micorrcico y el avance de la colonizacin fngica. Se evalu: peso seco y peso fresco de parte area y races, longitud de parte area y de races, dimetro de tallo, porcentaje de micorrizacin y el estado fitosanitario. Se realiz anlisis de varianza al 5% de significacin para la comparacin de medias entre los tratamientos generados a partir de la suspensin inoculante. Resultados: en VPM y FEM se identificaron hongos ECM asociados a E. grandis pertenecientes al gnero Scleroderma bovista Fr. La cantidad de esporas/mL en la suspensin inoculante himenio-esporal fue de 17,75x106. La densidad ptica (D.O.) del inoculante diluido (1/100) promedi en 0,2776. A los 30 das de la inoculacin se observ en pices: ramificacin pinada monopodial, predominante, retorcida, de textura aterciopelada; la insercin del cordn miceliar perpendicular; raicillas con hifas eflorescentes, todas caractersticas de hongos ECM. Los porcentajes de colonizacin en T2 y T4 fueron de 64% y 72% (elevados) respecto a T0 no colonizado. Los parmetros de relevancia estadstica fueron: peso seco de parte area, longitud de parte area y radical. En invernadero, Aleurotripxus floccosus (de baja incidencia) fue controlado con tiametoxan 25% y con Bacillus circulans. No se detectaron patogenias fngicas. La presencia de S. bovista Fr. en los dos sitios de estudio, refleja la ubicuidad del mismo y la elevada compatibilidad con E. grandis. Se aconseja la alternativa al uso del inoculo himenio-esporal siempre y cuando los esporocarpos sean jvenes y bien desinfectados. La suspensin himenio-esporal de S. bovista Fr. como inoculante, se perfila potencialmente como alternativa biotecnolgica para E. grandis, cultivo en expansin en la provincia, por los aportes en nutricin, proteccin contra patgenos (frecuentes) en raicillas en vivero y por promover su adaptacin local a esta extica.
P77 - 27429 OPTIMIZACIN DE LAS CONDICIONES DE CULTIVO DE Escherichia coli RECOMBINANTE PARA LA PRODUCCIN DE GLICEROL DESHIDROGENASA. PARCERISA, IVANA(1); PIATTONI, VANESA(1); IGLESIAS, ALBERTO(1); BECCARIA, ALEJANDRO(1)
(1) Instituto de Agrobiotecnologa del Litoral, Universidad Nacional del Litoral-CONICET, Santa Fe Introduccin: actualmente el auge por el empleo de biocombustibles permite disponer de abundantes cantidades de glicerol (Gro), subproducto del proceso de elaboracin del biodiesel. Adems, est establecido el uso del Gro como fuente de carbono en cultivos de microorganismos productores de protenas recombinantes y tambin su utilidad como sustrato precursor para la sntesis de valiosos metabolitos. Un ejemplo es la dihidroxiacetona (DHA), usada extensamente en la industria cosmtica como bronceador artificial. La sntesis de DHA a partir de Gro es catalizada por la enzima glicerol deshidrogenasa (GroDHasa) producida, entre otros microorganismos, por Escherichia coli. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue determinar las mejores condiciones de crecimiento y expresin de GroDHasa en una cepa de E. coli recombinante; ensayando distintos medios de cultivo suplementados con Gro y distintas condiciones de induccin e incubacin. Materiales y mtodos: se emple la cepa E. coli BL21(DE3) transformada con la construccin plasmdica [pET 221b/EcgldA], que contiene el gen que codifica para la GroDHasa de E. coli. Se evalu el crecimiento de la cepa recombinante en medios suplementados con Gro (LB y A1), cuya base se dise considerando la formulacin del medio LB, el que se emple como control. Los cultivos se realizaron a 30 C y 200 rpm, y fueron inducidos con concentraciones variables de lactosa (0-20 g/L) al alcanzar una DO (600 nm) de 0,6-0,8. Luego de la induccin, se evaluaron diferentes temperaturas (20, 30 y 37 C) y tiempos de cosecha (2, 4, 6 y 19 h). Como controles se realizaron cultivos inducidos con IPTG. Las clulas obtenidas se resuspendieron y sonicaron. La protena recombinante se recuper con alto grado de pureza a partir del sobrenadante libre de restos celulares, por choque trmico (10 min a 60 C). Se cuantificaron las protenas totales obtenidas por el mtodo de Bradford y la enzima expresada mediante densitometra en SDS-PAGE, empleando una curva patrn de albmina srica bovina. La determinacin de la actividad
P76 - 27419 EFICACIA DEL INCULO HIMENIO-ESPORAL DE UNA ESPECIE DE HONGO ECTOMICORRCICO PARA LA MICORRIZACIN CONTROLADA EN VIVERO DE Eucalyptus grandis HILL EX MAIDEN. BORRAS, MARIA MACARENA; ALE, MARIA; BRANDAN, CELIA; GARCIA, DANIEL; ORTIZ, NELIDA; WEHT, SEBASTIAN
FAZ, Universidad Nacional de Tucumn Introduccin: Eucalyptus grandis se asocia a hongos formadores de endo (MA) y ectomicorrizas (ECM). stas son importantes para las plantas ya que mejoran la nutricin y su supervivencia. Antecedentes de ECM en eucaliptos en Tucumn motivaron los siguientes objetivos: identificar los hongos ECM, inocularlos y evaluarlos en vivero. Materiales y mtodos: en marzo-abril de 2009 se recolectaron esporocarpos de bosques con E. grandis de Villa Padre Monti (VPM) y Finca El Manantial (FEM). La identificacin de los hongos se realiz con claves taxonmicas. El inoculo se prepar con esporocarpos desinfectados superficialmente; se licuaron en agua corriente estril logrndose una suspensin de himenios y esporas. Se contaron esporas/mL con cmara de Neubauer; se determin la densidad ptica (D.O.) en espectrofotmetro. Los tratamientos fueron: T0 (testigo agua corriente 10 mL); T1 (inculo puro 10 mL); T2 (inoculo diluido1/ 100,10 mL); T3 (inoculo puro 20 mL); T4 (inoculo diluido1/100, 20 mL); los plantines se mantuvieron en invernadero cinco meses. A los 30 y 60 das, en muestras de raicillas, se determinaron pre-
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enzimtica se realiz por espectroscopa cintica del NADH producido, comprobando la generacin de DHA mediante una tcnica colorimtrica con resorcinol (reaccin de Seliwanoff). Resultados: en todos los medios ensayados, el rendimiento de producto en base a biomasa (Yp/x), se increment conforme aument la concentracin de lactosa agregada como inductor. Por otro lado, un incremento en el tiempo de cosecha o de la temperatura de incubacin, maximizaron el Yp/x. Los mayores Yp/x determinados fueron 0,033, 0,028 y 0,026 g de GroDHasa por g de biomasa, en los cultivos realizados en LB, A1 y LB, respectivamente. La enzima obtenida fue capaz de transformar Gro crudo de biodiesel en DHA. La formulacin de medios de cultivo con Gro permiti intensificar los rendimientos especficos de GroDHasa. La lactosa result ser un sustituto econmico y efectivo del IPTG en la induccin de los cultivos. La adecuada seleccin de la concentracin de inductor, temperatura y tiempo de cosecha, permiti optimizar hasta 50 veces el proceso de produccin de una enzima clave en la bioconversin de Gro a DHA.
P78 - 27522 INFLUENCIA DE LA APLICACIN DE AGROQUMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS DIAZTROFOS EN EL REA MANISERA DE CRDOBA. ANGELINI, JORGE; GHIO, SILVINA; TANIA, TAURIAN; FABRA, ADRIANA
Universidad Nacional de Ro Cuarto Es conocido que la mayor biodiversidad del planeta se encuentra en el suelo. Estos son frgiles, y muchas de las actividades del hombre han producido su degradacin. Sin embargo, en los ltimos aos se ha renovado el inters por el estudio del suelo, reconociendo que los procesos que ocurren en el mismo influencian numerosos aspectos relacionados a la conservacin de la tierra y el agua. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la aplicacin de agroqumicos sobre la comunidad de bacterias fijadoras de nitrgeno presente en un suelo cultivado con man. Los agroqumicos aplicados fueron: herbicida pre-emergente S-metolacloro (1 l/ha) y Diclosulam (20 g/ha), para controlar las malezas emergidas se aplic Glifosato (3,5 l/ha) y para el control de malezas pre y postemergentes se us Imazetapir 1 (l/ha), insecticidas gammacialotrina (30 mL/ha) y lambdacialotrina (25 mL/ha). Las muestras de suelo se tomaron antes y despus de la aplicacin de agroqumicos y a los 12 meses posteriores a la primera aplicacin de fitosanitarios. La abundancia de diaztrofos de vida libre se determin por el nmero de colonias que crecieron en los medios NFB (Dbereiner, 1980) y JNF (Baldani y col., 1992) y cuyo gen nifH pudo ser amplificado por PCR. Para el recuento de rizobios se contaron las colonias que desarrollaron en medio YEMA (Vincent, 1970) y cuyo gen nodC fue detectado por PCR. La actividad nitrogenasa total en suelos con y sin el agregado de agroqumicos se determin midiendo en un cromatgrafo de gases equipado con un detector de ionizacin de llama de hidrgeno, los niveles de etileno acumulado luego de 15 das de incubacin con acetileno (Caton, 2007). El presente trabajo permiti demostrar que el nmero de diaztrofos totales y rizobios presentes en suelos maniseros de la provincia de Crdoba sometidos a prcticas fitosanitarias convencionales, se ve afectado observndose una disminucin del 15% en los diaztrofos y del 30% en los rizobios. Tambin se demostr que dicho efecto no se revierte an luego de transcurridos 12 meses de la primera aplicacin de agroqumicos. La actividad nitrogenasa del suelo sometido a prcticas fitosanitarias convencionales se ve reducida en un 20%, con respecto a la parcela control. Financiado por SECYT-UNRC, CONICET, MinCyt.
La salinidad tanto de los suelos como del agua de riego constituye uno de los principales estreses abiticos limitantes de la produccin, con especial impacto en regiones ridas y semiridas y en aquellas dedicadas a cultivos hortcolas. Los problemas en la germinacin de la semilla son la principal limitacin al establecimiento de las plntulas en condiciones de salinidad, ya que esta afecta tanto el porcentaje como la tasa de germinacin. Las tendencias alimenticias actuales posicionan a los vegetales de hoja, principalmente a la lechuga, como una parte importante de la dieta, siendo esta una especie medianamente sensible a la salinidad. Como estrategia paliativa para incrementar la tolerancia de las plantas al estrs se presenta la utilizacin de bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPB) especialmente las del gnero Azospirillum. El objetivo del presente trabajo fue evaluar los efectos de la inoculacin con A. brasilense Sp245 sobre la energa y el poder germinativo de semillas de lechuga en condiciones de salinidad y determinar la concentracin ptima de bacteria para maximizar el efecto promotor. Semillas de Lactuca sativa cv. Elisa se dividieron en siete lotes a cada uno de los cuales se lo inocul con alguna de las siguientes concentraciones de inculo: 0 (control), 106, 107, 108, 109, 1010 1011 clulas de A. brasilense Sp245. semilla-. Cada lote se subdividi en cuatro grupos de semillas y se sembraron en cajas de Petri sobre papel de germinacin embebido con alguna de las siguientes soluciones: 0, 40, 80 120 mM de NaCl. Las placas se incubaron a 23C y fotoperodo de 8 hs. A los 4 y 7 das se determinaron la energa (EG) y el poder germinativos (PG), respectivamente. La EG de las semillas control disminuy a medida que se increment el nivel de salinidad, siendo esta reduccin estadsticamente significativa en los niveles de 80 y 120 mM de NaCl. En la condicin sin salinidad la inoculacin con exp9 bacterias.semilla- increment la EG en un 34% con respecto a las semillas control. Para el nivel de 40 mM de NaCl la inoculacin con exp8 o con exp11 increment significativamente la EG en un 35%, mientras que la inoculacin con exp9 y exp10 la increment un 46 %. El PG de las semillas de lechuga sin inocular disminuy en los niveles 80 y 120 mM de salinidad en un 43% y un 93% respectivamente. La inoculacin con exp9 y exp10 bacterias.semilla- increment el PG de las semillas de lechuga cuando la salinidad en el medio fue de 80 mM, revirtiendo en un 59 % y en un 57% respectivamente, el efecto negativo causado por el estrs salino sobre el PG. La inoculacin de semillas de L. sativa cv. Elisa con A. brasilense Sp245 increment la EG y el PG especialmente en condiciones de salinidad, siendo la concentracin de exp9.clulas bacterianas.semilla- la que evidenci un mayor efecto promotor. Esto permitira revertir los problemas asociados a la heterogeneidad en la germinacin y el crecimiento inicial observados en condiciones de estrs, favoreciendo el establecimiento de las plntulas y, en consecuencia, el posterior desarrollo del cultivo.
P80 - 27544 COMPETITIVIDAD DE Rhizobium leguminosarum D70 COMO INOCULANTE DE Vicia sativa FRENTE A CEPAS NATIVAS. GUZMAN ARRAUSI, FRANCISCO; PAGLIERO, FABIOLA; CASTAO, CAROLINA; LORDA, GRACIELA
Universidad Nacional de La Pampa La mayora de los suelos de la Regin Semirida Pampeana de la Argentina, presentan limitantes para la produccin agropecuaria, siendo las ms importantes el nitrgeno y el agua. La posibilidad de encontrar formas alternativas de fertilizacin permitira mantener o aumentar la produccin, mientras se conforma una reserva de nutrientes, y se disminuyen riesgos de lixiviacin y emisin de gases de efecto invernadero. Dentro de estas alternativas se incluye la introduccin de leguminosas inoculadas con fijadores de nitrgeno. Con el fin de aprovechar la fijacin biolgica de nitrgeno, la utilizacin de cultivos de cobertura como vicia, durante los meses de invierno, que posteriormente son incorporados y conocidos como abonos verdes, permiten mejorar las propiedades fsicas y qumicas de los suelos para su uso posterior. El objetivo de este trabajo fue determinar la efi-
P79 - 27528 INOCULACIN DE SEMILLAS DE LECHUGA CON Azospirillum brasilense: EVALUACIN DE LA GERMINACIN EN CONDICIONES DE SALINIDAD. FASCIGLIONE, G (BECARIA CONICET); CASANOVAS, EM(1); SUELDO, R(1); BARASSI, CA(1)
(1) FCA, Universidad Nacional de Mar del Plata, Unidad Integrada Balcarce: FCA-EEA INTA
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ciencia, infectividad y competitividad de la cepa de referencia para vicia, Rhizobium leguminosarum D70, frente a cepas nativas en muestras de suelo de la Regin Semirida Pampeana, en distintas condiciones de fertilizacin. Se efectu la inoculacin de la leguminosa Vicia sativa con Rhizobium leguminosarum D70, en macetas con suelos de la zona, en condiciones de invernadero. Se desarroll un tratamiento control no inoculado, otro tratamiento donde se evalu la cepa, inoculada al momento de la siembra, y en cada caso las macetas fueron fertilizadas con fsforo, nitrgeno, azufre nitrgeno ms azufre. Se determin porcentaje de nodulacin, nmero de ndulos, materia seca (65 C), contenido de nitrgeno (mtodo Kjeldahl) y volumen radicular, para cada tratamiento. Los resultados fueron analizados estadsticamente mediante anlisis de la diferencia de medias segn Duncan, con un nivel de significancia del 5% (p<0,05). El anlisis de los resultados mostr diferencias significativas en los tratamientos en los que se inocul frente a los tratamientos sin inocular, en los parmetros: porcentaje de nodulacin, nmero de ndulos, materia seca y contenido de nitrgeno, destacndose los valores de nmero de ndulos, resultado que indicara especialmente que los microorganismos introducidos son ms competitivos que las cepas nativas, en las condiciones estudiadas. Acerca del parmetro volumen radicular, no hubo diferencia entre los tratamientos inoculados y sin inocular. Con respecto a los resultados obtenidos con las diferentes fertilizaciones dentro de cada tratamiento, no se observaron diferencias significativas en los distintos parmetros analizados. Podra suponerse que las dosis de fertilizacin utilizadas fueron insuficientes. Estos ensayos permiten concluir que los microorganismos introducidos de la cepa de R. leguminosarum D70, especfica para una nodulacin efectiva en vicia forrajera, son ms efectivos, eficientes y competitivos que las cepas nativas, tanto en condiciones de escases de nutrientes como en disponibilidad de los mismos, en las dosis ensayadas. Por otra parte, estos resultados deben ser validados en condiciones de campo para la obtencin de abonos verdes altamente portadores de nitrgeno al sistema productivo, considerando que su uso prctico depender tambin de aspectos econmicos, dentro del marco de una agricultura sustentable.
cin de biomasa (DO600) y viabilidad celular (UFC/mL)) y la concentracin residual de los elementos azufre (S) y sodio (Na) en sobrenadantes filtrados de cada cultivo. Para cumplir este objetivo fue utilizado el mtodo de Espectrometra de Emisin Atmica (ICP) en un sistema acoplado a plasma o ICP-AES (SHIMATZU, ICP-9000). Nuestros resultados demuestran que en medio de cultivo qumicamente definido modificado por la adicin de Na2SO4 e inoculado individualmente con las cepas Ps27, Ps30 y Ps9 las concentraciones de los elementos S y Na disminuyen entre un 30 y un 40%, con respecto al medio salinizado sin inocular. Por otro lado, en medio de cultivo modificado por adicin de NaCl, las concentraciones de Na residuales fueron similares a los controles salinizados sin inocular. Esta respuesta diferencial determinara que los microorganismos asociados a la especie vegetal seran capaces de acumular azufre (S) pero no sodio (Na) durante el crecimiento y que parte de la respuesta a salinidad de la planta dependera de la inmovilizacin o captura biolgica de compuestos de alta toxicidad, tal como el anin SO42- lo que podra considerarse un mecanismo alternativo de rizoremediacin.
P82 - 27550 AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE UN MUTANTE SENSIBLE A LA ACIDEZ DE Rhizobium sp. LPU83. MARTINI, MARIA CARLA; SALTO, ILEANA PAULA; SALAS, MARIA EUGENIA; TORRES TEJERIZO, GONZALO ARTURO; GIUSTI, MARIA DE LOS ANGELES; LOZANO, MAURICIO JAVIER; PISTORIO, MARIANO; LAGARES, ANTONIO; DEL PAPA, MARIA FLORENCIA
Instituto de Biotecnologa y Biologa Molecular, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP Introduccin. La simbiosis Medicago sativa (alfalfa)-rizobio es en general muy especfica, siendo el simbionte natural de esta planta Sinorhizobium meliloti. Sin embargo, se han caracterizado otros rizobios capaces de nodular alfalfa; entre ellos la cepa LPU83, aislada en suelos de Argentina, y estrechamente emparentada con la cepa Or191, aislada previamente en Oregn, Estados Unidos. En particular, estos aislamientos resultaron de gran inters debido a su capacidad para nodular un amplio rango de plantas, su ineficiencia para fijar nitrgeno y su tolerancia a la acidez. Esta ltima caracterstica convierte a la cepa LPU83 tipo Or191 en una importante herramienta para el estudio de los mecanismos involucrados en la tolerancia a la acidez en rizobios, dado que la acidez de los suelos es uno de los principales factores que limitan crecimiento de la alfalfa cuando el nitrgeno es aportado por microorganismos fijadores. Objetivo. En este trabajo, describimos la generacin y caracterizacin de un mutante sensible a la acidez obtenido a partir de una mutagnesis generalizada por transposicin en R. sp. LPU83. Materiales y Mtodos. Medios de cultivo: LB (Sambrook et al., 1989), TY (Beringer, 1974) y GS (Del Papa et al., 1999). Las tcnicas moleculares se realizaron segn Sambrook et al., 1989. Resultados. Para identificar genes asociados con la tolerancia a la acidez, se realiz una mutagnesis generalizada sobre la cepa LPU83 con el transposn Tn5. De los mutantes generados, identificamos uno que se vio disminuido en su capacidad de crecer a pH 5.0. Mediante clonado de la insercin, secuenciamiento y comparacin con bases de datos se encontr que dicho mutante contena interrumpido el extremo carboxilo terminal de un marco de lectura abierto (ORF1) situado ro arriba de un gen homlogo a ubiH (codifica para una hidroxilasa interviniente en la biosntesis de ubiquinona). Considerando el posible carcter polar de la mutacin, se construyeron dos mutantes sitio especfico para los genes ORF1 y ubiH. Ambos mutantes desarrollaron en medio mnimo en condiciones cidas una menor velocidad especfica de crecimiento. Tambin presentaron una competitividad para la nodulacin nula frente a la cepa salvaje LPU83, tanto en M. sativa como en P. vulgaris. Adems, en los dos mutantes observamos una tolerancia disminuida a la presencia de ascorbato (condiciones reductoras) y a concentraciones elevadas de Zn2+. Conclusiones. Los resultados que hemos obtenido muestran que el gen ubiH participa en la tolerancia de las cepas tipo R. sp. LPU83 a la acidez y a otros estreses. Asimismo, alteraciones en el mismo gen mostraron dis-
P81 - 27545 INMOBILIZACIN DE SULFATOS POR RIZOBACTERIAS REGULADORAS DE LA HOMEOSTASIS VEGETAL AISLADAS DE Prosopis strombulifera. SGROY, VERONICA (1); CASSAN, FABRICIO (1); FARIAS, FRANCO(2); LUNA, VIRGINIA(1)
(1) Universidad Nacional de Ro Cuarto, (2) AGLAB En nuestro pas, cerca de 34.000.000 ha estn sometidas al exceso de agua y sales minerales. En los suelos salinizados del sur de la provincia de Crdoba y San Luis, existen relaciones equivalentes de sales sdicas como el NaCl y el Na2SO 4, siendo esta ltima particularmente txica incluso para especies vegetales del tipo halofticas como la leguminosa Prosopis strombulifera, que puede tolerar concentraciones cercanas a 700 mM de NaCl pero no potenciales equivalentes de Na2SO 4. Nuestra hiptesis sostiene que la asociacin de la leguminosa P. strombulifera con rizobacterias reguladoras de la homeostasis vegetal o PSHR podra mejorar la respuesta vegetal a estrs salino generado por Na2SO4 y que parte de la esta regulacin dependera de la capacidad bacteriana de inmovilizar selectivamente el anin SO42- durante su crecimiento. Para probar esta hiptesis fueron utilizados 3 aislamientos endofticos de P. strombulifera obtenidos previamente en condiciones de salinidad extrema y denominados Brevibacterium halotolerans cepa Ps9, Achromobacter xyloxosidans cepa Ps27 y Pseudomonas putida cepa Ps30. Los microorganismos fueron reproducidos en un medio qumicamente definido, deficiente en fuentes de sodio o azufre (MM) y modificado por la adicin de NaCl (400 mM) o Na2SO4 (303.3 mM) en concentracin suficiente para obtener potenciales osmticos de -1.53 MPa. Adicionalmente, fueron generados tratamientos control del medio sin salinizar y del medio modificado por la adicin NaCl o Na2SO 4 pero sin inocular. Los cultivos bacterianos fueron incubados por 72 horas a 30 C y 120 rpm y posteriormente se colectaron submuestras con el objeto de evaluar su crecimiento (como produc-
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minuir muy fuertemente la competitividad de los rizobios para la nodulacin de M. sativa y P. vulgaris.
P83 - 27561 EFECTO DE LA INOCULACIN DE BACTERIAS ASIMBIOTICAS FIJADORAS DE NITRGENO EN EL CRECIMIENTO DEL ROBLE (Tabebuia rosea) EN FASE DE VIVERO EN SUELOS DEL VALLE DEL CESAR (COLOMBIA). ZAMBRANO, CORINA; SANCHEZ, LIGIA(1); OBANDO, MELISSA(2); BONILLA, RUTH(2)
(1) Universidad de La Sabana, Bogot, Colombia, (2) CORPOICA, Colombia Las bacterias fijadoras de nitrgeno presentes en diferentes cultivos pueden estimular el crecimiento de las plantas a travs de diversos mecanismos, tales como, la sntesis de sustancias reguladoras del crecimiento vegetal, la fijacin de nitrgeno y la solubilizacin de nutrientes. Se realiz el aislamiento y caracterizacin de bacterias de los gneros Azotobacter sp. y Azospirillum sp. asociadas naturalmente con races de rboles de roble (Tabebuia rosea) con el fin de evaluar su eficiencia como principio activo de biofertilizantes que complementen la aplicacin de fertilizantes nitrogenados de sntesis en fase de vivero. Las muestras de suelo fueron tomadas en Codazzi (Cesar-Colombia) y transportadas al laboratorio de microbiologa de suelos del Centro de Biotecnologa y Bioindustria de Corpoica para su anlisis. Para el aislamiento de bacterias diazotrficas se emplearon medios semiselectivos segn los mtodos descritos por Novo (1993) y Dbereiner et al. (1995) en suelo rizosfrico, races y hojas. Una vez obtenidos los aislamientos presuntivos de los dos gneros de inters en el estudio, se seleccionaron las cepas con potencial biofertilizante por su capacidad de reduccin de acetileno (Valero, 2002) y la produccin de cido indolactico (Rodrgues et al., 2008). Los experimentos de invernadero se llevaron a cabo en el Estacin Experimental Motilonia en el municipio de Codazzi (Cesar-Colombia). En los tratamientos evaluados se incluy un tratamiento testigo (roble sin inocular y sin fertilizar) y un control (roble sin inocular y fertilizado con nitrgeno qumico), dos cepas presuntivas de Azotobacter sp. y dos de Azospirillum sp., aplicando un diseo de bloques completamente al azar con 6 tratamientos y 15 repeticiones por tratamiento. Las plntulas de todos los tratamientos fueron colocadas en imbibicin en los inoculantes durante media hora. Se incluy un tratamiento testigo (roble sin inocular y sin fertilizar) y un control (roble sin inocular y fertilizado con nitrgeno qumico). El muestreo se realiz de tipo destructivo en 4 plantas tomadas al azar por cada tratamiento, luego de haber transcurrido 30, 60 y 90 das despus de la inoculacin; las variables evaluadas fueron las siguientes: altura de la planta (cm), peso fresco de la planta (g), peso fresco de las races (g), longitud de raz (cm), dimetro de la base del tallo (cm) y nmero de rebrotes. Fueron aisladas 8 cepas de las cuales se seleccionaron 4 (AZR1, AZR2, ACR1 y ACR4) por su capacidad de produccin de cido indolactico (10,2, 0,00, 7,86 y 4,12 g/mL) y reduccin de acetileno (3,63, 4,08, 18,64 y 26,84 nmol C2H4.hr-1/mL) y fueron evaluadas en la prueba de invernadero. Las diferencias obtenidas entre tratamientos no fueron significativas (P>0,05), las plntulas inoculadas con la cepa AZR2 presentaron una tendencia de incremento en la altura y peso fresco de la planta y dimetro de la base del tallo. Los resultados permiten inferir que las cepas del gnero Azospirillum sp. tienen un potencial biofertilizante sobre plantas de roble (Tabebuia rosea) en la fase de vivero.
efectivizan a travs del conocimiento cientfico alcanzado en la materia. Las pasturas en base a leguminosas que es necesario establecer, resultan fuertemente limitados por dos factores, la disponibilidad hdrica y la fertilidad natural de los suelos. En el primer caso, tcnicas de barbechos, rotaciones y prcticas culturales apropiadas harn factible un mejor aprovechamiento del agua disponible. En el segundo, la aplicacin de fertilizantes parece la solucin de mayor viabilidad, pero stos pueden ser contaminantes y adems su alto costo, pueden ser una limitante a la hora de decidir sobre la conveniencia de su utilizacin, por lo que la fertilizacin biolgica es una alternativa superadora desde lo ambiental y de notable menor costo. La regin semirida pampeana, ha tenido un ciclo rico en lo que hace al aporte de precipitacin pluvial a lo que ha sucedido, inmediatamente despus, un perodo de escasas lluvias. Es as que muchos productores, tienen en sus establecimientos necesidad de implantar cultivos de cosecha o pasturas en rea que estuvieron anegadas durante el tiempo necesario para la salinizacin de sus tierras, otrora muy aptas para agricultura o ganadera. El objetivo del presente trabajo es evaluar microorganismos PGPR (promotores de crecimiento) con alto potencial para la produccin de inoculantes especficos para las mismas. Para su cumplimiento se emplearon tcnicas microbiolgicas, analticas, bioqumicas, biotecnolgicas y agronmicas. Se seleccionaron 4 regiones, las que se muestrearon en otoo y primavera, se realizaron en ambos momentos los anlisis de los suelos y con diluciones de los mismos se: a) aislaron bacterias solubilizadoras de fsforo por siembra en medio selectivo; a los aislamientos obtenidos se le realizaron ensayos de caracterizacin, seguimiento de la variacin de pH y cuantificacin de la solubilizacin de fsforo en medio lquido por la tcnica de Fiske y Subbarow modificada, se seleccionaron seis aislamientos por su mayor capacidad solubilizadora, los valores de ppm de fsforo disponible en algunos casos llegaron a superar las 400 ppm a las 72 horas de crecimiento de los cultivos y b) inocularon plantas de alfalfa y planta de soja, colocadas en una cmara de cultivo con control de luz y temperatura. Al cabo de un mes se levant el ensayo, no se encontraron ndulos en las plantas de soja pero si se recolectaron 450 ndulos de las plantas de alfalfa, se aislaron los rizobios, se purificaron y se caracterizaron mediante su aspecto morfolgico, coloracin de Gram, electroforesis de isoenzimas e IER realizado a 45 aislamientos que mostraron una semejanza del 70% por el mtodo UPGMA. Se puede comprobar que hay rizobios nativos con una eficiencia superior a la de las cepas comerciales, por lo que con los dos aislamientos ms promisorios de cada regin se formularon inoculantes slidos combinados (rizobios y bacterias solubilizadoras de fsforo), que actualmente estn siendo evaluados.
P85 - 27570 ALTERNATIVAS TECNOLGICAS PARA OPTIMIZAR LA RESPUESTA A LA INOCULACIN EN SOJA INFLUENCIA DEL USO DE BIOPROTECTORES Y MTODO DE INOCULACIN. MONTELEONE, MARIA EMILIA(1); RUIZ, DANTE(1); MACARONI, LUCAS(1)
(1) Departamento de Investigacin y Desarrollo Nitrasoil Argentina S.A. Introduccin: la inoculacin es la prctica mediante la cual se aporta un elevado nmero de bacterias especficas, efectivas e infectivas, con el objetivo de que stas se asocien exitosamente con la raz y as lograr una rpida y adecuada nodulacin. Cuando la inoculacin se hace sobre las semillas, que es el mtodo ms utilizado, las bacterias se ven severamente afectadas por la desecacin y la temperatura. Desde hace ya algunos aos, se han empezado a implementar diferentes alternativas para aportar un alto nmero de bacterias y disminuir dichos efectos adversos. Dos de estas prcticas son la incorporacin de bioprotectores a la tecnologa usual de aplicacin del inoculante a la semilla y la inoculacin al surco de siembra. Objetivos: evaluar la respuesta a la inoculacin, comparando aplicacin del inoculante a la semilla con y sin bioprotector vs inoculacin al surco de siembra. Materiales y Mtodos: el ensayo se implant en la localidad de 9 de Julio, el da 10 de noviembre de 2009. El cultivo antecesor era soja de primera y la variedad sembrada Don Mario 3700 en hileras espa-
P84 - 27565 EVALUACIN DE AISLAMIENTOS CON EFECTO PROMOTOR DE CRECIMIENTO VEGETAL Y ALTO POTENCIAL BIOTECNOLGICO, DE REGIONES DE LA PROVINCIA DE LA PAMPA. MARTIN, PEDRO; GARCIA, PATRICIA; AZCARATE, SILVANA; FILIPPI, MAURO; SCARONE, JORGE; RONCHI, ANA LIA
Universidad Nacional de La Pampa El agotamiento de los suelos es una manifestacin de complejos desequilibrios funcionales, slo superable con la utilizacin de mecanismos de anlisis y propuestas de accin que se
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ciadas a 35 cm. Mtodos de inoculacin empleados: inoculacin sobre semillas dosis simple y doble (150 y 300 mL/50 Kg de semillas de soja, respectivamente) y chorreado en el surco de siembra (600, 750 y 900 mL de inoculante + 40 l agua/Ha). La dosis de bioprotector fue de 50 mL/50 Kg de semillas de soja. El diseo del ensayo fue en bloques completos al azar con cuatro repeticiones. Inoculantes empleados: Nitrasoil-L x 7,5 lt (Bradyrhizobium japonicum) concentracin 9 x 10E+9 riz/mL para la inoculacin al surco y Nitrasoil-L x 2,4 lt con turba en suspensin (Bradyrhizobium japonicum), concentracin 5,3 x 10E+9 riz/mL para la inoculacin a la semilla. Se evalu nodulacin en estado R5.3 y rendimiento de grano al finalizar el ciclo del cultivo. A los resultados se les realiz anlisis de varianza (ANOVA). Resultados: Los datos de rendimiento se detallan en la siguiente tabla:
Tratamientos Testigo I. Semilla (simple) I. Semilla (simple) + Biopr I. Semilla (doble) I. Surco (600 mL) I. Surco (750 mL) I. Surco (900 mL) Rendimiento 4814 5383 5652 5140 4889 4840 5248 c ab a abc bc bc abc Diferencia sobre testigo (Kg/Ha) 569 838 326 75 26 434
necromasa, aumentando la materia orgnica del suelo, contribuyendo a la fertilidad y a la estructura del suelo. La biofertilizacin con A. brasilense en los hbridos de maz MT y MH no influy en la materia seca de races y tallos con hojas en el estadio V2 ni en los componentes del rendimiento. MH inoculado con A. brasilense cepa Cd DD presenta mayor tasa de eficiencia en la particin de materia seca a los granos; MT inoculado con A. brasilense cepa Cd DD presenta mayor acumulacin de materia seca total promedio en planta y menores ndices de cosecha logrando una menor extraccin desde la materia orgnica del suelo.
P87 - 27639 AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE LIPASAS A PARTIR DE DIFERENTES SUSTRATOS. MAZZUCOTELLI, CINTIA; PONCE, ALEJANDRA; ROURA, SARA; MOREIRA, MARIA DEL R
CONICET-Grupo de Investigacin en Ingenieria en Alimentos, Facultad de Ingeniera, Universidad Nacional de Mar del Plata Introduccin: en los ltimos aos ha habido un creciente inters en el estudio de microorganismos productores de lipasas, que podran ser potencialmente aplicados para la reconversin de residuos industriales slidos e insolubles, dentro de las llamadas tecnologas limpias que haran ms sustentable la actividad industrial. Algunos bacterias, hongos y levaduras son capaces de secretar lipasas durante su crecimiento en diferentes sustratos. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue realizar un screening de microorganismos productores de lipasas, realizando su aislamiento a partir de diferentes sustratos alimenticios ricos en lpidos (man, girasol, almendras, emulsin agua/aceite). Materiales y mtodos: se realiz una optimizacin respecto de los medios de cultivo ms adecuados, donde los microorganismos evidenciaran su patrn lipoltico luego de incubar a 28-30C durante 7 das. Se utiliz el agar con Tween 80 con y sin agregado de CaCl2, el agar con aceite de oliva y la combinacin Tween/oliva en distintas proporciones. La presencia de actividad lipsica fue determinada en un medio mnimo de crecimiento en presencia de rodamina que permite evidenciar lipasa positiva frente a la produccin de fluorescencia a la luz UV a 350 nm. Resultados y conclusin: los medios de cultivos ensayados permitieron aislar 35 cepas presuntivas las cuales fueron repicadas en agar con rodamina en diferentes proporciones, verificando la produccin de colonias anaranjadas con fluorescencia a consecuencia de la actividad lipsica. Del screening realizado encontramos que slo 5 cepas mostraron actividad lipsica. Estas cepas presentaron una actividad enzimtica significativa que fue cuantificada a travs del mtodo de titulacin, usando tributirina como sustrato, titulando con NaOH los cidos grasos libres. Este trabajo es un estudio preliminar tendiente a transformar los residuos agroindustriales en productos de mayor valor agregado. Este trabajo es un estudio preliminar tendiente a transformar los residuos agroindustriales en productos de mayor valor agregado.
Todos los tratamientos inoculados, en valores absolutos, rindieron ms que el testigo sin inocular. Dentro de los tratamientos inoculados se destacaron los que fueron aplicados a la semilla, y el tratamiento que incluy bioprotector (con dosis simple de inoculante) fue el que mayor rendimiento present (+838 Kg respecto al testigo), con diferencias estadsticamente significativas respecto al testigo sin inocular.
P86 - 27572 BIOFERTILIZACIN CON Azospirillum brasilense EN HBRIDOS DE MAZ (Zea mays) EN SANTIAGO DEL ESTERO. ALBANESI, ADA; ANRIQUEZ, ANALIA; SILBERMAN, JUAN; GARAY, FERNANDO
FAYA, Universidad Nacional de Santiago del Estero El objetivo del trabajo fue determinar el efecto de la inoculacin con Azospirillum brasilense cepas AZ39 y Cd en la materia seca de raz y parte area del estadio V2 y en los componentes del rendimiento de dos hbridos de maz (Zea mays): Pioneer 30T17 (MT) y 30F35H (MH) en el rea de riego del Ro Dulce, Santiago del Estero. Dos ensayos se realizaron en el campo de la FAyAUNSE, (Santiago del Estero), en bloques al azar (n=4), durante la campaa 2008-2009, en maz MT y MH; en un suelo Haplustol ntico. Los tratamientos fueron: T. Sin nada, F. Fertilizado con 200 kg ha-1 de N urea; NP Fertilizado con 200 kg ha-1 de N NPK, Az39 DS. Inoculado con A. brasilense (Ab) cepa Az39 en dosis simple (1 L ha-1); Cd DS. Inoculado con Ab cepa Cd en dosis simple; Az39 DD. Inoculado con Ab cepa Az39 en dosis doble (2 L ha-1); Cd DD. Inoculado con Ab cepa Cd en dosis doble. Los ttulos de los inoculantes fueron: 2x10 8 UFC/mL y 3,5x109 UFC/mL de las cepas Az 39 y Cd, respectivamente. Se realiz anlisis de la variancia y test de diferencia de medias (Duncan, a = 0,05) de las variables en V2 y de los componentes del rendimiento. En el estado V2, la materia seca de races y tallos con hojas en ambos ensayos no presentaron diferencias significativas, an cuando se registraron aumentos en la MS de tallos en los tratamientos inoculados con dosis doble. El rendimiento medio (kg grano ha-1) y el nmero de semillas m-2 en MH y MT, no evidenciaron diferencias estadsticas (p=0,1 y p=0,18) entre tratamientos. An cuando los tratamientos fertilizados superaron a los inoculados, Cd DD en MH y Cd DS en MT registraron el mayor valor de los tratamientos inoculados en ambas variables, evidenciando que las variaciones en el nmero de granos estn estrechamente asociadas a variaciones en el rendimiento. La MS de races (datos usados para calcular IC) aument en los tratamientos Az39 DD y Cd DD en maz MH y Cd DS en maz MT. Se destaca la mayor eficiencia en la particin de materia seca a los granos de Cd DD en maz MH con relacin a T, reflejndose en los rendimientos finales. La MS total en Cd DD de MT fue significativamente mayor que T, con IC c/raz = 0,43, contribuyendo con un 57% de materia seca que se recicl en el sistema como
P88 - 27643 LA HETEROGENEIDAD ESPACIAL DE LA FISIOLOGA DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS ASOCIADAS AL CULTIVO DE TRIGO REDUCE LA RESPUESTA A LA INOCULACIN CON Azospirillum brasilense. DI SALVO, L P(1); PERDOMENICO, P(1); GARCIA DE SALAMONE, I E(1)
(1) Ctedra de Microbiologa Agrcola y Ambiental, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires La aplicacin de inoculantes con PGPR en cultivos es una prctica cada vez ms habitual. Sin embargo, el efecto del agregado de inoculantes sobre las comunidades microbianas rizosfricas (CMR) no ha sido bien estudiado. Los objetivos de este trabajo fueron caracterizar, en condiciones de campo, la diversidad funcional microbiana de la rizosfera de plantas de trigo inoculadas con Azospirillum brasilense, as como tambin evaluar los parmetros determinantes del rendimiento. Para ello, se realiz un ensayo de trigo (Klein Castor) en la localidad de Villa Moll (Navarro, Buenos Aires) con un diseo en bloques completamente aleatorizados con cuatro repeticiones, cuya superficie total fue de
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2600 m2. Los factores evaluados fueron dos: inoculacin (I0, I1, I2 e I3) y fertilizacin nitrogenada (0 y 30 kg N/ha). Los muestreos de rizosfera se realizaron en encaazn y llenado de grano, mientras que la biomasa area se determin en encaazn, llenado de grano y madurez fisiolgica, donde se estim el rendimiento del cultivo. Adems, se estudi la diversidad funcional de las CMR mediante la obtencin de perfiles de uso de fuentes carbonadas (CLPP). Los resultados de biomasa y rendimiento mostraron que el efecto de la inoculacin no fue estadsticamente significativo y fue variable segn el inoculante aplicado y el momento de muestreo. En encaazn, los tratamientos inoculados en conjunto presentaron mayor biomasa area con respecto al testigo. En madurez fisiolgica, la inoculacin con I2 sin fertilizacin increment 7% la biomasa area y 9% el rendimiento respecto al testigo no fertilizado. La fertilizacin, por su parte, gener un aumento estadsticamente significativo en la produccin de biomasa area, solamente en encaazn. Para este muestreo, los tratamientos fertilizados presentaron un 13% ms de biomasa area que los tratamientos sin fertilizar. En etapas posteriores, las diferencias encontradas no fueron significativas. Los CLPP de las CMR no difirieron significativamente entre tratamientos, para ninguno de los muestreos. Sin embargo, tanto para encaazn como para llenado de grano, la fisiologa de las CMR present diferencias entre bloques, poniendo de manifiesto la heterogeneidad espacial presente en el sitio del ensayo. Se sabe que el manejo diferencial de insumos segn la productividad de los ambientes a nivel lote favorece la sustentabilidad de los agroecosistemas. Los resultados encontrados en este trabajo demuestran que los CLPP de las CMR podran llegar a ser utilizados como indicadores de la heterogeneidad ambiental a nivel de lote. Los resultados encontrados en este trabajo demuestran que las variables ambientales en el sitio del ensayo, tales como disponibilidad de nutrientes y variacin en la fisiologa de las comunidades microbianas nativas presentes en distintos ambientes, predominaron por sobre los factores evaluados en este estudio y condicionaron la respuesta a la inoculacin.
epfitos, a excepcin de los cocos Gram (+) que no fueron aislados en asociacin endfita. El 10,8% de los morfotipos obtenidos no presentaron ninguna de las dos actividades PGPR evaluadas. El 37,8% del total de los aislamientos fue capaz de solubilizar fosfato, en su mayora epfitos y, el 62,1% fue capaz de fijar nitrgeno en medios libres de nitrgeno. A partir de las caractersticas fenotpicas y fisiolgicas evaluadas se lograron identificar los gneros Pseudomonas, Serratia, Aeromonas, Enterobacter, Bacillus, Corynebacterium, Lactobacillus y Staphylococus. En este trabajo, asociados a la rizosfera de Brassica napus, se describen por primera vez los gneros bacterianos Aeromonas, Corynebacterium, Lactobacillus y Serratia. En base a los resultados obtenidos se concluye que existe una gran diversidad de bacterias asociadas a Brassica napus que poseen un gran potencial en cuanto a promocin del crecimiento vegetal. Esto motiva a continuar los estudios con el objetivo de encontrar nuevas alternativas para mejorar la produccin y el desarrollo del cultivo de colza. Financiado por: SECyT-UNRC, CONICET, MinCyT
P90 - 27666 EFECTO DEL ESTRS SALINO EN RIZOBIOS SIMBIONTES DE lotus tenuis. SANNAZZARO, ANALIA(1); CASTAGNO, LUIS N(1); PIECKENSTAIN, FERNANDO(1); CASSAN, FABRICIO(2); SANJUAN, JUAN(3); RUIZ, OSCAR(1); ESTRELLA, MARIA J(1,4)
1-IIB-INTECH. UNSAM. Chascoms, Argentina, 2-Laboratorio de Fisiologa Vegetal. y de la Interaccin Planta-Microorganismo. UNRC. Crdoba, Argentina, 3-Dpto. de Microbiologa del Suelo y Sistemas. Simbiticos, EEZ, CSIC, Espaa, 4-Comisin de Investigaciones Cientificas, (CIC). Introduccin: La Pampa Deprimida del Salado es la zona de cra vacuna ms importante de la Repblica Argentina, pero sus suelos son de baja fertilidad y heterogneos en trminos de salinidad y pH, lo que afecta la adaptacin y el desarrollo productivo de las especies vegetales utilizadas como forraje, como el trbol o la alfalfa. Lotus tenuis es una leguminosa extica adaptada a estas condiciones, y por ello es el principal recurso forrajero para la produccin de pasturas destinadas a la ganadera en esta regin. La optimizacin de la simbiosis mutualista entre Lotus y rizobios nativos es una estrategia que permite incrementar la productividad y calidad de esta leguminosa. Es por ello que el objetivo del presente trabajo se centra en el estudio de la eficiencia simbitica y la tolerancia al estrs salino, en rizobios de L. tenuis aislados de suelos de esta regin. Mtodos: Se utiliz como material de estudio una coleccin de aislamientos obtenidos de plantas de L. tenuis recolectadas de distintos tipos de suelos de la Pampa Deprimida del Salado (media lomas, bajos salino-alcalinos, bajos-dulces). Se estudi la tolerancia a salinidad en vida libre (crecimiento de cada aislamiento en medio de cultivo agarizado suplementado con NaCl 0, 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500 mM). La eficiencia simbitica se evalu en plantas de L. tenuis cv Esmeralda, en condiciones control y de estrs salino por aclimatacin a 150mM NaCl, mediante la determinacin de peso seco de parte area y peso seco y nmero de ndulos. Resultados: aproximadamente la mitad de los aislamientos evaluados son capaces de tolerar hasta 200mM NaCl y un 25% toleran hasta 500mM NaCl. Tambin se encontraron algunos aislamientos provenientes de bajos salinos capaces de crecer hasta 1M NaCl. En los tres tipos de suelos se aislaron rizobios con mayor o igual eficiencia simbitica que la cepa tipo para L. tenuis (M. loti NZP2213, procedente de Nueva Zelanda). Algunos de estos aislamientos fueron seleccionados para su posterior evaluacin en condiciones de estrs salino. Se observ que la salinidad no disminuy significativamente la eficiencia simbitica de la mayora de las cepas provenientes de bajos salinos alcalinos. Por otra parte, el estrs salino afect el comportamiento simbitico de rizobios provenientes de la media loma y bajo dulce. A pesar de ello, se detectaron aislamientos que mostraron una eficiencia simbitica superior a la cepa tipo, an en condiciones de salinidad. No se pudo establecer ninguna correlacin entre las cepas ms eficientes bajo estrs salino y la tolerancia de las mismas a altas concentraciones de NaCl en condiciones de vida libre. Los resultados sugieren que la adaptacin rizobiana a ambientes con altos
P89 - 27650 DIVERSIDAD DE BACTERIAS ASOCIADAS AL CULTIVO DE COLZA (brassica napus). VALETTI, LUCIO(1); IRIARTE, LILIANA(2); FABRA, ADRIANA(1)
(1) Universidad Nacional Ro Carto; (2) INTA Introduccin: Numerosas especies de bacterias del suelo pueden crecer alrededor, o en los tejidos de las plantas, estimulando su crecimiento mediante una gran variedad de mecanismos. Dichos microorganismos son conocidos colectivamente como Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPRs). El estudio de dichas bacterias es importante no slo para el entendimiento de su rol ecolgico en su interaccin con plantas sino tambin para la aplicacin biotecnolgica de las mismas en reas tales como la promocin del crecimiento vegetal. Objetivo: Aislar bacterias de la rizsfera de plantas de colza identificarlas y evaluar su capacidad de fijar nitrgeno y solubilizar fosfatos. Metodologa: Se recolectaron plantas de campos ubicados en Ro cuarto (Crdoba) y Tres arroyos (Bs As). Para el aislamiento de epifitos las races se lavaron con solucin salina bufferada (PBS). Diluciones de esta solucin fueron sembradas en placas conteniendo medio TSA al 10% suplementado con cicloheximida. Para el aislamiento de endfitos, se esterilizaron las races superficialmente con hipoclorito de calcio al 3%. Luego fueron cortadas y homogenei-zadas en 1mL de agua estril por cada gramo de tejido fresco. Diluciones de esta solucin fueron sembradas en las mismas condiciones descriptas anteriormente. Se determinaron las caractersticas morfolgicas y tintoriales de las bacterias provenientes de colonias morfolgicamente diferentes y se identificaron a partir de pruebas bioqumicas segn el manual Bergey. En cada aislamiento se evalo la capacidad de solubilizar fosfato en los medios descriptos por Frioni (1999) y fijacin de nitrgeno atmosfrico en los medios semislido libre de nitrgeno JNFb, NFb y JMV. Resultados: Se aislaron 40 morfotipos: 28,2% bacilos esporulados Gram (+); 35,9% bacilos no esporulados Gram (+); 5,1% cocos Gram (+) y 30,8% bacilos Gram (-). La proporcin de morfotipos obtenidos fue similar tanto para aislamientos endfitos como para
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contenidos de sales no necesariamente se traduce en un mejor comportamiento simbitico. Por lo tanto la evaluacin de eficiencia simbitica sera ms conveniente que la tolerancia a la salinidad en estado de vida libre a la hora de elegir un criterio para seleccionar cepas que vayan a ser utilizadas como inoculantes de L. tenuis en suelos salinos
P91 - 27673 RENDIMIENTO DE LA FERMENTACIN MALOLCTICA EN VINOS CABERNET SAUVIGNON. ROMERO, JOSE; CARRILES, PEDRO (1); LOPEZ, LUIS (2); NOVOA, MARIA JOSE(2)
(1) LALLEMAND Inc. Chile, (2) Universidad de Chile La fermentacin malolctica (FML), transformacin del cido L- mlico en cido L- lctico por medio de bacterias malolcticas logra la desacidificacin, estabilidad biolgica y modificaciones en las caractersticas sensoriales del vino. Para evaluar el rendimiento del proceso y las caractersticas de los vinos con FML se realiz sta en vinos elaborados con mostos Cabernet sauvignon empleando cepas chilenas de Saccharomyces cerevisiae UCHM3 y UCHM4 autctonas del valle del Maule. Para ello se inocul Oenoccocus oeni (1 g/Hl) al comienzo y al finalizar la fermentacin alcohlica (FA) y se evalo determinando la concentracin de cido mlico en los mostos y en los vinos, empleando como control vinos sin FML. Los vinos se elaboraron realizando microvinificaciones en 800 mL de mosto (23Brix) con 0,1 g/l de fosfato diamnico y 20 mg/L de metabisulfito de potasio, se ferment a sequedad a 20C controlando la produccin de CO2 y consumo de azcar. En los vinos obtenidos con ambas cepas de levaduras se determin, grado alcohlico, azcar residual, SO2 total y SO2 libre, acidez total y acidez voltil. En los vinos con FML, el grado alcohlico, azcar residual, SO2 libre y total se mantuvieron sin variacin, determinndose una disminucin en la acidez total de 5,4 a 4,4 g/L cido tartrico para UCHM3 y de 4,8 a 4,3 g/L cido tartrico para UCHM4 y un aumento en la acidez voltil de 0,3 a 0,7 g/L cido actico para UCHM3 y de 0,3 a 0,8 g/L cido actico para UCHM4. En los vinos obtenidos con ambas cepas, la concentracin de cido mlico inicial 2,5 g/l, disminuy en 98,8% al realizar la FML en forma simultnea a la FA y en un 99,9% al realizarla al trmino de la FA. De acuerdo a estos valores el factor de rendimiento para la conversin de cido mlico en cido lctico (Yp/s) result ser 0,70. Los vinos con FML se evaluaron sensorialmente para identificar si hubo diferencias significativas respecto a un vino control sin FML, los resultados mostraron que no existen diferencias significativas para los descriptores: color, astringencia y aromas mantequilla, miel y nuez. Se detectaron diferencias significativas (p<0,05) para la densidad o fluidez, acidez y aromas frutales y florales, siendo stas de carcter positivo. Los vinos con FML resultaron ms fluidos, con aromas frutales y florales disminuidos y menos cidos al paladar. Los resultados obtenidos sealaran que la FML es aplicable en la produccin de vinos tintos Cabernet sauvignon, reduciendo la concentracin de cido mlico y otorgando as caractersticas sensoriales mejoradas en boca.
ratorio de Microbiologa de Suelos del Corpoica (CI Tibaitat) para su procesamiento (esterilizacin con Alcohol-Hipoclorito de Sodio al 3%, y siembra en medio de cultivo YMA con Rojo Congo); para la determinacin de la fijacin de nitrgeno, las races noduladas fueron llevadas a recipientes cerrados hermticamente sustituyendo el 10% de la atmosfera por acetileno; despus de una hora se procedi a medir la reduccin del acetileno a etileno por cromatografa de gases. Para la determinacin de compuestos indlicos las cepas fueron crecidas en medio Luria-Bertani (LB) durante 24h, y luego fueron cultivadas en medio K-lactato suplementado con triptfano durante 72h a 150rpm. Posteriormente se tom una alcuota de 1.2mL, se centrifug a 10000rpm y el sobrenadante de cada tubo se llev a reaccin con 1mL del reactivo de Salkowsky durante 30min. Cumplido el tiempo de reaccin se ley la absorbancia de cada muestra en espectrofotmetro (540nm). Se obtuvieron diecisis aislamientos y se evaluaron teniendo en cuenta los criterios de: capacidad de nodulacin en la planta husped, fijacin de nitrgeno, y produccin de compuestos indlicos (AIA). El medio de cultivo YMA con Azul de Bromotimol fue alcalinizado por las cepas: RM01, RM04, RM05, RCC01, RCC02, RCC03, RCC05 Y RU01, y las cepas RM02, RM03, RM06, RS01, RS02, RS03, RS04 y RCC04 presentaron acidificacin en el mismo medio. El anlisis macroscpico determin la morfologa tpica de rizobios: mucosas de bordes lisos con poca o no absorcin del indicador. La caracterizacin microscpica demostr bacilos Gram negativos. Los aislamientos obtenidos fueron eficientes en ARA, sin embargo, la cepa RS01, present el valor mayor (1154,40 nmolC2H4h-1mL-1) seguida por RCC02 con un valor de 1127 nmolC2H4h-1mL-1. En cuanto la produccin de ndoles los aislamientos RU01 y RM02 presentaron los valores ms altos (22,19 y 20,13ug de indoles/mL respectivamente) con respecto al testigo C50 (10,76ug de indoles/mL). De acuerdo con las pruebas de nodulacin realizadas, no se encontraron diferencias significativas (P=0.05); sin embargo los aislamientos: RM02 presentaron la mejor respuesta en las variables: peso fresco de la parte area (1,79g), peso seco de la parte area (0,649g) y longitud de la parte area (17,87cm); RCC01 en el porcentaje de materia seca (39, 57%) y longitud de la raz (24,67cm); con respecto a las cepas de referencia utilizadas (C50 y UFLA 1) y el testigo absoluto y qumico.
P93 - 27740 CARACTERIZACIN FILOGENTICA DE AISLAMIENTOS DE CRECIMIENTO LENTO NODULANTES DE MAN NATIVOS DE LA PROVINCIA DE CRDOBA. MUOZ, VANINA; IBAEZ, FERNANDO; FABRA, ADRIANA
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Crdoba Antecedentes: Arachis hypogaea L. (man) es una leguminosa de gran importancia agronmica y econmica. Argentina es uno de los principales productores de man en el mundo, y el 92% de su produccin se concentra en la provincia de Crdoba. Histricamente, se ha considerado que esta leguminosa es capaz de establecer una asociacin simbitica fijadora de nitrgeno con rizobios de crecimiento lento del gnero Bradyrhizobium. Objetivo: Realizar la caracterizacin filogentica de aislamientos de crecimiento lento nodulantes de man nativos de Crdoba, en base al estudio de genes y regiones del genoma bsico y accesorio. Materiales y mtodos: Se utilizaron los aislamientos nativos PI237 y CH81, obtenidos a partir de ndulos de plantas cultivadas en la provincia de Crdoba. Se realiz la amplificacin y posterior secuenciacin del gen dnaK, la regin espaciadora 16S-23S (ITS) y el gen simbitico nodA utilizando el servicio de secuenciacin de la Universit Laval (Canad). El anlisis filogentico y molecular de las secuencias fue realizado con los programas BioEdit, MEGA 4 y PhyML. El modelo de sustitucin ms adecuado fue seleccionado con la herramienta jModeltest 0.1.1. Resultados: El anlisis filogentico del gen dnaK permiti concluir que los aislamientos nativos pertenecen al gnero Bradyrhizobium. Sin embargo, la utilizacin de este gen como nica herramienta ha demostrado ser insuficiente para resolver las relaciones filogenticas dentro del gnero. Por el contrario, el anlisis de la regin ITS permiti discriminar los 10 linajes descriptos para el gnero Bradyrhizobium. Adems, este anlisis indic que los aisla-
P92 - 27701 AISLAMIENTO, SELECCIN Y CARACTERIZACIN FENOTPICA DE RIZOBIOS NATIVOS ASOCIADOS A Acacia decurrens EN CUATRO MUNICIPIOS DE CUNDINAMARCA (COLOMBIA). BONILLA, RUTH; CRIOLLO, PAOLA; GARRIDO, MARIA FERNANDA
CORPOICA La acacia negra (Acacia decurrens) es una de las especies arbreas que se encuentra en los sistemas silvopastoriles del altiplano cundiboyacence y ha sido empleada como suplemento alimenticio para el ganado; por esta razn, la inoculacin con rizobios nativos en los sistemas que incluyan leguminosas, se convierte en una herramienta para la recuperacin de suelos. El objetivo del presente estudio fue: aislar, seleccionar y caracterizar cepas nativas de rizobios asociadas a A, decurrens, en los municipios de Mosquera, Susa, Cucunuba y Ubat (Cundinamarca). Se colectaron ndulos y posteriormente se llevaron al Labo-
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mientos nativos CH81 y PI237 estn filogenticamente relacionados con las especies B. yuanmingense y B. iriomotense, respectivamente. El anlisis filogentico correspondiente al gen nodA, permiti distinguir los siete Clados previamente descriptos para bradirizobios y designados I-VII. De manera interesante, el anlisis revel que existe un elevado grado de diversidad entre los alelos nodA correspondientes a los aislamientos analizados y los existentes en la base de datos. La filogenia construida a partir de este gen sugiere que los alelos nodA de los aislamientos nativos podran representar un nuevo Clado (propuesto como VIII). Adems, la comparacin de las filogenias obtenidas a partir de genes housekeeping y simbiticos indica que la transferencia lateral de genes es importante para la evolucin de esta poblacin de microorganismos, ya que los aislamientos nativos analizados poseen alelos nodA idnticos a pesar de que los genes del metabolismo bsico son diferentes. Tomados en conjunto, los resultados de este trabajo indican que los aislamientos nativos B. sp. CH81 y B. sp. PI237 representan variantes localmente adaptadas de B. yuanmingense y B. iriomotense, cuyos genes simbiticos han sido moldeados por eventos de transferencia lateral de genes.
agregada. Esto permitira una aplicacin exitosa del producto evaluado en una variedad de situaciones productivas.
P95 - 27748 PRODUCCIN DE CIDO ACTICO A PARTIR DE EFLUENTES LQUIDOS DE LA INDUSTRIA CERVECERA. ISLA, MIGUEL(1); BENZZO, MARIA T(1); AGUER, FERNANDO (2); JACOB, PAULINA(2)
1 Facultad Ingeniera y Ciencias Hdricas-Universidad Nacional del Litoral. 2 Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas- Universidad Nacional del Litoral Introduccin: Uno de los principales subproductos de la produccin de cerveza es la corriente que se genera al separar las levaduras excedentes luego de la fermentacin. El efluente as obtenido puede considerarse prcticamente cerveza, y se conoce con el nombre de corriente de fondo o levadura lquida. Dada su alta carga orgnica, su tratamiento acarrea problemas en los reactores UASB (Upflow Anaerobic Sludge Blanket) que se utilizan en este tipo de industrias. El contenido de etanol (4-7 % m/v) de esta corriente es responsable de un 70% de su DQO (Demanda Qumica de Oxgeno). En el presente trabajo se analiz la posibilidad de producir vinagre de cerveza a partir de la corriente de fondo, mediante un proceso de fermentacin utilizando bacterias acticas. Objetivos: a) Analizar la factibilidad de producir cido actico a partir de efluentes de cerveceras con alto tenor de etanol, utilizando bacterias acticas. b) Disear un protocolo de reposicin de etanol que permita superar el valor mnimo de la concentracin de cido actico (4% m/v) exigido por el CAA (Cdigo Alimentario Argentino) para la comercializacin del producto como vinagre de cerveza. c) Explorar la posibilidad de utilizar la fermentacin actica como mtodo alternativo al tratamiento convencional de los efluentes cerveceros. Materiales y mtodos: Se utiliz cerveza comercial como materia prima, con un tenor de etanol de 5% m/v en reemplazo de la corriente de fondo, a fin de tener repetitividad en el medio de inoculacin. Acetobacter spp. y Gluconobacter spp. se inocularon (concentracin inicial: 1x107 UFC/mL) en dos reactores tipo batch, diseados a escala banco, con agitacin mecnica y aireacin adecuada, imitando el mtodo de cultivo sumergido utilizado en la industria vinagrera. Se adicion cido actico hasta alcanzar un pH inicial de 4,00 y alcuotas de etanol, cuando se detect la primera disminucin de cido actico producido. El tiempo de estudio para cada corrida fue de aproximadamente 10 das, realizndose un seguimiento diario del pH, oxgeno disuelto, y concentracin de cido actico y etanol. Resultados: se demostr que, luego de la aclimatacin, Acetobacter present mayor velocidad de acetificacin que Gluconobacter, aunque ambas especies produjeron valores similares de actico, aproximadamente 3,5% m/v. Por otra parte, tras la reposicin de etanol, se super el 4% m/v de actico requerido por CAA para ser comercializado como vinagre de cerveza. En cuanto al protocolo de reposicin de etanol, el mtodo cuasi-continuo, utilizando Acetobacter y manteniendo la concentracin de alcohol cercana al 3% m/v, logr los mejores rendimientos: 0,7 g de cido actico/g etanol. Mediante los procedimientos ensayados, puede producirse vinagre de cerveza con un rendimiento muy satisfactorio, siendo aplicable como alternativa al tratamiento convencional de los efluentes cerveceros. Los efluentes con altos tenores de etanol pueden considerarse como materia prima para la obtencin de otros productos con muy buen valor de mercado.
P94 - 27743 EVALUACIN A CAMPO DE GRAMINOSOIL-L TRIGO BAJO DIFERENTES NIVELES DE FERTILIZACIN NITROGENADA. RUIZ, DANTE(1); MONTELEONE, EMILIA(1); COURETOT, LUCRECIA(2); FERRARIS, GUSTAVO(2)
(1) Departamento de Investigacin y Desarrollo Nitrasoil Argentina S.A. (2) rea de Desarrollo Rural INTA EEA Pergamino Introduccin: La aplicacin de inoculantes es una prctica con probada eficiencia en el incremento de los rendimientos. En el caso de Azospirillum spp. queda descripta mediante una accin directa sobre la planta permitindole tener mayor eficiencia en el uso de los recursos a travs del estmulo en el desarrollo radicular. Los efectos ms observados son una rpida implantacin, mayor crecimiento radicular y acumulacin de biomasa. Objetivos: 1. Cuantificar el efecto sobre la implantacin, vigor inicial, acumulacin de biomasa y rendimiento de trigo de un inoculante en base a Azospirillum spp. 2. Evaluar la interaccin de la inoculacin con la fertilizacin nitrogenada. Mtodos: Se realiz un ensayo a campo sobre un suelo Serie Pergamino, Argiudol tpico, donde se evalu el inoculante Graminosoil-L Trigo aplicado a la semilla, combinado con tres niveles de fertilizacin nitrogenada. ste inoculante est formulado en base a Azospirillum spp. y contiene 1x109 bacterias/mL a la fecha de elaboracin. Los tratamientos evaluados surgen de la combinacin de semilla sin inocular o inoculada y tres niveles de fertilizacin nitrogenada, el diseo fue en bloques completos al azar. Se determin el nmero de plantas emergidas a los 10 dde, biomasa de planta entera en Z25 y Z89, vigor en Z39 y Z89, cobertura del cultivo sobre el suelo en Z89 por imgenes procesadas con el software Cob Cal 2.0. y rendimiento en grano. A los resultados se les realiz anlisis de varianza (ANVA), comparaciones de medias y anlisis de regresin. Resultados: Se observaron diferencias tempranas en vigor y acumulacin de materia seca en Z25, relacionadas con los tratamientos de fertilizacin, aunque fueron sutiles y aleatorias, sin predominar una tendencia central. A cosecha, las diferencias en materia seca y rendimiento fueron pronunciadas; ambas dosis de N superaron al testigo sin diferencias estadsticas entre s, aunque el diferencial entre ambos tratamientos de fertilizacin fue agronmicamente relevante. Las diferencias por inoculacin no fueron significativas para materia seca final y rendimiento, pero la magnitud fue considerable en relacin al costo del tratamiento y se encontr cercana al mximo esperable. Los anlisis de resultados indicaron que la respuesta a Azospirillum spp. es independiente de la dosis de N agregada. La diferencia media en rendimiento en grano alcanz los 427 Kg/ha. Si bien las diferencias no resultaron estadsticamente significativas, se observ una tendencia positiva al uso de Graminosoil-L Trigo en condiciones de campo sobre determinados parmetros de crecimiento del cultivo y rendimiento en grano. No se determin una interaccin entre el efecto de la inoculacin y los niveles de fertilizacin nitrogenada evaluados, lo que sugiere que la respuesta a la aplicacin de Graminosoil-L Trigo es independiente de la dosis de N
P96 - 27750 ESTUDIO DE LA SIMBIOSIS LOTUS TENUISMESORHIZOBIUM LOTI, COMO ALTERNATIVA DE APLICACIN A SUELOS CON LIMITANTES ABITICAS. ECHEVARRIA, ROMINA; GARCIA, PATRICIA; RONCHI, ANA LIA; GRASSANO, ALICIA ESTER
Universidad Nacional de La Pampa La FBN en los cultivos de leguminosas resulta cada vez ms importante en vista a los esfuerzos de desarrollar una produccin agrcola ms econmica y sostenible. Para lograr un alto rendi-
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miento de los cultivos es necesario el conocimiento y manejo de distintas variables tales como los aspectos genticos de las especies vegetales implantadas, la disponibilidad de nutrientes o su introduccin por tcnicas eficaces y no contaminantes, la presencia de microorganismos beneficiosos de la rizsfera y la incidencia de los factores abiticos (salinidad, sequa, etc.) y biticos (presencia de microorganismos de alta competitividad y/o patgenos) (Pankhurst and Lynch, 1995) Es por ello que se debe abordar su estudio, comprendiendo la complejidad de los mismos y jerarquizando cuales son las posibles vas de ganancia o prdida de los nutrientes ms importantes para cada uno de los cultivos. (Nannipieri y col. 2003). En este trabajo se estudia el Lotus tenuis (glaber), por su gran tolerancia a la sal y a los suelos pobres lo que hace a esta planta muy til para repoblar terrenos marginales. El objetivo es analizar la simbiosis Mesorhizobium lotiLotus glaber y la accin de efectos promotores de bacterias, con el fin de su aplicacin como cultivo alternativo para regiones agropecuarias con condiciones lmites. En este contexto se buscaron suelos, donde exista L. tenuis, en praderas naturales con distintos grados de salinidad y pH. De los mismos se aislaron rizobios, para ello se realizaron inoculaciones de solucin de los suelos en tubos con medio Jensen y plntulas de Lotus tenuis, aislndose ndulos. En esta etapa se estudi el comportamiento de cuatro de esos aislamientos frente a cepas recomendadas para la produccin de inoculantes (LL32). Los aislamientos de Mesorhizobium loti estudiados corresponden a suelos de pH 7,35, 7,05 y 7,87 de marcada salinidad y levemente sdico, respectivamente. Adems, se tom en cuenta comparando los perfiles de enzimas metablicas para a y esterasas, que presentaron diferencias entre s y respecto de la cepa patrn recomendada LL32. Para los aislamientos mencionados se determin que a las 40 hs, presentaron valores de UDO de 8,29 (S53), 6,15 (S54) y 7,35 (S92), con tiempos de duplicacin de 4 h. 16 min, 4 h. 41 min y 4 h. 36 min y velocidad especfica de 0,162 h-1; 0,147 h-1 y 0,151 h-1, respectivamente. En ensayos en cmara climatizada se evaluaron parmetros de rendimiento de los rizobios, frente a testigos sin inocular y fertilizados con nitrgeno, del anlisis de los resultados se determinan diferencias significativas entre todos los tratamientos y el testigo sin inocular, excepto con S96 y entre los tratamientos inoculados con S35 y S54 respecto a la cepa patrn LL32. Adems se detect que la inoculacin realizada con el aislamiento S96 produjo un efecto promotor significativo al inicio del desarrollo de las plntulas, sin que luego se produjera nodulacin. Por esta razn se estn realizando pruebas, que ya han dado positivo para la produccin de AIA. Se puede concluir, de esta etapa, que en condiciones controladas los aislamientos de Mesorhizobium loti muestran frente a la variedad de Lotus usada una mejor respuesta que la cepa patrn.
lubles de P y se determin la incidencia de la ruta de oxidacin periplasmtica de aldosas en este proceso. El cultivo batch es el ms simple para realizar estos estudios fisiolgicos, no obstante, un ambiente de crecimiento constante en el tiempo y bien definido puede lograrse empleando la tcnica de cultivos continuos. En este sistema los microorganismos crecen bajo limitacin por algn nutriente, una situacin usualmente encontrada en los ecosistemas naturales. En este trabajo se llevaron a cabo cultivos batch y cultivos continuos bajo diferentes limitaciones. Se tomaron muestras lquidas y gaseosas que fueron procesadas para obtener parmetros como consumo de O2, produccin de CO2, consumo de sustratos, rendimiento en biomasa y en producto, y se obtuvieron los siguientes resultados: -En cultivos batch con glucosa, independientemente de la fuente de Nitrgeno empleada, los niveles de P solubilizado a lo largo del cultivo se correlacionaron directamente con la produccin de cido glucnico. G. diazotrophicus fue capaz de crecer y solubilizar fosfatos de calcio insolubles empleados como nica fuente de P, slo cuando se utilizaron azcares que fueran sustratos de la glucosa deshidrogenasa periplasmtica. -En cultivos continuos, independientemente de la limitacin, la condicin de Fijacin Biolgica de Nitrgeno (FBN) fue aquella donde el microorganismo fue ms eficiente para producir biomasa, no obstante, en la condicin de limitacin por P bajo FBN se registr mayor produccin extracelular de cido glucnico. -La produccin de cidos mediada por la glucosa deshidrogenasa periplasmtica fue indispensable para llevar a cabo la solubilizacin de compuestos insolubles de P. -La condicin de crecimiento que ms se asemeja a la encontrada en el ambiente natural, en este caso la rizosfera, fue aquella donde se regul el flujo de carbono hacia una mayor produccin de cido al espacio extracelular capaz de producir una mayor solubilizacin de compuestos insolubles de P.
P98 - 27779 SECRECIN DE UNA PIOCINA TIPO FAGO POR LA CEPA RIZOSFRICA Pseudomonas sp. SF4C. FISCHER, SONIA; GODINO, AGUSTINA; CORDERO, PAULA; PRINCIPE, ANALIA; JOFRE, EDGARDO; MORI, GLADYS
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Crdoba Introduccin: Las bacteriocinas son compuestos con un espectro de accin estrecho. Las bacterias productoras de estos metabolitos tienen una ventaja competitiva, y pueden colonizar nuevos nichos. Las bacteriocinas de P. aeruginosa, denominadas piocinas, son clasificadas en R, F y S, en base a su estructura. Las piocinas S son solubles y R y F son colas de fagos que se han especializado como bacteriocinas. Los genes del sistema ltico hol y lys y el represor prtR han sido encontrados en todas las piocinas R y F; mientras que los genes que codifican para protenas responsables del ensamble de la cola del fago son diferentes en cada cepa. La produccin de piocina es inducida por agentes que causan daos al ADN, tales como la mitomicina C (Nakayama y col., 2000). El genoma de algunas P. fluorescens PGPR (promotoras del crecimiento vegetal) contiene profagos, similares a las piocinas F o R de P. aeruginosa (Mavrodi y col., 2009). Sin embargo, estas piocinas no han sido caracterizadas genticamente en estas Pseudomonas. Pseudomonas sp. SF4c es una PGPR nativa aislada de trigo. Previamente, se obtuvo un mutante de la cepa SF4c deficiente en la produccin de bacteriocina (ptm::Tn5-B20). El gen ptm codifica para una protena que determina el largo de la cola del fago (piocina). Objetivo: caracterizar genticamente la bacteriocina producida por Pseudomonas sp. SF4c. Materiales y mtodos: Complementacin del mutante ptm::Tn5-B20: El gen ptm de la cepa Pf0-1 fue amplificado con primers especficos. El producto de PCR fue purificado, digerido y ligado en pFAJ1709. Posteriormente, se transformaron competentes de E. coli DH5. El plsmido recombinante (pFAJptm) fue transferido al mutante por electroporacin. Amplificacin de genes del sistema ltico y de regulacin: a partir de regiones conservadas de los genes hol, lys y prtR de Pseudomonas productoras de piocinas R y F, se disearon primers para la amplificacin de dichos genes en la cepa SF4c. El producto de PCR fue secuenciado. Purificacin de la piocina: La bacteriocina de la cepa SF4c fue purificada del sobrenadante de cultivos in-
P97 - 27773 ROL DE LA OXIDACIN PERIPLASMTICA DE ALDOSAS EN LA SOLUBILIZACIN DE FSFORO POR Gluconacetobacter diazotrophicus. CRESPO, J; BOIARDI, J; LUNA, F*
CINDEFI (UNLP; CCT-La Plata, CONICET) La Plata, Argentina, *CIC PBA El fsforo (P) es, despus del nitrgeno, el nutriente ms importante para plantas y microorganismos y, a pesar de ser muy abundante en suelos, su disponibilidad es muy limitada. La solubilizacin de distintas fuentes de P inorgnico por microorganismos es una alternativa para incrementar la cantidad de P disponible para las plantas. El principal mecanismo de solubilizacin de P es a travs de la accin de cidos orgnicos sintetizados por los microorganismos. El cido glucnico, producido a travs de la ruta periplasmtica de oxidacin de aldosas, es el agente ms frecuentemente reportado para llevar a cabo esta solubilizacin. Gluconacetobacter diazotrophicus es una bacteria considerada de gran importancia para su uso en agricultura, no slo por solubilizar compuestos insolubles de P, sino tambin por otras caractersticas que lo enmarcan dentro del grupo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal. Con el objetivo final de lograr la utilizacin de microorganismos como biofertilizantes en cultivos de inters comercial, en este trabajo se evalu la capacidad de G. diazotrophicus PAL 5 de solubilizar compuestos inso-
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ducidos con mitomicina C y sin inducir. La actividad fue analizada en ambas condiciones. Resultados: Se amplific del genoma de la cepa SF4c los genes del sistema ltico y de regulacin del cluster de piocina. La secuencia de nucletidos obtenida mostr un alto porcentaje de identidad con los genes hol, lys y prtR de Pseudomonas productoras de piocinas tipo fago. La produccin de bacteriocinas no se restableci en el mutante ptm::Tn5-B20 que lleva el plsmido recombinante pFAJptm. Esto posiblemente se debe a efectos polares de la insercin del Tn5-B20 sobre otros genes del cluster. La actividad de la piocina secretada por la cepa SF4c fue mayor en los cultivos con mitomicina C, lo que demuestra que la misma es inducida por agentes que causan daos en el ADN. A partir de los resultados obtenidos podemos concluir que el genoma de Pseudomonas SF4c contiene los genes lticos y de represin encontrados en todos los cluster de piocinas tipo fago. La caracterizacin a nivel molecular de una bacteriocina producida por una Pseudomonas PGPR permitir dilucidar el rol de estos metabolitos en la competitividad de la cepa.
P100 - 27797 CARACTERIZACIN DE LA ACTIVIDAD DE LIPASA PRODUCIDA POR UNA NUEVA CEPA MUTANTE DE Yarrowia lipolytica A PARTIR DE SUBPRODUCTOS DE LA INDUSTRIA DEL BIODIESEL. BIANCHI, JORGELINA(1); CERRUTTI, PATRICIA(1); GALVAGNO, MIGUEL(1,2)
1) Lab. de Microbiologa Industrial, Facultad de Ingeniera, UBA; 2) IIB-CONICET La elaboracin de biodiesel produce cantidades importantes de glicerol (GLI) que pueden aprovecharse para el desarrollo de cepas con mltiples aplicaciones industriales, tal como la levadura GRAS Yarrowia lipolytica. Objetivo: Caracterizar la actividad de lipasa extracelular (LIP) obtenida en medios conteniendo GLI y cidos grasos provenientes de la produccin de biodiesel usando una mutante de Y. lipolytica, para mejorar la aptitud comercial del proceso. Materiales y mtodos: La cepa mutante Y. lipolytica BAFC 3852 se obtuvo por mutagnesis de Y. lipolytica NRRL 1095 con N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina. La concentracin de biomasa de levadura se determin como masa seca (MS, g/L), y la viabilidad por recuento en placa agar Sabouraud + 0.3% de extracto de levadura. La LIP (U/mL) se determin por titulacin de los cidos grasos liberados y el contenido de cidos grasos por cromatografa gaseosa. Resultados: La mutante duplic la produccin de LIP de la cepa parental. En estudios previos se determin la necesidad de inducir la produccin de LIP de la cepa por agregado de compuestos tales como el aceite de oliva (AO), cuando se usaba GLI como fuente de C. En el presente trabajo, se estudi el reemplazo del AO por cidos grasos separados durante el pretratamiento del GLI. La produccin de LIP por unidad de MS con el agregado de 2,4% p/v de cidos grasos, fue el 61% de la obtenida con el agregado de AO, pero se obtuvo paralelamente un 10% ms de biomasa. Se estudi adems la resistencia al congelado de la cepa de Y. lipolytica cultivada en un medio con 2% p/v de GLI en lugar de glucosa, encontrndose 93% de supervivencia al cabo de 2 ciclos de congelado a-20 C. La cepa mutante produjo el 30% ms de cidos grasos totales por unidad de MS que la cepa parental. Los perfiles de cidos grasos fueron tambin distintos ya que, por ej., la cepa mutante cultivada en un medio conteniendo glicerol como fuente de C no produjo cido palmitoelaidico (16: 1, 9-trans), a diferencia de la parental. Se evalu adems la estabilidad de la LIP obtenida en presencia de solventes de distintas polaridades (n-hexano y etanol). La actividad de LIP aument 1.8 veces despus del tratamiento con nhexano con respecto de los controles en ausencia de solventes, mientras que disminuy marcadamente despus del tratamiento con etanol. La cepa mutante fue capaz de crecer 1 ciclo logartmico en presencia de n-hexano. La produccin de biomasa de esta nueva cepa mutante de Y. lipolytica utilizando un subproducto industrial, permiti, adems de su conversin en productos de mayor valor agregado, obtener clulas con mayor contenido de cidos grasos, ms aptas para la produccin de aceites unicelulares. Los cidos grasos provenientes del biodiesel podran usarse como inductores para la produccin de LIP y tambin como materia prima para la obtencin de biomasa de Y. lipolytica, en beneficio de la economa del proceso. La levadura cultivada en GLI mostr muy buena tolerancia al congelado, y la enzima obtenida fue resistente frente a un solvente no polar como n-hexano, lo que la hara adems adecuada para su utilizacin en otros medios no acuosos.
P99 - 27792 OPTIMIZACIN SIMULTNEA DE LA PRODUCCIN DE PROTEASA Y BIOMASA DE Pseudomonas spp. MEDIANTE LA METODOLOGA DE SUPERFICIE DE RESPUESTA. AGERO, MARA VICTORIA; KOTLAR, CATALINA; ROURA, SARA
Facultad de Ingeniera, Universidad Nacional de Mar del Plata Introduccin: La optimizacin del medio de cultivo y condiciones de operacin es una etapa crtica en el diseo de procesos de fermentacin. Esto requiere evaluar primero cules son los factores que impactan significativamente sobre la variable de inters y, luego, determinar el nivel ptimo para cada uno de ellos. La tcnica de superficie de respuesta (RSM) es una herramienta ampliamente utilizada para realizar estos estudios. En un trabajo previo a travs de un diseo estadstico de Plackett-Burman se encontr que para la cepa Pseudomonas sp. los factores que afectan el crecimiento microbiano (CREC) y la produccin de proteasa (ACT) son diferentes: Temperatura (T), agitacin (agit) y concentracin de sal (NaCl) para la produccin de proteasa; y T, concentracin de glucosa (glu) y pH para el crecimiento microbiano. Objetivos: (1) Optimizar la produccin de proteasa; (2) Optimizar el crecimiento microbiano; (3) Evaluar el comportamiento de la cepa en una fermentacin bifsica (condiciones ptimas para CREC y luego ptimas para ACT). Materiales y Mtodos: La cepa Pseudomonas sp. fue aislada de repollo e identificada en CERELA (CONICET, Tucumn, Argentina). Las optimizaciones de ACT y de CREC se realizaron mediante la metodologa RSM con diseo de Box-Benkhen. Se realizaron 15 corridas experimentales en las que cada uno de los factores se combinaron en diferentes niveles (alto, medio, bajo) dado por el diseo. Para cada corrida se midi ACT en unidades proteasa (PU) y CREC en OD a 600nm. A partir de los resultados para cada corrida, se ajustaron modelos polinomiales de 2do orden. Para el experimento bifsico, las clulas fueron incubadas primero en el medio ptimo para CREC y luego de 10 horas, se transfirieron a un medio ptimo para ACT. El estudio se realiz por triplicado. Se utiliz el software SAS para el anlisis de los resultados. Resultados: Para ambas variables (CREC y ACT), se encontr una superficie acampanada con un mximo en funcin de los factores particulares para cada una. El ajuste de ambos modelos fue muy bueno, con valores de R2 de 0.94 y 0.97, respectivamente. El ptimo de CREC se encontr en T=25.29 C, pH=7.45 y glu=3.35 g/L, con valores de CREC y ACT de 1.637OD y 0.1023PU, respectivamente. Por otra parte, la superficie para optimizar ACT present su mximo en T=20.07 C, agit=47.61rpm y (NaCl)=2.07% w/v, con valores asociados de CREC y ACT de 0.8139OD y 0.1869PU, respectivamente. Finalmente, la fermentacin bifsica no arroj buenos resultados encontrndose menor ACT al final de la fermentacin comparada con la fermentacin en condiciones ptimas para ACT. Conclusiones: En este trabajo se aplic RSM para optimizar diferentes variables relativas a una cepa de Pseudomonas. La optimizacin ACT arroj los mejores resultados ya que permiti la obtencin de una mxima produccin enzimtica asociada a una baja produccin de biomasa, dando valores relativos de ACT/CREM altos lo que resulta muy interesante desde un punto de vista industrial.
P101 - 27803 SELECCIN DE LAS VARIABLES FISICOQUMICAS Y OPERATIVAS CON SIGNIFICANCIA EN LA PRODUCCIN DE ENZIMAS PROTEOLTICAS Y BIOMASA MICROBIANA DE Pseudomonas sp. AGERO, MARA VICTORIA; KOTLAR, CATALINA; ROURA, SARA
Facultad de Ingeniera, Universidad Nacional de Mar del Plata Introduccin: El uso potencial de proteasas microbianas a escala industrial requiere de la seleccin de los nutrientes adecuados y las variables operativas para mejorar tanto la produccin de enzimas como la biomasa microbiana. Tradicionalmente esta
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optimizacin requera el ensayo de un factor a la vez; hoy la aplicacin de diseos estadsticos permite la investigacin conjunta de ms de cinco factores. El diseo de Plackett-Burman (PB) es utilizado como paso previo a la optimizacin y permite estudiar la significancia estadstica de los factores (variables) con efecto en la productividad enzimtica. Sin embargo un paso crtico es la seleccin de los lmites mximos y mnimos para cada factor involucrado a la hora de aplicar este diseo y esto se requiere cada vez que una nueva cepa microbiana sea caracterizada. Objetivos: (1) Caracterizar la cintica de crecimiento y produccin enzimtica de Pseudomonas sp. conjuntamente con su especificidad de sustrato, morfologa y efectos antimicrobianos; (2) determinar de forma rpida los lmites inferiores y superiores de los factores con impacto en la produccin de enzimas y biomasa; y (3) aplicar el diseo de PB para seleccionar los factores que afectan significativamente la produccin enzimtica y crecimiento microbiano. Materiales y Mtodos: La bacteria Pseudomonas sp. fue aislada de repollo fresco por Prez Borla y col. e identificada en CERELA (CONICET, Tucumn, Argentina; 2008). En el prescreening se utilizaron placas con medio mnimo basal donde se modific la variable a ensayar, cubriendo un amplio rango y se evalu la habilidad del microorganismo para liberar proteasas extracelulares. Se trabaj con el SN libre de microorganismos como fuente enzimtica y la actividad se determin espectrofotomtricamente (Folin-Ciocalteau, a 660 nm) con casena como sustrato. Ocho factores (temperatura, velocidad de agitacin, pH, glucosa, peptona, NaCl, Ca2+ y Mg2+) fueron analizados a travs del diseo de PB para evaluar la importancia relativa de cada uno en la produccin enzimtica y de biomasa microbiana. Los datos fueron estadsticamente analizados usando el procedimiento REG del software SAS version 8.0 (SAS Inst. Inc., Cary, N.C., U.S.A. 1999). Resultados: A partir de la combinacin (prescreening-PB) se encontr que la temperatura, velocidad de agitacin, NaCl y pH son factores determinantes de la expresin de la actividad proteoltica de Pseudomonas sp., mientras que la temperatura, glucosa, pH, peptona y velocidad de agitacin son necesarios para el crecimiento del microorganismo. El pre-screening permiti la determinacin rpida y sencilla de los lmites mximo y mnimo de los factores analizados. Conclusiones: La identificacin realizada de los factores con mayor impacto en la produccin de enzima y la biomasa microbiana es un paso necesario y previo a la optimizacin de los componentes del medio y las condiciones operativas.
Subbarow (1925) modificada. Las bacterias fueron crecidas en medio NBRIP-BPB con y sin el agregado de soluciones tampn y en el sobrenadante se midi el fsforo soluble a las 24, 48 y 72 horas y 7 das de crecimiento. Paralelamente, se midi el pH del sobrenadante y se determin el nmero de clulas viables (UFC/ mL) (Somasegaran y Hoben, 1994). Las soluciones tampones empleadas fueron: Tris-HCl y MES, ambas en una concentracin de 100 mM. Resultados: Se observ que la capacidad de solubilizacin de fosfato fue variable en los diferentes aislamientos analizados. En medio NBRIP-BPB, sin el agregado de solucin tampn, se alcanzaron valores de fsforo soluble que variaban aproximadamente entre 190-545 g/mL. Resultados similares fueron observados cuando se agreg buffer Tris-HCl al medio NBRIP-BPB. Por otro lado, se observ para todos los aislamientos, que el agregado de buffer MES disminuy significativamente los niveles de fsforo soluble (aproximadamente 70%) siendo los valores alcanzados entre 41-68 g/mL. En todos los casos, el pH del sobrenadante descendi hasta valores aproximados a 3 en medio NBRIP-BPB y NBRIP-BPB con Tris-HCl. En cambio, cuando fue agregado el buffer MES al medio de cultivo, los valores se mantuvieron cercanos a pH 6. Conclusin: Si bien la cantidad de fosfato solubilizado en medio NBRIP fue variable entre los aislamientos, todos ellos produjeron un descenso del pH del medio, lo que indicara la produccin de cidos como posible mecanismo de mineralizacin de fosfato insoluble. El agregado de buffer Tris-HCl no modific dicha capacidad; mientras que el buffer MES la afect significativamente. Es posible sugerir que existira una correlacin entre la disminucin en el pH del medio de cultivo y la cantidad de fsforo solubilizado.
P103 - 27837 EFECTO DEL FSFORO EN EL MECANISMO DE SOLUBILIZACIN DE FOSFATO DEL AISLAMIENTO M91 (Pantoea eucalypti). CASTAGNO, LUIS N(1); ESTRELLA, MA JULIA(1,2); SANNAZZARO, ANALIA I(1); RUIZ, OSCAR A(1)
(1) IIB-INTECH; (2) INV CIC La capacidad de las bacterias solubilizadoras de fosfato de liberar fosfato soluble a partir del fosfato insoluble presente en el suelo, es de vital importancia para el desarrollo de nuevas tecnologas de fertilizacin, especialmente en suelos ridos y semiridos. Existe una relacin mutualista entre estas bacterias y las plantas; las primeras proporcionan fosfato soluble y las plantas aportan compuestos carbonados que promueven el crecimiento bacteriano. El mecanismo de solubilizacin de fosfato mineral est asociado a la liberacin de cidos orgnicos de bajo peso molecular. Los cidos glucnico (GA) y 2-cetoglucnico (2KGA) parecen ser los principales responsables de dicha solubilizacin. GA es generado por la va directa de oxidacin de la glucosa, mediada por la enzima glucosa deshidrogenasa (GDH), y luego es oxidado por la enzima gluconato deshidrogenasa (GaDH) para dar 2KGA. Ambas enzimas se sitan en la cara externa de la membrana citoplasmtica, por lo que los cidos se forman en el espacio periplsmico, dando como resultado la acidificacin de esta regin y, en ltima instancia, del entorno del microorganismo. En el presente trabajo se utiliz el aislamiento M91 por ser una de las cepas que mostr mayor actividad solubilizadora in vitro e in vivo y tambin por haber sido identificada (por amplificacin del ARNr 16s) como Pantoea eucalypti, una especie novedosa en trminos de bacterias promotoras del crecimiento vegetal. Objetivo: Estudiar el efecto del fosfato soluble en la secrecin de cido glucnico y en la actividad de las enzimas involucradas en su metabolismo en un aislamiento con alta capacidad solubilizadora de fosfato. Metodologa: Se cultiv la cepa M91 en medio NBRIP con distintos niveles de fosfato soluble (0-50 mM K2HPO4). Se tomaron muestras a distintos tiempos y se evaluaron los siguientes parmetros: pH, fosfato solubilizado, cido glucnico y actividad enzimtica de GDH y GaDH. Resultados: La liberacin de GA mediada por M91, a las 24 y 72 h postinoculacin (p.i.), fue significativamente superior cuando la cepa fue cultivada bajo condiciones deficientes de fsforo (0 mM de K2HPO4), comparado con el valor obtenido a 50 mM. Esto se correlaciona con los niveles de actividad GDH y GaDH de dichos tratamientos. Bajo deficiencia de fsforo, el nivel de GA liberado alcanza su mxima concentra-
P102 - 27823 CAPACIDAD SOLUBILIZADORA DE FOSFATO DE AISLAMIENTOS NATIVOS ASOCIADOS A PLANTAS DE MANI. ANZUAY, MARA SOLEDAD; TAURIAN, TANIA; FABRA, ADRIANA
Universidad Nacional de Ro Cuarto, Crdoba Introduccin: En la regin manisera de la provincia de Crdoba, que concentra el 92% de la produccin nacional, se han determinado bajos niveles de fsforo asimilable para las plantas. Este nutriente, despus del nitrgeno, es el elemento ms requerido por plantas y microorganismos. Sin embargo, menos del 5% del fsforo contenido en el suelo es asimilable por la planta. La baja disponibilidad de este elemento es atribuida a que el fsforo soluble reacciona con iones de calcio, hierro o aluminio que provocan su precipitacin. Uno de los mecanismos directos mediante el cual las bacterias promueven el crecimiento vegetal es la solubilizacin de fosfatos insolubles. El principal mecanismo microbiolgico por el cual los compuestos fosforados inorgnicos son movilizados involucra la liberacin de cidos orgnicos de bajo peso molecular. Objetivo: Evaluar la capacidad solubilizadora de fosfato de bacterias nativas del rea manisera de Crdoba mediante un anlisis cuantitativo. Materiales y mtodos: Se estudi un grupo de 18 bacterias aisladas de plantas de man de Crdoba que fueron seleccionadas a partir de una coleccin de 433 bacterias por producir los mayores halos de solubilizacin de fosfato en medio slido suplementado con fsforo insoluble (Frioni, 1999; Nautiyal, 1999). Se incluy una cepa comercial de Pseudomonas fluorescens solubilizadora de fosfato empleada como inoculante para trigo y maz en Argentina. Se determin cuantitativamente el fosfato solubilizado mediante la tcnica de Fiske y
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cin a las 24 h p.i y decrece a las 48 y 72 h Sin embargo, la actividad GDH se mantiene constante a lo largo del experimento. Por otro lado, la actividad GaDH presenta el mismo patrn que la liberacin de GA y ambos tienen una correlacin negativa con la concentracin de fosfato solubilizado en el medio. Cuando el medio fue suplementado con K2HPO4 (10 a 50 mM), la actividad de las enzimas GDH y GaDH se mantuvo a nivel basal a lo largo del tiempo. El aislamiento M91 es capaz de solubilizar fosfato mediante la liberacin de GA y su posterior conversin en 2KGA, lo cual se ve inducido en deficiencia de fsforo. Esta induccin se revierte una vez alcanzado un nivel adecuado de fosfato soluble en el medio.
P105 - 27845 EFECTO DE LA INOCULACIN CON Achromobacter xylosoxidans Y Bacillus pumilus SOBRE GIRASOL EN LA LOCALIDAD DE MANFREDI. TORRES , J (1); CASTILLO , P (1); ALVAREZ , D (2); MASCIARELLI , O (1); ALEMANO , S (1); ABDALA , G (1)
(1) Universidad Nacional de Rio Cuarto; (2) INTA EEA MANFREDI En Argentina, el girasol (Helianthus annus L) es la segunda oleaginosa de importancia econmica, el mismo ha sido desplazado por la soja a zonas marginales principalmente con caractersticas semiridas, ello implica que la planta no solo est expuesta a estrs hdrico cuando es adulta sino tambin en el establecimiento de la misma. Nuestro grupo de trabajo aisl de races de plantas de girasol cultivadas a campo con irrigacin y sequa, las bacterias Bacillus pumilus (Bp: cepa SF4) y Achromobacter xylosoxidans (Ax: cepa SF2). Ambas cepas presentaron capacidad de promover el crecimiento de las plantas en condiciones de estrs hdrico in vitro, adems presentaron actividad ACCdeaminasa y produjeron fitohormonas como cido indol-3-actico, cido saliclico, jasmnico y abscsico (Forchetti y col., 20072010), lo cual podra contribuir a la defensa frente a patgenos y a la promocin del crecimiento del girasol en condiciones de estrs. A partir de ello se plante como objetivo evaluar el efecto de las dos cepas a campo. Los ensayos de inoculacin se realizaron durante 2 ciclos agrcolas consecutivos, en el campo de la Estacin Experimental del INTA Manfredi, utilizndose un germoplasma comercial de girasol (Paraso 24). La inoculacin se realiz con el agregado de 1 mL de cultivo bacteriano (108 -109 UFC/mL) disueltos en 0,16 mL de adherente cada 100 gramos de semillas de girasol. Los tratamientos realizados fueron: T, Testigo, Nit, plantas sin inocular y con 280 Kg de urea x ha-1; Ax, plantas inoculadas con cepa SF2; Bp, plantas inoculadas con cepa SF4; AZO, plantas inoculadas con cepa comercial de Azospirillum; Nit+Azo, plantas inoculadas con Azospirillum y urea; Nit+Ax, plantas inoculadas con cepa SF2 y urea; Nit+Bp, plantas inoculadas con cepa SF4 y urea. Los resultados obtenidos muestran que las plantas inoculadas con las 2 cepas bacterianas nativas del girasol, si bien no presentaron diferencia significativa con respecto al control, presentaron una mejora en el rendimiento de granos de alrededor de 300Kg.ha-1 en las plantas inoculadas, lo que implica un incremento del rendimiento de granos por hectrea de alrededor del 15% al 17% para las plantas inoculadas con las bacterias Ax y Bp respectivamente. En cuanto al rendimiento de materia grasa, aunque no hubo diferencia estadsticamente significativa entre los tratamientos, las plantas inoculadas con la cepa SF4 fueron las que mejor resultado presentaron, siendo este parmetro similar para aquellas plantas inoculadas con la cepa SF2 y Azospirillum. Los ensayos aqu descriptos evidencian una favorable respuesta del cultivo frente a la inoculacin con las bacterias nativas para su aprobacin como prueba experimental. Podemos decir que la influencia de las inoculaciones con estas estirpes bacterianas sobre el rendimiento del cultivo supera a los de los cultivos fertilizados qumicamente y en algunos casos a los inoculados con bacterias no nativas. Estos nuevos productos podran mejorar la eficiencia del cultivo en condiciones agroecolgicas marginales desde un punto de vista agrcola y presentar adems la ventaja de ser amigables con el medio ambiente.
P104 - 27839 INFLUENCIA DEL GEN ntrc EN LA SIMBIOSIS Bradyrhizobium japonicum-SOJA. LOPEZ, M F; ALTHABEGOITI, M J; COVELLI, J M; PEREZ GIMENEZ, J; QUELAS, J I; LODEIRO, A R; LOPEZ GARCIA, S L
Instituto de Biotecnologia y Biologia Molecular (Facultad de Ciencias Exactas Universidad Nacional de La Plata) Introduccin: Bradyrhizobium japonicum fija N2 en simbiosis con plantas de soja slo en ambientes con escaso N asimilable para la planta, por lo que debera estar adaptada a sobrevivir bajo escasez de esta fuente. Cuando se cultiva a B. japonicum en esta condicin, hemos observado un marcado efecto estimulatorio de la simbiosis. Un elemento clave en la regulacin del metabolismo de N de diversas bacterias Gram-negativas es el sistema de dos componentes NtrBC. Este sistema se activa en condiciones de limitacin de N, permitiendo la expresin de genes necesarios para la asimilacin del mismo como los de la glutamino sintetasa (glnA y glnII) o los genes nif, entre otros. En algunas especies fijadoras de N en vida libre se ha reportado que la mutacin del gen ntrC afecta la fijacin de N2. En el caso de los rizobios, estudios en Sinorhizobium meliloti han demostrado que ntrC no afectara la fijacin de N 2. NtrBC ha sido poco estudiado en B. japonicum, y an se desconoce su posible influencia en la simbiosis con soja. Objetivos: Obtencin de un mutante en el gen ntrC en B. japonicum y evaluacin de su influencia sobre la fijacin de N2 en la simbiosis con soja. Materiales y Mtodos: La obtencin del mutante se realiz por mutagnesis insercional sitio especfica. El fragmento amplificado se clon en un vector suicida en rizobios, y luego se realiz una conjugacin biparental con la cepa USDA 110. Se determin la cintica de crecimiento (DO 500nm y UFC/mL) de esta cepa y de la salvaje, utilizando el medio de Gtz, con y sin el agregado de la fuente de N. Los ensayos con plantas de soja se realizaron utilizando como inculos ambas cepas cultivadas en medio Gtz con y sin su fuente de N. Luego de 60 das se evalu la cantidad de ndulos, el peso seco de los mismos y el peso seco de la parte area. Resultados: El anlisis de las cinticas de crecimiento muestra que cuando el N es suficiente, si bien ambas cepas alcanzan el mismo nmero de UFC/ mL a la entrada de la fase estacionaria, la cepa mutante exhibe una abrupta cada en ms de un orden de magnitud hasta alcanzar un valor estable. Sin embargo, no se observan diferencias cuando ambas cepas son cultivadas bajo limitacin de N. Respecto a los ensayos en plantas, se observ un mayor nmero de ndulos en las plantas inoculadas con la cepa mutante limitada en N, aunque el peso seco por ndulo para estas plantas fue menor que para la salvaje. Sin embargo, no hubo diferencias significativas en el peso seco de la parte area para todas las plantas inoculadas. Ninguno de estos parmetros mostr diferencias para las plantas inoculadas con ambas cepas cultivadas en suficiencia de N. La mutacin en ntrC estudiada en este trabajo sugiere un posible efecto de este gen en el crecimiento de este rizobio, que resulta ms marcado en condiciones de suficiencia de N. Por otra parte, podramos inferir que esta mutacin no tiene influencia en el rendimiento (peso seco) de las plantas en simbiosis. Sin embargo, la cepa mutante muestra una disminucin de la fijacin de N2 por ndulo cuando es cultivada con limitacin de este nutriente, lo que pondra en evidencia la posible participacin de ntrC en este proceso.
P106 - 27851 INTERACCIONES PRE-SIMBITICAS Y SIMBITICAS ENTRE GLOMUS INTRARADICES Y DOS ESPECIES DE Paenibacillus ASOCIADAS A MICELIO INTRARRADICAL Y ESPORAS. FERNANDEZ, LAURA; SILVANI, VANESA; COLOMBO, ROXANA; MARIANA, PERGOLA; BOMPADRE, JOSEFINA; GODEAS, ALICIA
Laboratorio de Microbiologa del Suelo, DBBE-FCEN-UBA Introduccin: Las comunidades microbianas en la rizsfera subordinadas a las especies vegetales y reguladas por la composicin de los exudados radicales, se modifican luego de la co-
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lonizacin con hongos MA (HMA). Sus estructuras crean un hbitat adicional con caractersticas propias para los microorganismos del suelo, diferente al de las races no micorrizadas, ejerciendo su propia influencia sobre las comunidades microbianas. Las bacterias asociadas, de manera casual o permanente, a los HMA en la micorrizsfera, podran representar un tercer componente en la simbiosis, promovindola de algn modo. Estas bacterias se denominan: mycorrhization helper bacteria. Objetivo: Evaluar el efecto de cepas productoras de indoles de Paenibacillus asociadas a HMA sobre el desarrollo pre-simbitico y simbitico de Glomus intraradices en cultivo con races transformadas de soja (RTS). Examinar si estas interacciones ocurren tambin en la riz sfera de soja bajo condiciones de invernadero. Materiales y Mtodos: Se emplearon TGX5E de P. rhizosphaerae (GenBank GU830879) obtenida del ambiente endfito de races de tomate colonizadas por G.intraradices, y TG1R2 de P. favisporus (GenBank GU937424) recuperada a partir de esporocarpos de G.mosseae. Identificadas mediante anlisis del 16SrRNA y comparadas con secuencias existentes. En ambas se cuantific el AIA producido en los sobrenadantes del cultivo. El desarrollo presimbitico y simbitico en respuesta a la presencia directa de las clulas bacterianas y sus sustancias difusibles se cuantific como: %de esporas germinadas, recrecimiento de micelio intrarradical, longitud de micelio extrarradical y %de RTS colonizada. En el ensayo en invernadero se cuantificaron adems los efectos de las inoculaciones microbianas sobre la biomasa seca de soja y cantidad de suelo rizosfrico adherido. Resultados: Las bacterias afectaron a G.intraradices dependiendo de su estado de desarrollo y de las condiciones del ensayo. La germinacin no fue afectada por la inoculacin, ms all de la produccin de AIA. Pero ambas causaron una clara promocin del crecimiento pre-simbitico del micelio. La inoculacin con TGX5E, que produjo menos cantidad de AIA que TG1R2, no mostr nunca un efecto deletreo sobre el desarrollo de G.intraradices, incrementndolo significativamente durante la fase simbitica, y en el ensayo in vivo. Aunque tuvo un efecto promotor sobre la infectividad, este incremento no se correlacion con un aumento en la produccin de biomasa seca de soja. El efecto de TG1R2 sobre G. intraradices en pre-simbiosis fue claramente deletreo, pero no suprimi los parmetros simbiticos In Vitro, y mostr un efecto promotor de la colonizacin y produccin de biomasa en las plantas de soja en invernadero La interaccin G. intraradices Paenibacillus no estara directamente relacionada con la produccin bacteriana de AIA. La complejidad de las interacciones HMA-bacterias asociadas incluye efectos benficos y detrimentales. La compatibilidad en diversas condiciones y los posibles efectos sobre el crecimiento de los vegetales debe ser profundamente investigado, estas interacciones sinrgicas son de gran importancia para una agricultura ms sustentable
en bloques completos aleatorizados, con 5 tratamientos y 4 repeticiones. Cada tratamiento se llev a cabo en una parcela de 4,5 m de largo y 1,60 m de ancho. Cada parcela tena dos hileras con entresurco de 0,8 m. Se utiliz avena silvestre (Avena strigosa cv Hayoats) como cultivo previo y fue incorporada al suelo tres meses despus con labranza. Se dej descansar un mes y medio antes de la siembra de papa. Se aplicaron dos microorganismos benficos: Bacillus pumilus (B-235) y Trichoderma harzianum (Th-1) (coleccin IMyZA, INTA). Se desarrollaron en caldo lquido BASE M y BASE S respectivamente. La siembra de papa se realiz en septiembre. En cada hilera se sembraron quince tubrculos del cultivar Spunta, distanciados cada 0,3 m. Las hileras fueron regadas con los microorganismos inmediatamente despus de la siembra y fueron cubiertas con suelo. La cosecha se realiz en diciembre. Los tratamientos fueron: T1) Suelo y tubrculos sin tratamientos; T2) Avena silvestre (AS); T3) AS + TH1; T4) AS + B-235; T5) AS + TH-1 + B-235. Se evalu el rendimiento de papa (expresado en kg/ha), nmeros de tubrculos por planta y peso promedio de tubrculos (g). Los dos ensayos se consideraron rplicas y se evaluaron en conjunto, utilizando el procedimiento GLM (SAS). Las medias aritmticas fueron comparadas con el test de Tukey (P = 0.05). Resultados: El rendimiento de papa aument con el uso de avena silvestre (T2) respecto a T1 (31.396 versus 18.368 kg/ha) mientras que los tratamientos con microorganismos no se diferenciaron de T2. El nmero de tubrculos por planta aument cuando se aplic B-235 (T4), respecto a T1 y T2 (6,99 versus 4,37 y 4,97). El peso promedio por tubrculo aument cuando se aplic T2 (152,34 g) y aument menos con T3, T5 y T4 (139,59; 128,31 y 123,80 g) respecto a T1 (100,77 g). La incorporacin al suelo de AS aument el peso de cada tubrculo, elevando el rendimiento, mientras que la incorporacin de B-235 aument el nmero de tubrculos por planta. La combinacin de ambas tcticas podra ser una estrategia alternativa natural para elevar el rendimiento del cultivo.
P108 - 27886 ENSAYOS DE COINOCULACIN DE UNA CEPA SOLUBILIZADORA DE FOSFATO Y Bradyrhizobium sp. SEMIA 6144 EN PLANTAS DE Arachis hypogaea L. EN CONDICIONES DE MICROCOSMO. TAURIAN, TANIA; FABRA, ADRIANA
Universidad Nacional de Rio Cuarto, Crdoba En la regin manisera de Crdoba se han determinado bajos niveles de fsforo asimilable para las plantas. A ello se suma que, en la interaccin man-rizobios, al igual que en las dems simbiosis con leguminosas, el fsforo es el principal factor nutricional que limita la fijacin biolgica del nitrgeno. Un gran inters reviste en la actualidad la investigacin sobre microorganismos que ejercen efectos benficos sobre el crecimiento de las plantas. Estos estudios apuntan a la formulacin de productos biolgicos que permitan mejorar el rendimiento de los cultivos. Un aspecto interesante es que en las prcticas de inoculacin, la mezcla de dos o ms especies microbianas ha demostrado producir mejores beneficios en el crecimiento de las plantas que el uso de una sola bacteria. El objetivo del presente estudio fue: Analizar el efecto benfico de la coinoculacin de una bacteria nativa solubilizadora de fosfato con una cepa recomendada como inoculante para man en ensayos de microcosmo. Se realizaron ensayos de inoculacin con el aislamiento nativo Pantoea sp. J49 solubilizador de fosfato as como de coinoculacin con la cepa Bradyrhizobium sp. SEMIA 6144 recomendada como inoculante para man. Se utiliz como soporte suelo estril deficiente en fsforo asimilable. Para dicho ensayo se incluy como control una cepa comercial de Pseudomonas fluorescens recomendada como fertilizante fosforado para maz y trigo. Las coinoculaciones fueron realizadas en una proporcin 1:1 de cada bacteria en fase estacionaria de crecimiento. Los controles fueron: plntulas de man sin inocular, fertilizadas con P, fertilizadas con N o inoculadas con Bradyrhizobium sp SEMIA 6144. Las plantas fueron mantenidas en condiciones controladas y cosechadas en los estadios reproductivos R1 y R4. Para determinar el efecto benfico de la inoculacin se analizaron peso seco areo y radical de las plantas, longitud area, nmero y peso seco de ndulos y nmero de cajas en el estadio R4. A partir de los ensayos de microcosmo
P107 - 27859 EFECTO DE LA COMBINACIN DE ENMIENDAS VERDES Y MICROORGANISMOS BENFICOS SOBRE EL RENDIMIENTO DE PAPA EN CRDOBA (ARGENTINA). VIVIANA, YOSSEN(1); ROJO, RODRIGO(2); BARRERA, VIVIANA(2); CHIESSA, GUIDO(2); ZUMELZU, GUILLERMO(1); COZZI, JORGE(2); KOBAYASHI, KIROKU(2); GASONI, LAURA(2)
(1) Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Crdoba; (2) Instituto de Microbiologa y Zoologa Agrcola, INTA. Introduccin: El cultivo de papa (Solanum tuberosum L.) es tradicional en la provincia de Crdoba (Argentina). Si bien los fertilizantes qumicos son de uso habitual, las tendencias actuales conducen a la utilizacin de alternativas naturales para evitar efectos adversos sobre la salud humana y el medio ambiente. El empleo de enmiendas verdes y de microorganismos benficos son dos alternativas ampliamente investigadas. Sin embargo, no existen antecedentes sobre su aplicacin combinada para aumentar el rendimiento del cultivo de papa. Objetivo: Determinar el efecto de la combinacin de enmiendas verdes y microorganismos benficos sobre el rendimiento de papa en ensayos de campo. Materiales y Mtodos: Se realizaron dos ensayos en aos consecutivos, 2002 y 2003, en un campo de produccin comercial de Villa Retiro (Crdoba). El diseo experimental seleccionado consisti
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se determin que la inoculacin de Pantoea J49 result en un incremento en el peso seco areo y radical de las plantas en los dos estadios analizados. Por otro lado, la coinoculacin de este aislamiento y la cepa simbitica SEMIA 6144 slo increment el peso seco areo de las plantas en el estadio R1. Si bien no se observ un aumento en el nmero de ndulos en plantas coinoculadas, se determin un incremento en el peso seco de los mismos en los dos estados analizados. Adems, el nmero de cajas de las plantas fue mayor tanto en aquellas inoculadas slo con J49 como en las coinoculadas, aunque su peso seco areo no mostr diferencias con el de plantas inoculadas slo con SEMIA 6144. Las plantas de man inoculadas con la cepa de P. fluorescens tanto en inoculo mixto como individual no mostraron variaciones en los parmetros analizados respecto a las plantas inoculadas con SEMIA e incluso con el control negativo. La coinoculacin de plantas de man con una bacteria solubilizadora de fosfato y una bacteria simbitica fijadora de nitrgeno increment algunos parmetros de crecimiento en dicho cultivo.
no fue significativo. Segn nuestros resultados las combinaciones de Azospirillum con Paenibacillus y Azotobacter produjeron efectos sinrgicos sobre el cultivo de trigo. Futuros ensayos deberan tener en cuenta el estudio de las dosis ptimas para las combinaciones con el resto de los microorganismos evaluados.
P110 - 27888 EFECTO DE Azospirillum brasilense CD EN LA MICROPROPAGACIN DE FRUTILLA. LARRABURU, EZEQUIEL; SCHIAFFINO, GABRIELA; EGEA, CLARISA; LLORENTE, BERTA
Universidad de Lujn Introduccin: La frutilla (Fragaria x ananassa Duch) es propagada por estolones, divisin de coronas o micropropagacin. La propagacin in vitro es recomendada para conservar germoplasma y producir plantas durante todo el ao. Adems, el uso de meristemas como explantos permite obtener plantas libres de virus. Aromas es el cultivar ms productivo de da neutro, se adapta a zonas costeras y es tolerante a cambios climticos; produce frutos de gran firmeza, color rojo intenso uniforme y buen sabor. El cultivar de gran aceptacin en el mercado internacional es el Albion que produce frutos de buen sabor y gran tamao. Azospirillum brasilense, rizobacteria que promueve el crecimiento y desarrollo de determinadas plantas, ha sido aislada de algunos cultivares de frutilla. Se ha descrito en otras especies que la inoculacin con esta bacteria reduce las alteraciones inducidas por las condiciones de cultivo in vitro. Objetivos: El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de A. brasilense Cd en la rizognesis de dos cultivares de frutilla micropropagada. Mtodos: Brotes terminales de los cultivares Aromas y Albion fueron desinfectados con hipoclorito de sodio comercial 10% y enjuagados tres veces con agua estril. Se aislaron meristemas (0,3-0,5mm) bajo microscopio estereoscpico (5X) en condiciones de esterilidad y se cultivaron en el medio Murashige-Skoog (MS) suplementado con 3% sacarosa, 0,7% agar, 4,44M bencilamino purina, 0,49M cido indolbutrico y 0,58M cido giberlico. Los brotes producidos se multiplicaron en el mismo medio con repiques cada 4 semanas. El enraizamiento se realiz en MS con sales a mitad de concentracin libre de fitohormonas inoculando con A. brasilense Cd (107 UFC). Los controles fueron plantas sin inocular. Se evaluaron pesos fresco y seco de parte area y de races, nmero de hojas y races, absorcin y longitud radicular a las 3 semanas de cultivo. Los datos fueron analizados mediante ANOVA y comparacin mltiple de medias utilizando el programa SPSS. Resultados: Cultivar Aromas: Se logr el desarrollo asptico del 75% de las yemas con una tasa de multiplicacin mensual de 4,6. El 74,5% de las microestacas inoculadas enraizaron a los 7 das de cultivo superando a los controles en el mismo perodo de tiempo (37,8%) y durante todo el ensayo. Adems, la inoculacin con A. brasilense Cd produjo incrementos significativos en el peso fresco (32%) y seco (16%) de parte area, nmero de hojas (12%) y nmero de races (23%) respecto a los controles. Cultivar Albion: Se obtuvo el establecimiento y desarrollo de 75,6% de las yemas y una tasa de multiplicacin mensual de 4,5. Si bien la inoculacin con A. brasilense Cd produjo un mayor porcentaje de plantas enraizadas (80%) respecto a los controles (44%), no se detectaron diferencias estadsticamente significativas en los otros parmetros evaluados. En ambos cultivares de frutilla se observ que la inoculacin con A. brasilense Cd produce mayor porcentaje de enraizamiento aunque solo en el cultivar Aromas produce incrementos significativos en pesos fresco y seco de parte area y nmero de hojas y de races.
P109 - 27887 PROMOCIN DEL CRECIMIENTO TEMPRANO E INCREMENTOS EN EL RINDE COMBINANDO Azospirillum brasilense CON OTRAS BACTERIAS SOBRE EL CULTIVO DE TRIGO A CAMPO. PICCINETTI, CARLOS; GARCIA, JULIA E; PUENTE, MARIANA L; RUBIO, ESTEBAN; VALLEJO, DANIELA; PERTICARI, ALEJANDRO
Instituto de Microbiologa y Zoologa Agrcola, INTA Los efectos benficos de la inoculacin con Azospirillum sobre los cultivos pueden ser mejorados por medio de la coinoculacin con otros microorganismos, ya que le provee a las plantas una nutricin ms balanceada y una mejora en la absorcin de nitrgeno, fsforo y otros nutrientes minerales. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto de diferentes microorganismos promotores en combinacin con Azospirillum brasilense sobre la productividad de trigo a campo. Los microorganismos utilizados fueron: Az39 (Azospirillum brasilense), AT19 (Azotobacter sp.), A25 (Rhizobium leguminosarum bv. trifolii), Z1 (Azorhizobium caulinodans) y NRRL4317 (Paenibacillus polymyxa), depositadas en la coleccin del Laboratorio BPCV, IMYZA, INTA Castelar. Para la preparacin de los inoculantes se utilizaron los medios lquidos de Sadasivan & Neyra para Az39; Burks para AT19; YEM para A25 y Z1, y BM para P. polymyxa NRRL4317. Los inoculantes de A25 y Z1se elaboraron en base a turba estril empleando un volumen de caldo necesario para obtener una humedad final del 40%. La concentracin de los inoculantes se ajust a 1x109 excepto el de P. polymyxa que se ajust 1x107 UFC/mL. Con los cultivos axnicos de cada uno de los microorganismos se inocularon las semillas de trigo previo a la siembra. El ensayo se realiz en el campo experimental del INTA Castelar durante la campaa 2008/09. La variedad utilizada fue Baguette Premium 11. Los parmetros de productividad que se midieron fueron: biomasa area verde y seca a fin de macollaje y biomasa area seca total y rendimiento en grano a cosecha. Los tratamientos fueron: 1- Testigo, 2- Az39, 3Az39+A25, 4- Az39 +Z1, 5- Az39 + AT19, 6- Az39 + NRRL4317. En la inoculacin simple la dosis fue de 10 mL/kg de semilla y para los tratamientos coinoculados 5 mL/kg de semilla de cada inoculante, el tratamiento testigo recibi 10mL de agua por kg de semilla. El diseo del ensayo fue en bloques completos al azar con 5 repeticiones. Los resultados se analizaron por medio de un ANOVA y las medias se compararon por el test de Duncan (p=0.05). En todos los parmetros evaluados la combinacin de A. brasilense Az39 con P. polymyxa NRRL4317 produjo incrementos significativos con respecto al testigo. En rendimiento el incremento fue del 20%. Comparado con la inoculacin simple de A. brasilense Az39, la coinoculacin con P. polymyxa increment significativamente la biomasa verde en 22%, la biomasa seca a fin de macollaje en 19% y el rendimiento en 16%. Con la combinacin de A. brasilense Az39 con Azotobacter AT19 tambin se increment el rendimiento significativamente respecto al testigo (13%), sin embargo este tratamiento no difiri respecto a la inoculacin simple. La inoculacin simple present un incremento en rendimiento con respeto al testigo del 3.11%, sin embargo, ste
P111 - 27900 ENRAIZAMIENTO IN VITRO DE Simmondsia chinensis JOJOBA BAJO CONDICIONES DE ESTRS SALINO INOCULANDO CON AZOSPIRILLUN BRASILENSE. GONZALEZ, ANA JULIA; BUSUSCOVICH, ANDREA; LARRABURU, EZEQUIEL; LLORENTE, BERTA.
Universidad Nacional de Lujn Introduccin: Jojoba es un arbusto dioico cuya importancia econmica radica en la produccin de cera lquida. Se propaga por medio de semillas generando una alta variabilidad o median-
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te estacas con dificultades en el enraizamiento. El cultivo in vitro permite clonar ejemplares con caractersticas deseables y estudiar el efecto de la salinidad. Se ha comprobado que Azospirillum brasilense promueve el enraizamiento in vitro de jojoba y sobrevive bajo condiciones de salinidad, pero no se ha encontrado bibliografa sobre la interaccin entre esta bacteria y jojoba bajo estrs salino. Objetivos: El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de las cepas Cd y Az39 de A. brasilense en la rizognesis in vitro de jojoba bajo condiciones de estrs salino. Mtodos: Se utiliz un pool clonal de estacas cultivadas en el medio MurashigeSkoog, vitaminas de Gamborg, 3% sacarosa, 0,7% agar (MB) y 4,44 M bencilamino purina. Para inducir la formacin de races, brotes de 2 cm se cultivaron en MB con sales a mitad de concentracin (MR) y 49,2 M cido indolbutrico durante 6 das. Posteriormente, se transfirieron a MR libre de hormonas con diferentes concentraciones de NaCl (0; 80 y 160mM). Luego del transplante se inocul la base de los brotes con 107 UFC de A. brasilense Cd o Az39. Los controles fueron plantas sin inocular. Durante 45 das de cultivo se evalu el porcentaje de enraizamiento. Al final del ensayo se realiz el aislamiento de las bacterias y se determinaron pesos fresco y seco de parte area y de races, presencia de callo basal, absorcin y longitud radicular. Los datos fueron analizados mediante ANOVA y comparacin mltiple de medias utilizando el programa SPSS. Resultados: Las microestacas inoculadas con las cepas Cd y Az39 de A.brasilense en ausencia de NaCl incrementaron significativamente el porcentaje de plantas enraizadas a partir del da 20 para Az39 (45%) y del da 25 para Cd (55%) respecto de los controles que enraizaron 31%. En todos los tratamientos inoculados en ausencia de NaCl se redujo significativamente el porcentaje de brotes con presencia de callo basal. Esta diferencia se mantuvo tambin en los brotes inoculados con la cepa Cd en el medio con 80 mM de NaCl, el resto de los tratamientos tuvieron porcentajes similares de brotes con callo. Por otra parte, la inoculacin con A. brasilense no increment significativamente los otros parmetros evaluados respecto a los controles en ninguno de los tratamientos con NaCl. De los tratamientos inoculados se aislaron ambas cepas bacterianas indicando su sobrevida en las concentraciones de NaCl utilizadas. La inoculacin con A.brasilense Cd y Az39 estimula la rizognesis in vitro de jojoba y reduce la formacin de callo basal en ausencia de sal. No se observaron diferencias significativas en la los parmetros de desarrollo evaluados en medios de enraizamiento con 80 o 160mM NaCl. Estos resultados podran ser consecuencia de la dispersin de datos generada por la variabilidad inherente al pool clonal o que las altas concentraciones de NaCl modifiquen la interaccin A.brasilense-jojoba.
de los mismos. Con este fin se cultivaron plantas de cowpea en condiciones controladas bajo un diseo experimental completamente aleatorizado (DCA). Al cabo de 30 das se determin el peso seco del tejido areo (PSA), de los ndulos (PSN) y la actividad nitrogenasa por el mtodo de reduccin de acetileno. El anlisis estadstico consisti en un ANOVA, contrastndose las medias por medio del test de Tukey al 5%. Los anlisis de la varianza mostraron que el PSN y el PSA de las plantas fueron afectados significativamente por el aislamiento inoculado (F= 7.92, p<0.01; F= 17.70, p<0.01 respectivamente). Se diferenciaron 3 grupos con una capacidad de nodulacin, alta, media y baja. Se observ una correlacin significativa entre el PSA y PSN (r= 0.49, p<0.01). Mientras que la mayora de los aislamientos mostraron una capacidad media de reduccin de acetileno, esta fue alta en slo dos aislamientos. Las pruebas fisiolgicas permitieron diferenciar a los rizobios del grupo cowpea y agrupar separadamente a estos de los aislamientos que nodulan soja. Por otro lado el potencial de fijacin de nitrgeno de estas estirpes fue bajo, mostrando solo dos con alta capacidad de fijacin. Los resultados sugieren que muchos de estos rizobios si bien nodulan cowpea son bacterias simbiticas de otras leguminosas, entre las que prevalecen probablemente especies nativas.
P113 - 27956 CARACTERIZACIN DE UN AISLAMIENTO REALIZADO EN UN SUELO CON CULTIVO DE ALGODN A PARTIR DE COLONIAS MORFOTPICAS DE Azotobacter sp. COSSOLI, MARCELA R.; IGLESIAS, MARIA C
Facultad de Ciencias Agrarias Universidad Nacional del Nordeste La actividad algodonera es una de las ms significativas del Nordeste Argentino. Histricamente ha sido el principal cultivo en la regin NEA. En el 2008 se realiz un ensayo de biofertilizacin en algodn utilizando macetas con suelo proveniente de la localidad de Las Breas-Chaco (pH: 5,74; P: 36.25 ppm; Ca: 9.7 meq/ 100 g), uno de los inculos utilizados fue aislado a partir del mismo suelo, considerando las caractersticas morfotpicas de Azotobacter sp., es decir que, las colonias eran marrones oscuras cuya poblacin pertenecan a bacterias Gram (-) y el morfotipo celular corresponda a cocos. El inoculante generado contaba con una poblacin de 0,9.101 microorganismos por mL. A partir de lo expuesto se plantea como objetivo del presente trabajo, continuar los anlisis, incorporando tcnicas moleculares, que posibiliten confirmar que los microorganismos que se utilizaron eran fijadores de nitrgeno. Para ello, en este trabajo se utilizaron 4 muestras de suelo pertenecientes a las macetas del ensayo antes descripto. Se realiz el cultivo de microorganismos fijadores libres de nitrgeno aplicando 2 tcnicas: 1) Placa de suelo moldeado y 2) Siembra de suelo en medio lquido, utilizando en ambas la solucin salina standard de Winogradsky, como medio de cultivo, y como fuente carbonada, glucosa y manitol. Una vez que se produjo el crecimiento en las placas y tubos se procedi al repique de los mismos a tubos con medio de cultivo. En relacin a las tcnicas moleculares utilizadas, se realiz la extraccin del DNA de los suelos y de los cultivos logrados. Estos fueron amplificados mediante dos anlisis de Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), la primera utilizando primers universales para bacterias (DNA de suelo) y, la segunda, utilizando primer especficos para genes nif-H (DNA de suelos y cultivos). Luego, los productos obtenidos en ambas PCR fueron separados mediante electroforesis en gel de agarosa al 2% y teidos con bromuro de etidio. Estos anlisis fueron realizados en el Instituto de Investigaciones en Ingeniera Gentica y Biologa Molecular (INGEBI-CONICET). Cuando se realizaron los cultivos de microorganismos fijadores de nitrgeno, estos dieron positivos para todas las muestras, en ambas tcnicas utilizadas. Tambin fue positiva la amplificacin del DNA de suelo con primers universales. Cuando se utilizaron primers especficos para genes nif-H, las amplificaciones del DNA de suelo y de los repiques de las placas de suelo fueron positivas, no as las amplificaciones del DNA extrado de los cultivos en medios lquidos. De esta forma se concluye en que los microorganismos que se lograron aislar mediante cultivo en placas de suelo, cuyas colonias tenan el morfotipo caracterstico de Azotobacter, corresponderan a fijadores libres de nitrgeno.
P112 - 27953 CARACTERIZACIN DEL COMPORTAMIENTO SIMBITICO Y FISILOGICO DE AISLAMIENTOS DE RIZOBIOS QUE NODULAN Vigna unguiculata COWPEA, RECUPERADOS DE SUELOS DEL NOROESTE ARGENTINO (NOA). VIDEIRA, L; SALVUCCI, D; PASTORINO, G; DIOSMA, G; BALAGUE, L; MARTINEZ ALCANTARA, V; BALATTI, P
Ctedra de Microbiologa Agrcola- Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales-Universidad Nacional de La Plata El cowpea Vigna unguiculata (Phaseolae), es una especie que se adapta a diferentes condiciones edafoclimticas, tiene un alto valor nutricional (20-28% de protenas), siendo una planta promiscua, se asocia estableciendo una simbiosis con bacterias del gnero Rhizobium y Bradyrhizobium. Esta leguminosa nodula con aproximadamente 42 especies que se conocen como rizobios cowpea. Los suelos prstinos en los que crecen leguminosas nativas que se encuentran en distintos ambientes del Noroeste Argentino (NOA), son potenciales refugios de estos rhizobios. Por ello a partir de muestras de suelos provenientes del NOA se aislaron rizobios utilizando a Vigna unguiculata como planta trampa, los que se caracterizaron fisiolgicamente. Estos resultados se analizaron en un anlisis multivariado con el coeficiente de similitud DICE y la tcnica UPGMA, observndose que la mayora de los aislamientos se asociaron en un cluster con un valor de similitud de 0.7. El objetivo de este trabajo fue confirmar la identidad de estos aislamientos y evaluar la capacidad simbitica
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P114 - 27959 DIVERSIDAD DE LOS RIZOBIOS QUE NODULAN LA SOJA EN LOS SUELOS DE LA PAMPA HMEDA E IDENTIFICACIN DE CEPAS PARA LA FABRICACIN DE INOCULANTES COMERCIALES. PASTORINO, G(1); LOPEZ, S M Y(2); BALATTI, P(1, 2, 3)
(1) Ctedra de Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata; (2) Comisin de Investigaciones Cientficas de la Provincia de Buenos Aires; (3) Centro de investigaciones en Fitopatologa, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata Las poblaciones bacterianas exticas en suelo son dinmicas y permanentemente se producen modificaciones a nivel gentico que resultan en la aparicin de poblaciones con caractersticas alteradas o con propiedades diferentes de la estirpe de origen. Esto es particularmente frecuente cuando se inoculan bacterias en ambientes exticos como es el caso de la inoculacin de las leguminosas, en donde la cepa inoculada muta con celeridad adquiriendo con frecuencia capacidades de sobrevivencia en el suelo pero perdiendo eficiencia en la fijacin de nitrgeno. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de las labranzas sobre las poblaciones de los rizobios del suelo como resultado de los distintos ambientes que se generan. En este contexto el objetivo es identificar aislamientos de cepas con aptitudes simbiticas superiores a las cepas parenterales que se utilizan en los inoculantes comerciales. A partir de muestras de suelo de la llanura pampeana provenientes de un lote bajo labranza convencional y antecesor maz y otro con siembra directa y antecesor soja, se realiz una serie de diluciones con el fin de determinar el nmero de rizobios por el nmero ms probable y aislar rizobios con capacidades simbiticas superiores a las estirpes parenterales. Los aislamientos se caracterizaron mediante pruebas fisiolgicas como la produccin de cido Indol actico (AIA) y la produccin de exopolisacridos. Por otro lado se evalu la supervivencia de rizobios sobre semillas y la eficiencia de fijacin de nitrgeno en condiciones controladas. La caracterizacin molecular de los aislamientos se bas en reacciones de PCR con primers especficos y BOX. La caracterizacin molecular con la reaccin de multiplex PCR confirm que los aislamientos pertenecen al gnero Bradyrhizobium. Ms an, los patrones de amplificacin obtenidos con el primer BOX agruparon a los aislamientos en dos clusters, unos con patrones similares a las cepas de B. japonicum (E109, SEMIA5079 y SEMIA5080) y otros con las de B. elkanii (SEMIA587 y SEMIA5019), lo que sugiere que los suelos contienen cepas de ambas especies. Las estirpes de B. elkanii produjeron, tal cual, era de esperar mayor cantidad de AIA que las estirpes de Bradyrhizobium que no producen esta hormona o lo hacen en baja cantidad. Adems, las estirpes difieren en su capacidad de fijacin de nitrgeno. Todos estos resultados confirman que las cepas naturalizadas en los suelos analizados derivan de inoculantes comerciales formulados en base a B. japonicum y B elkanii y que algunos de esos mutantes naturales tienen capacidades simbiticas que superan a las cepas parenterales.
mticas que ocurren mientras el mosto es fermentado. Varias actividades enzimticas pueden mejorar el proceso de elaboracin de vino y as su calidad. Las pectinasas cumplen importantes funciones en el proceso de elaboracin del vino. Incrementan la extraccin de sustancias que contribuyen al color y al aroma, mejoran la clarificacin y facilitan la filtracin del vino. Objetivos: a) comparar perfiles analticos correspondientes a fermentaciones de 2 aos consecutivos llevadas a cabo con la cepa Saccharomyces cerevisiae BSc562; b) determinar la actividad pectinoltica en dichas fermentaciones. Materiales y Mtodos: se llevaron a cabo microvinificaciones con mosto de uva sin prensar perteneciente al varietal Pedro Gimenez (3 lts en envases de 5 lts de capacidad). El inculo inicial fu de tres millones de clulas por mililitro. Se determinaron los siguientes valores finales (g/l): azcares reductores y totales, acidez total y voltil, glicerol, densidad, etanol (% v 20C) y viscosidad (Pa s). Durante el transcurso de las fermentaciones 2008 y 2009 se extrajeron muestras y se cuantific la actividad pectinoltica. Los datos fueron analizados estadsticamente mediante el test de ANOVA de medidas repetidas - Programa SPSS (versin 17.0). Resultados: las concentraciones iniciales de azcares fueron de 30 y 23Bx respectivamente. Se encontraron diferencias significativas en todos los valores finales de los perfiles analticos cuando se compararon ambas fermentaciones. Los registros obtenidos en la actividad pectinoltica fueron fluctuantes a lo largo de las vinificaciones. Este comportamiento en los niveles enzimticos pueden deberse a las caractersticas propias del medio fermentante (no homogneo) el cual puede influir en la posibilidad de acceso de las enzimas a sus sustratos especficos. La actividad pectinoltica determinada en la fermentacin 2009 fue significativamente superior en los 2 primeros das. La fermentacin del 2008 produjo la mayor actividad entre el tercer y sexto da. En ambas vinificaciones, a partir del da 9 dicha actividad comenz a disminuir y se mantuvo con valores bajos hasta el final del proceso. Conclusiones: se detectaron los valores mximos de actividad pectinoltica en la primera etapa de las fermentaciones, donde las concentraciones de azcares son ms elevadas, lo cual difiere con antecedentes en el tema. Los resultados obtenidos sugieren que la cepa Saccharomyces cerevisiae BSc562 puede realizar un aporte positivo en cuanto a la degradacin de polmeros presentes en el mosto, posibilitando su empleo como cultivo starter.
P116 - 27973 EFECTO DEL ESTRS ABITICO SOBRE LA INTERACCIN MAN-RIZOBIO: PAPEL DEL METABOLISMO DE TREHALOSA. DARDANELLI, MARTA SUSANA; BUENO, MIGUEL ANGEL; FUMERO, MARIA VERONICA; MEDEOT, DANIELA BEATRIZ; PAULUCCI, NATALIA SOLEDAD; WOELKE, MARIELA ROSANA; VICARIO, JULIO CESAR; GARCIA, MIRTA BEATRIZ
Universidad Nacional de Rio Cuarto En la agricultura, la fijacin simbitica del nitrgeno es relevante en leguminosas que establecen asociaciones con bacterias que reciben el nombre de rizobios. Esa interaccin es crucial para evitar problemas derivados del uso de fertilizantes de origen industrial y permitir el desarrollo de sistemas agrcolas sustentables respetuosos del medio ambiente as como cubrir las futuras necesidades de alimentacin. El cultivo de man localizado en Crdoba, concentra el 96% de la produccin nacional con un alto impacto socio-econmico. A fin de lograr mayor sustentabilidad, es necesario acrecentar los conocimientos cientfico-tecnolgicos existentes para lograr que el man desarrolle en nuevas reas de siembra que muestran condiciones adversas. Para ello este estudio tiene como objetivo estudiar el papel que tiene el metabolismo de trehalosa, en plantas de man noduladas por diferentes rizobios simbiontes en situaciones de estrs salino e hdrico. Los rizobios recomendados para inoculantes comerciales, TAL1000 (NifTAL, USA) y SEMIA6144 (MIRCEN/FEPAGRO, Brasil), fueron crecidos en medio YEM a 28 C (Dardanelli et al 1997), en diferentes condiciones experimentales: tratamiento control, tratamientos salino (100 mM NaCl) e hdrico (20 mM PEG6000). Las semillas de Arachis hypogaea (man) cultivar PEPE cedidas por el INTA Manfredi (Crdoba) fueron tratadas segn Dardanelli et al (2009). Los ensayos de nodulacin se realizaron inoculando con
P115 - 27966 DETERMINACION DE PECTINASAS EN VINIFICACIONES LLEVADAS A CABO POR UNA CEPA Saccharomyces cerevisiae DE INTERES ENOLOGICO. RODRIGUEZ ASSAF, LETICIA ANAHI(1 , 2); MATURANO, PAOLA(1); TORO, MARIA EUGENIA(1); C DE FIGUEROA, LUCIA INES(3, 4); VAZQUEZ, FABIO(1)
(1) IBT-FI-Universidad Nacional de San Juan - San Juan. (2) Departamento de Biologa-FCEFyN Universidad Nacional de San Juan- San Juan. (3) PROIMI-CONICET- Tucumn. (4) FBQyFUniversidad Nacional de Tucumn - Tucumn. Introduccin: la fermentacin del jugo de uva que resulta en vino es un complejo proceso microbiolgico, en el cual las levaduras juegan un rol central. La principal especie involucrada en dicho proceso es Saccharomyces cerevisiae. El vino puede ser considerado como un producto derivado de reacciones enzi-
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una suspensin de 108 rizobios viables/mL, crecidos en diferentes condiciones experimentales. Los sistemas de nodulacin fueron colocados en cmara de plantas por un mes y regados con solucin de Yensen libre de nitrgeno (tratamiento control), con 100 mM NaCl o 20 mM PEG6000 (tratamiento salino e hdrico). Se determin la cintica de nodulacin, parmetros de crecimiento de las plantas y de los ndulos y contenido de carbohidratos por cromatografa gaseosa (Streeter y Strimbu 1998). En diferentes extractos vegetales se determin la actividad trehalasa (Mller et al 1994), trehalosa-6 fostato sintasa (Salminen y Streeter 1986) y trehalosa-5 fostato fostasa (Bartlett 1958). Ambos rizobios fueron capaces de nodular plantas controles y tratadas con 20 mM de PEG6000 pero solamente SEMIA6144 fue capaz de nodular en estrs salino. El estudio de cintica de nodulacin no mostr diferencia en el da de aparicin de los ndulos pero si una reduccin el nmero de los mismos cuando el ensayo se realiz en estrs salino. El peso seco de los diferentes rganos vegetales fue menor cuando el estrs aplicado fue el salino, no siendo la diferencia significativa en estrs hdrico. Todos los tejidos vegetales mostraron sacarosa, maltosa, glucosa y fructosa pero la trehalosa solo fue detectada en ndulos, siendo mayor su contenido en los obtenidos de plantas con sal. En las tres condiciones experimentales se determinaron actividades de sntesis de trehalosa con una mayor actividad de trehalasa en ndulos controles. En conclusin la trehalosa puede tener un papel importante en la tolerancia de plantas de man noduladas en estrs salino, siendo menor su accin cuando el estrs es hdrico.
Periconia macrospinosa. Con el fin de determinar los efectos sobre plantas de trigo, dos de las cepas, A. pullulans y la cepa 15, an no identificada, fueron inoculadas en este hospedante. Los resultados mostraron que en ningn caso las cepas ocasionaron efectos promotores significativos, evaluados como peso seco y longitud de vstagos, sin embargo, tampoco fueron observados efectos inhibitorios. Por otra parte, 30 das despus de la inoculacin, los porcentajes de colonizacin fueron superiores al 30% para A. pullulans y al 40% para la cepa 15, alcanzando el 60% y 70%, respectivamente, 75 das despus de la inoculacin. Se est realizando la evaluacin del efecto en plantas de trigo de las cepas restantes, as como la identificacin, a travs de tcnicas moleculares de aquellas que no mostraron formacin de estructuras reproductivas.
P118 - 28034 PRODUCCIN DE DIACETILO, ACETONA Y 2,3BUTILENGLICOL DURANTE EL CRECIMIENTO DE Oenococcus oeni DE VINOS EN PRESENCIA DE CIDOS ORGNICOS, JUGO DE UVA Y/O DIXIDO DE AZUFRE. MATURANO, CARMEN; SAGUIR, FABIANA
Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumn. En vinificacin, Oenococcus oeni cumple un papel beneficioso conduciendo la fermentacin malolctica, la cual produce la desacidificacin del vino dando un producto ms agradable. Adems ocurren otros cambios beneficiosos, uno de los ms evidentes es el desarrollo de un carcter mantecoso debido a la formacin de diacetilo, que en concentracin inferior a 5-7 mg/l y combinado con otros componentes le proporciona al vino un aroma a nueces y tostado. En un trabajo previo seleccionamos las cepas de O. oeni MS10, MS21 y MS49 con elevadas actividades glucosidasas. Investigamos el comportamiento y la produccin de diacetilo, acetona y 2,3-butilenglicol en las citadas cepas en presencia de sustratos encontrados en el medio natural y SO2 en MRS + jugo de tomate 15%, pH 4,8 (control) y adicionado individualmente o combinado con cidos L-mlico (2g/l) y ctrico (0.7 g/l), SO2 (80 mg/l) y jugo de uva 10% en lugar de jugo de tomate. Diactetilo, acetona y 2,3 butilenglicol se determinaron espectrofotometricamente como valor combinado. cidos L-mlico y ctrico por mtodos enzimticos. En el control, las cepas MS10, MS21 y MS49 alcanzaron una concentracin celular final de 3,98x108, 6,02x107 y 1,17x107, respectivamente. En general, los cidos orgnicos y jugo de uva estimularon los parmetros de crecimiento, siendo el efecto ms marcado en el medio adicionado con los sustratos de manera combinada. En esta condicin, la cepa MS21 mostr el mayor efecto estimulatorio de 27% sobre la concentracin celular final con respecto al control. Dixido de azufre presento un efecto inhibitorio de 25,3% sobre la concentracin celular final solamente en la cepa MS10. En presencia de cido L-mlico el pH incremento alrededor de 1,5 unidades en las primeras horas de fase exponencial. A este tiempo el cido orgnico fue casi completamente consumido. Por el contrario, el cido ctrico fue utilizado con una velocidad menor, consumindose totalmente al final del crecimiento. La produccin de diacetilo, acetona y 2,3-butilenglicol vari en funcin de la cepa, condiciones de cultivo. En el control, la cepa MS49 produjo la mxima concentracin de los compuestos aromticos (5,580,15 mg/l). En general, la adicin de los sustratos al medio estimul su produccin. La cepa MS10 alcanzo un valor mximo de 4,98 0,21 mg/ l en presencia de citrato y/o jugo de uva. Las cepas MS49 y MS21 en presencia de cido L-mlico y SO2 produjeron las mximas concentraciones de 6,490,35 y 6,870,32 mg/l, respectivamente, superando el lmite aceptable en vino. En conclusin, las cepas ensayadas desarrollaron favorablemente en presencia de los cidos orgnicos y jugo de uva y en general, su crecimiento no fue inhibido por el dixido de azufre. La produccin de los compuestos aromticos vari en funcin de la cepa y condiciones de cultivo, indicando la importancia de su caracterizacin como criterio para la seleccin de cepas de O. oeni que acten en condiciones de vinificacin.
P117 - 27975 IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE HONGOS DSE AISLADOS A PARTIR DE PLANTAS DE TRIGO. ROTHEN, CAROLINA; CISNEROS, GABRIELA; LO, TAI EN; FERNANDEZ, LAURA; MARTINEZ, ALICIA; RODRIGUEZ, ALEJANDRA
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Los hongos DSE (Dark Septate Endophytes) son un grupo heterogneo de endofitos que habitan las races de una gran variedad de plantas, colonizndolas a travs de hifas intercelulares y estructuras intracelulares melanizadas. Poco se conoce acerca de la biologa de estos hongos y del papel que desempean en el ecosistema, contndose, en la mayora de los casos con trabajos realizados en el hemisferio norte. Por otra parte, no siempre pueden identificarse por medio de caracteres morfolgicos, debido a la ausencia de estructuras reproductivas en muchas de las cepas. Las asociaciones de los hongos DSE con la planta hospedante, tal como ocurre con las micorrizas arbusculares, pueden ser includas en un amplio rango que abarca desde el mutualismo al parasitismo. El objetivo de este trabajo es identificar y caracterizar morfolgica y fisiolgicamente cepas autctonas de hongos DSE obtenidas a partir de plantas de trigo de la provincia de Buenos Aires y evaluar sus efectos en el hospedante. Para ello, se determin la dinmica de crecimiento de 8 cepas de hongos DSE en dos temperaturas (4 y 25C) y tres medios de cultivos (Agar malta, AM; Agar papa glucosado, APG; Agar harina de maz, CMA) a lo largo de 20 das. Adems, en cada caso, se realizaron observaciones al microscopio ptico con el fin de realizar la identificacin a travs de caracteres morfolgicos y/o determinar la formacin de estructuras particulares. Para la caracterizacin fisiolgica, se determin la produccin de enzimas hidrolticas mediante ensayos cualitativos en medio slido y la produccin de indoles en medio lquido. Las cepas evaluadas pudieron agruparse como rpidas o lentas segn la velocidad de crecimiento, pero presentaron una gran diversidad tanto morfolgica como fisiolgica entre ellas. Slo una present actividad celuloltica, mientras que otra fue la nica con actividad proteoltica. La mitad de ellas produjeron lipasas y la mayora amilasas. En ningn caso se detectaron actividades pectinasas, xilanasas y quitinasas. En el testeo de la produccin de indoles, 5 de las cepas mostraron resultados positivos. Cuatro cepas pudieron ser identificadas mediante caracteres morfolgicos como Aureobasidium pullulans, Dreschlera dyctioydes, Dreschlera coycis y
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P119 - 28062 INTERACCIN DE GENOTIPOS DE ARROZ CON AISLAMIENTOS DE BACTERIAS MICROAEROFILICAS FIJADORAS DE NITRGENO. ANZOVINI, M B; ESCOBAR ORTEGA, J; DI SALVO, L P; GARCIA DE SALAMONE, I E
Ctedra de Microbiologa Agrcola y Ambiental, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires (FAUBA) La inoculacin con bacterias microaeroflicas fijadoras de nitrgeno (N) constituye una alternativa para aumentar la productividad de los cultivos reduciendo el aporte de insumos y favoreciendo la sustentabilidad agrcola. El objetivo de este trabajo fue estudiar las rizosferas de plantas de arroz en situacin de cultivo e incluidas en un experimento de inoculacin con Azospirillum brasilense. Utilizando muestras de races en dos momentos del ciclo ontognico del cultivo (antesis y madurez fisiolgica), se realiz el recuento del nmero ms probable (NMP) de microorganismos microaeroflicos fijadores de N sobre un medio semislido libre de N (NFb). Adems, se evalu la diversidad fisiolgica mediante la obtencin de perfiles de utilizacin de fuentes carbonadas (CLPP). A partir de los tubos de NMP se obtuvieron aislamientos de bacterias microaerofilicas fijadoras de N. De un total de 15 aislamientos obtenidos, cinco fueron estudiados en dos tipos de ensayos: de germinacin y en condiciones de invernculo. Se utilizaron tres variedades de arroz (Camba INTA, Supremo I y Yerua) las cuales fueron incluidas en ensayos con diseo factorial con los cinco aislamientos y un control, permitiendo evaluar la interaccin cepa bacteriana x genotipo vegetal. Se determin el porcentaje de germinacin a los 4 das y la longitud del tallo y de la raz, peso hmedo y seco de las plntulas luego de 7 das desde el inicio de cada ensayo. El anlisis de CLPP en antesis y madurez fisiolgica permiti observar que la fisiologa de las comunidades microbianas rizosfricas de plantas inoculadas present diferencias con respecto al control. La incorporacin de un microorganismo exgeno gener un impacto en la microflora nativa en antesis. Sin embargo dichas diferencias no se observaron en madurez fisiolgica, comprobndose que el impacto generado fue reversible. No se observaron efectos en el porcentaje de germinacin de las tres variedades cuando fueron inoculadas con las cepas seleccionadas. La inoculacin de semillas con las cepas aisladas permiti observar una interaccin significativa entre las cepas y los genotipos utilizados. Para todas las variables estudiadas, los genotipos vegetales fueron significativamente diferentes. Las cepas 4 y 5 de mejor comportamiento, incrementaron, significativamente respecto al testigo sin inocular, la longitud de la raz, del tallo de las plntulas. En estas dos variables se observaron interacciones significativas. La cepa 3 fue la que provoc el mayor incremento en el peso seco de las plntulas de las tres variedades de arroz pero no se diferenci de las cepas 4 y 5. Los resultados demuestran que la prctica de inoculacin con bacterias microaerofilicas fijadoras de N en el cultivo de arroz tiene un alto potencial en programas de agricultura sustentable.
el momento las condiciones ptimas de crecimiento para algunos de estos hongos. Estas condiciones de cultivo, juegan un importante rol en la formacin y secrecin de endoglucanas (EGs), enzimas implicadas en la hidrlisis de la celulosa. En este sentido, el objetivo de este trabajo fue investigar el efecto combinado de distintas temperaturas, pHs y tiempos de incubacin, sobre la produccin de EGs en Coriolus versicolor var antarcticus. El hongo fue cultivado a 25, 29 y 33 C, a pH 3,5; 4,5 y 5,5 en 50 mL de medio conteniendo 12,7 g/L extracto de malta y 0,5% extracto soluble de maz durante 7, 10 y 14 das. En estos das, se recolectaron los sobrenadantes para la cuantificacin enzimtica. La actividad EG fue determinada por el mtodo del cido dinitrosaliclico mediante la liberacin de azcares reductores. Las reacciones se realizaron con 0,1 mL de carboximetilcelulosa al 2% preparada en buffer acetato de sodio (0,05 M) pH 4,8 y 0,1 mL del extracto enzimtico. Las mismas fueron incubadas a 50 C por 60 min. Los anlisis estadsticos se realizaron con el programa Statgraphics Plus. Se observaron diferencias estadsticamente significativas, con un nivel de confianza del 95% entre las distintas condiciones ensayadas. La mayor actividad enzimtica se observ al dcimo da de incubacin a la temperatura de 25 C y pH 4,5 en el medio de cultivo. De acuerdo a los resultados obtenidos, las condiciones antes mencionadas favorecen la mayor produccin de EGs en C. versicolor var antarcticus. Estos resultados preliminares son de gran importancia y sientan las bases para continuar con el proceso de optimizar las condiciones de produccin de EGs a escalas industriales.
P121 - 28141 COINOCULACIN DE SOJA CON Bradyrhizobium japonicum Y Azotobacter chroococcum. DE FALCO, P(1); PENON, E(1); DI CIOCCO, C(1); CORREA, O(2); DIAZ ZORITA, M(3); GALVAN, M(1); GIMENEZ, L(1); HEREDIA, J(1)
(1) Universidad Nacional de Lujn; (2) Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires; (3) CONICET Introduccin: Las bacterias como Azotobacter chroococcum podran elevar la fijacin de nitrgeno reduciendo la prdida de nitrgeno de los suelos y mejorar la eficiencia de absorcin de agua y nutrientes de soja al aumentar el desarrollo radicular. Objetivo: Evaluar el efecto de la coinoculacin sobre el rendimiento, el nmero, peso de ndulos y la fijacin de nitrgeno de soja. Mtodos: Se realizaron dos ensayos en el campo experimental de la Universidad Nacional de Lujn, en un suelo Argiudol Tpico donde se evalu en parcelas experimentales la coinoculacin de soja con Bradyrhizobium japonicum cepa E 109 + A. chroococcum cepas BNM272 y BNM273 frente a la inoculacin de Bradyrhizobium japonicum cepa E 109. En el 1 ensayo se sembr el cultivar Don Mario 4600 el 11-12-2008 y se cosech el 3-042009 en R7. Se midi el nmero y peso de ndulos, el rendimiento y la fijacin de nitrgeno. En el segundo ensayo se implant el cultivar Don Mario 3700 el 13-1-2010 y se cosech el 20-04-2010. Las condiciones experimentales fueron semejantes al primer ensayo, siendo la principal diferencia el nivel de precipitaciones: de siembra a cosecha en el primer ensayo llovieron 275 mm y en el segundo: 712 mm. En el 2 ensayo no se evalu fijacin de nitrgeno. Los datos se analizaron por ANVA y las diferencias se compararon por LSD (a = 0,05). Resultados: En los dos ensayos el rendimiento no vari entre los tratamientos ni entre las campaas (tabla). La coinoculacin con A. chroococcum + B. japonicum aument el peso seco de los ndulos (2008-2009). En 2009-2010 fue mayor el peso de ndulos (g m-2) que en el ciclo anterior sin observarse diferencias entre los tratamientos. La cantidad de N fijada evaluada en el 1 ensayo no mostr diferencias significativas.
Tabla. Rendimiento, peso seco, nmero de ndulos y fijacin de N de soja segn el tipo de inculo. Promedios desvo estndar con la misma letra en cada columna no difieren significativamente segn DSM (P<0,05). B j: Bradyrhizobium japonicum. A c: Azotobacter chroococcum Ciclo agrcola Inculo Granos (Kg ha-) 2055961a 19721183a 2106640a 1889515a Peso ndulos N ndulos (g m-) m- 0,820,52a 1,551,16b 4,062,76c 3,811,44c 498359a 684245a 522217a 639311a N fijado (Kg ha -) 47,06a 44,76a no evaluado no evaluado
P120 - 28091 EFECTO COMBINADO DE LA TEMPERATURA, PH Y TIEMPO DE INCUBACION SOBRE LA PRODUCCION DE ENDOGLUCANASAS EN EL HONGO DE PUDRICION BLANCA Coriolus versicolor var antarcticus. GIORGIO, ERNESTO MARTIN (1); FONSECA, MARIA ISABEL(1); ZALAZAR, CINTIA (1); CONIGLIO, ROMINA(1); ABATE, CARLOS(2); VILLALBA, LAURA(1); ZAPATA, PEDRO(1)
(1)Laboratorio de Biotecnologa Molecular. Mdulo de Farmacia y Bioqumica. Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones. (2)Departamento de Ecologa Microbiana, PROIMI/CONICET. San Miguel de Tucumn. Los hongos de pudricin blanca presentan una elevada capacidad degradativa sobre los materiales lignocelulolticos, debido a la presencia de un espectro de enzimas que secretan al medio. Se han descripto una amplia variedad de enzimas hidrolticas y oxidativas con capacidad de liberar productos monmericos de la celulosa y hemicelulosa, as como de oxidar la lignina y otros compuestos policclicos. Sin embargo, no se han descripto hasta
2008-2009 2008-2009 2009-2010 2009-2010
Bj Bj+Ac Bj Bj+Ac
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La soja no present diferencias significativas entre tratamientos ni en el rendimiento ni en el nmero de ndulos en las dos campaas. En el 1 ensayo la fijacin de nitrgeno no mostr diferencias significativas entre los tratamientos posiblemente debido a que la principal limitante fue la falta de agua y no el nitrgeno, el peso de ndulos en las plantas coinoculadas super a las inoculadas. En el ciclo agrcola 2009-2010 la lluvia cada durante el cultivo fue casi tres veces superior y las situaciones de anegamiento temporal sucedidas pueden haber limitado el desarrollo del cultivo.
P123 27152 - ESTUDIO COMPARATIVO DE LA SENSIBILIDAD A ONCE ANTIBITICOS EN NEUMOCOCOS AISLADOS DE PACIENTES PEDITRICOS CON OTITIS MEDIA AGUDA Y CON INFECCIONES INVASIVAS. REIJTMAN, VANESA; HERNANDEZ, CLAUDIA; PINHEIRO, JOSE LUIS; BERNALDEZ, PATRICIA; SOMMERFLECK, PATRICIA; LOPARDO, HORACIO
Hospital Nacional de Pediatra Dr. Juan P.Garrahan Introduccin: Streptococcus pneumoniae es un microorganismo prevalente tanto en infecciones invasivas (INV) como en otitis media aguda (OMA) y sinusitis aguda. El conocimiento de su resistencia a los antibiticos permite establecer tratamientos empricos iniciales, elegir alternativas para pacientes alrgicos y seleccionar el antibitico indicado para cada caso. Objetivo: (1) Comparar la sensibilidad a once antibiticos [penicilina (PEN), cefotaxima (CTX), eritromicina (ERY), clindamicina (CLI), rifampicina (RIF), trimetoprima-sulfametoxazol (TMS), tetraciclina (TET), cloranfenicol (CLO), vancomicina (VAN), levofloxacina (LEV) y ofloxacina (OFL)] en neumococos aislados de pacientes peditricos con OMA, con la observada en nios con INV. Materiales y mtodos: a lo largo de un ao (mayo de 2009-abril de 2010) se estudiaron los pacientes que consultaron por OMA al Servicio de ORL del hospital y los que fueron atendidos por INV como pacientes ambulatorios o se internaron en este hospital. Las muestras de odo fueron obtenidas por puncin timpnica. Los pacientes, sus padres o tutores acordaron la realizacin de los procedimientos mediante la firma de una planilla de consentimiento informado. La identificacin a nivel de especie se realiz mediante las pruebas de catalasa, hemlisis en agar sangre ovina, optoquina y solubilidad en bilis. La sensibilidad a PEN y CTX fue estudiada por Etest. Para los otros antibiticos se emple el mtodo de difusin con discos segn recomendaciones del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Para PEN se utilizaron los puntos de corte para el tratamiento por va oral y para CTX los recomendados para no meningitis. Resultados: se estudiaron 99 aislamientos provenientes de nios con OMA y 65 de nios con INV obtenidas de materiales normalmente estriles: hemocultivos (50), lquidos cefalorraqudeos (2), articulares (3), pleurales (6), biopsias pulmonares (1), puncines orbitarias (1), abscesos (1) y punciones de tejidos blandos (1). En la tabla se muestran los porcentajes de aislamientos con sensibilidad intermedia (I) y resistencia (R) a PEN, ERY, CLI, TMS y TET para aislamientos de OMA y de INV. Todos los neumococos resultaron sensibles a CTX, RIF, CLO, VAN, LEV y OFL. La CIM50 y la CIM90 para PEN y CRO fueron idnticas (OMA: 0,016 y 0,19 g/ml; INV: 0,023 y 0,38 respectivamente).
ATB OMA (I) OMA (R) INV (I) INV (R) PEN 32,3 0 29,2 0 ERY 1 23,2 0 20 CLI 0 6,1 0 3,1 TMS 2 20,2 3,1 29,2 TET 0 22,2 0 7,7

P122 27120 - RIESGO BIOLGICO EN EL AMBIENTE DE UNA UNIDAD DE TERAPIA INTENSIVA. FERNANDEZ, M; MANGIATERRA, M; GIUSIANO, G
Universidad Nacional del Nordeste El incremento de las infecciones fngicas causadas por hongos ambientales es preocupante en los hospitales de todo el mundo. Estos hongos producen micosis invasoras con alta morbimortalidad y la mayor gravedad se presenta en salas con pacientes de alto riesgo, como las Unidades de Cuidados Intensivos (UCI). El monitoreo del aire en los hospitales es un elemental mecanismo de prevencin de estas infecciones. Dado el aumento detectado en las infecciones causadas por hongos ambientales en la UCI del Hospital Peditrico Juan Pablo II de Corrientes, el objetivo de este estudio fue conocer y monitorear la microbiota presente en dicha Unidad. Durante la primavera y otoo de 2009, cada 15 das, utilizando el colector de aire Surface Air Sampler, P.B.I. Intenational super 100 (SAS), se tomaron muestras del aire de la UCI y del rea de acceso, o rea contigua a la misma, considerada como ambiente control. Simultneamente, por el mtodo del hisopo, se tomaron muestras de las superficies de mesadas y de los aparatos biomdicos de la sala (Sup). Se calcul el nmero de unidades formadoras de colonias por metro cbico de aire (UFC/m), se identificaron los hongos a nivel de especie. La correlacin estadstica de variables discretas se estudi mediante test de Student y Chi cuadrado (p<0,05). Para el estudio de diversidad se aplic el ndice de Shannon-Wiener. El nmero de UFC/m hallado excedi considerablemente los parmetros establecidos internacionalmente para este tipo de ambiente. El recuento promedio de colonias en otoo fue de 557 UFC/m y en primavera de 336 UFC/m. En ambas estaciones la frecuencia de aislamientos fue considerablemente mayor dentro de la UCI que en el rea tomada como control. El ndice de diversidad fue alto en todos los casos y mostr mayor diversidad en el aire de la UCI (2,0) que en el rea control (1,2). ShannonWiener en las Sup fue de 1,5. Se aislaron 324 colonias de las que se distinguieron 47 levaduras y se identificaron 20 gneros y 57 especies de hongos filamentosos. Los gneros de hongos filamentosos ms frecuentes en el aire y Sup fueron Cladosporium, Penicillium y Aspergillus, seguidos por Acremonium, Fusarium, Curvularia y Chrysonilia. Su sola presencia no representa riesgo para el hombre, si bien, cargas elevadas de estos agentes como las halladas en la UCI, pueden generar situaciones riesgosas. Se hallaron especies consideradas inaceptables en ambientes cerrados, algunas potencialmente patgenas y otras productoras de toxinas, como Aspergillus fumigatus (A. fumigatus), Stachybotrys atra, A. flavus, A. niger complex, Acremonium strictum complex, Fusarium oxysporum y Trichoderma harzianum. Teniendo en cuenta que una UCI es un ambiente que debe permanecer libre de cualquier contaminacin microbiana y que los resultados obtenidos demuestran una importante contaminacin ambiental, por la alta concentracin fngica y la presencia de especies inaceptables en una ambiente interno, la estudiada es un rea de riesgo para sus habitantes. Conociendo el agente, el ambiente y los reservorios, es posible aplicar medidas de prevencin y control que contribuyan de manera directa a disminuir las tasas de infeccin nosocomial por hongos. La vigilancia epidemiolgica en los hospitales es de vital importancia para implementar medidas efectivas de control de infecciones.
Los niveles de resistencia resultaron comparables entre los neumococos aislados de INV y de OMA. Solamente se observ una diferencia significativa en la resistencia a TET (p = 0,01). Los valores bajos de CIM de PEN y CTX garantizan el uso emprico de amoxicilina para el tratamiento de OMA y el de CTX para INV.
P124 27162 - ANLISIS DE LAS PROPIEDADES ANTIMICROBIANAS DE DIFERENTES COMPUESTOS DERIVADOS DE NARINGINA. CELIZ, GUSTAVO (1, 2,3); DAZ, MIRTA (1,2); AUDISIO, CARINA (1, 2, 3)
(1)Universidad Nacional de Salta (UNSA), (2) INQUI, (3) CONICET Introduccin: existen muchos antecedentes sobre las propiedades biolgicas de naringina y en general se ha informado que no posee una actividad antimicrobiana relevante. La modificacin estructural en una molcula puede alterar su carcter hidroflico: hidrofbico y se espera que el nuevo compuesto posea propiedades diferentes. Resulta interesante entonces determinar si modificando la estructura de naringina se pueden obtener com-
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puestos que posean adems de sus conocidas propiedades biolgicas, actividades antimicrobianas. Objetivo: estudiar el espectro antimicrobiano de flavonoides derivados de naringina y la relacin entre actividad antimicrobiana y estructura qumica. Materiales y mtodos: se siguieron 2 vas de modificacin estructural. Hidrlisis de naringina (naringenin-7-ramnoglucsido) para obtener naringenina y prunina (naringenin-7-glucsido) y transesterificacin enzimtica de prunina para obtener 6-O-acil-steres de prunina con cadenas lineales entre 2 y 18 tomos de carbono. Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de los compuestos sobre 10 cepas bacterianas de acuerdo al mtodo de microdilucin del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2003). En particular, para la cepa Listeria monocytogenes 99/287R (clon resistente a bacteriocinas) se cuantific el efecto antagnico de los compuestos por contacto directo mediante recuento en placa luego de 120 min a 37 C. Para ello se prepararon suspensiones de bacterias en solucin fisiolgica (0,85% p/v NaCl) a las que se le agregaron los compuestos en una concentracin de 0,25 mM. Todos los ensayos se realizaron por triplicado. Resultados: naringina, prunina y naringenina se comportaron como los controles al no presentar efecto antagnico sobre ninguna de las cepas estudiadas. Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Salmonella enteritidis y Escherichia coli O157:H7 no fueron inhibidas por ninguno de los compuestos. En relacin a los steres de prunina se observ un aumento del efecto inhibitorio a medida que se increment la longitud de cadena. Para algunas cepas se observ una sensibilidad mxima para los steres con cadenas de longitud intermedia. Es el caso de Bacillus cereus, Bacillus subtilis C4, Listeria monocytogenes 99/287S, 01/155 y el clon resistente a bacteriocina, 99/287R las cuales se vieron ms inhibidos por los steres de C8-C12 con CIMs entre 0,100 y 0,010 mM. Frente a Enterococcus faecium CRL1385 y Staphylococcus aureus ATCC29213, la mxima actividad la present el ster de mayor longitud (estearato de prunina, C18), con una CIM de 0,025 mM. La cuantificacin del efecto inhibitorio de los steres de prunina sobre L. monocytogenes 9/287R mostr una disminucin de casi 4 rdenes de magnitud con respecto al control para steres con C entre 8 y 12. La naringenina y sus derivados glicosilados (prunina y naringina) no inhibieron el crecimiento de ninguna de las cepas por lo que la modificacin estructural con azcares parece no tener efecto sobre la actividad antimicrobiana. Sin embargo, la introduccin de cadenas hidrofbicas lineales s modific la actividad antimicrobiana. La longitud de la cadena del ster con mxima actividad dependi de la cepa en estudio.
onicopatas de pie (60% vs 41%, p=0,004). En mujeres vs varones, hubo mayor frecuencia de cultivos negativos en ua de pie (46% vs 25%, p= 0,0006). Los agentes causales en ua de pie fueron: 66% dermatofitos, 7% levaduras, 4% hongo micelial no dermatofito (HMND) y 2% infeccin mictica mixta; en mano: 33% dermatofitos y 25% levaduras. No se detect onicomicosis de mano por HMND ni afeccin mixta. Los pacientes con onicodistrofia de pie mayor vs menor al 50% de la tabla ungueal presentaron mayor positividad en los cultivos (p=0,01). No hubo diferencia en los cultivos segn la cronicidad de la lesin ungueal. El desarrollo de dermatofitos en cultivo de ua de pie fue mayor que en mano (38% vs 16%, p=0,005). En ua de mano fue ms comn el aislamiento de Candida spp.vs ua de pie (25% vs 6%, p=0,0004). Conclusin: la onicomicosis constituy el 75% de las onicodistrofias y fue ms prevalente en varones que mujeres. En ua de pie la forma clnica ms comn fue OSDL y en mano OT. Los principales agentes fngicos fueron: T. rubrum 93 casos, Candida spp. 30, T. mentagrophytes 21, HMND 7 e infeccin mixta 5. En ua de pie, dermatofitos y HMND representaron el 86% de las onicomicosis, mientras que en mano, Candida spp, 60%. En onicomicosis por levaduras predominaron especies de Candida diferentes de C. albicans. El EMD vs cultivo result el mtodo ms sensible para el diagnstico de onicomicosis de pie, mientras que el rendimiento de ambos mtodos fue similar en onicomicosis de mano. La correlacin entre EMD y cultivo fue: 62% y 57% en ua de pie y mano. Las principales discrepancias fueron: a) observacin en EMD de filamentos compatibles con dermatofitos con cultivo negativo o contaminado y b) EMD negativo y cultivo positivo para Candida spp.. La positividad del cultivo se asoci directamente al tamao de la lesin ungueal y no tuvo relacin con la cronicidad de la onicodistrofia.
P126 27173 - SARNA NORUEGA EN UNA PACIENTE AOSA. MADEO, CECILIA (1); DURANTE, GABRIELA (1); IOVANNITTI, CRISTINA (2); KOPCOW, ELENA (1); BUSTAMANTE, JUAN (1); RONCHETTI, INES (1); FERNANDEZ BLANCO, GRACIELA (1)
(1) Hospital Torn, (2) Centro de Micologa-UBA Introduccion: la sarna Noruega es una enfermedad parasitaria de la piel producida por un caro llamado Sarcoptes scabiei var. hominis. Fue descubierta por Danielssen y Boeck en 1848 en Noruega en pacientes con lepra lepromatosa. Esta patologa aparece en pacientes inmunocomprometidos y en aquellos que utilizan en forma crnica corticoides de alta potencia. A partir de la dcada del 80 esta patologa se increment por la asociacin con SIDA. En estos pacientes la sarna Noruega es de peor pronstico ya que aumenta el riesgo de adquirir otras infecciones. En relacin a los sntomas se caracteriza por ausencia o disminucin de prurito, erupcin generalizada eritemato-escamosa descamativa con zonas hiperqueratsicas en manos y pies y fisura de los mismos. En estas zonas hiperqueratsicas puede haber miles de parsitos y huevos por lo que esta patologa es altamente contagiosa. De hecho a partir de un caso de sarna Noruega surge con frecuencia un brote epidmico local en instituciones y hospitales. Caso clnico: enfermedad actual. Paciente de sexo femenino de 88 aos de edad, institucionalizada en un hogar para ancianos, es traida a la guardia de nuestro hospital presentando mal estado general, esnutricin y deshidratacin. Como antecedente presenta un Ca de colon con colostoma permanente en FII. Examen clnico: paciente en muy mal estado general en flexin permanente de miembros superiores e inferiores, poliescarada. En piel presenta erupcin generalizada eritematodescamativa con zonas de hiperqueratosis en cuero cabelludo, cara, manos y pies. Se realiza escarificacin de cuero cabelludo y pabellon auricular y se visualiza en fresco por MO un caro compatible con Sarcoptes scabiei. Tratamiento: medidas higinicas, ivermectina 12 mg/semanales, un unguento a base de urea para acelerar la descamacin de las zonas hiperqueratsicas. La paciente mejora clnicamente en relacin a las lesiones de piel, pero fallece a las dos semanas por su mal estado general. La sarna Noruega ha experimentado un aumento de su incidencia debido a la aparicin de determinadas patologas que afectan el sistema inmune como el SIDA. Esta patologa no debe conside-
P125 27170 - ESTUDIO MICOLGICO Y PROSPECTIVO DE LAS ONICODISTROFIAS EN ESQUEL, PATAGONIA ARGENTINA. NAZAR, JAVIER (1); GEROSA, PAULA (1); DIAZ, OSVALDO (2)
(1) Laboratorio Gerosa, (2) IM Los Alerces Introduccin: la onicomicosis representa la principal causa de onicodistrofia. Es una de las micosis superficiales con mayor dificultad de diagnstico y tratamiento. Objetivos: determinar agentes causales, frecuencia de onicomicosis segn edad, sexo y localizacin y evaluar los mtodos de diagnstico microbiolgico. Materiales y mtodos: se utilizaron 2 mtodos: 1) examen microscpico directo (EMD): se defini positivo cuando se observ cualquiera de los siguientes elementos micticos: filamentos compatibles con dermatofitos, filamentos hialinos y levaduras. 2) cultivo, en Sabouraud y Lactrimel de Borelli: se consider positivo cuando se obtuvo desarrollo en forma seriada del agente causal. Se definieron 2 criterios para el diagnstico de onicomicosis: 1) EMD positivo, independientemente del desarrollo en el cultivo y 2) EMD negativo y cultivo seriado positivo. Resultados: de marzo 2007 a enero 2010 se estudiaron prospectivamente 309 pacientes. La prevalencia de onicomicosis de pie fue 78% y de mano 59%. La frecuencia mayor de onicomicosis se ubic en el rango etreo de 31-40 aos En hombres la prevalencia de onicomicosis de pie fue 90% y de mano 70%, mientras que en mujeres 70% en pie y 46% en mano. Se destaca en hombres vs mujeres: mayor frecuencia de Trichophyton rubrum en ua de pie (43% vs 23%, p=0,0005), mayor positividad del EMD en ua de mano (65% vs 23%, p=0,007) y pie (89% vs 65%, p=0,00002) y del cultivo en
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rarse slo como una enfermedad oportunista sino tambien como via de entrada de otras posibles infecciones de mayor riesgo para el paciente. Es imprescindible el diagnstico precoz debido a su alta contagiosidad, especialmente al volar las escamas. Es importante instaurar tratamiento profilctico con ivermectina (nica toma) a contactos prximos y personal sanitario.
P127 27181- HISTOPATOLOGA DE LA INFECCIN POR Cryptosporidium spp. EN RATONES INMUNOSUPRIMIDOS CON DEXAMETASONA. DEL COCO, VF (1,2); CORDOBA, A (1,3); SIDOTI, A (1); DRUT, R (1); BASUALDO, JA (1)
(1) Facultad de Medicina, Universidad Nacional de La Plata; (2) CONICET; (3) Comisin de Investigaciones Cientficas de la provincia de Buenos Aires (CIC) Cryptosporidium spp. es un protozoo entrico que afecta a mamferos. La infeccin se cronifica en inmunocomprometidos y puede ser mortal. La infeccin intestinal por Cryptosporidium spp. es diagnosticada habitualmente mediante estudio coproparasitolgico. El estudio histopatolgico permite el diagnstico de certeza de la infeccin. Objetivo: evaluar mediante estudio histopatolgico la infeccin intestinal y extraintestinal por Cryptosporidium spp. en modelo murino. Materiales y mtodos: materia fecal de terneros fue utilizada como fuente de ooquistes de Cryptosporidium spp.. stos fueron concentrados por tcnica de agua ter, purificados por gradiente discontinuo de sacarosa y suspendidos en antibitico. Ratones Swiss machos de 1 mes de edad (n=30), inmunosuprimidos (IS) con 200 g/da de dexametasona (DXM)/ oral, fueron inoculados al da 8 del inicio de la experiencia con 1x106 ooquistes. Ratones inmunocompetentes e inoculados con ooquistes fueron el grupo control. La infeccion es evalu mediante: 1) score de salud diario; 2) estudio coproparasitolgico: la materia fecal fue recolectada los das 7, 14, 21, 28 y 35 post-infeccin, procesada por tcnica de agua ter y coloreada por Ziehl- Neelsen modificada, establecindose por muestra un promedio del nmero de ooquistes en 20 campos observados a 1000X; 3) estudio anatomopatolgico: 3 ratones por grupo fueron sacrificados los das 7, 14, 21, 28 y 35 post-infeccin. Muestras de intestino, hgado, vas biliares, pncreas y pulmones fueron extraidas por necropsia. stas fueron fijadas en formol al 10%, incluidas en parafina, seccionadas, coloreadas con hematoxilina y eosina y examinadas a 400X. Para evaluar infeccin intestinal y apoptosis secundaria, un score fue establecido: I: una unidad criptovellositaria (UCV) comprometida; II: 2 3 UCV comprometidas; III: varias UCV comprometidas; IV: gran nmero de UCV comprometidas. Resultados: el anlisis de materia fecal demostr que los ratones IS e inoculados con ooquistes resultaron infectados. El score de salud indic gran deterioro fsico de los ratones infectados. Al cuantificar el nmero de ooquistes en heces, se detectaron 2 picos de excrecin, los das 14 y 35 post-infeccin. La excrecin persisti durante toda la experiencia. No hubo evidencias de infeccin extraintestinal. Cryptosporidium spp. predomin en ileon; seguido de yeyuno distal y en menor proporcin en duodeno, yeyuno proximal, ciego y colon. La presencia del parsito se correlacion con apoptosis de clulas epiteliales vecinas. Conclusin: el presente estudio demuestra el desarrollo de criptosporidiosis intestinal crnica en ratones inmunosuprimidos con DXM, con marcada morbilidad y escasa mortalidad. El intestino se vio afectado en su totalidad lo cual se asemeja a la infeccin en humanos con inmunocompromiso severo. No hubo evidencia de infeccin extraintestinal. Este modelo podr ser utilizado en futuros ensayos para evaluar el efecto de diversos agentes terapeticos sobre la infeccin intestinal por Cryptosporidium spp.
y hongos). Las bacterias dispersadas por el aire pueden producir infecciones, especialmente en pacientes con factores predisponentes, siendo la microbiota area de ambientes hospitalarios objeto de diversos estudios, como una causa potencial de infecciones nosocomiales. El objetivo del presente trabajo fue optimizar las condiciones de muestreo para realizar estudios sobre la presencia de bacterias anemfilas en diferentes ambientes hospitalarios. El estudio se realiz en dos hospitales de las ciudades de Resistencia y Corrientes. Como muestreador se utiliz un colector de aire Surface Air Sampler Super 100 (PBI). Se tomaron muestras de diferentes salas en volmenes de 100, 200, 300 y 400 litros de aire, colocando el colector a alturas de 50 y 150 cm cada vez. Adicionalmente se muestre, en iguales condiciones, el ambiente contiguo o exterior a la sala en estudio, considerndose ste como ambiente control. Todas las muestras fueron recogidas sobre placas de agar triptena soya, las que fueron incubadas durante 3 das a 35 C. Las colonias bacterianas fueron contadas e informadas como unidades formadoras de colonias por metro cbico de aire (UFC/m3). De cada morfotipo colonial se realiz una resiembra y posterior coloracin de Gram registrndose la tincin, morfologa y disposicin bacteriana. Los cocos grampositivos fueron resembrados en agar manitol salado e identificados por pruebas bioqumicas clsicas. Las colonias de Staphylococcus aureus fueron repicadas sobre agar cromognico para deteccin de cepas resistentes a meticilina. Luego de evaluar la totalidad de las placas en los diferentes muestreos se seleccionaron las condiciones que permitieran el mejor recuento e individualizacin de colonias, siendo las ptimas aquellas con un promedio de 30 UFC/placa (5 a 50 UFC/placa), colocando el aparato a 150 cm y tomando volmenes de 400 litros para aquellas reas ms limpias (quirfano, neonatologa, oncologa), 300 litros para reas intermedias (salas de espera, pasillos, oficinas de enfermera) y 200 litros para el aire exterior. La frecuencia de aparicin de bacterias en orden decreciente entre las gram-positivas fue: bacilos, cocobacilos difteromorfos, cocos en racimos, cocos en ttradas y bacilos ramificados; solo en una muestra por hospital desarrollaron bacilos gram-negativos. S. aureus sensible a meticilina fue detectado en 8 salas diferentes. Ante la ausencia de parmetros estrictos para la realizacin de este tipo de estudios, las pruebas realizadas indican que deben utilizarse diferentes volmenes segn la supuesta calidad del aire a muestrear y una altura media de muestreo. La presencia de S. aureus en reas crticas de los hospitales amerita la inclusin de placas con medios selectivos para monitorear la calidad del aire especialmente en salas que alberguen pacientes con factores predisponentes. La escasa presencia de bacilos gram-negativos no justifica el uso de medios selectivos excepto cuando se realice un muestreo dirigido como consecuencia de brotes de infecciones nosocomiales debidos a este grupo bacteriano.
P129 27213 - ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE QUITOSANO: EFECTO SOBRE LA INTERNALIZACIN DE Staphylococcus aureus EN CLULAS EPITELIALES DE GLNDULA MAMARIA BOVINA. FELIPE, VERNICA (1); MORGANTE, CAROLINA (1); ICELY, PAULA (2); CORREA, SILVIA G(2); PORPORATTO, CARINA(1)
(1) Universidad Nacional de Villa Mara (UNVM), (2) Centro de Investigaciones Bioqumica Clnica (CIBICI) La mastitis bovina causada por Staphylococcus aureus es una de las infecciones mas importantes del ganado y afecta tanto a la calidad como la cantidad de la produccin lechera. Esta bacteria tiene la habilidad de evadir la respuesta inflamatoria generando una supresin de la respuesta inmune mediada por diferentes mecanismos. Las clulas epiteliales de la glndula mamaria (GM) bovina actan como primera lnea de defensa frente a una infeccin y contribuyen a la respuesta inflamatoria de la ubre mediante la secrecin de factores quimiotcticos para clulas inmunes. El bloqueo de la adhesin bacteriana a las clulas epiteliales y colonizacin de las superficies mucosas en la infeccin por S. aureus podra ser una estrategia efectiva para prevenir la infeccin. Quitosano (Q) es un polisacrido de acetil-glucosamina deacetilada obtenido de la quitina y uno de los polmeros ms
P128 27196 - OPTIMIZACIN DE PARMETROS MUESTREALES PARA EL ESTUDIO DE BACTERIAS EN EL AIRE DE AMBIENTES HOSPITALARIOS. MERINO, LUIS; GOMEZ, MARIA VERNICA; FERNANDEZ, MARIANA; GIUSIANO, GUSTAVO
Facultad de Medicina, Universidad Nacional del Nordeste El aire atmosfrico no tiene una microbiota autctona pero es un medio para la dispersin de microorganismos (bacterias, virus
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abundantes en la naturaleza. Presenta efectos antibacterianos, propiedades mucoadhesivas naturales y capacidad de modular la respuesta inmunolgica. Dada las propiedades de Q, en el presente trabajo se evalu la actividad antimicrobiana del polisacrido y la capacidad de controlar la adherencia de S. aureus a clulas epiteliales de GM bovina. En el presente estudio se utiliz la cepa S. aureus V329. Se observ una disminucin de la DO y recuento de UFC/ml en forma dosis dependiente en presencia de concentraciones crecientes de Q, en cultivos de medio TSB crecidos durante 16h a 37 C. Conjuntamente, V329 mostr un retraso en la fase de latencia y exponencial de crecimiento en presencia de 100 y 400 ug/ml de Q. Se evalu la capacidad de modificar la adherencia e internalizacin de la cepa V329 a las clulas epiteliales de GM, utilizando la lnea celular de epitelio de GM bovina MAC-T. La capacidad de adherencia de V329 a las MACT se encontr disminuida en presencia del polisacrido Q en forma dosis dependiente evaluado mediante recuento de las UFC (p<0,05). Se realizaron cultivos celulares de MAC-T con distintas concentraciones de Q (0.01 a 100 ug/ml) por 24 h. Luego, las MAC-T fueron lavadas e incubadas con V329-FITC por 1 h. Se evalu por citometra de flujo la internalizacin de V239 en estas clulas. Se observ una disminucin del porcentaje de bacterias internalizadas al aumentar la dosis del pre-tratamiento con Q. Se evalu el efecto de Q sobre la respuesta inmune generada por las clulas epiteliales de GM luego de la infeccin con V329, determinando la produccin de citoquinas y quimioquinas. Por RTPCR se determin un incremento en la expresin de mARN de TNF-a, IL-8 y CCL-2 en clulas MAC-T estimuladas con Q + V329 (p<0,05). El polisacrido Q presenta actividad bacteriosttica en las primeras fases del crecimiento de cepas de S. aureus, e inhibe la internalizacin y adherencia en cultivos de clulas epiteliales mamarias. Adems este polisacrido estimula una respuesta inflamatoria por parte del epitelio de la GM, lo cual podra favorecer la eliminacin del patgeno.
Existe una diferencia significativa entre los grmenes aislados entre los dos grupos etreos. La piel vulvar de las nias prepberes se daa facilmente por falta de higiene y la proximidad al ano, esto hace que sean importantes la Vv inespecficas. Las infecciones especficas se deben ms a grmenes de la va respiratoria. El patgeno entrico ms comn aislado es Sf. Ca no es causa importante de Vv en nias. Gv en nias, ha sido relacionada por algunos autores con abuso sexual infantil (ASI); afecta sobretodo a adolescentes como en el caso de Uu. Este ltimo tambin puede ser un alerta ASI. En los casos de Chla es muy importante la evaluacin del ASI, al igual que trichomonas. No hubo ningn aislamiento de Neisseria gonorrhoeae, ni TIF positivo para herpes. La Vv por cuerpo extrao, plipos, tumor, enfermedades sistmicas, etc. se ve en nias. En las adolescentes las infecciones especficas y las relacionadas con transmisin sexual son las ms importantes, la leucorrea tambin se relaciona con los cambios cclicos en el nivel de estrgenos. La Vv es el motivo de consulta ms frecuente en ginecologa infanto juvenil, y si bien no es una afeccin grave, los resultados teraputicos no son siempre buenos. Por lo tanto en ocasiones es necesario realizar un estudio cuidadoso para poder resolver el cuadro en forma adecuada.
P131 27244 - SEROPREVALENCIA DE TOXOCARIASIS ASOCIADA A POSESIN DE GATOS EN NIOS DE UNA POBLACIN RURAL DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. MOLINA, NORA (1); PEZZANI, BETINA(1); CIARMELA, LAURA(1); ORDEN, BIBIANA(2); ROSA, DIANA(3); APEZTEGUIA, MARIA(4); MINVIELLE, MARTA(1)
(1) Facultad de Medicina UNLP, (2) CONICET, (3) Facultad de Veterinaria UNLP, (4) CIC Provincia de Buenos Aires. Toxocariasis es el trmino clnico que se aplica a la infeccin causada principalmente por Toxocara canis o T.cati en el husped humano. Ambos parsitos son ascridos cuyos huspedes definitivos son el perro y el gato respectivamente. Diferentes estudios en el mundo y en nuestro pas, han demostrado que los paseos pblicos de lugares urbanos y suburbanos se encuentran contaminados con huevos de T. canis y T. cati, dado que estos ambientes son frecuentados por mascotas y animales abandonados. De este modo, los nios que al jugar realizan geofagia, presentan mayor riesgo de infectarse y adquirir esta zoonosis. Trabajos previos del grupo han demostrado la asociacin de serologa antitoxocara y tenencia de caninos. Pero, en la literatura se menciona tambin el rol del gato como transmisor de esta infeccin parasitaria. El objetivo de este trabajo fue evaluar la relacin entre seroprevalencia de toxocariasis y variables demogrficas, ambientales y socioculturales en nios pertenecientes a una poblacin rural (Atalaya, partido de Magdalena) de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Dentro del marco del PROCOPIN (Programa de Control de las Parasitosis Intestinales y Nutricin) se llev a cabo un estudio transversal descriptivo en escolares de Atalaya, partido de Magdalena durante el ao 2009. La determinacin serolgica de anticuerpos antitoxocara en 78 nios (3-11 aos de edad) fue realizado en el laboratorio de Parasitologa de la Ctedra, usando el kit Toxocara Microwell Serum ELISA (IVD Research Inc. Carlsbad, USA). Se realiz un frotis sanguneo por persona para cuantificacin de eosinfilos en sangre perifrica. Los padres/tutores de los nios fueron entrevistados para registrar datos demogrficos, ambientales y socioculturales mediante una encuesta estructurada y cerrada. Estos padres/tutores firmaron el consentimiento para la extraccin sangunea de sus hijos y presenciaron la misma. Se registr desarrollo pondo-estatural y concentracin de hemoglobina y micronutrientes en sangre. Para determinar las asociaciones se usaron las pruebas de X2 y Fisher. Se utiliz el Software SPSS (Statistical Programme Social Science) versin 11.5. La seroprevalencia de toxocariasis fue de 26,9% (21/78). No se registraron diferencias estadsticamente significativas segn sexo y edad. Se detect eosinofilia en 12/21 (57,1%) personas seropositivas, y en 10/57 (17,5%) seronegativas (p = 0,001; OR= 6.267). Quince de 21 nios (71,4%) con serologa positiva tenan perros en sus domicilios respecto a 41/57 (71,9%) nios seronegativos (p = 0,965) mientras que 9/21 (42,8%) nios
P130 27223 - VULVOVAGINITIS EN NIAS Y ADOLESCENTES. GIUGNO, S; RUBINSTEIN, A; OCAMPO, D; RAHMAN, G; FALLENSEN, S; BORSA, A
Hospital Nacional de La Plata, Sor Mara Ludovica La vulvovaginitis (Vv) constituye un motivo de consulta frecuente en nias y adolescentes. En las distintas etapas del desarrollo se producen cambios en la flora endgena y predisposicin a la multiplicacin de distintos agentes, influenciados por las variaciones del pH y el contenido de glucgeno determinados por los niveles de estrgenos. El carcter inespecfico de la Vv, determinado por el hecho de hallar una flora bacteriana mixta constituida por los grmenes habituales de la vagina, en algunas situaciones puede mostrar un germen predominante. En el caso de las especficas, los microorganismos no forman parte de la flora endgena vaginal. Nuestro objetivo fue determinar la prevalencia de los agentes etiolgicos ms frecuentes en nias y adolescentes con Vv que concurrieron al Servicio de Ginecologa del Hospital de Nios Sor Maria Ludovica durante el ao 2009. Se estudiaron 163 pacientes con diagnstico de Vv. Las muestras fueron extraidas con hisopo y remitidas al Laboratorio de Microbiologa. Se realiz examen en fresco, coloracin de Gram, cultivo y TIF para clamidias y herpes. Los resultados se muestran en la tabla. Abreviaturas: Haemophilus spp. (Hi), Shigella flexneri (Sf), Candida albicans (Ca), Streptococcus pneumoniae (Sp), Gardnerella vaginalis (Cv), Ureplasma urealyticum (Uu), Moraxella catarrhalis (Mc), Trichomonas vaginalis (Trich), inespecficas (inesp), estreptococo grupo B (e grupo B), Chlamydia trachomatis (Chla). En el grupo de 0-11 aos en menor proporcin se aislaron Mc n=1 (1.1 %), Sp n=1 (1.1 %) y en el caso de 12-17 aos Candida no albicans en 3 (3.9 %) y e grupo B n=1 (1.3)
Grupo etreo 0-11 aos (n=87) 12-17 aos (n = 76) Hi n (%) 5 (5.7) 0 Sf n (%) 5 (5.7) 0 Ca n (%) 5 (5.7) 10 (19.7) Trich n (%) 0 4 (5.3) Uu n (%) 2 (2.39) 20 (26.3) Chla n (%) 1 (1.1) 3 (3.9) Gv n (%) 2 (2.3) 15 (19.7) Inesp n (%) 49 (56.3) 37 (48.7)
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seropositivos tenan gatos respecto a 8/57 (14,0%) seronegativos (p = 0,006, OR= 4.594). Tambin result significativa la asociacin entre nios con serologa positiva y vivienda precaria (p =0,022, OR= 3.438). En funcin del registro de las variables que se asociaron a la prevalencia de toxocariasis en esta poblacin, se recomend la implementacin de programas de Salud Pblica dirigidos especialmente al tratamiento antiparasitario de los gatos y educacin de la poblacin.
P132 27248 - EMERGENCIA DE blaOXA-48 EN AISLAMIENTOS DE Shewanella putrefaciens, EN UN HOSPITAL DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. MERKIER, ANDREA KARINA (1); RAMIREZ, MARIA SOLEDAD (1 ); ALMUZARA, MARISA(2); VAY, CARLOS (2); CENTRON, DANIELA(1)
(1) Facultad de Medicina UBA (2) Hospital de Clnicas. Introduccin: las infecciones causadas por Shewanella spp. son poco frecuentes, sin embargo en los ltimos aos S. algae (Sa) y S. putrefaciens (Sp) han sido reconocidas como agentes causales de una amplia variedad de infecciones humanas, siendo las ms comunes las infecciones ticas, as como tambin las infecciones asociadas a piel y partes blandas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la dispersin de -lactamasas asociadas a la transferencia horizontal de genes, las cuales han sido reportadas en aislamientos de bacilos gram-negativos, en 12 aislamientos intrahospitalarios de Shewanella spp., con el fin de pesquisar la presencia de dichos mecanismos como reservorio intrahospitalario de genes. Materiales y mtodos: se estudiaron 5 aislamientos de Sp y 7 de Sa, provenientes del servicio de Bacteriologa de un hospital de la Ciudad de Buenos Aires durante los aos 2005-2009. Los aislamientos fueron identificados por las pruebas bioqumicas convencionales y confirmados por secuenciacin del gen ADNr 16S. Se realiz la CIM a los anti-biticos - lactmicos segn normas del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). La identificacin de los genes codificantes para -lactamasas se realiz por PCR y posterior secuenciacin. Resultados: si bien Shewanella spp. es naturalmente sensible a la mayor parte de los antibiticos -lactmicos, se identific la presencia de una variante del gen blaOXA-48 en los 5 aislamientos de Sp. Aunque se encontr por PCR el elemento IS1999, el cual fue descripto asociado a la expresin del gen blaOXA-48, no se pudo demostrar su asociacin con el gen codificante para la carbapenemasa presente en nuestros aislamientos. Nuestros resultados muestran la presencia de una variante del gen blaOXA48 en aislamientos de Sp de nuestro pas, siendo el primer reporte de la presencia de dicho gen en bacilos gram-negativos no fermentadores de la glucosa. La presencia del elemento IS1999 y su posible asociacin a la variante del gen blaOXA-48, en aislamientos de origen hospitalario, podran beneficiar una mayor y rpida diseminacin de dichos mecanismos tanto intra como interespecie. Se evidenci la presencia de un mecanismo de resistencia potencialmente transferible en un microorganismo que si bien, su incidencia a nivel intrahospitalario es baja, podra actuar como reservorio para la posible emergencia de cepas resistentes a carbapenemes.
accin en cadena de la polimerasa (PCR) y su correlacin con variables clnicas y epidemiolgicas. Se estudiaron prospectivamente 51 pacientes que consultaron por transtornos disppticos entre octubre de 2009 y mayo de 2010 en el Hospital Dr. Julio C. Perrando de la ciudad de Resistencia (Chaco). Bajo consentimiento informado de los pacientes se confeccionaron las fichas epidemiolgicas, se realiz el examen clnico y se procedi a la toma de muestras de biopsias gstricas de cuerpo y antro mediante endoscopa. La deteccin de Hp en las muestras se realiz mediante PCR amplificando el gen que codifica para la ureasa (ureA), segn tcnica previamente descripta. Los datos fueron registrados en Excel 5.0 y procesados mediante el programa Epi Info 2002. Sobre 51 pacientes, en 10 se detect Hp mediante PCR de muestras de biopsias endoscpicas gstricas. Cinco pacientes eran varones y 5 mujeres, con una edad media de 41 aos y un promedio de 3,5 personas por habitacin. Ocho pacientes provenan de la zona urbana, 6 contaban con agua potable y bao instalado. En cuanto a los datos clnicos ms frecuentes, el dolor abdominal estuvo presente en 8 pacientes y el reflujo gastroesofgico, en 6. La tcnica de PCR posee alta sensibilidad y especificidad para la deteccin de la infeccin por Hp, la cual se comporta de manera particular en diferentes regiones geogrficas existiendo discrepancias entre los factores predisponentes, los determinantes de patogenicidad de la bacteria y las condiciones de vida de los individuos. Es por ello que se hace necesario completar el estudio clnico y epidemiolgico con la caracterizacin de los genes de virulencia bacteriana presentes en cada caso a fin de comprender mejor la presentacin clnica y la evolucin de los pacientes.
P134 27293 - EFICACIA DE Duddingtonia flagrans EN UN BLOQUE ENERGTICO PARA EL CONTROL DE NEMATODOS GASTROINTESTINALES EN OVINOS. SAGUES, FEDERICA (1); FUSE, LUIS (1); FERNANDEZ, SILVINA (2); PURSLOW, PETER (2); IGLESIAS, LUCIA (1); MORENO, FABIANA (3); SAUMELL, CARLOS (1)
(1) Universidad del Centro de la provincia de Buenos Aires (UNICEN), (2) UNIV.GUELPH, (3) INTA Balcarce Se evalu la eficacia de un aislamiento del hongo nematfago Duddingtonia flagrans incorporado en un bloque energtico contra nematodos gastrointestinales de ovinos y su capacidad para disminuir el nmero de larvas en heces y por consiguiente en el pasto. Con el objetivo de contaminar pasturas libres de larvas con huevos de nematodos gastrointestinales y con hongos nematfagos, se colocaron en cada una de dos parcelas contiguas 2 ovinos naturalmente infectados y con un promedio de 2.320 huevos por gramo de heces. El grupo tratado (T1) recibi diariamente un bloque energtico conteniendo clamidosporos de D. flagrans, y el grupo control (C1) recibi un bloque energtico libre de clamidosporos. La dosis de clamidosporos administrada a cada animal con el bloque fue de 200.000/kgPV/d. Los animales recibieron el bloque durante un mes, eliminando durante este perodo clamidosporos de D. flagrans por heces. Pasado este perodo se retiraron de las parcelas y stas fueron ocupadas por 12 ovinos previamente desparasitados, divididos aleatoriamente en dos grupos de 6 animales cada uno, tratado (T2) y control (C2). Los animales del grupo T2 se alojaron en la pastura conteniendo D. flagrans y los animales del grupo C2 fueron alojados en la pastura libre de este hongo. Luego de un mes de pastoreo, se retiraron de las pasturas y se colocaron en corrales techados donde se alimentaron con alimento balanceado durante 15 das. Finalizado este perodo se sacrificaron para determinar el nmero y las especies de nematodos presentes en el abomaso, intestino delgado e intestino grueso. El porcentaje de eficacia del hongo sobre el total de la poblacin parasitaria susceptible fue del 92%. La eficacia en el grupo T2 fue del 100% contra Haemonchus contortus y Teladorsagia circumcincta, 87,5% contra Cooperia oncophora y 90% contra Trichostrongylus axei. La administracin del bloque energtico conteniendo clamidosporos de D. flagrans redujo significativamente (p< 0,0001) el nmero de nematodos adultos presentes en el tracto gastrointestinal de ovinos en este ensayo a campo en pequea escala. La accin predadora del
P133 27263 - DETECCIN MEDIANTE REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA DE Helicobacter pylori EN BIOPSIAS GSTRICAS Y SU CORRELACIN CON VARIABLES CLNICOEPIDEMIOLGICAS. MEDINA, MARCELO (1); MEDINA, MYRIAM (1); LOSCH, LILIANA (1); PICON, SANTIAGO (2); MARTIN, GRACIELA (3); MERINO, LUIS (1)
(1) Instituto de Medicina Regional, (2) Hospital J. C. Perrando, (3) Hospital A. Castelan Helicobacter pylori (Hp) est asociado a enfermedades gastroduodenales de diferente gravedad dependiendo de las caractersticas del husped, las condiciones ambientales y la presencia de alguno o todos los factores de virulencia bacteriana (cagA, vacA y babA2). El objetivo de este trabajo fue estudiar la presencia de Hp en muestras de biopsias gstricas mediante re-
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hongo sobre las larvas en las heces redujo el nmero de larvas en la pastura y, por ende, fue capaz de reducir la carga de la mayora de los gneros parasitarios del tracto gastrointestinal estudiados con la dosis de clamidosporos utilizada. Los bloques minerales como forma de administracin del agente de control biolgico podran utilizarse en producciones extensivas donde los animales son criados a pasto y su administracin podra realizarse en los momentos en que la contaminacin de la pastura es un riesgo para la salud animal.
(1)Departamento Micologa, INEI y (2)Servicio antgenos y antisueros, INPB - ANLIS Dr. C. G. Malbrn La criptococosis menngea ocupa el cuarto lugar dentro de las complicaciones infecciosas que comprometen la vida de los infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana. En Argentina, la incidencia en los pacientes con SIDA oscila entre 6-15 %. Los mtodos utilizados para el diagnstico de esta enfermedad, son el examen microscpico del lquido cefalo-raqudeo (LCR) con tinta china, el cultivo y la deteccin de antgeno capsular por la prueba de aglutinacin de ltex. Esta ltima tcnica permite una deteccin semicuantitativa del antgeno polisacridico capsular de Cryptococcus neoformans presente en el LCR y suero de pacientes. Dicho reactivo no se produce en el pas y su costo es elevado. El objetivo de este trabajo fue la obtencin y purificacin de anticuerpos anti C. neoformans para la produccin del reactivo de ltex. Los sueros anti-C. neoformans se obtuvieron mediante la inmunizacin de conejos neozelandeses, con dosis de 3 x 108 clulas de las cepas de referencia de C. neoformans ATCC 62067, WM148 y WM628 inactivadas con formalina. El esquema de inmunizacin consisti en una dosis cada 4 das durante el primer mes, una por semana el segundo mes, un mes de descanso y un refuerzo final. Para la purificacin de los anticuerpos se evaluaron los mtodos de precipitacin con sulfato de amonio y cromatografa de afinidad con Montage Antibody Purification Kit (Millipore), Protein A HP SpinTrap (GE Healthcare) y DEAE-AffiGel Blue (BIORAD), para obtener mejor rendimiento y pureza de los anticuerpos especficos. Se establecieron las condiciones ptimas para la produccin del reactivo de ltex, variando el tamao de las partculas y la concentracin de las inmunoglobulinas durante el proceso de adsorcin. El antisuero de mayor ttulo (1/ 1024) fue obtenido inmunizando con la cepa WM148. El mtodo que brind mejores resultados para la purificacin de anticuerpos especficos fue la cromatografa con DEAE affi-Gel Blue. Las condiciones ptimas de adsorcin se obtuvieron con 0,1 mg/ml de anticuerpos y partculas de ltex de 0,8 m al 1% (p/v). El lmite de deteccin del reactivo preparado fue de 31 ng/ml de antgeno capsular purificado de C. neoformans serotipo A. Los resultados obtenidos son promisorios, sin embargo debemos determinar la sensibilidad y especificidad diagnstica para establecer su utilidad en la rutina de los laboratorios de microbiologa. La produccin nacional de este reactivo permitir asegurar su provisin continua y gratuita a los laboratorios de la Red.
P135 27300 - Strongyloides stercoralis EN PACIENTE INMUNOSUPRIMIDO CON ANTECEDENTE DE GLIOBLASTOMA MULTIFORME. ALVAREZ, VERONICA; PIDONE, JUAN; GUEL-FAND, LILIANA; SOLOAGA, ROLANDO; CARRION, NATALIA; SALINAS, ANDREA; SUAR, MARIA BEATRIZ; MARGARI, ALEJANDRA
Hospital Naval Buenos Aires Strongyloides stercoralis es un nematode intestinal transmitido por la tierra, de gran importancia en zonas tropicales y subtropicales. La infeccin se adquiere por va cutnea. La larva filariforme (infectiva) atraviesa la piel entrando a la circulacin y es transportada pasivamente hasta alcanzar los capilares pulmonares y alvolos. Progresa hasta la trquea y llega finalmente al tracto digestivo, donde en intestino delgado se transforma en adulto y deposita sus huevos que eclosionan a larvas rhabditiformes que son eliminadas con las heces. Esta infeccin es nica en el ser humano por la capacidad de reproducirse dentro del husped y persistir en forma indefinida. En el caso de inmunosupresin la estrongiloidiosis acta como enfermedad oportunista. El objetivo fue describir la deteccin de larvas de S. stercoralis en heces de un paciente inmunosuprimido con antecedente de glioblastoma multiforme. Caso clnico: paciente masculino de 19 aos de edad oriundo de la ciudad de Corrientes con antecedente de glioblastoma multiforme, que recibi tratamiento con corticoides, ciruga y quimioterapia. Ingres a guardia mdica por episodios diarreicos de 15 das de evolucin (8 deposiciones diarias lquidas y mucosanguinolentas) con fiebre, nuseas, vmitos, tos seca, alteracin del coagulograma, leucocitosis y abdomen doloroso al examen fsico. Present hemoptisis, descompensacin hemodinmica y melena. Inici tratamiento antibitico con ceftriaxona+metronidazol y se le tomaron cultivos. Pas a Unidad de Cuidados Intensivos, donde fue transfundido, entr en asistencia respiratoria mecnica y soporte inotrpico. Por posible foco abdominal, rot a pipercilina-tazobactama+amikacina. Continu con melena, se le realiz FEDA (fibro-endoscopa digestiva alta) hallndose esofagitis erosiva + candidiasis esofgica + antritis + duodenitis. Todos los cultivos y la serologa para VIH fueron negativos. Infectologa solicit coproparasitolgico en muestra seriada. Por mtodo de Telemann modificado (centrifugacin con ter), en una muestra seriada recogida en solucin formolada al 5%, al sedimento se le realiz coloracin hmeda con una gota de lugol y al microscopio ptico se observaron larvas compatibles con Strongyloides stercoralis. El paciente fue tratado con albendazol x 7das + ivermectina x 3 das presentando mejora clnica. Complet tratamiento antiparasitario hasta su externacin. En conclusin y segn la bibliografa, este nematode debe sospecharse y buscarse en los pacientes inmunosuprimidos pues acta como agente oportunista. La terapia con corticoides o con citotxicos disminuye las defensas del husped y puede haber implantacin de las larvas en todo el intestino delgado, yeyuno y pulmones causando diarrea, nuseas, vmitos, hemorragias intestinales y esofagitis. La estrongiloidiosis se caracteriza por la irregularidad en la salida de las larvas dificultando su diagnstico, de all que se sugiera su bsqueda en muestras seriadas de materia fecal.
P137 27313 - DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD ANTIFNGICA DE ESPECIES DE Malassezia. APLICACIN AL LABORATORIO MICOLGICO DE RUTINA. SORTINO, M (1); RAMADAN, S (1); BULACIO, L (1); MAROZZI, M L (1); LOPEZ, C (1); RAMOS, L (1)
(1) CEREMIC-Facultad de Ciencias Bioqumicas y FarmacuticasUNR Introduccin: las levaduras lipoflicas del gnero Malassezia pueden encontrarse integrando la microbiota habitual de la piel humana o causando patologas como pitiriasis versicolor, dermatitis seborreica y foliculitis, entre otras. Los estrictos requerimientos nutricionales y la baja viabilidad en cultivos del gnero han dificultado el desarrollo de tcnicas para definir sus perfiles de sensibilidad. Objetivos: determinar in vitro perfiles de sensibilidad de cepas de Malassezia aplicando un mtodo de microdilucin en caldo recomendado por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), adaptada a los requerimientos del gnero y evaluar la factibilidad de su realizacin en el laboratorio micolgico de rutina. Materiales y mtodos: se utiliz la metodologa descripta en el documento M27-A3 del CLSI, usando el medio de cultivo RPMI 1640 modificado, ya que el mismo fue diseado para la evaluacin de sensibilidad antifngica de especies no lipoflicas. ste fue suplementado con los nutrientes requeridos por el gnero Malassezia. Para obtener inculos homogneos se utilizaron perlas de vidrio y Tween 20. Se probaron las siguientes drogas: fluconazol, ketoconazol, terbinafina e itraconazol, a las concentraciones finales establecidas por el mtodo. Se ensayaron 7 cepas de referencia y 10 aislados clnicos, de las siguientes es-
P136 27312 - PRODUCCIN Y EVALUACIN DE UN REACTIVO DE LTEX PARA EL DIAGNSTICO RPIDO DE CRIPTOCOCOSIS MENNGEA. TROVERO, ALICIA(2); ROGE, ARIEL(2); BORDAGORRIA, XIMENA(2); BOSCO BORGEAT , M EUGENIA(1); MAZZA, MARIANA(1); REFOJO, NICOLAS(1); IACONO, RUBEN(2); BRUNO, SUSANA(2); DAVEL, GRACIELA(1)
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pecies: M. pachydermatis, M. slooffiae, M. sympodialis, M. globosa, M. furfur, M. restricta y M. obtusa. Se colocaron en microplacas las soluciones de los antifngicos y los inculos, incubndose a 32 C por 48-72 h. Las pruebas fueron realizadas por triplicado para evaluar reproducibilidad del mtodo. Las lecturas de las placas se realizaron en lector para placas de ELISA, determinndose la concentracin inhibitoria mnima (CIM), considerada como la menor concentracin que produjo una disminucin del 90% del crecimiento en comparacin con el control de crecimiento. Resultados: los rangos de sensibilidad obtenidos fueron: terbinafina (CIM: 0,007-0,03g/ml), fluconazol (CIM: 0,130,50g/ml), itraconazol (CIM: 0,015-0,50g/ml) y ketoconazol (CIM: 0,015-0,06g/ml). Estos resultados coinciden con los perfiles de sensibilidad encontrados por otros grupos de investigadores. En general, se pudo observar que todas las cepas evaluadas son marcadamente sensibles a itraconazol, ketoconazol y terbinafina, mientras que son de moderadamente a poco sensibles frente a fluconazol. La metodologa empleada requiere una gran laboriosidad, entrenamiento tcnico, as como costosos insumos y equipamiento. No obstante, obtuvimos un adecuado ajuste de las variables que inciden en la buena reproducibilidad del mtodo, tales como magnitud del inculo, suplementos del medio utilizado, temperatura y tiempo de incubacin. Esto nos permiti la obtencin de resultados cuantitativos acerca de la sensibilidad antifngica frente a drogas comerciales. Consideramos de vital importancia continuar en el desarrollo de tcnicas ms sencillas como las que emplean medios slidos, a los efectos de facilitar la implementacin de estos estudios en el laboratorio de rutina.
Es llamativo el alto porcentaje de C. glabrata encontrado. La prematurez y la profilaxis favorecen la infeccin por C. glabrata. Esta especie desarrolla resistencia secundaria al fluconazol, una de las pocas opciones teraputicas en neonatos. C. famata aislada de hemocultivo es un importante patgeno emergente y ha sido informada con sensibilidad decreciente a la anfotericina B. El control de la colonizacin del tracto urinario y gastrointestinal en neonatos se considera importante para prevenir diseminaciones. Conclusin: nuestros resultados sugieren un cambio en el reconocido predominante rol de C. albicans como causa de candidemia o agente colonizador en neonatos. La diversidad encontrada y la deteccin de especies con tendencia al desarrollo de resistencia antifngica enfatizan la importancia de realizar una continua vigilancia en estos pacientes.
P139 27352 - INFECCIONES DE TRANSMISIN SEXUAL EN NIOS CON SOSPECHA DE ABUSO SEXUAL. KIGUEN, ANA XIMENA (1); VENEZUELA, FERNANDO (1); FRUTOS, MARIA CELIA (1); MONTANARO, PATRICIA (2); MIRAS, MIRTA (2); MOSCA, LILIANA (2); CUFFINI, CECILIA (1)
(1) Instituto de Virologa Dr. Jos M. Vanella (INVIV), FCM, UNC, (2) Hospital de Nios, Crdoba Introduccin: la presencia de una infeccin de transmisin sexual (ITS) en un nio, siempre nos debe hacer pensar en un abuso. Se cree que, aproximadamente, el 5% de los nios abusados contrae alguna ITS como consecuencia del mismo. Segn la Academia Americana de Pediatra (AAP), la deteccin de Neisseria gonorrhoeae (Ng), Treponema pallidum (Tp) y Chlamydia trachomatis (Ct) es considerada diagnstico de certeza de abuso sexual, siempre y cuando se compruebe que la infeccin no es perinatal, mientras que el hallazgo de Trichomonas vaginalis (Tv) y virus papiloma humano (HPV) nos da alta sospecha del mismo. La presencia de Mycoplasma genitalium (Mg) todava es controvertido. Objetivo: establecer la presencia de infecciones de transmisin sexual en nios con sospecha de abuso sexual en la ciudad de Crdoba. Pacientes y mtodos: se estudiaron muestras de 20 nios de 2 a 14 aos, que fueron evaluados en el Servicio de Endocrinologa del Hospital de Nios de la Santsima Trinidad de la Ciudad de Crdoba, con sospecha de abuso sexual. A los mismos se les tomaron muestras de hisopado farngeo y orina para la deteccin mediante mtodos de biologa molecular, de Ct, HPV y Mg. Para ello, se utilizaron los siguientes primers: A1, A2 y pCTM3 dirigidos contra MOMP de Ct; My09/ My11 y GP5+/ GP6+ para las PCR de HPV y Mgpa1/Mgpa3 para Mg. A las muestras que resultaron positivas para HPV, se las someti a RFLP para conocer el genotipo del virus. Adems, se tom muestras de flujo vaginal en las nias (N=18) y secrecin uretral o anal en los nios (N=2), en las cuales se efectu un examen directo para la deteccin de Tv y se cultivaron en medio de Thayer Martin para el aislamiento de Ng. Por ltimo, se realiz extraccin de sangre para VDRL. Resultados: del total de pacientes estudiados, 3 muestras de hisopados farngeos de nias resultaron positivos para Ct (15%). En 5 muestras de hisopado farngeo y 1 de orina, correspondientes a 6 pacientes, se detect ADN de HPV (30%) ya sea utilizando My09/My11 o GP5+/GP6+ y los genotipos encontrados fueron de bajo riesgo (6 y 11). Dos hisopados farngeos de nias resultaron positivos para Mg (10%). La observacin de Tv y el cultivo para Ng, slo se practic en 14 de los 20 nios, resultando negativo en todos los casos al igual que la VDRL que se realiz en 7 pacientes. Slo en una paciente se diagnostic coinfeccin de HPV y Mg en la muestra de hisopado farngeo. Conclusiones: el aislamiento de un microorganismo de transmisin sexual en un nio, puede ser el primer indicio de abuso sexual. Teniendo en cuenta que el 50% de estas infecciones son asintomticas en los nios, es de gran importancia realizar el diagnstico y tratamiento precoz para evitar las complicaciones propias de estas infecciones, permitiendo una mejor calidad de vida en estos pacientes. Por lo expresado anteriormente, consideramos que sera necesario profundizar las investigaciones en este tema, a los fines de aportar datos que sirvan a la implementacin de futuros programas de diagnstico de ITS en este grupo etreo.
P138 27325 - FUNGEMIAS Y COLONIZACIN POR LEVADURAS EN NEONATOS DE UNIDADES DE CUIDADOS INTENSIVOS. ROJAS, FD; CATTANA, ME; SOSA, MA; MANGIATERRA, ML; GIUSIANO, GE
Instituto de Medicina Regional - UNNE La fungemia por levaduras es un problema cada vez ms frecuente en neonatos en unidades de cuidados intensivos neonatales (UCIN). Las condiciones predisponentes ms importantes para desarrollar candidemia son la neutropenia, los defectos en la inmunidad celular y la alteracin de la biota microbiana. En neonatos la colonizacin ha sido claramente identificada como factor de riesgo independiente que los hace susceptibles para adquirir candidemia. Diversos estudios enfatizan que la colonizacin de 2 o ms sitios anatmicos no contiguos se correlaciona con el aumento del riesgo de mortalidad. Aproximadamente, el 70% de las infecciones son de origen endgeno y se adquieren a partir de la colonizacin del tracto digestivo y de la piel. Las levaduras del canal de parto son la principal fuente exgena. El objetivo fue conocer la frecuencia de aislamiento de especies levaduriformes como agentes colonizantes y de fungemias en neonatos en UCIN. Se analizaron los aislamientos levaduriformes de muestras clnicas obtenidas de neonatos en UCIN privadas de la ciudad de Resistencia, entre los aos 2005-2009. La identificacin se realiz segn la metodologa de Kreeger van-Rij y el sistema API ID 32C (bioMrieux).
Especies Candida parapsilosis C. tropicalis C. albicans C. glabrata C. famata Total Sangre 9 (64,3%) 2 (14,3%) 2 (14,3%) 0 1 (7,1%) 14 (100%) Catter 1 (33%) 2 (67%) 0 0 0 3 (100%) Orina 7 (27%) 6 (23%) 9 (35%) 4 (15%) 0 26 (100%) Mat. fecal 4 (21%) 7 (37%) 5 (26%) 3 (16%) 0 19 (100%) Total 21 (34%) 17 (27%) 16 (26%) 7 (11%) 1 (2%) 62 (100%)
C. parapsilosis es comensal de piel y tiene capacidad de colonizar catteres, instrumental plstico, ltex, soluciones antispticas, etc. El alto porcentaje obtenido en todos los tipos de muestras evidencia la importante transmisin horizontal de este agente y la necesidad de aplicar medidas de higiene y control. C. tropicalis aislada en 2 lugar es comensal del tracto gastrointestinal y una importante causa de infeccin por su capacidad invasora y alta tendencia al desarrollo de resistencia a los azlicos.
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P140 27375 - MICROBIOLOGA DE LA PERI-IMPLANTITIS. TOMAS, LEANDRO JUAN

Facultad de Odontologa de la U.N.L.P. (Ctedra de Microbiologa y Parasitologa) Los implantes dentales oseointegrados, utilizados cada vez ms en nuestro medio, permiten ofrecer a nuestros pacientes prtesis confortables y funcionales, mejorando as su calidad de vida. La peri-implantitis se define como un proceso inflamatorio que afecta a los tejidos que rodean un implante oseointegrado en funcin y que produce una prdida del soporte seo. El objetivo de este trabajo es mostrar, valorar y discutir los resultados del estudio microbiolgico del exudado o del tejido peri-implantario de implantes con peri-implantitis. Todos estos implantes ya haban sido cargados con sus respectivas prtesis. De los 16 implantes estudiados, en 14 se obtuvieron muestras de exudado con puntas de papel estriles que se introdujeron en la bolsa peri-implantaria. En 2 implantes las muestras fueron de tejido de granulacin peri-implantario. A continuacin, las muestras se colocaron en placas de agar-chocolate con Brain Heart Infusion. Las placas de Petri se introdujeron en un frasco de vidrio diseado especialmente para su transporte en un medio anaerobio. Se realizaron cultivos de anaerobios y de aerobios para determinar las bacterias predominantes en cada muestra, practicndose tambin un antibiograma para establecer el tratamiento antibitico de eleccin en cada paciente. Los antibacterianos estudiados fueron: amoxicilina, metronidazol y la combinacin de amoxicilina con cido clavulnico o con metronidazol. Una vez tomada la muestra, se proceda al tratamiento del implante infectado con la descontaminacin de la superficie del implante, o bien con la extraccin del implante afectado si la prdida sea era muy importante. Las bacterias aisladas fueron: Stomatococcus sp., Prevotella oralis, Peptostreptococcus spp. y Fusobacterium nucleatum. En 9 muestras fue imposible aislar una bacteria predominante debido a la complejidad de la flora. Respecto al resto de muestras, la bacteria predominante fue Stomatococcus sp. (3), Prevotella oralis (1), Peptostreptococcus spp. (1) y Fusobacterium nucleatum (2). Los antibiogramas mostraron una mayor sensibilidad a la asociacin de amoxicilina con el cido clavulnico, comparada con amoxicilina, metronidazol o una combinacin de estos dos ltimos antibacterianos. En este trabajo las bacterias asociadas ms frecuentemente a la peri-implantitis fueron: Stomatococcus sp., Prevotella oralis, Peptostreptococcus spp. y Fusobacterium nucleatum. En ningn caso se aislaron cepas de Actinobacillus actinomycetemcomitans. Los posibles factores de riesgo asociados a peri-implantitis en nuestra serie fueron los implantes recubiertos con hidroxiapatita, implantes de 3,25 mm de dimetro y la localizacin ms distal del implante en las prtesis que rehabilitaban extremos libres edntulos superiores. El mejor tratamiento de la peri-implantitis es su prevencin. Esto se consigue siendo muy rigurosos durante la fase quirrgica y protsica. Se debe realizar previamente un diagnstico y plan de tratamiento correctos para determinar el nmero y la posicin ideal de los implantes, segn las caractersticas y posibilidades de cada paciente. El diseo de la prtesis debe presentar un ajuste pasivo y permitir una buena higiene bucal y un buen control de la placa bacteriana. Si el paciente presenta alguna parafuncin debe tratarse previamente. Tambin es muy importante efectuar controles peridicos de los pacientes, tanto clnica como radiolgicamente.
les existen caractersticas favorables para la diseminacin de esta enfermedad: deambular constante de caninos en va pblica, calles de tierra inundadas, acmulos de basura y presencia de roedores. Objetivo: demostrar la existencia de una mayor prevalencia de leptospirosis canina en barrios carenciados respecto al resto de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires (CABA) y estudiar su fluctuacin entre 2007 y 2009. Materiales y mtodos: se realiz la prueba de microaglutinacin (MAT) en 131 sueros de caninos extrados en 2007 y 55 extrados en 2009, ingresados de enero a diciembre de 2007 e igual perodo en 2009. La disminucin del tamao muestral se debi a que las acciones emergentes del IZLP se centralizaron en las acciones de foco de lucha contra el dengue, durante la epidemia de dicha enfermedad en 2009. Las muestras provinieron del Centro de Salud y Accin Comunitaria (CeSAC) 18, localizado en la Villa 20 de la CABA (situada entre Av. Cruz, Larraya, B y Ordez, Miralla, FF. Belgrano y Av. Escalada), visitado regularmente por profesionales de la residencia de veterinaria en Salud Pblica del IZLP. Las muestras del resto de la CABA se obtuvieron a partir de caninos atendidos en consultorios externos del IZLP y de sueros remitidos por veterinarios de la actividad privada. Las diferencias estadsticas se establecieron por prueba de X2. Resultados: P (CeSAC 18 2007 vs Resto CABA 2007) < 0,000001, P (CeSAC 18 2009 vs Resto CABA 2009) = 0,037, P(CeSAC 18 2007 vs CeSAC 18 2009) = 0,043, P(Resto CABA 2007 vs Resto CABA 2009) = 1
Ao 2007 2007 2009 2009 Procedencia CeSAC 18 RESTO CABA CeSAC 18 RESTO CABA Muestras 52 38 13 29 Muestras 79 272 42 205 Prevalencia 39,69% 12,26% 23,64% 12,39%
Los resultados demostraron que existe una mayor prevalencia de la enfermedad en los barrios carenciados, sin duda condicionado por la particular situacin ambiental que padecen. Tambin se observ una declinacin en la prevalencia de leptospirosis en la Villa 20 en el ao 2009, que podra ser explicada, por un lado, por el menor nmero de muestras tomadas, y por otro, por el menor volumen de precipitaciones pluviales durante 2008, lo cual pudo influir en la disminucin de la circulacin del agente etiolgico y por lo tanto, influy probablemente en un menor nmero de infecciones en caninos. As, considerando la tasa de decaimiento de los anticuerpos anti Leptospira interrogans (1 ao de vida media) y el ambiente menos propicio para el mantenimiento y difusin del agente, puede explicarse la reduccin de la seroprevalencia en caninos en la villa 20.
P142 27396 - ANLISIS DE LAS DERMATOFITOSIS EN UNA POBLACIN PEDITRICA. TURCATO, GABRIELA; VESCINA, CECILIA; GUIGNO, SILVINA; BETTIOL, MARISA; GATTI, BLANCA MARIA
Hospital de Nios de La Plata. Sor Mara Ludovica Introduccin: las dermatofitosis o tias son infecciones de los tejidos epidrmicos causados por un grupo de hongos queratinoflicos denominados dermatofitos que se encuentran distribuidos taxonmicamente en tres gneros: Microsporum (M) Tricho-phyton (T) y Epidermophyton (E). Estos hongos penetran y parasitan las estructuras crneas de la piel, pelo y uas provocando diferentes presentaciones clnicas que motivan la consulta mdica. Objetivo: analizar la etiologa de estas infecciones fngicas, su localizacin y la relacin con la edad y el sexo. Metodologa: se realiz un estudio retrospectivo, observacional y descriptivo de 303 muestras de piel, pelo y uas,obtenidas de pacientes atendidos en el Servicio de Dermatologa del Hospital de Nios de La Plata desde enero de 2008 a diciembre de 2009. Para el procesamiento de las muestras se utilizaron mtodos convencionales realizndose la tipificacin de las colonias obtenidas por macro y micro morfologa. Resultados: de las 303 muestras analizadas, en 134 (44.0%) se obtuvieron cultivos positivos. El 59,7% correspondi al sexo masculino y 40.3% al sexo femenino. El anlisis por edades revel que el 13.4% de los nios que adquirieron dermatofitosis eran menores de 3 aos, el 29.8% de 3-5 aos, el 37.3% de 5-12 aos y el 19.4% mayores de 12 aos.
P141 27382 - INFORME PRELIMINAR: FLUCTUACION EN LA SEROPREVALENCIA DE LEPTOSPIROSIS EN CANINOS EN LA VILLA 20 DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. TEALDO, MARTA; FURFARO, ALEJANDRA; GENTILE, ADRIAN; MARIA, NAVARRO OCONNOR; DURE, FRANCISCO; BRAMBATI, DIEGO; VIDAL, JIMENA; SICCARDI, FERNANDO; DEL RIO, AMANDA; CAPRA, SILVANA; CALDEVILLA, CECILIA; DE GENNARO, MARIA F; GURY DOHMEN, FEDERICO
Instituto de Zoonosis Luis Pasteur (IZLP) Introduccin: la leptospirosis es una zoonosis que puede afectar a diversos mamferos, incluido el hombre. En zonas margina-
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Respecto a la etiologa, el 38.0% fue M.cannis, 16.8% T.rubrum, 7.0% M. gypseum ,7.0% T. mentagrophytes, 6.1% T.verrucosum y 4.4% T. tonsurans. La localizacin de las lesiones fue de 48.4% en pelo y cuero cabelludo, 32.2% en piel lampia, 15.3% en uas de pie y 4% en uas de mano. M cannis fue el principal agente etiolgico de las dermatofitosis en la poblacin peditrica, seguido por T. rubrum para el perodo 2008-2009. La localizacin predominante fue el pelo y cuero cabelludo. Fue mayor el porcentaje de aislamientos en varones que en mujeres. Las dermatofitosis fueron ms frecuentes en el grupo entre 3-12 aos, coincidiendo con sus hbitos de juego.
P143 27409 - CANDIDIASIS GRANULOMATOSA DE HERIDA QUIRRGICA, POST CIRUGA CARDACA. MAIOLO, ELENA; NEGRONI, RICARDO; BIANCHI, MARIO; LEHMANN, ERICA; ARECHAVALA, ALICIA; SANTISO, GABRIELA; WALKER, LAURA
Hospital Muiz Introduccin: la ciruga cardiovascular a cielo abierto puede presentar complicaciones infecciosas. En el caso de reemplazos de vlvulas cardacas, las ms frecuentes son las infecciones de las vlvulas protsicas, las de las heridas quirrgicas y la mediastinitis, esta ltima, cuando en producida por candida, se acompaa de deterioro del estado general con una tasa de mortalidad que vara entre el 40% y 60% y suelen cronificarse cuando comprometen el esternn, los cartlagos costales o presentan cuerpos extraos como los alambres. Objetivos: dar a conocer un caso de candidiasis de la herida quirrgica en un paciente diabtico que present una mediastinitis como complicacin post-quirrgica. Pacientes y mtodos: paciente del sexo masculino, 67 aos, diabtico tipo II, con antecedentes de endocarditis bacteriana de vlvula mitral, en 8/2008 se le realiz reemplazo de la misma y colocacin de un marcapasos en un nosocomio de Espaa. Durante su internacin recibi muchos tratamientos antibiticos y hemodilisis, fue dado de alta en 12/2008 y viaj a la Argentina. Present una mediastinitis post-ciruga, con fstulas, granulomas para-esternales y osteocondritis, recibi mltiples tratamientos con antibiticos. En 2/2009 las lesiones se haban cronificado, presentaba febrcula y mal estado general, adems haba adelgazado 30 kg de peso. Los exmenes de laboratorio fueron: eritrosedimentacin 120 mm/h, PCR positiva, glucemia 178 mg%, hemoglobina 11,5 mg%, el resto de los resultados estaba dentro de parmetros normales. Se realiz un anlisis micolgico de las secreciones para-esternales y se aisl Candida albicans. Este hallazgo fue corroborado por una toma biopsia donde se observaron levaduras y pseudohifas. Se determin el perfil de sensibilidad mediante Etest con los siguientes resultados: anfotericina B 0,09 g/ml, fluconazol 0,25 g/ml, itraconazol 0,01 g/ml, voriconazol 0,004 g/ml y caspofungina 0.25 g/ml. Resultados: se comenz el tratamiento con itraconazol 400 mg/da y a los 45 das se rot a fluconazol 400 mg/da, por presentar involucin lenta de los granulomas. Evolucion favorablemente, pero como no haba cicatrizado completamente, se realiz ciruga esttica reparadora pare extraer los alambres de la primera internacin en 8/2009. Continu con fluconazol hasta 2/2010 cuando fue dado de alta. Conclusiones: una causa frecuente de infecciones postesternotoma son las producidas por levaduras del gnero Candida, principalmente cuando se realiza ciruga cardaca y se unan los huesos con cerclaje de alambre. Debido a lo no caracterstico de las manifestaciones clnicas, el diagnstico suele demorarse y evoluciona crnicamente, es recomendable en estos casos, realizar un examen micolgico adems del bacteriolgico. Para el tratamiento se eligi itraconazol debido a su buena penetracin sea y a que la cepa aislada present una baja CIM a los azlicos. Luego de un mes se rot a fluconazol por presentar una lenta involucin de las lesiones. Este antifngico y la eliminacin de los alambres permitieron una completa recuperacin del paciente.
El botulismo alimentario (BA) es hoy la forma fisiopatognica menos frecuente de botulismo humano, posiblemente por ser la ms conocida y las medidas de prevencin ms populares. En Mendoza, despus de 18 aos sin registros, en 2009 se produce un nico caso por ingestin de escabeche de vizcacha (Lagostimus maximus) de elaboracin casera. El paciente, masculino de 44 aos, manifest los primeros sntomas 16 h 30 min despus de la ingestin. El alimento txico no present signos de deterioro que pudieran impedir su consumo. Se recibieron restos del alimento consumido (RAC) y 8 frascos sin abrir y del paciente se recibieron suero, hisopado rectal (HR) y contenidos gstrico (CG) e intestinal (CI) (enema). Se investig toxina botulnica (TBo) en todos los materiales excepto en HR, y esporas de Clostridium botulinum (Cb) en todos excepto en suero. Los alimentos (homogeneizados con su propio lquido), el CI y el CG, se centrifugaron a 10.000xg, 4 C, 20 min. Los sobrenadantes se reservaron para deteccin de TBo (bioensayo en ratn por va IP y tipificacin preliminar por neutralizacin con antitoxinas polivalentes [ABF] y monoespecficas [A, B y F]), y el sedimento para la investigacin de Cb (medio de carne picada, inubado a 31C, 5 das, e investigacin de TBo en el sobrenadante centrifugado). De los cultivos txicos se procedi al aislamiento de Cb en medios slidos y con las cepas aisladas a produccin, titulacin y tipificacin definitiva de la TBo a nivel de 2.000 DL50/ratn. Resultados: ver Tabla (Ref: NR no realizado). Se detect TBo A en: RAC, suero y CI. Se aisl Cb A de: RAC, CI e HR. El pH en el RAC fue 5,04 y en los otros frascos 5,07 a 6,07. El ttulo de TBo fue muy elevado en RAC (13.632 DL50/ml) y en suero (26 DL50/ml).
Resultados Alimento Consumido No consumidos Paciente Suero Contenido Contenido Hisopado intestinal gstrico rectal
Investigacin Toxina C. botulinum
A A
Neg Neg
A NR
A A
Neg Neg
NR A
Este es el segundo brote en la historia del botulismo en la provincia de Mendoza en que un mdico se autodiagnostica la intoxicacin al inicio de los sntomas e identifica al alimento responsable. La sospecha precoz, la confirmacin rpida por el laboratorio, la instalacin inmediata del tratamiento especfico con antitoxina botulnica y el tratamiento de soporte adecuado, son fundamentales para la recuperacin del paciente. En este caso, no obstante el rpido diagnstico, la demora en la disponibilidad de la antitoxina motiv que su administracin comenzara aproximadamente a las 40 h de iniciados los sntomas. Aunque la recuperacin de la tonicidad muscular fue lenta, la evolucin fue favorable, debiendo necesitar traqueotoma y fisioterapia prolongada. Las buenas prcticas de manufactura para elaborar conservas caseras disminuye la incidencia del BA y el estado de alerta permanente y la disponibilidad y administracin precoz del suero antitxico disminuyen la tasa de letalidad.
P145 27430 - CEPAS DE INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO DE LA COMUNIDAD CON FENOTIPO BLEE EN VILLA MARA, CRDOBA: UN PROBLEMA EMERGENTE. AIMARETTO, CLAUDIA(1); RAIMONDI, KARINA(2); CHEGUIRIAN, LAURA(3); TOLEDO, CRISTINA(4); PEIROTTI, MARIA GABRIELA(5)
(1) Hospital Pasteur, (2) Clnica San Martin CL Esp, (3) Sanatorio Cruz Azul, (4) Laboratorio Gorniz, (5) Clnica G. Maraon Los bacilos gram-negativos productores de beta-lactamasa de espectro extendido (BN-BLEE) han sido considerados patgenos nosocomiales con un alto potencial de diseminacin. Sin embargo, desde los aos90 comenzaron a comunicarse aislamientos procedentes de la comunidad principalmente de infecciones del tracto urinario (ITU), que constituyen uno de los principales motivos de consulta ambulatoria, por lo que debera realizarse su bsqueda de manera sistemtica. Los objetivos del presente trabajo fueron: determinar la prevalencia y perfil de sensiblidad de BN- BLEE aislados de ITU de pacientes ambulatorios y documentar su emergencia en la comunidad. Se estudiaron en forma prospectiva-descriptiva todos los urocultivos procedentes de pa-
P144 27425 - BOTULISMO POR ESCABECHE DE VIZCACHA EN MENDOZA, ARGENTINA. PAREJA, VIRTUDES; DE JONG, LAURA I T; FERNANDEZ, RAFAEL A
FCM Universidad Nacional de Cuyo
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cientes ambulatorios de 6 instituciones de salud de la ciudad de Villa Mara: 1 pblica y 5 privadas, durante el perodo comprendido entre noviembre de 2009 hasta abril de 2010. El procesamiento se llev a cabo por mtodos convencionales. A los aislamientos jerarquizados se les realiz pruebas de sensibilidad antibacteriana por el mtodo de difusin con disco que se interpretaron segn normas del Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). La confirmacin de BLEE se determin por mtodo de doble disco. El anlisis estadstico de los datos se realiz utilizando tests de chi cuadrado y U de Mann-Whitney. De un total de 2812 urocultivos se jerarquizaron 653 (23%), de los cuales 19 fueron cepas productoras de BLEE con una prevalencia del 2,9%. Del total de BN- BLEE, 17 correspondieron a enterobacterias (11 Escherichia coli, 4 Klebsiella pneumoniae, 1 Enterobacter spp., 1 Proteus mirabilis) y 2 Pseudomonas aeruginosa. La resistencia a ciprofloxacina (CIP) fue significativa en los BN-BLEE (p=0,038) mientras que para nitrofurantoina y cotrimoxazol no se obtuvo diferencia estadstica (p=0,804 y p=0,534 respectivamente). Este es el primer estudio multicntrico sobre prevalencia de BLEE en la comunidad de Villa Mara. Los laboratorios participantes nuclean a un sector mayoritario de la poblacin de la ciudad y zona de influencia. Detectamos una prevalencia del 2,9% de BN-BLEE, con una resistencia acompaante a CIP estadsticamente significativa. La emergencia y diseminacin de estos microorganismos en la comunidad es un hecho inevitable. Por lo que una adecuada deteccin de los mecanismos de resistencia es responsabilidad del laboratorio de microbiologa, siendo esencial para conocer la verdadera dimensin del problema que representan, limitar su diseminacin y adecuar las opciones teraputicas.
Typhimurium fue la serovariedad que se aisl con mayor frecuencia en humanos, en animales y en alimentos, desplazando a S. Enteritidis del primer lugar en aislamientos de origen humano, como lo vena haciendo desde 1987. Mientras que en alimentos para animales la serovariedad prevalente fue S. Montevideo y en el ambiente S. Livingstone. Merece destacarse que aunque estos datos no representan la totalidad de los aislamientos de Salmonella spp. en Argentina, tienen importancia para el monitoreo de esta zoonosis, ya que a pesar de la necesidad creciente de mejorar la calidad de los alimentos, an no se logra su control a nivel mundial.
P147 27437 - HEMOCULTIVOS AUTOMATIZADOS: EVALUACION DE DIEZ MESES. DECCA,L; RIVAROLA,M; MORENO, G;SACHETTA, M; MARINO, M; RIERA, F
Clnica del Sud. Crdoba Las infecciones del torrente sanguneo tienen una alta tasa de morbi-mortalidad. El hemocultivo (HC) seriado es una de las muestras ms importantes remitidas al laboratorio de microbiologa, por su valor diagnstico y su implicancia en el posterior manejo del paciente. El objetivo de este trabajo fue evaluar el rendimiento del sistema automatizado de monitoreo continuo utilizado, conocer la frecuencia de aislamiento de los microorganismos (MO) causantes de bacteriemias y fungemias, y los patrones de resistencia (R) a los antimicrobianos (ATM) habitualmente usados. Se realiz un estudio observacional descriptivo en el que se incluyeron todos los hemocultivos realizados a pacientes peditricos y adultos que concurrieron a nuestro sanatorio entre agosto de 2009 y mayo de 2010. Las muestras fueron procesadas en el sistema automatizado Bactec 9050 (Becton Dickinson), los aislamientos se identificaron segn esquemas de pruebas bioqumicas convencionales y los estudios de sensibilidad se realizaron por mtodos de difusin y/o dilucin segn normas del Clinical Laboratory Standars Institute (CLSI). Se analizaron en total 1176 botellas correspondientes a 618 pacientes (13% peditricos). Del total de HC, 203 (17.3%) fueron positivos, 60% de los frascos di seal positiva antes de las 15 h y 75% antes de las 20 h de incubacin. Del total de los aislamientos, 115 (56.6%) correspondieron a cocos gram-positivos, 58 (28.6%) a enterobacterias (EB), 14 (6.9%) a bacilos gram-negativos no fermentadores (BNF), 6 (3.0%) a levaduras y 10 (4.9%) resultaron ser contaminantes. Dentro de los gram-positivos el MO ms frecuente fue Staphylococcus aureus (Sau) (n=71, 35%), seguido por estafilococos coagulasa-negativa (n=12, 5.9%), Streptococcus pneumoniae (n=12, 5.9%), Enterococcus faecalis (n=10, 4.9%), estreptococos grupo viridans (n=8, 3.9%) y estreptococos beta hemoltico (n=2, 1.0%). En las enterobacterias el primer lugar correspondi a Escherichia coli (n=38, 18.7%), seguido por Enterobacter cloacae (n=10, 4.9%), Klebsiella pneumoniae (n=6, 3.0%), otras enterobacterias (n=4, 2.0%). Pseudomonas aeruginosa (n=14, 6.9%) fue el nico representante de los bacilos no fermentadores. Dentro de las levaduras, Candida albicans (n=5, 2.5%) y Candida tropicalis (n=1, 0.5%). En Sau se observ 42% de R a meticilina. S. pneumoniae mostr 100% de sensibilidad a penicilina. El 35.5% de las EB fue productor de beta lactamasa de espectro extendido. Pseudomonas aeruginosa tuvo 33.3% de R a carbapenemes. La rapidez en la deteccin de positividad en el HC automatizado es una de las principales ventajas del sistema de monitoreo continuo. El porcentaje de HC positivos hallado en nuestro trabajo es similar a lo reportado en bibliografa. En esta serie los cocos gram-positivos fueron los MO aislados con mayor frecuencia y dentro de stos Sau fue el ms prevalente. Destacamos la importancia y utilidad de conocer la epidemiologa de cada lugar, como as tambin los patrones de sensibilidad de los MO involucrados, a fin de poder instaurar de manera temprana un esquema antimicrobiano emprico orientado.
P146 27432 - SEROVARIEDADES DE Salmonella spp. EN ARGENTINA, 2007-2009. CAFFER, MI (1); ALCAIN, A (1); PANAGOPULO, M (1); MORONI, M (1); BRENGI, S (1); TERRAGNO, R (1)
(1) Servicio Enterobacterias, INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn La salmonelosis es una zoonosis de importancia en salud pblica, debido al impacto socioeconmico que ocasiona tanto en pases en desarrollo como en los desarrollados. Su distribucin es mundial, con variaciones en las serovariedades entre pases, porque se encuentra influenciada por factores como: clima, densidad poblacional, prcticas agroganaderas, tcnicas de elaboracin de los alimentos y hbitos de consumo. El objetivo de esta comunicacin, continuando con la vigilancia desde el laboratorio, es presentar los datos de prevalencia de Salmonella spp. en aislamientos de origen humano, animal, de alimentos para consumo de ambos y del medio ambiente, en el trienio 2007-2009. En este perodo, en el Laboratorio Nacional de Referencia, se estudiaron 2814 aislamientos de Salmonella spp., siendo el nmero superior en un 19.7 %, al del trienio anterior (n=2350). Del total de aislamientos recibidos 1460 (51.9%) fueron de origen humano, 420 (14.9%) de animales, 506 (18.0%) de alimentos, 344 (12.2%) de alimentos para animales, 84 (3.0%) del ambiente. Todos fueron confirmados por pruebas bioqumicas y la determinacin de las serovariedades se realiz por serotipificacin utilizando antisueros provistos por el Servicio Antgenos y Antisueros, del Instituto Nacional de Produccin de Biolgicos. Las tres serovariedades prevalentes en humanos fueron: S. Typhimurium, n=559, seguida por S. Enteritidis, n=338 y S. Newport, n=121, lo que signific un cambio en el orden de frecuencia respecto del perodo 2004-2006, en que el mismo fue: S. Enteritidis, S. Typhimurium y S. Infantis. En animales las serovariedades aisladas con mayor frecuencia, fueron S. Typhimurium, n=75 y S. Enteritidis, n=35; en alimentos S. Typhimurium, n=125 y S. Anatum, n=51; en alimentos para animales S. Montevideo, n=40 y S. Agona, n=27 y en el ambiente S. Livingstone, n=30 y S. Mbandaka, n=14. En este perodo, se tipificaron 109 serovaridades diferentes considerando todas las fuentes y por primera vez en Argentina S. Brandenburg, S. Benfica, S. Bareilly, S. Coeln, S. Irumu, S. Oslo, S. Sundsvall, S. Stanleyville, S. subespecie IV 43:z4:z23:-.y S. subespecie IV 21:z4, z23:- En este trienio se registraron 11 brotes causados por Salmonella spp.: 6 fueron por S. Enteritidis, 2 por S. Newport, 2 por S. Typhimurium y 1 por S. Thompson. De los resultados obtenidos, podemos concluir que S.
P148 27444 - CARACTERIZACIN MOLECULAR DE AISLAMIENTOS DE Echinococcus spp. (SENSU LATO) OBTENIDOS DE HOSPEDADORES INTERMEDIARIOS EN LA PROVINCIA DE NEUQUN, ARGENTINA. SORIANO, SV (1); PIERANGELI, NB
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(1); PIANCIOLA, LA (2); MAZZEO, M (2); LAZZARINI, LE (1); KOSSMAN, AV (1); BERGAGNA, HFJ (3); CHARTIER, K (4); BASUALDO, JA (5)
(1) Facultad de Ciencias Mdicas UNCO, (2) Subsecretara de Salud de Neuqun (3) Zoonosis Municipalidad de Neuqun, (4) Municipalidad Chos Malal, (5) Facultad de Ciencias Mdicas UNLP Introduccin: la echinococcosis qustica es una zoonosis altamente endmica en Neuqun, Argentina, a pesar de existir un programa provincial de control desde 1970. Echinococcus granulosus sensu lato existe como un complejo de diferentes variantes genticas (G1 a G10) que en la actualidad se ha propuesto agrupar en: E. granulosus sensu stricto (G1 a G3), E. equinum (G4), E. ortleppi (G5), y E. canadensis (G6 a G10). Estos genotipos pueden diferir en caractersticas fenotpicas que son importantes en las estrategias de control. Si bien la cepa G1 es predominante en infecciones humanas, estudios previos han demostrado que la infeccin humana por cepa G6 es frecuente en Neuqun. El objetivo de este trabajo fue analizar quistes hidatdicos (QH) de diferentes hospedadores intermediarios para identificar los posibles reservorios locales de cepa G6. Materiales y mtodos: se obtuvieron QH de oveja (n=16), cabra (n=23) y cerdo (n=18) en mataderos provinciales. Se investig la fertilidad (definida como presencia de protoesclices) de cada QH y el porcentaje de viabilidad en los QH frtiles (por coloracin vital de protoesclices con Azul Tripn al 0,4%). Se defini como aislamiento a protoesclices o membrana germinal de cada QH individual. Se extrajo el ADN, se amplific por la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) una regin del gen de citocromo oxidasa (cox1) y se secuenci por mtodos standard. Resultados: fertilidad: 78,6%; 90,5%; 94,4% y viabilidad: 45,0%; 73,9%; 81,5% para los QH de origen ovino, caprino y porcino respectivamente. Genotipos: oveja=G1 (15/16) con algunas microvariantes y G3 (1/16); cabra=G6 (21/23) y G1 (2/23); cerdo=G7 (18/18). Discusin: se detectaron 4 genotipos diferentes correspondientes a E. granulosus sensu stricto (G1 y G3) y E. canadensis (G6 y G7) lo cual indica una compleja epidemiologa para el gnero Echinococcus en nuestra regin. El genotipo G3 fue identificado por primera vez en Argentina y en Sudamrica. La distribucin de los genotipos sugiere asociacin con la especie de hospedador intermediario involucrado. Considerando que E. canadensis (genotipo G6) fue detectado solamente en cabras, que la fertilidad y viabilidad de los QH caprinos fue elevada y que la cra de este ganado es la principal actividad econmica en zonas rurales de la provincia podemos concluir que el ganado caprino acta como reservorio del genotipo G6 en la provincia de Neuqun. Estudios posteriores que involucren mayor nmero de ejemplares y otros potenciales hospedadores intermediarios como bovinos y animales autctonos seran necesarios para determinar si otra especie puede tambin cumplir el rol de reservorio local de E. canadensis genotipo G6.
principalmente de linfocitos T activados. Objetivo: evaluar la utilidad del dosaje de ADA en lquidos pleurales por el mtodo de Galanti Giusty, como herramienta diagnstica de TBC pleural en nuestro medio. Materiales y mtodos: en el perodo 4/2007 a 4/ 2010 se procesaron 238 muestras de LP de pacientes con derrame pleural y diagnstico presuntivo de TBC pleural. Las muestras fueron centrifugadas 15min a 3000rpm, el sedimento fue sembrado en medio lquido (MB/Bact) e incubadas a 37 durante 45 das. Los cultivos positivos se detectaron en un tiempo promedio de 20 das e identificados por NAP test. El sobrenadante se almacen a -20 para el dosaje de ADA por el mtodo de Galanti Giusty (se procesaron todas las muestras por duplicado) utilizndose un valor de corte de 60 u/l. Resultados: pacientes (n): ADA + cultivo+ 43, ADA + cultivo- 23, ADA- cultivo + 5, ADA- cultivo167. En el grupo de pacientes con ADA+y cultivo-, 8 de ellos tuvieron confirmacin diagnstica, ya sea por anatoma patolgica o por la evolucin favorable tras instaurar el tratamiento antituberculoso. En los 15 pacientes restantes los diagnsticos definitivos fueron: linfomas: 5, empiemas: 6, NMN: 2. Otros 2 casos tenan epidemiologa para TBC (1 contacto, otro TBC previa), con abandono de tratamiento, por lo que se excluyeron de este anlisis. Sobre el total de 238 pacientes la confirmacin bacteriolgica se obtuvo en 48 casos (20%) (LP y/o BP). 1) ADA+TBC + 51 2) ADA+TBC- 13 3) ADA-TBC + 5 4) ADA-TBC- 167. Sensibilidad: 91%, especificidad: 93%, VP +: 80%, VP -:97%. En el grupo de pacientes con ADA- y cultivo+ (falsos negativos) los valores de ADA fueron: 1) 51 2) 46 3) 25 4) 17 5) 41. La determinacin de ADA en LP es un mtodo sensible y especfico que contribuye al diagnstico de TBC pleural. Las principales ventajas son: rapidez, bajo costo, fcil ejecucin, destacndose su alto valor predictivo negativo (VPN). En el caso de valores positivos es necesario hacer un diagnstico diferencial con otras enfermedades que tambin producen una elevacin de la enzima (ej: neoplasias, empiemas).
P150 27446 - COMPLEJO Burkholderia cepacia Y HEMODILISIS. PREDARI, SC (1); CASTAEDA, NC (2); DE PAULIS, AN (1); SANTOIANNI, JE (1); GUTIERREZ, MA (1); AGUIRRE, C (1); CENTRON, D (2)
(1) Instituto de Investigaciones Mdicas A. Lanari-UBA; (2) Facultad de Medicina-UBA. Introduccin: el complejo Burkholderia cepacia (CBC) est constituido por 17 genoespecies. Son patgenos oportunistas de distribucin ubicua, sobreviven en el suelo, en el agua y se multiplican en medios con requerimientos nutricionales mnimos. Objetivo: partir del aislamiento de genoespecies del CBC en los hemocultivos (HEM) de pacientes con bacteriemia intradilisis, en el agua tratada y en el bao de dilisis, se investig si exista alguna relacin clonal o algn clon predominante que permitiese detectar el/los reservorios para establecer estrategias de prevencin y control. Materiales y mtodos: en el perodo 2006-2009, se identificaron 36 aislamientos del CBC, a. Fenotpicamente: bacilos gram-negativos, mviles, oxidasa y catalasa (+), oxidadores de glucosa y manitol, LDC y ONPG (+). En el medio Reasoner presentaron un caracterstico color verde limn. b. Tipificacin molecular: se realiz extraccin de ADN, PCR del gen recA y secuenciacin del fragmento de 385 pb; anlisis de las secuencias por alineamiento en la base de datos BLAST y el anlisis genotpico por RAPD. Cebadores: Bur3 y Bur4. Resultados: de los 36 aislamientos del CBC, en el perodo 2006-7, 10 correspondieron a la genoespecie B. cepacia, RAPD I (6), II, XI y XVI aislados de HEM y del agua tratada. A partir de 09-2007 se detectaron 7 combinaciones B. cepacia + B. contaminans en los HEM de 4 pacientes, en el bao de dilisis y en el agua tratada. Burkholderia spp.: 8 aislamientos del agua tratada y 1 de HEM. B. contaminans: 5 aislamientos, 2 de HEM, RAPD III y XVI; 2 de agua tratada, RAPD II y V y del hisopado de la vlvula del tanque de almacenamiento chico, RAPD V. B. lata: 2 aislamientos a partir de 04-2008, provenientes de HEM y del hisopado del tanque chico, ambos RAPD III. B. cenocepacia: 2 aislamientos a partir de 05-2009, del agua tratada RAPD VII y del bao de dilisis, RAPD VIII. B. stabilis: de 1 HEM, RAPD XX. Conclusiones: 1. A travs del tiempo se detect la aparicin de nuevas genoespecies. 2. Si
P149 27445 - UTILIDAD DE LA DETERMINACIN DE ADENOSINA DEAMINASA EN EL DIAGNSTICO DE TUBERCULOSIS PLEURAL. ZAPATA, ALEJANDRA; SUAU, MATILDE; ASQUINEYER, YANINA; BALDINI, MATIAS; LUQUE, GRACIELA
Hospital Posadas Introduccin: la tuberculosis (TBC) pleural es la principal forma de TBC extrapulmonar en nuestro medio. Durante el periodo 2007 a 3/2010 sobre un total de 690 muestras con cultivo positivo para Mycobacterium tuberculosis (pulmonares y extrapulmonares) la localizacin pleural represento un 8,1% (n= 56). Las dificultades en la confirmacin bacteriolgica de TBC pleural debido a la baja sensibilidad del cultivo del lquido pleural (LP ) y la demora del mismo que aun con mtodos rpidos es de aproximadamente 20 das, nos han llevado a implementar mtodos diagnsticos complementarios, como es el dosaje de adenosina deaminasa (ADA) en lquidos pleurales. La adenosina deaminasa es una enzima liberada por linfocitos durante la etapa de modulacin de la respuesta inmune inflamatoria. El nivel de ADA en el LP refleja la presencia de clulas en el compartimiento pleural,
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bien las bacteriemias intradilisis fueron espordicas, durante 3 aos se detectaron las mismas genoespecies y patrones RAPD relacionados en los pacientes, en los baos de dilisis, en el agua tratada y entre algunos pacientes. 3. Las genoespecies halladas en los hisopados del tanque de almacenamiento chico fueron: B. cepacia, B. contaminans y B. lata. 4. Luego de desactivado, no se volvieron a detectar bacteriemias intradilisis por ninguna genoespecie de Burkholderia. 5. Probablemente, el reuso y el lavado de los filtros de dilisis con el agua tratada haya sido uno de los factores responsables de las bacteriemias intradilisis, asociado a la extraordinaria capacidad de supervivencia de las genoespecies de Burkholderia en el agua tratada y en el bao de dilisis. 6. Se destaca la importancia del monitoreo permanente de la calidad del agua de las centrales de hemodilisis (agua de red, agua tratada y de los baos de dilisis), minimizar los tanques de almacenamiento de agua y extremar los procesos de desinfeccin.
leccin causada por este antibitico. Se hace necesario optimizar el uso de COL y maximizar las medidas de prevencin y control de IN para evitar la emergencia y diseminacin de estos grmenes multirresistentes.
P152 27457 - ESPECIES DE Malassezia EN LA BIOTA NORMAL DE PIEL Y EN DERMATITIS ATPICA. SOSA, M A (1); ROJAS, F D (1); BLANCO, N S (1); MANGIATERRA, M L (1); GIUSIANO, G E (1)
Instituto de Medicina Regional - UNNE El gnero Malassezia es miembro de la microbiota cutnea normal humana. Bajo la influencia de ciertos factores puede volverse patgeno y asociarse a distintos desrdenes dermatolgicos. En algunos casos acta como factor exacerbador, por ejemplo en la dermatitis atpica (DA). La DA es considerada una reactividad cutnea anormal a alergenos, favorecida por una predisposicin gentica. Los objetivos de este estudio fueron: comparar la prevalencia de las especies de Malassezia en DA y en biota normal de piel (BN) y establecer la distribucin de las especies de acuerdo al sitio de la lesin. Las muestras fueron obtenidas por raspado de piel de cara (ca), cuero cabelludo (cc) y tronco (tr). Se sembraron en medio de Agar Dixon y se incubaron durante 7 das a 32 C. Se aislaron 91 cepas de Malassezia, 41 provenientes de lesiones de DA (ca: 14, cc: 7, tr: 20) y 50 de BN (ca: 4, cc: 14, tr: 32). La tipificacin de las especies de Malassezia se realiz por la tcnica PCR-RFLP. La extraccin de ADN de las levaduras aisladas se llevo a cabo por shock trmico. El ADN obtenido se amplific con los cebadores descriptos por Mirhendi et al. (5-TAA CAA GGA TTC CCC TAG TA -3 y 5-ATT ACG CCA GCA TCC TAA G -3). El programa de amplificacin incluy una desnaturalizacin inicial a 94 C (5 min), seguida por 30 ciclos de 94 C (45 seg), 55C (45 seg) y 72 C (1 min), con una extensin final a 72C (7 min). Los productos de la PCR fueron sujetos a RFLP (anlisis del polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restriccin) usando las enzimas de restriccin Cfo I (Promega) y Mbo I (Fermentas). Los fragmentos digeridos fueron separados por electroforesis en gel de agarosa al 2,5 % a 96 V durante 90 minutos y revelados con bromuro de etidio (0.5 g/ ml). De las lesiones de DA se obtuvieron 37 cepas como agente nico y 4 cepas distribuidas en 2 asociaciones. La distribucin de las especies fueron: M. globosa (39%), M. furfur (29.3%), M. sympodialis (19.5%), M. restricta (4.9%), M. slooffiae (4.9%) y M. pachydermatis (2.4%). De piel sana se obtuvieron 50 cepas como agente nico. La distribucin de las especies fueron: M. globosa (36%), M. furfur (18%), M. sympodialis (42%), M. restricta (4%). Nuestros resultados sugieren: a) que las condiciones de la piel atpica favorecen a una mayor diversidad de especies de Malassezia, especialmente en zonas de tronco b) que M. globosa encuentra un nicho ecolgico propicio en ambos tipos de piel siendo la cepa dominante en cuero cabelludo c) que el desequilibrio inmunolgico cutneo favorecera el establecimiento de M. furfur y d) que las condiciones de la piel sana favorecen el desarrollo de M. sympodialis. Es destacable el aislamiento de M. pachydermatis en una lesin de DA ya que esta especie es primariamente zooflica. La ecologa del gnero Malassezia y el rol que cumple cada especie en alteraciones de la piel se encuentra todava en estudio. Este trabajo es una contribucin a este conocimiento.
P151 27449 - EMERGENCIA DE Klebsiella pneumoniae RESISTENTE A COLISTINA (KPN-R-COL) EN UN HOSPITAL INTERZONAL DE AGUDOS. TOGNERI, ANA (1); FACCONE, DIEGO (2); PODESTA, LAURA (1); PEREZ, MARCELA (1); CORSO, ALEJANDRA (2)
(1) HIGA EVITA, (2) Instituto INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn La prevalencia de Kpn-R-COL en 376 aislados del Htal. EVITA entre 2007 y 2009 fue: 0(2007), 0.7 (2008) y 3.6 (2009). Entre octubre de 2009 y enero de 2010 se detectaron 8 aislados de K. pneumoniae (Kpn) con halos de inhibicin para colistina (COL) <9mm (Kirby-Bauer), confirmados como resistentes por E-Test (CIM90 = 48g/ml). Debido a que los casos se detectaron en un corto periodo de tiempo, se quiso establecer el nexo epidemiolgico y la relacin gentica entre las Kpn-R-COL. Objetivos: evaluar la relacin gentica de los Kpn-R-COL aislados, establecer el vnculo epidemiolgico y analizar el posible impacto del uso de COL en esta emergencia. Materiales y mtodos: ante la sospecha de trasmisin horizontal de Kpn-R-COL, se analiz retrospectivamente las informacin disponible en los registros bacteriolgicos de las Kpn desde enero/2007 a enero/2010, se revisaron las solicitudes de antibiticos de uso restringido de 2009, la documentacin microbiolgica en los pacientes tratados con COL y el consumo de COL durante 2009, calculando la dosis diaria definida (DDD). Seis de 8 Kpn-R-COL estuvieron disponibles para estudios de tipificacin molecular. Se emple la tcnica de electroforesis en campo pulsado (PFGE) con XbaI. Resultados: las 8 Kpn-R-COL, correspondientes a 5 pacientes, se aislaron de (n): sangre (2), aspirado traqueal (2), orina (3) y absceso de partes blandas (1). Por medio de PFGE los 6 aislados estudiados se pudieron diferenciar en 2 tipos clonales: A y B. El clon A fue dominante en la muestra remitida, representando 4/6 Kpn. Dentro del clon A se diferenciaron 4 subtipos clonales genticamente relacionados: A1, A2, A3 y A4. Al investigar la existencia de vnculo epidemiolgico, los 4 pacientes con aislados del clon A compartieron facilidades hospitalarias durante su internacin en terapia intensiva y clnica mdica. Los 2 aislados del clon B, provenan de muestras de partes blandas y orina del mismo paciente que proceda de otra institucin. Durante 2009, 54 pacientes recibieron COL: 28 con documentacin microbiolgica para el uso (52%) por infecciones nosocomiales (IN) por Acinetobacter baumanii o Pseudomonas aerugniosa multirresistentes y 26 (48%) administrado en forma emprica. De estos ltimos, en 13 pacientes (50%) se confirm posteriormente a la administracin de COL, el aislado de grmenes multirresistentes que avalaron su uso. En el otro 50% no se obtuvo rescate microbiolgico o el uso de COL no estara justificado. En 41%(22/54) de los pacientes medicados con COL se documentaron aislados naturalmente resistentes al antibitico posteriores al inicio del tratamiento (n): Serratia marcescens (4), Proteus vulgaris (6), Morganella morganii (1), Enterococcus faecium (5), Staphylococcus aureus (4), ms dos casos con Kpn-R-COL. El uso de COL en los trimestres de 2009 expresado en n de DDD/das/trimestre fue: 1.4, 0.7, 2.1 y 1.8 respectivamente. El aumento de Kpn-R-COL en 2009 y la deteccin de un brote cronolgicamente posterior al incremento del uso de CO, deben ser tomados como marcadores de la presin de se-
P153 27459 - EPIDEMIOLOGA DE LOS BACILOS GRAM-NEGATIVOS NO FERMENTADORES DE GLUCOSA RESISTENTES A CARBAPENEMES EN UN HOSPITAL POLIVALENTE DE LA CIUDAD DE CRDOBA. MINOLI, M J (1); MUOZ, M S (1); TOMASINI, A (1); AIASSA, M S (1); PERLO, O E (1)
Hospital de Crdoba En los ltimos aos, la atencin mdica se ha enfocado en los bacilos gram-negativos no fermentadores de glucosa (bnnf) por su frecuencia cada vez mayor en las infecciones nosocomiales. El excesivo uso de carbapenemes ha provocando brotes con microorganismos con resistencia natural y otros bacilos gram-negativos con resistencia adquirida a carbapenemes por presin selectiva. Esta fuerte presin antibitica en reas crticas, as como
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medidas deficientes o ausentes de control de infecciones intrahospitalarias son importantes factores de riesgo para la adquisicin de resistencia llevando a un gran impacto clnico y epidemiolgico. Nuestro objetivo fue analizar la situacin en nuestra institucin en los ltimos aos para conocer el perfil de microorganismos resistentes a los carbapenemes, porcentaje de resistencia, el perfil de resistencia a todos los antibacterianos (atb) ensayados en cada ao en la especie predominante, fenotipos de resistencia y sitios de aislamiento, para ayudar a elegir terapias empricas que ofrezcan mayor cobertura antibitica hasta tener el informe microbiolgico final. Materiales y Mtodos: se realizaron tres cortes de prevalencia para analizar los bnnf resistentes a carbapenemes aislados de muestras clnicas y ambientales en el hospital: ao 2007, 2008 y 2009. Fueron identificados por el Sistema Automatizado Vitek (bioMrieux) y por pruebas bioqumicas manuales. La sensibilidad antibitica fue determinada por Vitek y mtodo Kirby-Bauer de difusin en agar. La especie predominante que present resistencia a ambos carbapenemes fue Acinetobacter baumannii complex (abc) encontrndose tambin otras como Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, Acinetobacter spp., Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, Cryseobacterium indologenes. El porcentaje de resistencia anual representa el 46.39%, 53.40% y 79% del total de los aislamientos de abc en los respectivos aos. La frecuencia de resistencia anual a todos los atb ensayados a lo largo de los tres perodos fu 49%, 77% y 81% para imipenem y 47%, 77% y 83% para meropenem. Trimetoprima-sulfametoxazol sigue la misma tendencia llegando a 93% de resistencia, ciprofloxacina, cefepima, ceftacidima, piperacilina-tazobactama, ampicilina-sulbactama y amicacina se mantienen en porcentajes altos. Minociclina, colistina y tigeciclina oscilan alrededor de 0%. No se detectaron metalo lactamasas por el mtodo de doble disco con EDTA, tampoco de carbapenemasas tipo oxa. Estos microorganismos se aislaron predominantemente en orinas, puntas de catter y muestras respiratorias. La resistencia a carbapenemes muestra un aumento, por lo que estamos frente a la prdida de una excelente opcin de amplio espectro. Minociclina y tigeciclina son buena eleccin. No tenemos confirmada la presencia de ninguna ML por mtodos fenotpicos, tampoco de carbapenemasas tipo oxa. Estos microorganismos aparecen predominantemente en orinas, puntas de catter y muestras respiratorias, lo que demuestra la necesidad de vigilar factores de riesgo conocidos como sondas vesicales, catteres y asistencia respiratoria mecnica y tomar medidas de control hacia ellos.
puesta inflamatoria (recuento de leucocitos mayor a 5/c 400X), de los cuales 34.6% (n=65) presentaron enterobacterias patgenas. El 12% (n=57) del total tuvieron cultivo positivo para agentes causales de diarrea, que se repartieron entre Shigella spp. 61% (n=35), Salmonella spp. 37% (n=21) y por ltimo un 2% (n=1) E. coli enteroinvasiva. La investigacin de Campylobacter spp. se efectu a travs de examen directo debido a que no se realiza cultivo de rutina para este germen. Se observaron formas compatibles con Campylobacter spp. en un 5% (n=25) de los casos. Se detectaron 29 cepas con algn tipo de resistencia antimicrobiana, en el 90% (n=26) fueron Shigella spp. resistente a ampicilina (AMP) y trimetoprima-sulfametoxazol (TMS) y solo dos cepas de Salmonella spp. a AMP, TMS, cido nalidxico y cloranfenicol. De las cepas de Salmonella spp. encontradas, dos hicieron bacteriemia con evolucin fatal. El 80% de las muestras con enteropatgenos presentaron respuesta inflamatoria y un 5% formas compatibles con Campylobacter spp. El principal agente etiolgico encontrado en las diarreas procesadas fue Shigella spp., predominando la especie Shigella sonnei 34% (n=12) sobre la especie Shigella flexneri 20% (n=7); los serotipos del gnero Salmonella spp. recuperados con mayor frecuencia fueron Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium 10% (n=2), sobre Salmonella Amatum y Salmonella Cervallis 5% (n=1). Si bien en el paciente adulto, generalmente, los casos de diarrea se resuelven sin complicaciones, consideramos importante pautar lineamientos en el manejo teraputico, los cuales ayudaran a mejorar la calidad sanitaria en el manejo hospitalario.
P155 27472 - AISLAMIENTO DE Paracoccidiodes brasiliensis EN UN PACIENTE PORTADOR DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA. ERBIN, MARIANA (1); TUTZER, SILVIA (1); BOZANO, CLAUDIA (1); BERMEJO, VERONICA (2); ELBERT, GABRIELA (2); KAUFMAN, SARA (1); GUELFAND, LILIANA (1)
(1) Seccin Microbiologa y (2) Divisin Infectologa del Hospital General de Agudos J.A. Fernandez La paracoccidioidomicosis (PM) es una micosis sistmica endmica producida por un hongo dimorfo el Paracoccidiodes brasiliensis (Pb). La distribucin geogrfica de esta micosis es restringida a Amrica latina, en particular a Sudamrica. Afecta fundamentalmente a pobladores rurales de regiones de clima subtropical y no presenta asociacin con el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), de acuerdo a la baja frecuencia publicada. Presentacin del caso clnico: paciente de sexo masculino de 27 aos, oriundo de Paraguay, VIH + desde enero de 2009 en tratamiento con antirretrovirales, pero con seguimiento irregular. Consult por fiebre, dolor abdominal de dos meses de evolucin y dificultad respiratoria. Al examen fsico se observ adelgazamiento, adenopatas generalizadas a predominio de regin latero cervical derecha, escasas lesiones de piel de tipo ppulas umbilicadas, hepatoesplenomegalia y su radiografia de trax revel infiltrado nodulillar bilateral. Los datos de laboratorio mostraron: CD4: 10 clulas /mm3, anemia normoctica normocrmica, transaminasas, FAL y LDL elevadas, VSG 75 mm, HBV, HCV, VDRL, CHAGAS negativos. Se solicit estudio microbiolgico para grmenes comunes, micobacterias y micolgico de puncin de ganglio, escarificacin de lesiones de piel y esputo. En los exmenes en fresco se visualizaron elementos esfricos de tamaos variables con paredes gruesas y doble refringencia, algunos presentaron brotes mltiples con aspecto de rueda de timn y otros en cadenas, patognomnicos de Pb. En la coloracin de Giemsa se observaron estructuras similares pero coloreadas en forma irregular. El cultivo fue positivo para Pb slo en la puncin de ganglio y en el resto de los materiales no se obtuvo desarrollo. La inmunodifusin para Pb fue positiva mostrando las bandas de precipitacin caractersticas. Se inici el tratamiento con anfotericina B con buena respuesta. Por episodios de suboclusin intestinal requiri alimentacin parenteral. El paciente evolucion con mejora general y tolerancia de la va oral por lo que se rot a itraconazol luego de un mes de tratamiento con anfotericina B. Las micosis sistmicas y oportunistas son patologas que aumentaron su frecuencia en pacientes inmunocomprometidos, pero los casos publicados en la bibliografa internacional de asociacin
P154 27463 - PREVALENCIA DE ENTEROBACTERIAS EN UN HOSPITAL DE ADULTOS. RANTICA, NOELIA (1); MUOZ, VERNICA (1); AGUIRRE, ALINA (1); PINO, GLADYS (1); D ANDREA, ELENA (1)
Nuevo Hospital San Roque. Crdoba La diarrea es una de las causas ms comunes de morbilidad y mortalidad en pases subdesarrollados constituyendo un verdadero problema de salud pblica. Los estudios epidemiolgicos permiten implementar medidas de control y prevencin. Se realiz un estudio retrospectivo en pacientes adultos en el Nuevo Hospital San Roque de Crdoba, Argentina, que presentaron gastroenteritis entre octubre del 2007 y mayo del 2010 con el propsito de establecer la prevalencia de enteropatgenos; observar la relacin entre la reaccin inflamatoria y agentes etiolgicos aislados y evaluar la resistencia antimicrobiana. Mediante el anlisis directo de muestras de materia fecal diarreicas se determin la presencia de polimorfonucleares, hemates, parsitos y levaduras. La coloracin de los extendidos con fucsina bsica al 0.1% permiti detectar formas compatibles con Campylobacter spp.. Se cultivaron en agar Mac Conckey, caldo selenito y medio selectivo para salmonella y shigella tipificando los aislamientos sospechosos por pruebas convencionales. Las materias fecales sanguinolentas se cultivaron en Mac Conckey sorbitol para buscar Escherichia coli enterohemorrgica. Se llevaron a cabo antibiogramas segn normas CLSI y se deriv a centros de referencia para la serotipificacin correspondiente. Del total (n=491) de las muestras de materia fecal analizadas 38.3% (n=188) tuvieron res-
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entre PM y SIDA siguen siendo bajos, sin embargo debe tenerse en cuenta su diagnstico en individuos provenientes de zonas endmicas. El polimorfismo de las lesiones debe alertar al mdico al diagnstico diferencial de las micosis oportunistas. P156 27477 - FUNGEMIAS DIFERENTES A CANDIDEMIAS EN HOSPITALES DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES
SCHIJMAN, M (1); BIANCHI, M (1); GUELFAND, L (1); LOPEZ MORAL, L (1); TIRABOSCHI, I (1); LOPEZ, M (1); E INTEGRANTES DE LA RED MICOLOGIA. CABA
(1) Hospitales de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires Introduccin: las levaduras del gnero Candida son los hongos ms frecuentemente recuperados en el laboratorio, pero otros gneros fngicos tienen relevancia, especialmente cuando en la poblacin hospitalaria la frecuencia de patologa relacionada al VIH es alta. Objetivos: conocer la incidencia y la etiologa de las fungemias por gneros diferentes a Candida spp., en hospitales de la ciudad de Buenos Aires (CABA). Establecer si hubo modificaciones en la incidencia en los 4 aos analizados. Conocer el tiempo de deteccin de los hongos recuperados, de hemocultivos automatizados (AU) y por lisis centrifugacin (LC). Evaluar la correlacin de los hallazgos con el sexo, edad y enfermedad de base de los pacientes. Metodologa: se realiz un estudio multicntrico de las fungemias basado en datos de laboratorio entre enero de 2005 y diciembre de 2008 en 16 hospitales de la Red de Micologa de CABA. Se registr: la especie recuperada, el tiempo de desarrollo, la metodologa del hemocultivo y se recabaron datos demogrficos y antecedentes de los pacientes en el momento de deteccin de la fungemia. Resultados: se procesaron 190.820 hemocultivos: 182.050 AU y 8.870 por LC. De 1020 hemocultivos se recuperaron elementos fngicos. En 683 (68%) desarrollaron levaduras del gnero Candida y en 325 (32%) otros hongos: 214 Cryptococcus spp., 105 Histoplasma spp. y otros agentes fngicos en 18, entre los que se detectaron 7 fungemias por Rhodotorula spp., 5 por Trichosporon spp., 2 por Pichia spp., 2 por Acremonium spp., 1 por Saccharomyces spp. y 1 por Fusarium spp. Fungemias por Cryptococcus spp.: hubo 214 episodios: 211 por C.neoformans, 2 por C.albidus y 1 por C.laurentii. La incidencia del perodo fue de 0,36/1000 ingresos (0,35 en 2005, 0,27 en 2006, 0,39 en 2007 y 0,4 en 2008, p=0,2). El 70% de los pacientes fueron varones. La mediana de edad fue de 34 aos (de 0 a 95) y el 93% de 209 pacientes eran VIH +. Se registr el tiempo de deteccin en 209 hemocultivos (111 AU y 98 por LC). En los hemocultivos AU el desarrollo fue detectado en un 40% en los primeros 2 das de incubacin, el 71% al da 3 y el 98% al 5 da de incubacin. La visualizacin en los cultivos por LC fue registrada un 18% al 2 da, 36% el 3 da y 80% al 6 da. Fungemias por Histoplasma sp.: hubo 105 fungemias por H. capsulatum. La incidencia del perodo fue de 0,18/1000 ingresos (0,21 en 2005, 0,20 en 2006, 0,13 en 2007 y 0,17 en 2008, p=0.38). El 82% de los pacientes eran varones y la mediana de edad fue de 33,5 aos (de 14 a 63 aos). Todos los pacientes eran VIH +. Los episodios fueron diagnosticados slo en 7 de los 16 hospitales participantes y el 78% de ellos en el Hospital de Infecciosas F.J Muiz. El 87 % de los histoplasmas pudieron ser visualizados entre el da 10 y 17 de incubacin (rango: da 8 a 25). De los episodios de fungemias diferentes a candidemias, predominan los causados por Cryptococcus spp. e H. capsulatum. La incidencia se ha mantenido estable en el perodo estudiado. La recuperacin de estos hongos en los hemocultivos, est fuertemente asociada a la atencin de pacientes VIH reactivos.
hemocultivos; pero tanto la incidencia como la distribucin de las especies vara en cada regin. Objetivos: conocer la incidencia de las candidemias en los hospitales de la ciudad de Buenos Aires, las especies involucradas y establecer si hubo modificaciones en el curso de 4 aos. Conocer el tiempo de desarrollo de Candida spp. en los hemocultivos. Evaluar sexo, edad, sala de internacin, tiempo de internacin hasta la candidemia, la enfermedad de base de los pacientes, el antecedente de catteres y antibioticoterapia previa. Materiales y mtodos: se realiz un estudio multicntrico observacional de las candidemias basado en datos de laboratorio, entre enero de 2005 y diciembre de 2008, en 16 hospitales integrantes de la Red de Micologa la Ciudad de Buenos Aires. Se consign la especie recuperada, el tiempo de desarrollo, y la metodologa del hemocultivo. Se recabaron los datos demogrficos y antecedentes de los pacientes. Resultados: se procesaron 190.820 hemocultivos (182.050 automatizados y 8.870 por lisis centrifugacin), de los que se recuperaron elementos fngicos en 1020; 683 (68%) correspondieron a candidemias. La incidencia global del perodo fue de 1,15 /1000 ingresos, pero con amplia variacin entre los centros (de 0,35 a 2,65) y no mostr diferencias significativas a travs de los 4 aos (1,08 para el 2005; 1,20 para el ao 2006 y 2007 y 1,12/1000 ingresos el ao 2008, p=0,7). Las especies de Candida recuperadas fueron: C. albicans 41,3%, C. parapsilosis 24,3%, C. tropicalis 19,9%, C. glabrata 6,3%, seguidas por 1,8% de C. guilliermondii y 0,6% de C. krusei. Hubo 1,5% de episodios mixtos donde la asociacin ms frecuente fue C. albicans y C.parapsilosis. El 97% de las levaduras se detectaron en los primeros 2 das de incubacin, pero C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis tuvieron su pico de deteccin en el primer da, el de C. glabrata fue entre los das 3 y 4. El 51% de las candidemias se detectaron en varones y el 17% de estas, en menores de 1 ao. La mediana de edad fue de 48 aos (0 a 99 aos). El 98% de los pacientes estaba internado en el momento de la candidemia (46% en terapia intensiva, 39% en clnica y 15% en ciruga), con un promedio de 24 das de internacin. El 57% de los menores de 1 ao tenan como antecedente ms importante la prematurez. Para el resto de los pacientes los antecedentes ms frecuentes fueron ciruga (29 %), enfermedades oncohematolgicas o tumorales (26%) e insuficiencias funcionales o metablicas (17%). Se registr el uso de catteres en 443/ 518 episodios y de antibiticos en 439/515. No hubo diferencias en la incidencia de las candidemias a travs de los aos analizados. C. albicans se recuper en menos de la mitad de los episodios. La gran mayora de las candidemias se detect en los primeros 2 das de incubacin. Se usaron catteres y antibiticos en el 85% de los episodios donde este dato estuvo consignado. La prematurez, la ciruga, enfermedades onco - hematolgicas, tumorales y las alteraciones metablicas y funcionales fueron los antecedentes ms frecuentes.
P158 27490 - TUBERCULOSIS EN UN HOSPITAL REFERENCIAL DURANTE EL PERODO 2007-2009. RODRIGUEZ, MNICA; RIZZOTTI, VIVIANA; PATALLO, CLAUDIA; MOSCOLONI, MARIA; BALLESTER, DANIELA
Hospital Piero En Argentina se notifican 11000 nuevos casos de tuberculosis por ao, con una tasa de incidencia de 30 por 100.000 habitantes. La incidencia en la Ciudad de Buenos Aires durante el 2009 fue de 36.9 por 100.000 habitantes y en nuestro hospital y su rea programtica de 133.8 por 100.000 habitantes, constituyndose as como la zona geogrfica de mayor tasa de esta enfermedad en la ciudad. Objetivos: analizar las caractersticas epidemiolgicas y clnicas de los pacientes con tuberculosis atendidos en nuestro hospital durante el perodo 2007 -2009. Evaluar los porcentajes de resistencia de las cepas aisladas en dichos pacientes. Materiales y mtodos: se realiz un anlisis retrospectivo y descriptivo. De un total de 5628 muestras para cultivo de micobacterias, 720 (13%) fueron positivas e identificadas como complejo Mycobacterium tuberculosis. A 391 (54%) se les realiz la prueba de sensibilidad a estreptomicina (S), isoniazida (H), rifampicina (R) y etambutol (E) con los sistemas semiautomatizado Bactec 460(Becton Dickinson) y automatizado MGIT 960 (Becton
P157 27480 - CANDIDEMIAS EN LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. LOPEZ MORAL, L (1); TIRABOSCHI, I (1); SCHIJMAN, M (1); PEREDA, R (1); GARBASZ, C (1); E INTEGRANTES, RED MICOLOGIA CABA
(1) Hospitales de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires Introduccion: Candida spp. ha emergido como un patgeno fngico predominante en el hospital, ocupando en muchas series el cuarto lugar dentro de los microorganismos recuperados en los
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Dickinson) por presentar factores de riesgo: pacientes con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), peditricos, inmunosuprimidos, contacto con pacientes portadores de cepas multirresistentes, mala evolucin y personal de salud segn normas del Programa Nacional. Resultados: nacionalidad: argentinos 389 (54%), sin especificar 50 (7%) y extranjeros 281 (39%), representados estos ltimos por: paraguayos, peruanos, uruguayos y mayoritariamente oriundos de Bolivia. En relacin al sexo: femenino 310 (43%) y masculino 410 (57%). En cuanto a las formas de presentacin clnica: 468 (65%) fueron muestras pulmonares y 252 (35%) de localizacin extrapulmonar: pleural, cervical, genito-urinaria, menngea, sea y sangre. Las asociaciones mrbidas ms frecuentes fueron: VIH, inmunosuprimidos, diabticos, enfermedad pulmonar obstructiva crnica, embarazo/puerperio. Los porcentajes de resistencia a las drogas antituberculosas probadas fueron: S 11%, H 6%, R 4% y E 3%. En la notificacin del ao 2007 se reportaron en Argentina 85% de casos de localizacin pulmonar, un 13% tuvo localizacin exclusivamente extrapulmonar y un 2% de formas mixtas. En el presente estudio se obtuvieron un 65% de cultivos positivos provenientes de muestras pulmonares pero cabe destacar que por tratarse de una de las zonas de mayor pobreza y marginalidad, muchos pacientes con patologa pulmonar llegan a la consulta en un estado muy avanzado de la enfermedad con marcada sintomatologa clnica y evidencia radiolgica y epidemiolgica compatible con tuberculosis a los que se solicita slo baciloscopa para diagnstico, por lo tanto no estaramos evaluando un importante grupo de cultivos positivos de muestras pulmonares. Las localizaciones extrapulmonares ms frecuentes fueron pleurales y ganglionares. La mayora de los pacientes evaluados son argentinos pero las zonas aledaas a nuestro hospital cuentan con un importante asentamiento de extranjeros afectados por tuberculosis. Si bien el porcentaje de cultivos positivos de la zona resulta alto, afortunadamente los niveles de resistencia observados en nuestra poblacin son bajos, obteniendose mayormente aislamientos de cepas sensibles a drogas tuberculostticas de primera lnea.
piratoria, presentando espectoracin mucopurulenta y eliminacin de tapones mucosos con estras sanguinolentas, por lo que se decide tratamiento antifngico. Se inici tratamiento con voriconazol 200 mg/dia (100 cada 12 hs.) y a la semana present notable mejora clnica. A los 10 das se encontraba asintomtico. Se realizan dosajes del antifngico en suero, laboratorio de rutina con hepatograma normal y reiterados anlisis micolgicos de secrecin bronquial que hasta el presente nunca se negativizaron. Conclusiones: comunicamos el primer aislamiento de A. blochii en la ciudad de Rosario y probablemente, a nivel mundial, en un paciente fibroqustico ya que la literatura relata, dentro de este gnero, un caso por A. strictum. Los hongos aislados comnmente son: Aspergillus spp., Candida spp., Paecilomyces spp., Scedosporium apiospermum y Exophiala dermatitidis. Creemos que es conveniente realizar anlisis micolgicos en estos pacientes para poder instaurar un correcto y rpido tratamiento antifngico.
P160 27523 - CANDIDURIA. IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE Candida Y SENSIBILIDAD A FLUCONAZOL. PERETTI, SILVIA TERESA; NARDIN, MARIA ELENA; RAMOS, CLAUDIA FABIANA; MENDEZ, EMILCE DE LOS A
Hospital JM Cuyen, Santa Fe Introduccin: la definicin de candiduria es enigmtica. El consenso general es que la candiduria es muy comn en pacientes hospitalizados y su incidencia depende de la poblacin estudiada. Se asocia a anormalidades del tracto urinario, ciruga abdominal, diabetes, uso de antibiticos, etc. El objetivo de este trabajo fue: a. determinar la prevalencia de esta infeccin, b. identificar las especies de Candida spp, c. determinar su sensibilidad a fluconazol. Materiales y mtodos: se estudiaron 3640 urocultivos en la Seccin Microbiologa del laboratorio Central del Hospital Jos Maria Cullen de Santa Fe, durante el perodo 1 de setiembre de 2009 y el 1 de junio de 2010. Se recolectaron los siguientes datos: edad, uso de sondas, administracin previa de antibiticos, presencia de catteres perifricos, enfermedad de base y diagnstico probable. Se identificaron las especies de Candida mediante las siguientes pruebas: formacin de tubo germinativo, fermentacin de carbohidratos (glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, galactosa, trehalosa y rafinosa) y cultivo en medio cromognico (CHROMagar Candida). Luego se determin la sensibilidad por el mtodo de difusin con tabletas de fluconazol (25 ug) Neo-Sensitabs (Rosco), usando agar Mueller-Hinton con 2% de glucosa y 0,5 l/ml de azul de metileno. Para confirmar la candiduria se pidi una segunda muestra de orina y se repiti la identificacin de especie. Resultados: del total de urocultivos, 1.011 resultaron positivos, en 69 desarroll Candida spp.. La prevalencia de candiduria fue del 1,9% del total de urocultivos y 6,8% de los positivos. La edad media de los pacientes con candiduria fue de 45 aos. Un 90,5% eran pacientes hospitalizados y el 41% de los mismos en unidad de cuidados intensivos. Los factores predisponentes observados fueron uso de sonda y/o catter urinario (72,5%), presencia de catteres perifricos (55,1%), antibioticoterapia (39,1%), anormalidades del tracto urinario (17,4%), politraumatismos (23,2%), diabetes mellitus (8,4%), sepsis (2,8%) y otras entidades clnicas (11,6%). Las especies de Candida aisladas fueron Candida tropicalis (68,0%), Candida albicans (14,5%), Candida glabrata (11,6%), Candida guillermondii (4,5%) y Candida krusei (1,4%). La sensibilidad a fluconazol result ser del 95,6%. La especie predominante en orina fue Candida tropicalis y fluconazol sigue siendo la terapia adecuada en nuestro hospital. Candiduria se asocia fundamentalmente a instrumentacin de las vas urinarias, dispositivos mdicos invasivos, uso de antibiticos o un incremento en la permanencia hospitalaria por enfermedades inhabilitantes. En pacientes de alto riesgo es importante identificar la especie involucrada y determinar su sensibilidad a los antifngicos habitualmente usados en la prctica mdica.
P-159 27491 - AISLAMIENTO DE Acremonium blochii EN PACIENTE FIBROQUSTICO EN LA CIUDAD DE ROSARIO. RAMOS, LAURA (1); BELMONTE, ADRIANA (1); DALMASO, HERNAN (1); VILA, FERNANDO (2)
(1) Instituto de Estudios Bioqumicos IDEB; (2) Estacin de la Infancia Inroduccin: el gnero Acremonium comprende especies oportunistas siendo poco frecuentes las infecciones producidas por las mismas. No obstante, dado que se suelen presentar en pacientes debilitados, por su frecuente resistencia a los antifngicos, se constituyen en un problema teraputico. Objetivo: comunicar el aislamiento de una cepa de Acremonium blochii en un paciente de 11 aos con diagnstico de fibrosis qustica desde los 3 meses, con insuficiencia pancretica. Caso clnico: desde los 7 aos se aisl con frecuencia Pseudomonas aeruginosa, variedad mucosa, tratada va oral sin ser erradicada, lo que llev a su tratamiento con expectorante mucoltico de bromhexina, como profilaxis. En los prximos dos aos no se obtuvo ms rescate de P. aeruginosa variedad mucoide, pero si el desarrollo de Staphylococcus aureus y otras bacterias como Acinetobacter spp. Material y mtodo: se realizaron esputos micolgicos seriados durante fines del ao 2008, realizndose exmenes directos con azul de lactofenol e KOH al 20%, coloracin de May Grunwald Giemsa y Gram Nicolle. Los materiales fueron sembrados en agar Sabouraud glucosa, agar Sabouraud glucosa cloramfenicol y Mycosel e incubados a 28 C y en agar Sabouraud glucosa, agar Sabouraud glucosa cloramfenicol y agar sangre a 37 C durante 30 das. Resultados: en los exmenes directos y coloracin de May Grunwald Giemsa se observaron filamentos hialinos, aislndose en todos los medios sembrados, un hongo filamentoso que por sus caractersticas macromorfolgicas present una colonia blanca, algodonosa y su micromorfologa mostr fialides, poco diferenciadas, conidias ovoides, de paredes lisas, aisladas y en cadenas por lo que se lo clasific como Acremonium blochii. Dicho hallazgo coincidi con un empeoramiento de la funcin res-
P161 27556 - INFECCIN NOSOCOMIAL POR EL COMPLEJO Burkholderia cepacia EN PACIENTES DE LA UNIDAD DE CUIDADOS INTENSIVOS DEL HOSPITAL DEL NIO JESS
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TUCUMAN. GONZALEZ, MARIA LAURA; ALVAREZ, CHRISTIAN(1); DELGADO, GABRIELA(2); RUBIO MAS, MIGUEL (1); TREJO , ANA(1)
(1) Hospital del Nio Jess, (2) Universidad Nacional de Tucumn El complejo Burkholderia cepacia (BCC) es reconocido como un importante patgeno oportunista que causa infecciones respiratorias severas en pacientes fibroqusticos o en inmunodeprimidos. Adems tiene el potencial de causar brotes hospitalarios, siendo stos cada vez ms frecuentes, donde estn ntimamente relacionados a la contaminacin de desinfectantes, soluciones de nebulizadores y dispositivos mdicos, que incluyen los respiradores mecnicos. El BCC puede diseminarse fcilmente entre pacientes de una misma o diferentes salas presentando resistencia innata a antibiticos de amplio espectro llevando al fracaso de los tratamientos y complicaciones clnicas de los pacientes. El objetivo de este trabajo es reportar la infeccin del BCC en nios con compromiso respiratorio internados en la Unidad de Cuidados Intensivos del Hospital del Nio Jess. Se realiz un estudio retrospectivo entre octubre 2009 y junio 2010. Se procesaron 89 muestras respiratorias en el laboratorio de microbiologa, provenientes de 45 pacientes peditricos hospitalizados en la UCIP, con diferentes causas predisponentes. Las muestras se sembraron por la tcnica semicuantitativa (cuatro cuadrantes), en medios de cultivos comunes y selectivos e incubaron a 37C durante 24 a 72 h. Las colonias del BCC se identificaron por propiedades bioqumicas convencionales y el mtodo API 20NE bioMrieux. Se determin la sensibilidad in vitro segn las normativas del CLSI. La muestras se confirmaron por la tcnica de PCR con primers especficos para el gen recA del BCC; para ello se extrajo ADN genmico bacteriano a partir de las cepas aisladas por el mtodo de fenol-cloroformo. Adems, se estim el tiempo insumido para la identificacin del BCC por las tcnicas convencionales y la molecular. Resultados: en 9 (10,1%) de las muestras procesadas se identific el BCC, las mismas correspondan a pacientes que se encontraban bajo asistencia respiratoria mecnica (ARM). El primer caso de infeccin por el BCC fue detectado en diciembre 2009 en una paciente fibroqustica, seguido de la infeccin de 3 pacientes en la 2 semana de febrero 2010, 1 en marzo 2010 y un ltimo caso registrado fue en abril 2010. En todos los casos las cepas fueron slo sensibles a trimetoprimasulfametoxazol y minociclina. El tiempo necesario para la confirmacin por PCR no super las 36 hs, mientras que para la identificacin fenotpica se requiri entre 4 a 7 das. a) los resultados demuestran un brote por el BCC en la UCIP del Hospital del Nio Jess de Tucumn entre diciembre/09 a abril/10. b) consideramos que existi mayor riesgo de contraer esta bacteria patgena en nios bajo ARM. Por lo cual, es necesario desarrollar un sistema de vigilancia continua en estos pacientes a fin de evitar colonizacin y/o infeccin por BCC mediante estudios ambientales peridicos. c) la identificacin del BCC por mtodos convencionales result ms laboriosa, a diferencia de la PCR que fue lo suficientemente rpida, sensible y especfica para el diagnstico y confirmacin del BCC. lo cual permiti instaurar un adecuado y oportuno tratamiento y evit complicaciones clnicas en nuestros pacientes.
(PVL). En un perodo de tres meses del ao 2005 en Crdoba se report una prevalencia de 33% de infecciones por CA-MRSA en pediatra. En el ao 2007 en un estudio anual multicntrico-(9 centros peditricos distribuidos en Bs As, CF, CABA, Corrientes, Chaco, Jujuy y Santa Fe) se report una frecuencia promedio del 62% (rango 30%-75%). Objetivo: analizar la epidemiologa clnica y molecular de las infecciones por CA-MRSA en la poblacin peditrica del centro, norte y este del pas durante el ao 2007 y su evolucin en el tiempo con respecto a los resultados anteriores. Materiales y mtodos: se estableci la prevalencia y caractersticas clnicas de las infecciones por CA-MRSA en Crdoba durante los aos 2007-2008 y se analiz molecularmente una muestra representativa de cepas (n: 219) del estudio multicntrico2007 (n: 281) y 99 cepas de CA-MRSA de pacientes peditricos de Crdoba durante los aos 2007-2008. Para la caracterizacin molecular de las cepas se realiz: PFGE, MLST, tipo spaA, tipo de SCCmec y deteccin de genes de virulencia por PCR. Resultados: en Crdoba durante los aos 2007 y 2008, los porcentajes de CA-MRSA en pediatra fueron 38% (36 /94) y 47% (60/127) respectivamente, establecindose un incremento significativo tanto en esta proporcin de infecciones totales (p=0.04) como en la de infecciones severas e invasivas (ISIn) [10%, (2/22) vs 25% (25/ 99)] (p=0.009) por CA-MRSA entre los aos 2005 y 2007-2008. No hubo diferencias significativas entre estos valores y aquellos obtenidos en el estudio multicntrico-2007 (28% de ISIn) que abarc las dems regiones del pas. Los focos de infeccin ms frecuentes fueron: osteomielitis (29%), artritis (17%), empiema pleural (17%) y neumona (15%). El anlisis molecular demostr que el 76% del total de infecciones y el 78 % de las ISIn por CAMRSA en el centro, norte y este del pas fueron producidas por un clon: pulsotipo I, t311, ST5, SCCmec IVa, PVL y enterotoxina A positivo, previamente reportado en Crdoba y en el este del pas en los aos 2005-2006. El 11 % de los casos fueron asociados al clon caracterizado como pulsotipo N, t019, ST30, SCCmec IVc, PVL positivo, ya diseminado en Uruguay y 4 cepas presentaron el genotipo USA300, t008, ST8, SCCmec IVc, PVL positivo. Los resultados demuestran que la diseminacin del clon ST5-IV PVL positivo fue la principal causa del incremento significativo tanto del nmero total de infecciones como del nmero de ISIn por CAMRSA durante los aos 2005-2008 en una amplia regin del pas. Adems se reportan los primeros casos en Argentina del clon altamente epidmico USA 300. La vigilancia continua de este tipo de infecciones es importante para el diseo de estrategias efectivas para su control.
P163 27585 - INFECCIONES INVASIVAS HUMANAS PRODUCIDAS POR Streptococcus dysgalactiae. SPARO, M (1); LISSARRAGUE, S (1); TACHELLA, E (2); RANNO, G (1); PSENDA, L (2); SCHELL, C (3); DELPECH, G (1); BASUALDO, J(3)
(1) Hospital R. Santamarina, (2) Hospital H. Cura, (3) FCM-UNLP Introduccin: estudios epidemiolgicos han demostrado un incremento en el nmero de infecciones invasivas en el hombre producidas por distintas subespecies de Streptococcus dysgalactiae, afectando sobre todo a pacientes inmunosuprimidos. Objetivo: caracterizar las infecciones invasivas humanas producidas por Streptococcus dysgalactiae y estudiar aspectos fenotpicos de las cepas recuperadas. Materiales y mtodos: se dise un estudio no experimental, prospectivo y transversal durante enero 2008diciembre 2009 en dos Hospitales Municipales de adultos (Ramn Santamarina, Tandil y Dr. Hctor M. Cura, Olavarra). Fue documentado en los pacientes: edad, gnero, enfermedad de base, sndromes clnicos y muerte relacionados con la infeccin. Se incluyeron todas las cepas de S. dysgalactiae provenientes de sitios estriles. Para la identificacin fenotpica se efectu: serologa de grupo (Slidex Strepto-kit, bioMrieux, Francia), hemlisis en agar sangre ovina (5%), sensibilidad a bacitracina (0,04U), presencia de pirrolidonil aril amidasa, reacciones de CAMP y VogesProskauer, hidrlisis de hipurato, esculina y almidn, produccin de cido en caldo con sorbitol, trehalosa y ribosa, desaminacin de arginina. Se utilizaron pruebas enzimticas: -galactosidasa, -galactosidasa y -glucuronidasa (Rapid ID 32 Strept System, bioMrieux, Francia). Se realiz concentracin inhibitoria mnima
P162 27583 - GENOTIPO ST5-IV: PRINCIPAL CAUSA DEL INCREMENTO DE LAS INFECCIONES INVASIVAS POR Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA ASOCIADO A LA COMUNIDAD (CA-MRSA) EN PEDIATRA, ARGENTINA, 20052008. SOLA, C (1); PAGANINI, H (2); LOPARDO, H (2); EGEA, A L (1); GRUPO CA-MRSA, PEDIATRIA (MULTICENTRICO 2007); BOCCO, JL (1)
(1) CIBICICONICET-UNC, (2) Hospital Nacional de Pediatra Dr JP Garrahan En la dcada de 1990, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) emergi como un patgeno asociado a la comunidad (CA-MRSA) produciendo infecciones desde leves a muy graves. La mayora de estas cepas portan el tipo IV o V de SCCmec y los genes para la toxina Panton-Valentine-leukocidin-
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(CIM) a penicilina, eritromicina, vancomicina y clindamicina por microdilucin en caldo Mueller-Hinton suplementado con 3% de sangre lisada de caballo (CLSI, 2007). Resultados: doce pacientes (4 mujeres, 8 varones) presentaron enfermedad invasiva por S. dysgalactiae. Los pacientes ingresaron con el cuadro infeccioso desde la comunidad. El intervalo de edad fue de 24-87 aos (promedio: 48 aos). Las enfermedades de base fueron: cardiovascular (2), diabetes mellitus (4), trastornos dermatolgicos crnicos (3), etilismo crnico (1). Los sndromes clnicos fueron bacteriemia sin foco (4), celulitis (3), artritis sptica (5). Dos pacientes con bacteriemia primaria fallecieron. Las cepas fueron identificadas como S. dysgalactiae subsp. equisimilis. Todas presentaron -hemlisis; 8, fueron grupo C y 4 grupo G de Lancefield. Se observ sensibilidad a bacitracina en dos cepas. Todas fueron sensibles a los antimicrobianos ensayados: penicilina (CIM 0,016 g/ml), eritromicina (CIM 0,12 g/ml), clindamicina (CIM 0,12 g/ml) y vancomicina (CIM 0,25 g/ml). Los focos osteoarticulares, de partes blandas y las bacteriemias primarias fueron las formas de presentacin clnica en las infecciones invasivas. No se observaron enfermedades malignas como patologas de base. La sensibilidad a bacitracina en dos cepas ratifica la necesidad de realizar en todos los aislamientos con hemlisis la serotipificacin y las pruebas bioqumicas. S. dysgalactiae subsp. equisimilis es uno de los agentes a investigar en las infecciones invasivas provenientes de la comunidad.
1mg/l. La S y E utilizando ambas tabletas fue 100%. El rango de zonas de inhibicin de la predifusin VISA/h-VISA estuvo entre 9-23 mm para VAN y 9-19 mm para TEI. Las cepas con CIM VAN 1mg/l presentaron halos entre 23 y 29 mm para VAN y 17 a 26 mm para TEI. El mtodo de predifusin con t-NST de VAN+TEI es altamente S y E para diferenciar los SAMR VISA y h-VISA con CIM VAN 2mg/l, de las cepas con CIM 1 mg/l. Si bien la S fue evaluada con solo seis VISA/h-VISA, la tcnica de predifusin promete ser un mtodo de screening confiable y al alcance de los laboratorios clnicos de rutina para la deteccin de VISA/h-VISA. Cualquier resultado positivo por este screening debe indefectiblemente confirmarse por CIM y otras metodologas ms especficas.
P165 27589 - EFECTOS DEL ACEITE DE TOMILLO Y ALGUNO DE SUS COMPONENTES EN LA MOVILIDAD Y VIABILIDAD DE Leishmania mexicana. GOMEZ COLUSSI, ANDREA (1); MARQUEZ, VANINA (1, 2); IGLESIAS, ALBERTO (3); BECCARIA, ALEJANDRO (2); GUERRERO, SERGIO (1)
(1) Laboratorio de Bioqumica Microbiana, (2) Laboratorio de Fermentaciones, (3) Laboratorio de Enzimologa Molecular. Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas, UNL. Santa Fe, Argentina. Introduccin: la leishmaniosis es una zoonosis transmitida en Amrica fundamentalmente por hembras de insectos dpteros del gnero Lutzomia. Puede presentarse bajo diferentes formas clnicas. Leishmania mexicana es agente etiolgico de la forma cutnea localizada, la presentacin clnica ms comn en nuestro pas. Los compuestos organometlicos derivados de antimonio pentavalente, entre otros, son los agentes quimioteraputicos de eleccin. La relacin beneficio/riesgo obtenida en los tratamientos de esta enfermedad justifican la caracterizacin de nuevas alternativas teraputicas. Objetivo: evaluar el efecto del aceite de tomillo y alguno de sus principales componentes sobre la movilidad y viabilidad de promastigotes de L. mexicana cultivados axnicamente. Materiales y mtodos: se realizaron cultivos de promastigotes de L. mexicana en frascos T en medio BHI suplementado con 20% SFB inactivado, inoculados a una densidad inicial de 1.000.000 parsitos/ml. Diferentes cultivos fueron tratados con: aceite de tomillo (T) (18,72 g/ml), carvacrol (C) (19,72 g/ml) y la mezcla de ambos (C+T) en iguales proporciones. Se realizaron cultivos control, adicionados de dimetilsulfxido, tambin utilizado para preparar las diluciones de los aceites. Se tomaron muestras de los cultivos para determinacin de su viabilidad por reduccin de resazurina y cuantificacin colorimtrica del producto formado. Se evalu la movilidad de los parsitos en cmara de Neubauer. Resultados: se observaron diferencias estadsticamente significativas (p<0,05) en la viabilidad de los cultivos tratados con C y la mezcla C+T. A las 24 h de exposicin la densidad de clulas viables del control fue 1,4 y 1,6 veces la del cultivo tratado con C y C+T, respectivamente y a las 48 h de 1,3 y 1,4 veces respectivamente. No se observaron diferencias significativas en los cultivos tratados con T respecto del control. Efectos similares se observaron sobre la movilidad: se encontraron diferencias estadsticamente significativas (p<0,05) en los cultivos tratados con C (88% y 67% a las 24 y 48 h de exposicin) y la mezcla de C+T (55% y 66% a las 24 y 48 h de exposicin), con respecto al control (96% tanto a las 24 como a las 48 h de exposicin). Adems se evidenci, entre C y T, un efecto sinrgico significativo sobre la movilidad del parsito en relacin al C o al aceite por separado (p<0,05). El carvacrol y la mezcla de carvacrol y tomillo en las concentraciones establecidas afectan la viabilidad y movilidad de promastigotes de L. mexicana in vitro. El aceite de tomillo actuara sinrgicamente con carvacrol en la inhibicin de la movilidad de los parsitos, lo que los convierte en compuestos a analizar en profundidad por su potencial como agentes leishmanicidas.Trabajo realizado con fondos del proyecto PICT 2007 668.
P164 27586 - DETECCIN DE VISA Y h-VISA: MTODO DE PREDIFUSIN CON TABLETAS COMO SCREENING DE SENSIBILIDAD REDUCIDA A VANCOMICINA (SR-VAN) EN AISLAMIENTOS CLNICOS DE Staphylococcus aureus. CERIANA, P (1); GAGETTI, P (1); RODRIGUEZ, M (1); ERRECALDE, L (2); GRECO, G (3); CORSO, A (1)
(1)Servicio Antimicrobianos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. C. G. Malbrn; (2) Seccin Microbiologa. Hospital General de Agudos J. A. Fernndez, (3) Seccin Microbiologa. Hospital Italiano Bs As. Introduccin: vancomicina (VAN) es terapia emprica inicial en pacientes donde se sospecha Staphylococcus aureus meticilinoresistente (SAMR). Se han descripto tres fenotipos de resistencia o SR-VAN: 1) VISA: CIM VAN 4-8mg/l (intermedio), 2) h-VISA: CIM VAN 2 mg/l (sensible) pero capaces de seleccionar subpoblaciones VISA y 3) VRSA: CIM VAN 16mg/l (resistente) por adquisicin del gen vanA. El mtodo de difusin por discos detecta VRSA, pero no diferencia VISA y h-VISA de las cepas VAN sensibles (VSSA). En 2009, el CLSI elimin los puntos de corte de difusin para VAN en Staphylococcus spp. La tcnica de predifusin con tabletas Neo-Sensitabs (t-NST) permitira diferenciar mejor los fenotipos VISA, h-VISA y VSSA por extensin del tiempo de difusin de los antimicrobianos. Objetivo: evaluar el mtodo de predifusin con tabletas t-NST como screening de VISA y h-VISA en aislamientos clnicos. Materiales y mtodos: se evaluaron 50 SAMR: 30 cepas de referencia representantes de distintos clones internacionales y 20 de origen clnico derivadas al INEI para evaluacin de sensibilidad a VAN. La CIM por dilucin en agar se us como mtodo de referencia (CLSI). Las cepas presentaron la siguiente distribucin de CIMs a VAN en mg/l(n): 0,5 (13), 1 (31), 2 (3), 4 (3). Las tres cepas de CIM 2 mg/l fueron h-VISA (ITA1, FER1 y Mu3) y las tres de CIM 4mg/l VISA (ITA2, FER2 y Mu50). Los VISA y h-VISA se confirmaron por macro Etest y GRD VAN/TEI+S (bioMrieux). Se realiz la tcnica predifusin 2+18 h con t-NST (ROSCO Diagnostica) segn instruccin del fabricante. Brevemente, se coloca una t-NST de VAN (30 g) y una de TEI (30 g) en una placa de agar Mueller-Hinton. Despus de 2 h a temperatura ambiente (predifusin1: 2h) se sacan las tNST y las placas se mantienen a temperatura ambiente por 18 h (predifusin2: 18h). Luego se hisopa la cepa a evaluar con inculo 0,5 McFarland y se incuba a 35 C. Zonas de inhibicin de TEI < 20mm y/o VAN 22 mm se interpretan como VISA o h-VISA. Resultados: la t-NST VAN detect 5/6 SAMR [sensibilidad (S) 83%] con CIM 2mg/l: 3 VISA y 2 h-VISA, y fue 100% especfica (E) para cepas con CIM 1mg/l. La t-NST TEI identific los 6 hVISA/VISA (S: 100%) con CIM 2mg/l, pero fue 95% E para CIM
P166 27602 - LA PREEXPOSICIN A CONTAMINANTES AMBIENTALES ALTERA LA RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIN PULMONAR POR Mycobacterium phlei EN UN MODELO MURINO IN VIVO. DELFOSSE, VERONICA (1); PALMIERI,
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MONICA (2); FERRARO, SEBASTIAN (1); TASAT, DEBORAH (1, 3); GIOFFRE, ANDREA (4)
(1) Centro de Estudios en Salud y Medio Ambiente (CESyMA), Escuela de Ciencia y Tecnologa (ECyT), UNSAM, (2) DTO. RADIOBIO, CNEA, (3) FO-UBA, (4) IB, Centro de Investigacion en Cs. Veterinarias y Agronmicas (CICVyA), INTA Es conocido que las micobacterias ambientales (MA) son patgenos oportunistas. Sin embargo, en pacientes inmunocomprometidos la incidencia de las infecciones aumenta. Por otra parte, el aumento de los contaminantes ambientales areos, material particulado (MP) en suspensin y gases, inducen un drstico incremento en el porcentaje de las enfermedades ambientales. Dado que la exposicin al humo del cigarrillo y la contaminacin asociada al uso del carbn como combustible han sido identificadas como factores de riesgo para la infeccin y el desarrollo de enfermedades, la contaminacin area no debera ser subestimada en la incidencia y/o evolucin de las mismas. Hasta el momento no se han descripto estudios que evalen el efecto del MP sobre la respuesta del sistema inmune innato a micobacterias. Por ello, seleccionamos a Mycobacterium phlei, una especie usualmente no patgena en el hombre y a ROFA (Residual Oil Fly Ash) como MP para estudiar en ratones BALB/c la susceptibilidad a la infeccin en pulmn. Los animales se dividieron en 4 grupos (n=16): controles (Co), expuestos intranasalmente a 30 g ROFA (R), infectados con 8.106UFC M. phlei (I) y expuestos e infectados (RI). Previamente la identidad de la micobacteria se confirm a travs de la secuencia parcial del gen hsp65. La respuesta al tratamiento se evalu en pulmn a travs del recuento de unidades formadoras de colonias y en el BAL mediante los siguientes parmetros biolgicos: 1) recuento de clulas totales (RCT), 2) anlisis de la composicin celular (CD) mediante tincin con hematoxilina y eosina, 3) cuantificacin de la produccin del anin superxido mediante el test del NitroBlue Tetrazolium (NBT), 4) cuantificacin de la produccin de IFN-gamma e IL-10 mediante la tcnica de ELISA. Si bien el RCT no mostr diferencias significativas entre los grupos (Co: 1,20,4.106; R: 1,20,3.106; I: 2,10,6.106; RI: 1,60,7.106) el CD, revel para todos los tratamientos una reduccin en el porcentaje de macrfagos alveolares respecto del control (R: 17%; I: 53%; RI: 36%). La produccin de anin superxido aument significativamente para todos los tratamientos respecto del grupo Co (Co: 21,51,4; R: 34,20,3; I: 52,93,1; RI: 47,81,9). Aunque la produccin de IFN-gamma se mantuvo constante (130,5pg/ml), la de IL-10 disminuy en el grupo R (16,72,4pg/ml) y aument en los dos grupos infectados (I: 54,82,1pg/m; RI: 479,6pg/ml) respecto del Co (35,74,7pg/ ml). Llamativamente, la carga bacteriana en pulmn fue mayor en los animales del grupo RI (1,61,08.109 UFC) respecto del grupo I (5,040,05.108 UFC). Estos resultados muestran que la preexposicin a ROFA altera la composicin del BAL, aumenta la generacin de anin superxido e inhibe la actividad antimicobacteriana. Si bien esta ltima observacin no se ve reflejada en los valores de las citoquinas analizadas, los resultados sealan a la contaminacin ambiental como un factor potencialmente decisivo en la progresin de la infeccin.
nientes de bovinos lecheros con mastitis subclnicas y clnicas, mediante API Staph (bioMrieux, France) comparado con el mtodo fenotpico de referencia Kloos and Schleifer (1975) y Bannerman (2003). Materiales y mtodos: se estudiaron 97 aislamientos de ECN provenientes de leche de 374 bovinos con mastitis subclnica y clnica, de 19 establecimientos de la provincia de Buenos Aires. Los aislamientos fueron analizados con Api 20 Staph y el mtodo fenotpico de referencia. Con Apiweb software, se determin como correctamente identificados, aquellos aislamientos que presentaron un resultado con una probabilidad del 90%. La denominacin de ECN incluye a todos los estafilococos aislados de mastitis bovina que no son Staphylococcus aureus, incluyendo coagulasa variable como S. hyicus. Anlisis estadstico: se consider falsos positivos a los ECN encontrados diferentes en comparacin con el mtodo de referencia. Se determin la sensibilidad (S), especificidad (E) y el valor predictivo positivo (VPP) para cada especie. Resultados. Segn el mtodo de referencia se identificaron 96 ECN (98,9 %), correspondiendo a 13 especies diferentes: S. chromogenes (25), S. epidermidis (11), S. simulans (12),S. xylosus (14), S. hyicus (10), S. haemolyticus (4), S. hominis (4), S. sciuri (5), S. saprophyticus (3), S. caprae (1), S. cohnii subsp. urealyticus (2), S. warneri (3), S. capitis (1). Con API Stapth: 49 ECN (50,4%) fueron correctamente identificados, 40 (41,6%) falsos positivos y 8 (8,7%) no identificados. S. chromogenes fue la especie con menor S (20%), E (88%) y VPP (44%), mientras que S. hyicus fue la especie con mayor S (90%), E (100 %) y VPP (100 %). Conclusiones. Por el mtodo fenotpico de referencia fueron resueltos casi todos los aislamientos (96), mientras con Api Staph slo la mitad (49). Api Staph, es un test propuesto para identificar estafilococos en el hombre. Sin embargo, nuestros estudios reflejan una insuficiente respuesta para los patgenos veterinarios. Esto probablemente obedece a un bajo nmero de aislamientos veterinarios en la base de datos. Subsidio UBACyT V011. 2008-2011 (Comunicacin preliminar).
P168 27612 - ONICOMICOSIS: ESTUDIO CLNICO, EPIDEMIOLGICO Y MICOLGICO MULTICNTRICO. RELLOSO, SILVIA(1); ARECHAVALA, A(2); GUELFAND, L(3); MALDONADO, I(4); WALKER, L(2); AGORIO, I(5); REYES, S(5); GIUSIANO, G(6); ROJAS, F(6); FLORES, V(7.); CAPECE, P(8); POSSE, G(8); NICOLA, F(1); BIANCHI, M(9)
(1) CEMIC, (2) Hospital Muiz, (3) Hospital Fernndez, (4) Hospital Alemn, (5) Hospital Britnico, (6) universidad Nacional del Nordeste, (7) Hospital Italiano Dermatologa, (8) Hospital Posadas, (9) Laboratorio M. Bianchi Introduccin: las onicomicosis son patologas de las uas que afectan al 2 - 13% de la poblacin mundial y representan aproximadamente el 50% de las onicopatas, pueden ser causadas por dermatofitos (D), levaduras (L) y/u hongos filamentosos no dermatofitos (HFND). Objetivos: la Subcomisin de Micologa de SADEBAC planific un estudio piloto prospectivo multicntrico para: - Evaluar la prevalencia de onicomicosis. - Analizar los resultados de los estudios micolgicos. - Conocer los agentes causales y las formas clnicas ms frecuentes. - Analizar la presencia de diferencia entre formas clnicas y agentes etiolgicos en uas de mano (UM) y uas de pies (UP) y su relacin con el sexo de los pacientes. Materiales y mtodos: se convoc a 9 centros asistenciales para el estudio: Hospitales Alemn, Britnico, Fernndez, Italiano, Muiz, Posadas, CEMIC, Universidad del Nordeste y Laboratorio Mario Bianchi. Se confeccion una planilla para la toma de muestra donde se asentaron los datos y antecedentes del paciente y las caractersticas de las lesiones. Se evaluaron todas las muestras de lesiones en UP y UM en el perodo: marzo 2009- febrero 2010. Los exmenes microscpicos directos se realizaron con KOH al 20-40% o calcofluor; los cultivos en medios de agar: Sabouraud-miel, Lactrimel, Sabouraud con cicloheximida y/o Dermatophyton Test Medium. Los aislamientos se identificaron segn los procedimientos de cada centro participante. Resultados: se procesaron un total de 5970 muestras, de las cuales 82,4% correspondieron a UP y 17,6 % a UM. La edad promedio fue de 49,7 aos (rango: 1 m-94 aos) y el 66% era de
P167 27610 - MASTITIS BOVINA: IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE ESTAFILOCOCOS COAGULASA-NEGATIVA. GENTILINI E, CUNDN C, PUIGDEVALL T, DENAMIEL G.
Microbiologa. Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA Introduccin: en los ltimos aos en todo el mundo, los estafilococos coagulasa- negativa (ECN) han adquirido importancia por su relacin con la mastitis clnica y subclnica en bovinos. Existen ms de 44 especies y subespecies de las cuales 39 (Euzby 2007) son ECN reconocidos dentro del gnero. La correcta identificacin a nivel de especies es difcil y costosa, sin embargo es necesaria para comprender el potencial patognico de las mismas. En la mayora de los estudios y durante la rutina del diagnstico bacteriolgico en el laboratorio, la identificacin se realiza por el anlisis de las caractersticas fenotpicas. Objetivo: identificar aislamientos de ECN a nivel de especies prove-
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sexo femenino. El 96% de las muestras correspondieron a pacientes adultos. Se evidenci la presencia de hongos en el 61% de los casos. En los pacientes adultos las UP presentaron un 61% de exmenes directos positivos y los cultivos fueron positivos en un 47,9%. Las especies predominantes pertenecen al grupo de los D (82,6%) y la forma clnica ms frecuente fue la distal subungueal. En UM la positividad del examen directo fue de 59% y los cultivos fueron positivos en un 56%, las especies predominantes correspondieron a las levaduras del gnero Candida y la forma clnica ms frecuente fue la onicolisis. Conclusiones: se encontr 61% de positividad en el examen micolgico directo, valor superior al de otras investigaciones. En las UP prevalecieron las dermatoficias en ambos sexos por igual y en UM se evidenci un predominio de levaduras en el sexo femenino y D en los varones. Los HFND se aislaron en 2,2% de lesiones de UP y 3,2% en UM.
P170 27621 - MASTITIS BOVINA: HEMAGLUTINACIN DE ESTAFILOCOCOS COAGULASA-NEGATIVA Y SU RELACIN CON LAS MASTITIS SUBCLNICA Y CLNICA. GENTILINI E (1), TESTORELLI MF (1), CUNDN C (1) Y DENAMIEL G (1).
(1) Microbiologa. Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA. Subsidio UBACyT V011 Introduccin: la hemaglutinacin (HA) es la agregacin de eritrocitos causada por la adherencia de las bacterias a dos o ms eritrocitos. La presencia de hemaglutininas en las bacterias se ha relacionado con la capacidad de adhesin. Es reconocido que la adherencia es el primer paso en la patognesis de las infecciones intramamarias. Objetivo: determinar la capacidad hemaglutinante de los estafilococos coagulasa-negativa (ECN) aislados de mastitis subclnica y clnica. Materiales y mtodos: se estudiaron 97 ECN de los cuales 18 fueron de mastitis clnica y 79 de mastitis subclnica. Tcnica: 3 a 4 colonias de cada ECN de un cultivo de 24 horas en agar triptena soja con sangre desfibrinada de bovino al 5 %, se sembraron en caldo triptena soja e incubaron 18 h a 35 C. Posteriormente cada cultivo se centrifug a 500 g y se lav tres veces consecutivas descartando el sobrenadante y resuspendiendo el pellet en PBS pH 7,2. La suspensin bacteriana se ajust al estndar N 3 del nefelmetro de Mc Farland que se correlacion aproximadamente con 108 bacterias/ml (valor determinado por el recuento de unidades formadoras de colonias en placa). Las suspensiones bacterianas se diluyeron 1:10 en PBS pH 7.2. Glbulos rojos: se obtuvieron por el sangrado de un carnero con solucin de Alsever en una relacin 1:4 (Alsever: sangre). La sangre se centrifug a 500g 15 minutos, el sedimento se lav dos veces consecutivas con PBS pH 7,2 y resuspendi en PBS al 1%. Prueba: se realiz en microplacas de 96 pocillos. Se coloc 25 l por pocillo de cada suspensin bacteriana con 25 l de la suspensin de eritrocitos de bovino, obteniendo un volumen total de 50 l. Las placas se sellaron con celofn y se mantuvo el ensayo en movimiento a una velocidad 75-80 (Rondina, Industria Argentina) durante 2 horas a temperatura ambiente. Controles: (+) y () de HA y de glbulos rojos. Lectura: (+) pellet pobre con un halo alrededor de HA, (++) una HA difusa con una pobre sedimentacin organizada de eritrocitos y (+++) para una sedimentacin difusa. La prueba de HA se consider negativa cuando se observ un botn compacto en el fondo del pocillo. Resultados: del total de los ECN (97) hemaglutinaron el 25,7% (25/97). De mastitis clnica el 100% (18/18) de los ECN hemaglutin; mientras que slo el 8,8% (7/79) de los ECN de mastitis subclnica. Conclusin: estudios realizados con Staphylococcus epidermidis en el hombre, demuestran una alta correlacin entre adherencia a biomateriales y hemaglutinacin. En las mastitis clnica, encontramos correlacin entre HA y ECN, esto permitira inferir que las hemaglutininas podran jugar un rol muy importante en la patognesis de las infecciones intramamarias o servir como un marcador para ECN con potencial adherente.
P169 27614 - MICROBIOTA VAGINAL (MV) Y SU CONFORMACIN COMO BIOPELCULA (BP). FARINATI, ALICIA; MIQUELARENA, AMADEO; VAZQUEZ, GUSTAVO
Ctedra de Microbiologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. Universidad del Salvador. CABA Los microorganismos (MOs) viven habitualmente en forma planctnica y en biopelculas (BP) o biofilms. La MV es un ejemplo de BP mixta. Sin embargo se desconoce su dinmica y cmo interviene en ciertos procesos sobre todo los denominados crnicos y/o recurrentes. Objetivo: conocer la dinmica del establecimiento de la MHV de la mujer en edad reproductiva (ER). Pacientes y mtodos: se estudiaron 21 mujeres en ER que consultaron por flujo genital (FG):12 con MH y 9 con infecciones endgenas: 3 vaginosis bacteriana (VB), 4 candidiasis vulvovaginal (CVV) y 2 con vaginitis aerbica (VA). Cada muestra de FG se proces en forma habitual (pH, prueba de aminas, examen en fresco, coloraciones y cultivos). Para la formacin de las BP in vitro se utiliz la tcnica descrita previamente y el FG se inocul en triptena soja caldo (TSC) y Man Rogosa Sharp (MRS) para LB. Se introdujo el dispositivo de vidrio en 2 de cada uno. Se extrajeron 2 a las 24 y 2 a las 48 h. Las lecturas se efectuaron previa coloracin de Gram. Se realizaron extendidos para anlisis de los MOs planctnicos a partir de cada tubo. En tres casos (2 de MHV y 1 de CVV) se realiz el estudio directo de la BP sobre el FG (BPD). Resultados: se observ, en todas las BP in vitro que las especies de cocos gram-positivos (CGP) son los que inician la adherencia para su formacin. LB aparece tardamente e inicialmente forman BP separados de los CGP. En las CVV hay BP mixtas integradas por Candida spp y por los cocos no as por LB que tienden a permanecer aislados. Esta BP mixta aparece despus de las 24h. En las VB los MOs que podran corresponder a Gardnerella vaginalis aparecen a las 48 h. En las VA por Streptococcus agalactiae, se observ la BP monomicrobiana pero fue notoria su alteracin morfolgica. En el estudio planctnico se observaron coagregados bacterianos en los casos de VA y VB. En la MHV los LB desarrollan bien a partir de las 24 h siendo notoria la diferencia entre este desarrollo y la BP correspondiente. En las CVV hubo coagregados de hifas y cocos y a las 48 h tambin con LB. En las BPD se formaron inicialmente BP de CGP sobre la superficie de las clulas epiteliales. A las 48 h observamos en la MHV el desarrollo de BP pequeas de LB pero no yuxtacelulares. En las BPD de CVV observamos a las 24 h LB filamentosos y blastosporos, pero no hifas. Este aspecto difiere a las 48h en que se observan LB con su morfologa habitual. Conclusiones: si bien LB es la microbiota predominante en mujeres en ER con MHV, no parecen ser los que inician la formacin de las BP mientras que si lo hacen las especies de CGP. Esto indicara la importancia de la concentracin lactobacilar para dar lugar a la constitucin de la microbiota como BP ya que en estado planctnico no ocurre lo mismo. Es importante considerar que para que los lactobacilos ejerzan su funcin protectora podra ser necesario que se constituyan como BP. El distinto comportamiento de LB a las 24 y 48 h en las BP directas y en estado planctnico sugiere que esta formacin de BP por parte de LB puede ser especie dependiente.
P171 27630 - EVALUACIN DE LA CONCENTRACIN INHIBITORIA MNIMA (CIM) A VANCOMICINA (VAN) POR DILUCIN EN AGAR, VITEK2, ETEST Y MICE EN Staphylococcus aureus. CERIANA, P(1); GAGETTI, P(1); SOLOAGA, R(2); RODRIGUEZ, M(1); CORSO, A(1)
(1) Servicio Antimicrobianos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. C. Malbrn; (2) Hospital Naval de Bs. As. Introduccin: Staphylococcus aureus es una de las causas ms comunes de infeccin hospitalaria y de la comunidad. VAN es la terapia de eleccin en pacientes con S.aureus meticilino-resistente (SAMR). Debido a la falta de correlacin entre el mtodo de difusin y la CIM a VAN, a partir del 2009 el CLSI elimin los puntos de corte de difusin para VAN en Staphylococcus spp. Recientemente, se ha demostrado que cepas con CIM VAN 2mg/l responden pobremente al tratamiento con VAN, por lo que se hace imprescindible evaluar la sensibilidad por CIM en pacientes donde esta droga vaya a ser utilizada. Actualmente se dispone de mtodos alternativos a los de referencia para evaluar la CIM a
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VAN: tiras de gradiente de antibitico Etest (bioMrieux) o MICE (OXOID) y sistemas automatizados. Objetivos: evaluar la correlacin entre la CIM a VAN por dilucin en agar (DA) y mtodos de Etest, MICE y Vitek2 en aislamientos de S. aureus. Materiales y mtodos: se evaluaron 50 SAMR: 30 cepas de referencia representantes de distintos clones internacionales y 20 de origen clnico derivadas al INEI para evaluacin de sensibilidad a VAN. La CIM por DA se us como mtodo de referencia (CLSI). La distribucin de CIMs a VAN en mg/l (n) de las cepas fue: 0,5 (13), 1 (31), 2 (3), 4 (3). Las tres cepas de CIM 2mg/l fueron h-VISA (ITA1, FER1 y Mu3) y las tres de CIM 4 mg/l VISA (ITA2, FER2 y Mu50). Los VISA y h-VISA se confirmaron por Macro Etest y GRD VAN/TEI+S (bioMrieux). Se realiz la CIM a VAN por Etest, MICE y Vitek2 (AST-P577) segn instrucciones del fabricante. Las discrepancias con el mtodo de referencia fueron confirmadas. Resultados: la concordancia esencial (CE) con el mtodo de referencia (CIM1dilucin) fue 92% para MICE, 98% para Etest y 100% para Vitek2. La concordancia en la categora de interpretacin (CI) fue 98% para Etest y MICE y 100% para Vitek2. Hubo 1 error minor (Mi) por Etest y MICE (h-VISA FER1). Los rangos de CIMs a VAN fueron: 0,5 - 4 mg/l para DA, MICE y Vitek2 y 0,5 - 8 mg/l para Etest. La CIM50 para VAN fue (mg/l): 1 por DA y Vitek2, 1,5 por Etest y 2 por MICE. La CIM90 fue 2 mg/l por los cuatro mtodos. Se observ un desplazamiento hacia CIMs mayores entre (n: 27) ,1 (n: 4), 1 (n: 1) log para Etest y entre (n: 13), 1 (n: 19), 1 (n: 4) log para MICE con respecto a DA. DA, Etest, MICE y Vitek2 detectaron las tres cepas VISA. Los 3 h-VISA con CIM de 2 mg/l dieron CIMs (mg/l): 2 con Vitek2, 2-3 por Etest y 1,5-2 por MICE. La CE y la CI fue superior a 90% para Etest, MICE y Vitek2. Las CIMs por Etest y MICE tienden a ser log y 1 log mayor, respectivamente, por lo que se deben interpretar con precaucin las CIMs de 2mg/l. Los mtodos evaluados detectaron el mecanismo VISA, emergente en nuestro pas, por lo que seran apropiados para evaluar la sensibilidad a VAN en aislamientos clnicos de S. aureus.
Haemophilus influenzae y Streptococcus pyogenes), 9% a enterobacterias (Shigella flexneri y Proteus mirabilis) y 9% a Gardnerella vaginalis. No se obtuvo ningn aislamiento de Candida spp. La etiologa inespecfica fue la ms frecuente en estas pacientes prepberes, lo que coincide con lo publicado por otros autores. Estos resultados avalan la utilizacin de tratamientos sintomticos empricos sin necesidad de antibiticos. Por lo tanto a la hora de decidir un tratamiento antimicrobiano, se hace necesario el estudio microbiolgico, teniendo en cuenta que las VV especficas fueron debidas principalmente a patgenos respiratorios.
P173 27648 - SALMONELOSIS EXTRAINTESTINAL EN PACIENTES PEDITRICOS. SPADA, ROMINA; BARONI, MA ROSA; OCHOTECO, MA CRISTINA; ZURBRIGGEN, MA LAURA; LANDOLT, NOELIA; VIRGOLINI, MA STELLA
Hospital O. Alassia. Santa Fe Introduccin: Salmonella entrica no typhi (SNT) es uno de los enteropatgenos que suele aislarse en los coprocultivos de los pacientes con gastroenteritis, adems puede localizarse en cualquier tejido del cuerpo causando abscesos y otro tipo de manifestaciones. Es bien conocida su relacin con las enfermedades de transmisin alimentaria. Los serotipos predominantes en Argentina son: Salmonella Typhimurium y Salmonella Enteritidis. Objetivo: evaluar retrospectivamente las caractersticas microbiolgicas y epidemiolgicas de aislamientos extraintestinales de SNT y la resistencia antibitica entre enero 2004 a diciembre 2009, estudiados en el Hospital de Nios Dr Orlando Alassia de la ciudad de Santa Fe. Pacientes y mtodos: se analizaron retrospectivamente los datos de 12 pacientes peditricos en los cuales se hall SNT en muestras clnicas diferentes al coprocultivo, siendo ste positivo o negativo. Resultados: el rango de edad de los pacientes fue de 4 meses a 16 aos. Del total de casos estudiados, SNT fue aislada en diez muestras de hemocultivo (10/12), en una muestra de lquido articular (1/12) y en una de empiema subdural (1/12). En slo 3 de los pacientes que presentaron bacteriemias a Salmonella entrica no typhi, la misma fue aislada del coprocultivo en forma conjunta al aislamiento del hemocultivo (3/12). Los serovares implicados con mayor frecuencia en las infecciones extraintestinales fueron Salmonella Enteritidis (5/12) y Salmonella Typhimurium (3/12). El resto de los ailamientos correspondieron a Salmonella Infantis (2/12), Salmonella Brandenburg (1/12) y Salmonella spp. (1/12). Todos los aislamientos resultaron sensibles a cefalosporinas de tercera generacin. Cuatro presentaron resistencia a ampicilina (4/12) y conjuntamente, tres de ellos tambin fueron resistentes a trimetoprima sulfametoxazol. En este estudio los casos de salmonelosis extraintestinal no fueron frecuentes, no obstante, deben ser sospechados en pacientes con fiebre y diarrea, aunque el coprocultivo sea negativo para esta bacteria. El hemocultivo fue el principal sitio de aislamiento de SNT. Salmonella spp result altamente sensible a los antibiticos ensayados.
P172 27638 - VULVOVAGINITIS EN NIAS PREPBERES: AGENTES ETIOLGICOS. ZURBRIGGEN, MARIA LAURA (1); BARONI, MARIA ROSA (1); MENDOSA, MARIA ALEJANDRA (2); RAGOGNA, GABRIELA (1,2); ROLDAN, MARIA LILIANA (2)
(1) Hospital de Nios O. Alassia, (2)Instituto Mdico de la Mujer. Santa Fe Introduccin: en la nia prepber existen condiciones anatmicas, fisiolgicas e higinicas diferentes a la de la adolescente y de la mujer adulta, que contribuyen al desarrollo de la vulvovaginitis (VV). El estado hipoestrognico deja a la mucosa vaginal susceptible a agentes irritativos e infecciosos tales como microorganismos de origen intestinal, respiratorio, drmico y de transmisin sexual. La vulvovaginitis con o sin descarga vaginal es el desorden ginecolgico ms comn en la prctica peditrica. Dado que la fisiopatologa de este cuadro clnico es controvertida, reconocer los agentes que la producen, su frecuencia, la condicin socioeconmica y hbitos higinicos contribuiran a establecer programas de prevencin, educacin y control de las mismas. Objetivo: establecer la frecuencia de aislamientos de agentes etiolgicos de vulvovaginitis en nias prepberes. Pacientes y mtodos: se estudiaron 35 nias prepberes con diagnstico clnico de vulvovaginitis (VV) que concurrieron al consultorio externo de Ginecologa del Hospital de Nios Dr. Orlando Alassia y al Instituto Mdico de la Mujer, ambos de la ciudad de Santa Fe durante el perodo 1 de noviembre de 2009 al 30 de abril de 2010. Las edades de las nias estuvieron comprendidas entre 2 y 12 aos. Se excluyeron los casos con sospecha de abuso sexual. Las muestras vaginales fueron extradas con hisopo especial (tipo uretral). Se realiz observacin en fresco y coloracin de Gram. Se cultivaron en agar sangre al 5%, agar chocolate, agar CLDE y agar Sabouraud glucosado. En los casos de ginecorragia se agreg en el procesamiento agar Salmonella Shigella. Resultados: del total de la poblacin, el 62% correspondi a VV inespecficas sin agente etiolgico demostrado y el 38% a VV especficas. En este ltimo caso, los aislamientos correspondieron: 20% a patgenos respiratorios (Streptococccus pneumoniae,
P174 27649 - MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD EXTERNO EN MICROBIOLOGA: EVALUACIN DE ETAPAS DE AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS. EXPERIENCIA DE 6 AOS. ZRATE, MARIELA SOLEDAD; SMAYEVSKY, JORGELINA; CARRIZO, CAROLINA; DADAMIO, JESICA; ABALLAY, DANIELA; QUIROGA, SILVIA; TORRES, MARTA
Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas Norberto Quirno (CEMIC) El anlisis microbiolgico requiere el control de calidad en cada una de sus etapas. La evaluacin externa (CCE) es una herramienta necesaria para respaldar dichos procedimientos. Nuestro objetivo fue evaluar las etapas de aislamiento e identificacin de microorganismos (mo) a partir de muestras clnicas liofilizadas. Entre 2004 y 2009 se realizaron seis pruebas piloto (PP1 a 6), con laboratorios pblicos y privados participantes del ProgBA (Programa Buenos Aires). Materiales clnicos utilizados: lquidos de
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dilisis peritoneal (LDP) (2), lquido asctico (LA) (1), lavado bronqueoalveolar (BAL) (1), exudado de fauces (EF) (1) y orina (1). En PP4 se envi simultneamente un frotis de LA con abundantes bacilos gram-negativos (BGN) y en PP6 un frotis de hemocultivo con cocos gram-positivos (CGP) en racimo. Las muestras se liofilizaron segn el protocolo del ProgBA, cumpliendo con los requisitos de validacin interna que demostr que el proceso de liofilizacin no alter la morfologa y viabilidad de los mo provenientes de muestras clnicas. Los laboratorios recibieron tambin una planilla de instrucciones para el manejo e informe de resultados. En todas las PP realizadas se evalu concordancia en los morfotipos bacterianos observados en la coloracin de Gram, porcentajes de aciertos en la recuperacin e identificacin de mo. Adems, en la PP1, PP2 y PP3 se evalu la visualizacin microscpica de la coloracin de Gram a partir de la muestra y en la PP5 se evalu la deteccin de antgeno para Streptococcus grupo A. Se enviaron un total de 197 muestras: 34 en la PP1, 22 en la PP2, 38 en la PP3, 26 en la PP4, 36 en la PP5 y 41 en la PP6. Los porcentajes de respuestas y aciertos en la recuperacin e identificacin de mo se observa en la tabla 1. El porcentaje de aciertos para BGN y CGP en la visualizacin microscpica fue del 100% y 79% en la PP1, 94% y 80% en la PP2 y de 41% y 100% en la PP3, respectivamente. En la PP4 el 87 % observ la presencia de BGN y PP6 el 94% de CGP en racimo en la coloracin de Gram. En la PP5 el 77% realiz la deteccin del antgeno para S. grupo A.
P Tasa de Materiales Piloto respuesta clnicos (%) liofilizados mo aislados en la recuperacin de mo Escherichia coli Streptococcus agalactiae Klebsiellap neumoniae Estafilococos coagulasa-negativa Staphylococcus aureus Acinetobacter baumannii E. coli S. pyogenes E. coli Enterococcus faecalis % de aciertos en la identificacin de mo 100/70 % de aciertos
hinchamiento capsular con antisueros Statens Seruminstitut (Dinamarca) se realiz en el Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas Carlos G. Malbrn. Resultados. Se identificaron 48 serotipos y 25 cepas fueron no tipables. La cobertura para los serotipos incluidos en las dos vacunas conjugadas disponibles 10 valente (v) y 13v, segn perodo de estudio, es la que se presenta en la Tabla. Cobertura para la enfermedad invasiva neumoccica / serotipo, segn perodo, Hospital de Nios Sup Sor Mara Ludovica.
Perodo 1994-2008 1994-1998 1999-2003 2004-2008 n 722 229 288 205 10V n (%) 548 181 224 143 (75,8) (79) (77,8) (69,8) 13V n (%) 598 (82,8) 194(84,7) 247(85,8) 157(76,6)
La vigilancia clnica y microbiolgica son los pilares fundamentales para el conocimiento de la incidencia y la circulacin de los serotipos de S. pneumoniae. Estos datos contribuyen al sustento de la meta de desarrollo de vacunas (con amplia cobertura por serotipos) para ser includas en el Calendario de Vacunacin desde temprana edad.
P176 27688 - ESTUDIO DEL SULBACTAM COMO AGENTE ESTRESANTE SOBRE AISLAMIENTOS NOSOCOMIALES DE Acinetobacter baumannii. TORAN, JOSEFINA; MIQUELARENA, AMADEO; DORRONZORO, ANDRES; VAZQUEZ, GUSTAVO; FARINATI, ALICIA
Ctedra de Microbiologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. Universidad del Salvador. CABA
PP1
44
LDP
100/70
PP2
68
LDP
93/80
93/66
PP3
71
BAL
100/59
93/52
PP4 PP5 PP6
89 86 89
LA EF Orina
100 100 100/50
95 100 100/50
Observamos un fuerte incremento en la tasa de respuesta de los laboratorios participantes en el transcurso de los aos. Los CCE en la visualizacin microscpica del frotis permitieron evidenciar un buen porcentaje de aciertos. La alta tasa de aciertos en la recuperacin e identificacin de mo permiti evaluar las etapas iniciales del anlisis microbiolgico
P175 27674 - ENFERMEDAD INVASIVA NEUMOCCICA: PROFILAXIS ACTIVA EN NIOS. VESCINA, CM (1); GATTI, BM (1); AGOSTI, MR (2); REGUEIRA, M (3); GONZALEZ AYALA, SE (2)
(1) Sala de Microbiologa, laboratorio Central y (2) Servicio Enfermedades Infecciosas, Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovica, La Plata. (3) Departamento Bacteriologa, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas Dr. Carlos G. Malbrn Introduccin: la enfermedad invasiva neumoccica es la causa ms importante de morbi-mortalidad en los nios < 5 aos. Han sido identificados 91 serotipos de Streptococcus pneumoniae de los cuales 40 provocan la enfermedad. El conocimiento de los serotipos causales es necesario para definir la constitucin de una vacuna y asesorar sobre el beneficio de la profilaxis activa universal con las vacunas conjugadas disponibles. Materiales y mtodos: para conocer la distribucin de los serotipos aislados de nios con enfermedad invasiva se realiz el estudio longitudinal prospectivo (Protocolos SIREVA-CARIBE, OPS/OMS) de 722 cepas aisladas de nios de 0-5 aos internados en el Hospital de Nios Sor Mara Ludovica en el perodo 1994-2008, La Plata. Las cepas fueron cultivadas a partir de sangre, lquido cefalorraqudeo, pleural, peritoneal y/o articular. La serotipificacin por tcnica de
Acinetobacter baumannii (Ab) es una bacteria gram-negativa, de morfologa cocobacilar, no fermentadora, oxidasa negativa y de amplia distribucin en el ambiente, principalmente en el medio intrahospitalario. Este microorganismo que suele ser multirresistente (MR) se caracteriza por producir infecciones severas, particularmente en pacientes inmunocomprometidos y formar biopelculas (BP) sobre superficies biticas y abiticas. El sulbactam (Sb), antibitico beta-lactmico, ha demostrado tener actividad sobre estos aislamientos y en las biopelculas pueden funcionar como agentes estresantes. Objetivo: estudiar la actividad de Sb sobre el desarrollo de BP de aislamientos nosocomiales de Ab. Materiales y mtodos: se usaron Ab MR: 6 aislamientos con rango de CIM para Sb de 64-128mg/l (Grupo A) y 6 aislamientos con rango de CIM de 2-4 mg/l (Grupo B). Para los diferentes experimentos, se crecieron los Ab MR en caldo Mueller-Hinton. Las biopelculas de Ab grupo A se desarrollaron con Sb: 32 mg/l (condicin subCIM) y 2048 mg/l (condicin supra CIM). Los del grupo B se desarrollaron con 0.5 mg/l y 10 mg/l como sub CIM y supra CIM respectivamente. En el grupo A el Sb se agreg junto con el inculo o 24 h posteriores a la inoculacin. En el grupo B el Sb se agreg en el momento de la inoculacin de los aislamientos. Las biopelculas se visualizaron microscpicamente crecindolas en dispositivos de vidrios especiales. Resultados: la observacin microscpica de los dispositivos demuestra que los aislamientos controles sin Sb formaron biopelculas integradas por cocobacilos, pero cuando se agrega Sb en el momento de la inoculacin del microorganismo todos los aislamientos mostraron morfologa o disposicin alterada. En condiciones subCIM se observaron microcolonias formadas predominantemente por estructuras filamentosas. Por otra parte cuando el Sb se agreg despus de la inoculacin, slo 4 Ab MR del grupo A formaron biopelculas de menor densidad que las desarrolladas sin Sb. Se observ una marcada tendencia a la formacin de agrupamientos espiculares. Los del grupo B en condiciones supraCIM demostraron un desarrollo poco denso y con concentraciones subCIM se observaron formas filamentosas predominantes, en forma similar a lo que ocurri en el grupo A. Comprobamos que al aplicar el agente estresante despus de la formacin de las BP, Ab sufre alteraciones en su morfologa. Tambin es interesante destacar que independientemente de la CIM frente al Sb que presente Ab, la presencia del mismo produce marcadas deformaciones estructurales y en la forma de desarrollo y agrupacin del microorganismo dentro de la BP.
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Esto permitira que el Sb deje las BP ms accesibles a los mecanismos inmunes en el caso de infecciones por Ab adquiridas en el hospital y a su vez permitir que otras sustancias utilizadas en los procedimientos de limpieza y desinfeccin hospitalaria puedan actuar de manera ms eficiente. Este modelo permite inferir que el uso de agentes estresantes sobre las BP de Ab sean un camino viable para poder disminuir la colonizacin ambiental y de elementos de uso intrahospitalario que se observa con este microorganismo.
(1) Unidad Microbiologa, (2) Infectologa. Hospital Interzonal General de Agudos Dr. Abraham Pieyro Introduccin: la histoplasmosis (H) es una micosis sistmica endmica producida por un hongo dimrfico Histoplasma capsulatum (Hc). Su hbitat es el suelo hmedo y sombro de zonas templadas, rico en heces de aves y murcilagos. En Argentina la mayora de los casos se registran en la provincia de Buenos Aires. En individuos inmunocompetentes puede ser asintomtica, provocar enfermedad pulmonar aguda o diseminada crnica con lesiones en la mucosa oral. Las formas diseminadas agudas y subagudas han aumentado su frecuencia en zonas endmicas, relacionado con la infeccin por VIH, originando procesos graves con compromiso pulmonar y extrapulmonar. Objetivo: en este trabajo se presentan las caractersticas clnicas y microbiolgicas de 15 casos de H diseminada (HD) en pacientes con SIDA diagnosticadas en el HIGA Junn (Buenos Aires) desde el 2002 al 2009, sobre un total de 173 pacientes atendidos en ese perodo. Materiales y mtodos: se evaluaron en forma retrospectiva los episodios de HD a partir de los registros del laboratorio de microbiologa y de 14/15 historias clnicas. Las muestras de sangre y puncin de mdula sea fueron procesadas por lisis centrifugacin con saponina y cultivadas en agar Sabouraud glucosado y agar infusin cerebro corazn, incubados a 28C y 35C respectivamente durante 40 das. A las muestras de esputo, lesiones de piel obtenidas por escarificacin y ganglio se les realiz coloracin de Giemsa y cultivo en las condiciones mencionadas. Las cepas fueron identificadas mediante observacin microscpica y confirmadas en el Departamento de Micologa del INEI-ANLIS Dr.CG Malbrn. Los pacientes recibieron tratamiento con itraconazol, requiriendo algunos induccin previa con anfotericina B desoxicolato. A los 30 das comenzaron tratamiento antirretroviral (TARV). Resultados: los sntomas ms frecuentes fueron los constitucionales (prdida de peso, anorexia, astenia y fiebre) 13 pacientes, seguidos por los respiratorios (tos con expectoracin, disnea y radiografa de trax con predominio de infiltrados bilateral) 12 pacientes. Nueve presentaron compromiso de piel (lceras y costras) y 4 afeccin en la mucosa oral. En 14/15 casos fue la enfermedad marcadora de SIDA. El nivel de CD4 fue menor 100 clulas/mm3. Se observaron elementos compatibles con Hc y/o desarrollo en 13/15 muestras de sangre, 7/7 de esputo, 7/9 de piel, 3/3 de mdula sea y 1/1 de ganglio. Slo en 2 pacientes el cultivo de sangre fue la nica muestra positiva, en 1 el examen directo de esputo y en 1 el examen directo de piel. Conclusiones: la prevalencia de H en nuestra poblacin con VIH fue 8%, superior a la estimada en la literatura. En reas endmicas debe considerarse la H dentro de los diagnsticos diferenciales en pacientes VIH+ con severo deterioro inmune, sntomas constitucionales, respiratorios y lesiones de piel. El cultivo de sangre por lisis centrifugacin fue el principal mtodo diagnstico. El estudio de lesiones cutneas result una herramienta muy til para el diagnstico rpido de esta infeccin, as como el examen directo de esputo. El tratamiento antimictico ms el TARV favoreci la reconstitucin inmune, la sobrevida y evit la recada.
P177 27711 - COMPARACIN DEL MTODO DE HEMOCULTIVO AUTOMATIZADO CON BOTELLAS MYCO F LYTIC VS LISIS CENTRIFUGACIN PARA EL DIAGNSTICO DE FUNGEMIAS. TUTZER, SILVIA (1); GENTILINI, ANTONELA (1); GUELFAND, LILIANA (1); FIGUEROA, VIRGINIA (1); BONNEU, BEATRIZ (1); KAUFMAN, SARA (1)
(1) Seccin Microbiologa, Laboratorio Hospital J.A. Fernandez, CABA. Argentina En los pacientes inmunocomprometidos, especialmente por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), las fungemias son una causa frecuente de infeccin oportunista. El objetivo del trabajo fue comparar la recuperacin de hongos productores de micosis sistmicas en pacientes VIH+, por mtodo automatizado BACTEC (Becton Dickinson) en botellas Myco F-Lytic (MFL) y el convencional de Lisis Centrifugacin (LC) con saponina. Entre el 1/1/2006 al 1/9/2009, se estudiaron en forma retrospectiva 905 cultivos de pacientes VIH+, con muestras procesadas por ambos mtodos (LC y MFL) en forma simultnea. En las botellas MFL, utilizadas adems para la bsqueda de micobacterias, se inocularon entre 3-5 ml de sangre, se incubaron a 35 C por 44 das en el equipo de lectura automatizada BACTEC 9050. De los 905, en 39 desarroll micobacterias por lo que se excluyeron de la serie. Para la LC se emplearon tubos con EDTA (BD) y con el agregado de 0,5 ml de saponina al 5%. Se inocularon con 9.0 ml de sangre, se centrifugaron durante 30 minutos a 3000 rpm; del sedimento se sembraron 4 tubos (0.25 ml/tubo): 2 Sabouraud (SB) y 2 agar cerebro corazn (BHI) con cloramfenicol y se incubaron a 28C y 37 C durante 3 semanas. Se consider el gold standard al cultivo positivo para hongos por cualquiera de ambos mtodos. Se diagnosticaron 41 fungemias. Los hongos aislados en total por LC fueron 38 y por MFL 25. Por LC se obtuvieron 17 cultivos positivos para Cryptococcus neoformans (Cn), 825 cultivos negativos, 3 falsos negativos y 1 falso positivo. Por MFL resultaron 17 cultivos positivos para Cn, 817 cultivos negativos, 2 falsos negativos, y 8 falsos positivos (contaminaciones con bacterias). De los cultivos positivos solo 14 fueron detectados por ambos mtodos. Respecto a la deteccin de Histoplasma capsulatum (Hc), por LC se aislaron 21 cultivos positivos, ningn falso negativo, 1 falso positivo y 825 cultivos negativos. Por MFL, se obtuvieron 8 cultivos positivos, 6 falsos negativos y 15 falsos positivos (contaminaciones con bacterias, o sin desarrollo en subcultivos agar chocolate). Los clculos de sensibilidad (S) y especificad (E) para Cn e Hc arrojaron los siguientes resultados: para Cn tanto por la tcnica de LC como por MFL, la S y E fueron del 85% y 99%, respectivamente. Para Hc por LC la S fue 100% y 99.8% la E, en cambio por MFL la S y E fueron del 57.1% y 98.2% respectivamente. Conclusiones: ambos mtodos fueron igualmente sensibles y especficos para la deteccin de Cn, no as para la deteccin de Hc, donde la LC super notablemente al MFL. Para la deteccin de hongos filamentosos, la LC sigue siendo la tcnica indicada. Hubo un porcentaje de falsos positivos ms alto al esperado en MFL, probablemente por ser un medio lquido muy enriquecido, lo que aumenta las probabilidades de contaminacin bacteriana. Habra que realizar estudios futuros de sensibilidad y especificidad con igual volumen de sangre para ambos mtodos, ya que con MFL se utiliz la mitad de volumen de sangre.
P179 27725 - ESTUDIO DE LA FRECUENCIA DE APARICIN DE LEVADURAS EN UAS DE MANO EN EL HOSPITAL MUIZ. LEHMANN, ERICA; WALKER, L; ARECHAVALA, A; SANTISO, G; REYES, S; BIANCHI, M; MAIOLO, E
Hospital Muiz. CABA Introduccin: las onicomicosis representan el 50% de las enfermedades de las uas y son las ms frecuentemente observadas en el mundo. En su mayora son producidas por dermatofitos, pero las lesiones ungueales con aislamiento de levaduras han sido motivo de controversia durante mucho tiempo, pues se cuestiona el rol patgeno de las mismas. Objetivo: conocer la frecuencia de especies aisladas de uas de mano en un perodo de 14 meses, desde el 1/10/08 al 31/12/09. Definir las formas clnicas que se relacionan con el aislamiento de levaduras. Materiales y mtodos: se consign el sexo, la edad y el tipo de lesin ungueal de los pacientes. Se tomaron escamas por raspado con sindesmtomo estril y se aclararon con KOH 40%. Se observaron al microsco-
P178 27716 - HISTOPLASMOSIS DISEMINADA EN PACIENTES CON SIDA. MACHAIN, M (1); RODRIGUEZ, F (2); FERREIRO, D (1); FONTANAZZA, A (1); CEREGIDO, E (1); IDOIPE, J (2)
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pio ptico con 200 y 400 aumentos (examen directo) y se sembraron en Sabouraud-miel y Lactrimel. Se realizaron subcultivos en medios cromognicos (CHROMagar Candida) y se registr el color, aspecto y presencia de ms de un tipo de colonias. A partir de una colonia aislada se realiz la identificacin a nivel de especie por mtodos macro y micromorfolgicos (agar leche, agar harina de maz) y pruebas de asimilacin (API ID 32 C bioMrieux). Resultados: se estudiaron 101 cepas provenientes de 84 pacientes. Hubo un claro predominio del sexo femenino, 65 mujeres (77,4 %) y 19 hombres (22,6 %) con una edad promedio de 51,2 aos. El 40,6% de los aislamientos correspondi a Candida parapsilosis (41), el 19,8% a Candida albicans (20) y el 18,8% a Candida tropicalis (19). El 20,8% restante correspondieron a Candida glabrata (8), Candida famata (3), Trichosporon spp. (7) y un aislamiento de Candida magnoliae, Geotrichum sp. y Cryptococcus sp. Entre las formas clnicas observadas, predomin la onicolisis pura (41 casos, 48,8%), seguida por la onicolisis asociada a otra lesin (19 casos, 22,6%). En el 28,6 % restante se observaron otras formas clnicas, como la distal subungueal 12 (14,3%), distrofia ungueal total 6 (7,1%) y 7,2% de: paroniquia 3, cromoniquia 1, onixis 1 y formas combinadas de paroniquia con cromoniquia 1. En nuestro hospital se atendieron 884 consultas por onicopatas en un perodo de un ao, de las cuales solo 52 (5.9 %) fueron debidas a levaduras (datos no publicados). Por otra parte en un estudio realizado en un centro privado, de un total de 353 onicodistrofias de manos, 107 (30,3%) fueron por levaduras. Por lo que la importancia de esta patologa vara enormemente con la poblacin estudiada. Ambos estudios encuentran un predominio del sexo femenino en la afectacin de uas de mano. A diferencia de otros trabajos que hablan de un gran predominio de C. albicans, nosotros observamos ms de un 40% de C. parapsilosis, C. albicans y C. tropicalis se aislaron aproximadamente en el 20% cada una. Ms del 70% de las lesiones correspondieron a onicolisis, en tanto las formas clnicas tpicas observadas en las onicomicosis por dermatofitos (distal subungueal y distrofia ungueal total), slo se observaron en el 21%. Tambin cabe resaltar que 17 pacientes tuvieron infecciones mixtas que slo pudieron detectarse por la presencia de colonias de distinto color en CHROMagar.
halos de inhibicin se midieron en milmetros en el punto en el cual hubo una reduccin prominente del crecimiento (80%) a las 24 y 48 h. Se utilizaron los siguientes puntos de corte. Sensible =16; sensible dosis dependiente 9 a 15 y resistente = 8. Resultados: al comparar los dimetros de inhibicin entre los discos y tabletas, no encontramos diferencias significativas. Tampoco entre el tiempo necesario para clasificar como S, SDD o R a un aislamiento, obteniendo un 100% de correlacin. Detectamos 126 (81,8%) aislamientos sensibles al FCZ, 10 (6,5%) sensibles dosis dependientes y 18 (11,7%) resistentes al FCZ. El 100% de las C. krusei (resistente natural al FCZ) incluida la cepa ATCC6258 dieron halos de = 8 mm a las 24 h; al igual que 3 cepas de C. tropicalis; mientras que se pudo corroborar la resistencia a las 48 h en otras 2 cepas de C. tropicalis, 2 C. parapsilosis, 2 C. glabrata y 1 C. lusitaneae. Nuestros resultados indican que pueden utilizarse indistintamente discos o tabletas Neo-Sensitabs por el mtodo de difusin en agar para determinar la sensibilidad in vitro al FCZ en la prctica diaria. Adems, la aparicin de resistencia al FCZ en especies del gnero Candida y la recuperacin de C. krusei refuerzan la necesidad de contar con estos mtodos de sensibilidad antifngica in vitro, reproducibles, que ayuden como gua teraputica en la toma de decisin y proporcionen un medio para monitorizar el desarrollo de resistencia en estudios epidemiolgicos.
P181 27737 - TIA CAPITIS: EXPERIENCIA DE 11 AOS EN UN HOSPITAL DE PEDIATRA DE TUCUMN, ARGENTINA. ALCORTA, MARA ELENA; PALACIOS, NICOLAS; ALCORTA, MARIA MALENA; ALVAREZ, CHRISTIAN
Hospital del Nio Jess. Tucumn Introduccin: la tia capitis es una infeccin causada por hongos queratinoflicos denominados dermatofitos, los cuales son capaces de invadir el estrato crneo y colonizar estructuras queratinizadas (cuero cabelludo y pelos). Es ms frecuente en la infancia y constituye un problema sanitario importante, cuya incidencia y agentes causales varan segn la ubicacin geogrfica, el clima y las caractersticas socioeconmicas. Los nios pueden adquirir la enfermedad por contacto directo con animales, personas, tierra o a travs de las escamas vehiculizadas por la ropa u otros objetos. Objetivo: establecer la prevalencia de las diferentes especies de dermatofitos en nios de 0 a 14 aos de edad, con diagnstico presuntivo de tia capitis en nuestro medio. La poblacin infantil estudiada comprende a pacientes de un estrato social especial que solamente puede tener acceso a la consulta mdico-asistencial gratuita hospitalaria. Materiales y mtodos: se estudiaron 468 muestras provenientes de pacientes internados o ambulatorios del Hospital del Nio Jess entre enero de 2000 a junio de 2010, cuyas edades comprendan entre 0 a 14 aos de edad, de ambos sexos (281 varones y 187 mujeres). Las muestras de escamas de piel se recogieron mediante raspado con bistur estril y la extraccin de pelos parasitados se efectu con pinza de depilacin. Los exmenes micolgicos directos se realizaron por digestin alcalina en caliente con KOH 20% entre porta y cubreobjetos. Los cultivos, en medio de agar Sabouraud glucosa adicionado con antibiticos fueron incubados a 28 C durante 15 das y la identificacin de los dermatofitos se realiz siguiendo las claves de Rebell y Taplin. Resultados: el estudio, arroj 392 (83,7%) resultados positivos. La mayor prevalencia la presentaron los individuos del sexo masculino 227 (57,9%) correspondiendo 165 (42,1%) al gnero femenino. El grupo etario de mayor incidencia fue el de 0 a 3 aos seguido del grupo de 4 a 6 aos de edad. El porcentaje de resultados negativos totales obtenidos en los cultivos fue del 16,3%. El orden de frecuencia de los dermatofitos aislados a partir de muestras clnicas fue: Microsporum canis (91,6%) seguido por Trichophyton tonsurans (4,3%), Microsporum gypseum (3,3%) y Trichophyton mentagro-phytes (0,8%). 1) se observ un marcado predominio de la tia capitis en nios del sexo masculino (57,9%) de nuestro medio y en el grupo de menor edad (0 a 3 aos). 2) M. canis (91,6%) fue el dermatofito que present mayor incidencia. 3) por ltimo, es necesario resaltar que el diagnstico de certeza (aislamiento e identificacin del agente causal de la tia capitis) requiere de la asis-
P180 27736 - ACTIVIDAD IN VITRO DEL FLUCONAZOL: MTODO DE DIFUSION EN DISCOS VS TABLETAS NEOSENSITABS SOBRE LEVADURAS DEL GNERO Candida. GONZALEZ, GUILLERMO; PALACIOS, NICOLAS; ALCORTA, MALENA; ALVAREZ, CHRISTIAN
Hospital del Nio Jess. Tucumn Introduccin: el mtodo de microdilucin, estandarizado por el CLSI (documento M27-A2), para determinar la sensibilidad de las levaduras a los antifngicos, es muy laborioso para incluirlo en la rutina en el laboratorio. Sin embargo, el mtodo de difusin en agar con discos de papel (M44-A), estandarizado para fluconazol, ofrece mayor facilidad. Segn el estudio realizado por EspinelIngroff y col. en el 2007 las tabletas Neo-SensitabsTM de FCZ, tienen halos de inhibicin reproducibles y presentan buena correlacin con los discos de dicho antifngico al realizar el mtodo (cualitativo) por difusin. Objetivo: comparar el uso de discos y tabletas Neo-Sensitabs para la determinacin de la sensibilidad in vitro al FCZ de especies del gnero Candida. Materiales y mtodos: se incluyeron en el estudio un total de 154 aislamientos del cepario del laboratorio de Micologa del Hospital del Nio Jess correspondiente a levaduras del gnero Candida; (70 C. albicans, 44 C. tropicalis, 21 C. parapsilosis, 8 C. krusei, 6 C. famata, 3 C. glabrata y un aislado de C. dubliniensis y C. lusitaneae y 2 aislados de referencia C. parapsilosis ATCC 22019 y C. krusei ATCC 6258 (cepa documentada como resistente al FCZ). El anlisis se realiz en dicho laboratorio usando placas de Agar MuellerHinton suplementado con 2% de glucosa y 0.5 ug/ml de azul de metileno. A partir del cultivo se realiz un inculo de turbidez 0.5 McFarland, se estri el mismo sobre la superficie de la placa con hisopo, y posterior incubacin a 35 C-15 minutos. Luego, se colocaron tabletas Neo-Sensitabs (Rosco Diagnstica) y discos de FCZ (Malbrn) [25ug] y nuevamente se incubo a 35 C-24 h. Los
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tencia de un laboratorio de micologa, ya que la clnica slo arriba a un diagnstico presuntivo, el cual debe ser siempre corroborado en el laboratorio.
P182 27755 - IDENTIFICACIN DE DERMATOFITOS POR PCR FINGERPRINTING CON (GACA)4, (GTG)5 O M13. SPESSO, MARA FLORENCIA; NUNCIRA, TANIA (1); DIB, MOISES (1); MASIH, DIANA(2); CHIAPELLO, LAURA(2)
(1) Hospital Peditrico, Crdoba (2) FCQ-UNC-CBA Objetivo: estandarizar la tcnica PCR fingerprinting para identificar especies de dermatofitos utilizando primers que hibridan con secuencias mini y microsatlites dispersas en el genoma. Materiales y mtodos: se recolectaron muestras de pacientes con sospecha clnica de dermatofitosis concurrentes al Servicio de Dermatologa del Hospital Peditrico del Nio Jess de Crdoba Capital. Las muestras fueron procesadas para examen directo con KOH 40% y cultivadas en medio de Sabouraud y agar papa dextrosa. Luego de 20 das, se procedi a la tipificacin de los cultivos positivos por las caractersticas macro y microscpicas de las colonias. Para la extraccin de material gentico se seleccionaron los siguentes dermatofitos: Microsporum canis (n=40), Microsporum gypseum (n=5), Trichophyton rubrum (n=13), Trichophyton mentagrophytes var. mentagrophytes (n=12) y Trichophyton tonsurans (n=1). Se obtuvo el ADN genmico a partir del micelio crecido en las colonias puras en pico de flauta, por pulverizacin con mortero y aire lquido y la posterior extraccin con fenol-cloroformo. Las reacciones de amplificacin se realizaron utilizando los siguientes primers: (GACA)4 (5-GACA GACA GACA GACA3), (GTG)5 (5-GTG GTG GTG GTG GTG-3) o M13 (5GAGGGTGGCGGTTCT-3). Luego de la amplificacin, se corrieron gel de agarosa al 2% con el agregado de SybreSafe (Invitrogen) para la visualizacin, a 50 V por 75 minutos en buffer TAE 1x. La reproducibilidad de las tcnicas con los diferentes primers se evalu realizando extracciones de ADN por duplicado y amplificando las muestras en reiteradas ocasiones. El anlisis de las imgenes se realiz con el programa GEL-PRO ANALIZER 3.1.00.00. Resultados: en general, se observaron bandas con pesos moleculares en el rango de 300 a 1300 pb y de complejidad variable luego de la amplificacin del ADN fngico utilizando PCR con cualquiera de los tres primers. La PCR con (GACA)4 mostr los perfiles de bandas ms sencillos y reproducibles (entre 1 y 5 bandas dependiendo del hongo) con patrones caractersticos y distintivos para M. canis, M. gypseum y T. rubrum. Sin embargo, la PCR con (GACA)4 no permiti diferenciar T. mentagrophytes de T. tonsurans, ya que ambas especies mostraron perfiles genticos idnticos. La PCR con (GTG)5 mostr patrones de bandas ms complejos que los observados con (GACA)4 pero se obtuvo un perfil de bandas caracterstico para cada una de las especies fngicas analizadas. Finalmente, la PCR con M13 mostr perfiles de bandas ms complejos que los observados con (GACA)4 y con patrones distintivos para M. canis, M. gypseum y T. rubrum, pero no permita diferenciar T. mentagrophytes de T. tonsurans. La PCR fingerprinting con (GACA)4 es un mtodo simple, rpido y reproducible para identificar M. canis, M. gypseum y T. rubrum. Los perfiles constituidos por un gran nmero de bandas obtenidos con la PCR fingerprinting con (GTG)5 dificultan la reproducibilidad de la tcnica, por lo cual se lo propone como un segundo paso, cuando la especie hallada no puede ser distinguida utilizando (GACA)4.
El proyecto MIDAS (Models of Infectious Disease Agent Study) para la deteccin de brotes de enfermedad se implement en Argentina desde 2007. Con modelos estadsticos (Kulldorff spacetime permutation scan statistic) de anlisis espacio-tiempo, SaTScan (STS) recorre bases de datos de laboratorio comparando la situacin actual con la histrica del lugar y lo que ocurre en tiempo real a nivel local, regional o nacional buscando excesos de casos en reas/perodos determinados dando alarmas que luego hay que confirmar por mtodos habituales. Objetivo: evaluar la utilidad de incluir STS en la base nacional de datos de laboratorio de la Red WHONET-Argentina de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos para la sospecha temprana de brotes de shigellosis a travs de la deteccin de clusters en tiempo real. 1 etapa: se realiz un estudio retrospectivo con los laboratorios de la Red (70) para la deteccin de clusters con datos de 2006-2007 comparando los resultados con los brotes informados al Sistema de Salud (MS) desde julio 2006-junio 2007. Con los resultados y las capacidades provinciales en salud, se dise la 2 etapa: estudio prospectivo piloto, enero 2009-marzo 2010 con 7 hospitales de LP, NQ y RN. Estos cargaron y enviaron a ANLIS cada mircoles datos de shigellosis, por semana epidemiolgica indicando gnero, especie, serotipo y antibiotipo, N= 762 aislamientos. Los jueves se unific la informacin y se buscaron seales STS. Los viernes se analizaron los resultados e informaron a los participantes para hacer la investigacin epidemiolgica y enviar los aislamientos incluidos en las seales para evaluar su relacin gentica por Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE). El estudio retrospectivo mostr que 4 de los 6 brotes informados al MS tenan buena concordancia con alguno de los 19 eventos detectados por STS. De los 2 brotes restantes no hallados por STS: i) la provincia no tena datos histricos para el anlisis ii) brote de 4 casos en ciudad grande escap a la sensibilidad del sistema. En el estudio prospectivo se detectaron 15 seales de Shigella flexneri y S. sonnei, 9 de las cuales fueron estudiadas por PFGE obtenindose correlacin entre la seal y los perfiles moleculares de los aislamientos. Cuatro de ellas tuvieron estudio epidemiolgico a nivel local, coincidente con la seal de STS. La mediana del tiempo entre la aparicin de la seal y el primer aislamiento de la misma fue de 14 das (rango 0-29). Hubo excelente correlacin entre las seales y la relacin clonal de las cepas dentro de ellas. STS integrado con WHONET detect eficiente y tempranamente brotes de shigellosis y ofrece al MS la oportunidad de actuar en el control del mismo. Todas las seales incluyeron cepas relacionadas genticamente y las estudiadas por el MS fueron confirmadas como brotes, reforzando la necesidad de la investigacin epidemiolgica confirmatoria. La aplicacin de STS a datos de laboratorio fue una herramienta novedosa que le dio al diagnstico individual un valor agregado para el estudio y monitoreo de la epidemiologa de la shigellosis.
P184 27764 - PERFIL DE SENSIBILIDAD DE AISLAMIENTOS DE Cryptococcus neoformans DE PACIENTES CON CRIPTOCOCOSIS DISEMINADA ASOCIADA AL SIDA A 5 ANTIFNGICOS. SANTISO, GABRIELA ; ARECHAVALA, A; BIANCHI, M; LEHMANN, E; WALKER, L; MAIOLO, E; NEGRONI, R
Hospital Muiz. CABA Introduccin: Cryptococcus neoformans es una levadura capsulada que produce meningitis en huspedes inmunocomprometidos. En nuestra institucin se observa actualmente que entre el 7 y el 8% de los pacientes con sida internados presenta criptococosis diseminada. Dado que la erradicacin de C. neoformans implica la utilizacin de antifngicos por un perodo prolongado, esto podra favorecer la seleccin de cepas resistentes. Objetivo: determinar la CIM a 5 antifngicos, de aislamientos de C. neoformans provenientes de pacientes con criptococosis diseminada asociada al SIDA, con el fin de estudiar el perfil de sensibilidad en nuestra institucin. Materiales y mtodos: se estudiaron 280 aislamientos provenientes de 152 pacientes, a los que se le realiz CIM (concentracin inhibitoria mnima) por microdilucin a fluconazol, anfotericina B, voriconazol, albaconazol y posaconazol, siguiendo la tcnica del Documento M27-A2 del
P183 27761 - APLICACIN DE MODELOS ESTADSTICOS A LA DETECCIN DE BROTES DE SHIGELLOSIS. GALAS, M(1); VIAS, M(1); PICHEL, M(1); STELLING, J(2); YIH, K(3); TUDURI, E(1); KULLDORFF, M(3); VAN DER PLOEG, C(4); MIDAS ARGENTINA, GRUPO(5); TERRAGNO, R(1)
(1) INEI-ANLIS Dr CG Malbrn, (2) Brigham and Womens Hospital, (3) Harvard Pilgrim Health Care, Harvard Medical School, (4) INPB-ANLIS Dr CG Malbrn, (5) La Pampa, LP; Neuqun, NQ y Ro Negro, RN.
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CLSI. Se usaron como control de calidad 3 cepas de referencia ATCC de sensibilidad conocida: Candida parapsilosis 22019, Candida krusei 6258 y C. neoformans 90112. Los aislamientos de C. neoformans fueron identificadas como tales por su capacidad de desarrollar a 37 C, la produccin de fenol-oxidasa en el medio de girasol, la actividad de ureasa, presencia de cpsula en preparaciones con tinta china y su diferenciacin de Cryptococcus gattii utilizando los medios de glicina-canavanina-azul de bromotimol y glicina-cicloheximida-rojo fenol. Resultados:
Antifngico Anfotericina B Fluconazol Voriconazol Posaconazol Albaconazol CIM50 g/ml 0,5 4 0,06 0,03 0,03 CIM90 g/ml 1 8 0,06 0,12 0,06 Rango g/ml 0,03-2 0,12-32 0,03-025 0,03-0,25 0,03-0,12
P186 27795 - MUCORMICOSIS CUTNEA PRIMARIA ASOCIADA A LA CONTAMINACIN DE FRULAS DE FIJACIN Y CINTAS ADHESIVAS DE TELA. PALACIOS, NICOLAS; GONZALEZ, GUILLERMO; ALCORTA, MARIA ELENA; ALVAREZ, CHRISTIAN
Hospital del Nio Jess. Tucumn Introduccin: la mucormicosis cutnea primaria (MCP) es una infeccin infrecuente causada por hongos no tabicados del orden Mucorales, cuya caracterstica es la invasin vascular por hifas, lo que determina trombosis, infarto y necrosis tisular. Entre febrero de 2008 a abril de 2009 hubo un brote de MCP en nuestro hospital que afecto a pacientes inmunodeprimidos (3 con leucemia linfoblstica aguda, 1 con linfoma no Hodgkin y 1 con enfermedad granulomatosa crnica). Cabe destacar, que las lesiones necrticas en piel de los pacientes, coincidan con el sitio de fijacin de las vas. Por otro lado, reportes a nivel mundial de brotes intrahospitalarios se asocian al contacto de la piel con gasas, vendas, productos adhesivos usados en su ajuste y baja-lenguas de madera contaminados. El objetivo del presente trabajo fue determinar la posible asociacin del brote de MCP con el uso de frulas de fijacin (FF) y cintas adhesivas de tela (CAT) usadas rutinariamente en nuestro hospital. Materiales y mtodos: un total de 10 FF y 10 CAT utilizadas en las salas donde fueron diagnosticados los casos de MCP, fueron procesadas en el laboratorio de Micologa del Hospital del Nio Jess en marzo de 2008. Las FF (fabricadas en dicho hospital) estaban compuestas por trozos de madera de 30x10x2cm, con extremos recubiertos con goma espuma, una 1 cubierta con plstico y una 2 con tela; por lo cual se realiz la siembra de los componentes por separado en agar glucosa Sabouraud (SAG) a 28 C. Adems se cortaron trozos de las CAT y se sembraron e incubaron de idntica forma. Las colonias vellosas se transplantaron en SAG y se identificaron a nivel de gnero en base a las claves de Hoog & Guarro (2000). Resultados: en el 70% del total de FF y en el 60% de las CAT, se aislaron hongos del gnero Mucorales, en el resto de muestras no se aislaron hongos filamentosos no tabicados. A partir de todos los componentes de las FF y de las CAT se recupero gran proporcin de hongos del gnero Rhyzopus y Mucor. El orden de frecuencia encontrados de las 10 FF fue: 5/71,4% Rhyzopus spp., 1/14,3% Mucor spp. y 1/14,3% con mezcla de ambos gneros. Solamente se aisl Mucor spp. de las CAT positivas. a) los resultados obtenidos en este estudio promovieron el reemplazo de los dispositivos usados para fijar vas en el nospital, no observndose ningn otro caso de MCP hasta el da de la fecha. b) la contaminacin de los elementos de las frulas de fijacin y cintas adhesivas de tela concordaba con los aislamientos hallados durante el brote. (2 casos Rhyzopus spp. y 3 de Mucor spp.). c) en base a estos datos, creemos que el uso de las FF y CAT (contaminadas) en estos nios inmunodeprimidos fueron los causantes de la infeccin por estos hongos oportunistas d) por ltimo, sera necesario confirmar esta hiptesis por estudios moleculares de las cepas recuperadas de las FF, las CAT y de los pacientes.
De acuerdo con este estudio todos los aislamientos mostraron CIM muy bajas para los frmacos ensayados. Solamente 10 aislamientos fueron sensibles dosis-dependeiente frente a fluconazol y 5 tuvieron CIM de 2 frente a anfotericina B. Estos datos son coincidentes con los encontrados en otras investigaciones. Se observ que los nuevos azlicos demuestran gran actividad in vitro frente a C. neoformans.
P185 27775 - MASTITIS BOVINA: CONCENTRACIN INHIBITORIA MNIMA DE PENICILINA, ERITROMICINA Y LINCOMICINA DE Streptococcus agalactiae. DENAMIEL, G (1); PUIGDEVALL, T (1); TESTORELLI, F (1); ALBARELLOS, G (2); GENTILINI, E (1)
Ctedras de Microbiologa (1) y Farmacologa (2). Fac. Cs. Veterinarias. UBA. Subsidio UBACyT V011. Introduccin: la mastitis es la enfermedad del ganado lechero que mayores prdidas econmicas produce. Streptococcus agalactiae es una de las bacterias relacionadas con la infeccin intramamaria (IIM) en los bovinos. La principal causa del uso de antibacterianos en tambos es para prevenir o tratar IIM mediante administracin sistmica o local. En nuestro pas, la mayora de las drogas utilizadas en los rodeos lecheros pertenecen a los grupos de -lactmicos, lincosamidas, eritromicina, aminoglucsidos y rifamicinas, utilizndolos solos o asociados. El objetivo de este estudio fue determinar la concentracin inhibitoria mnima de penicilina, eritromicina y lincomicina frente a aislamientos de Streptococcus agalactiae provenientes de mastitis bovina. Materiales y mtodos: se estudiaron 43 aislamientos de S. agalactiae obtenidos a partir de muestras de leche de animales con signos clnicos de mastitis que provenan de establecimientos ubicados en la provincia de Buenos Aires. Las muestras fueron procesadas por tcnicas habituales de laboratorio. La caracterizacin de los aislamientos se realiz a travs de pruebas fenotpicas (Facklan 2003), serolgicas (Diagnostic Reagents Streptococcal Grouping Kit, Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) y API 20 Strep bioMrieux Argentina S.A. La concentracin inhibitoria mnima (CIM) frente a penicilina, eritromicina y lincomicina se realiz por el mtodo de macrodilucin, segn recomendaciones del CLSI 2008 documento M31-A3. Se utiliz como cepa control Streptococcus pneumoniae ATCC 49619. Resultados: los valores obtenidos para CIM50 y CIM90 fueron respectivamente: penicilina: 0,0625 g/ml y 0,125 g/ml. Rango: 0,0156 - 0,5 g/ml. Eritromicina: 0,0625 g/ml y 0,0625g/ml. Rango: 0,0625 - 1 g/ ml. Lincomicina: 0, 25 g/ml y 4 g/ml. Rango: 0,125 - 4 g/ ml. Los perfiles de sensibilidad de S. agalactiae encontrados en este estudio respecto a penicilina y eritromicina, se encuentran dentro del rango de sensibilidad. Diferente es para lincomicina, cuyos valores son ligeramente superiores a los esperados como respuesta para esta droga. Esto podra deberse a que el control de la mastitis en los rodeos lecheros se realiza mediante el uso permanente de algn antibacteriano. Seguramente, esto ejerce una sostenida presin de seleccin que puede inducir a cambios en la expresin de los perfiles de sensibilidad de los microor-ganismos con el consiguiente impacto en la salud pblica y animal.
P187 27806 - DERMATOMICOSIS EN POBLACIN PEDITRICA. VELAZQUEZ, ERNESTO (1); MERELES RODRIGUEZ, BEDA E (1); CHADE, MIRIAM E (1); MEDVEDEFF, MARTHA G (1); VEDOYA, MARIA C (1); SOSA, VANESA (1); VILLALBA, CECILIA (1)
(1) Servicio del Laboratorio de Micologa, Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones Las dermatomicosis son infecciones de la piel, pelo y uas, causadas por hongos queratinolticos. Son muy frecuentes en la consulta dermatolgica. Dentro de estas, las ms comunes son producidas por hongos dermatofitos de los gneros: Epidermophyton, Trichophyton y Microsporum; hongos levaduriformes del gnero Candida y levaduras lipoflcas del gnero Malassezia. Este trabajo tuvo como finalidad contribuir al diagnstico de cer-
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teza y perfil epidemiolgico regional de las dermatomicosis en la poblacin peditrica. La poblacin en estudio consisti en pacientes peditricos de ambos sexos, del rea metropolitana de la ciudad de Posadas y otras localidades de la Provincia de Misiones, con diagnstico presuntivo de dermatomicosis, derivados al servicio del laboratorio de Micologa. Las muestras clnicas obtenidas de las lesiones, fueron sometidas a examen microscpico directo (KOH 20%), cultivadas en medios micolgicos de rutina e incubadas a temperatura ambiente, con controles peridicos semanales. La diferenciacin en gneros y especies de los hongos aislados se realiz segn sus caractersticas macroscpicas, microscpicas y fisiolgicas. Desde febrero de 2000 a mayo de 2009, se procesaron 611 muestras de pacientes peditricos, de las cuales 53,5% resultaron positivas para hongos; 286 fueron de pacientes masculinos, con 54,4% de positivas y 325 de femeninos, donde 45,6% fueron positivas. La frecuencia en pacientes de 0 a 4 aos fue de 54,6%; 56,7% en los de 5 a 9 aos y 45,9% en los de 10 a 14. Se analizaron 355 muestras de lesiones en cuero cabelludo, 65,6% fueron positivas; 222 de piel con 34,7% positivas y 34 de uas, resultando 50% positivas. Microsporum canis represent 62,4% de los agentes fngicos aislados, Trichophyton mentagrophytes, 12,5%, T. rubrum, 5,8%, M. gypseum, 4,6%, Malassezia spp., 3,1%, Trichophyton spp. 2,8%, Trichosporon spp. y Candida albicans 1,8% y otros agentes representaron menor frecuencia. Se determin alta frecuencia de dermatomicosis en la poblacin peditrica estudiada, principalmente de infecciones en cuero cabelludo producidas por M. canis. No se observ diferencias significativas con respecto a edad y sexo.
prevalentes continan siendo las dermatoficias, las candidiasis vaginales y las micosis sistmicas oportunistas, seguidas de las endmicas. La notificacin de las micosis diagnosticadas en los laboratorios de la RNLM en 2004 y 2008, permiti centralizar informacin consolidada y estructurada; posibilitando, por primera vez, la estimacin de la prevalencia de las micosis humanas en Argentina. Estos resultados representan slo las micosis notificadas por los laboratorios hospitalarios que constituyen la RNLM. El sistema de vigilancia epidemiolgica laboratorial (SIVILA) que est siendo implementado desde el Ministerio de Salud de la Nacin, permitir en un futuro conocer ms sobre la epidemiologa de las micosis en todas las jurisdicciones sanitarias de Argentina.
P189 27827 - INFECCIONES FNGICAS SUPERFICIALES Y CUTNEAS EN PACIENTES DIABTICOS. SANCHEZ, ANDREA (1); MERELES RODRIGUEZ, BEDA E (1); CHADE, MIRIAM E (1); MEDVEDEFF, MARTHA G (1); VEDOYA, MARIA C (1); THEA, ANA E (1); JAQUET, BELEN (1)
(1) Servicio del Laboratorio de Micologa, Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones En los ltimos aos se increment el nmero de diagnstico de micosis en el mundo entero. Las micosis superficiales y cutneas son las de mayor prevalencia y constituyen un importante problema sanitario. El paciente diabtico al tener alteradas las cifras de glucemia se convierte en un terreno abonado para la propensin y padecimiento de las infecciones. La diabetes mellitus se asocia con una alta incidencia de infecciones bacterianas y micticas (25%) en la piel y anexos, en especial onicomicosis. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la frecuencia de infecciones fngicas superficiales y cutneas en pacientes diabticos, su relacin con edad, sexo, localizacin topogrfica, valores de glucemia y agentes etiolgicos involucrados. Se realiz un estudio prospectivo y transversal en 35 pacientes diabticos ambulatorios, que concurrieron al laboratorio de Micologa. Se estudiaron 23 pacientes de sexo femenino y 12 de sexo masculino con edades de 19 a 72 aos (media aritmtica 51.15), 33 con diabetes mellitus tipo II y 2 con diabetes mellitas tipo I. Se confirm el diagnstico clnico de micosis en 20 pacientes (57%; 20/ 35). Las localizaciones ms frecuentes fueron en uas de pies (11/ 23) y manos (8/23). No se observaron diferencias significativas en los valores de glucemia promedio de los pacientes en los que se diagnostic micosis y aquellos en los que no se demostr infeccin fngica (p> 0,05). Pudo observarse que en uas de pies los agentes etiolgicos aislados con mayor frecuencia fueron los dermatofitos: Trichophyton rubrum (5/11) y Trichophyton mentagrophytes (2/11), mientras que en uas de manos se aislaron levaduras del gnero Candida. Otro gnero involucrado en lesiones de uas de pies fue Fusarium sp. (1/11), hongo filamentoso no dermatofito con capacidad queratinoflica. Se concluye que estas infecciones son de alta frecuencia en pacientes diabticos mayores de 47 aos sin diferenciacin de sexo. No existe diferencia significativa entre la adquisicin de estas micosis y los valores promedio de glucemias. Las localizaciones de dermato-micosis predominantes son las de uas de pies y manos. Los agentes etiolgicos ms frecuentes en lesiones podales son T. rubrum y T. mentagrophytes, mientras que en onicomicosis de manos son C. parapsilosis, C. tropicales y C. albicans. Es imprescindible el diagnstico precoz en los pacientes diabticos debido a la alta frecuencia de dermatomicosis observada, para implementar un tratamiento especifico y evitar complicaciones posteriores.
P188 27814 - PREVALENCIA DE LAS MICOSIS HUMANAS EN ARGENTINA. DAVEL, GRACIELA (1); MAZZA, MARIANA (1); REFOJO, NICOLAS (1); RIVAS, CRISTINA (1); CANTEROS, CRISTINA (1); GRUPO, ENCUESTA 2008 (2)
(1) Departamento Micologa, INEI, ANLIS Dr. C. G. Malbrn. (2) Red Nacional de Laboratorios y Programa Nacional de Control de Calidad en Micologa Los cambios en la epidemiologa de las micosis generaron la necesidad de desarrollar en Argentina una Red Nacional de Laboratorios (RNLM) y un Programa Nacional de Control de Calidad en Micologa, con el objetivo de mejorar la calidad del diagnstico en los hospitales. El trabajo coordinado de estos laboratorios permiti realizar en 2004, una encuesta retrospectiva de micosis diagnosticadas, en la cual participaron 72 laboratorios de 19 provincias y Ciudad de Buenos Aires, los que notificaron 23.600 casos. El objetivo de este trabajo fue conocer la prevalencia de las micosis diagnosticadas en 2008, realizando una nueva encuesta retrospectiva y analizar los cambios de frecuencias detectados respecto de la encuesta de 2004. En 2008, se notificaron 23.904 casos de micosis en 109 laboratorios distribuidos en todo el pas. La prevalencia global fue 60,1 cada 100.000 habitantes (micosis superficiales: 31,2 cada 100.000 habitantes, candidiasis de las mucosas: 24,0 cada 100.000 habitantes, micosis subcutneas: 0,1 cada 100.000 habitantes y micosis sistmicas: 4,8 cada 100.000 habitantes). Las dermatofitosis fueron las micosis ms prevalentes (22,0 cada 100.000 habitantes), seguidas de las candidiasis vaginales y vaginitis por levaduras (21,4 cada 100.000 habitantes). Entre las micosis profundas, las ms prevalentes fueron las candidemias y otras infecciones por levaduras (1,4 cada 100.000 habitantes), seguidas de criptococosis (1,2 cada 100.000 habitantes), aspergilosis broncopulmonar crnica (0,5 cada 100.000 habitantes), histoplasmosis (0,4 cada 100.000 habitantes), neumocistosis (0,4 cada 100.000 habitantes), paracoccidioidomicosis (0,2 cada 100.000 habitantes) y coccidioidomicosis (0,03 cada 100.000 habitantes). La comparacin de las frecuencias de micosis notificadas en ambas encuestas mostr que en 2008 aumentaron las micosis superficiales (p<0.05), disminuyeron las vaginales y endmicas (p<0.05), no se observaron cambios en las micosis subcutneas (p>0,05) y se incrementaron las sistmicas oportunistas, especialmente la criptococosis que aument de 328 casos en 2004 a 487 en 2008 (p<0,05). A pesar de la baja prevalencia de la coccidioidomicosis, los casos aumentaron de 5 en 2004 a 11 en 2008. Los resultados obtenidos muestran que las micosis
P190 27838 - BSQUEDA DE Candida dubliniensis MEDIANTE PRUEBAS FENOTPICAS. NARDIN, MARIA ELENA (1); MORANO, SUSANA (1); ARO, CAROLINA (1); MENDEZ, EMILCE DE LOS A (1)
(1) Seccin Microbiologa-Laboratorio Central-Hospital J.M.Cullen. Santa Fe Introduccin: en 1995 se describi Candida dubliniensis como una nueva especie patgena, responsable de cronicidad y resis-
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tencia a algunos antimicticos. Presenta una estrecha relacin filogentica con Candida albicans ya que ambas poseen la capacidad de adherirse a la superficie epitelial, de secretar proteinasas, de producir tubo germinativo y clamidoconidios; por lo que se hace difcil diferenciarla a nivel de laboratorio clnico. Objetivo: identificar C. dubliniensis con metodologa sencilla, aplicable a un laboratorio pblico. Materiales y mtodos: se estudiaron 90 colonias de levaduras-tubo germinativo positivo (en suero humano, en tres horas, a 37 C) aisladas de exudado genitales femenino que concurrieron al Hospital J.M. Cullen en el perodo 1 de marzo a 14 de junio del 2010. Se realizaron las siguientes pruebas fenotpicas: color en medio cromognico (CHROMagar Candida) (verde claro:C.albicans; verde oscuro: C. dubliniensis), crecimiento a 45 C en agar glucosado Sabouraud (AGS), produccin de clamidoconidios (CL) en agar harina de maz (AHM), produccin de CL, observacin de morfologa y color de las colonias en agar tabaco (AT) y asimilacin de D-xilosa (tabletas Rosco). Se utilizaron como control cepas de referencia C. albicans ATCC 90028 y C. dubliniensis (primer aislamiento realizado por Sullivan en Dublin en 1995). Resultados: en el medio cromognico no se pudo observar diferencia en la tonalidad del color verde para la identificacin presuntiva y la asimilacin de D- xilosa result el 100% positiva. Tabla. Resultados de las pruebas de los 90 aislamientos estudiados. En AT observamos que de los 24 aislamientos que producan CL, todos presentaron bordes festoneados sin poder distinguir los colores. Tres de ellas no desarrollaron a 45C, por lo que los consideramos sugestivos de C. dubliniensis. A estos se les realiz la prueba fisiolgica API ID 32 C que los identific como C. albicans.
Crec. 45C Pos.n (%) 82 (91,11%) Crec. 45 C Neg.n (%) 8 (8,89%) CL en AHM Pres. n (%) 70 (77,78%) CL en AHM Aus. N (%) 20 (22,22%) CL en AT Pres. n (%) 24 (26,67%) CL en AT Aus. N (%) 66 (73,33%)
ba de urea de Christensen, observacin de la morfologa en agar arroz y el kit comercial API ID32C (bioMrieux). De 188 pacientes estudiados con diagnstico presuntivo de meningitis en 9 muestras de LCR se diagnostic Cryptococcus spp. (4,8%). Todas ellas dieron pruebas de ltex positivo, 8 se recuperaron en los cultivos y se identificaron mediantes pruebas bioqumicas manuales y comerciales, 6 cepas fueron confirmadas a nivel de especie como C. neoformans por la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) por el Instituto INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn y el Instituto de Medicina Regional, Universidad Nacional del Nordeste. De los nueve pacientes, seis presentaban serologa positiva para VIH, dos pacientes cursaban enfermedades inmunosupresoras (artritis reumatoidea y leucemia linfoblstica crnica) y a uno no se le detect enfermedad de base alguna. La edad promedio de los pacientes con diagnstico de criptococosis menngea fue de 37 aos, con una relacin varnmujer de 3,5. Si bien las infecciones por C. neoformans son ms frecuentes en pacientes VIH, debe tenerse en cuenta su hallazgo en un paciente inmunocompetente. Ademas, el aumento de la incidencia de pacientes con compromiso del sistema inmune debe alertar al microbilogo e incluir de rutina la bsqueda de C. neoformans en todos los LCR.
P192 27881 - BROTE DE SNDROME URMICO HEMOLTICO ASOCIADO A LA INFECCIN POR Escherichia coli O157:H7 EN UN JARDN MATERNAL DE LA CIUDAD DE CRDOBA. MILIWEBSKY, E(1); DEZA, N(1); BASCHKIER, A(1); DASTEK, B(1); CARBONARI, C(1); MANFREDI, E(1); CHINEN, I(1); SUAREZ, ME(2); ESQUIVEL, P(3); RIVAS, M(1)
(1) INEI-ANLIS Dr. CG MALBRN, (2) Laboratorio Central, Crdoba, (3) EPI, Crdoba Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) O157, es un patgeno emergente asociado a casos espordicos y a brotes de diarrea (D) con o sin sangre (DS) y sndrome urmico hemoltico (SUH). La transmisin persona a persona por la va fecaloral ha sido sealada como una va importante de transmisin. Los nios y adultos que asisten a jardines maternales o de infantes constituyen grupos de riesgo, debido a fallas en los hbitos de higiene que pueden producirse en estos centros. El riesgo aumenta debido a la baja dosis infectiva del patgeno. En la semana epidemiolgica 38 del ao 2009 se notificaron a Epidemiologa de Crdoba dos casos de SUH. El primer caso informado fue el de una nia de 33 meses que comenz con sntomas de D el 22/09/09, continu con DS el 24/09 y falleci por SUH el 25/09. El segundo caso fue un nio de 21 meses que comenz con D el 14/09, continu asistiendo al jardn hasta presentar DS el 24/09 y fue internado con SUH el 28/09. Segn la investigacin se estableci que los nios asistan al mismo jardn maternal de la Ciudad de Crdoba. El jardn contaba con dos salas para los ms pequeos: A (hasta 24 meses) y B (>24 meses). Los nios con SUH compartieron las actividades de la sala A desde el 14 al 18/09. Cinco nios (3 de la sala A y 2 de la sala B) presentaron D durante el perodo del 18 al 23/09. El objetivo de este trabajo fue realizar el estudio bacteriolgico del brote y establecer el tiempo de excrecin del patgeno. Muestras de materia fecal del nio con SUH, contactos familiares (n=2), nios de las salas A (n=18) y B (n=16) y de tres maestras fueron procesadas para la identificacin de STEC. Las muestras fueron sembradas en forma directa y luego del enriquecimiento en caldo tripticasa de soja suplementado con cefixima y telurito de potasio, en agar Mac Conkey-sorbitol. La deteccin de los genes stx1, stx2 y rfbO157 se realiz por PCR mltiple. En aquellas muestras que por el primer tamizaje por PCR no se recuper E. coli O157, se aplic la tcnica de separacin inmunomagntica (SIM). Los aislamientos stx-positivos fueron caracterizados por tcnicas feno-genotpicas y de subtipificacin. Por PCR se detect seal positiva para los genes stx2 y rfbO157 en seis muestras. En dos de estas muestras y en otra PCR-negativa, solo se aisl la bacteria luego de la SIM. Se identific E. coli O157:H7, stx2/stx2c (vh-a)/eae/ehxA en el caso de SUH, en 5 nios con D y en un asintomtico (sala B). Por Xba I-PFGE, todas las cepas presentaron el mismo patrn de restriccin correspondiendo a un nico clon. Seis nios infecta-
En este trabajo concluimos que todas las cepas estudiadas fueron C.albicans. Ninguna de las pruebas fenotpicas result contundente para la diferenciacin como sostienen diferentes autores. Consideramos importante reevaluar y mejorar la caracterizacin fenotpica para la correcta identificacin.
P191 27840 - MENINGITIS POR Cryptococcus neoformans DESDE ENERO 2009 A MAYO 2010- HOSPITAL PERRANDOCHACO. TRACOGNA, MARIA FERNANDA; GARIBOGLIO VAZQUEZ, MARIA LUCRECIA; CAROL REY, MARIANA CARINA; MARQUES, ISABEL ANA
Hospital Perrando Chaco Cryptococcus neoformans (C. neoformans) es una levadura encapsulada que puede afectar a individuos sanos, pero con mayor frecuencia se presenta en individuos inmunocomprometidos generando infecciones oportunistas, aumentando la morbi-mortalidad de pacientes con Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). La principal manifestacin clnica de la criptococosis es la meningitis, aunque en pacientes con inmunosupresin grave se puede diseminar ampliamente en piel, hgado, bazo, glndulas suprarrenales y huesos. Se realiz un estudio retrospectivo de lquidos cefalorraqudeos (LCR) de pacientes adultos que ingresaron al Servicio de Microbiologa del Hospital Julio C. Perrando desde enero de 2009 a mayo de 2010. Los pacientes estuvieron internados en distintas salas del Hospital (principalmente en unidad de terapia intensiva, unidad de aislamiento y clnica mdica). La puncin lumbar se realiz en base a la presencia de sntomas menngeos (cefaleas, vmitos, alteracin del sensorio, rigidez de nuca, fiebre y en algunos casos convulsiones). El anlisis micolgico de los LCR consisti en: examen directo en fresco y con tinta china, coloraciones de Gram y May Grunwald Giemsa. El test de ltex para deteccin de antgeno de Cryptococcus spp. (Latex-Cryptococcus Antigen Detection System Inmuno Mycologic) se ensay nicamente en aquellos lquidos con expresa solicitud mdica. Fueron sembrados en medios agar chocolate y 4 tubos de agar Sabouraud adicionado con cloramfenicol, incubados a 28 y 35. Las cepas de levaduras que desarrollaron en agar Sabouraud y agar chocolate fueron identificadas mediante la prue-
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dos excretaron la bacteria por un perodo entre 15 y 49 das. Estos resultados indican la necesidad de implementar medidas de control en los hbitos de higiene en instituciones de cuidado diario. Tambin se enfatiza el cumplimiento de la normativa que establece la prohibicin de asistencia de personas infectadas, hasta no tener dos coprocultivos negativos con un intervalo de 48 h.
P193 27907 - DETECCIN DE Histoplasma capsulatum EN PEQUEOS MAMFEROS SILVESTRES EN LA PAMPA HMEDA ARGENTINA. IBARRA CAMOU, BELEN (1); TORANZO, ADRIANA (1); SUAREZ ALVAREZ, ROBERTO O (1,2); DAVEL, GRACIELA (1); LEVIS, SILVANA (3); CANTEROS, CRISTINA E (1)
(1) Departamento Micologa, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. (2) Departamento de Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Mxico DF. (3) Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas Dr. Julio I. Maiztegui Pergamino. Histoplasma capsulatum es el agente causal de la histoplasmosis, micosis de amplia distribucin en la Repblica Argentina. La principal rea endmica es la regin denominada Pampa Hmeda y es de donde provienen la mayora de los casos clnicos. En esta regin geogrfica se han detectado porcentajes de infeccin en humanos de aproximadamente 30 % a travs de pruebas de intradermorreaccin con histoplasmina. Las tcnicas moleculares fueron utilizadas por diversos autores para establecer las reas endmicas de diferentes micosis. Estas tcnicas permiten detectar ADN fngico en el ambiente o en animales silvestres los que pueden actuar como reservorios y dispersores de hongos de importancia mdica. Se conoce que diferentes animales silvestres son capaces de infectarse con H. capsulatum y desarrollar la enfermedad, entre ellos los pequeos mamferos terrestres. El objetivo de este trabajo fue detectar infeccin por H. capsulatum en pequeos mamferos terrestres autctonos de la Pampa Hmeda Argentina. Se analizaron los rganos (hgado o bazo) obtenidos por necropsia de 34 mamferos terrestres silvestres capturados en diferentes localidades de la Pampa Hmeda Argentina, entre los paralelos de 33-34 de latitud sur y 59-61 longitud oeste. Las especies estudiadas fueron: 17 Calomys laucha (laucha pequea), 6 Calomys musculinus (ratn maicero), 5 Akodon azarae (ratn del pastizal pampeano), 3 Monodelphis dimidiata (colicorto pampeano), 2 Didelphis albiventris (comadreja overa) y 1 Cavia aperea (cuis). Para detectar la presencia de ADN fngico en los rganos analizados se utiliz una PCR anidada que amplifica un fragmento del gen hcp100 especfico de H. capsulatum. El ADN de H. capsulatum fue detectado en tres especies de roedores (4/17 C. laucha; 2/6 C. musculinus y 1/5 A. azarae) y en dos especies de marsupiales (1/3 M. dimidiata y 1/2 D. albiventris). Los resultados sugieren que tanto roedores como marsupiales pueden actuar como reservorios y convertirse en potenciales dispersores del hongo en el ambiente. ste es el primer estudio que registra infeccin por H. capsulatum en C. laucha, C. musculinus y M. dimidiata.
va tumoral. En el acto quirrgico se extrajo material purulento de la duramadre, que se envi para estudios microbiolgicos. En el mismo se recuper Propionibacterium acnes por lo que se inici tratamiento antibitico y se coloc un catter venoso central (CVC). A los 20 das, la paciente present sndrome febril, por lo que se realizaron 2 hemocultivos y se retir el CVC. En los hemocultivos y en la punta de catter desarrollaron levaduras. Dos colonias de cada material se reaislaron en CRHOMagar Candida y se identificaron por mtodos fenotpicos y genotpicos. La identificacin fenotpica se realiz por el mtodo comercial API 32C y por la metologa de referencia. Los resultados de esta ltima, fueron analizados en la base de datos del Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS). Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) para diferentes antifngicos utilizando el micromtodo segn el documento E. Def. 7.1 del EUCAST. Los estudios moleculares se realizaron por tcnicas de PCR con los primers fngicos universales NL1-NL4 e ITS1-ITS4 que amplifican el dominio variable D1/D2-26S y la regin ITS1-5.8S-ITS2 del ADN ribosomal, respectivamente. Los productos de PCR fueron secuenciados para ambas hebras. Las secuencias fueron editadas en el programa BioEdit y se realiz una bsqueda de homologa con las secuencias depositadas en el GenBank utilizando el programa BLAST. La identificacin por API 32C fue Candida rugosa para todos los aislamientos, mientras que los resultados del mtodo de referencia fueron ambiguos y orientaban a C. rugosa o C. pararugosa con porcentajes >94%. Las secuencias obtenidas tanto del dominio D1/D2 como de la regin ITS1-5.8S-ITS2 fueron idnticas para todos los aislamientos. El anlisis comparativo arroj un porcentaje de similaridad de 99% para el dominio D1/D2 y de 94% para la regin ITS1-5.8S-ITS2 con C. pseudorugosa. Los valores de la media aritmtica de CIM en mg/l fueron: 0,67 anfotericina B; 0,71 fluconazol; 0,022 itraconazol; 0,025 voriconazol; 0,063 anidulafungina y 0,13 5fluorocitosina. Este es el primer aislamiento de C. pseudorugosa en Argentina y el primero recuperado de hemocultivo en el mundo. Las tcnicas fenotpicas no fueron concluyentes, probablemente porque sta especie, recientemente descripta, no se encuentra en la base de datos utilizada para el anlisis fenotpico. Los valores de CIM obtenidos no coincidieron con los descriptos para la especie. Las tcnicas moleculares permitieron determinar con certeza la identidad del aislamiento, resaltando la importancia de la utilizacin de estas tcnicas en los centros de referencia.
P195 27979 - DETECCION DE Mycoplasma genitalium Y Chlamydia trachomatis EN HOMBRES VIH POSITIVOS SIN URETRITIS, CRDOBA ARGENTINA. VENEZUELA, FERNANDO; KREMER, LUIS EMILIO (1); KIGUEN, XIMENA (2); FRUTOS, M CELIA (2); CUFFINI, CECILIA (2)
(1) HNC, (2) Instituto de Virologa Dr. Jos M. Vanella (INVIV) Introduccin: Mycoplasma genitalium (M.g.) fue aislado por primera vez en 1980 y si bien han transcurrido ms de 30 aos y algunos estudios lo han asociado con uretritis no gonoccica (UNG), su rol patolgico an no es del todo claro. Debido a que su crecimiento en medios de cultivo es lento, el diagnstico se realiza por tcnicas moleculares como la amplificacin del ADN mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Chlamydia trachomatis (C.t.) es una de las infecciones de transmisin sexual ms frecuente. En el hombre es la responsable del 50% de las UNG y de la mayora de las uretritis post-gonoccica. Se encuentra asociada a epididimitis, prostatitis, pudiendo producir estenosis de los conductos y orquitis. Objetivo: evaluar la frecuencia de las infecciones por M.g. y C.t. en pacientes VIH (+) sin sntomas de uretritis. Pacientes y mtodos: se tomaron muestras de hisopado uretral a 29 hombres (23 VIH positivos), sin sntomas de uretritis, que asistieron al Servicio de Infectologa del Hospital Nacional de Clnicas, Crdoba. Se realiz, por PCR, la deteccin de M.g. (genes ARNr 16s MgPa1/3), y C.t. (genes OMP1 A1/A2/ PCTM3 y plsmido CTP1/2). Para el anlisis estadstico se utiliz el programa EPI INFO, versin 3.5.1, 2008. Resultados: en 5 (21,73%) de los 23 pacientes VIH (+) y en 3 (25%) de los 12 en estado de VIH-SIDA, se detect M.g. De los 6 pacientes VIH (-), 2 (33,3%) arrojaron resultado positivo para M.g. Entre los 29 pa-
P194 27937 - PRIMER AISLAMIENTO DE Candida pseudorugosa EN HEMOCULTIVO. TAVERNA, CG(1); BOSCO BORGEAT, ME(1); TIRABOSCHI, IN(2); FERNANDEZ, N(2); GARCIA, S(2); CORDOBA, S(1); MURISENGO, O(1); VIVOT, W(1); CANTEROS, CE(1); DAVEL, G(1)
1 INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbrn, 2 Hospital de Clnicas Jos de San Martn Candida pseudorugosa fue descripta por primera vez en 2006, aislada de una muestra de esputo. Desde esa fecha no se informaron otros aislamientos de esta especie a partir de materiales clnicos. El objetivo de este trabajo es informar el primer aislamiento de C. pseudorugosa recuperada de hemocultivo. En 2008, ingres al hospital una mujer de 49 aos con diagnstico de gioblastoma multiforme, que presentaba cefalea y sndrome vertiginoso. La paciente fue intervenida quirrgicamente por una recidi-
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cientes, slo 2 VIH (-) (33,33% - 2/6) fueron positivos para C.t. En uno de ellos se detecto el genotipo L2 y ambos presentaron coinfeccin con M.g. Se debe destacar que, el 66, 67% (2/3) de los bisexuales, el 12,5% (2/16) de los homosexuales, el 30% (3/ 10) de los heterosexuales, el 28,57% (6/21) de los que tuvieron ms de 3 parejas sexuales en el ltimo ao (media 6,66) y el 12,5% (1/8) de los que tuvieron menos de 3 parejas, fueron positivos para M.g. Conclusin: si bien no se evidenci asociacin estadsticamente significativa entre la presencia del M.g. y el uso de preservativo, el nmero de parejas sexuales en el ltimo ao, la presencia de VIH y la preferencia sexual (HsH, HsM y bisexualidad), la deteccin de C.t. estuvo asociada a la presencia de M.g (p=0,0110 IC 95% p<0.05). En nuestro estudio la deteccin de M.g. fue superior a la informada en otros trabajos: 5,8% en VIH-positivos asintomticos y 7,1% en VIH-positivos con UNG. De acuerdo a los resultados obtenidos, debera considerarse el estudio de M.g en aquellos diagnsticos de C.t, por encontrarse stos en estrecha relacin. El valor hallado (25%) en aquellos pacientes con SIDA, sin patologa del tracto genital inferior, denota la necesidad de realizar estudios prospectivos, para monitorear la carga de M.g. a fin de determinar su valor patolgico.
vo tradicional. El mtodo desarrollado no depende de equipamiento costoso y podra adaptarse sin mayor esfuerzo a laboratorios de baja complejidad en reas rurales.
P197 28001 - VALORACIN DE FACTORES DE PATOGENICIDAD DE Candida albicans DE UNA POBLACIN INFANTIL CON ALTO RIESGO CARIOGNICO. ESTUDIO PRELIMINAR. LEVIN, BEATRIZ CLARA; MANTO, MARIA DEL CARMEN; BOZZA, FLORENCIA LUCIA; JEWTUCHOWICZ, VIRGINIA MARTA; MOLGATINI, SUSANA LILIANA
Facultad de Odontologa UBA Introduccin: el gnero Candida se encuentra como comensal en la cavidad bucal adems de otros nichos ecolgicos. La caries dental produce una acidificacin del medio bucal dando lugar a la seleccin de microorganismos acidfilos. Candida albicans posee capacidad acidgena y acidrica. El objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro la capacidad de producir fosfolipasas y proteinasas de cepas de Candida albicans aisladas de la mucosa bucal de nios con alto riesgo cariognico. Materiales y mtodos: el estudio se realiz con 10 aislamientos de Candida albicans obtenidos de mucosa bucal de nios con alto riesgo cariognico cuyas edades estaban comprendidas entre los 7 y 12 aos y que no presentaban manifestaciones clnicas de candidosis La identificacin a nivel de especie se realiz en base al color desarrollado en medio cromognico, micromorfologa en agar leche1%-Tween y sistema comercial ID32C. La actividad de fosfolipasa se ensay por el mtodo de placa con agar malta y agar Sabouraud con yema de huevo y la proteasa en medio conteniendo albmina srica bovina. Los ensayos se realizaron por duplicado y los resultados se expresaron mediante el ndice Pz, que es la relacin entre el dimetro de las colonias y de las mismas ms el halo de opacidad producido por la actividad enzimtica, clasificando los aislamientos en altamente, moderados, bajos o no productores (Price 1982 y Ozcan S 2005). Se utilizaron controles: positivo (C. albicans ATCC 10231) y negativo (C. glabrata ATCC 90030). Resultados: el 60% de los aislamientos presentaron actividad de proteasas. El agar Malta evidenci un 70% de produccin de fosfolipasas comparado con el 90% en medio Sabouraud, siendo el 80% de estos de moderada o alta produccin. Conclusiones: estos estudios preliminares permiten evidenciar la portacin de C. albicans con moderada o alta actividad enzimtica en una poblacin de nios con alto riesgo cariognico. Esto podra deberse a las condiciones ambientales generadas en este hbitat por la acidificacin del medio causada por el alto riego cariognico, lo que podra favorecer la produccin de enzimas en los aislamientos estudiados. Este trabajo fue financiado con el subsidio UBACyT O409.
P196 27983 - DETECCIN DE Tritrichomonas foetus MEDIANTE LAMP. GRACIA MARTINEZ, FLORENCIA (1); FUCHS, LUMILA (2); FORT, MARCELO(2); BRECCIA, JAVIER(1); OYHENART, JORGE(1,3)
(1) Universidad Nacional de La Pampa (UNLPAM), (2) INTA, (3) CONICET Introduccin: la tricomonosis bovina es una enfermedad venrea causada por Tritrichomonas foetus. La enfermedad es causa de vaginitis, placentitis, aborto prematuro, flujo uterino y pimetra en la hembra y cursa sin sntomas en el macho. El diagnstico temprano y la eliminacin de animales positivos es la nica medida eficaz para el control de la tricomonosis. La prueba diagnstica ms empleada es el cultivo durante 5 a 7 das y la visualizacin microscpica. La sensibilidad de un muestreo prepucial no supera el 70% y la especificidad es cuestionada por la aparicin de protozoos indistinguibles de T. foetus. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) permite aumentar la sensibilidad y especificidad en este diagnstico, pero los costos de equipamiento y reactivos hacen difcil su generalizacin. La amplificacin isotrmica mediada por bucles (loop mediated isothermal amplification, LAMP) es una tcnica desarrollada para la amplificacin especfica de secuencias de ADN conocidas. La misma es rpida, altamente especfica y no requiere equipamiento costoso. Objetivo: disear y optimizar una prueba de LAMP para la deteccin especfica de T. foetus. Materiales y mtodos: ADN genmico de T. foetus, distintos protozoos (T. vaginalis, Tetratrichomonas spp, Pentatrichomonas spp, Toxoplasma gondii) y bacterias (Brucella abortus, Campylobacter fetus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus) se obtuvo por tratamiento con proteinasa K. Los primers para LAMP se disearon con PrimerExplorer (Eiken Chemical Co). Cantidades variables de ADN se incubaron 40 minutos a 65C en 25 ul de reaccin con 0.2-0.8 M de primers FIP y BIP, 0.1-0.4 M de primers LF y LB, 0.05-0.1 M de primers F3 y B3, 125 M de dNTPs, 0.8 M betana, 20 mM Tris-HCl (pH 8.8), 10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 2 mM MgSO4, 0.1% Triton X-100 y 4U de polimerasa Bst (N. Engl. Biolabs). El resultado se juzg por observacin directa o fluorescencia tras adicin de SYBR Green I (Molecular Probes) y mediante electroforesis en gel de agarosa. La especificidad se confirm por secuenciado directo. Resultados: hemos diseado una prueba de LAMP, basada en la secuencia del gen sod1, para la deteccin especfica de T. foetus. La amplificacin se optimiz y permiti detectar rpidamente ADN de T. foetus. La reaccin se mostr negativa ante una serie de parsitos y bacterias as como ADN bovino y humano. El tiempo mnimo de incubacin para obtener una reaccin positiva fue de 35 minutos. El lmite de deteccin obtenido fue de 1 genoma/reaccin. Conclusiones: hemos diseado un test para la amplificacin especfica de ADN de T. foetus. La rapidez, sensibilidad y especificidad demostradas permitiran sortear muchos inconvenientes del culti-
P198 28009 - CONOCIMIENTO DE AGENTES O INFECCIONES DE TRASMISIN SEXUAL EN ESTUDIANTES DE DOS CARRERAS UNIVERSITARIAS. LUCIANO, MARIA I; ARLETTAZ, DAIANA; CASALEGNO, MARIA L; COLMEGNA, EMILIANO; EZCURRA, GERARDO; FERNANDEZ, JUAN M; GOMEZ BALTAR, MIGUEL A; PAZ, NATALI; NOTARIO, RODOLFO
Facultad de Medicina UNR Introduccin: las infecciones de transmisin sexual (ITS) representan una problemtica importante en la salud. No se dispone de datos sobre el conocimiento de la poblacin del tema, particularmente en estudiantes de medicina y ciencias sociales. Considerar esto es fundamental para poder efectuar educacin en prevencin y consulta precoz. Objetivos: evaluar el conocimiento que tienen los estudiantes de 1 y 3 ao de Medicina y Ciencias Sociales (Psicologa y Ciencia Poltica) sobre ITS. Determinar el orden de las enfermedades y/o agentes citados por los encuestados. Utilizar la informacin obtenida para disear estrategias de promocin y prevencin en relacin a ITS. Materiales y mtodos: se realizaron encuestas semiestructuradas entre los meses de marzo a mayo de 2010 sobre una poblacin total de 580 estudiantes universitarios. Los estudiantes escribieron de
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puo y letra las enfermedades o agentes. Se analizaron los datos obtenidos en tablas de Microsoft Excel. Resultados: 1) conocimiento de ITS: del total de encuestas se desprende que un 98,1% menciona a VIH en primer lugar, sfilis en segundo (75,5%), hepatitis en tercero (52%), gonorrea en cuarto (49%) y HPV en el quinto (44,6%). Se encontraron similitudes en las enfermedades o agentes nombrados por alumnos de 1 ao de las carreras elegidas, siendo que en 3 ao de Medicina el espectro de enfermedades fue superior. Treinta y tres personas de 1 de Ciencias Sociales citaron dos o menos ITS; mientras que 28 personas de 3 no completaron ms de dos; un 50% de los estudiantes de 1 de medicina no respondieron ms de 2 ITS mientras que slo 5 de 3 de medicina completaron 2 o menos. 2) orden jerrquico de ITS que se realiz en funcin de las respuestas brindadas por los alumnos de las distintas carreras:
1 Cs sociales 1 nombrado VIH Sfilis Hepatitis HPV Gonorrea N (%) 3 Cs. sociales 1 nombrado VIH Sfilis Hepatitis HPV Gonorra N (%) 1 medicina 1 nombrado VIH Sfilis Sin Rta Hepatitis Gonorrea N (%) 3 medicina 1 nombrado VIH Sfilis Gonorrea hepatitis HPV N (%)
134 (97.8) 111 (81.0) 57 (41.6) 55 (40.2) 52 (37.96)
122 (100) 81 (66.4) 72 (59.0) 52 (42.6) 50 (41.0)
158 (96.9) 110 (67.5) 82 (50.3) 60 (36.8) 56 (34.4)
155 (98.1) 136 (86.1) 129 (81.7) 115 (72.8) 107 (67.7)
derrame pleural bilateral a predominio derecho. Se realiza toracocentesis para examen bacteriolgico y micolgico, se toman nuevas muestras de esputo para examen directo y cultivo y se realiza fibrobroncoscopa observndose edema inflamatorio del parnquima bronquial y abundantes secreciones espesas y blanquecinas compatible con micosis profunda. En 2 muestras de esputo y 1 de lquido pleural se observaron hifas hialinas. A las 24-48 h se obtuvo desarrollo de colonias color crema y aspecto rugoso que fueron identificada por re-aislamiento en CHROMagar Candida y micromorfologia en agar harina de maz-Tween80; actividad ureasa y perfil de asimilacin en sistema ID API 32C como Geotrichum capitatum utilizando. Se realiza tratamiento antifngico con AMB + fluconazol. El paciente ingresa a UTI a asistencia respiratoria mecnica. Evoluciona neutropnico con shock sptico refractario al tratamiento y fallece. La infeccin fngica por Geotrichum capitatum, patgeno oportunista, se vio favorecida por la inmunosupresin y por el desequilibrio de la flora indgena del paciente. La imposibilidad de corregir el cuadro de inmunocompromiso y la falta de respuesta al tratamiento antifngico desencadenaron rpidamente su fallecimiento.
El nmero de alumnos que conoca slo 2 o menos disminuy discretamente en 3 de Ciencias Sociales respecto de 1, mientras que en medicina disminuy drsticamente de 50 a 5% en 1 y 3 respectivamente. Las enfermedades o agentes conocidos por ms del 33% de los estudiantes fueron VIH, sfilis, gonorrea y hepatitis. Menos de un tercio de los alumnos conoca HPV, herpes o ladilla llegando a que slo 1 2 alumnos en cada grupo mencion clamidia o tricomonas, muchos de ellos desconociendo incluso la trasmisin por va sexual, lo que revela un serio desconocimiento an en el nivel universitario y amerita planificar un slido programa de educacin por parte del poder poltico y de extensin de las universidades.
P200 28017 - ACTIVIDAD DE FOSFOLIPASA Y PROTEINASA DE Candida dubliniensis PROVENIENTES DE BIOFILM SUBGINGIVAL. JEWTUCHOWICZ, VIRGINIA; LEVIN, BATRIZ CLARA; CUESTA, ALICIA; MOLGATINI, SUSANA LILIANA
Facultad de Odontologa UBA Las enfermedades periodontales se asocian a una compleja y diversa microbiota, la cual interacta entre s y con el hospedero y cuyos mecanismos patognicos no son conocidos ntegramente. Candida dubliniensis coloniza el biofilm subgingival constituyendo un reservorio favorable para su multiplicacin. Objetivo: determinar si la produccin de enzimas de C. dubliniensis procedentes de bolsa subgingival de individuos inmunocompetentes se encuentran exacerbados. Materiales y mtodos: se incluyeron aislamientos de C. dubliniensis de mucosa bucal y de biofilm subgingival recuperados a partir de 240 pacientes con enfermedad periodontal inmunocompetentes y no fumadores. La identificacin a nivel de especie se realiz en base al color desarrollado en medio cromognico, micromorfologa en semillas de alpiste (Staib 1999), PCR con iniciadores especficos y secuenciacin. La actividad de fosfolipasa se ensay por el mtodo de placa con agar malta y agar Sabouraud con yema de huevo y la proteasa en medio conteniendo albmina srica bovina. Los ensayos se realizaron por duplicado y los resultados se expresaron mediante el ndice Pz, que es la relacin entre el dimetro de las colonias y de las mismas ms el halo de opacidad producido por la actividad enzimtica, clasificando los aislamientos en altamente, moderados, bajos o no productores (Price 1982 y Ozcan S 2005). Se utilizaron controles: positivo (C. albicans ATCC 10231) y negativo (C. glabrata ATCC 90030). Resultados: la prevalencia de C. dubliniensis en la mucosa bucal y el biofilm subgingival fue del 5% (12/240) y del 4.4% (11/240) respectivamente. El 50% de los aislamientos presentaron actividad de fosfolipasas, siendo la mayora de bajo o moderada produccin, en los dos medios ensayados. No hubo diferencias significativas en la actividad enzimtica en ambos nichos ecolgicos. (ANOVA). Ninguno de los aislamientos mostr actividad de proteasa. Conclusiones: los aislamientos de C. dubliniensis del nicho ecolgico subgingival no presentaron actividad enzimtica exacerbada en los individuos inmunocompetentes. Lo que podra hacernos inferir que esta levadura puede ser considerada saprfita por su baja capacidad de virulencia, ya que las enzimas estudiadas son consideradas importantes factores de patogenicidad para otras especies como Candida albicans. Este trabajo fue financiado por el subsidio UBACyT 0409.
P199 28012 - INFECCIN POR Geotrichum capitatum EN UN PACIENTE CON LINFOMA ANAPLSICO. AMIGOT, SUSANA; CLEMENTI A, ALEJANDRA(1); TOSELLO , MARA ELENA(2); BIASOLI, MARISA (2); BOBATTO , A(1); TSCHAGGEY, S(1); ANCHART, EDUARDO(3)
(1) Laboratorios-Redes Bioqumicas de Santa Fe (SAMCo-San Jorge), (2) CEREMIC- Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas UNR, (3) CEMAR-DSLAC. Municipalidad de Rosario Los individuos con algn nivel de inmunocompromiso son susceptibles a las infecciones por algunos hongos oportunistas. Geotrichum capitatum es un hongo ubicuo en la naturaleza y en el hombre capaz de colonizar la mucosa gastro-intestinal y respiratoria. El objetivo del presente trabajo es comunicar un caso de Geotricosis spp. en un paciente de sexo masculino de 58 aos de edad, trabajador de un molino harinero y con antecedentes de tabaquismo (38aos), con diagnstico de linfoma anaplsico de clulas grandes en abril de 2006 y recada de grado III en 2009 y que recibi quimioterapia con vincristina, doxorrubicina, ciclofosfamida y meprednisona. En mayo de 2010, luego de reincorporase a su trabajo sin autorizacin mdica, presenta sndrome febril, en los 15 das posteriores a quimioterapia ingresa con foco infeccioso, neumona del lbulo superior derecho. Se inicia tratamiento antibacteriano y antiviral. Se solicita: hemocultivo, urocultivo, hisopado nasofarngeo para gripe A H1N1, esputo para gmenes comunes. Los estudios para H1 N1 resultaron negativos por lo que se suspende oseltamivir. El paciente presenta progresin en el infiltrado pulmonar. Al tratamiento anterior se le agrega vancomicina. Presentando mejora clnica y posterior descompensacin respiratoria, febril persistiendo la condensacin bilateral. Se solicita serologa para citomegalovirus (CMV) y hongos, todas negativas. No obstante, se inicia tratamiento con anfotericina B (AMB). Luego del 5 da de tratamiento con AMB y luego de una mejora leve, evoluciona con insuficiencia respiratoria. Se realiza TAC de trax que muestra infiltrado de tipo alvolo-intersticial en todo el pulmn derecho y en el lbulo inferior del lbulo izquierdo con
P201 28024 - POTENCIA IN VITRO DE EQUINOCANDINAS VERSUS SIETE ANTIFNGICOS EN AISLAMIENTOS CLNICOS DE Aspergillus spp.. CORDOBA, SUSANA; VIVOT, WALTER; ISLA, GUILLERMINA; ABRANTES, RUBEN; WANDA, SZUSZ; DAVEL, GRACIELA
INEI-ANLIS Dr. CG MALBRN
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En las ltimas dcadas se observa un aumento en las tasas de morbi-mortalidad por infecciones causadas por Aspergillus fumigatus y distintas especies de A. no fumigatus. El tratamiento con antifngicos de uso habitual no siempre es eficaz. La aparicin las equinocandinas y su aprobacin para el uso en humanos hacen necesario el conocimiento del perfil de sensibilidad de estas nuevas molculas antifngicas frente a estos microorganismos. El objetivo de este trabajo fue evaluar y comparar la actividad in vitro de dos equinocandinas versus siete antifngicos frente a aislamientos clnicos de Aspergillus spp.. Materiales y mtodos: se estudiaron 187 cepas de distintas especies de Aspergillus pertenecientes a la coleccin de cultivos del Departamento Micologa del INEI-ANLIS Dr. CG Malbrn. Las cepas fueron obtenidas de muestras clnicas durante el perodo 19982009. La identificacin de las especies se realiz mediante el estudio de las caractersticas micro y macromorfolgicas. Las concentraciones de los antifngicos testados fueron: 0,03-16 mg/ l para anfotericina B (AB), itraconazol (IZ), voriconazol (VZ), ketoconazol (KZ), caspofungina (CAS) y anidulafungina (AN) y de 0,25-128 mg/l para fluorocitosina (5FC), terbinafina (TB) y fluconazol (FZ). La determinacin de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) se realiz segn el documento M38-A2 del CLSI. La incubacin se realiz a 35C durante 24-48 h. La lectura fue visual. La CIM de AB, IZ, VZ y TB se consider cuando no se observ crecimiento discernible (e95% de inhibicin). La CIM para 5FC se determin como la menor concentracin que produjo prominente disminucin del crecimiento comparado con el control (e50%). Para las equinocandinas se determin la concentracin mnima efectiva (MEC), definida como la menor concentracin que produce cambios morfolgicos evidentes en el crecimiento apical de la hifa. Resultados: las especies identificadas fueron: A. fumigatus (n=66); A. flavus (n=42); A. terreus (n=28); A. niger (n=20); Aspergillus seccin Fumigati (n=18); A. parasiticus (n=2); A. sydowii (n=2); otros (n=9). La media geomtrica y el rango de la CIM en mg/l fue: AB 1,11 (8,0-0,13); 5FC 7,63 (256,00- 0,13); FZ 225,03 (256,00- 64,00); IZ 0,32 (2,00- 0,01); KZ 0,97 (8,000,06); TB 0,11 (4,00- 0,01); VZ 0,33 (4,00- 0,02). La MEC y el rango de la CIM en mg/l fue: CAS 0,06 (1,00-0,02) y AN 0,03 (4,00-0,01). Las equinocandinas fueron los antifngicos ms eficaces in vitro frente a las especies de Aspergillus testadas, inclusive en aquellas resistentes a la anfotericina B. El 95% de las especies fue sensible a anfotericina B (CIM 2 ug/mL), mientras que el 21,4% de los A. terreus tuvo una CIM 4 ug/mL. Fluconazol fue inactivo frente a todas las especies evaluadas. Se observ un amplio rango de CIM dependiente de las especies en estudio, por lo que es esencial realizar la identificacin a nivel de especie y evaluar su perfil de sensibilidad.
de referencia. Nuestro objetivo fue evaluar y comparar la actividad in vitro de siete antifngicos frente a cepas de S. schenckii en su fase levaduriforme utilizando un mtodo de referencia por microdilucin y uno de difusin en agar con tabletas. Materiales y mtodos: se estudiaron 72 cepas clnicas de S. schenckii obtenidas de pacientes de Colombia (n=20), Venezuela (n=20), Uruguay (n=17), Brasil (n=11) y Argentina (n=4). Las concentraciones de los antifngicos testados fueron: 0,03-16 mg/l para anfotericina B (AB), itraconazol (IZ), voriconazol (VZ), ketoconazol (KZ), y de 0,25-128 mg/l para terbinafina (TB), 5-flucytosina (FC) y fluconazol (FZ). La determinacin de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) se realiz segn el documento M27-A3 y la difusin en agar con tabletas Neo-Sensitabs Rosco (T). Para ambos mtodos, el inculo se prepar en medio agar cerebro corazn ms 5% de CO2 a 35C y se ajust a 0,5 McFarland (1- 5 x 106 UFC/ml) en solucin salina estril. La incubacin se realiz a 35C ms 5% de CO2 durante 72 h. La lectura fue visual para ambos procedimientos. Resultados: los valores de la media geomtrica en mg/l y en mm de la CIM/T fueron para AB 1,17/14,66; TB 0,09/ 61,37, KZ 0,17/36,48; IZ 0,35/24,25; VZ 0,31/17,85; FZ 74,59/ 12,56 y 5FC 4,19/13,47. Los errores very major fueron: 26, 15, 2, 21 y 3, para AB, FZ, 5FC, IZ y VZ en ese orden. La concordancia entre ambos mtodos fue para AB 47,22%; FZ 45,83%, 5FC 52,78%, IZ 47,22% y VZ 63,89%. Los antifngicos ms eficaces in vitro fueron terbinafina, ketoconazol, itraconazol y voriconazol. La concordancia general entre el mtodo de referencia y el de difusin en agar con tabletas fue del 51,38%. El mtodo de difusin en agar con tabletas no sera un mtodo recomendable para determinar la sensibilidad en cepas de Sporothrix schenckii.
P203 28049 - Mycobacterium fortuitum: BROTE DE INFECCIONES EN IMPLANTES MAMARIOS. SANTANATOGLIA, SANDRA (1); MIGLIORANZA, CRISTINA; HUALDE, MARIANA; FRANCIONI, SILVIA (2); KAUFMAN, SARA (2)
(1) FARES TAIE INSTITUTO, (2) Laboratorio HUSPED Introduccin: las infecciones asociadas a la colocacin de prtesis mamarias son raras, Staphylococcus aureus es el agente etiolgico ms comn. Existen pocos reportes asociados a micobacterias de crecimiento rpido, siendo la ms frecuente Mycobacterium fortuitum. Objetivo: comunicar un brote de M.fortuitum post cirugas de implantes mamarios. Materiales y mtodos: luego de un caso ndice en una Institucin con un quirfano exclusivo para cirugas limpias se realiz la investigacin de brote, identificacin de casos secundarios, bsqueda de fuente comn y se implementaron medidas para control del mismo. El perodo de estudio fue del 10-3-2009 al 12-6-2009. Se recibieron para cultivo materiales del sitio quirrgico y en algn caso el implante mamario. Se inocularon en agar sangre ovina al 5%, agar chocolate y caldo cerebro corazn. Los extendidos de las muestras se colorearon con Gram visualizndose bacilos gramlbiles; Ziehl-Neelsen observndose bacilos cido-alcohol resistentes largos. Se siembra en medio de Lowenstein - Jensen. A las 72 horas desarrollan en los medios habituales y especficos colonias blancas, secas, de borde irregular. La baciloscopa de las colonias revela bacilos cido-alcohol- resistentes, identificndose con pruebas convencionales como Mycobacterium fortuitum. La CIM por Etest fue: imipenem 3 ug/ml; linezolid 3 ug/ml; amikacina 0.5 ug/ml; ciprofloxacina 0.032 ug/ml; claritromicina 8 ug/ml; trimetoprima- sulfametoxazol > 32 ug/ml. Se revisaron todos los pacientes sometidos a ciruga en el mismo perodo, no hallndose otros casos. Se realiz hisopados nasofarngeos del equipo quirrgico resultando negativos. Estudio microbiolgico del quirfano: al trmino de una ciruga se tomaron 52 muestras con el objetivo de buscar una fuente comn de contaminacin o propagacin de Mycobaterium fortuitum, aislndose M. fortuitum con igual sensibilidad en 2 de las 4 bocas del aire acondicionado del quirfano. Resultados: se detectaron 6 casos con similar modo de presentacin. El motivo de consulta en todos fue induracin, eritema o secrecin purulenta en el sitio quirrgico. Sexo: femenino. Edad: 22 a 47 aos. Ninguno de los casos con enfermedad de base. Todos requirieron retiro del implante, 5 evolucionaron favorablemente con claritromicina 500 mg/12 h y ciprofloxacina
P202 28039 - Sporothrix schenckii. DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD A LOS ANTIFNGICOS POR DILUCIN Y POR DIFUSIN EN AGAR. UN ESTUDIO DE CEPAS DE CINCO PASES DE LATINOAMRICA. CORDOBA, SUSANA (1); VIVOT, WALTER (1); ISLA, GUILLERMINA (1); SZUSZ, WANDA (1); BALLESTE, RAQUEL (2); PANIZO, MERCEDES (3); MATOS, DULCILENA (4); MESA, ANA C (5); DAVEL, GRACIELA (1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas Dr. CG Malbrn, Argentina. (2) Departamento de Laboratorios de Salud Pblica, Uruguay. (3) Instituto Nacional de Higiene R. Rangel, Venezuela, (4) Instituto A. Lutz, Brasil. (5) Universidad Antioquia, Colombia. Antecedentes: Sporothrix schenckii es el agente causal de la esporotricosis, una micosis endmica en pases de Latinoamrica. El tratamiento indicado es con itraconazol para la forma linfocutnea o anfotericina B para la forma diseminada. Estas drogas, son generalmente efectivas, pero no siempre llevan a la cura de la enfermedad, por lo que es necesario conocer la sensibilidad in vitro de otros agentes antifngicos. A la fecha no existe un estndar para hongos dimrficos y los mtodos de referencia disponibles, tanto del EUCAST como del CLSI, son de limitada aplicacin en los laboratorios clnicos por ser onerosos y muy laboriosos. Existen tcnicas comerciales, de simple realizacin, que permitiran obtener resultados comparables a los de los mtodos
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500 mg/12 h por 6 meses, 1 sin seguimiento, 1 se reimplant posttratamiento y reincidi. Medidas de control del brote: se revisaron procedimientos de higiene del quirfano, normas de lavado de manos, limpieza y esterilizacin del material. Se suspendieron cirugas y se convoc al equipo de seguridad e higiene para controlar el sistema de ventilacin hallndose que la toma de aire exterior no se realizaba correctamente. Se cambi toda la instalacin segn recomendaciones vigentes. No hubo reportes de nuevos casos. Conclusin: Mycobacterium fortuitum debe considerarse en el diagnstico diferencial en las infecciones post-implante mamario. Es importante identificar las especies de micobacterias aisladas a los fines epidemiolgicos y conocer su sensibilidad antibitica porque los tratamientos suelen ser prolongados.
P205 28066 - SENSIBILIDAD DE LAS CEPAS DE Salmonella spp. A LOS ANTIBACTERIANOS UTILIZADOS EN EL TRATAMIENTO DE LA DIARREA NEONATAL DE TERNEROS. BILBAO, GLADYS (1); MONTEAVARO, CRISTINA(1); BIGATTI, CECILIA(1); PINTO DE ALMEIDA CASTRO, ALDANA(1); SOTO, PEDRO(1)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias UNCPBA Introduccin: la salmonelosis es una de las causas de mortalidad en terneros, especialmente cuando no se realiza un tratamiento apropiado; es decir que adems de realizar una adecuada fluidoterapia se debe elegir el antibitico correcto. Objetivo: evaluar la sensibilidad a los antibiticos utilizados en el tratamiento de la diarrea neonatal, de cepas de Salmonella spp. aisladas de terneros con y sin signos diarreicos de crianza artificiales. Materiales y mtodos: se estudiaron un total de 39 cepas de Salmonella spp. provenientes de 20 establecimientos lecheros ubicados en la Cuenca Mar y Sierras durante los aos 2008-2009. Los antibacterianos utilizados fueron: enrofloxacina, florfenicol, gentamicina, neomicina, penicilina G, Estreptomicina, trimetoprima-sulfametoxazol, tetraciclina. La metodologa empleada y el criterio de interpretacin se realiz de acuerdo al mtodo de Kirby-Bauer. Resultados: de los ocho antibiticos analizados slo gentamicina, enrofloxacina y trimetoprima-sulfametoxazol presentaron sensibilidad en la totalidad de las cepas. Los antibiticos restantes mostraron resistencia; es as que penicilina G manifest resistencia en la totalidad de las cepas y tetraciclina junto con neomicina, florfenicol y estreptomicina presentaron cepas resistentes entre el 2,5 y 15,4 %. Adems las cepas exhibieron un 25,6 y 10,25% de sensibilidad intermedia a neomicina y florfenicol respectivamente.
Antibitico Enrofloxacina Florfenicol Gentamicina Neomicina Penicilina G Estreptomicina Trimetoprima-sulfametoxazol Tetraciclina Sensible 39 34 39 26 38 39 33 Intermedio 4 10 Resistente 1 3 39 1 6
P204 28053 - MAL DE POTT. REPORTE DE UN CASO CLINICO. PATALLO, CLAUDIA (1); RODRIGUEZ, MONICA (1); RIZZOTTI, VIVIANA (1); COSTA, MIRTA (2); BALLESTER, DANIELA (1)
(1) Hospital Pieiro, (2) Hospital Penna El trmino espondilodiscitis, indica un proceso inflamatorio, generalmente infeccioso, del espacio intervertebral y los cuerpos vertebrales adyacentes. La tuberculosis (TB) de columna vertebral es la localizacin ms frecuente de las tuberculosis osteoarticulares. Sir Percival Pott, en 1779, reconoci la giba dorsal, el absceso osifluente y los trastornos neurolgicos como del mismo origen etiolgico, lo que se conoce como Mal de Pott. Actualmente, estas tres situaciones se consideran ms bien como complicaciones de la TB de columna. Posteriormente, el origen tuberculoso fue establecido a comienzos del Siglo XIX por Delpech. La patologa se produce como consecuencia de la diseminacin hematgena desde focos alejados, focos contiguos o la diseminacin linftica de TB pleural. La tomografa axial computarizada y la resonancia magntica nuclear (RMN) pueden ser tiles para identificar lesiones seas tempranas y sobre todo la RMN para evidenciar lesiones intramedulares, pero el diagnstico definitivo se alcanza a travs de la confirmacin histolgica-microbiolgica de las muestras de absceso o lesiones seas. El tratamiento contempla la inmovilizacin, la administracin de antimicrobianos y la ciruga en casos avanzados. Caso clnico: paciente de 20 aos, boliviana, que trabaja en el mercado de compras La Salada. Ingresa por intenso dolor en zona lumbar, como antecedente refiere cada de su propia altura ocurrida un ao y medio atrs, consultando en diversos centros por dolor agudo que fue progresando, con parestesia de sus cuatro miembros e impotencia funcional. Al examen fsico se observa cifosis dorsal. El laboratorio al ingreso inform Hto. 33%; Hb10.8 g/dl; GB7200; VSG 52mm, funcionalidad heptica y renal normales y serologa negativa para VIH y VDRL. Se realiza RMN informndose fractura y aplastamiento del cuerpo vertebral D10 con importante componente de partes blandas que se expanden dorsalmente al canal raqudeo comprimiendo la mdula espinal. Por sospecha de mal de Pott se inicia tratamiento con rifampicina, isoniazida, pirazinamida y etambutol y analgsico, con diclofenac por dolor y se decide conducta quirrgica con el objetivo de drenaje del absceso, descompresin neurolgica y estabilizacin de la columna. Se enva muestra de material purulento para estudio histopatolgico y cultivo resultando positivo para complejo Mycobacterium tuberculosis. Debido a la evolucin post-quirrgica satisfactoria se decide alta hospitalaria y continuacin de tratamiento en forma ambulatoria y rehabilitacin kinsica. Posteriormente se recibe el informe de la sensibilidad del aislamiento que reporta la resistencia a isoniacida y rifampicina por lo cual, pese al buen estado general de la paciente se cambia el esquema inicial por etiona-mida moxifloxacina, cicloserina adems de estreptomicina y pirazinamida. Actualmente, contina el tratamiento antitubercu-loso, recobr la movilidad de sus miembros y se recupera con pocas secuelas neurolgicas. El diagnstico de espondilodiscitis tuberculosa depende de un alto grado de sospecha, especialmente en zonas de alta incidencia como la de nuestro medio. La asociacin entre un cuadro de dolor axial prolongado con o sin compromiso neurolgico o fiebre y una eritrosedimentacin elevada, continan siendo el eje diagnstico inicial de estos cuadros.
Conclusiones: de acuerdo a lo observado en el presente trabajo, es de eleccin enrofloxacina, trimetoprima-sulfametoxazol y gentamicina para un adecuado tratamiento antimicrobiano de la salmonelosis como causa de diarrea neonatal en terneros. Penicilina G debe descartarse y tener precaucin en el uso de tetraciclina, neomicina y florfenicol. De acuerdo al comportamiento de las cepas de Salmonella spp., estos resultados deben cotejarse peridicamente.
P206 28127 - INFLUENCIA DEL MTODO ANTICONCEPTIVO EN EL PERFIL DE LA FUNCIN VAGINAL EN UN MICROAMBIENTE SOCIAL DE LA PROVINCIA DE SANTA FE (ARGENTINA). FOSCH, SONIA (1); YONES, CRISTIAN (2); TROSSERO, MARTA (1); GROSSO, OMAR (1); ROLDAN, LILIANA (3)
(1) Laboratorios-Redes Bioqumicas de Santa Fe (SAMCo-SA PEREIRA), (2) Facultad de Ingeniera y Ciencias Hdricas (FICHUNL), (3) Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas (FBCB-UNL) Introduccin: la vagina es un rgano autnomo, de importancia funcional crtica en salud sexual y reproductiva. Existen evidencias parciales de la influencia del mtodo anticonceptivo utilizado sobre estados de disfuncin vaginal (DV). Objetivo: a) evaluar la funcin vaginal de mujeres en edad frtil asintomticas que asistieron a controles de planificacin familiar, de dos centros de salud pblicos semirrurales y b) analizar su relacin con el uso de anticonceptivos orales (ACO), dispositivo intrauterino (DIU), preservativos (PRE), mtodo del ritmo (RIT) y sin anticoncepcin (SA). Pacientes y mtodos: se estudiaron 210 mujeres: edad entre 17 a 45 aos, sexualmente activas, sin tratamiento inmunosupresor y/o con antimicrobianos, ni duchas vaginales. La prctica anticonceptiva fue utilizada con un mnimo de 6 meses previos al estudio. Se aplic el estudio microscpico BACOVA (Ba-
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lance del Contenido Vaginal) (www.fba.org.ar/prosar consensos) definiendo cinco estados vaginales bsicos (EVB): microbiota normal (MN), microbiota normal ms reaccin inflamatoria vaginal (MN+RIV), microbiota intermedia (MI), vaginosis bacteriana (VB), vaginitis microbiana inespecfica (VMI). Se agregan a los cinco EVB la deteccin morfolgica de levaduras (Le), tricomonas (TV) con ausencia y presencia de RIV, obteniendo una distribucin final de nueve estados vaginales (EV) que fueron relacionados con los mtodos anticonceptivos y procesados mediante el programa EPI-INFO 6. Resultados: las prcticas anticonceptivas se utilizaron con la siguiente frecuencia: ACO (n 98) 47%, DIU (n 48) 22,8%, PRE (n 20) 9,5%, RIT (n 15) 7,1% y SA (n 29) 13,6%. El 75% del total de las mujeres estudiadas mostr indicadores de DV. La prevalencia de los EV definidos fue: MN 25%, MN+RIV 5%, MI 4%, VB 12%, VMI 8%, Le 15%, Le+RIV 17%, TV 4% y TV+RIV 10%. Vaginosis bacteriana se asoci con Le (1,4%) y TV (0,5). Analizando la influencia de los mtodos anticonceptivos y sin anticoncepcin se detectaron asociaciones estadsticamente significativa de: ACO con: MN (43/73 p 0,009), MN+RIV (9/31 p 0.03), VB (6/25 p 0,02), Le (20/32 p 0.05) y TV+RIV (5/22 p 0,02); DIU con: VB (17/25 p 0,0002); PRE con: MN (3/73 p 0,05) y MN+RIV (11/31 p 0,0000); RIT con MN (13/73 p 0,0000) y SA con: MN (2/73 p 0,0006) y TV+RIV (14/22 p 0,0000). Conclusin: la prevalencia de estados anormales del 75% del total de casos es superior a la mayora de los datos publicados (alrededor de 50%) para DV en mujeres en edad frtil asintomticas. Es de destacar a) la asociacin de ACO con MN seala una tendencia positiva de proteccin, b) DIU genera un incremento de riesgo para VB, mientras que ACO reduce la frecuencia y c) si bien el nmero de casos es reducido, la prctica de ritmo genera el valor ms alto de MN encontrado en todas las series estudiadas por nuestro grupo. P207 28132 - DISTRIBUCIN DE GENOTIPOS DE Candida dubliniensis PROCEDENTES DE MUCOSA BUCAL DE PACIENTES INFECTADOS Y NO INFECTADOS POR VIH. JEWTUCHOWICZ, VIRGINIA; LOPEZ DANERI, GABRIELA; POLA, SANTIAGO; IOVANNITTI, CRISTINA ADELA; BENDEZU, KARLA; LANDABURU, FERNANDA; MUJICA, MARIA TERESA Facultad de Medicina UBA Introduccin: Candida dubliniensis, es una especie de levaduras identificada como patgeno oportunista asociado a candidiasis orofarngea, particularmente en individuos infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). Gee et al. (Gee SF 2002), han clasificado esta especie en 4 genotipos basado en el anlisis de las secuencias nucleotdicas del ADN ribosomal fngico. El anlisis del polimorfismo del ADN amplificado con cebadores arbitrarios (RAPD) es una tcnica molecular que ha sido muy utilizada para estudiar clonalidad en aislamientos clnicos de levaduras. Objetivos: estudiar la distribucin de genotipos de C. dubliniensis de mucosa bucal en individuos infectados y no infectados por VIH. Materiales y mtodos: se incluyeron aislamientos de C. dubliniensis procedentes de 125 muestras de hisopado de mucosa bucal de pacientes VIH y de 240 individuos VIH negativos. Se registraron lesiones clnicas, tratamientos previos con antifngicos y el tratamiento antirretroviral. Las colonias de color verde en medio CHROMagar Candida se seleccionaron y se observaron la formacin de clamidoconidios en agar alpiste (medio de Staib) y PCR especfica. Los ADN se obtuvieron mediante accin enzimtica con zymolasa (Scherer-Stevens) y se amplific una regin de ADN ribosomal con los cebadores ITS1 e ITS4. Los productos fueron purificados, secuenciados y analizados. Tambin se realiz con la tcnica de RAPD-PCR con los cebadores OPA 02, OPA 09, M13F y M13R. Los patrones de bandas obtenidos permitieron relacionar a las cepas mediante el coeficiente de similitud (CS) de Jaccard y el algoritmo UPGMA. Resultados: la prevalencia de levaduras fue del 77.6% (97/125) y 39.2% en individuos VIH positivos y negativos respectivamente, con una diferencia significativa (Chi2 test p<0.001). La prevalencia de C. dubliniensis fue 15.2% (19/125) IC95%: 9.6-23), y 4.2% (10/240) IC95%: 2.7-8.8 en VIH positivos y negativos respectivamente, (Chi2 test p<0.001). Las 19 C. dubliniensis provinieron de 7 pacientes con candidiasis orofarngea, 7 tratamien-
tos previos con antifngicos y 9 con tratamiento antirretroviral. No se observ una distribucin de genotipos relacionados con la infeccin por VIH, el recuento de linfocitos TCD4+, la presencia de sntomas, el hospital del cual provena la muestra, el tratamiento antirretroviral, el haber padecido episodios previos de candidiasis orofarngea o el tramiento antifngico pasado o actual. Conclusiones: existe una mayor colonizacin por C. dubliniensis en pacientes con VIH. Los mtodos de RAPD-PCR y la secuenciacin del rADN permitieron detectar la variabilidad gentica entre los aislamientos. No se detect un clon predominante asociado a la manifestacin clnica, al tratamiento antifngico o la procedencia del paciente. Este trabajo fue subsidiado por UBACYT M426.
P208 28147 - EVALUACIN DEL RIESGO SANITARIO DE RESIDUOS LQUIDOS HOSPITALARIOS. NUEZ, LIDIA (1); TORNELLO, CARINA(1); PAZ, MARTA(1); DE GROSSI, JOSE(1); MANTOVANO, JULIAN(1); MORETTON, JUAN(1)
1) Higiene y Sanidad. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA Introduccin: los centros de salud eliminan grandes volmenes de residuos lquidos contaminados con materia orgnica, antibiticos, antispticos, detergentes, solventes, medicamentos a los que se suman excretas y secreciones humanas contaminadas por diferentes tipos de patgenos. En general estos residuos lquidos se vierten sin tratamiento previo, a la red cloacal urbana. Si bien las aguas cloacales reciben un tratamiento previo a su disposicin final, varios autores han demostrado que los productos eliminados por hospitales representan un riesgo potencial para el ser humano y el ambiente lo que se traduce en un impacto para la salud pblica. La magnitud de dicho impacto ha comenzado a evaluarse en los ltimos aos en mbitos cientficos. Los efluentes del sistema municipal de cloacas de la ciudad de Buenos Aires se eliminan con un mnimo tratamiento previo, en el Ro de la Plata. Este ro es la principal fuente de abastecimiento de agua potable para una poblacin de aproximadamente 10 millones de habitantes; por este motivo es de suma importancia efectuar aportes para el estudio de los riesgos que pueden producir los agentes biolgicos liberados por distintos tipos de efluentes. Objetivo: analizar las caractersticas microbiolgicas de las aguas residuales del Hospital de Clnicas con el fin de obtener datos para el estudio del riesgo infeccioso del residuo lquido hospitalario. Materiales y mtodos: para realizar este trabajo se seleccion el lquido residual proveniente de un centro hospitalario de alta complejidad, el Hospital de Clnicas Jos de San Martn, Hospital Escuela de la Universidad de Buenos Aires. Se tomaron muestras mensuales durante siete das al mes (marzo a septiembre). Se determin el nmero de indicadores bacterianos como, coliformes, Escherichia coli, enterococos e indicadores virales como fagos somticos. Tambin se realiz el recuento de patgenos: Pseudomonas spp. y Staphylococcus spp., Salmonella spp. y la investigacin del complejo Burkholderia cepacia en las muestras del residuo lquido hospitalario. Resultados y conclusiones: todos los microorganismos indicadores fueron detectados en las muestras ensayadas. Se observ una gran variabilidad en los recuentos microbianos. Entre los microorganismos indicadores, los coliformes totales se detectaron en mayor concentracin. Los valores de Escherichia coli variaron entre 1,3 x 107 a 2,5 x 104 UFC/100ml, con un valor medio de 2,0 x 105 UFC/100 ml. Con respecto a enterococos, se obtuvo un valor medio de 1,6 x 105 UFC/100ml. Todos los patgenos ensayados fueron detectados. Se observ presencia del complejo Burkholderia cepacia y se detectaron valores medios de Pseudomonas spp. y Staphylococcus spp. de 71 UFC/ml y 1,6 x 102 UFC/ml respectivamente. Se registraron valores de Salmonella spp. de 5 bacterias/100ml. La caracterizacin biolgica de los lquidos residuales hospitalarios es una de las etapas iniciales en los procesos de gestin para encarar acciones que eviten vertidos inadecuados al medio ambiente.
P209 28148 - PRESENCIA DE BACTERIAS RESISTENTES A ANTIBITICOS EN RESIDUOS LQUIDOS HOSPITALARIOS. NUEZ, LIDIA (1); PUENTES, NOEL (1); TORNELLO, CARINA (1); MORETTON, JUAN (1)
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1) Higiene y Sanidad. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad de Buenos Aires Introduccin: los residuos lquidos hospitalarios estn constituidos por una mezcla de materia orgnica, antibiticos, antispticos, detergentes, solventes, medicamentos a los que se suman excretas y secreciones humanas contaminadas por diferentes tipos de patgenos. En los hospitales se utilizan cantidades importantes de antimicrobianos para prevenir y tratar infecciones, esto promueve que los ambientes hospitalarios sean fuertemente selectivos, dando lugar a la proliferacin de bacterias multirresistentes que son liberadas a los lquidos residuales hospitalarios, los que pueden ser un riesgo sanitario por la liberacin de bacterias multirresistentes, provenientes del ambiente hospitalario, hacia el sistema cloacal. Los efluentes del sistema municipal de cloacas de la ciudad de Buenos Aires se eliminan con un mnimo tratamiento previo, en el Ro de la Plata. Este ro es la principal fuente de abastecimiento de agua potable para una poblacin de aproximadamente 10 millones de habitantes; por este motivo es de suma importancia efectuar aportes para el estudio de los riesgos que pueden producir la diseminacin de bacterias resistentes. Objetivo: evaluar la presencia de bacterias resistentes a los antibiticos en residuos lquidos hospitalarios. Materiales y mtodos: se utiliz un lquido residual proveniente de un centro hospitalario de alta complejidad, el Hospital de Clnicas Jos de San Martn, Hospital Escuela de la Universidad de Buenos Aires. Se tomaron muestras mensuales durante siete das al mes (marzo a septiembre). Se determin el nmero de bacterias resistentes a ampicilina, cefalotina, ceftriaxona, ciprofloxacina, ceftacidima, gentamicina y tetraciclina en triptena soja agar. Se evalo la prevalencia de enterococos vancomicino resistentes y de estafilococos meticilino resistentes, como tambin la prevalencia de bacterias coliformes y de bacilos gram-negativos no coliformes resistentes a antibiticos beta-lactmicos. Las pruebas frente a los antibacterianos se realizaron por el mtodo de dilucin en agar. La categora de resistente fue asignada de acuerdo a los valores de corte segn las normas del CLSI. Resultados y conclusiones: en todas las muestras se observaron bacterias heterotrficas resistentes a los antibiticos ensayados. Se encontr una alta prevalencia de cepas de bacterias viables resistentes a ampicilina (40%), cefalotina (49%), gentamicina (32%) y ciprofloxacina (21%). Con respecto a los coliformes, un 32 % de estas bacterias presentes en las muestras demostraron ser resistentes a ampicilina y 27% a cefalotina. Se observ la presencia de enterococos vancomicino resistentes en 73% de las muestras en un valor medio del 4 % del nmero total de enterococos presentes en las muestras. Se detect la presencia de estafilococos meticilino resistentes en un valor medio del 2%. De acuerdo, con los resultados de este trabajo, se puede inferir que los efluentes hospitalarios eliminan al sistema cloacal municipal bacterias patgenas y saprfitas con distintos grados de resistencia a los antibacterianos. Estos microorganismos podran producir un desequilibrio en el ecosistema aumentando la proporcin de bacterias resistentes en aguas superficiales.
cies aisladas en una poblacin de pacientes adultos en dilisis y su perfil de sensibilidad a antifngicos. Materiales y mtodos: en el perodo comprendido entre agosto de 2008 y junio de 2010 se estudiaron 17 aislamientos de Candida spp. provenientes de pacientes adultos en dilisis, que correspondieron a las siguientes muestras clnicas: 7 hemocultivos perifricos, 4 retrocultivos y 6 lquidos peritoneales. Para realizar la identificacin a nivel de especie de las levaduras aisladas, se sembraron en agar Sabouraud glucosado, agar cromognico Candida (Oxoid) y se realiz identificacin micromorfolgica en agar harina de maz con Tween 80. Para completar la identificacin se utiliz la galera API ID 32 C (bioMrieux). Se determin la sensibilidad a fluconazol, itraconazol, voriconazol y anfotericina por mtodo de difusin (tabletas ROSCO) y CIM a fluconazol y anfotericina por mtodo de Etest. Los resultados se interpretaron de acuerdo a los criterios del CLSI. Se utiliz como control Candida parapsilosis ATCC 22019. Resultados: de los aislamientos estudiados se obtuvo la siguiente distribucin de especies: hemocultivo: 6 C. parapsilosis, 1 C. guilliermondii; retrocultivo: 3 C. parapsilosis, 1 C. albicans; lquido peritoneal: 3 C. parapsilosis, 2 C. guilliermondii, 1 C. albicans. Todos los aislamientos estudiados fueron sensibles a fluconazol, itraconazol, voriconazol y anfotericina. Comentarios: se resalta el mayor predominio de especies de Candida no albicans, de las cuales la ms prevalente fue C. parapsilosis. Todos los aislamientos analizados fueron sensibles a fluconazol, por lo cual, este anlisis puede contribuir a realizar un tratamiento emprico inicial dirigido y precoz, lo que reduce de forma significativa la mortalidad. Es importante tener presente la sensibilidad al resto de los antifngicos como alternativa de tratamiento en casos de reacciones adversas.
P211 28178 - ACTIVIDAD ANTIFNGICA DE Syngonanthus nitens (Eriocaulaceae) SOBRE Candida albicans AISLADAS DE EXUDADOS VAGINALES. ENSAYOS DE TOXICIDAD SOBRE CLULAS HeLa. ARAUJO, MARCELO G F(1); ICELY, PAULA ALEJANDRA(2); HILARIO, FELIPE(3); SANTOS, LOURDES C(3); VILEGAS, WAGNER(3); SOTOMAYOR, CLAUDIA E(2); BAUAB, TAIS M(1)
(1) Facultad de Ciencias Farmacuticas-Universidade Estadual Paulista (FCFAR-UNESP), (2) FCQ-UNC, (3) IQ-UNESP Syngonanthus, gnero perteneciente a la famlia Eriocaulaceae, posee 200 especies, la mayora endmica en Brasil. La especie Syngonanthus nitens es conocida tambin como Capim dourado. Sus escapos son utilizados como materia prima en la confeccin de objetos de ornamentacin, que son exportados a pases europeos. Estudios qumicos de esta especie muestran la presencia de compuestos fenlicos, principalmente flavonoides. Es conocido que los extractos ricos en flavonoides presentan una importante actividad antimicrobiana. En nuestro laboratorio demostramos que el extracto de escapos de S. nitens (ESn) poseen actividad antifngica frente a la cepa ATCC 18804 de Candida albicans y que la concentracin inhibitoria mnima (CIM) frente a esta cepa fue de 250 g/ml. Dos fueron los objetivos planteados para el presente trabajo: el primero, fue evaluar la efectividad de la actividad antifngica de ESn sobre C. albicans provenientes de aislados clnicos de pacientes con candidiasis vaginal. El segundo, fue determinar si el ESn en CIM es capaz de ejercer efecto txico sobre clulas epiteliales humanas. El extracto de escapos de S. nitens fue obtenido por percolacin, utilizando metanol como lquido extractor. La actividad antifngica y las respectivas CIM fueron evaluadas de acuerdo a la norma M27-A2 (NCCLS, 2002), sobre C. albicans (NCPF 3153) y sobre 14 aislados clnicos tipificados. Los extractos fueron disueltos en metanol al 25% con una concentracin inicial de 2000 g/ml y diludas seriadamente en medio RPMI 1640 hasta 7,8 g/ml en microplacas de 96 wells. Se utiliz el inculo a una concentracin de 2,5 x 10 UFC/ml. Como control positivo se incluy anfotericina B. Las placas fueron incubadas en estufa a 37C durante 48 horas. Las CIM fueron definidas como la menor concentracin donde no hubo crecimiento fngico, detectndose con la adicin de cloruro de trifeniltetrazolio al 2%. Todos los ensayos se realizaron por triplicado. Para la evaluacin de la actividad citotxica se emplearon
P210 28166 - DISTRIBUCIN DE ESPECIES Y SENSIBILIDAD DE Candida spp. EN PACIENTES DE UN CENTRO DE DILISIS. MERKT, MARIELA (1); IOVANNITTI, CRISTINA (2); PENNINI, MAGDALENA (1); CARRION, SILVINA(1); BIONDI, ESTEFANIA(3); OCHIUZZI, MARIA EUGENIA(3); SUCARI, ADRIANA(1)
(1) Stamboulian Laboratorio, (2) Centro de Micologa, Facultad de Medicina UBA, (3) NEFROLAB Introduccin: la dilisis es una alternativa de tratamiento en pacientes en los que el deterioro de la funcin renal se hace irreversible; la misma puede ser de dos tipos: dilisis peritoneal (DP) o hemodilisis (HD) y consiste en la separacin de los elementos txicos de la sangre por difusin a travs de una membrana semipermeable. En los ltimos aos, Candida parapsilosis un colonizante habitual de la piel con manifiesta capacidad de adherencia a materiales sintticos, se ha asociado a infecciones en pacientes en dilisis, en ocasiones en igual o mayor proporcin que Candida albicans. Objetivo: evaluar la distribucin de espe-
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clulas epiteliales humanas de lnea HeLa. Las clulas fueron cultivadas en presencia de diferentes concentraciones de ESn (125, 250, 500 g/ml) durante 24h a 37 C y en atmsfera de CO2. La viabilidad celular fue evaluada mediante el ensayo de reduccin de MTT. Todos los ensayos se realizaron por triplicado y cada experiencia repetida al menos 3 veces. Los resultados obtenidos en los diferentes ensayos mostraron que todas las cepas de C. albicans de origen clnico fueron sensibles a la accin fungicida de ESn, presentando valores de CIM entre 62,5 y 250 g/ml. Interesantemente, el tratamiento de las clulas HeLa con el ESn a la dosis efectiva no result txico para las clulas. Estos resultados muestran la efectividad del extracto de escapos de S. nitens y sugieren el posible uso de esta especie como fuente para el aislamiento e identificacin de nuevos agentes antifngicos.
marcando una rpida progresin a SUH en los pacientes infectados. Por esta razn, no detectamos el agente mientras est causando patologas ms leves. Es imprescindible profundizar estas investigaciones, para aclarar debidamente las causas de la alta incidencia de la enfermedad en nuestro medio y poder actuar sobre ellas ms eficientemente.
P213 - 27154 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE CEPAS DE Bacillus spp. AISLADAS DE ALIMENTOS VEGETALES. FANGIO, MARIA FLORENCIA; ROURA, SARA INES(1,2); FRITZ, ROSALIA(1)
(1) Universidad Nacional de Mar Del Plata, (2) CONICET Introduccin: La creciente demanda de los consumidores por obtener alimentos ms naturales y la conciencia de los riesgos a la salud de algunos conservantes qumicos ha llevado a los investigadores a examinar la posibilidad de utilizar bacteriocinas como bioconservantes, as como la aplicacin directa de las cepas productoras de estas sustancias. Las bacteriocinas son pptidos sintetizados ribosmicamente por bacterias que presentan propiedades antimicrobianas contra otras bacterias, a menudo estrechamente relacionadas con la cepa productora. Han sido frecuentemente encontradas como metabolitos secundarios de varios microorganismos entre los cuales se encuentra el gnero Bacillus. Objetivo. El objetivo del presente estudio fue analizar la actividad antimicrobiana de cepas de Bacillus spp. y gneros relacionados aisladas de alimentos de origen vegetal, con el fin de identificar cepas potencialmente productoras de sustancias tipo bacteriocinas. Materiales y mtodos: Los microorganismos se aislaron a partir de muestras de zapallo (Cucurbita moschata), papa (Solanum tuberosum subsp. tuberosum), arroz crudo (Oryza gnero L), y harina de trigo (Triticum vulgare). Las cepas fueron identificadas de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas, bioqumicas y moleculares. Se prepararon extractos crudos libres de clulas a partir de cultivos en caldo Mueller-Hinton que se emplearon para la evaluacin de su actividad antimicrobiana por el mtodo de difusin en agar frente a bacterias indicadoras (distintas especies de Bacillus spp. y Paenibacillus spp., Staphylococcus aureus y Escherichia coli). Para analizar la naturaleza peptdica de las sustancias antimicrobianas, se midi la actividad antimicrobiana de los extractos incubados previamente con y sin tripsina. La actividad antimicrobiana de las cepas frente a cada bacteria indicadora se compar mediante anlisis de varianza (ANOVA) con las pruebas de Tukey. Resultados: Aproximadamente 100 cepas bacterianas aisladas a partir de alimentos vegetales fueron analizadas para la deteccin de sustancias tipo bacteriocinas. Veinte cepas pertenecientes a Bacillus spp. y al gnero Paenibacillus presentaron actividad antimicrobiana contra B. cereus (16 cepas), B. pumilus, (2 cepas), B. subtilis (14 cepas), P. larvae (10 cepas), P. polymyxa. (7 cepas) y S. aureus (3 cepas). E. coli ATCC 25922 fue resistente a todas las cepas aisladas. En muchos casos para una cepa indicadora dada, algunos aislamientos mostraron una actividad antimicrobiana significativamente mayor (P <0,05) a los dems aislados. La actividad antimicrobiana de los extractos fue sensible a la accin proteoltica de la tripsina. Esto sugerira que las sustancias antimicrobianas producidas corresponderan a bacteriocinas. Dos de las cepas que mostraron un amplio espectro de inhibicin podran ser considerados como agentes antimicrobianos con potenciales aplicaciones en la seguridad alimentaria e implicaciones importantes para el control biolgico de microorganismos patgenos y alterantes.
MARTES 19/10/2010
P212 - 27098 CEPAS HIPERVIRULENTAS DE Escherichia coli O157:H7: DETECCIN EN NEUQUN DE UN LINAJE ASOCIADO A PATOLOGAS MS SEVERAS. PIANCIOLA, LUIS(1); NAVELLO, MARIANO(1); FERNANDEZ, CLAUDIA(1); GONZALEZ, GLADYS(2); DI RUSSO, VIRGINIA(2); AMARILLA, NOEMI(2); MAZZEO, MELINA(1)
(1) Laboratorio Central, (2) Hospital Heller Introduccin: Escherichia coli O157:H7 est asociada a casos espordicos y brotes de diarrea acuosa y sanguinolenta, colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH). Estudios comparativos han revelado una gran diversidad genmica relacionada a la estructura, posicin y contenido gentico de bacterifagos y variabilidad en los genes putativos de virulencia incluyendo los que codifican adhesinas, toxinas Shiga y protenas efectoras. Mediante anlisis de 96 polimorfismos de nucletido nico (SNP) se han identificado 39 genotipos agrupados en 9 clades. La emergencia del clade 8 en brotes recientes ocurridos en EE UU, ha sido relacionada con un elevado nmero de internaciones y casos de SUH. En Argentina el SUH es endmico y en Neuqun la incidencia se mantiene en valores muy altos de 25,0 a 30,0 casos cada 100 000 menores de 5 aos. En un estudio realizado por nuestro grupo en Neuqun entre 2006 y 2008, en una muestra de 908 pacientes con diarrea, encontramos una sorprendente-mente baja proporcin de ellas causadas por E. coli O157:H7. Esto nos permite hipotetizar sobre la circulacin en la zona de clones hipervirulentos que cuando infectan a la poblacin, causan patologas que evolucionan rpidamente a formas graves. Por esta razn, no se encontraran porcentajes significativos de infecciones leves o moderadas causadas por este patgeno. Objetivo: Implementar en el Laboratorio Central de Neuqun, una metodologa de PCR en tiempo real para caracterizar los aislamientos de E. coli O157 por genotipificacin basada en SNP. Investigar en aislamientos provenientes de muestras clnicas, la presencia de cepas del clade 8, caracterizado por su hipervirulencia y capacidad para causar patologas severas. Materiales y mtodos: Se estudiaron aislamientos provenientes de casos clnicos de SUH y de diarreas acuosas y sanguinolentas. Las cepas conservadas en caldo glicerinado a -80 C, se repicaron en agar Mac Conkey Sorbitol. A partir de este crecimiento se realiz la extraccin y purificacin de DNA empleando el equipo QIAamp DNA mini kit (Qiagen, Hilden, Alemania).Se utiliz una PCR en tiempo real que utiliza cebadores en horquilla (hairpin primers) dirigidos contra el SNP 539 ubicado en el marco de lectura ECs2357, caracterstico del Clade 8. Se us un equipo de real time PCR CFX96 (BioRad, Hercules, CA, USA). Resultados: Se estudiaron 40 cepas clnicas, 37 (92,5%) de ellas pertenecieron al clade 8. Conclusiones: se implement una metodologa para detectar SNP, con buenos resultados. Los hallazgos demuestran una circulacin muy predominante del clade 8 hipervirulento. Estos primeros datos podran explicar la particular epidemiologa del SUH en nuestra provincia. Tal vez la presencia casi exclusiva del clade hipervirulento est
P214 - 27184 CALIDAD MICROBIOLGICA DE HIERBAS AROMTICAS: SALVIA (Salvia officinalis L.) Y MENTA (Mentha piperita). DECONTAMINACIN POR RADIACIN GAMMA. MARUCCI, PATRICIA LILIANA; CROCI, CLARA ANA
Universidad Nacional del Sur La mayor parte de la microbiota en muchas especias est integrada por bacterias aerobias mesfilas formadoras de esporas provenientes de la tierra. Las esporas pueden ser ms del 50%
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del recuento de aerobios mesfilos. El porcentaje de bacterias formadoras de esporas anaerobias estrictas suele ser insignificante. Con frecuencia se encuentran coliformes pero no Escherichia coli. Aunque los mohos pueden variar en gran medida con la especia, por lo general predominan Aspergillus glaucus, Aspergillus niger y Penicillium spp. De los mtodos propuestos para la decontaminacin de hierbas aromticas y especias, el tratamiento con radiaciones ionizantes ha demostrado ser el ms eficaz y seguro. La dosis de irradiacin mxima aceptada en la Unin Europea es de 10 kGy, mientras que algunos pases, como Argentina y Estados Unidos, han aumentado ese nivel hasta 30 kGy sin observar efectos perjudiciales. El objetivo de nuestro trabajo fue evaluar el efecto de diferentes dosis de radiacin gamma sobre la decontaminacin microbiana de menta y salvia. Las muestras frescas fueron provistas por Profam Cultivos Alternativos de la localidad de Mdanos, Provincia de Buenos Aires, Argentina. Se secaron en estufa a 37C hasta que alcanzaron un peso constante. Fueron fraccionadas e irradiadas en la Planta de Irradiacin Semi-industrial del Centro Atmico Ezeiza, de la Comisin Nacional de Energa Atmica. Se utiliz una fuente de rayos gamma de cobalto-60 con una velocidad de dosis 0.13 kGy/min en aire (determinado por dosimetra Fricke). Se aplicaron dosis de radiacin de: 1.0, 3.0, 6.0, 10.0 y 30.0 kGy. Se trabaj en paralelo con una muestra control sin irradiar. Se determin el recuento de bacterias aerobias mesfilas y sus esporas, enterobacterias, mohos y levaduras, clostridios sulfito reductores y la presencia de Escherichia coli segn normativas de la International Commission on Microbiological Specifications for Food. En nuestro trabajo la aplicacin de 10 kGy produjo un grado de decontaminacin cercano al lmite de deteccin del mtodo utilizado (< 100 UFC/g) para todos los grupos fisiolgicos buscados. Escherichia coli no estuvo presente en 0.1g en ninguna de las muestras analizadas. Podemos concluir que la dosis recomendada para la decontaminacin de hierbas aromticas estara comprendida entre 6 y 10 kGy, valores que se encuentran en el rango de dosis permitido para el control microbiano en nuestro pas.
pseudomonas se hallaron diferencias entre las fechas de muestreo (p<<0,01) para ambas edades. No se detectaron salmonelas. Se observaron bacterias gram-variable de los gneros Corynebacterium, Arthrobacter y actinomicetes.
Sitio de Muestreo Galpones N muestras RHP (UFC/mL) CT (UFC/mL) Pseudomonas (UFC/mL) EF (UFC/100 mL) Salmonella spp. Bebederos Pollitos 12 2400x10 200 2100x10 67x10 ausencia Bebederos Adultos 12 2200x10 280 1300x10 62x10 ausencia Tanques Pollitos 4 15x10 11 8 420 ausencia Tanques Adultos 4 20x10 10 14x10 230 ausencia
El modelo de bebederos favorecera el elevado recuento de bacterias debido al ingreso de suciedad, pollinaza y polvo en suspensin. Estos resultados podran vincularse con deficiencias en el manejo sanitario de la granja. La ausencia de salmonelas y el predominio de bacterias gram-positivas estaran relacionados con los antibiticos adicionados al agua.
P216 - 27218 EFECTO DE LA INFECCIN DE Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis SOBRE LA PRODUCCIN Y COMPOSICIN QUMICA DE LA LECHE DE CABRAS. ZEDDE, AINARA(1); FIORENTINO, MARIA ANDREA(2); VECHIARELLI, MARIA SOL(1); CIRONE, KARINA(2); MORSELLA, CLAUDIA(2); MENDEZ, LAURA(2); PAOLICCHI, FERNANDO(2,1); GAGLIOSTRO, GERARDO(2)
(1) Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) INTA Introduccin: La paratuberculosis es una enfermedad crnica de los rumiantes producida por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) que afecta a bovinos, ovinos, caprinos y otros pequeos rumiantes. Se caracteriza por provocar enteritis crnica que conlleva prdidas en la produccin. Estudios previos demostraron que Map reduce la produccin de leche en vacas infectadas con y sin signos clnicos, sin efectos claros sobre el contenido de grasa y protenas. La informacin del efecto de la infeccin con Map sobre la produccin y composicin de la leche de caprinos a nivel nacional o internacional es a nuestro conocimiento inexistente. Objetivos: Determinar si existe variacin de la produccin lctea y la composicin qumica de la leche de cabras naturalmente infectadas con Map. Materiales y mtodos: El trabajo se realiz en un tambo caprino de 200 animales de la raza Saanen, situado en la provincia de Buenos Aires con diagnstico previo de paratuberculosis. Se seleccionaron 20 cabras de 3-4 aos de edad, paridas durante el mes de septiembre, las cuales fueron divididas en dos grupos: A) Grupo infectado (n=9), animales con tincin de Ziehl Nielsen (ZN) positivo en materia fecal y ELISAi positivo (Do > 0,35), B) Grupo sano (n=11), animales ZN de materia fecal y ELISAi ambos negativos (Do < 0,17). Ningn animal mostraba signos clnicos de la enfermedad al inicio del trabajo. La duracin del ensayo fue de 15 das. La produccin lctea individual se determin registrando los litros producidos durante el nico ordee de la tarde durante 8 das no consecutivos. Se determin el contenido de grasa butirosa, protenas totales y lactosa a travs de un autoanalizador infrarrojo (MilkoScan 300) en 4 oportunidades. Resultados: El grupo infectado tuvo una disminucin en la produccin de leche que vari del 54,2% al 42% en los diferentes ordees registrados. Al culminar el trabajo el grupo de animales infectados produjo 37,830 L de leche menos que el grupo sano, pero esta diferencia no fue significativa. Para el contenido de grasa, de lactosa y de protenas totales, no se encontr una diferencia significativa entre los grupos infectado (4,72%; 4,94%; 3,92%) y sano (4,17%; 4,10%; 3,45%). Este estudio muestra que la infeccin subclnica con Map en cabras no produce un efecto negativo sobre el tenor graso, de lactosa y de protenas resultado que coincide con estudios realizados en ganado bovino. Por otro lado aunque la diferencia encontrada en la produccin lctea no es estadsticamente significativa, si es importante desde el punto de vista econmico para el productor, ya que una disminucin en la produccin significa una menor ganancia.
P215 - 27216 CALIDAD SANITARIA DEL AGUA DE BEBIDA EN UN CRIADERO INTENSIVO DE POLLOS PARRILLEROS DE LA ZONA DE BAHA BLANCA. ESPERANZA, X; SALERNO, C; RODRIGUEZ GANDUGLIA, H; ARENAZ, F; PEREZ, M
Universidad Nacional del Sur La contaminacin bacteriana del agua de bebida en criaderos intensivos de pollos parrilleros facilita el ingreso de bacterias patgenas, causando diarreas, problemas respiratorios y articulares. Dicha situacin afecta los parmetros productivos, acarreando prdidas econmicas para el productor. Objetivo: determinar la sanidad bacteriolgica del agua de bebida proveniente de una perforacin que abastece al establecimiento. Las investigaciones se realizaron en un criadero a 25 Km de Baha Blanca. Se seleccionaron dos galpones, uno destinado a la cra de pollitos y el otro a pollos adultos, efectundose cuatro muestreos mensuales durante el ao 2008. En todas las fechas se tom una muestra de cada tanque colector y tres muestras de los bebederos. Ambos galpones presentaban bebederos de modelo abierto. Se realizaron recuentos de bacterias heterotrficas (RHP), coliformes totales (CT) en VRBA y pseudomonas en Pseudomonas agar F y P. El recuento de enterococos fecales (EF) se estableci por Nmero Ms Probable (APHA). Para la bsqueda de salmonelas se us caldo selenito y los medios agar Salmonella Shigella y MacConkey. A las colonias sospechosas, se les efectuaron las pruebas de TSI, LIA, SIM, ONPG y ureasa. El diseo estadstico fue un ANOVA doble mixto desbalanceado proporcionalmente. No existe una normativa para el agua de bebida del ganado. Algunos autores proponen posibles parmetros microbiolgicos. En la Tabla se observa que los RHP y los CT superaron las 100 y 50 UFC/mL, respectivamente, segn Waggoner y Good. Se confirm la presencia de P. aeruginosa; segn Watkins, una sola UFC/mL hace al agua no apta para las aves. Los valores de los EF superaron las 5 UFC/100mL propuestas por el Labovet-Reseau Cristal. Hubo diferencias significativas en todos los recuentos entre bebederos y tanques en ambos tipos de galpones (p<<0,01). Slo para CT y
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P217 - 27269 PORTACIN DE Staphylococcus aureus EN MANIPULADORES DE ALIMENTOS. JORDA, GRACIELA BEATRIZ; MARUCCI, RAUL SALOMON; GUIDA, ADRIANA MARCELA; PIRES, PATRICIA
Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales Universidad Nacional de Misiones Las enfermedades transmitidas por los alimentos se encuentran entre los principales problemas de salud pblica en el mundo. El patgeno aislado con mayor frecuencia en casos de intoxicaciones alimentarias es Staphylococcus aureus (S. aureus) Su presencia en los alimentos se asocia a una inadecuada manipulacin o al empleo de materias primas contaminadas. La portacin nasofarngea de S. aureus es comn en la poblacin y para los manipuladores de alimentos y personal hospitalario constituye un serio problema. El objetivo de este estudio fue investigar la presencia de S. aureus en el personal que elabora y expende alimentos en reconocidos restaurantes y panaderas de la ciudad de Posadas y determinar la susceptibilidad a antibiticos en las cepas aisladas. Se obtuvieron 88 muestras de hisopado nasal y manos de manipuladores que intervienen en las distintas etapas del proceso de elaboracin. Las muestras se sembraron en Agar Manitol Salado y se incubaron a 37C por 24 - 48 h. Se identificaron las colonias de S. aureus mediante las pruebas bioqumicas de catalasa, coagulasa, DNAsa y susceptibilidad a la novobiocina. El estudio de susceptibilidad a antibiticos se efectu mediante el mtodo de difusin en agar aplicando la metodologa recomendada por el CLSI. Se utilizaron discos de oxacilina 1 ug, clindamicina 2 ug, vancomicina 30 ug, eritromicina 15 ug y cefoxitina 30 ug, teicoplanina 30 ug, rifampicina 5 ug, gentamicina 10 ug. Del total de las muestras estudiadas resultaron positivas 33 (37,5%), discriminadas de la siguiente manera: 2 en manos y fosas nasales y 31 en fosas nasales solamente. El estudio de susceptibilidad a antibiticos de las 33 cepas de S. aureus aisladas mostr 26 (78,7%) cepas sensibles a todos los antibiticos ensayados y 2 resistentes a eritromicina y clindamicina. Cabe destacar que se encontraron 5 (15%) cepas meticilino resistente (MRSA). De los resultados obtenidos se puede concluir que este microorganismo esta presente en un elevado porcentaje de los manipuladores, lo que puede alterar la calidad de los alimentos y/o producir enfermedades transmitidas por los alimentos cuando se contaminan y se los consume. Los resultados de los estudios realizados se entregaron a los dueos de las empresas, con el objeto de concientizar a su personal de la importancia de la aplicacin de las buenas prcticas de manufactura.
riamente en cada tanque) con un peso promedio inicial de 97.29 21.89 g. La temperatura del agua se mantuvo entre 14-16C. Los cambios de agua, de aproximadamente 15% del volumen del sistema, se realizaron semanalmente. La evaluacin de la calidad sanitaria del sistema se realiz mediante estudios semanales de la calidad microbiolgica y fisicoqumica del agua. Los parmetros microbiolgicos registrados durante el periodo fueron: Recuento de bacterias hetertrofas mesfilas aerobias y anaerobias facultativas totales (RHP), coliformes totales, Escherichia coli y Pseudomonas del grupo fluorescente. Quincenalmente, los peces se pesaron para calcular la tasa especfica de crecimiento (TEC) y el factor de conversin del alimento (FCA). El RHP no super las 2150 UFC/ml en el transcurso de la experiencia, y no se evidenci presencia de coliformes en 100 ml en ninguna de las muestras. A partir de la segunda semana de iniciada la experiencia, en las muestras se detect presencia de Pseudomonas del grupo fluorescente en 100 ml, sin embargo, no se evidenciaron patologas por causa de dicho grupo en los animales. El pH de las aguas se mantuvo en el rango de 7.8 0.1, los valores de amonio no superaron los 0.5 mg/L y los de nitritos presentaron una media de 1 mg/L. La ganancia de peso de los animales fue de 94.73 21.76 g. A lo largo de la experiencia se obtuvo una supervivencia del 95%, sin observarse mortandad debido a enfermedades de origen microbiano. Los indicadores de crecimiento muestran una utilizacin eficiente del alimento en el SCRA: la biomasa se increment en un 200% con un FCA 0.74 y una TEC 0.86. Se puede concluir que el sistema de recirculacin mantiene la calidad del agua y que es adecuado para sustentar la cra de la trucha arco iris en condiciones de sanidad.
219 - 27323 PORTACION DE Staphylococcus aureus COAGULASA POSITIVO EN MANIPULADORES DE ALIMENTOS. GRUMELLI , YANINA(1); ALIVERTI, FLORENCIA(2); BROCARDO, M SILVINA(2); ALIVERTI, VIRGINIA (2); BRUSA, VICTORIA(2); COPES, JULIO A(2); LEOTTA, GERARDO A (2)
(1) FCQYA UCC, (2) LAMA Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata La presencia de Staphylococcus aureus en alimentos representa un riesgo potencial para la salud pblica y su principal factor de virulencia son las enterotoxinas. Entre los alimentos implicados en intoxicaciones causadas por S. aureus se encuentran carnes, lcteos, huevos y vegetales. La contaminacin por este microorganismo ocurre durante y despus del procesamiento de los alimentos. El objetivo del trabajo fue determinar la portacin de S. aureus en las manos de operarios de una empresa productora de alimentos listos para el consumo y caracterizar los aislamientos por tcnicas fenotpicas y genotpicas. Entre el 04/10/2009 y 18/12/2009 se tomaron muestras a todos los operarios de una planta elaboradora de alimentos listos para el consumo (N=120), en diferentes turnos operacionales y en las condiciones de trabajo en que se encontraban los manipuladores. Se utilizaron 250 mL de agua peptonada en bolsas estriles. Las manos de cada operador fueron sumergidas en una bolsa. Las muestras fueron procesadas inmediatamente segn la metodologa para determinar presencia/ausencia (ICMSF, 2000). De cada bolsa se tom 1 mL y se incub en 9 mL de caldo Giolitti Cantoni a 37C por 24 h. Se sembr una ansada de cada caldo en agar Baird Parker incubndose a 37 C por 48 h. De cada placa se realiz el reaislamiento de las colonias tpicas y atpicas en agar Baird Parker. Las colonias aisladas fueron identificadas por pruebas bioqumicas (DNAsa, VP, reduccin de nitrato y fermentacin de maltosa, lactosa, manitol, trehalosa y manosa), ELISA (TECRA Staph, 3M) y PCR (Manfredi, 2008). Sobre un total de 120 muestras analizadas, 46 (38,3%) fueron positivas presuntivas en caldo Giolitti Cantoni, de las cuales 38 (31,6%) presentaron colonias tpicas y/ o atpicas en agar Baird Parker. Se caracteriz un aislamiento de cada muestra. Sobre un total de 24 (20%) aislamientos coagulasa positivo, 22 (18,3%) fueron identificados como S. aureus subespecie aureus. Catorce (11,7%) aislamientos fueron positivos para el pool de enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED y SEE por ELISA, de las cuales 12 (10%) fueron positivas por PCR. Seis aislamientos fueron portadores del gen sea y 6 aislamientos fueron porta-
P218 - 27321 CALIDAD MICROBIOLGICA DEL AGUA EN UN SISTEMA CERRADO DE RECIRCULACIN PARA CULTIVO INTENSIVO DE TRUCHA ARCO IRIS (Oncorhynchus mykiss). MARUCCI, PATRICIA(1); BRUGNONI, LORENA(1,2); SICA, MARIA GABRIELA(1); LOPEZ CAZORLA, ANDREA(1,2); CUBITTO, MARIA AMELIA(1)
(1) Universidad Nacional del Sur, (2) CONICET Los sistemas cerrados de recirculacin de agua para acuicultura (SCRA) presentan un creciente inters debido al enorme potencial que exhiben para reducir los requerimientos de agua en estas actividades, ahorrando hasta un 90% de agua comparado con los sistemas abiertos tradicionales. La piscicultura requiere de una ptima calidad del agua, y los SCRA tienen la ventaja de permitir el control del ambiente y los parmetros fisicoqumicos y microbiolgicos de la misma, obtenindose as un adecuado crecimiento de los animales y una prevencin en sanidad. El objetivo de nuestro trabajo fue evaluar la calidad sanitaria de un SCRA durante un ensayo de cultivo de trucha arco iris. El sistema incluy 2 unidades de tres estanques circulares de auto limpieza cada una, con un volumen de agua de 400 L, dos tanques de fibra de vidrio con biofiltros y dos unidades de luz ultravioleta. El caudal en los estanques de produccin fue de 250 litros/hora y la mxima carga de biomasa fue estimada en 15 kg/m. Se utilizaron animales de 4 meses de edad (25 animales distribuidos aleato-
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dores del gen sec. Durante el perodo de muestreo la empresa elaboradora de alimentos listos para el consumo realiz el anlisis microbiolgico de los productos terminados y todos los alimentos fueron aptos para el consumo (CAA, Art. 151). Sin embargo, el 20% de los manipuladores fue portador de Staphylococcus spp. coagulasa positivo y el 10% fue portador de S. aureus enterotoxignico. Las causas de este hallazgo podran ser desde la buena aplicacin del sistema de HACCP, BPM y POES, hasta un insuficiente muestreo de producto terminado. Se considera adecuado implementar y optimizar el sistema de HACCP, BPM y POES en las empresas elaboradoras de alimentos, como as tambin implementar la deteccin de S. aureus coagulasa positivo en los manipuladores para tomar medidas de intervencin adecuadas y minimizar los riesgos de contaminacin alimentaria por manipuladores.
P220 - 27326 EVALUACIN DE UN SISTEMA DE PCR EN TIEMPO REAL PARA LA DETECCIN DE Escherichia coli O157:H7 A PARTIR DE CARNE BOVINA MOLIDA. BRUSA, VICTORIA(1); PALACIOS, MAURO(2); LOUP, VERONICA(3); COPES, JULIO(1); PINEDA, GLORIA(3); BROCARDO, SILVINA(1); ALIVERTI, VIRGINIA(1); ALIVERTI, FLORENCIA(1); GALLERI, DELFINA(1); PERAL GARCIA, PILAR(4); PELLICER, KAR
(1) LAMA Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata, (2) MEDICATEC, (3) SENACSA Paraguay, (4) IGEVET Universidad Nacional de La Plata-CONICET La infeccin por Escherichia coli O157:H7 es causa de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH) en humanos. El principal reservorio animal de E. coli O157:H7 son los bovinos y la carne bovina molida es una potencial fuente de infeccin. El objetivo de este trabajo fue evaluar un sistema comercial de PCR en tiempo real para la deteccin de E. coli O157:H7. Se contaminaron experimentalmente 50 muestras de carne molida bovina con 10 cepas de E. coli O157:H7 (10, 100 y 1000 UFC/25 g) y 20 cepas de bacterias E. coli noO157:H7 (1000 UFC/25 g). Como tamizaje se utiliz el sistema de PCR en tiempo real R.A.P.I.D. LT Food Security System y el kit comercial E. coli O157:H7 LT Test Kit (Idaho Technologies Inc., Utah, EE.UU.), siguiendo las instrucciones especficas del fabricante. Se determin lmite de deteccin, selectividad y robustez. Todas las muestras contaminadas con diferentes concentraciones de E. coli O157:H7 fueron positivas. El lmite de deteccin dependi de la cepa analizada y la concentracin bacteriana con la que se contaminaron las muestras, el valor mnimo fue 6,1 UFC/25 g. Se obtuvo un 100% de inclusividad y un 100% de exclusividad. Todos los resultados fueron reproducibles al analizar las muestras contaminadas con 10 cepas de E. coli O157:H7 en 3 das consecutivos y por 3 operadores. El sistema evaluado en este trabajo se basa en PCR en tiempo real y utiliza sondas especficas marcadas con fluorgenos para la deteccin de los amplicones generados en el proceso. La tcnica evaluada es una alternativa apropiada para la deteccin de E. coli O157:H7 a partir de carne bovina molida. Si bien este sistema de PCR en tiempo real cuenta con la validacin de AOAC International (AOAC N 100901), en el presente trabajo se demostr su utilidad para la deteccin de cepas de E. coli O157:H7 circulantes en Argentina.
que difcilmente un solo test serolgico logre identificar todos los animales infectados. Esta investigacin tuvo por objetivo comparar los resultados de tres tests aplicados para el diagnstico serolgico de la brucelosis porcina. Fueron comparados la prueba del rosa de Bengala (RB), la prueba del mercaptoetanol (ME), realizado simultneamente a la prueba de aglutinacin en tubos, siendo que la interpretacin fue realizada segn la legislacin brasilea, y la prueba de fijacin de complemento (FC), utilizando la microtcnicas 50% de hemlisis con incubacin a 37 C en la dos fases de la reaccin, considerando positivos los sueros con por lo menos 25 de fijacin de complemento en la dilucin 1/4. Se analizaron 333 muestras de suero de cerdos de un rebao comprobadamente infectados por Brucella suis y 1.100 muestras de suero de cerdos de rebaos libres de la infeccin, obtenidas en un frigorfico. La concordancia en los resultados de los testes fue analizada con el indicador kappa. De los 333 animales del rebao infectado, RB present 276 (82,9%) resultados positivos y 57 (17,1%) resultados negativos, el ME present 265 (79,6%) resultados positivos, 7 (2,1%) inconcluyentes y 61 (18,3%) negativos, y la FC present 271 (81,4%) resultados positivos y 62 (18,6%) resultados negativos. De los 1.100 sueros animales del frigorfico, 8 (0,7%) fueron positivos en el RB y todos fueron negativos en los otros dos tests. En la comparacin entre los resultados del RB con los del ME, el indicador kappa fue 0,97 cuando los resultados inconcluyentes del ME fueron desconsiderados, 0,93 cuando los inconcluyentes fueron considerados positivos y 0,95 cuando ellos fueron considerados negativos, indicando, en las tres situaciones, concordancia ptima entre los testes. En la comparacin entre RB y la FC, fue notado una proporcin de 98,7% de resultados concordantes y un indicador kappa 0,96, mostrando concordancia ptima entre los tests. Cuando la FC fue comparada con el ME, fue verificado kappa 0,98 cuando los inconcluyentes del ME fueron desconsiderados y kappa 0,97 cuando fueron considerados positivos y cuando fueron considerados negativos, o sea, concordancia ptima. Los resultados obtenidos permiten concluir que, en la situacin analizada, todos los tests presentaron un bueno desempeo en el diagnstico serolgico de la brucelosis porcina y que la concordancia entre ellos fue ptima.
P222 - 27330 ESTUDIO PRELIMINAR SOBRE EL AISLAMIENTO Y LA IDENTIFICACIN DE Salmonella enterica EN CERDOS DE LA REPBLICA DEL PARAGUAY. COPES, JULIO(1); CARDOZO, LUZ(2); ALVAREZ, MERCEDES(3); SUZUKI, KUNIAKI(4); GIMENEZ, GUILLERMO(2); WEILER, NATALIE(3); NUEZ, LORENA(2); ZARATE, NOEMI(3); LOPEZ, DALILA(2); LEOTTA, GERARDO(2)
(1) LAMA Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata, (2) FCV UNA PARAGUAY, (3) LCSP MSPBS PARAGUAY, (4) JICA JAPN La salmonelosis es una de las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) ms importantes de Amrica del Sur, que puede ser transmitida por una gran variedad de alimentos. En Paraguay, se observa un aumento en la produccin de cerdos para consumo. El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de Salmonella enterica y sus diferentes serotipos presentes en cerdos en crecimiento de doce distritos de la Repblica del Paraguay. Se recolectaron 1000 muestras de materia fecal en 33 granjas de cerdos en crecimiento. Las muestras fueron pre-enriquecidas en agua peptonada a 37 C durante 24 h, enriquecidas en caldo tetrationato a 42 C por 24 h y finalmente fueron sembradas en medios de cultivo selectivos y diferenciales. Las colonias sospechosas fueron caracterizadas por pruebas bioqumicas y serotipificacin. Se obtuvieron 189 (18,9%) muestras positivas, de las cuales se aislaron 189 cepas de S. enterica. Se identificaron 28 serotipos, entre los que predominaron S. Typhimurium (16%), S. Schwarzengrund (13%), S. Derby (11%), S. Anatum (7%), S. Cerro (7%), S. Stanley (5%), S. Saintpaul (4%) y S. Rissen (4%). De los 12 distritos estudiados, Tablada y Capiata presentaron los porcentajes de aislamiento ms altos (26%). El porcentaje de S. enterica (18,9%) indica una alta contaminacin en los sistemas de explotacin estudiados. Dentro de la totalidad de las granjas, se observaron resultados muy dispares que oscilaron entre 3,3%
P221 - 27328 COMPARACIN ENTRE LOS TESTS ROSA DE BENGALA, 2-MERCAPTOETANOL Y FIJACIN DEL COMPLEMENTO PARA EL DIAGNOSTICO SEROLGICO DE LA BRUCELOSIS PORCINA. MEIRELLES BARTOLI, RAPHAELLA; SILVA, TALITA; BLANKENHEIM, THALITA; SILVA, FELIPE JORGE; MATHIAS, LUIS ANTONIO
Universidad Estatal Paulista - UNESP El diagnstico es una de las herramientas de un programa de combate de la brucelosis animal, pues permite identificar las fuentes de infeccin, evitando su circulacin y reduciendo el riesgo de diseminacin del agente etiolgico. Cuando se trata de la brucelosis porcina, el diagnstico es particularmente problemtico, por-
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y 63,3%. Estos resultados pueden asociarse a deficiencias identificadas en las condiciones edilicias y en la aplicacin de las buenas prcticas de manejo en los establecimientos muestreados. Por lo tanto, es importante continuar con este tipo de estudios, ya que el conocimiento de las caractersticas fenotpicas y genotpicas de las cepas de S. enterica circulantes en el reservorio animal permitir mejorar el sistema de vigilancia de las ETA en la Repblica del Paraguay. Desde el punto de vista de la salud pblica, es interesante desatacar que el serotipo ms frecuentemente aislado fue S. Typhimurium, uno de los serotipos ms prevalentes en casos de ETA en el mundo, como as tambin en Paraguay. Los datos obtenidos en este trabajo son los primeros en la Repblica del Paraguay.
P223 - 27398 AISLAMIENTO DE Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis A PARTIR DE LECHE DE CABRAS NATURALMENTE INFECTADAS. ZEDDE, AINARA(1); FIORENTINO, MARIA ANDREA(2); VECHIARELLI, MARIA SOL(1); CIRONE, KARINA(2); MORSELLA, CLAUDIA(2); MENDEZ, LAURA(2); PAOLICCHI, FERNANDO(1,2)
(1) Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) INTA Introduccin: La paratuberculosis es una enfermedad crnica de los rumiantes producida por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) que afecta a bovinos, ovinos, caprinos y otros pequeos rumiantes. Actualmente es vinculada con la Enfermedad de Crohn en humanos, una inflamacin crnica del intestino, por lo que se la puede considerar una posible zoonosis. La fuente de infeccin para humanos ms importante es la leche, ya que la pasteurizacin no lograra eliminar las clulas de Map viables. Map ha sido detectado en leche cruda y pasteurizada y en quesos de vacas, en diferentes pases. En la India, Map se aisl por cultivo de leche cruda de cabras que tenan signos clnicos de la enfermedad. Sin embargo existen pocos estudios realizados en cabras. Objetivo: Investigar la presencia de Map en leches de cabras serolgicamente positivas. Materiales y mtodos: el trabajo se realizo en un tambo caprino con 200 animales de raza Saanen, situado en la provincia de Buenos Aires, con diagnstico previo de paratuberculosis por cultivo de materia fecal. Se seleccionaron 9 cabras (3-4 aos de edad) con Ziehl Neelsen de materia fecal y ELISAi positivos, sin presencia de signos clnicos de la enfermedad. Se tomaron muestras de materia fecal (MF) y de leche individuales en dos oportunidades separadas por un periodo de tiempo de 30 das, durante el ordee de la tarde. Las muestras de MF se decontaminaron con hexadecilpiridinium (HPC) al 0,75% durante toda la noche. Para las muestras de leche se utilizaron dos mtodos de descontaminacin: 1) con (HPC) al 0,75% durante toda la noche y 2) con cido oxlico (AO) al 5% durante 2 horas. Luego cada muestra de MF y de leche se cultiv en tres tubos: a- Herrold, b- Herrold con micobactina y piruvato, c- Herrold con micobactina, piruvato y antibiticos (HMPA). Se observaron los tubos semanalmente durante 8 meses y las colonias sospechosas fueron confirmadas por PCR IS900. Resultados: De las 9 cabras muestreadas, solo en 4 se aisl Map de materia fecal, en los medios HMP y HMPA. Por otro lado se observaron, en el medio HMP colonias de Map en una de las muestras de leche decontaminada con AO al 5%. Las colonias fueron confirmadas por PCR. Este trabajo demuestra que Map puede ser excretado en la leche de cabras que no presentan signos clnicos de la enfermedad. Esta situacin podra representar un riesgo para la salud pblica en caso de que esta enfermedad sea confirmada como una zoonosis ya que Map resiste las condiciones de pasteurizacin de leche y de maduracin de quesos.
Botulismo es una enfermedad caracterizada por parlisis flccida, causada por neurotoxinas (NTBo) de Clostridium botulinum y en ocasiones por Clostridium baratii y Clostridium butyricum. La forma alimentaria se presenta con alta mortalidad, por lo que resulta una emergencia y debe ser reportada en forma inmediata Se caracteriza por siete tipos de neurotoxinas, de la A a la G. Los tipos A, B, E y eventualmente el F, afectan al humano, C y D a animales y el G se encontr en suelos. Los aspectos fsico qumicos como aw (water activity), pH, temperatura y conservantes pueden inhibir o favorecer el desarrollo de Clostridium botulinum y la produccin de sus toxinas. Los valores y concentraciones de los mismos pueden minimizar los riesgos para la produccin de una toxoinfeccin. El objetivo es evaluar la produccin de toxina botulnica en quesos untables, a diferentes temperaturas, con caractersticas fsico qumicas determinadas, durante un periodo de tiempo establecido. Las caractersticas fsicas qumicas para el ensayo fueron las siguientes: Humedad: 70%, pH: 5,2, aw: 0,98, ClNa: 1,2% Sal fundente: 0,7%. Se conformaron para el ensayo grupos de tres muestras en diferentes condiciones. Un pote se conserv a temperatura ambiente sin modificaciones, los otros dos fueron inoculados con Clostridium botulinum Tipo A, en una concentracin de 15 x 105 UFC/ml, uno se mantuvo a temperatura ambiente y el otro a 4C. Se realizaron ensayos cada 15 das durante 4 meses. El diagnstico se realiz investigando la neurotoxina (NTBo) por bioensayo, a partir de extractos de los alimentos con tripsina y por cultivo en caldo Tarozzi, con el fin de identificar la presencia de esporas en el alimento sin inculo, y su existencia en las muestras inoculadas para darle sustentabilidad al ensayo. Los resultados obtenidos mostraron ausencia de esporas y neurotoxina en las muestras originales (sin inculo) lo que permite inferir sobre buenas prcticas de manufactura. En las muestras inoculadas, no se demostr la formacin de neurotoxina en ninguna de las muestras analizadas y puso en evidencia la presencia del microorganismo y su capacidad toxignica por cultivo y bioensayo, lo que refuerza la potencial situacin de riesgo y la validez de las prueba. Se concluye que las condiciones fsico qumicas del producto del ensayo resultaron favorables para la inhibicin de la produccin de neurotoxina, durante el tiempo del estudio, para esa concentracin inoculada y a las temperaturas probadas. Es necesario realizar futuros ensayos, utilizando mayores concentraciones del inculo y variando parmetros fsicos qumicos, definiendo posibles lmites de riesgo para la produccin de toxina y una potencial toxoinfeccin.
P225 - 27536 DETECCIN DE Campylobacter spp. EN HAMBURGUESAS DE POLLO POR MTODOS BACTERIOLGICOS Y MOLECULARES. HOFFER, ALICIA; CORREA, CRISTINA; FARACE, MARIA
Instituto Nacional Introduccin: Los Campylobacter termotolerantes son reconocidos como una de las causas mas frecuentes de gastroenteritis de origen alimentario. El alimento de mayor riesgo es la carne de ave mal cocida, dado que esta especie es portadora sana del microorganismo en su intestino, contaminando la carcasa durante la faena. Por ello es importante su deteccin en alimentos en forma precoz. Objetivo: comparar mtodos bacteriolgicos y moleculares para la deteccin de Campylobacter spp. en muestras de hamburguesas de pollo de elaboracin artesanal, tomadas al azar de bocas de expendio, a fin de comparar sensibilidad y rapidez de las diferentes metodologas. Materiales y mtodos: Se emple la tcnica del Bacteriological Analytical Manual (March 2001) partiendo de 25 g de hamburguesa. Se le realiz un lavado con solucin fisiolgica estril, y se sembr 10 ml en caldo Bolton con antibiticos, se incub 24 h a 42 C,en microaerofilia. A partir del caldo de enriquecimiento, se sembraron placas de agar mCCDA y agar sangre por filtracin a travs de membrana de nitrocelulosa. Simultneamente se realizaron templados de los lavados y de los caldos de enriquecimiento, utilizando resina Chellex para eliminar inhibidores. Se efectu la extraccin del DNA por calentamiento y se realizaron: una PCR multiplex para Campylobacter jejuni y C. coli y otra para Campylobacter termotolerantes
P224 - 27497 EVALUACIN DEL DESARROLLO DE Clostridium botulinum EN QUESOS UNTABLES, CON CARACTERSTICAS FSICO-QUMICAS DETERMINADAS Y EN DIFERENTES CONDICIONES DE CONSERVACIN. FARACE, MARIA ISABEL (1); CASTELLI, EDGARDO (1); DIAB, ALEJANDRO (2); RAMPONE, HORACIO (2)
(1) Instituto Nacional, (2) SANCOR Cooperativa
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incluyendo a Campylobacter lari, mtodo validado por Josefsen y col. y utilizado en hamburguesas de pollo. Resultados: Se procesaron 39 muestras por bacteriologa, 18 (46%) resultaron positivas. Por caracterizacin bioqumica: 11(61%) result C. jejuni y 7 (39%) C. coli. Por tipificacin molecular (PCR mltiplex): 11 (61%) C. jejuni, 3 (17%) C. coli y 4 (22%) coinfeccin C. jejuni / C. coli. Los estudios de sensibilidad en 25 g mostraron: Lmite de deteccin: por mtodo bacteriolgico: 104 -105ufc/25 g. Por mtodos moleculares: PCR multiplex: 106 ufc/25 g y por PCR termotolerante: 105 ufc/25 g. Conclusiones: Se obtuvo un elevado porcentaje de muestras positivas. El mtodo de filtracin result efectivo para obtener aislamientos puros sin el uso de antibiticos. La PCR arroj resultados significativos, permite identificar la presencia de dos especies en la misma muestra (coinfeccin), cuando fenotpicamente no fue posible por bacteriologa y pruebas bioqumicas. El uso de resina chellex mejor la sensibilidad, en especial en la deteccin previa al enriquecimiento (lavados) con resultados positivos, siendo negativos por mtodos bacteriolgicos. Se adapt la PCR mltiplex, de uso habitual para caracterizacin de aislamientos, al estudio de alimentos. Sin embargo, mostr mayor sensibilidad la PCR que incluye C. lari, siendo adems ms abarcativa
reportan son an ms preocupantes. La falta de datos epidemiolgicos sobre brotes de listeriosis en nuestro pas hace imposible establecer ningn tipo de correlacin entre estos datos con los provenientes de casos clnicos del Ministerio de Salud a nivel municipal o nacional. Sin embargo, en el mismo perodo de tiempo se registraron en Chile dos importantes brotes relacionados al consumo de queso y fiambre, que alcanzaron un nivel importante de difusin en los medios nacionales
P227 - 27624 PREVALENCE OF Salmonella spp. IN THE PRODUCTION CHAIN OF BOVINE MEAT FOR EXPORT. LOPES, JANAINA THAIS; LANDGRAF, MARIZA; DESTRO, MARIA TERESA; FRANCO, BERNADETTE D G M
Universidad de San Pablo, Brasil Introduction and Objective: The bovine meat faces a common problem that is latent zoonoses, caused by pathogenic microorganisms present in animals called reservoirs, in which these microorganisms dont cause any pathology. Once present in the animal, these microorganisms can contaminate the whole meat production chain. Beef is exposed to contamination at all stages of meat processing technology, particularly in operations where it is more manipulated and where no special precautions are taken in relation to Good Hygiene Practices. The most relevant pathogenic microorganism present in animals and man is Salmonella spp, the major causative organism of foodborne diseases in Brazil and other countries. This study aimed to evaluate the prevalence the Salmonella spp, in a bovine meat production chain. Material and Methods: Surface samples were collected from 200 animals in a slaughterhouse that produces bovine meat for export, located in So Paulo, Brazil. The sampling was done at three points of the slaughtering process, i.e, hide right after bleeding (CO), carcass of the same animal after removal of the hide (CA1) and carcass of the same animal after cleaning but before chilling (CA2). Samples were collected using a swab applied to a surface area of 400 cm per sample. The ISO 6579:2002 method was used for detection of Salmonella spp., and PCR, using primers ST11 and ST15, was used for confirmation. Results: Salmonella spp. was found in 31 (15.5%) animals at the point CO, 7 (3.5%) animals at the point CA1 e 6 (3.0%) animals at the point CA2. Two animals were positive at two points simultaneously (CO and CA2), and only one animal was positive at three points simultaneously. Conclusion: Results indicate that Salmonella spp. is present in the studied slaughterhouse, and Good Hygiene Practices are necessary to avoid dissemination of the pathogen in the production chain. Financing: FAPESP; Capes; CNPq.
P226 - 27588 INCREMENTO EN LA DETECCIN DE Listeria monocytogenes EN ALIMENTOS DURANTE EL AO 2009 EN LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. EPSZTEYN, SERGIO; MINGORANCE, SANTIAGO; MELAMED, CELIA; SILVIA, SPIOUSSAS; MAREY, EDITH; STEFANINNI, CARLA; DI LORENZO, LUCILA
Direccin General Higiene y Seguridad Alimentaria -GCBA Objetivos: Establecer comparaciones entre las tasas de prevalencia de Listeria monocytogenes en alimentos en la ciudad de Buenos Aires en diferentes muestreos anuales. Mostrar el incremento detectado de la prevalencia de Listeria monocytogenes en el ao 2009. Remarcar la necesidad de una base de datos epidemiolgicos que permita correlacionar los datos clnicos con los aumentos registrados en los ltimos aos. Materiales y mtodos: Todas las muestras fueron analizadas utilizando el mtodo horizontal para deteccin y enumeracin de Listeria monocytogenes en muestras de alimento ISO 11290-1, con un enriquecimiento primario en Caldo Fraser/2, enriquecimiento secundario en Caldo Fraser y Aislamiento en Agar MOX y Agar Palcam. Las colonias sospechosas se confirmaron por movilidad a 22 C, Tincin de Gram, Hemlisis, Movilidad (Tumbling), Produccin de cido a partir de Ramnosa y Xilosa y Test de Camp. Resultados: durante el perodo comprendido entre el 2006 al 2008 la taza de prevalencia promedio de Listeria monocytogenes fue de 0,13%, se registraron en promedio 2 detecciones por ao y el total de muestras analizadas promedio fue de 1200. Estos datos se mantuvieron sin mostrar grandes variaciones en los muestreos correspondientes a los aos 2006, 2007 y 2008. En el ao 2009, se registr un aumento en la tasa de prevalencia de Listeria monocytogenes que alcanz el 1,04% (casi 10 veces ms alta que la observada en el perodo 2006-2008) con un total de 16 muestras positivas en un total de 1543 muestras analizadas. De las 16 muestras positivas, 4 (25,6%) correspondieron a salchichas, 1 (6,25%) a embutido seco, 2 (12,5%) a sandwiches y 7 (56,25%) a comidas listas para consumo. Todos los aislamientos fueron confirmados por el laboratorio de Bacteriologa especial del ANLIS- INEI Dr. Carlos Malbrn, donde adems fueron subtipificados. Los resultados de los seroagrupamientos determinaron que: un 75% de las cepas aisladas correspondieron al serotipo 1/2b, 12,5% fueron identificados como pertenecientes a la serovariedad 1/2c, el grupo 4b presento la misma prevalencia que el 1/2a (6,25%) las proporciones observadas entre los diferentes serotipos son consistentes con los reportados en el resto del mundo. Si bien es un anlisis rutinario, la bsqueda de Listeria monocytogenes en alimentos slo se lleva a cabo sobre productos listos para ser consumidos (fiambres, salchichas y quesos, sndwiches y alimentos tipo vianda) que, en su gran mayora, no requieren tratamiento trmico que pudiera eliminar o reducir la carga del microorganismo, razn por la cual, los datos que se
P228 - 27632 PELCULAS COMESTIBLES DE QUITOSANO: UN SISTEMA INHIBITORIO PARA CONTROLAR LA MICROFLORA NATIVA Y LA SOBREVIDA DE E. coli O157:H7 INOCULADA. PONCE, ALEJANDRA; ROURA, SARA; MOREIRA, MARIA DEL R
Consejo Nacional de Investigacin Cientfica y Tecnolgica/ CONICET. Grupo de Investigacin en Ingeniera en Alimentos, Facultad de Ingeniera, Universidad Nacional de Mar del Plata Introduccin: La aplicacin de pelculas comestibles con propiedades antimicrobianas tendientes a asegurar la inocuidad y prolongar la vida til del alimento est en pleno desarrollo. Los films de quitosano han mostrado ser efectivos para la preservacin de diferentes alimentos, con una significativa actividad antimicrobiana sobre microorganismos patgenos y deteriorantes. Objetivos: evaluar el efecto antimicrobiano de pelculas comestibles de quitosano sobre la microflora nativa (bacterias mesfilas totales, psicrfilas, hongos y levaduras, lcticas y coliformes) de brcoli mnimamente procesado y almacenado a 5 C durante 20 das. Adems, evaluar el efecto del quitosano sobre la sobrevida y crecimiento de E. coli O157:H7 inoculado en brcoli. Materiales y Mtodos: La aplicacin del film se realiz sumergiendo las flores de brcoli en la solucin de quitosano durante 180 s a 20 C, luego fueron secadas en una cmara con condiciones controladas (aire a 30 C y 60% humedad relativa durante 60 min).
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Para la inoculacin, 100 ul de suspensin bacteriana se aplicaron en forma de spray (concentracin final de E. coli O157:H7 3-4 log UFC/g) sobre las flores de brcoli. La inoculacin se llev a cabo en dos momentos, inmediatamente despus de aplicar el film y 24 h despus de aplicado. El brcoli tratado se coloc en bolsas (3 a 4 flores por bolsa) polimricas de 25 um de espesor (PD960, CRYOVAC) que fueron luego selladas y almacenadas en una cmara refrigerada. Se tomaron muestras a los 0, 4, 7, 10, 14 y 20 das, realizando las determinaciones de las diferentes poblaciones microbianas y del patgeno. Resultados y Conclusiones: Los resultados indican que el uso de coberturas antimicro-bianas de quitosano es una buena alternativa para controlar las diferentes poblaciones microbianas presentes en flores de brcoli mnimamente procesado, mostrando reducciones significativas (2,0-2,5 log) en los recuentos de mesfilas totales y psicrfilas durante todo el almacenamiento. Los hongos y levaduras fueron la microflora dominante al final del almacenamiento. Adems el quitosano mostr un efecto bactericida sobre E. coli endgeno y una significativa reduccin sobre los recuentos de E. coli totales (endgeno y exgeno). En base al concepto de tecnologas de obstculos, el uso de quitosano podra contribuir a mejorar la seguridad de brcoli mnimamente procesado prolongando a su vez su vida til.
(1) Departamento de Industrias, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires (2) CONICET La conservacin de los productos de la pesca es problemtica debido al rpido deterioro que se produce tras su muerte como consecuencia de una serie de mecanismos de degradacin bioqumica y microbiolgica. Para retrasar los mecanismos involucrados en el deterioro de la calidad, se refrigera inmediatamente despus de la captura y luego se aplica algn mtodo de preservacin, en este marco, el uso de antimicrobianos en combinacin con otros factores ha demostrado ser una opcin promisoria para extender la vida til. En base a lo comentado, el objetivo del trabajo fue evaluar el efecto del tiempo de inmersin y de la concentracin de soluciones de lactato de sodio sobre el desarrollo de la flora nativa presente en filetes de merluza. Para ello se realiz un diseo factorial, en dos bloques, siendo la concentracin de lactato y el tiempo de inmersin las variables estudiadas. Los niveles de las mismas fueron: lactato de sodio (0, 2%m/m) y tiempo de inmersin (2, 10 minutos). Se incluy un punto central (lactato de sodio 1%m/m y tiempo de inmersin 6 minutos). Los filetes se cortaron en trozos de 4,5 cm de lado, se sumergieron en las distintas soluciones, se dejaron escurrir 5 minutos bajo flujo laminar, se colocaron en bolsas estriles de polietileno (Nasco Whirl-Pak, USA) y se almacenaron en una cmara de temperatura constante a 3 C durante 7 das. Paralelamente, se almacenaron muestras control sin tratamiento de inmersin. Se realiz el recuento de bacterias psicrfilas en agar PCA incubado a 4 C durante 7 das. La flora proteoltica se enumer en agar Casena al cabo de 48 h de incubacin a 30 C. Los recuentos se realizaron al inicio y al final del almacenamiento. La inmersin de los filetes de merluza en solucin de lactato de sodio 2%m/m redujo significativamente (P < 0,05) tanto el recuento de bacterias psicrfilas como el de proteolticas. El recuento final de los microorganismos no fue afectado significativamente por el tiempo de inmersin. Tampoco se observ una interaccin significativa entre las dos variables. Al cabo de 7 das, el recuento de las bacterias psicrfilas y proteolticas de las muestras que fueron sumergidas en lactato de sodio, aument, en promedio, 3 ciclos logartmicos, mientras que el aumento fue de 4 ciclos en las muestras que no fueron tratadas con el conservante. En las muestras control sin tratamiento de inmersin, los recuentos de bacterias psicrfilas y proteolticas aumentaron 4 y 5 ciclos, respectivamente. Los resultados obtenidos muestran que la inmersin en soluciones de lactato al 2%m/m durante 2 minutos permite disminuir el desarrollo de la flora nativa presente en filetes de merluza y que el uso combinado de refrigeracin y de agentes antimicrobianos permitira extender la vida til de productos de la pesca.
P229 - 27640 PREVALENCE OF O26, O103, O111, O145 AND O157 SHIGA TOXIN-PRODUCING Escherichia coli SEROGROUPS IN REFRIGERATED BEEF AND CHICKEN MEATS SOLD IN SAO PAULO, BRAZIL. ALVARES, PRISCILA PEDULLO; FRANCO, BERNADETTE DGM; DESTRO, MARIA TERESA; LANDGRAF, MARIZA
Universidad de San Pablo, Brasil Introduction: Shiga toxin-producing E. coli (STEC) are foodborne pathogens that can cause since mild or severe and bloody diarrhea to serious complications, such as hemorrhagic colitis, hemolyticuremic syndrome and thrombotic thrombocytopenic purpura. These microorganisms have been associated with numerous outbreaks and several sporadic cases of worldwide infections due to consumption of contaminated food. E. coli O157 is considered the main serogroup involved in disease outbreaks of STEC, however, many cases have been occurred worldwide due to strains of non-O157 STEC, such as O26, O103, O111 and O145. Objectives: The aims of the present research were to determine the prevalence of O26, O103, O111, O145 and O157 STEC serogroups in refrigerated beef and chicken meats sold at retail in Sao Paulo, Brazil; identify the genes that code for the virulence factors stx1, stx2, eaeA and ehxA and detect E. coli O157: H7 strains using uidA, rfbO157 and flicH7 primers. Material and Methods: Samples were collected from 100 beef and 100 chicken meats sold in Sao Paulo butcheries and supermarkets. The detection of E. coli O157 samples were conduced according to the ISO methodology (16654) and to detection nonO157 E. coli was used Surveillance Group for Diseases and Infections of Animals methodology. Suspected isolates were submitted to PCR for virulence factors identification and for search O157:H7 serotype. Results: O157 serogroup was identified in twelve beef and 19 chicken samples, however, none of them produced genes encoding virulence factors of this bacteria group. Therefore, O26, O103, O111, O145 and O157 STEC serogroups were not detected in beef and chicken meat samples. Conclusions: Considering that O26, O103, O111, O145 and O157 STEC serogroups were not isolated, eating beef and chicken meat sold in retail establishments of Sao Paulo cannot be considered a risk for population, and the search of rfbO157 gene can be considered a good marker for the identification of serogroup O157. Although STEC detection has not occurred, the presence of O157 serogroup can serve as an alert for the presence of these microorganisms, since this serogroup is the most involved in cases of STEC foodborne outbreaks. Financing: FAPESP; Capes; CNPq.
P231 - 27698 EFECTO DEL LACTATO DE SODIO Y DEL SORBATO DE POTASIO SOBRE LA INHIBICIN DEL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS DETERIORATIVOS Y PATGENOS PRESENTES EN PRODUCTOS DE LA PESCA. SCHELEGUEDA, LAURA I(1,2); GLIEMMO, MARIA F(1,2); CAMPOS, CARMEN A (1,2)
(1) Departamento de Industrias, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires (2) CONICET El uso de antimicrobianos junto con otros factores de preservacin es empleado para controlar el deterioro de productos de la pesca. El conocimiento del efecto de distintos antimicrobianos sobre la capacidad de inhibicin de la flora permite optimizar su aplicacin. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto del lactato de sodio (LS) y del sorbato de potasio (SK) sobre la inhibicin del crecimiento de microorganismos representativos del deterioro de productos de la pesca. Se eligi Listeria innocua como alternativa al patgeno Listeria monocytogenes, cuyo desarrollo se verifica a temperaturas de refrigeracin, Pseudomonas fluorescens como representante de la microflora gram-negativa presente en el almacenamiento en condiciones aerobias y Lactobacillus plantarum como representante de bacterias cido lcticas, gram-positivas, presente en el almacenamiento bajo atmsferas modificadas. Se determinaron las mnimas concentraciones inhibitorias (MCI) y las mnimas concentraciones bacte-
P230 - 27690 EFECTO DE LA INMERSIN EN SOLUCIN DE LACTATO DE SODIO SOBRE LA FLORA NATIVA DE FILETES DE MERLUZA. SCHELEGUEDA, LAURA I (1,2); GLIEMMO, MARIA F(1,2); CAMPOS, CARMEN A(1,2)
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ricidas (MCB) de LS y de SK a pH 5.5 sobre el crecimiento microbiano, y se evalu la existencia de interacciones entre ambos preservadores mediante la construccin de isobologramas. Se aplic la tcnica de dilucin en microplacas. Se prepararon soluciones de LS y SK de 20000 y 10000 ppm, respectivamente, en caldo Mueller-Hinton. Se les ajust el pH a 5.5 con cido ctrico al 10%m/m y se esterilizaron. Se hicieron sucesivas diluciones de las soluciones con caldo Mueller-Hinton ajustado a pH 5.5. Se adicion un inculo de 105 UFC/ml de cada microorganismo a microplacas conteniendo las distintas diluciones de los antimicrobianos. Las MCI se obtuvieron despus de incubar las microplacas a 30 C, durante 24 horas. Para determinar las MCB, se tomaron 35 l de cada pocillo donde no hubo crecimiento y se sembraron en agar PCA. Se incubaron a 30 C por 48 horas. Los ensayos se realizaron por quintuplicado, obteniendo en todos los casos, iguales resultados. La MCI del LS frente a L. innocua fue de 18000 ppm, mientras que para el SK fue de 4500 ppm. La presencia conjunta de ambos preservadores mostr un comportamiento sinrgico sobre la inhibicin a altas concentraciones de SK, que se vuelve aditivo cuando la concentracin de SK se acerca a las 1000 ppm. Para P. fluorescens, la MCI del LS fue de 13500 ppm, y la del SK, 4500 ppm. El uso conjunto de los conservantes mostr un comportamiento sinrgico en todo el rango de concentraciones ensayado. La MCI del SK para L. plantarum fue de 9000 ppm, y la del LS fue mayor a las 18000 ppm. Adems, no se observ interaccin entre los preservadores. En todos los casos, las MCB fueron mayores a las mximas concentraciones de LS y de SK ensayadas, 18000 y 9000 ppm, respectivamente. Los resultados obtenidos muestran que el uso conjunto de LS y SK, al presentar un comportamiento sinrgico, permite inhibir el desarrollo de L. innocua y P. fluorescens, de esta manera, se emplearan menores concentraciones de cada uno de los antimicrobianos.
patrones de restriccin idnticos, constituidos por catorce bandas cada uno. La similitud entre los perfiles de restriccin de estas cepas sugiere una fuente de contaminacin comn que podra localizarse en algn punto del proceso de produccin: criaderos, frigorficos, plantas de procesamiento o sitios de comercializacin.
P233 - 27739 EVALUACIN DEL EFECTO CITOPTICO EN AISLAMIENTOS DE Bacillus megaterium PROVENIENTES DE MIEL. LOPEZ, ANA C(1); MINNAARD, JESSICA(1); PEREZ, PABLO F(2); ALIPPI, ADRIANA M(1)
(1) CIDEFI-Universidad Nacional de La Plata, (2) Facultad de Ciencias Exactas Universidad Nacional de La Plata La calidad de la miel esta influenciada por la presencia de microorganismos que afectan sus caractersticas. El efecto combinado derivado de las propiedades naturales antimicrobianas de la miel ms la adopcin de prcticas higinicas de procesamiento resulta generalmente en un producto apto para el consumo humano directo, con bajos niveles de contaminacin microbiana. Las bacterias del gnero Bacillus son las especies esporuladas introducidas en la miel por las abejas con mayor frecuencia. Dentro de este grupo, Bacillus megaterium ha sido citado como productor de amilasas, proteasas, citoquinasas, y compuestos con actividad bactericida y se encuentra en diversos hbitats tales como suelo, agua marina, arroz, pescado, miel y alimentos secos. Dado que a travs del consumo de miel se podran ingerir estas bacterias y/o sus productos metablicos, se plante estudiar el efecto citoptico sobre enterocitos humanos en cultivo (lnea Caco-2) de cepas de B. megaterium aisladas de miel. Para ello se utilizaron clulas Caco-2 cultivadas durante 15 das a 37 C en 5% de CO2 en medio DMEM suplementado con 10 % de suero fetal bovino en placas de 24 fosas. El desprendimiento se evalu, mediante tincin con cristal violeta de las clulas remanentes luego de la incubacin de las monocapas con los sobrenadantes de cultivo previamente filtrados. Asimismo, se infectaron las monocapas con suspensiones bacterianas en ausencia de sobrenadantes. Los resultados se analizaron utilizando el test de Student. Se evaluaron los sobrenadantes de 50 cepas de B. mega-terium de los cuales el 18% desprendi el 100% de la monocapa de enterocitos y 8% desprendi menos de la mitad de la monocapa; mientras el resto de las cepas no produjo alteracin de la misma. Con las cepas que provocaron el mayor desprendimiento se evalu la dosis respuesta (dosis de sobrenadante vs. porcentaje de desprendimiento) observndose una respuesta asinttica en la mayora de los casos. Se observ una alta dependencia del efecto biolgico con la concentracin. La infeccin de las monocapas dio como resultado que slo una cepa desprendi la totalidad de la monocapa para cultivos de 3 hs de desarrollo y ninguna desprendi los enterocitos para cultivos de 16 hs de desarrollo. Tambin se evalu el ttulo de hemlisis de glbulos rojos de origen animal con los sobrenadantes filtrados incubando 2 hs a 37 C y 16 hs a 4 C. El ttulo vari desde 4 hasta 16 luego de la incubacin a 37 C. Todos los ttulos aumentaron una dilucin luego de la incubacin a 4C. Los resultados demuestran que los factores extracelulares de B. megaterium poseen efecto citoptico, as como las bacterias en estado vegetativo (aunque en menor proporcin). Este es el primer trabajo donde se estudi el efecto citoptico sobre enterocitos en cultivo de este microorganismo. Esta trabajo fue subsidiado por la ANPCyT.
P232 - 27729 COMPARACIN DE PERFILES DE RESTRICCIN DE ADN DE CEPAS DE Salmonella anatum AISLADAS DE EMBUTIDOS FRESCOS EN SAN LUIS, ARGENTINA. FAVIER, GABRIELA; LAZARTE OTERO, VALERIA; LUCERO ESTRADA, CECILIA; SALINAS, ANGEL; ISAGUIRRE, ANDREA; VELAZQUEZ, LIDIA
Universidad Nacional de San Luis La electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) es una tcnica muy til y valiosa para la subtipificacin molecular de microorganismos. Permite comparar patrones de restriccin de ADN y as establecer con mucha precisin las relaciones clonales entre aislamientos de la misma especie bacteriana. El objetivo de este trabajo fue comparar los perfiles de restriccin de ADN y determinar la posible relacin gentica entre cepas de S. anatum aisladas de embutidos frescos destinados al consumo humano. Se utiliz PFGE para la subtipificacin de cinco cepas de S. anatum aisladas de 90 chorizos destinados al consumo en la ciudad de San Luis, Argentina. La extraccin de ADN cromosomal se realiz segn el protocolo estandarizado de PulseNet (Centers for Disease Control and Prevention, CDC, EE.UU.), utilizando la cepa estndar Salmonella braenderup H9812. Las cepas fueron aisladas en agar Mueller Hinton y resuspendidas en buffer TE (10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8), ajustando la concentracin a DO 610: 1,00. Un volumen de 200 l de cada una de las suspensiones fue mezclado con igual volumen de agarosa Seakem Gold (Cambrex) al 1% (p/v) y colocado en moldes. Una vez formados los moldes de agarosa se incubaron en buffer de lisis (20 mg/ml proteinasa K, 50 mM tris-EDTA, y 1% de lauril sarcosina, pH 8) a 37 C por 18 h. Los moldes fueron lavados cuatro veces con agua ultrapura estril y buffer TE. Trozos de estos moldes, de aproximadamente 2 mm de espesor, fueron digeridos con 10 U de la enzima de restriccin XbaI (Fermentas) durante 2 h a 37C y sembrados en gel de agarosa para PFGE al 1 % (BioRad) en buffer TBE 0,5 X (45 mM Tris - borato, 1 mM EDTA). La electroforesis se realiz en equipo CHEF DR III (BioRad) a 6 V/cm y 14 C, por 20 h con tiempo de pulso inicial: 2,2 s y tiempo de pulso final: 63,8 s. La tincin del gel fue realizada con Gel Red (Biotium) 3 X en agua ultrapura por 30 min y se visualiz en transiluminador con luz ultravioleta (UVP). Las cepas locales de S. anatum mostraron
P234 - 27771 CAPACIDAD PROTEOLTICA DE LEVADURAS Y BACTERIAS CIDO LCTICAS PRESENTES EN PRODUCTOS LCTEOS Y EMBUTIDOS DE LA REGIN PATAGNICA. RUSSELL WHITE, KAREN; CARRASCO, MARTA; SIMONETTA, ARTURO
Facultad de Ingeniera Qumica UNL Las caractersticas sensoriales que se generan en los quesos durante el proceso de maduracin, tienen estrecha relacin con la actividad bioqumica de la microbiota presente en el interior de la masa casearia. Estos microorganismos participan en la maduracin de los quesos por metabolizar el cido lctico, fermentar
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la lactosa y producir proteasas y lipasas caractersticas. Es necesario, por lo tanto, conocer la microbiota participante en la maduracin de los quesos, identificando las bacterias lcticas provenientes del fermento y las levaduras que pudieran estar presentes en la materia prima, o ser producto de la contaminacin ambiental. El conocimiento de los aspectos bioqumicos de cada grupo microbiano y de cada cepa en particular permitir utilizarlas, a ellas y/o a sus sistemas enzimticos, con los fines tecnolgicos ms adecuados. El objetivo de este trabajo ha sido conocer la biota tpica de levaduras presentes en leches ovinas, quesos y embutidos producidos en la regin patagnica, caracterizarlas y estudiar las posibles interacciones con las bacterias lcticas presentes en fermentos artesanales. Se estudiaron 37 aislados de levaduras, determinando su distribucin taxonmica, y 94 de bacterias cido lcticas. En cultivos puros y mixtos (cocultivos), se determin cualitativamente la actividad proteoltica en Agar Leche, y la actividad proteoltica exocelular sobre casena total y sobre las fracciones a y b-casena, utilizando el mtodo electrofortico Tricina-SDS-PAGE. Entre los aislados de levaduras se detect un neto predominio del gnero Candida. Los resultados del estudio cualitativo de la actividad proteoltica indicaron que todas las levaduras poseen capacidad para hidrolizar la casena de leche, generando halos de protelisis de 4,3 a 8 cm de dimetro, mientras que slo un 12,8% de las bacterias lcticas presentaron esta actividad. La hidrlisis de los patrones casenicos evaluada mediante electroforesis mostr un comportamiento heterogneo. Si bien todas las levaduras fueron capaces de hidrolizar totalmente la casena patrn, slo una hidroliz de manera total los patrones de a y -casena; el resto dej bandas que corresponderan a pptidos de menor peso molecular, resultantes de la degradacin slo parcial de a y -casena luego de 15 horas de contacto con los sobrenadantes libres de clulas. A diferencia de las levaduras, todas las bacterias lcticas tuvieron un comportamiento similar entre s. La mayora hidroliz la casena total, escasamente la a-casena y medianamente la casena. Cuando se trabaj con cultivos mixtos, la actividad proteoltica result inferior comparada con la de las levaduras, pero igual o levemente superior a la de las bacterias lcticas ensayadas. Estos resultados indican que es indispensable conocer la biota levaduriforme participante en la maduracin de cada variedad de queso, para poder predecir su participacin en las caractersticas estructurales y sensoriales de las mismas.
evaluar los resultados obtenidos. Posteriormente se realizaron muestreos en forma sorpresiva para evaluar el cumplimiento de las normas de higiene. La tcnica utilizada consisti en frotar hisopos estriles en las palmas de las manos de los operarios, los que posteriormente se transfirieron a tubos con buffer Letheen. De dichos tubos se tomaron alcuotas de 1 ml y se sembraron en placas Petrifilm 3 M para recuento de coliformes totales. Se incubaron por 24 hs a 37 C. Se realiz el recuento, considerando el rea promedio de las manos de 220 cm (calculado para los operarios de la planta). Los resultados fueron evaluados en el Laboratorio de Control de Calidad de COFRA, Misiones (1) y el laboratorio de Micologa, Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones (2). Para evaluar la efectividad de la capacitacin y de la aplicacin de la tcnica de lavado se aplic un test de comparacin de medias pareadas de Student. Se observaron diferencias estadsticamente significativas en los resultados del recuento de coliformes totales antes y despus de la capacitacin en BPM, sto demuestra la efectividad de la concientizacin del personal para una buena calidad alimentaria (p< 0,05). Al evaluar las diferencias en los recuentos de coliformes totales en manos lavadas de los operarios antes y despus del adiestramiento en la tcnica correcta para esta prctica se encontraron diferencias estadsticamente significativas (p< 0,05) por lo que debemos insistir en la constante capacitacin del personal para garantizar la calidad de los productos elaborados. Podemos concluir que la capacitacin fue efectiva, ya que tanto la aplicacin de las BPM y de la tcnica de lavado de manos se mantienen en el tiempo. El involucrar activamente al personal en este estudio logr que monitoreos sucesivos arrojen valores similares en cuanto al decrecimiento de la carga microbiana. Adems se constituye en un parmetro indicador de la concientizacin del personal y la valoracin de las BPM.
P236 - 27833 USO DE UN CONTROL DE AMPLIFICACIN INTERNO EN LA DETECCIN DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA POR PCR MLTIPLE, EN HECES DE ORIGEN PEDITRICO. SALINAS, AG(1); ZARATE, JM (2); CHIALVA, C(2); JURI AYUB, M(2); LUCERO ESTRADA, C(1); CHINEN, I (3); ESCUDERO, ME(1)
(1) Microbiologa General, (2) Area Biologa Molecular, FQBF, Universidad Nacional de San Luis, (3) Servicio Fisiopatogenia, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, INEI-ANLIS, Dr. Carlos G. Malbrn. Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) causa colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH) en la poblacin infantil de nuestro pas. El empleo de la reaccin en cadena de polimerasa (PCR) para la deteccin de este microorganismo directamente en heces de los pacientes presenta la ventaja, sobre las tcnicas de cultivo, de acortar los tiempos de diagnstico permitiendo adoptar medidas teraputicas y epidemiolgicas ms efectivas. Por la naturaleza de la muestra, se corre el riesgo de obtener falsos resultados negativos debido a inhibicin de la PCR. El uso de un control de amplificacin interno (CAI) resulta til para diferenciar entre resultados negativos verdaderos y falsos. CAI es una secuencia de cido nucleico adicionada a la mezcla de reaccin para PCR con el objeto de ser co-amplificada en el mismo tubo por el par de cebadores dirigidos a la secuencia de ADN blanco y que se distingue de sta por una diferencia en el tamao molecular detectable por electroforesis. En este trabajo se propuso la deteccin de STEC directamente en heces peditricas mediante el protocolo de PCR mltiple (PCRm) para los genes stx1, stx2 y rfbO157, diseado en el Servicio Fisiopatogenia de INEI-ANLIS (Buenos Aires, Argentina) utilizando un CAI de 280 pb, correspondiente a una delecin interna de la secuencia stx2 original de 349 pb, y flanqueada por el mismo par de cebadores. Se contamin 1 g de heces de nio sano con 10E9 y 10E7 ufc/ml de la cepa local (CL) E. coli O157:H7 stx2+ aislada de un paciente peditrico con SUH, en 9 ml de caldo EC. Se realiz extraccin de ADN por el mtodo de boiling y se prepar la mezcla de reaccin incorporando CAI en concentracin 0,143 pg/l. El mismo protocolo fue aplicado en heces no conta-
P235 - 27783 LA MICROBIOLOGIA COMO HERRAMIENTA DE FORMACIN AL PERSONAL DE UN FRIGORFICO. MONITOREO DE SU APLICABILIDAD. JAQUET, BELEN(1;2); MEZA THOMAS, RICARDO(1); MOREIRA, MARCELO(1); VEDOYA, CELINA(2); MEDVEDEFF, MARTHA(2); THEA, ANA(2)
(1) Laboratorio de Control de Calidad de COFRA, Misiones, (2) Laboratorio de Micologa, Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y Naturales Universidad de MIsiones Los centros para el control de enfermedades estiman que alrededor de 5.000 personas mueren cada ao por enfermedades transmitidas por alimentos. Un hecho comn en todos estos casos es el deficiente lavado de manos. En el cumplimiento de las buenas prcticas de manufactura (BPM) y en la formacin del personal manipulador, es bsico hacerlos partcipes activos del monitoreo y aplicacin de los conocimientos adquiridos. El trabajo se realiz con el fin de concientizar y evaluar a los operarios de la Cooperativa Frigorfica L. N. Alem (COFRA), sobre la importancia del correcto lavado de manos como indicador de higiene, a travs de la aplicacin de tcnicas microbiolgicas y monitoreo constante. Para ello, se dict un curso obligatorio a todo el personal de planta sobre BPM y manipulacin de alimentos. Se resalt la importancia del lavado de manos y tcnica correcta de hacerlo. Se efectuaron muestreos de manos al personal de desposte y empaque (sectores claves para la contaminacin), mediante hisopados de las mismas antes y despus de la capacitacin en BPM, como tambin antes y despus del adiestramiento en la tcnica de lavado de manos. Se explic a los operarios la tcnica microbiolgica aplicada, para que ellos mismos puedan
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minadas, y en diluciones de CL y de la cepa de referencia E. coli O157:H7 EDL 933 stx1+/stx2+. El lmite de deteccin de E. coli O157:H7 fue de 1,3 x 10E4 ufc/25 l de reaccin de PCR en heces y de 13 ufc/25 l de reaccin de PCR en las cepas puras. Cuando la secuencia blanco (SB) se amplific pero CAI no, se asumi que SB estaba presente en mayor proporcin que el CAI y el resultado fue vlido. Cuando SB no se amplific pero el CAI s, se asumi que SB no estaba presente o lo estaba en menor proporcin que el CAI. Para evitar falsos negativos, se recomienda usar el CAI en concentracin mnima para que en la competencia gane SB, y suficiente para ser detectado cuando SB no est presente. Cuando el CAI y SB no son amplificados, se asume que la muestra contiene inhibidores de la reaccin, existe una incorrecta preparacin de la mezcla de reactivos o mal funcionamiento del equipamiento, y por lo tanto el ensayo no es vlido. La deteccin de E. coli STEC se puede realizar por PCRm, directamente en heces de pacientes peditricos, en un tiempo no mayor a 4 h, utilizando CAI en reaccin competitiva con el ADN blanco para evitar el riesgo de informar falsos resultados negativos.
Tratamiento
Aves Materia Sist. infectadas fecal reproductor % % % 0 80 100 0 80 60 0 0 60
Intestino Higado
Bazo
Corazn
% 0 40 60
% 0 60 20
% 0 20 60
% 0 40 60
A B C
Estos datos podran indicar que el fago disminuye el desarrollo de la infeccin bacteriana y permite la ovoposicin normal
P238 - 27865 YERBA MATE EN SAQUITOS: CALIDAD MICROBIOLGICA. CASTRILLO, MARIA LORENA; TAYAGUI, AYELEN; JERKE, GLADIS; HORIANSKI, MARTA AURELIA; MARTINEZ, MIRIAN LILIANA; SERPP, CARINA INES
Laboratorio de Microbiologa, Mdulo de Bioqumica y Farmacia, Facultad de Ciencias Exactas Qumicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones, Posadas, Misiones, Argentina La yerba mate en saquitos es la yerba mate molida y envasada en bolsitas o saquitos. Es el producto utilizado para preparar el mate cocido, la infusin que se consume en taza. La elaboracin del mate cocido en saquitos es prcticamente igual a la de la yerba mate comn, con la diferencia de que en la molienda se eliminan el polvo y los palitos, clasificando y procesando solamente las hojas de yerba mate. Los alimentos deshidratados o secados como yerba mate, no suelen ser estriles; sin embargo, debido a su baja actividad acuosa pueden permanecer estables microbiolgicamente durante mucho tiempo, slo cuando se humedecen podra comenzar la alteracin. Por lo general el rango de humedad, temperatura e higiene empleados en el procesamiento de vegetales como yerba mate varan ampliamente, generando condiciones favorables para la proliferacin de hongos y bacterias contaminantes; los cuales pueden modificar su calidad bromatolgica, microbiolgica y comercial. La calidad microbiolgica de los productos alimenticios se determina estableciendo lmites cuantitativos para los parmetros microbianos evaluados. En Argentina no contamos con normas que establezcan el perfil microbiolgico para yerba mate en saquitos. El objetivo del presente trabajo fue realizar el control de la calidad microbiolgica de muestras de yerba mate en saquitos obtenidas de diferentes comercios cntricos y perifricos de la ciudad de Posadas, Misiones. Se analizaron un total de 22 muestras de yerba mate en saquitos. El perfil microbiolgico se realiz segn la Norma IRAM 20517:2007 el cual incluye: recuento de bacterias aerobias mesfilas totales (BAMT), recuento de hongos y levaduras (RHL) recuento de coliformes totales (RCT), recuento de coliformes fecales (RCF), y deteccin de Escherichia coli. Los resultados de los recuentos microbianos obtenidos se sometieron a anlisis estadsticos hallndose los valores que se muestran en la tabla:
BAMT (UFC/g) Promedio 11000 Mediana 640 Valor mximo 140000 Valor mnimo 23 RHL (UFC/g) 2400 1200 21000 250 RCT (NMP/g) 450 15 1100 <3 RCF (NMP/g) 3.6 3.6 3.6 <3 Deteccin de E. coli
P237 - 27862 EVALUACIN DE UN BACTERIFAGO PARA LA PREVENCIN DE Salmonella gallinarum EN AVES DE POSTURA. PROSDOCIMO, F; ANSELMO, R; OLIVETTO, N; GOMEZ, I; VIORA, S; DE FRANCESCHI, M; BARRIOS, H
Universidad Nacional de Lujan El control y prevencin de especies de Salmonella tficas y paratificas es de gran importancia en la produccin avcola. Los medicamentos profilcticos y teraputicos ms usados son los antibiticos con la precaucin de no comercializar la produccin cuando son aplicados. Existen evidencias que estos incrementaron la resistencia de cepas bacterianas, siendo actualmente restringido su uso por las consecuencias en salud pblica. Como alternativa natural y preservando la seguridad de los alimentos se plantea el uso de bacterifagos en avicultura, por ser especficos para una bacteria, abundan en el ambiente y son inofensivos para humanos y animales. Este trabajo consisti en evaluar el efecto de un bacterifago en aves de postura infectadas experimentalmente con Salmonella gallinarum (SG). De la vescula biliar de una gallina ponedora con tifosis se aisl y se identific bioqumica y antignicamente SG. La materia fecal de esa ave se coloc en caldo nutritivo y se inocul con el cultivo de SG, incubando a 35C por una noche. Una alcuota del enriquecimiento se descontamin con cloroformo, se agit y conserv a 4 C. La presencia de fagos se comprob por el mtodo de la doble capa de agar y se conserv en caldo nutritivo ms cloroformo. Para evaluar la eficacia del fago se utilizaron en cada tratamiento: 1 gallina de color de una granja comercial; 2 gallos y 2 gallinas blancas de 24 semanas criadas experimentalmente sin vacunar. Todas las aves se criaron en jaulas experimentales y estaban produciendo huevos. El tratamiento A testigo no recibi desafo; el tratamiento B fue inoculado con 0,1ml x 109 unidades formadoras de placas (ufp) del fago y luego de 2 horas se infect con 0,1ml de 4,4x103 unidades formadoras de colonias (ufc) de SGINTA 90 y el tratamiento C fue infectado con 0,1 ml de 4,4 103 ufc de SG. Diariamente se registr la postura y a los 10 das de la inoculacin se necropsiaron y se tomaron muestras de distintos rganos y materia fecal para aislar SG con la marcha bacteriolgica convencional. En el tratamiento C la infeccin alcanz el 100% y en el tratamiento B solamente el 80%. Los testigos resultaron negativos. El da posterior a la infeccin las gallinas del tratamiento C dejaron de poner huevos, en cambio las dems continuaron con su ovoposicin. Al realizar las necropsias las aves del tratamiento B no presentaron sintomatologa y no se aisl SG en sus rganos reproductivos, en cambio las del tratamiento C no evidenciaron formacin de huevos, slo una present un huevo con deficiencias de formacin de cscara. En el intestino, corazn y bazo se encontr un menor porcentaje de aislamientos en el tratamiento B lo contrario ocurri en hgado. En ambos tratamientos se aisl SG en materia fecal.
negativo negativo negativo negativo
Comparando estos resultados con los obtenidos en estudios locales previos de control de calidad microbiolgica en yerba mate elaborada, se observan valores similares en todos los parmetros evaluados, no evidencindose diferencias significativas. El rango de contaminacin microbiolgica de cada uno de los parmetros analizados present valores del mismo orden de magnitud.
P239 - 27868 CALIDAD HIGINICO-SANITARIA EN LA CADENA DE PRODUCCIN DE UNA PLANTA ELABORADORA DE PASTAS FRESCAS RELLENAS PASTEURIZADAS. GARCIA,
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MARIA JOSE; GAMBERO, MARIA LAURA; LOMBARDO, DANIELA; FRIGERIO, CECILIA; BETTERA, SUSANA
Universidad Nacional de Ro Cuarto El procedimiento bsico de elaboracin de pastas alimenticias incluye la preparacin de una mezcla amasada de derivados del trigo con agua, que luego se procesa para obtener las dimensiones y formas finales del producto. Esta mezcla constituye un medio adecuado para la multiplicacin microbiana. El procedimiento de pasteurizacin se realiza con el fin de disminuir el nmero de microorganismos, eliminar los patgenos y aumentar el periodo de vida til. Este procedimiento tiene particular importancia cuando se trata de pastas frescas rellenas. El objetivo de este trabajo fue analizar la carga microbiana de pastas frescas rellenas pasteurizadas, a lo largo de la cadena de produccin, para determinar posibles fallas en procedimientos que pongan en riesgo la calidad higinico-sanitaria del producto terminado. Se realiz la bsqueda de microorganismos indicadores de calidad higinica: recuento de microorganismos aerobios totales (RAT) (ISO 4833:2003), enterobacterias (ISO 7402:1993) y anaerobios sulfito reductores (APHA). En las muestras correspondientes al producto terminado, se realiz adems el recuento de hongos y levaduras (H y L) (ISO 7954:1987) y de Staphylococcus aureus (UNEEN ISO 6888:1999) para verificar el cumplimiento de las especificaciones microbiolgicas establecidas por el Cdigo Alimentario Argentino (CAA). Se tomaron 90 muestras, correspondientes a dos lneas de produccin: ravioles de pollo - verdura y capellettis de carne, en cinco etapas de produccin: antes y despus de pasteurizado, preenfriado, salida del enfriador y producto terminado. Antes de la pasteurizacin del producto, se observ que los valores de RAT oscilaron entre 2 x 106 y 8 x 107 u.f.c./g . La pasteurizacin disminuy el RAT en todos los casos, pero slo en el 33% de las muestras hasta niveles inferiores a 1 x 105 u.f.c/ g. El 44% de las muestras antes de pasteurizar presentaron recuentos de enterobacterias en valores que superaron 1 x 103 u.f.c./g .Luego del tratamiento trmico no se observ desarrollo en ningn caso. El 33% de las muestras present recuentos de anaerobios sulfito reductores mayores a 103 ufc/g. En la mitad de las muestras la pasteurizacin redujo el recuento de este indicador hasta los valores permitidos por el CAA. El 67% de las muestras correspondientes al producto terminado fueron aptas para consumo. El 44% evidenci crecimiento de H y L pero slo el 5% super el lmite permitido. No se observ desarrollo de S. aureus en ningn caso. De acuerdo con los resultados obtenidos podemos concluir que la aplicacin del proceso de pasteurizacin permiti obtener productos de adecuada calidad microbiolgica para el consumo y que slo con un seguimiento continuo estricto de las condiciones de procesamiento, manipulacin y almacenamiento sumado a un control microbiolgico peridico de las pastas frescas rellenas es posible garantizar la produccin de un alimento inocuo.
che no pasteurizada, brotes de alfalfa, lechuga y sidra. Los brotes recientemente producidos por el consumo de hortalizas contaminadas por microorganismos patgenos, demuestran la vulnerabilidad de estos productos a la contaminacin. El consumo de hortalizas se ha incrementado a raz de las recomendaciones mdicas que insisten en la necesidad de comer ms hortalizas para prevenir enfermedades y para mejorar la salud personal. Objetivos: debido a la patogenicidad y morbilidad de VTEC para el hombre, y especialmente para la poblacin infantil, y conociendo que las hortalizas pueden estar contaminadas, nos propusimos investigar la presencia de VTEC en hortalizas de consumo directo y caracterizar por tcnicas de biologa molecular las cepas VTEC aisladas. Materiales y Mtodos: se trabaj con 18 muestras de lechuga, repollo y remolacha procedentes de quintas de 2 ciudades de la Provincia de Buenos Aires. Se tomaron 10 gr de cada muestra y se cultivaron en 90 ml de agua de peptona (37 C durante 18 hs con agitacin). De cada cultivo de enriquecimiento se tomaron 1750l que se centrifugaron a 2300 rpm, 4 min. Se tomaron 1350l del sobrenadante y se centrifugaron a 13000 rpm, 3 min. El pellet se resuspendi en 34l de agua bidestilada y 250 l de chellex, se incub 30 min a 65 C, se agit con vrtex 10 seg y se hirvi 10 min para la extraccin del ADN. Esta suspensin se utiliz para la deteccin de genes de virulencia de VTEC mediante la tcnica de PCR-multiplex para la deteccin simultnea de los genes vt1-vt2. Los productos de amplificacin de PCR se analizaron por electroforesis en geles de agarosa. Resultados: una muestra de repollo y una de remolacha fueron positivas para vt1-vt2. La materia fecal de animales se usa como fertilizante del suelo mejorando la calidad a nivel nutricional de las hortalizas. La aplicacin de materia fecal sin tratar puede presentar un riesgo de contaminacin de hortalizas de consumo directo. Existe documentacin limitada sobre la contaminacin de hortalizas debido a la aplicacin directa de materia fecal o abono derivado a los campos sembrados con stas. Estos resultados representan un alerta en las prcticas de fertilizacin del suelo de las huertas e higiene y/o coccin de hortalizas ya que pueden ser potenciales vehculos de patgenos que implican un riesgo para la salud pblica.
P241 - 27883 EVOLUCIN DEL RECUENTO DE Clostridium GASGENOS, DESDE LA LECHE HASTA EL QUESO MADURADO GIECO, A; GERVASONI, L; DELLA GIUSTINA, Z; ETCHEVERS, F; LOPEZ, G
FCA Universidad Nacional de Entre Ros Existen productores lecheros entrerrianos que producen quesos de pasta dura y uno de los problemas comunes es la hinchazn tarda causada por ciertos microorganismos que actan cuando las condiciones del medio son apropiadas. Se atribuye como principal responsable a las esporas de Clostridium, dentro de ellos C. butyiricum y C. tyrobutyricum; que desarrollan produciendo deformacin de las hormas y prdidas de la produccin. El mayor riesgo de este tipo de bacterias est dado por su aptitud para esporular que los hace resistentes a la pasteurizacin, para luego germinar en los quesos maduros, donde su actividad degradativa sobre los lactatos produce cido butrico, alcohol, dixido de carbono e hidrgeno; con la consiguiente formacin de grandes ojos de forma irregular, cavernas o esfolias y aroma o sabor desagradables. El objetivo del trabajo fue determinar la evolucin del recuento de Clostridium butyricum y C. tyrobutyricum desde la leche hasta los quesos madurados. Iniciamos seleccionando el establecimiento proveedor de leche, bajo determinadas pautas. Efectuada la seleccin se realizaron las elaboraciones con leche entera y descremada (total 24) y su correspondiente maduracin. Se fij un plan de muestreo en 8 puntos: leche cruda (LC), leche pasteurizada (LP), cuajada cortada (S+C), masa de queso y quesos al 1 da, al 1 mes, a los 3 meses y a los 6 meses de maduracin. A cada muestra se le realizaron: recuento de Clostridium totales, C. butyricum y C. tyrobutyricum por mtodo nmero ms probable (NMP) en Weirzirl modificado por Annibaldi; y sobre los quesos madurados se realiz evaluacin organolptica. Los resultados se procesaron estadsticamente, previa con-
P240 - 27878 DETECCIN DE Escherichia coli VEROCITOTOXIGNICA EN HORTALIZAS DE CONSUMO DIRECTO. COLELLO, R(1,2); PADOLA, NL(1,2); ETCHEVERRIA, AI(1,2); PARMA, AE(1,2)
(1)Lab de Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV-UNCPBA. (2) CICPBA Escherichia coli verocitotoxignica (VTEC) es considerado un patgeno emergente transmitido por alimentos, asociado a casos espordicos o brotes de diarrea, colitis hemorrgica o sndrome urmico hemoltico. La principal caracterstica de VTEC es su capacidad de producir y liberar verocitotoxinas (VT1 y VT2). Presenta tambin otros factores de virulencia como la intimina, codificada en el gen eae que media la adherencia de la bacteria al enterocito y un megaplsmido que contiene los genes para la sntesis de enterohemolisina (codificada en el gen ehxA), fimbrias de adhesin y adhesina autoaglutinante codificada por el gen saa. La mayora de los casos de infeccin en el hombre se produce por ingestin de alimentos y agua contaminados. Los alimentos comnmente asociados a brotes son: carne picada, salame, le-
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versin logartmica de los datos, usando InfoStat V.2008. Grupo InfoStat, FCA, UNC, Argentina. La evaluacin sensorial de los quesos, permiti observar defectos ms marcados, con gustos y aromas no caractersticos en las elaboraciones de leche descremada. Los resultados obtenidos nos permiten inferir que en ambas elaboraciones, el recuento de esporulados butricos y C. tyrobutircum presentan similar evolucin; en tanto que realizada la comparacin estadstica de las medias de cada tipo de bacterias y en cada uno de los puntos de muestreo, se comprob que en ningn caso hubo diferencias significativas, de sus medias a un nivel de significancia del 95%. Adems la presencia de defectos organolpticos marcados presenta correspondencia directa con los casos de mayor recuento de C. tyrobutyricum dado en quesos descremados. Disminuir el recuento inicial es clave para bajar el recuento final y el potencial riesgo de deterioro de la calidad del queso.
P243 - 27940 UTILIZACIN DE LECHE FERMENTADA CON BACTERIAS CIDO LCTICAS PROBITICAS PARA LA ESTIMULACIN DEL CONSUMO DE TERNEROS LACTANTES. SOTO, LORENA; FRIZZO, LAUREANO; ZBRUN, MARIA; BONANSEA, EMANUEL; ALTINA, MELISA; SEQUEIRA, GABRIEL; ROSMINI, MARCELO
Departamento de Salud Pblica. Facultad de Ciencias Veterinarias, UNL El desarrollo del rumen de los terneros abarca una serie de procesos que deben comenzar en la primera etapa de vida del ternero si se pretende realizar un destete precoz con alimento slido a una edad temprana. Los cambios iniciales dependen bsicamente del consumo de alimento seco junto con la fermentacin microbiana de la materia orgnica en cidos grasos voltiles. El desarrollo de los preestmagos y de las papilas absortivas responde al consumo de granos y fibra, por lo que se debe estimular el consumo de alimento seco a una edad temprana. Por lo tanto, cuanto antes llegue el animal a consumir entre 0,7 y 0,9 kg de alimento seco, antes ser realizado el destete, con los consecuentes beneficios econmicos. Por lo dicho anteriormente, podramos esperar que la alimentacin con leche fermentada estimule el consumo de los animales y por lo tanto acelere el desarrollo ruminal. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la alimentacin con leches fermentadas con bacterias cido lcticas (BAL) probiticas sobre la estimulacin del consumo de terneras. Se utilizaron 30 terneras Holstein con una edad promedio de 20 d, separadas en 3 grupos de 10 animales: grupo inculo A (A), grupo inculo B (B), grupo control (C). Las terneras permanecieron en experimentacin durante 21 das. Fueron alimentados con la amamantadora automtica de terneros DeLaval CF150, con un mximo de 6 litros diarios de leche y alimento concentrado ad libitum. Se determin el consumo de leche y balanceado para cada animal diariamente. El inculo probitico A estaba compuesto por: Lactobacillus casei DSPV318T, Lactobacillus salivarius DSPV315T y Pediococcus acidilactici DSPV006T. El inculo probitico B estaba compuesto por la cepa Lactobacillus plantarum<i/> DSPV354T. Se adicionaron 30 ml de inculo/l de leche. La dosis diaria para cada ternero fue de aproximadamente 10 log UFC. Se tom una muestra de leche semanalmente para determinar el pH y la poblacin de Lactobacillus totales y cepas del inculo. El anlisis estadstico fue realizado mediante un ANOVA y test de Duncan. La carga de Lactobacillus totales fue menor (P<0,05) en la leche del grupo C que en la leche de los grupos suplementados con los probiticos. Esta alta carga de BAL en la leche de los grupo A y B, ocasion una produccin de cidos suficiente para llevar la leche a un pH significativamente menor (P<0,05) al de la leche control. Por otro lado, se pudo confirmar, en las leches inoculadas, que un gran porcentaje de los Lactobacillus presentes eran las cepas integrantes de los inculos administrados. El consumo promedio, tanto de leche como de balanceado fue significativamente mayor (P<0,05) en los 2 grupos inoculados con las BAL. Esta estimulacin del consumo puede ser atribuida a la acidez ocasionada por la fermentacin de la leche. La suplementacin de la leche para terneros con ambos inculos probiticos increment el consumo precoz de balanceado, lo cual facilitara un rpido desarrollo ruminal. Todo ello permitira un destete anticipado de los animales y mejorara los ndices de produccin de la guachera.
P242 - 27935 DETECCIN DE Escherichia coli VEROCITOTOXIGNICA (VTEC) EN TERNEROS RECIN NACIDOS EN DOS TEMPORADAS DE PARICIN. FERNANDEZ, D(1,3); PADOLA, N L(1,2); PARMA, A E(1,2)
(1) Laboratorio de Inmunoqumica y Biotecnologa, (2) CIC, (3) CONICET, Dpto. de Sanidad Animal y Medicina Preventiva, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Centro, Tandil. Introduccin: VTEC causa en el hombre colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico mediante la produccin de verocitotoxinas (VT1 y VT2), y factores de virulencia adicionales como intimina (codificada en el gen eae), enterohemolisina (EhxA), y una adhesina (Saa) en cepas eae-. El bovino es el principal reservorio de la bacteria siendo eliminada con sus heces y pudiendo transmitirla al hombre a travs de la ingestin de alimentos o agua contaminada con heces de animales o por medio del contacto directo con estos animales o con su medio ambiente. Los terneros pueden incorporar VTEC del canal del parto y de las heces de su madre, mientras que las colonizaciones posteriores son debidas a la ingestin de los alimentos contaminados con esta bacteria. Objetivo: detectar VTEC en hisopados rectales de terneros dentro de las 12 horas de su nacimiento y caracterizar genotpicamente las cepas aisladas de los mismos. Materiales y mtodos: se tomaron 378 muestras de terneros de tambo de menos de 12 h de vida en dos temporadas de paricin. En la paricin de verano-otoo se obtuvieron 186 muestras y en la paricin de invierno-primavera se obtuvieron 192 muestras. Las muestras de hisopados rectales se sembraron en agar MacConkey y posteriormente una alcuota de la zona de crecimiento confluente se cultiv en caldo Luria Bertani. Una alcuota de este cultivo se utiliz para extraccin de ADN por lisis celular en caliente. Se utiliz PCR multiplex para identificar los genes vt1 y vt2 y para la caracterizacin genotpica de los aislamientos (vt1, vt2, eae, ehxA, saa). Resultados: noventa y cuatro (25%) terneros recin nacidos resultaron positivos a VTEC, observndose una mayor prevalencia en terneros nacidos en la paricin de verano/otoo (33%) comparado con los terneros nacidos en invierno/primavera (17%). Se obtuvieron 26 cepas y en 18/26 (75%) de los aislamientos se encontr el gen vt2, 6/26 (25%) presentaban el gen vt1 y ninguna de las cepas portaban vt1 + vt2. Los genes ehxA, saa y eae fueron detectados en 21/26 (81%), 3/26 (11%) y 17/26 (65%) de los aislamientos, respectivamente. Ninguno de los aislamientos positivos a saa portaban el gen eae, y el 49% de las cepas positivas a ehxA presentaban el gen saa. Quince de los 26 aislamientos (58%) mostraron el perfil de virulencia vt2, eae, ehxA. Conclusin: la alta prevalencia de VTEC detectada en terneros recin nacidos indica que estn expuestos a esta bacteria desde el nacimiento permitiendo de esta manera la permanencia de la bacteria en el rodeo. El aislamiento en terneros de cepas portadoras de genes de virulencia relacionados con enfermedad en el hombre podra indicar un rol importante en la transmisin vertical de VTEC, principalmente en pariciones de verano/otoo.
P244 - 27961 DOS ADITIVOS ALIMENTARIOS INDUCEN MULTIPLE RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS EN AISLAMIENTOS DE Escherichia coli DE ORIGEN CLNICO Y ALIMENTARIO. AQUILI, V; CASABONNE, C; PEREZ, J; ABECASIS, C; BALAGUE, C
Facultad de Ciencias Bioqumicas, Bacteriologa - UNR El fenotipo de mltiple resistencia a antimicrobianos (Mar) se caracteriza por una disminucin en la susceptibilidad a mltiples
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antimicrobianos debido a la reduccin de la expresin de porinas (OmpF) y al incremento en la expresin de sistemas de expulsin (AcrAB-TolC). Se sabe que concentraciones sub-inhibitorias de diferentes frmacos y compuestos qumicos como benzoato de sodio (conservante alimentario) inducen el fenotipo de Mar por activacin de la expresin del opern marRAB en aislamientos de Escherichia coli (E. coli). Existe una relacin entre aislamientos de E. coli de determinados materiales, las E. coli uropatgenas y enteropatgenas provienen generalmente de agua y alimentos contaminados. El objetivo de este trabajo fue determinar si otros dos conservantes de uso alimentario, propionato de sodio y sorbato de potasio, inducen el fenotipo Mar y/o modifican factores de patogenicidad en aislamientos de E. coli, recuperados de materia fecal, orina y alimentos, sometidos a estas situaciones de estrs qumico. Se seleccionaron 32 aislamientos de E. coli recuperadas de alimentos, materia fecal y orina. Como cepas controles se utilizaron E. coli ATCC 43895 y la cepa sensible AG100. Se evalu el efecto de concentraciones 1/2, 1/4, 1/8 de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de propionato de sodio y sorbato de potasio sobre la CIM de cloranfenicol, tetraciclina, norfloxacina y cido nalidxico. El eflujo activo fue evidenciado por el efecto del carbonilcianuroclorofenilhidrazona (CCCP) inhibidor de sistemas de expulsin dependiente de protones y por el incremento en la tolerancia al Ciclohexano. Se analiz el perfil de protenas de membrana externa por SDS-PAGE. La produccin de entero hemolisina fue detectada en agar sangre de carnero con y sin cloruro de calcio 10mM y la hidrofobicidad con sulfato de magnesio 2 M, ambas se realizaron en ausencia y presencia de los dos conservantes. Dichos ensayos se realizaron con las mismas concentraciones de benzoato de sodio, inductor ya caracterizado del opern marRAB. En presencia de los conservantes alimentarios se evidenci una disminucin de 4 a 16 veces en la CIM a cloranfenicol, tetraciclina, cido nalidxico y norfloxacina, se observ que dicha susceptibilidad aumentaba en presencia del CCCP. Adems se evidenci un incremento en la tolerancia a solventes orgnicos como ciclohexano en presencia de los dos inductores. Dichos resultados sugieren la presencia de sistemas de eflujo dependiente de protones. En el perfil de protenas de membrana externa observamos una disminucin de la expresin de la porina OmpF en las cepas inducidas. Los factores de patogenicidad estudiados no disminuyeron su expresin en presencia de las diferentes concentraciones de dichos aditivos. Los dos aditivos alimentarios, propionato de sodio y sorbato de potasio, inducen el fenotipo de mltiple resistencia en los 32 aislamientos de E. coli ensayados en este estudio, al igual que lo observado con benzoato de sodio, un inductor ya caracterizado. No se evidenci la prdida de la expresin fenotpica de los factores de patogenicidad en dichas situaciones de estrs qumico.
das (superficie de la piel (S) y cavidad torcica y abdominal (C)). Adems, en el 2 y 3 muestreo se tomaron en total 41 muestras de la cavidad torcica y abdominal de carcasas evisceradas sin lavar (CSL). Cada hisopo se proces individualmente en 10 ml de agua de peptona a 37C en agitacin ON. A partir del cultivo se tomaron 10l que se hirvieron para la liberacin de ADN. Luego se utiliz una PCR multiplex para detectar los genes vt1, vt2 y eae. La reaccin se visualiz mediante electroforesis en gel de agarosa con bromuro de etidio. Las muestras eae+ pero vt- se consideraron contaminadas con EPEC. Resultados: se detect EPEC en el 1er muestreo en 6 cloacas y 2 carcasas lavadas (una de ellas en S y C, y la otra solo en S); en el 2 muestreo, en 28 cloacas, 13 carcasas sin lavar y 29 lavadas (6 en S, 15 en C y 8 en S+C) y en el 3, en 22 cloacas, 7 carcasas sin lavar y 19 lavadas (6 en S, 5 en C y 8 en S+C). Conclusiones: en todos los muestreos se detect el gen eae en ausencia de genes vt, lo cual indicara la presencia de EPEC. Los resultados obtenidos sugieren, por un lado, que el pollo sera reservorio de las mismas, y por otro, que la contaminacin se mantiene en las distintas etapas del proceso, an despus del lavado, por lo cual es necesario implementar otras medidas de control para disminuir la carga de EPEC de modo que llegue a los consumidores un producto seguro.
P246 - 27996 EFECTO DE Oenococcus oeni SOBRE LAS ACTIVIDADES ANTIHIPERTENSIVA Y ANTIOXIDANTE EN UN MEDIO SINTTICO ADICIONADO DE LA FRACCIN MACROMOLECULAR DE VINOS TINTOS. AREDES FERNANDEZ, PA(1); STIVALA, MG(1); RODRIGUEZ VAQUERO, MJ(1,2); FARIAS, ME(1,2)
(1) Centro de Referencia para Lactobacilos, CERELA, (2) Universidad Nacional de Tucumn, UNT Durante el proceso de vinificacin, una vez concluida la fermentacin alcohlica (FA) conducida por Saccharomyces cerevisiae, se produce la autolisis de la levadura con la consecuente liberacin de compuestos nitrogenados, entre ellos pptidos con actividades biolgicas beneficiosas (antihipertensiva y antioxidante). Asimismo, los compuestos fenlicos presentes en vinos tintos, se relacionan con estas actividades biolgicas. La FA es generalmente seguida por una fermentacin malolctica, llevada a cabo por Oenococcus oeni. Determinamos que la cepa X2L de O. oeni expresa un sistema proteoltico con actividad sobre las protenas del vino y jugo de uva, liberando pptidos que podran ejercer actividad biolgica y/o potenciar la ya existente. Objetivo: evaluar la modificacin de las actividades antihipertensiva y antioxidante por O. oeni X2L inoculado en medio vino sinttico (MVS), en el cual se induce la autolisis de S. cerevisiae mc2, y se suplementa con la fraccin macromolecular (FM) de vino tinto (constituida por compuestos nitrogenados y polifenoles). A partir de un precultivo en fase exponencial en medio YPD, S. cerevisiae mc2 se inocula en MVS (10^7 cl/ml), y se induce su autolisis acelerada. Despus de 24 h, se separan las clulas, se adiciona FM al medio, se ajusta a pH 4, se esteriliza e inocula con O. oeni X2L (10^7 cl/mL). A diferentes tiempos de incubacin se determina viabilidad microbiana, protenas (Bradford); pptidos, aminocidos y actividad proteoltica (Doi). Se evalan las actividades antihipertensiva: inhibicin de la enzima convertidora de angiotensina (% IECA); antioxidante: FRAP (reduccin del hierro frrico) y DPPH (captura del radical 2,2-difenil-1-picrilhidracilo) y los compuestos fenlicos: Folin Ciocalteu. La autolisis de la levadura se evidencia por disminucin del 40% en peso seco e incremento en la concentracin de protenas, pptidos y aminocidos en 16,0; 3,6 y 6,3 mg N/L respectivamente. Se detecta incremento en la actividad I-ECA (48,4%) y antioxidante por FRAP (600 mol/L FeSO4). Cuando se adiciona la FM, se observa un incremento de 3,6 veces en la concentracin de protenas y pptidos y se incorporan 1000 mg GAE/L de polifenoles. En estas condiciones se detecta mayores actividades biolgicas (IECA= 76,4%; FRAP= 6200 mol/L FeSO4 y DPPH= 35%). Cuando O. oeni se inocula en MVS adicionado de la FM, el microorganismo mantiene su viabilidad celular durante la incubacin y expresa una actividad proteoltica extracelular con liberacin de 4,9 mg N/L de pptidos. Si bien se observa incremento de la actividad I-ECA
P245 - 27993 DETECCIN DE Escherichia coli ENTEROPATOGNICO (EPEC) EN DIFERENTES ETAPAS DEL PROCESO DE FAENA EN UN ESTABLECIMIENTO AVCOLA. ALONSO, MZ(1,2); PADOLA, NL(1,3); LUCCHESI, PMA(1,2); PARMA, AE(1,3)
(1) Lab. Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV. UNCPBA. (2) CONICET. (3) Comisin de Investigaciones Cientficas PBA Introduccin EPEC produce diarrea acuosa, dolores abdominales y fiebre moderada en nios y adultos. El principal factor de virulencia es una protena llamada intimina, codificada por el gen eae, que participa en la lesin A/E (attachment and effacement) que se caracteriza por el borrado de las vellosidades y permite una adherencia ntima entre la bacteria y el enterocito. Dado que la deteccin de eae en una muestra no es indicadora exclusivamente de la presencia de EPEC, ya que existe otro patotipo (E. coli verocitotoxignico) que tambin puede portar este gen, es importante diferenciarlos. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue detectar la presencia EPEC en las distintas etapas del procesamiento de pollos en un establecimiento avcola. Materiales y mtodos: se realizaron tres muestreos en abril, septiembre y diciembre de 2009 en diferentes etapas del proceso de faena: animales vivos, carcasas evisceradas sin lavar y carcasas lavadas. En cada una de las visitas se tomaron con hisopos 100 muestras de cloacas de pollos antes de la faena, 50 muestras de carcasas lava-
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(83,2%), no se modifica significativamente la actividad antioxidante, indicando que esta ltima propiedad estara relacionada principalmente a pptidos y compuestos fenlicos presentes en la fraccin macromolecular. Este estudio provee informacin sobre la importancia de la actividad proteoltica de O. oeni X2L en condiciones similares a las de vinificacin, con respecto a la liberacin y/o produccin de pptidos con actividad antihipertensiva a partir de compuestos nitrogenados presentes en el medio natural y destaca las propiedades beneficiosas del producto fermentado.
Universidad Boyac Introduccin. Estudios realizados en Colombia han determinado que el mayor riesgo de adquirir una enfermedad transmitida por alimentos est asociado a las malas prcticas de manufactura de los alimentos, siendo el queso artesanal un producto de alto valor nutricional que provee las fuentes necesarias para el desarrollo de organismos indeseados causantes de focos de infeccin y vehculo de patgenos principalmente Listeria monocytogenes, Salmonella sp., Staphylococcus aureus, Escherichia coli, etc, que afectan la salud de la poblacin. Las deficientes condiciones higinicas de la cadena productiva, y de comercializacin del queso fresco, junto a las prcticas artesanales y culturales de obtencin de este producto son motivo para la realizacin del presente estudio. Objetivo. Determinar la calidad microbiolgica y parmetros fisicoqumicos del queso fresco (artesanal) elaborado y comercializado en la ciudad de Tunja-Colombia. Materiales y Mtodos. Se analizaron microbiolgica y fisicoqumicamente 46 muestras de queso fresco, recolectadas entre julio/2009 y abril/ 2010 en las dos principales plazas de mercado de la ciudad de Tunja (Colombia). Los anlisis microbiolgicos realizados fueron: recuento de coliformes totales (mtodo de nmero ms probableNMP), identificacin de coliformes fecales (E.coli) mediante el mtodo NMP en caldo Fluorocult (Merck, EUA) y agar Chromocult (Merck, EUA). Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positivo; deteccin presuntiva de Listeria monocytogenes y Salmonella sp. (25gr/producto), mediante la prueba rpida Singlepath (Merck, EUA) y sistema API (bioMrieux) y recuento de Clostridium sp. y de bacterias cido lcticas. Los anlisis fisicoqumicos realizados fueron: % humedad, % cenizas, cloruros (mg/100gr), pH, calcio (mg/100gr) y protena total. Resultados. Los coliformes totales y fecales fueron detectados en las 46 muestras analizadas (100%), S. aureus coagulasa positivo >1x10^3 UFC/gr (40/46, 87%), Listeria monocytogenes (9/46, 20%), Salmonella sp. (16/46, 35%), bacterias lcticas (>10^4UFC/g) en las 46 muestras (100%). No fue detectado Clostridium sp. Otros patgenos detectados fueron Shigella sonnei, Pantoea sp., Enterobacter cloacae y Citrobacter sp. (4/46, 7%). Los parmetros fisicoqumicos de los quesos fueron: humedad (55,54,77), cenizas (3,410,6), cloruros (897263), pH (5,490,34), calcio (760,8229) y protena total (15,53,15). Conclusin: en conformidad con la norma tcnica colombiana 750 para productos lcteos (quesos), los 46 productos analizados no cumplen con los parmetros microbiolgicos y fisicoqumicos, representando un alto riesgo para la poblacin de toxi-infecciones alimentarias. Los elevados recuentos se deben a las bajas condiciones higinicas de manipulacin de los alimentos, empacado inadecuado, largos perodos de almacenamiento sin refrigeracin y otros factores culturales.
P247 - 28002 EVALUACIN DE CINTICA DE CRECIMIENTO Y ACIDIFICACIN DE BACTERIAS LCTICAS CON POTENCIAL APLICACIN EN LA INDUSTRIA CRNICA. PALAVECINO, NOELIA(1,2); CAYRE, ELISA(2); VIGNOLO, GRACIELA(1,3); GARRO, OSCAR(1,2)
(1) CONICET, (2) Universidad Nacional del Chaco Austral UNCAUS, (3) Centro de Referencia para Lactobacilos - CERELA Los productos crnicos fermentados elaborados en la provincia del Chaco se obtienen mediante fermentacin espontnea lo que conlleva a un alto grado de heterogeneidad en la calidad del producto terminado. El proceso se podra controlar mediante la adicin de cultivos starters especficamente seleccionados a partir de la flora autctona de tales productos a fin de mantener la tipicidad de los mismos. El primer paso en el diseo de un starter crnico consiste en caracterizar las cepas de bacterias cido lcticas (BAL) aisladas de estos productos para seleccionar las que presenten mejores propiedades tecnolgicas. La inmediata y rpida formacin de cido al comienzo del proceso de fermentacin, y la produccin de suficientes cantidades de cidos orgnicos que permitan reducir el pH debajo de 5,1 son requerimientos esenciales para las BAL a ser utilizadas como cultivos iniciadores. Es por ello que el objetivo del presente trabajo fue evaluar la cintica de crecimiento y acidificacin de BAL asiladas de productos crnicos fermentados elaborados en la provincia del Chaco. A partir de productos crnicos fermentados elaborados por los 4 establecimientos habilitados de la provincia, se aislaron 63 BAL que se caracterizaron por tincin de Gram, catalasa, oxidasa, crecimiento a 15 C y 45 C en caldo MRS, y produccin de gas a partir de glucosa. La cintica de crecimiento y acidificacin de los aislados homofermentativos (58), se evalu en medio SB a 15 C, mediante monitoreo de la densidad ptica (DO) a 600 nm y del pH a distintos intervalos de tiempo durante 48 h. Los datos obtenidos se utilizaron para ajustar modelos matemticos y estimar los siguientes parmetros cinticos: fase de latencia y velocidad asociados tanto al crecimiento bacteriano como a la acidificacin, DO600 y pH a las 48 h, y profundidad de la acidificacin, definida como la diferencia entre el valor inicial de pH y el final estimado. Un anlisis de componentes principales (ACP) se aplic a los datos cinticos con el objeto de seleccionar aquellos que presenten las mejores propiedades. Los valores estimados de los parmetros cinticos presentaron una gran variabilidad lo cual evidencia la heterogeneidad de la poblacin de BAL asociada a los productos. El ACP present una correlacin cofentica de 0,925 indicando que la matriz de datos estandarizados represent adecuadamente los datos originales. El componente principal 1 explic el 47% de la variabilidad total. El grfico biplot obtenido permiti identificar un grupo de 9 aislados que presentaron las mejores propiedades cinticas. El valor medio de la velocidad de crecimiento en ese grupo particular fue de 0,140,03 generaciones por hora, la de acidificacin 0,07 0,01 unidades de pH por hora, la DO final de 0,41 0,15 (log DO600) y el pH final 4,3 0,2. El estudio realizado permiti seleccionar un grupo de BAL autctonas, con propiedades cinticas tiles para el diseo de cultivos iniciadores. Otras propiedades de inters tecnolgico sern evaluadas en posteriores ensayos.
VIROLOGA
P249 - 27590 EXPRESIN DE LOS TRANSCRIPTOS RPMS1 DE LA REGIN BAMHI-A DEL VIRUS EPSTEIN-BARR (EBV) EN AMGDALAS DE PACIENTES TRASPLANTADOS Y NO TRASPLANTADOS. FELLNER, MD(1); DURAND, K(1); BERNALDEZ, P(2); BALBARREY, Z(2); BOSALEH, A(2); SOLERNOU, V(2); NUEZ, S(1); CAMPOS, J(1); ALONIO, V(1); TEYSSIE, AR(1); PICCONI, MA(1)
(1) INEI-ANLIS MALBRN, (2) Hospital Garrahan El virus Epstein-Barr (EBV) se asocia a una variedad de neoplasias, entre ellas Desrdenes linfoproliferativos post-trasplante (PTLDs), que abarcan y pueden progresar desde linfoproliferaciones benignas hasta linfomas. Luego de la primoinfeccin el EBV persiste a travs de fases de latencia y replicacin en linfocitos B de tejido linfoideo y sangre perifrica. En la regin BamHI-A del genoma de EBV se han detectado transcriptos (BARTs) con splicings heterogneos de sus hexones y en algunos se han descripto marcos abiertos de lectura con la posibilidad de actuar como ARNm. Entre las especies ms abundantes
P248 - 28097 EVALUACION DE LA CALIDAD MICROBIOLGICA Y DE LOS PARMETROS FISICOQUMICOS DEL QUESO FRESCO (ARTESANAL) DISTRIBUIDO EN LA CIUDAD DE TUNJA (COLOMBIA). PIEROS, OSCAR; USECHE, YERLY; RODRIGUEZ, DEYCI; HUERTAS, LUISA; CASTELLANOS, ERIKA; PEA, ALEXANDRA; BENAVIDES, YEIMY; BOTERO, IMELDA
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est el transcripto RPMS1, cuya protena expresada artificialmente demostr antagonizar a Notch 1, actividad que podra ser relevante en el rol del virus en cncer. Hasta el momento se ha detectado la expresin del transcripto RPMS1 en lneas celulares EBV positivas de origen epitelial y linfoide asociadas a todo tipo de latencia y replicacin, en linfocitos B perifricos (Lat 0) y en patologas neoplsicas asociadas a EBV (latencias 0/1, 2, 3). Todava no ha sido esclarecida su expresin durante la infeccin natural, ni su contribucin al desarrollo de procesos neoplsicos. Objetivo. Determinar la expresin del transcripto RPMS1 en amgdalas de pacientes trasplantados y no trasplantados y analizar su asociacin con las fases de latencia y replicacin de EBV en distintas situaciones clnicas. Materiales y Mtodos. Se estudiaron muestras de amgdalas de 33 pacientes infectados con EBV, 17 trasplantados (Tx) y 16 no trasplantados (No-Tx). Se aplicaron ensayos de RT-nPCR para determinar la expresin de RPMS1 y de genes marcadores de Lat 0: EBERs; Lat 2: LMP1; Lat 3: EBNA2 y replicacin: BcLF1. Resultados. Se detect RPMS1 en el 70,6% de Tx y 11,8% de No-Tx, siendo la expresin significativamente mayor en Tx vs No-Tx (p< 0,001). De acuerdo al diagnstico histolgico, 16 Tx presentaron PTLDs y 1 hiperplasia linfoide folicular (HLF). En los Tx-PTLDs se detect: en el 12,5% Lat 0 con 50% de expresin de RPMS1; en el 37,5% Lat 2 con 50% expresin de RPMS1; en el 12,5% Lat3 con 50% de expresin de RPMS1 y en el 37,5% replicacin con 100% de expresin de RPMS1. El Tx-HLF mostr Lat 0 con expresin de RPMS1. En No-Tx, se diagnostic HLF en todos los casos, observndose: en el 50,0% Lat 0 sin expresin de RPMS1; en el 18,8% Lat 2 con 33,3% de expresin de RPMS1; en el 6,2% Lat 3 sin expresin de RPMS1 y en el 25,0% replicacin con 25% de expresin de RPMS1. No se observaron diferencias significativas en la expresin de RPMS1 entre las distintas fases de latencia y replicacin (p>0,05) en Tx ni en No-Tx. La expresin de RPMS1 en Tx-PTLDs fue significativamente mayor que en pacientes con HLF (p<0,05). Los transcriptos RPMS1 se expresan en amgdalas de individuos infectados con EBV. Su expresin en amgdalas se asocia a todo tipo de latencia y a fase de replicacin. En individuos trasplantados con PTLDs, la alta expresin de RPMS1 podra indicar un rol en el desarrollo de esta linfoproliferacin.
codificante de VP2. En la regin amplificada se encuentra un polimorfismo de nucletido simple (SNP) que diferencia entre las cepas de alta y baja patogenia. Este SNP fue detectado con un procedimiento basado en el uso de sondas Taqman-MGB especficas para cada variante allica y marcadas con los fluorocromos FAM y VIC. La metodologa se aplic sobre cepas de referencia y muestras de campo uruguayas, clasificadas previamente como de baja y alta patogenia por el anlisis de su secuencia nucleotdica. La caracterizacin realizada por real-time PCR mostr una coincidencia total con la obtenida por la secuenciacin de las diferentes cepas analizadas. IBDV es un virus que causa cuantiosas prdidas econmicas en la industria avcola mundial. Las cepas de alta y baja patogenia tienen marcadas diferencias en cuanto a sus signos clnicos y nivel de patogenia, pero ambos tipos virales deben ser rpidamente detectados para poder tomar las medidas necesarias y as controlar la infeccin. En este trabajo se logr el desarrollo de una metodologa de diagnstico y genotipificacin de IBDV que permite acelerar los tiempos de respuesta frente a brotes de este virus y constituye un ejemplo de incorporacin de tecnologa de punta con alto grado de aplicacin al sistema productivo avcola.
P251 - 27675 PREVALENCIA ELEVADA DE CITOMEGALOVIROSIS CONGNITA EN UN HOSPITAL PBLICO DE LA CIUDAD DE RESISTENCIA, CHACO. MARIN, H; DELUCA, G; GIUSIANO, G
Hospital Julio C. Perrando Resistencia - Chaco La infeccin por citomegalovirus (CMV) es considerada de elevada morbi-mortalidad en los neonatos que la adquieren durante el perodo fetal. El CMV es la causa ms frecuente de infeccin congnita en el ser humano, con una incidencia mundial que vara entre 0.2 y 2.2 %. Los sntomas slo se presentan aproximadamente en un 10% de los neonatos infectados in-tero, en el resto la infeccin pasa inadvertida. Aproximadamente el 80% y el 15% de las poblaciones sintomticas y asintomticas respectivamente, desarrollar secuelas durante la infancia. La deteccin por reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) en sangre seca de tarjetas metablicas, cobr importancia en estudios retrospectivos desarrollados en todo el mundo, con sensibilidad y especificidad comparables al aislamiento viral por cultivo celular. No existen a la fecha datos epidemiolgicos moleculares concretos acerca de infeccin congnita por citomegalovirus en el Nordeste argentino. El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de esta patologa en una ciudad de la regin mencionada considerndose la importancia de instaurar una terapia oportuna a partir del diagnstico temprano a fin de disminuir la morbilidad y evitar secuelas progresivas en casos de infeccin subclnica. Durante el periodo 2007-2009 se estudiaron 277 muestras seleccionados al azar, correspondientes a recin nacidos del Servicio de Neonatologa del Hospital Julio C. Perrando.Se recolectaron dentro de los diez primeros das post nacimiento. Treinta y cuatro neonatos presentaron algn signo o sntoma de infeccin viral congnita y el resto fue asintomtico. La deteccin del DNA viral se efectu en muestras de sangre seca de tarjetas metablicas, mediante la tcnica de nested PCR utilizando primers GB que amplifican un segmento de 150 pb. La prevalencia encontrada fue del 3,97%, detectndose CMV en 11 muestras, de las cuales 5 pertenecieron a recin nacidos sintomticos y 6 a neonatos asintomticos. Los positivos fueron confirmados por repeticin de la PCR y 2 de ellas pertenecieron a neonatos con madres con antecedente de IgM especfica durante el embarazo. Las principales manifestaciones clnicas fueron bajo peso, prpura, hepatoesplenomegalia, ictericia y nivel elevado de transaminasas. El valor de prevalencia encontrado en este estudio puede considerarse elevado en comparacin con los resultados (0.2% - 2,2%) de Demmler y col. (1988), Barbi y col (1998) y Griffiths y col (1991), los cuales utilizaron tcnicas serolgicas y moleculares, aportando los primeros datos epidemiolgicos mundiales. En nuestro pas los relevamientos de Distfano y col. coinciden con la casustica mundial antes mencionada. En otras regiones del mundo (Japn, Finlandia, Hungra), encontraron prevalencias elevadas (aprox. 16%). Mientras que en San Pablo (Brasil) hallaron
P250 - 27620 DESARROLLO DE UNA METODOLOGA DE DIAGNSTICO Y GENOTIPIFICACIN POR REAL-TIME PCR DEL VIRUS DE GUMBORO. TOMS, GONZALO; HERNANDEZ, MARTIN(1); PANZERA, YANINA(1); VILLEGAS, PEDRO(2); HERNANDEZ, DIEGO(1); PEREZ, RUBEN(1)
(1) Facultad de Ciencias, Uruguay (2) Universidad de Georgia El virus de la enfermedad infecciosa de la bursa (IBDV) es el causante de una enfermedad inmunosupresora que afecta a pollos de engorde y postura, generando cuantiosas prdidas econmicas a la industria avcola mundial. IBDV es un virus no envuelto perteneciente al gnero Avibirnavirus de la familia Birnaviridae. Su genoma consiste en dos segmentos de RNA doble hebra (A y B) que codifican cinco protenas virales. Existen tres cepas del virus: clsicas, variantes e hipervirulentas. Las dos primeras son consideradas de baja patogenia, ya que provocan una enfermedad sub-clnica inmunodepresora que favorece la entrada de otros agentes patgenos oportunistas. Este hecho hace que las infecciones causadas por IBDV de baja patogenia sean difciles de detectar, ya que frecuentemente se ven camufladas por los signos clnicos causados por otras enfermedades co-infectantes. Por otro lado, las cepas hipervirulentas son consideradas de alta patogenia, y provocan una enfermedad inmunosupresora grave y con tasas de mortalidad elevadas. En este caso, si bien la infeccin provocada causa signos clnicos detectables, es importante realizar un rpido diagnstico para tomar las medidas necesarias lo antes posible. En este trabajo se desarroll una metodologa de diagnstico y genotipificacin de IBDV mediante real-time PCR. La misma permite diferenciar las cepas de alta patogenia de las de baja patogenia. Se dise un juego de primers que amplifica una regin altamente conservada del segmento A del virus, especficamente la regin solapada del gen vp5 y la regin
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un 2,6%, valor aproximado al de nuestra poblacin. Las manifestaciones clnicas encontradas en los neonatos coincidieron con trabajos nacionales principalmente. La cifra elevada de prevalencia en nuestra poblacin, podra deberse a una baja condicin socioeconmica de los pacientes que asisten al Hospital pblico en la ciudad de Resistencia. La tcnica de PCR permiti estudiar una poblacin silente de recin nacidos, con riesgo de desarrollar secuelas progresivas en un futuro cercano, sin un tratamiento oportuno.
(1) Ctedra de Virologa, Fac. de Farmacia y Bioqumica, UBA El virus de hepatitis B (HBV) es un agente etiolgico de enfermedad aguda y crnica. Su genoma es una molcula de ADN de 3,2 kb que contiene 4 marcos de lectura abiertos (P, preS-S, X y preC-C), parcialmente superpuestos. Desde el punto de vista evolutivo, el HBV presenta dos caractersticas particulares: una elevada tasa de mutacin derivada del proceso de retrotranscripcin del genoma y una fuerte restriccin evolutiva producto del solapamiento de sus genes. El HBV ha sido clasificado principalmente en 8 genotipos (A-H). El objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia de la superposicin de marcos de lectura en el comportamiento evolutivo del HBV y los mecanismos virales implicados, mediante el estudio de la tasa de variacin de las tres posiciones del codn, las presiones de seleccin y el uso de aminocidos y de codones. Para ello, se analizaron 611 genomas completos de los genotipos principales del HBV. Los anlisis se realizaron sobre cada genotipo en forma separada y sobre una matriz de datos con representacin equilibrada de cada uno (n total=150). La tasa de variacin de las tres posiciones del codn fue estudiada por mxima verosimilitud (Baseml, PAML v4.2). La presin de seleccin sobre los distintos genes se evalu mediante el clculo de las tasas de sustituciones sinnimas por sitios sinnimos (dS) y de sustituciones no sinnimas por sitios no sinnimos (dN) (mtodo SLAC, HYPHY v2.0). Por ltimo, el uso de aminocidos y de codones se evalu mediante el clculo de la frecuencia de ocurrencia (DAMBE v5.0.7). Los resultados mostraron que en la regin de superposicin P/preS-S, la posicin ms variable fue la 1ra posicin del marco de P que representa la 3ra del marco del preS-S (1p/3s). Para otras regiones, la 3ra posicin de P fue la ms variable, especialmente en P simple codificacin. Por otro lado, los genes en simple codificacin presentaron siempre una dS mayor que en doble codificacin, sin mostrar diferencias entre las dN. Las regiones de simple codificacin, a pesar de ser las ms variables a nivel nucleotdico, resultaron ms conservadas a nivel aminoacdico. Adems, se observ que las regiones de P simple codificacin, P/X y P/S presentaron dS>dN (patrn conservativo en P), mientras que P/preS1 y P/C mostraron dN>dS (patrn no conservativo en P). En cambio, cuando la superposicin se analiza desde los marcos de lectura superpuestos del preS1 y C, stos mostraron una dS>dN, sugiriendo que el virus evoluciona hacia la conservacin aminoacdica del preS y del C, por sobre la variacin de P. Por lo tanto, distintas regiones de P presentan distinta tolerancia a los cambios no sinnimos, lo cual est de acuerdo con la diferente funcionalidad de los dominios de esta protena. Adems, se observaron diferencias entre la frecuencia de aminocidos y de codones entre los genes en simple y doble codificacin del genoma del HBV. El proceso de sustitucin en las regiones de superposicin de marcos de lectura en el genoma del HBV estara dirigido por las restricciones selectivas que operan sobre uno de los genes, ms que sobre los dos genes en cuestin, mientras que el uso diferencial de aminocidos y de codones constituira una de las herramientas utilizadas por este virus para tolerar los cambios en el marco superpuesto y evolucionar.
P252 - 27685 EFECTO DE LA INFECCIN CON VIRUS JUNN SOBRE LA EXPRESIN Y EL TRANSPORTE NCLEOCITOPLASMTICO DE LA RIBONUCLEOPROTENA HETEROGNEO-NUCLEAR A1. KNOTT, MARIA ELENA; MAETO , CYNTHIA A; LINERO , FLORENCIA N; GARCIA , CYBELE C; ELLENBERG , PAULA C; SCOLARO , LUIS A; CASTILLA , VIVIANA
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UBA Las ribonucleoprotenas heterogneo-nucleares del grupo A/ B (hnRNPs A/B) normalmente intervienen en el procesamiento, transporte y traduccin de ARN mensajeros y su transporte ncleo-citoplasmtico est relacionado con la regulacin de la supervivencia celular. En trabajos previos se comprob que las hnRNP A/B participaran en la replicacin del virus Junn (JUNV), agente causal de la fiebre hemorrgica argentina, habindose demostrado que el silenciamiento de estas protenas inhibe la replicacin viral. El objetivo de este trabajo consisti en analizar las caractersticas de la expresin de las hnRNPs del grupo A/B en cultivos celulares de distinto origen infectados con JUNV o transfectados con vectores que permiten la expresin transitoria de protenas virales. Mediante la tcnica de western blot se analiz la expresin de protenas hnRNPs A/B en clulas Vero, BHK21 y HeLa infectadas con JUNV en forma aguda o clulas Vero persistentemente infectadas con JUNV (clulas V3). La infeccin aguda en Vero, BHK-21 y HeLa no provoc cambios en los niveles de expresin de las hnRNPs A/B. En clulas V3, durante la primera etapa de la persistencia los niveles de hnRNPs A/B no se modificaron pero en una etapa tarda, en la cual no se detecta produccin de virus, se observ una marcada reduccin en los niveles de estas protenas. Mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta, se analiz el efecto de la infeccin viral o de la expresin de protenas virales sobre la localizacin intracelular de hnRNP A1 en clulas transfectadas con el plsmido T7-hnRNP A1 que permite la expresin de esta protena. Se determin que mientras la infeccin en clulas Vero promueve la acumulacin de hnRNP A1 en el citoplasma, la infeccin en clulas BHK-21, HeLa o V3 no altera la localizacin predominantemente nuclear de la misma. La sobreinfeccin con JUNV de clulas V3 no modific el patrn de distribucin nuclear de hnRNP A1. Asimismo, la sobreexpresin de hnRNP A1 no provoc alteraciones en la produccin de virus infeccioso por parte de estos cultivos. Finalmente, se observ que la sobreexpresin conjunta de hnRNP A1 y la protena viral N indujo la relocalizacin de hnRNP A1 al citoplasma en clulas Vero pero no en clulas V3. Sin embargo, la co-expresin de hnRNP A1 con las protenas virales GPC o Z no alter su localizacin predominantemente nuclear. Mientras que la infeccin aguda en diversos sistemas celulares no alter los niveles de expresin de las hnRNPs A/B, dichos niveles se encontraron marcadamente disminuidos durante la persistencia viral en clulas Vero. En aquellos sistemas en los cuales el virus no produce efecto citoptico (clulas BHK-21, HeLa y V3) la localizacin de hnRNP A1 fue principalmente nuclear. Sin embargo, la infeccin aguda o la sobreexpresin de la protena viral N en clulas Vero indujo la relocalizacin de hnRNP A1 al citoplasma. Esto sugiere la participacin de la protena de nucleocpside viral en la alteracin del patrn de distribucin de hnRNP A1 que podra estar relacionada con una modulacin del efecto citoptico de JUNV.
P254 - 27699 DIAGNSTICO Y CARACTERIZACIN GENTICA DEL VIRUS DE LA BRONQUITIS INFECCIOSA AVIAR EN URUGUAY. MARANDINO, ANA EUGENIA; HERNANDEZ, MARTIN; PANZERA, YANINA; HERNANDEZ, DIEGO; PEREZ, RUBEN
Facultad de Ciencias - Uruguay El virus de la bronquitis infecciosa aviar (IBV) pertenece al gnero Coronavirus de la familia Coronaviridae. IBV es un virus pleomrfico, envuelto, con un genoma de ARN simple hebra (27,6 kb) de polaridad positiva. Este virus es el agente causal de la bronquitis infecciosa (IB), una enfermedad respiratoria aguda que afecta exclusivamente a aves de corral, generando cuantiosas prdidas econmicas a la industria avcola mundial. Los brotes de esta enfermedad se registran incluso en lotes de aves correctamente vacunados debido a que las vacunas empleadas no siempre proporcionan inmunidad cruzada ante los variados serotipos
P253 - 27108 INFLUENCIA DE LA SUPERPOSICIN DE GENES EN LA EVOLUCIN DEL VIRUS DE HEPATITIS B. TORRES, C(1); CAMPOS, RH(1); MBAYED, VA(1)
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existentes. El diagnstico molecular de IB tiene gran relevancia ya que la enfermedad suele confundirse con otras patologas aviares respiratorias que provocan sntomas clnicos similares. En el presente trabajo se realiz el diagnstico y caracterizacin de IBV en un brote ocurrido en una granja uruguaya durante el ao 2009. La metodologa de diagnstico implementada se bas en la deteccin del genoma viral mediante la amplificacin por RTPCR de un fragmento de 437 pb del gen que codifica para la Nucleoprotena. La caracterizacin gentica se realiz mediante el anlisis de la secuencia completa del gen que codifica para la Glicoprotena de Superficie (1670 pb), principal sitio antignico del virus. Los anlisis comparativos de las secuencias mostraron que existe divergencia entre el aislado uruguayo y la vacuna utilizada actualmente a nivel nacional para prevenir la enfermedad. Esta vacuna est confeccionada en base al serotipo Massachussets, nica cepa de uso comercial autorizada en Uruguay. En el presente trabajo se implement, por primera vez en Uruguay, una metodologa de diagnstico molecular para la deteccin de IBV. Este ensayo constituye un mtodo rpido, especfico y sensible, por lo que brinda competitividad frente a otras tcnicas de diagnstico alternativas. La aplicacin del ensayo estandarizado en muestras de campo de animales con sintomatologa presuntiva de IB logr detectar una cepa de campo de IBV uruguaya. La caracterizacin gentica de esta cepa permiti ver una clara divergencia con la cepa vacunal utilizada en Uruguay para prevenir la IB. Nuestros resultados fundamentan un estudio ms profundo de caracterizacin de las cepas presentes en la regin con el objetivo de evaluar los niveles de proteccin cruzada entre las cepas vacunales existentes y las variantes virales circulantes. De esta manera se podr seleccionar el plan de vacunacin ms adecuado a las caractersticas antignicas de los virus de campo locales.
Biosystems). Resultado. De las 157 muestras analizadas en Salta en las semanas epidemiolgicas 35 y 36, 141 (89%) dieron negativas por IFI y 16 (11%) positivas para influenza A. Por qRTPCR 74 muestras (47%) dieron positivas para A y en 83 (53%) muestras no se detect genoma de influenza A pandmico. De las 74 muestras positivas para influenza A, 43 (58%) fueron virus influenza A (H1N1) pandmico y 31 no se pudieron subtipificar. Conclusiones. La aplicacin de qRT-PCR ha resultado exitosa para realizar el diagnstico del virus de influenza A (H1N1) pandmico, permitiendo recuperar un gran porcentaje de muestras que fueron IFI negativas. El contar con resultados rpidos y especficos permiti tomar decisiones adecuadas minimizando el impacto en salud pblica.
P256 - 27921 EFECTO DE MACRFAGOS SOBRE EL METABOLISMO OXIDATIVO DE BIOFILMS DE Candida albicans. ARCE MIRANDA, JULIO EDUARDO(1); BARONETTI, JOSE LUIS(1); SOTOMAYOR, CLAUDIA ELENA(2); ALBESA, INES(1); PARAJE, MARIA GABRIELA(1)
(1) Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Nacional de Crdoba, (2) Departamento de Bioqumica Clnica, CIBICI, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Nacional de Crdoba. Introduccin: Candida albicans es el principal patgeno fngico aislado en humanos, causando un gran nmero de infecciones intrahospitalarias. Muchas de stas, estn asociadas al uso de dispositivos biomdicos, tales como catteres, sondas y dispositivos intrauternos, donde Candida posee la capacidad de formar biofilms sobre la superficie. Estudios previos de nuestro grupo de trabajo han demostrado que el tratamiento de biofilms de C. albicans con macrfagos (M), por perodos de tiempos cortos, resulta en una modificacin de la biomasa probablemente asociada al metabolismo oxidativo del mismo. Objetivo: En el presente estudio, nuestro objetivo fue evaluar la presencia de diferentes metabolitos oxidativos en biofilms maduros de C. albicans expuestos a tratamientos prolongados con M, lo que podra estar relacionado con el nivel de biomasa presente en el sistema. Materiales y mtodos: *Modelo experimental: C. albicans fue incubada en microplacas de polipropileno de 96 pocillos por 48 hs para formar el biofilms maduro. Posteriormente, a este biofilms se le agreg M (lnea celular de ratn -RAW-) o medio (RPMI). La determinacin de biomasa, especies reactivas del oxigeno (ERO) y especies reactivas del nitrgeno (ERO) fue realizada luego de 24 hs de la co-incubacin. *Determinacin de Biomasa: La biomasa fue cuantificada a travs de la coloracin con cristal violeta, y una Unidad de Biomasa de Biofilm (UBB) fue definida arbitrariamente como una densidad ptica de 0,1 leda a 595 nm (DO595) (1 UBB = 0,1 DO595). *Especies Reactivas del Oxigeno y Nitrgeno: Las ERO fueron detectadas por reduccin de Azul de Nitro Tetrazolio (NBT) a Azul de Formazn, mientras que la presencia de ERN (nitritos) fue evaluada mediante la tcnica de Griess. Resultados: La adicin de M a los cultivos result en un incremento de la biomasa de biofilms maduro con respecto a los cultivos controles (RPMI). Adems, este incremento en la formacin de biofilms fue acompaada de una disminucin en los niveles intra y extracelulares de ERO. En contraste, la produccin de ERN en biofilms co-cultivados con M no fue significativamente modificada con respecto a la observada en cultivos sin tratamiento. Nuestros resultados muestran que el cultivo prolongado de biofilms maduros de C. albicans con M es capaz de generar reacciones que se traducen en alteraciones de biomasa microbiana y del metabolismo oxidativo del sistema; indicado por un aumento de la relacin ERO/ERN con respecto a UBB. Por lo tanto, el modelo in vitro diseado result apropiado para observar que los M pueden interactuar con biofilms ya formados, generando modificaciones metablicas. No obstante, futuros estudios son necesarios para dilucidar el mecanismo por el cual estas clulas inducen estos fenmenos.
P255 - 27760 APLICACIN DE NUEVAS TCNICAS PARA EL DIAGNSTICO DE VIRUS DE INFLUENZA A EN SALTA, ARGENTINA. POMA, RAMIRO(1); RASKOVSKY, VIVIANA(2); GENTILE, ALBERTO(3); RAJAL, VERONICA(1,4)
(1) Instituto de Investigaciones para la Industria QumicaCONICET, (2) Hospital del Milagro, (3) Departamento de Epidemiologa, (4) FOGARTY Center Introduccin. Hasta inicios del ao 2009 los virus influenza que circulaban en nuestro pas fueron cepas de influenza A subtipos H1N1 y H3N2 estacionales. En el ao 2009 surgi un nuevo virus influenza A con material gentico de diferentes orgenes, al que se lo llam influenza A (H1N1) pandmico. Ante la rpida propagacin de esta nueva especie viral, la Organizacin Mundial de la Salud declar la pandemia, lo que signific un gran desafo a nivel mundial para desarrollar tcnicas rpidas, sensibles y especficas en el diagnstico que permitieran tomar medidas sanitarias oportunas. Objetivo: Realizar el diagnstico de Influenza A (H1N1) empleando mtodos sensibles, rpidos y especficos en Salta, Argentina. Materiales y Mtodos. Se analizaron muestras (hisopados y aspirados nasofarngeos) de pacientes ambulatorios y hospitalizados, incluyendo todos los grupos etarios, de la provincia de Salta. A partir de la semana epidemiolgica 35 del ao 2009 se aplic la siguiente metodologa de trabajo. Panel de virus respiratorios (influenza A, influenza B, adenovirus, virus sincicial respiratorio, virus parainfluenza) utilizando tcnicas de Inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos monoclonales especficos para cada tipo de virus, segn se vena trabajando en aos anteriores en la Unidad Centinela (Hospital del Milagro). La totalidad de las muestras de las semanas epidemiolgicas 35 y 36 fue tambin analizada mediante RT-PCR en tiempo real (qRTPCR) para identificacin de Influenza A (H1N1) pandmico. Los cidos nucleicos fueron extrados empleando kits comerciales (Invitrogen) y el protocolo empleado para qRT-PCR fue el publicado por el Center of Disease Control (USA, Abril 2009). Las actividades se dividieron coordinadamente en dos estaciones de trabajo: recepcin, toma de muestras y extraccin de cidos nucleicos en Hospital del Milagro y diagnstico molecular en Laboratorio de Aguas de la Universidad Nacional de Salta, empleando un equipo GenAmp Sequence Detection 5700 (Applied
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P257 - 27988 ANLISIS DE COMPLEJOS DE NEUROTOXINA BOTULNICA TIPO A PRODUCIDOS A DISTINTOS TIEMPOS DE CULTIVO. CABALLERO, PA(1); DE JONG, LIT (1); SOSA, MA(2); PAREJAS, V (1); FERNANDEZ, RA (1).
(1) Facultad de Ciencias Mdica, Universidad de Cuyo, (2) Instituto de Histologa y Embriologa (IHEM). Las neurotoxinas botulnicas (NTBo) son proteasas Zn2+ dependiente de 150 kDa, asociadas a componentes proteicos no txicos hemaglutinantes y no hemaglutinantes, formando complejos de 300, 600 y 900 kDa (molculas M, L y LL). Nuestros estudios preliminares realizados con NTBo A en cultivos de 4 das, purificada por precipitacin tanto cida como salina (NH<4>SO<4>) mostraron electroforeticamente bandas del complejo L (500 kDa) de alta pureza, pero n el complejo LL. Nuestro objetivo fue determinar la produccin de los distintos complejos neurotxicos a diferentes tiempos de incubacin del cultivo. Se seleccion la cepa prototipo A-Hall de Clostridium botulinum. Se produjo toxina en medio de cultivo lquido: 2,4% triptycase, 0,5% proteosa peptona, 0,5% extracto de levadura, 0,5% glucosa, pH 7,2 final incubado 72 h a 34C en atmsfera aerbica. Se tomaron alcuotas de 200 ml a las 14, 24, 48 y 72 h. Se centrifugaron a 10.000 rpm, 30 min, 4C, descartndose los sedimentos. Los sobrenadantes se precipitaron con cido tricloroactico (ATa) al 10%, 30 min en bao de hielo y centrifugaron a 13.000 rpm,10 min a 4C. Los sedimentos alicuotados en dos se redisolvieron en: a) 1 ml de buffer fosfato (RBF) 30 mM y b)1 ml Nonidet P40 (RNP) al 10%. Se midi su concentracin proteica por Lowry (mg/ml) y se analizaron por PAGE-nativa (6% acrilamida), con NTBo B (cepa William Hooper) como marcador de PM (600 kDa) durante 6 h, 25 mV x gel y revelado con Azul de Coomassie. Se detect NTBo en el cultivo de 14 h por inoculacin intraperitoneal. Los sedimentos de la precipitacin con ATa resultaron muy poco solubles RBF y parcialmente solubles en RNP. La concentracin proteica en las cuatro muestras del RBF fue muy baja y en valor a la mitad que en el RNP (Tabla 1). En la electroforesis, en el gel 1 (RBF): No se observaron bandas en ninguna de las muestras para los distintos tiempos de incubacin. En el gel 2 (RNP): todas las muestras presentaron una nica banda dbil y todas de semejante intensidad, correspondientes estimativamente a un PM 500 kDa (complejo L de la NTBo A).
Tiempo de incubacin (h) 14 24 48 72 Concentracin de protenasmg/ml (Mtodo Lowry) Buffer fosfato 30 mM NP40 10%
y anaerobios localizados en la cavidad oral que se adhieren a la superficie dentaria, espacios interdentarios u otras superficies, formando una comunidad estructurada y heterognea de clulas ssiles rodeadas por una matriz exopolisacrida de origen salival y microbiano. La formacin de este bioiflm incluye una serie de pasos que comienzan con la colonizacin inicial de la biopelcula y termina con la compleja formacin de un biofilm maduro generalmente mixto. Dentro de la placa los microorganismos sobreviven con fenmenos de sinergismos y cooperacin, produciendo sustancias necesarias para otras especies vecinas, sustancias adherentes que se entremezclan y conservan el biofilms intacto sobre la superficie dental pudiendo producir infecciones. En el conducto radicular de infecciones endodnticas primarias predomina Enterococcus faecalis. Esta especie necesita escasa cantidad de nutrientes para su desarrollo y no necesita de sinergias con otros microorganismos. Objetivo: Desarrollar un modelo de infeccin con formacin de biofilms en conductos radiculares de dientes y en superficies abiticas por E. faecalis. Materiales y Mtodos: Se realiz la infeccin de los dientes (n=20) con un cultivo over night de E. faecalis ATCC 29212 en el conducto radicular y posterior incubacin durante 60 das a 37 C. La formacin de biofilms in vitro de se cuantific mediante la adhesin a placas de poliestireno de 96 wells, coloracin con cristal violeta, elucin con alcohol/acetona y posterior cuantificacin espectrofotomtrica para determinar la densidad ptica (D.O.) a 595 nm. La expresin del curli caracterstico de especies formadoras de biofilm se analiz mediante la tcnica de rojo congo. Por microscopa confocal de exploracin lser (MCEL) y coloracin diferencial con dos marcadores fluorescentes con ioduro de propido/isotiocianato de fluorescena (FITC) se estudi la formacin de biofilm en el conducto radicular en los dientes infectados. Resultados: E. faecalis ATCC 29212 aislada del conducto radicular, posterior a su infeccin, mostr alta formacin de biofilm (D.O.: 3,365 0.021) estudiada por microtcnica en superficies polimricas. Con la tcnica del rojo congo se visualizaron las caractersticas colonias negras de cepas formadoras de biofilms. MCEL se pudo observar la formacin de biofilm en el conducto radicular, obteniendo informacin de la estructura en 3 dimensiones y la diferenciacin entre la matriz extracelular coloreada de verde por FITC y las clulas ssiles teidas de naranja por el IP. El modelo de infeccin diseado result apropiado para evaluar la formacin de biofilms de E. faecalis tanto en el conducto radicular del diente como en superficies polimricas. Este modelo podra ser til para estudios posteriores de la accin de irrigantes o antibiticos para el control de las enfermedades infecciosas de la cavidad bucal.
0,55 0,67 0,79 0,48
1,25 1,31 1,55 0,98
En conclusin, el precipitado fue soluble slo parcialmente en NP40, e insoluble en buffer RBF. No hubo variaciones significativas en la concentracin proteica (NTBo A) para los distintos tiempos de incubacin. En los geles del RNP slo se observaron complejos correspondientes a la forma L (500 kDa), la ausencia de la LL (900 kDa) puede deberse a inestabilidad del complejo en las condiciones experimentales o a una alta insolubilidad que impedira su ingreso al gel. La ausencia de bandas con el RBF evidencia la insolubilidad de la protena en el buffer fosfato.
P259 - 28057 EXPRESIN DE GENES PRO Y ANTI-APOPTTICOS EN MACRFAGOS PERITONEALES DE RATN INFECTADOS CON Clostridium septicum. VILLA, CECILIA (1); CACERES, CLAUDIA (1); RODRIGUEZ, YAMILA (1); ORTIZ, RODOLFO (1); VEGA, ALBA (1); SOTOMAYOR, CLAUDIA (2); CORTIAS, TERESA (1).
(1) Universidad Nacional de San Luis (UNSL), (2) CIBICICONICET Facultad de Ciencias Qumicas Universidad Nacional de Crdoba. Clostridium septicum es un bacilo anaerobio agente causal del edema maligno en los animales de sangre caliente y gangrena traumtica y no traumtica en el hombre. Estas enfermedades mionecrticas evolucionan con un alto ndice de mortalidad. Una de las caractersticas mas sobresalientes de la mionecrosis producida por este microorganismo es la ausencia de clulas fagocticas en el sitio de infeccin. Tanto la induccin de apoptosis o de necrosis son considerados mecanismos de evasin del sistema inmune innato que pueden producir algunos microorganismos, ya que logran la destruccin de clulas claves del sistema inmune. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de C. septicum de inducir la expresin de molculas pro y antiapoptticas en macrfagos peritoneales de ratn a diferentes multiplicidades de infeccin (MDI) y tratados con protenas extracelulares secretadas por este patgeno durante su cultivo. Macrfagos peritoneales de ratn fueron infectados a diferentes
P258 - 28032 FORMACIN DE BIOFILM DE Enterococcus faecalis EN CONDUCTO RADICULAR DE DIENTES. MARTN, G (1); ARCE MIRANDA, J (2); ANGEL VILLEGAS, N (2); RAVETTI, S (2); VISVISIN, C (1); PARAJE, MG (2)
(1) Facultad de Odontologa, UNC, (2) Facultad de Ciencias Qumicas, UNC Introduccin: la cavidad bucal posee aspectos ecolgicos que facilitan el establecimiento y crecimiento de una gran variedad de microorganismos como bacterias, hongos y virus. La placa dental (o biofilm dental) es un conjunto de microorganismos aerobios
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MDI=3:1, 30:1, 100:1, empleando clulas de C. septicum ATCCC 10092 y sobrenadantes libres de clulas al 10%, obtenidos en fase logartmica de cultivo. La presencia de apoptosis fue determinada mediante cambios morfolgicos observados por microscopa ptica, Annexin VCY3 y presencia de ladder del DNA. La expresin de genes pro y anti-apoptticos se determin por RT-PCR. El RNA total fue obtenido mediante el empleo del reactivo de trizol. Para la realizacin de la RT-PCR,el RNA fue transcripto a cDNA y usado para la amplificacin de los genes bax, bcl2 y gpdh como gen constitutivo, usando inciadores especficos. Las bandas resultantes fueron semicuantificadas mediante el software Scion Image. La expresion bax fue 2.5 veces mayor con respecto al control a bajas MDI (3:1) y tratado con el sobrenadante de cultivo, y de 1.7 veces a la MDI 30:1 y prcticamente no se expres a MDI=100:1. La mxima expresin de gen anti-apopttico bcl2 se observ en el control sin infectar, y disminuy dos y tres veces a MDI 3:1 y 100:1 respectivamente. La expresin de genes pro-apptcos y anti-apoptticos vara de acuerdo a la MDI ensayada . Bajas MDI al igual que bajas concentraciones de los sobrenadantes inducen la expresin del gen pro-apopttico en concordancia con la induccin de apoptosis observada en macrfagos murinos.Por el contrario cuando se infecta a altas MDI de C. septicum los macrfagos no expresan el gen pro-apottico e inducen muerte celular por necrosis. El nmero de bacterias es probablemte baja al comienzo de la infeccin, por lo que la evasin del sistema inmune empleando el mecanismo de apoptosis, podra ser importante para el establecimiento de la enfermedad mionecrtica. Este es el primer trabajo dirigido a comparar la regulacin de estos dosgenes en macrfagos infectados con C. septicum a bajas y altas MDI.
plsmidos suicidas y electroporacin de ADN) de un mutante de C. perfringens derivado de la cepa 13 deficiente en la produccin de CcpA demostramos que la expresin de las toxinas alfa (PLC) y Mu (NagH) se encuentra bajo represin catablica dependiente de CcpA, mientras que la represin catablica de la toxina theta (PFO) es independiente de CcpA. Ms an, demostramos la existencia de un nuevo rol de CcpA, independiente de represin catablica, sobre la produccin de las tres toxinas ensayadas (PLC, PFO y NagH). Los nuevos roles, dependientes e independientes de represin catablica, del regulador tanscripcional CcpA de C. perfringens sumado a trabajos anteriores de nuestro grupo (sobre la formacin de esporas y la movilidad asociada a superficies tipo gliding de este patgeno) permiten disear un escenario concreto para el desarrollo de nuevos tipos de antibiticos inhibidores del gliding y la produccin de toxinas como posible tratamiento y/o prevencin del desarrollo de la gangrena gaseosa en humanos.
P261 - 28125 CAPACIDAD DE FORMACIN DE BIOPELCULA DE ESTREPTOCOCOS GRUPO MUTANS (EGM) IN VITRO Y SU POSIBLE RELACIN CON RIESGO DE CARIES DENTAL. BIONDI, LUCIANA (1); MATEU GAGLIARDI, JANINA (1); MOLINAS, KARINA (1); PIGNOLO , MARCELINO (1); ARANCEGUI, NORBERTO (2); HERMIDA LUCENA, PERLA SONIA (2).
(1) Facultad de Odontologa, (2) Comisin de Investigaciones Cientficas, Universidad Nacional de Rosario. Con el objeto de contribuir a conocer posibles relaciones entre capacidad de formacin de biopelcula de EGM y riesgo de caries dental, se evaluaron 6 muestras de saliva provenientes de 2 grupos de varones de entre 7 y 12 aos, 3 de alto riego (AR) y 3 de bajo riesgo (BR). El grupo AR est integrado por pacientes con ndice de cariados perdidos y obturados (CPOd) mayor de 5 y con 3 o ms caries activas y el grupo BR con ndice de CPOd menor de 3 y sin caries activas. Se aislaron en agar mitis salivarius sacarosa, bacitracina y telurito de potasio 53 cepas, tipificadas por pruebas bioqumicas (produccin de catalasa, fermentacin de manitol, produccin de perxido de hidrgeno, resistencia a bacitracina 2UI/ml e hidrlisis de arginina, tcnica validada con cepas testigos CECT) y confirmadas con API 20 Strep (Lab. bioMrieux); de stas 25 pertenecan al grupo AR y 28 al grupo BR, 37 eran S. mutans, (AR:15; BR:22), 1 S. sobrinus (AR), 10 S. rattus (AR:4; BR:6) y 5 no pudieron ser tipificadas por lo que fueron descartadas. Las cepas se sembraron en agar triptena soja (ATS - Lab. Britania) y se incubaron 24 hs. en microaerofilia y 24 hs. en aerobiosis, se repicaron en caldo triptena soja (CTS- Lab. Britania) 48 hs. para obtener masa bacteriana en fase log. Se diluyeron en CTS hasta una DO436: 0,5 equivalente entre 5 x 107 y 1 x 108 clulas/ml, a partir de sta se sembraron 200 l en microplaca de poliestireno de 96 pocillos, por triplicado. Se incubaron 24 hs. en microaerofilia y 24 hs. en aerobiosis con agitacin. La biomasa total se estim midiendo la DO550. Se realizaron 3 lavados con agua destilada estril, se agregaron 200l de solucin de cristal violeta 0,01% y se incub 30 minutos. Se lav con agua destilada estril, se extrajo con 200l de etanol 95% y se cuantific la biopelcula formada midiendo la DO550 del cristal violeta disuelto usando espectrofotmetro de microplaca. Cada cepa fue clasificada de la siguiente manera: Productor dbil de biopelcula: DO550 2xDOc, productor moderado: DO550 >2xDOc 4xDOc y productor fuerte: DO550 >4xDOc; dnde DOc es la DO del medio sin inocular (control) y DO550 = DO del cristal violeta (biopelcula)/DO de la biomasa total. Resultados: De las 25 cepas con AR 2 fueron dbiles formadoras de biopelcula, 4 formadoras moderadas y 19 fuertes formadoras; de las 28 cepas BR 26 (92,86%) fueron formadoras dbiles, 2 fueron moderadas y ninguna mostr capacidad de formacin de biopelcula alta. El anlisis con la prueba de &X mostr p<0,0001. Conclusin: Los resultados obtenidos en estas pruebas sugieren la existencia de una posible relacin entre capacidad de formacin de biopelcula y el riesgo de caries dental, y permiten proponer la existencia de una mayor tendencia a la formacin de biopelcula en las cepas provenientes de pacientes de AR comparadas con las cepas de BR. Es muy significativo el resultado obtenido en las muestras provenien-
P260 - 28092 REPRESIN CATABLICA DE LA PRODUCCIN DE TOXINAS EN LA BACTERIA ANAEROBIA PRODUCTORA DE GANGRENA GASEOSA Clostridium perfringens. MENDEZ, MARCELO(1); RAMIREZ, WALTER(1); GRAU, ROBERTO(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional de Rosario. Laboratorio de Microbiologa Bsica y Aplicada. CONICET-Rosario. La bacteria anaerobia, gram-positiva formadora deesporas Clostridium perfringens es responsable de la produccin de severas lesiones gastrointestinales e histo-txicas siendo la de mayor importancia mdica la gangrena gaseosa. Una vez iniciada su avance es rpido y devastador an en presencia de terapia con antibiticos. Para el desarrollo de la gangrena en humanos, C. perfringens debe producir y secretar diversas exo-toxinas siendo las ms relevantes las toxinas alfa (PLC) y theta (PFO). Pese a que C. perfringens solo es capaz de desarrollar en hbitats extremadamente ricos en nutrientes (como el cuerpo humano) poco es lo que se conoce, a nivel molecular, sobre las seales ambientales y nutricionales que impactan sobre la virulencia y produccin de toxinas por parte de este patgeno. En este trabajo decidimos estudiar qu conexin existe entre la disponibilidad de carbono (regulacin catablica por C) y la produccin de toxinas relevantes para el desarrollo de la gangrena. A partir de extractos celulares de C. perfringens se comprob que la actividad hemoltica (PFO) y lipasa (PLC) se ve notoriamente disminuida cuando la bacteria es crecida anaerbicamente en presencia de azcares fcilmente metabolizables (glucosa, fructosa, sacarosa, etc.). Mediante ensayos de actividad beta-glucuronidasa de fusiones reporteras transcripcionales a los promotores de los genes codificantes para dichas toxinas (plc-gusA y pfo-gusA) introducidas por electroporacin de ADN en una cepa de referencia productora de gangrena gaseosa (cepa 13) se comprob que el efecto negativo de los azcares se produce a nivel transcripcional (represin catablica por azcares). Esta conclusin fue confirmada por estudios de RT-PCR que mostraron que aparte de existir represin catablica por C sobre plc y pfo tambin se ve regulada, negativamente, la expresin de nagH que codifica para la toxina hialuronidasa (toxina Mu). En bacterias gram-positivas, como B. subtilis y lactobacilos, el regulador transcripcional CcpA desempea un rol clave en la regulacin por carbono de la expresin gnica. A travs de la construccin (mediante la utilizacin de
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tes de pacientes BR en los que ninguna cepa evaluada mostr alta capacidad de formacin de biopelcula. Estos resultados nos estimulan a profundizar nuestro trabajo de investigacin.
PRESENTACIONES DE PSTERES -SALON B14:00 - 19/10/2010 (MAR) - DE POSTERS B PRESENTACIONES POSTER

P262 - 27166 MECANISMOS INMUNITARIOS TEMPRANOS ASOCIADOS AL CLEARANCE BACTERIANO PULMONAR EN RATONES INMUNIZADOS POR LA VA NASAL CON PROTENAS DE MEMBRANA EXTERNA DE Burkholderia multivorans. RESTELLI, MARCELA (1); BERTOT, GUSTAVO (2).
(1) HOSPITAL DE NIOS RICARDO GUTIERREZ (HNRG), (2) Instituto Universitario de Ciencias de la Salud (IUCS). El complejo Burkholderia cepacia (Bcc) ha emergido como un patgeno multirresistente asociado a infecciones en individuos inmunocomprometidos, en la enfermedad granulomatosa crnica y la fibrosis qustica. Las citoquinas pro-inflamatorias han sido implicadas como factores principales en la patognesis de la fibrosis qustica, y Bcc son importantes inductores de citoquinas. El dao pulmonar severo se encuentra asociado a un ciclo continuo de infeccin e inflamacin. El objetivo fue determinar el papel de la inmunizacin por va intranasal (in) con protenas de membrana externa de B. multivorans (BmOMP) en el control temprano de la colonizacin e infeccin por Bcc y de la inflamacin asociada a la infeccin pulmonar. Se inmunizaron ratones (in) a das 0, 7 y 14, con BmOMP + adamantilamida dipptido como adyuvante de mucosas, o PBS como grupo control. A da 21, ambos grupos fueron desafiados por va in con 1 x10^7 ufc de B. multivorans y sacrificados a 2; 6; 24 y 48 h postinfeccin (hpi), o con B. cenocepacia y sacrificados a las 24 hpi. Se tomaron muestras de sangre, de lavado broqueoalvolar (BAL) y se extirparon los pulmones. Los ratones del grupo BmOMP presentaron un mayor clearance bacteriano pulmonar con una reduccin de 1,38 log en la carga bacteriana respecto de los controles. A 48 hpi, el grupo control present >99% de las bacterias en el parnquima pulmonar, mientras que el grupo BmOMP solamente 50%. La inmunizacin con BmOMP estimul la produccin de anticuerpos de tipo IgA secretora anti-BmOMP en suero y BAL con actividad bactericida. Adems, se determin la expresin relativa de IL-1, IFN-gamma, TNF-alfa, TGF-, IL-10 y IL-1ra y xido ntrico sintetasa inducible (iNOS), mediante RT-PCR semicuantitativa, en tejido pulmonar. Ambos grupos de inmunizacin presentaron un incremento en la expresin de TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1, respecto de la expresin basal. La expresin de TNF-alfa e IFNgamma fue ms temprana en el grupo control (p<0,05). Si bien, a 2 hpi se observ aumento de IL-1 en ambos grupos, este fue mayor en el grupo control. Por el contrario, en el grupo BmOMP la induccin de TGF-, IL-10 e IL-1ra fue ms temprana y con niveles mayores en el curso del experimento. Se observ mayor expresin de iNOS en el grupo control junto con una mayor concentracin de NO en los homogenatos de pulmn. Adems, los macrfagos alveolares purificados de BAL de los animales inmunizados con BmOMP presentaron a las 24 hpi una menor carga bacteriana intracelular y una menor produccin de NO respecto del grupo control. Se observaron resultados similares cuando se desafi a ambos grupos de inmunizacin con B. cenocepacia. Los resultados se analizaron utilizando el test t de Student y ANOVA. Las diferencias se consideraron significativas con p<0,05. La inmunizacin nasal con BmOMP (1) aumenta el clearence bacteriano pulmonar desde los primeros momentos posteriores a un desafo pulmonar con B. multivorans o B. cenocepacia, (2) controla la invasin del parnquima pulmonar y disminuye la capacidad de invasin y de sobrevida intracelular de esta bacteria en macrfagos alveolares y (3) induce mayor expresin de citoquinas anti-inflamatorias, lo cual podra limitar el dao pulmonar evocado por la inflamacin durante la infeccin con Bcc.
P263 - 27278 FRECUENCIAS CARACTERSTICAS DE ABSORCIN INFRARROJA DE LOS GRUPOS FUNCIONALES MS IMPORTANTES PRESENTES EN P. vulgaris Y S. cohnii Y SU BIOFILM. GAUDIOSO DE ALLORI, MA CRISTINA (1); PORCEL, NORMA (1); DE GREGORIO, PRISCILA (1); AYBAR, MARIANA (1); CECILIA DE CASTILLO, MARTA (1).
(1) Universidad Nacional de Tucuman (UNT) El espectro infrarrojo de un microorganismo resulta de la absorcin de los modos vibracionales de las molculas de la clula. La espectroscopia infrarroja-trasformada de Fourier (FT-IR) es un mtodo para detectar estos componentes y depende del estado fisiolgico del microorganismo ya que el espectro refleja la composicin bioqumica de las clulas. El objetivo del trabajo fue identificar los grupos funcionales ms importantes y el biofilms de P. vulgaris y de S. cohnii por esta metodologa. Se obtuvieron dos espectros de cada cepa: en estado planctnico y biofilm: Para el espectro en estado planctnico: 100 l de la suspensin de 5x10(a la 5) ufc/ml fue transferida a una ventana de cloruro de plata y secada por vaco moderado entre 60 y 70 mm de Hg para obtener una pelcula transparente y homognea. Para el espectro del biofilm: La suspension en LB se incub a 37 C durante 48 h. Se colocaron 3 g de perlas de polipropileno esterilizadas. Se incub 24 h. Las perlas se lavaron tres veces de modo suave con agua estril. En 2 ml de agua estril se agitaron para despegar biofilm. Se coloc 100 l de la suspensin homognea en una ventana de cloruro de plata y se procedi como en la muestra anterior. Los espectros fueron registrados entre 4.000 y 650 cm-1 en un espectrmetro Perkin Elmer modelo GX (EEUU), equipado con un detector de sulfato de triglicina deuterado. Cada espectro se midi con 4 cm-1 de resolucin y resulto del promedio de 100 escaneos. Se realiz el anlisis por separado de P. vulgaris y S. cohnii en estado planctnico y de su biofilm. Se compararon las diferencias de los espectros, centrando la atencin en el rango espectral correspondiente a los hidratos de carbono, componente principal del biofilm. La interpretacin se realiz en base a tablas con rango espectral y de asignacin de absorciones infrarrojas para el anlisis de muestras biolgicas. En las dos cepas, en el espectro en estado planctnico se observan bandas de mayor intensidad de absorcin en las ventanas donde predominan las estructuras lipdicas de pared, membranas celulares, y estructuras proteicas de la clulas, con respecto a la bandas observadas en la ventana que corresponde a hidratos de carbono. En los espectros del biofilm se observ, una intensificacin de bandas que confirma la mayor presencia del exopolisacrido secretado por las clulas en la formacin del biofilm. La banda de mayor absorbancia en el espectro del biofilm de P.vulgaris se observ a 1017 cm-1, no presentndose esta en el espectro de la bacteria, en S. cohnii se observ la mayor absorbancia para biofilms a 1083 cm. Para la comparacin de las frecuencias caractersticas de absorcin infrarroja de los grupos funcionales en estado planctnico y biofilm se superpusieron ambos espectros. Se seleccion la regin espectral correspondiente a hidratos de carbono y la correspondiente al fingerprint. Este trabajo permite definir una estrategia para la diferenciacin de biofilm de inters en microbiologa clnica, basada en espectroscopia vibracional que demuestra ser rpida, de bajo costo y apropiada resolucin.
P264 - 27525 ACTIVACIN DEL MECANISMO DE QUORUM SENSING POR UVA EN Pseudomonas aeruginosa. PEZZONI, MAGDALENA (1); PIZARRO, RAMON (1); COSTA, CRISTINA (1).
(1) Comisin Nacional de Energa Atmica (CNEA) Pseudomonas aeruginosa es un microorganismo muy verstil presente en diversos ambientes. Esta bacteria es capaz de responder a su densidad poblacional liberando seales qumicas que a cierta concentracin umbral regulan la expresin de cientos de genes, como aquellos relacionados con virulencia y defensa antioxidativa. Este mecanismo, llamado Quorum sensing (QS), comprende dos sistemas principales, las y rhl, cuyas seales o
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autoinductores son las homoserina lactonas 3OC12-HSL y C4HSL, respectivamente. Bajo ciertas condiciones extremas, QS puede inducirse prematuramente, lo que sugiere un mecanismo adaptativo. Uno de los principales factores de estrs a los que deben enfrentarse las bacterias en la naturaleza es la luz ultravioleta A (UVA), cuyos efectos obedecen en parte a dao oxidativo. Datos previos de nuestro laboratorio indicaron que ambos sistema de QS son esenciales en la defensa contra dosis letales de UVA, mientras que slo el sistema rhl es relevante cuando la dosis es subletal. El objetivo del trabajo fue determinar si la exposicin a dosis subletales de UVA es capaz de activar la produccin de seales de QS. Se obtuvieron suspensiones celulares a partir de cultivos estacionarios de la cepa PAO1: una fraccin se irradi con UVA durante 60 o 120 minutos (tasa de fluencia 20W/m), mientras que la otra permaneci en oscuridad. Se resuspendieron muestras de estas fracciones en medio completo a DO=0,1 y se incubaron hasta DO=0,5, extrayndose luego los autoinductores con acetato de etilo. Los niveles de autoinductores se determinaron midiendo la actividad de -galactosidasa de cepas portadoras de plsmidos reporteros especficos para 3OC12HSL (DH5a pKDT1.7) y C4-HSL (PAO-JP2 pECP61.5) crecidas en presencia de los extractos. Los extractos obtenidos a partir de clulas previamente irradiadas durante 120 minutos triplicaron los niveles de -galactosidasa del plsmido pECP61.5 (reportero de C4-HSL), respecto de los extractos provenientes de clulas no irradiadas. Contrariamente, los niveles de -galactosidasa del plsmido pKDT1.7 (reportero de 3OC12-HSL) no mostraron diferencias al ser tratados con ambos tipos de extracto. Cuando la irradiacin se llev a cabo durante 60 minutos el resultado fue similar, salvo que los niveles de -galactosidasa del plsmido pECP61.5 se duplicaron en presencia de extracto de clulas irradiadas con respecto al control. Los resultados obtenidos se confirmaron mediante la cuantificacin de piocianina en cultivos ensayados para -galactosidasa de la cepa PAO-JP2 pECP61.5. Esta cepa no produce piocianina ya que no produce C4-HSL. Se observ un incremento significativo de piocianina en la cepa PAOJP2 pECP61.5 cuando creci en presencia de extracto de clulas irradiadas comparado con extractos de clulas no irradiadas, sugiriendo una mayor concentracin de C4-HSL. Se concluye que dosis subletales de radiacin UVA son capaces de activar la produccin de la seal C4-HSL en P. aeruginosa. Los resultados obtenidos permiten sugerir que la induccin del sistema de QS rhl por UVA independientemente de la densidad celular, podra actuar como un mecanismo adaptativo contra los efectos txicos de la radiacin, induciendo por ejemplo la transcripcin de genes involucrados en funciones protectoras, como aquellos relacionados con la defensa antioxidativa.
ello, se emplearon cultivos estacionarios de la cepa silvestre PAO1 y sus derivadas JP1 (lasI), PDO100 (rhlI) y JP2 (lasI rhlI). La influencia del oxgeno en la muerte radioinducida se analiz irradiando durante 180 minutos a una tasa de fluencia de 20 W/m en atmsfera de nitrgeno o aire y comparando la sobrevida en ambas condiciones. El estrs oxidativo se evalu por el mtodo de quimioluminiscencia. Se determin la actividad de las enzimas catalasa y SOD antes y luego de irradiar. La irradiacin en atmsfera de nitrgeno permiti una restauracin de la viabilidad de todas las cepas ensayadas, sobre todo en el caso de la cepa ms sensible, el doble mutante JP2. En comparacin con la cepa PAO1, las derivadas defectivas en QS mostraron un incremento en la quimioluminiscencia al ser expuestas al UVA. La actividad de catalasa fue mxima en la cepa silvestre; mientras que los mutantes lasI y rhlI mostraron un 55% de la actividad de PAO1, la cepa lasI rhlI present slo el 10% de la actividad de catalasa del tipo silvestre. Se observ una reduccin en la actividad de SOD en los mutantes lasI JP1 y JP2, que presentaron 32% y 16% de la actividad de la cepa PAO1, mientras que el mutante rhlI mostr una actividad similar al tipo silvestre. Luego de irradiar, la actividad de catalasa se redujo en todas las cepas, mientras que la actividad de SOD no se modific. Los resultados obtenidos sugieren que gran parte del dao radioinducido por UVA en mutantes de QS es de naturaleza oxidativa. En estas condiciones, la actividad de catalasa depende de ambos sistemas de QS y se reduce significativamente por exposicin al UVA; contrariamente, la actividad de SOD slo depende del sistema las y no se ve afectada por la radiacin. A la luz de estos resultados, se observa una correlacin entre los niveles de catalasa presentes en las cepas antes de irradiar y la sobrevida luego de exposicin a la radiacin..Los datos obtenidos indican que el sistema de QS es fundamental en la defensa contra el dao oxidativo generado por la radiacin UVA en P. aeruginosa, probablemente debido a su rol en la expresin de enzimas antioxidantes, principalmente catalasa.
P266 - 27578 CARACTERIZACIN DEL AUMENTO EN LA FORMACIN DE BIOPELCULA EN PRESENCIA DE CONCENTRACIONES SUBINHIBITORIAS DE VANCOMICINA (SUBVAN) EN Staphylococcus aureus. GORDIOLA, ML (1); ALVAREZ, LP (1); BARBAGELATA, MS (1); SORDELLI, DO (1); BUZZOLA, FR (1).
(1) Dpto. de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa. Facultad de Medicina, UBA La biopelcula bacteriana juega un rol fundamental en la produccin de infecciones crnicas. S. aureus responde a cambios ambientales por medio de una compleja red regulatoria que involucra diversos locus y factores de transcripcin. La expresin y composicin de la biopelcula depende fundamentalmente de las condiciones ambientales. El locus icaADBC codifica las enzimas necesarias para la produccin del polisacrido de adhesin intercelular (PIA), que promueve la adhesin y agregacin de las bacterias que forman la biopelcula. Recientemente, se demostr que S. aureus puede conformarse en un tipo de biopelcula icaindependiente, indicando que PIA no sera un componente fundamental de la misma, sino que tambin intervendran adhesinas como Eap (regulada positivamente por sae). Otros investigadores han reportado que las concentraciones subinhibitorias de algunos antibiticos afectan la expresin de los factores de virulencia en S. aureus. La vancomicina es el antibitico de eleccin para el tratamiento de infecciones producidas por S. aureus resistentes a meticilina. Sin embargo, en los ltimos aos, se reportaron fallas en el tratamiento, lo que gener un creciente inters en torno a la naturaleza de este problema. Considerando que la exposicin de la cepa Newman de S. aureus a subVAN (0.6g/ml) produjo un aumento significativo en la formacin de biopelcula (1.129 vs. 1.569), el objetivo del presente trabajo fue estudiar la expresin de aquellos genes involucrados en la formacin de la biopelcula y de los reguladores globales que los controlan bajo esas condiciones. Se utilizaron cultivos de la cepa Newman en TSB-glu 0.25% con o sin subVAN. La cuantificacin de biopelculas se realiz espectrofotomtricamente. El nivel de expresin de transcriptos se determin de forma cuantitativa y semicuan-
P265 - 27559 DAO OXIDATIVO POR EXPOSICIN A UVA EN MUTANTES DEFICIENTES EN QUORUM SENSING DE Pseudomonas aeruginosa. PEZZONI, MAGDALENA (1); FORTE GIACOBONE, ANA (1); PIZARRO, RAMON (1); COSTA, CRISTINA (1)
(1) Comisin Nacional de Energa Atmica (CNEA) Pseudomonas aeruginosa es una bacteria que se encuentra presente en gran variedad de ambientes, constituyendo adems un patgeno oportunista en humanos. En condiciones naturales est expuesta a diversos factores de estrs, como por ejemplo la radiacin solar UVA, que produce efectos letales debidos en parte a dao oxidativo. Entre las estrategias de P. aeruginosa para defenderse de las especies reactivas de oxgeno, se incluyen las enzimas catalasa y superxido dismutasa (SOD). La transcripcin de los genes de estas enzimas depende en parte del sistema de Quorum sensing (QS). QS es un mecanismo que regula la transcripcin de cientos de genes en respuesta a la densidad poblacional, e incluye dos sistemas de seales, las y rhl. Datos previos de nuestro laboratorio demostraron que mutantes deficientes en la sntesis de las seales de QS presentan una significativa disminucin de viabilidad al ser expuestos a dosis letales de UVA. El objetivo de este trabajo fue estudiar si los efectos letales del UVA en mutantes de QS se deben a dao oxidativo y la influencia de las enzimas catalasa y SOD en este fenmeno. Para
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titativa a partir de biopelculas o bacterias planctnicas con o sin subVAN. En el presente trabajo, mostramos que el efecto evidenciado en Newman no se produjo en la mutante isognica saedeficiente (1.453) en presencia de subVAN (1.285) (p=0.8089). Por otra parte, la subVAN no produjo cambios en la expresin de transcriptos icaA o icaR (represor de icaA) en las bacterias planctnicas, pero s aument la expresin del transcripto sae. El incremento de Eap por exposicin a subVAN se determin por SDS-PAGE. Asimismo, se estudi la expresin de los transcriptos del locus ica en la biopelcula formada en presencia de subVAN, se determin un aumento en el nivel de expresin de icaA y sae, mientras que el de icaR disminuy a la mitad. En conclusin, el aumento en la formacin de biopelcula por subVAN en la cepa Newman se debera tanto a la modificacin de la actividad del locus ica como a la expresin aumentada de protenas de superficie como Eap, que contribuiran en la adhesin intercelular a travs de la activacin de sae. La transcripcin de icaA e icaR en respuesta a subVAN difiere notablemente entre bacterias planctnicas o embebidas en biopelcula.
P268 - 27599 REEMPLAZO DE ESPECIES GENTICAS Y CLONES DEL COMPLEJO Burkholderia cepacia EN EL CURSO DE LAS INFECCIONES PULMONARES EN PACIENTES CON FIBROSIS QUSTICA PROCEDENTES DE ARGENTINA Y BRASIL. CASTAEDA, NANCY CLAUDIA (1); JERIC, PAOLA (1); PIVETTA, OMAR (2); CENTRON, DANIELA (1)
(1) Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Argentina, (2) Ctedra de Gentica, Facultad de Ciencias Biomdicas, Universidad Austral. Introduccin: La fibrosis qustica (FQ) es una enfermedad gentica autosmica recesiva. La infeccin pulmonar es la causa ms importante de morbilidad y mortalidad que se asocia a estos pacientes. El Complejo Burkholderia cepacia (BCC) es un problema cada vez mas preocupante en la comunidad fibroqustica por ser un patgeno oportunista, emergente en nuestro pas. Materiales y mtodos: Desde 2008 a 2010 se recibieron 150 muestras de esputo procedentes de Brasil y de Argentina de pacientes con FQ. En 96 muestras de esputo provenientes de 19 pacientes se identificaron por secuenciacin del gen recA diversas especies genticas de Burkholderia spp. Durante estos 3 aos de seguimiento (Agosto/2008-Agosto/2010) de nuestros pacientes con FQ, hemos observado un comportamiento particular en la cronicidad de la infeccin por Burkholderia spp. como as tambin en el reemplazo de determinadas especies genticas. A todas las muestras clnicas analizadas se les realiz extraccin de ADN, PCR del gen recA y posterior secuenciacin del fragmento de 385pb. Paralelamente se realizaron los cultivos y pruebas bioqumicas tradicionales para su identificacin. El anlisis de las secuencias se realiz por alineamiento de las secuencias en la base de datos BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast). Posteriormente se realiz el anlisis genotpico por RAPD. Resultados: Burkholderia cenocepacia result la especie ms frecuentemente identificada (17/96) a partir de las muestras de esputo tanto en pacientes con FQ de Argentina como de Brasil, correspondiendo a 8 pacientes. En 3/8 pacientes en los cuales se identific a B. cenocepacia, se detect el mismo perfil gentico por el estudio de RAPD. Dos de los pacientes eran hermanos de Brasil, y el tercer paciente era procedente de Argentina. Burkholderia multivorans se identific en 15/96 de las muestras de esputo. En uno de los pacientes, se detect el mismo perfil gentico en 3 aislamientos alternados. Burkholderia contaminans se detect en 7/96 muestras de esputo. En un paciente se detect el mismo perfil gentico en los 2 aislamientos consecutivos y en otro paciente la misma especie gentica present diferentes patrones genticos cuando se analiz por RAPD. El resto de las muestras (57/96) se identificaron diferentes especies genticas del complejo BCC. Conclusin: El RAPD permiti, no solo estudiar la transmisin de clones entre pacientes relacionados y no relacionados, sino que tambin result de utilidad para detectar reemplazo de clones en B. cenocepacia, en B.multivorans y en B.contaminans en el transcurso de la infeccin en diferentes pacientes con FQ.
P267 - 27581 PRODUCCIN DE NO POR MACRFAGOS BOVINOS DE LNEA CELULAR ESTIMULADOS CON INTERFERN &ALPHA; 2 RECOMBINANTE HUMANO Y DE CULTIVO PRIMARIO INFECTADOS CON Brucella abortus. HOLLENDER, DAIANA(1); CONDE, SANDRA(2); SALUSTIO, EDUARDO(2); CISTERNA, CECILIA(3); SAMARTINO, LUIS(2)
(1) CONICET,(2) Instituto de Patobiologa, CICVyA, INTA Castelar, Bs. As., Argentina, (3) CIC Antecedentes: La brucelosis bovina es una enfermedad zoontica causada por Brucella abortus, bacteria intracelular, gram-negativa. Los macrfagos juegan un rol importante en la respuesta inmune frente a Brucella. El interfern gama (IFN ) regula los mecanismos defensivos de los mismos y es considerado un factor crucial en la proteccin frente a la infeccin por Brucella. Los macrfagos producen xido ntrico (NO) a travs de la xido ntrico sintetasa inducible (NOSi), enzima que puede ser activada por IFN y lipopolisacrido (LPS). Dado que el LPS de Brucella sp. es 100 veces menos activo que el LPS de Escherichia coli, el tratamiento de macrfagos con IFN podra estimular la produccin de NO para ayudar a eliminar a las brucelas intracelulares. En ratones, el NO tiene un papel importante en la eliminacin de Brucella durante las infecciones in vivo, mientras que en humanos, la incapacidad para producirlo favorecera la cronicidad de las mismas. En macrfagos bovinos de la lnea celular BoMac la produccin de NO en respuesta a la infeccin por B. abortus es entre 5 y 50 veces menor que en macrfagos murinos de la lnea celular J774. Objetivo: El objetivo del trabajo es determinar si el IFN 2 rhu es capaz de activar a macrfagos bovinos de la lnea celular BoMac y establecer si macrfagos bovinos provenientes de un cultivo primario son capaces de producir NO en respuesta a la infeccin por B. abortus. Materiales y Mtodos: Se utilizaron la lnea celular BoMac y un cultivo primario que se estableci a partir de monocitos aislados de sangre perifrica de bovino. El tratamiento con 150U o 200U de IFN 2 rhu (Invitrogen) se realiz durante 24 hs. La activacin de los macrfagos se determin a travs de la estimacin del NO2- en el sobrenadante del cultivo mediante la reaccin de Griess utilizando un kit comercial (Molecular Probes). Los resultados se analizaron mediante ANOVAs utilizando el software Infostat. Resultados: No hubieron diferencias significativas entre los tratamientos con las dos concentraciones de IFN 2 rhu. El IFN 2 rhu tuvo un efecto significativo en la produccin de NO 2- en los macrfagos de la lnea BoMac comparado con los mismos sin tratar. La produccin de NO2-por macrfagos bovinos de cultivo primario infectados con B. abortus S19 es significativamente mayor a la produccin de NO2- por macrfagos sin infectar. Dado que el IFN 2 rhu aumenta la produccin de NO, estimada a travs del NO2- en el sobrenadante del cultivo, los macrfagos bovinos de la lnea BoMac son capaces de ser estimulados con el IFN 2 rhu utilizado. Los macrfagos bovinos de cultivo primario tienen la capacidad de producir NO en respuesta a la infeccin por de B. abortus S19.
P269 - 27647 DETERMINACIN DE DIFERENTES FACTORES DE VIRULENCIA REGULADOS POR QUORUM SENSING EN AISLAMIENTOS DE Burkholderia contaminans Y Burkholderia lata. LOPEZ DE VOLDER, MARIA AGUSTINA (1); DEGROSSI, JOSE (2); MANGANO, ANDREA (1); FRANCO, MIRTA (1)
(1) UBA. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Ctedra de Microbiologa, (2) UBA. Facultad de Farmacia y Bioqumica, Ctedra de Higiene y Sanidad El complejo Burkholderia cepacia es un conjunto de bacilos gram-negativos no fermentadores, actualmente conformado por 17 especies. Burkholderia contaminans y Burkholderia lata son especies recientemente definidas dentro del complejo, existiendo poca informacin sobre ellas. Estudios previos muestran un predominio de B. contaminans en pacientes fibroquisticos de nuestro pas a diferencia de lo que ocurre en otros lugares, donde B. cenocepacia y B. multivorans son predominantes. Adems B.
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contaminans y B. lata han sido encontradas como contaminantes en diversas industrias. La expresin de diferentes factores de virulencia est regulada por Quorum Sensing. Entre ellos se destaca la capacidad de formacin de biofilms, la produccin de proteasas extracelulares, la produccin de lipasas y la motilidad swarming. El objetivo del presente trabajo fue determinar la expresin de estos factores de virulencia en aislamientos locales de B. contaminans y B. lata. Se analizaron 23 aislamientos de B. contaminans de distintos orgenes y 6 aislamientos de B. lata provenientes de muestras industriales. Se incluyeron como controles cepas del complejo Burkholderia cepacia pertenecientes a colecciones de cultivos microbianos, ATCC25416 y LMG16654 para el estudio de la formacin de biofilms. Adems para el estudio de lipolisis, protelisis y motilidad swarming se incorporaron como controles cepas de E. coli, P. aeruginosa y S. aureus. La capacidad de formar biofilms se evalu por elucin del Cristal Violeta adherido a cultivos en placas de polietileno de 96 pocillos. La motilidad swarming se determin midiendo el halo de crecimiento en agar nutritivo semiblando en placas de 90 mm. La protelisis se analiz en agar nutritivo suplementado con leche descremada (20%). Por ltimo, la produccin de lipasas se detect en el medio agar tributirina. En B. lata se observ que 5/6 aislamientos (83%) forman biofilm, mientras que 13/23 (56%) aislamientos de B. contaminans presentan esta caracterstica. Con respecto a la motilidad swarming, se pudo clasificar a los aislamientos en dos grupos: uno de gran motilidad, en el cual se encuentra alrededor del 90% de los aislamientos analizados; y otro de escasa motilidad. La mayora de los aislamientos de ambas especies mostraron actividad proteoltica, pero solo B. contaminans present actividad lipoltica (~ 90%). La mayora de los aislamientos de B. contaminans y B. lata estudiados muestran capacidad de formar biofilm. Parece no existe una relacin estricta entre la formacin de biofilm, la expresin de lipasas y proteasas y la motilidad swarming.
formados por muchas capas de clulas y microcolonias. En el bioensayo con At se observ menor produccin de HSL en los cultivos en presencia de NMP. El inhibidor de bombas de eflujo NMP, en concentraciones subinhibitorias, disminuye significativamente la capacidad de formar biofilms maduros de A. baumannii. Estos resultados sugieren que en A. baumannii las bombas de eflujo tendran participacin en la formacin de biofilms y que inhibidores de dichas bombas podran ser molculas de inters para el diseo de estrategias anti-biofilm.
P271 - 27747 DETECCIN DEL GEN SAB Y SU ASOCIACIN CON LA FORMACIN DE BIOFILM EN CEPAS VTEC DE MEDIOAMBIENTE DE TAMBO Y ANIMALES. POLIFRONI, R (1, 2); FERNANDEZ, D (1, 2); ALONSO, MZ (1, 2); ETCHEVERRIA, AI (1, 3); PADOLA, NL (1, 3); PARMA, AE (1, 3)
(1) Laboratorio de Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV. UNCPBA, (2) Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas, (3) Comisin de Investigaciones Cientficas Sab es una nueva adhesina que contribuye a la formacin de biofilm que pertenece a una familia de protenas de superficie que se ha encontrado en cepas de Escherichia coli enterohemorrgicas (EHEC) del serotipo O113:H21. Sab se une a la superficie de clulas epiteliales humanas (HEp-2). Tambin se ha descripto que su presencia favorece la formacin de biofilm de cepas de O113:H21 en placas de poliestireno. El gen sab se encuentra en el megaplsmido de EHEC carentes de locus de borrado del enterosito (LEE), por lo que comparte ubicacin con los genes ehxA, saa y subA. Sin embargo, no se ha encontrado que las cepas que poseen el megaplsmido sean portadoras del gen sab. En el presente ensayo hemos seleccionado 6 aislamientos de Escherichia coli verocitotoxignicas (VTEC) obtenidas de superficies slidas del ambiente de tambo y portadoras del megaplsmido: una cepa O116:NM (ehxA, vt2, saa) y 5 cepas O26:H21 (ehxA, eae, vt1). Tambin se analizaron 4 cepas procedentes de animales: una cepa de O113:H21 (ehxA, vt2, vt1, saa), una cepa O113:H? (ehxA, vt2, saa), una cepa O178:H? (ehxA, vt2, saa) y otra O178:H19 (ehxA , vt2, vt1, saa). Se utiliz una cepa O157:H7 (ehxA, eae, vt2) aislada de bovinos como control negativo de sab y O20:H19 (ehxA, vt2, vt1, saa, sab) como control positivo. A todas las muestras se les realiz una PCR monoplex para la identificacin de la presencia del gen sab y de los genes crl, csgD y csgA implicados en la sntesis de fimbria curli. Paralelamente, se realiz la produccin de biofilm en placas de poliestireno (cada muestra por cuadruplicado) y la feno-caracterizacin en placas de Rojo Congo (RC). El fenotipo rdar (colonias rojas y rugosas) indica la sntesis de fimbria curli y celulosa y la capacidad de formar biofilm, mientras que los fenotipos saw (colonias blancas y lisas) y sar (colonias rojas y lisas) indica la no sntesis de ambos productos o slo de la fimbria, y por lo tanto la incapacidad de formar biofilm. Slo la cepa O178:NM posee el gen sab y present la mayor capacidad de formar biofilm, con un valor promedio de absorbancia a 570 nm de 0,83 (DO570), mientras que la cepa O20:H19 present un valor de DO570 0,49. Las restantes cepas y aislamientos tuvieron valores de DO570 sin diferencias significativas. Todas las cepas y aislamientos analizados poseen los genes necesarios para le expresin de la fimbria curli, pero no todas presentaron el mismo fenotipo en RC. La cepa O157:H7 present fenotipo saw mientras que las muestras aisladas del ambiente de tambo fueron rdar y las cepas aisladas de animales presentaron un fenotipo intermedio sar. Conclusin: la presencia del gen sab se no se encuentra relacionada con la capacidad de formar biofilm de cepas analizadas de VTEC procedentes del ambiente y de animales.
P270 - 27656 UN INHIBIDOR DE BOMBAS DE EFLUJO DISMINUYE LA FORMACIN DE BIOFILMS EN Acinetobacter baumannii. FRIEDMAN, LAURA (1); FERNANDEZ, FLORENCIA (1); VAY, CARLOS (2); FRANCO, MIRTA (1)
(1) Ctedra de Microbiologa, Facultad de Farmacia y Bioqumica, (2) Laboratorio de Bacteriologa, Dpto de Bioqumica Clnica, FFyB, Hospital de Clnicas UBA Acinetobacter baumannii (Ab) es un patgeno multirresistente que causa infecciones intrahospitalarias y que posee capacidad de formar biofilms. Se ha reportado que en biofilms de Pseudomonas aeruginosa las bombas de eflujo multicomponente tipo RND se expresan en altos niveles. En Ab se han identificado las bombas tipo RND AdeABC y AdeIJK. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto del inhibidor 1- (1-naftilmetil) piperazina (NMP) sobre la formacin de biofilms de Ab. Se analizaron 14 aislamientos independientes de Ab provenientes del Hospital de Clnicas, obtenidos en el perodo 2004-2009, y la cepa de referencia ATCC19606, todos los cuales son formadores de biofilms. Se determin, por el ensayo de microdilucin en caldo, la mayor concentracin de NMP que no produjo disminucin de la DO de los cultivos y se estudi su efecto sobre la formacin de biofilms por la tcnica en microplacas. La biomasa adherida se evalu por tincin con cristal violeta a las 48 h de cultivo. Se evalu la motilidad tipo twitching en placas de LB Agar y LB Agar con NMP. Las estructuras de los halos de twitching se examinaron microscpicamente. Se detect la produccin de autoinductores tipo homoseril lactonas (HSL) con el biosensor Agrobacterium tumefaciens NT1 pZlR4 (traG::lacZ) (At). En presencia de NMP (12,5 g/ml), la formacin de biofilms disminuy significativamente (P<0,01) en la cepa de referencia (40,6%) y en 11 aislamientos clnicos (rango 35,2-59,5%). El anlisis microscpico de los biofilms teidos con naranja de acridina, mostr microcolonias ms pequeas que en los controles. La observacin microscpica de los halos de twitching mostr diferentes patrones de adhesin. En los cultivos en presencia de NMP se observaron estructuras con bordes finos de pocas capas de clulas; en cambio en los controles se observaron bordes gruesos
P272 - 27762 Stenotrophomonas maltophilia INTERFIERE EN LA FORMACIN DEL TUBO GERMINAL Y EL CRECIMIENTO DE Candida albicans ATRAVES DE SU SEAL DE QUORUM SENSING. PASSERINI DE ROSSI, BEATRIZ (1); FELDMAN, LAUREANA (1); SALIBA PINEDA, MARIA (1); GARCIA, CARLOS (1); FRANCO, MIRTA (1)
(1) Ctedra de Microbiologa, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA
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Stenotrophomonas maltophilia es un patgeno nosocomial emergente multiresistente. Un importante factor de virulencia es su capacidad de formar biofilms, regulada por el sistema de quorum sensing (QS). El gen rpfF codifica la inusual seal de QS denominada diffusible signal factor (DSF, cido cis-11-metil-2dodecenoico). El sistema de QS atraviesa la frontera procariotaeucariota. DSF de Xanthomonas campestris y BDSF (cido cis2-dodecenoico) producido por Burkholderia cenocepacia promueven la inhibicin de la filamentacin del hongo dimrfico Candida albicans al unirse al receptor del cido farnesoico (AF). AF, estructural y funcionalmente relacionado con DSF, regula la transicin morfolgica y la virulencia de C. albicans. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de S. maltophilia, a travs de la seal DSF, en la formacin del tubo germinal y el crecimiento miceliar de C. albicans. Se utilizaron las cepas S. maltophilia K279a, cepa de origen clnico cuyo genoma ha sido secuenciado, y K279a rpfF (DSF-), cedidas por el Dr. Maxwell Dow (BIOMERIT Resarch Centre, Ireland), y C. albicans. ATCC10231. Para evaluar el efecto de Sm en la formacin de tubo germinal se inocularon medios condicionados con clulas levaduriformes de C. albicans, en presencia o en ausencia de S. maltophilia. El medio condicionado corresponde al sobrenadante de un cultivo en TSB de S. maltophilia, esterilizado por filtracin. Los cultivos se incubaron a 28 C durante 15h, y luego por otras 3h en condiciones que promueven la filamentacin: 37 C, con y sin suero fetal bovino (SFB). El porcentaje de formacin de tubo germinal se evalu por tcnicas microscpicas (fresco y tincin de Gram), observando 400 clulas por muestra. Para evaluar el efecto de S. maltophilia sobre la multiplicacin del micelio se repicaron cultivos de C. albicans en TSB a 37 C en medios condicionados en presencia o en ausencia de Sm, se incubaron a 37C durante 4 das, y se realizaron recuentos de clulas fngicas viables a las 0, 24, 48 y 72h en agar Sabouraud suplementado con ciprofloxacina 100 g/ ml y observaciones microscpicas. El porcentaje de tubo germinal en el control fue de 60-67% en presencia o ausencia de SFB. La presencia de K279a produjo una inhibicin de la filamentacin, 40-45% de tubo germinal, y una reduccin de 2 logaritmos en la viabilidad de C. albicans a las 72h de incubacin, donde se observ la presencia de micelio fuertemente asociado a grandes microcolonias bacterianas. La presencia de la mutante K279a rpfF no modific los resultados observados en el control y a las 72h se observ el micelio asociado en forma laxa a las bacterias. S. maltophilia interfiere en la patogenicidad de C. albicans. La inhibicin de la filamentacin ha sido correlacionada directamente con la unin de DSF a receptores de AF, mientras que la disminucin de la viabilidad podra deberse a la formacin de biofilms sobre el micelio.
concentraciones y combinaciones de los mismos. Posteriormente las clulas fueron infectadas a una multiplicidad de infeccin 20:1. Una hora post-infeccin se realiz el recuento de bacterias asociadas a los macrfagos, consideradas tanto aqullas ubicadas en la superficie como intracelularmente, mediante microscopia ptica previa coloracin de Giemsa. Macrfagos sin tratar fueron empleados como control. Se realiz la recuperacin de clulas viables intracelulares de C. septicum a partir de macrfagos tratados con los distintos inhibidores e infectados, previa lisis con Tritn X-100 y posterior cultivo en medio SPS en condiciones anaerobias. La presencia de clulas de C. septicum en el fagosoma, rodeadas de una membrana ntegra, co-localizadas con marcador de fagosoma o libres en el citoplasma celular, fue determinada mediante microscopia electrnica y confocal . La adicin de F permiti un mayor nivel de inhibicin de asociacin del macrfago con la bacteria (76,7%), la adicin de MP result en una reduccin del 56,7%, mientras que M solo inhibi entre el 20 y el 39% el nmero de clulas asociadas. Combinaciones de los inhibidores F y MP permitieron una disminucin del 89%. Una baja proporcin de las clulas infectantes (0,015 a 0,095%), fueron recuperadas viables del interior de los macrfagos a las 3 h postinfeccin. No hubo diferencias significativas del nmero de bacterias viables recuperadas del interior de los macrfagos tratados con distintos inhibidores. Los resultados obtenidos sugieren que los receptores de manosa y CR3 participan en la unin y fagocitosis de C. septicum, sin embargo son los receptores scavenger los que jugaran el papel principal en el proceso de fagocitosis de este patgeno. La disminucin superior al 100% de bacterias asociadas a los macrfagos obtenida como resultado de la suma de los tratamientos de los inhibidores por separado, indicaran cierta falta de especificidad del efecto de los mismos sobre los receptores estudiados.
P274 - 27861 PRODUCCION DE BIOFILM EN BACTERIAS LACTICAS VAGINALES CON PROPIEDADES BENEFICAS. LECCESE TERRAF, MARIA CECILIA (1); JUAREZ TOMAS, MARIA SILVINA (2); NADER MACIAS, MARIA ELENA (2); SILVA DE RUIZ, CLARA (1)
(1) Ctedra de Bacteriologa. Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumn, (2) Centro de Referencias para Lactobacilos (CERELA-CONICET) Tucumn. Argentina Introduccin: Los lactobacilos son los microorganismos predominantes del tracto vaginal y participan en el mantenimiento del equilibrio ecolgico del tracto. Muchos de ellos exhiben propiedades benficas que protegen del ingreso de microorganismos patgenos, entre las que se incluye la formacin de biofilm, lo que favorecera su colonizacin y establecimiento para mantener la salud del tracto. Objetivo: En trabajos previos se han aislado, identificado y seleccionado bacterias lcticas vaginales (BLV) con propiedades benficas, por lo que el objetivo de este trabajo fue evaluar su capacidad de formar biofilm en varios medios de cultivo. Materiales y Mtodos: Se trabaj con siete cepas de BLV que fueron desarrolladas en caldo MRS a 37C durante 14 horas y subcultivadas en diferentes medios: MRS caldo completo, MRS sin glucosa, MRS sin Tween 80 y MRS sin MnSO4. Una vez alcanzada la fase estacionaria de crecimiento, se tomaron 200 L de cada uno de los cultivos, los que se diluyeron en 5mL de los respectivos medios. Alcuotas de 200 L se transfirieron a microplacas de poliestireno estriles, las que se incubaron 72 horas a 37 C. Para la cuantificacin del biofilm se aplic la tcnica de Cristal Violeta, determinndose la densidad ptica (DO) del colorante disuelto a 570 nm, en un lector de microplacas. Las determinaciones se realizaron por cuadruplicado y el ensayo completo se repiti dos veces. Resultados: De las siete cepas estudiadas, slo tres mostraron un perfil de formacin de biofilm moderado o fuerte, dependiendo del medio de cultivo empleado. Lactobacillus reuteri CRL 1324 (que inhibe a uropatgenos por cidos orgnicos) fue la cepa mayor productora de biofilm en MRS completo y MRS sin Tween 80. Bajo estas condiciones de cultivo, el perfil de adhesin fue moderado o fuerte (DO= 0,20 y DO=
P273 - 27781 ESTUDIO DE RECEPTORES QUE INTERVIENEN EN EL RECONOCIMIENTO Y FAGOCITOSIS DE Clostridium septicum. VILLA, CECILIA (1); CACERES, CLAUDIA (1); RODRIGUEZ, YAMILA (1); ORTIZ, RODOLFO (1); SOTOMAYOR, CLAUDIA (2); CORTIAS, TERESA (1)
(1) UNSL, (2) CIBICI, UNC Clostridium septicum es un microorganismo patgeno anaerobio, agente causal de enfermedades mionecrticas que afectan al hombre y a la mayora de los animales de sangre caliente. Una vez establecida la enfermedad es de rpido curso e inevitablemente fatal. Recientemente se ha determinado en nuestro laboratorio la capacidad de este microorganismo de sobrevivir en el interior de clulas fagocticas. Con el objetivo de identificar los receptores de membrana que participan en el reconocimiento y fagocitosis de C. septicum se plante el uso de inhibidores especficos de receptores presentes en macrfagos. Se emple la cepa de C. septicum ATCC 10092. Los cultivos fueron realizados en condiciones anaerobias y las clulas obtenidas en fase logartmica de crecimiento. Macrfagos peritoneales de ratn fueron tratados durante 1 h con diferentes inhibidores: fucoidan (F), inhibidor de receptores scavenger, manano (M), inhibidor de receptores de manosa y metil-alfa-D-manopiransido (MP), inhibidor de receptores de manosa y del complemento, (CR3), empleando distintas
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1,44, respectivamente). L. rhamnosus CRL 1332 y L. delbrueckii CRL 1510 (productores de perxido de hidrgeno) presentaron una produccin moderada de biofilm en ausencia de Tween 80 (DO=0,37 y DO=0,30, respectivamente). En ninguno de los microorganismos evaluados se detect formacin de biofilm al no estar presente glucosa o MnSO4 en el medio de cultivo base. La ausencia del agente tensioactivo Tween 80 favoreci la produccin de biofilm en algunas cepas de BLV. Los resultados de este trabajo permiten avanzar en la optimizacin de las condiciones y factores que afectan la formacin de biofilm, para luego evaluar la capacidad de BLV de inhibir la colonizacin de microorganismos patgenos u oportunistas en el tracto vaginal.

P276 - 27084 UTILIZACIN DEL MODELO HIDRODINMICO DE CIRCULACIN (MOHID) PARA EVALUAR EL EFECTO DE UNA PLANTA DE TRATAMIENTO DE LQUIDOS CLOACALES SOBRE UN REA RECREACIONAL. STREITENBERGER, MARIA EUGENIA(1); BALDINI, MONICA(1); PIERINI, JORGE(1,2)
(1) Universidad Nacional del Sur, (2) CIC Baha Blanca cuenta con el balneario municipal Maldonado (BM) cuya pileta se abastece con agua del estuario homnimo. En septiembre de 2008 comenz a funcionar la Planta de Tratamiento de Lquidos Cloacales para la Tercera Cuenca (PTLC), cuyos efluentes se vuelcan al estuario, cerca del BM. Esta ampliamente demostrado que el uso de aguas recreacionales con contaminacin fecal incrementa el riesgo de enfermedades en la poblacin. En las ltimas dcadas, numerosos modelos computacionales se han propuesto como herramienta en la prediccin de los movimientos de las descargas de efluentes y su impacto en los recursos acuticos. Objetivo: Implementar un modelo numrico para evaluar el impacto de la PTLC sobre la calidad higinico-sanitaria de las aguas que ingresan al BM. Mtodos: Se establecieron 5 estaciones de muestreo en la zona del BM. Entre diciembre de 2008 y marzo de 2010 se recolectaron 15 muestras de agua subsuperficial, en las que se cuantific Escherichia coli (EC). Para evidenciar la variacin espacial del indicador se us ANOVA simple. Se aplic el modelo hidrodinmico de circulacin (MOHID) con una batimetra de alta resolucin (50 x 50 m), para evaluar la dispersin espacial de dicha bacteria, considerando su tasa de decaimiento, el efecto del viento y la evaluacin de su trayectoria mediante un mdulo Lagrangiano en el perodo de simulacin. Las propiedades hidrodinmicas y ambientales fueron validadas y calibradas. Se consideraron la salinidad, temperatura y radiacin solar. Resultados: Los resultados bacteriolgicos en la compuerta, superaron lo exigido para aguas de contacto primario. Esto determin la no apertura del balneario en la temporada estival 2009-10. El anlisis estadstico no detect diferencias significativas (p< 0,5) en los recuentos de EC entre los sitios de muestreo. Coincidentemente, el MOHID puso de manifiesto que en marea creciente la pluma tiende a distribuirse homogneamente sobre las planicies de marea del rea estudiada, alcanzando la compuerta del BM. Este efecto se acrecienta con viento sur persistente, ya que aumenta el tiempo de permanencia de la carga contaminante en la zona. Por el contrario, con viento del sector NNO la pluma alcanza mayores distancias sobre el canal Principal (zona portuaria). La regresin lineal entre los valores bacteriolgicos obtenidos en el laboratorio y los derivados del modelo numrico, dio un buen ajuste (R= 0,95). Los recuentos bacterianos en el canal de descarga (del orden de los diez millones UFC/mL) evidenciaron que durante el tiempo que dur el muestreo, la PTLC no funcion. Se desea enfatizar que si bien el cierre del Balneario Maldonado en la pasada temporada estival fue aconsejable, ya que no se poda asegurar la calidad higinico-sanitaria de sus aguas, el problema en el estuario persiste y debe ser controlado. Se debe recuperar el Balneario, debido a su importancia social, ya que representa un escenario de ptimas ventajas para satisfacer una de las necesidades sociales bsicas como es la recreacin. La utilizacin de herramientas de modelado numrico permite obtener informacin muy importante a los efectos de la toma de decisiones para un manejo racional de los cuerpos de agua receptores.
P275 - 27867 Lactobacillus delbrueckii SUBSP lactis (CIDCA 133) INCREMENTA LA CAPACIDAD FAGOCTICA Y DE DESTRUCCIN DE MACRFAGOS HUMANOS CONTRA ENTEROPATGENOS CAUSANTES DE LESIN ATTACHING / EFFACING. HUGO, AA (1); PEREZ, PF (1)
(1) CIDCA-CONICET-Universidad Nacional de La Plata Introduccin: Una de las funciones esenciales de los de los monocitos y macrfagos es su capacidad de endocitar bacterias y posteriormente inactivarlas, constituyendo as una de las primeras lneas de defensa en la inmunidad innata. Las bacterias cido lcticas (BAL) han sido ampliamente utilizadas como probi-ticos debido a sus efectos benficos sobre la salud del hospedador entre los que se encuentran la activacin de macrfagos y linfocitos. Objetivos: En el presente trabajo se evalu la capacidad fagoctica y bactericida sobre patgenos causantes de lesin attaching/effacing (A/E) de la lnea celular de monocitos macrfagos U-937 en presencia de la cepa probitica Lactoba-cillus delbrueckii subsp. lactis (CIDCA 133). Materiales y Mtodos: Las clulas U-937 se cultivaron a 37C en atmsfera enriquecida con 5% de CO2 en medio RPMI suplementado con 10% (v/v) de suero fetal bovino, estreptomicina y penicilina. La diferenciacin celular se obtuvo por el aadido de dimetilsulfxido al 1%. Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis (CIDCA 133) se creci en medio MRS a 37 C en condiciones anaerbicas. Los sobrena-dantes de cultivo, neutralizados a pH 7 con NaOH, se filtraron a travs de una membrana de 0,45 m. E. coli EHEC cepa 69160 y C. rodentium ICC 180 fueron crecidos en medio LB a 37 C con agitacin. Los microorganismos gram-negativos fueron marcados con isotiocianato de fluorescena (0.3 mg/ml) y opsonizados mediante su incubacin en RPMI con 10% de suero humano. El lactobacilo fue marcado con succinimidil ester de acetato de carboxifluorescena (10 ug/ml). En los ensayos de fagocitosis los microorganismos y las clulas eucariticas fueron suspendidos en medio RPMI con una multiplicidad de infeccin de 20:1 bacteria-clula e incubados a 37 C durante 30 min. Luego las clulas fueron lavadas con PBS helado a fin de detener la fagocitosis. Las bacterias internalizadas totales se determinaron mediante citometra de flujo. La fluorescencia externa de las bacterias asociadas se apantall mediante la adicin de azul Tripn al 2% (v/v). Las bacterias internalizadas sobrevivientes se evaluaron mediante recuento de microorganismos viables previa incubacin con RPMI gentamicina (100 g/ml) para matar bacterias no internalizadas y lisis celular. Resultados: En presencia del lactobacilo la internalizacin de E. coli EHEC y C. rodentium fue significativamente mayor tanto para las clulas U-937 diferenciadas como no diferenciadas. La supervivencia intracelular de los enteropatgenos A/E disminuy entre 2 y tres veces en las clulas diferenciadas que fueron coincubadas con el la cepa CIDCA 133. Los sobrenadantes del lactobacilo no modificaron el ndice de fagocitosis de los microorganismos ensayados. Para la cepa CIDCA 133 se obtuvieron ndices de internalizacin relativamente bajos, los cuales no se vieron modificados en la presencia de las bacterias gram-negativas. CONCLUSIONES: Los resultados demuestran que Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis (cepa CIDCA 133) es capaz de incrementar la internalizacin y eliminacin de enteropatgenos A/E en estudio por parte de los macrfagos.
P277 - 27103 DIVERSIDAD MICROBIANA EN ORUJO DE ACEITE DE OLIVA PRODUCIDO EN LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. BRUGNONI, LORENA INES (1,2); GONZALEZ, MARIA TERESA (1,2); CUBITTO, MARIA AMELIA(1)
(1) Universidad Nacional del Sur, (2) CONICET Nuestro pas ocupa actualmente el dcimo lugar mundial en la produccin de aceite de oliva. El descarte del residuo (orujo)
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resultante del sistema de dos fases de obtencin del aceite presenta un desafo actual para la industria por su alto contenido en polifenoles, cidos orgnicos voltiles, pH cido y altos niveles de sales. En la bibliografa existe muy poca informacin sobre la diversidad microbiana caracterstica del orujo a pesar de la enorme importancia que sta podra tener en procesos biotecnolgicos y de biorremediacin. El objetivo del presente trabajo fue aislar e identificar la microbiota de orujo obtenido por el sistema de dos fases en una planta productora de aceite de oliva localizada en el sudoeste bonaerense, con el fin de conocer su diversidad y su posible potencial en procesos biotecnolgicos y de biorremediacin. Los microorganismos del orujo se aislaron en Agar Tripticasa Soja (ATS) y agar Extracto de Levadura Glucosa Cloranfenicol (YGC). Por otra parte, se realiz el enriquecimiento de las muestras en medio mnimo base de Winogradsky. Posteriormente, se realizaron aislamientos del sobrenadante en ATS e YGC como se describi en el prrafo anterior. El recuento promedio en ATS fue de 1 x 109 UFC/g y en YGC, de 3 x 108 UFC/g. Se aislaron 9 cepas bacterianas (B1-B9). Todas correspondieron a bacilos gram-negativos excepto la cepa B6, que fue caracterizada por su reaccin al Gram como coco gram-positivos y bioqumicamente como una bacteria del cido lctico. Cuatro de ellas (B1, B2, B4 y B5) fermentaron la glucosa, y otras cuatro (B3, B7, B8 y B9) fueron no fermentadoras de glucosa ni de lactosa. Se aislaron dos mohos: Aspergillus sp. y Mucor racemosus y tres levaduras, identificadas como Pichia guilliermondii, Rhodotorula mucilaginosa y Rhodotorula sp. Todas las bacterias aisladas (B1B9) se caracterizaron por su actividad reductora sobre el doble enlace de grupos azo, lo cual les confiere potencial inters sobre la biodegradacin de efluentes provenientes de toda aquella actividad donde intervengan colorantes sintticos (industria textil, alimentaria, cosmtica, farmacetica, papelera, curtidura y fotogrfica). Se ha descripto que tanto Mucor racemosus como Aspergillus spp. participan en la reduccin de la fototoxicidad del orujo y en la produccin de enzimas extracelulares de uso industrial. Los miembros del gnero Rhodotorula han sido estudiados por su habilidad para degradar compuestos fenlicos y de crecer en presencia de altas concentraciones de los mismos, as como por la produccin de pigmentos carotenoides y polisacridos. Pichia guilliermondii ha sido ampliamente estudiada por su eficiencia en la biorremediacin de metales pesados en efluentes y por la produccin de enzimas a partir de orujo de aceite de oliva. Podemos concluir que el orujo de aceite de oliva obtenido por el sistema de dos fases en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires provee una fuente de cepas de microorganismos con potencial biotecnolgico y de biorremediacin.
e invierno,en diferentes puntos del arroyo. Se sum un sitio testigo: ro Limay aguas arriba del vertido. Los anlisis bacteriolgicos se realizaron de acuerdo a Mtodos Normatizados para anlisis de Aguas y Aguas residuales (APHA, 1998). Recuento de coliformes fecales: tcnica de fermentacin en tubo mltiple para miembros del grupo de los coliformes (NMP). Recuento de bacterias aerobias hetertrofas mesfilas totales: recuento en tubo, Nmero ms Probable. Identificacin mediante test bioqumicos: Api20E (Bio Mrieux). Resultados: Se observ un aumento en los parmetros microbianos indicadores de contaminacin fecal y en la poblacin de microorganismos hetertrofos en los meses ms fros. Dicho comportamiento estara influenciado por la temperatura y la humedad, cuyos factores inciden en la supervivencia de los mismos. Los microorganismos hetertrofos alcanzaron valores del orden de 10.4 durante el verano, mientras que en invierno los valores rondaron el orden de 10.8. En tanto que el sitio tomado como testigo mantuvo constante sus valores en ambas estaciones, en un orden de 10.1. Los valores del anlisis de bacterias indicadoras de contaminacin fecal en el arroyo, en ambas estaciones, fueron mayores a 1100. An as, los valores de supervivencia de los microorganismos fueron mayores durante los meses ms fros. En las 4 estaciones se identific la presencia de: E. coli, K. oxytoca, E. cloacae y E. aglomerans. Conclusin: Los indicadores de calidad bacteriolgica demuestran la existencia, persistencia y aumento de bacterias de origen fecal, en funcin a la capacidad de adaptabilidad de stas al medio. Lo cual se traduce en un alto riesgo para la salud de la poblacin que utiliza el agua del ro Limay para recreacin y consumo, sin un adecuado tratamiento de potabilizacin. Se considera necesaria la concientizacin acerca de los perjuicios que acarrea la contaminacin de cursos de agua a cielo abierto que desaguan en el principal recurso hdrico de la regin. P279 - 27203 MICORRIZAS Y HONGOS SEPTADOS MARRONES DE LA FLORA ALTOANDINA. BRUZONE, MARIA CLARA; FERNANDEZ, NATALIA; FONTENLA, SONIA Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medio Ambiente, Universidad Nacional del Comahue, Bariloche El rea Altoandina patagnica se caracteriza por encontrarse por arriba del lmite superior del bosque, con un gradiente de precipitacin marcado de oeste (3500 mm anuales) a este (500 mm anuales). Se caracteriza por una gran diversidad de ambientes con una composicin florstica propia adaptadas a las condiciones extremas. Algunas plantas se encuentran tambin en la estepa arbustiva patagnica, con la que posee caractersticas comunes (aridez y elevada radiacin). Las micorrizas y los hongos septados marrones (HSM) se encuentran citados en la mayora de los ambientes del planeta, incluidos algunos ambientes de alta montaa. El objetivo de este trabajo fue estudiar los hongos intraradicales a lo largo de un gradiente de precipitacin en ambientes Altoandinos y en la Estepa Patagnica. Se seleccionaron cuatro sitios con especies de plantas comunes al menos en tres de ellos; a lo largo del gradiente de precipitacin: tres de alta montaa (arriba de 1500 m s.n.m.) y uno en la estepa Patagnica, con la que adems hay un gradiente de altitud (800 m s.n.m.). Se seleccionaron nueve especies de plantas, 5 individuos por especie y por sitio, de diferentes familias y forma de vida. En ellas se determin la ocurrencia de hongos intraradicales y su comportamiento a los largo del gradiente de precipitacin y en las diferentes formas de vida. Ocho de las nueve especies de plantas presentaron micorrizas arbusculares (MA) y no se registraron otro tipo de micorrizas. Dos especies de hierbas, dos subarbustos y dos arbustos presentaron se comportaron como hospedadoras, dos especies como facultativas y una como no hospedadora. Comparando las formas de vida, los arbustos presentaron porcentajes de MA mayores. Si se compara adems los valores por sitio, slo las hierbas presentaron valores de MA diferentes entre los sitios ubicados en los extremos del gradiente; siendo significativamente menor en el sitio del oeste. Analizando todas las especies de plantas en todos los sitios, se observ una tendencia a disminuir la infeccin MA de este a oeste, a medida que las condiciones ambientales se hacen ms extremas y con mayor precipitacin. Los
P278 - 27141 COMUNIDADES MICROBIANAS EN EL ARROYO DURN, NEUQUN. ALVAREZ, ANAHI SOLEDAD; PEZZULLO, SILVINA DESIREE; ARAUJO, CAROLINA MARTA; NAVARRO, MARIA CECILIA
FACIAS Universidad Nacional del Comahue Introduccin: Conservar las comunidades biolgicas de los cursos de agua es primordial para mantener el equilibrio de un ecosistema, por ello se debe promover y preservar la calidad de las aguas. La presencia de microorganismos alctonos en un curso de agua genera diferentes impactos: enfermedades infecciosas, depredacin entre especies y aspectos estticamente desagradables. En la ciudad de Neuqun existen canales a cielo abierto que desembocan en ros utilizados como fuente de agua para consumo humano, sitio recreativo y turstico. Estos canales reciben el impacto antrpico de vertido de lquidos cloacales desde viviendas e industrias, lo cual modifica la composicin de sus aguas, originalmente pluvioalivionales, y consecuentemente las del cuerpo receptor. El arroyo Durn, nace en una zona rural, atraviesa distintos barrios y desemboca en el ro Limay. La contaminacin del agua puede estar marcada por el aumento de poblaciones microbianas y la presencia de organismos indicadores de contaminacin fecal. Objetivos: Se plante evaluar el nivel de contaminacin bacteriolgica de las aguas del arroyo Durn, por su cercana a la poblacin y riesgo de impacto en la salud pblica. Materiales y mtodos: Los muestreos se realizaron en verano
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HSM se encontraron en todas las especies y en la mayora de los individuos. El porcentaje de infeccin con HSM es mayor en los arbustos. La mayora de las especies presentan valores de infeccin con HSM no muestran diferencias entre los sitios del este y del oeste. Las MA y los HSM coexisten en las mismas especies de plantas y en los ambientes, se encuentran correlacionados positivamente, planteando que ambos son frecuentes en los ambientes Altoandinos. Considerando que la mayora de las especies poseen comportamiento hospedador para MA y un elevado nmero de individuos infectados, los resultados obtenidos sugieren una elevada dependencia por esta simbiosis. Posiblemente las condiciones extremas a las que las plantas de alta montaa estn sometidas, tambin influyen en las micorrizas, especialmente si se considera que la infeccin tiende a disminuir cuando las condiciones se hacen ms severas. Dado que las micorrizas constituyen una estrategia de adaptacin al stress ambiental, es posible que aunque con valores menores, las mismas cumplan un rol fundamental en los ambientes Altoandinos patagnicos.
tadas y 1 colonia negra), conservadas para futuros anlisis fisiolgicos y moleculares que permitan la identificacin de los aislamientos, y se pretende estudiar la produccin de metabolitos fotoprotectores y enzimas extracelulares con posibles aplicaciones biotecnolgicas.
P281 - 27309 ESTUDIO DE LA BIODIVERSIDAD DE BACTERIAS Y ARQUEAS MARINAS EN CALETA POTTER, ISLAS SHETLAND DEL SUR, ANTARTIDA. HERNANDEZ, EDGARDO ALEJANDRO(1); PIQUET, ANOUK MT(2); LATORRE, GUSTAVO(1); AGUIRRE, GASTON(1); BUMA, ANITA GJ(2); MAC CORMACK, WALTER P(1)
(1) Instituto Antrtico Argentino, (2) University of Grningen Durante un muestreo anual, realizado desde diciembre de 2007 a febrero de 2009, se estudi la variabilidad temporal y espacial de bacterias y arqueas marinas en Caleta Potter, Islas Shetland del Sur, Antrtida. Para ello se tomaron muestras de agua marina superficial usando botellas Niskin en tres localidades de la caleta: E1 (zona interior), E2 (zona exterior) y E3 (desembocadura del chorrillo Potter). En cada muestreo se tomaron datos de pigmentos fotosintticos, material particulado en suspensin, salinidad y temperatura. Adems se registraron los principales parmetros meteorolgicos. Las muestras de agua fueron filtradas usando membranas de acetato de celulosa (0,22 mm) y los filtros fueron congelados a -80C hasta su posterior procesamiento. Se aisl el ADN genmico amplificndose el ADNr 16S por PCR, usando cebadores para bacterias y arqueas. Los productos de PCR fueron analizados mediante DGGE y las bandas obtenidas fueron secuenciadas. La comparacin de las secuencias obtenidas con las presentes en Genbank mostr que la mayora pertenecen a integrantes del phylum Proteobacteria, principalmente a la clase Gammaproteobacteria (rdenes Oceanospirillales, Pseudomonadales, Alteromonadales, Thiotrichales) y algunos a la clase Alfaproteobacteria (mostrando todas las secuencias un 100% de identidad con el gnero Pelagibacter, del orden Rickettsiales). Los patrones de bandas obtenidos en geles de DGGE bacterianos mostraron una alta variabilidad anual. Aunque al analizar el ndice de similaridad se observ que los patrones de bandas de las muestras de E1 y E2 fueron ms similares entre s que con los obtenidos de E3. Esto podra deberse a que las corrientes marinas circulantes en la caleta tienden a mezclar las masas de agua de las estaciones E1 y E2, mientras que la estacin E3 est fuertemente influenciada por del derretimiento de los glaciares durante el verano. El ndice de Shannon (H) mostr que la diversidad bacteriana no se modifica significativamente a lo largo del ao y ni tampoco en las tres localidades a un mismo tiempo de muestreo. La diversidad media de bacterias (H=3.028) fue significativamente mas alta (p<0.01) que la de arqueas (H=1.070). La diversidad de arqueas se redujo durante el verano y mostr una correlacin inversa con la concentracin de clorofila-a. Por otra parte, la diversidad media de arqueas fue similar para E1 y E2 (H=1.260 y H=1.266 respectivamente), y stas fueron significativamente mayores (p<0.05) que para E3 (H=0.6835). El material particulado en suspensin, que estuvo formado principalmente por materia inorgnica, se increment en los meses de primavera y verano. Este trabajo representa un primer paso para la comprensin de los cambios en la diversidad de las comunidades microbianas marinas de Caleta Potter y tiende a cubrir la actual brecha existente en el conocimiento de la dinmica del bacterioplancton y el arqueoplancton de los mares antrticos, en particular durante el otoo y el invierno.
P280 - 27209 MAR AUSTRAL ARGENTINO: HBITAT DE LEVADURAS ADAPTADAS A BAJAS TEMPERATURAS. DE GARCIA, VIRGINIA; VAN BROOK, MARIA ROSA
Centro Regional Universitario Bariloche - Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medio Ambiente, Universidad Nacional del Comahue, Bariloche Ms de las tres cuartas partes de la superficie terrestre estn ocupadas por ecosistemas fros (0-25 C). Aproximadamente el 80% de la biosfera tendra una temperatura entre 3 a 7 C y el 90% del volumen de los hbitats marinos se encuentran a menos de 5 C. Los microorganismos sicrfilos y sicrotrofos que colonizan estos ambientes extremos presentan adaptaciones metablicas a las bajas temperaturas y podran utilizarse en procesos biotecnolgicos en esas condiciones. Los microorganismos que colonizan ambientes extremos de regiones del Hemisferio Sur, particularmente sometidas a los efectos del cambio climtico, estn expuestos al aumento de la radiacin UV por adelgazamiento de la capa de ozono y a la fluctuacin de temperaturas debidas al calentamiento global. Esto los postulara como bioindicadores para el monitoreo de dichos cambios. No existen referencias que den cuenta de la presencia de levaduras en los mares del territorio Argentino, por lo que este trabajo representa el primer estudio de levaduras adaptadas a bajas temperaturas del mar Austral Argentino. Seis muestras de agua de mar (cada una con 3 rplicas), fueron recolectadas en el canal de Beagle y en el meridiano del Cabo de Hornos (Tabla 1), en el mes de abril de 2010 durante la Campaa del Buque Puerto Deseado CONICET. Fracciones de 100 mL fueron filtradas a travs de filtros de nitrocelulosa (45 m). Los filtros fueron colocaron en medio MYP agarizado con y sin NaCl al 5%, se incubaron a 5 C durante 10 das y luego a 10 C por 1 mes. Asimismo, 100 mL de cada muestra fueron filtrados en las mismas condiciones, para extraccin de ADN total, los filtros se conservaron a -20 C.
Puntos Coordenadas Latitud Sur Longitud Oeste Salinidad Tempera- UFC/ (PSU) tura (C) 1000 mL MYP
MYP+ ClNa (5%) 6,6 8,2 16,6 24,2 8,3 11,7 6,6 5,2 16,6 12,1 3,3 5,2
Canal Beagle
1 2 3 4 5 6
54 51829 54 53016 54 55038 57 03312 57 25073 57 47912
068 02666 067 33890 067 25703 067 15338 066 34867 066 02232
30,11 30,223 30,317 33,88 33,91 33,904
8,36 8,28 8,09 6,62 6,31 5,86
10
10,9
Meridiano Cabo de Hornos
15 13,8 13,3 16,3 17,7 34,9 26,6 5,2 1,6 4,1
Los recuentos obtenidos se presentan en la Tabla 1. El agregado de cloruro de sodio al medio de aislamiento parece no favorecer la recuperacin de levaduras comparado con el medio sin sal. Las condiciones ms estrictas (mayor salinidad y menor temperatura) de las muestras 4,5 y 6 no resultaron en recuentos inferiores respecto de las muestras de menor salinidad y mayor temperatura. Ms an, la muestra de mayor salinidad present el mayor recuento. A partir de los cultivos se obtuvieron 91 aislamientos de levaduras (71 colonias blancas, 20 colonias pigmen-
P282 - 27319 ACCIN DEL HIPOCLORITO DE SODIO SOBRE CLULAS Y BIOFILM DE BACTERIAS AISLADAS DE AGUA DE CONSUMO. LUIS, PIGONI; OLGA, AULET; CECILIA DE CASTILLO, MARTA
Universidad Nacional de Tucumn Introduccin: En sistemas de agua potable, las clulas asociadas a biofilm tienden a sobrevivir a los procesos de desinfec-
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cin. El hipoclorito de sodio (NaClO) es el desinfectante ms usado y su efecto residual puede durar todo el recorrido del agua a travs de la red de distribucin hasta el grifo del consumidor. Teniendo en cuenta que en la red de agua de Tucumn, se llega a concentraciones de 0.2 a 0.5 ppm de NaClO y que bajo esas condiciones se aislaron numerosas especies bacterianas, el objetivo de este estudio fue determinar en bacterias aisladas de la red de agua potable, la accin del NaClO sobre clulas y el biofilm. Metodologa: Se trabaj con Pseudomonas sp. (Ps) y Aeromonas sp. (As). La cintica de formacin de biofilm se realiz por la tcnica de policubeta en placa valorndose el crecimiento bacteriano y biofilm. Accin de NaClO sobre: a) Clulas libres. Se prepararon 4 frascos con Buffer fosfato y se inocularon con una suspensin bacteriana de aproximadamente 106 (diez a la seis) unidades formadoras de colonias por mL (UFC/mL), a 3 se agreg soluciones de NaClO hasta concentraciones finales de 0,2; 0,5 y 1 ppm de cloro residual y un control sin NaClO. Despus de 1, 3, 5,10 y 15 minutos de contacto (mc), se neutraliz el cloro residual con tiosulfato de sodio (TS). Se cuantificaron clulas viables. b) Clulas del biofilm. Se prepararon lotes de policubetas con biofilm formado y se agregaron soluciones de NaClO hasta concentraciones finales de 0,2; 0,5; 1 y 5 ppm de cloro libre. Despus de 1 h, se neutraliz, se realizaron recuentos de clulas incluidas y cuantificacin del biofilm coloreado. Se trabaj por duplicado. Resultados: En ambas cepas la carga de bacterias includas en el biofilm maduro fue de 105 (diez a la cinco) a 106 (diez a la seis) UFC/mL. El NaClO mostr a 0,5 y 1 ppm mayor actividad desinfectante sobre clulas libres. A 0,5 ppm, la reduccin de clulas para Ps fue del 73% y 99% (1 y 10 mc) y para As fue del 91% y 99% (1 y 10 mc). A 1 ppm la reduccin de clulas en 1 mc fue 84 y 94% para Ps y As respectivamente, llegando al 99% para ambas cepas a los 5 mc. Una menor reduccin celular fue observada a 0,2 ppm, mostrando mayor susceptibilidad As, con una reduccin de 82% (1 mc) a 99% (10 mc). Las clulas del biofilm de As se redujeron ms significativamente (entre 54 a 82%) que las de Ps a 0,2 y 0,5 ppm. Se observ para ambas bacterias una mayor reduccin de clulas del biofilm (entre 87 y 99%) a 1 y 5 ppm. La estructura del biofilm no fue significativamente removida en las concentraciones estudiadas. Podemos concluir que el incremento de la concentracin del desinfectante produjo reduccin celular (libres e includas en el biofilm) pero no de la matriz del biofilm. Ambas bacterias mostraron entre s diferentes susceptibilidades al NaClO, principalmente a las menores concentraciones ensayadas. Frente a las concentraciones de cloro residual, comnmente mantenidas en los sistemas de agua potable de la provincia, la susceptibilidad de las clulas libres fue mayor que para aquellas del biofilm.
cadas por pruebas bioqumicas clsicas y la caracterizacin del gen de virulencia aggR se realiz mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). El protocolo de trabajo fue el descripto por Toma y cols. (J Clin Microbiol 2003; 41: 2669-2671). Se incluyeron cepas control con y sin factor de patogenicidad suministradas por el personal del Servicio de Fisiopatogenia del INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. La electroforesis se realiz en geles de agarosa los cuales se tieron con bromuro de etidio. El anlisis de las bandas se realiz con el programa UVI Pro. En total se estudiaron 160 muestras de aguas procedentes de red domiciliaria, natatorios y fuentes superficiales y subterrneas, de las cuales se recuperaron 52 cepas de E. coli. Fueron positivas para el gen aggR 3/15 (20%) cepas provenientes de agua de red, 5/9 (55,5%) de las obtenidas de natatorios, 3/19 (15,8%) aislamientos de fuentes superficiales y 3/9 (33,3%) recuperadas de fuentes subterrneas. La implementacin de tcnicas moleculares en la deteccin de este patotipo de E. coli constituye una herramienta eficaz en la deteccin e identificacin de estos agentes y contribuye a evaluar la seguridad del agua con indudables beneficios sobre la salud humana. Los resultados obtenidos hasta el momento evidencian que es necesario continuar con la deteccin de ECEA de las fuentes de agua y en pacientes con diarrea de la provincia del Chaco a fin de evaluar si en nuestra regin esta bacteria puede considerarse un patgeno emergente.
P284 - 27365 ANLISIS PRELIMINAR DEL MECANISMO DE ADSORCIN DE URANIO POR UNA MATRZ DE MONTMORILLONITA - Aphanocladium sp. OLIVELLI, MELISA(1,2); CURUTCHET, GUSTAVO(2); TORRES SANCHEZ, ROSA(1)
(1) Centro de Tecnologa de Recursos Minerales y Cermica, La Plata (2) CEA-ECyT-3IA, Universidad Nacional de San Martn, CONICET Antecedentes. El uranio es un metal pesado con notable toxicidad que se encuentra como efluente asociado a procesos de energa nuclear y drenajes cidos de minas. La biosorcin es una alternativa efectiva para la remocin de este tipo de contaminantes aunque en el caso de bacterias u hongos es necesario inmovilizar los mismos sobre una matriz para facilitar las operaciones posteriores de separacin de la solucin. A su vez, las arcillas son minerales con reconocida capacidad de adsorcin de metales aunque esta es menor que la que generalmente poseen los sistemas biolgicos y adems su pequeo tamao de partcula dificulta su separacin de la suspensin. En este contexto, la generacin de matrices de biopolmeros arcillosos por inmovilizacin de biomasa en el soporte arcilloso puede favoreced la adsortividad especfica del metal, as como la posterior separacin de las mismas de la solucin mejorando las propiedades de coagulacin del sistema. Objetivos. El objetivo de este trabajo es evaluar de manera preliminar los mecanismos involucrados en la remocin de especies de Uranio de soluciones mediante matrices de biopolmeros arcillosos (bio-arcilla). Materiales y mtodos. Para la generacin de la bio-arcilla se hizo crecer una cepa de Aphanocladium sp. sobre una montmorillonita natural. Las mismas fueron recuperadas por centrifugacin. Luego fueron secadas en estufa y molidas con mortero. El complejo arcilla-biofilm fue tratado con una solucin de acido ntrico 1 M, a fin de eliminar cualquier catin de intercambio presente y convertir los grupos funcionales de la matriz a su forma protonada. Luego de lavar la matriz protonada se procedi a su secado a temperatura ambiente. Soluciones de distintas concentraciones de U (VI) a distintos pH entre 2,5 y 4,5 fueron puestas en contacto con la bio-arcilla (0.1% p/v) en un reactor a 25 C. Se tomaron muestras de 1 mL a los 0 y 135 minutos. El pH se mantuvo constante mediante el agregado de una solucin de NaOH. Resultados. Durante el desarrollo de las adsorciones se detect liberacin de protones, lo cual sugiere un proceso de intercambio inico entre los protones asociados a los grupos funcionales de la bio-arcilla y las especies de Uranio presentes en la solucin. Adems, los datos mostraron una correlacin entre el pH y la cantidad de Uranio adsorbido. La adsorcin se vio disminuida a medida que el pH fue menor. Al mantener el pH controlado por el agregado de NaOH fue posible determinar la relacin estequiomtrica entre la canti-
P283 - 27358 DETECCIN DE Escherichia coli ENTEROAGREGATIVA EN FUENTES DE AGUA DE LA PROVINCIA DEL CHACO. INFORME PRELIMINAR. LOSCH, LILIANA SILVINA(1,2); TRACOGNA, MARIA FERNANDA(1); GARIBOGLIO, MARIA LUCRECIA(1); MERINO, LUIS (1,2)
(1) IMR (2) Facultad de Medicina Escherichia coli es un indicador de contaminacin fecal de fuentes de agua pero existen cepas de esta bacteria con capacidad para causar enfermedad en el ser humano a las que se las denomin cepas diarreognicas. Entre ellas se encuentra E. coli enteroagregativa (ECEA), un patgeno emergente en muchos pases y reconocida como agente causal de diarrea persistente en nios y adultos tanto en pases desarrollados como en vas de desarrollo. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de cepas de ECEA en fuentes de agua de la provincia del Chaco. Entre marzo y junio de 2010 se estudiaron muestras de aguas superficiales, profundas, de red y natatorios. En funcin de la turbidez de las muestras, las mismas se procesaron por dos tcnicas diferentes: enriquecimiento directo en medio EC doble concentracin (muestras ms turbias) o filtracin de membrana y posterior incubacin del filtro en el mismo medio (muestras menos turbias). Las botellas positivas se repicaron en placas de Agar Eosina Azul de Metileno y se incubaron a 35C durante 24 horas para la recuperacin de E. coli. Los aislamientos fueron identifi-
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dad de protones liberados y la cantidad de metal adsorbido. La capacidad de adsorcin del sistema tuvo una fuerte dependencia con el pH de la solucin y est dada por un intercambio inico entre los protones de los grupos funcionales de la matriz y el metal en solucin. Adems, la capacidad de adsorcin del sistema fue alta, lo que convierte a este material en una alternativa efectiva y de bajo costo para su empleo en la remediacin de efluentes que contienen este tipo de contaminantes.
(1) QO, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires (2) Instituto de Microbiologa y Zoologa Agrcola-INTA Los hongos son una fuente prominente de metabolitos secundarios (antibacterianos, antifngicos, inmunosupresores, micotoxinas, etc.). Se estima que slo un porcentaje menor al 1% fue estudiado en cuanto a la obtencin de productos naturales. Numerosos compuestos con actividad teraputica fueron aislados de hongos (penicilinas, cefalosporinas, ciclosporinas, lovastatina, entre otros). El surgimiento de cepas bacterianas resistentes a antibiticos conocidos hace relevante la bsqueda de nuevas molculas activas. El suelo, en cuanto a fuente importante de propgulos fngicos, resulta un interesante reservorio de molculas con actividad biolgica. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antibacteriana de extractos crudos provenientes de cepas fngicas aisladas de suelo. Se cultivaron en arroz 25 cepas fngicas de suelo (30 g de arroz, 50 mL de agua) y se incubaron durantes 15 das a 25 C. Los cultivos desarrollados se extrajeron con 50 mL de acetato de etilo durante 18 h en reposo y oscuridad, se filtraron y se llevaron a sequedad en rotavapor (35 C). Los extractos secos se reconstituyeron en 500 l de acetato de etilo. La actividad antibacteriana de los extractos se ensay contra Enterococcus faecalis (ATCC 29212), Escherichia coli (ATCC 8739), Salmonella enterica subsp. enterica (ATCC 13311) y Staphylococcus aureus subsp. aureus (ATCC 6538P). Se utilizaron cultivos desarrollados en Caldo Infusin Cerebro Corazn durante 18-24 h. Se realizaron antibiogramas por duplicado (mtodo de difusin, Agar Mueller Hinton) utilizando discos de papel de filtro (Whatman N 5) de 6 mm de dimetro embebidos en el extracto reconstituido. Como control positivo y negativo se utilizaron discos con 50 g de cloranfenicol y embebidos en acetato de etilo respectivamente. Se midieron los halos de inhibicin luego de 24 h de incubacin a 37 C. Los resultados de cada extracto crudo se expresaron como porcentaje del dimetro del halo de inhibicin respecto del cloranfenicol. Dos extractos resultaron relevantes: el de Bipolaris sp., que present actividad contra S. aureus (120 %) y contra E. faecalis (64 %) y el extracto de Aspergillus sydowii que evidenci actividad contra S. aureus (92 %). El resto de los extractos present actividades inferiores contra todas las bacterias ensayadas. Estos resultados sugieren continuar los estudios a fin de aislar las molculas involucradas en la actividad antibacteriana y elucidar sus estructuras.
P285 - 27376 DIVERSIDAD Y DISTRIBUCIN DE LEVADURAS EN SUELOS ASOCIADOS A Nothofagus EN EL BOSQUE ANDINO-PATAGNICO, ARGENTINA. MESTRE, MARIA CECILIA(1); LIBKIND, DIEGO(1); ROSA, CARLOS A(2); FONTENLA, SONIA(1)
(1) Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medio Ambiente, Universidad Nacional del Comahue, (2) Instituto de Cincias Biolgicas, Universidade Federal de Minas Gerais Los ecosistemas forestales son importantes en la conservacin del paisaje y de la diversidad en general. Las poblaciones vegetales condicionan la composicin de microorganismos del suelo, algunos de los cuales tienen importancia en el crecimiento y establecimiento de las plantas (PGPR y micorrizas) del ecosistema. Gran parte de la actividad microbiana ocurre en las capas superficiales del suelo y en la rizsfera (influenciada por exudados radicales). Los bosques Andino-patagnicos estn dominados por especies del gnero Nothofagus o por conferas. Los primeros poseen elevada incidencia de ectomicorrizas en las races (73-79% de puntas infectadas), siendo la fraccin micorrizsfera una zona de alto desarrollo microbiano. En el suelo, las levaduras son una de las poblaciones frecuentes, aunque en menor nmero que bacterias y otros hongos. En estos bosques nativos, es poca la informacin de las comunidades microbianas y menos an la de levaduras presentes en las fracciones de suelo. Se estudi la presencia de levaduras en suelo (S), rizsfera (R) y micorrizosfera (M), en bosques puros de Nothofagus pumilio (lenga) o de N. antarctica (ire). La fraccin S se obtuvo por tamizado del suelo; las fracciones R y M por agitacin de la raz y de los morfotipos ectomicorrcicos dominantes, agrupados por similitud morfolgica. En todos los casos el aislamiento de levaduras se realiz en medio MYP agarificado, adicionado con cloranfenicol (200ug/mL) y rosa de bengala (25 ug/mL). Los aislamientos se identificaron por secuenciacin de la regin D1/D2 del 26S ADNr. Se aislaron 126 levaduras en el bosque de lenga, distribuidas en 23 especies, y 89 en el bosque de ire, distribuidas en 13 especies. Ms del 65% de los aislamientos correspondieron al Phyllum Basidiomycetes y el gnero ms frecuentemente aislado fue Cryptococcus. La especie ms abundante en el bosque de lenga fue Cr. podzolicus, mientras que en el de ire fue Cr. phenolicus. En el bosque de lenga se observ que los rdenes Tremellales y Saccharomycetales se asociaron a las fracciones M y R, respectivamente. En el bosque de ire se observ la asociacin de Tremellales y Saccharomycetales con las fracciones R y S respectivamente. Un grupo de aislamientos fueron asociados a hongos micorrcicos no identificados, que se asocian a la fraccin M en el bosque de ire. En ambos bosques se identificaron aislamientos correspondientes a 5 posibles especies nuevas de las cuales 2 ya fueron descriptas: Lindnera rhizosphaerae y Lachanchea nothofagi. Ambos bosques poseen poblaciones de levaduras propias, que se manifiesta en las diferencias en la distribucin y ocurrencia de algunos rdenes y especies observados. Este hecho y el aislamiento de especies nuevas, revelan la importancia de las levaduras en las fracciones del suelo y evidencia la necesidad de profundizar el estudio de su diversidad y su funcin ecolgica en los suelos forestales.
P287 - 27423 CARACTERIZACIN DE ABUNDANCIA Y DIVERSIDAD DE HONGOS EN SUELOS CULTIVADOS SOMETIDOS A DISTINTOS ESQUEMAS DE ROTACIONES. BARRERA, V A(1); LOPEZ, N(1); ROJO, R(1); AGAMENNONI, R(2); CHIESSA, G(1); MARTINEZ, M C(3)
(1) IMYZA-INTA, (2) EEA ASCASUBI INTA, (3) IB-INTA Los hongos de suelo tienen un importante rol por sus funciones ecolgicas como as tambin por las propiedades fitopatognicas de algunas especies. En este trabajo, se analiza la abundancia y diversidad de hongos de suelo mediante mtodos clsicos de aislamiento y caracterizacin y por mtodos moleculares. El objetivo es aplicar y desarrollar metodologas apropiadas que permitan determinar el efecto de diferentes esquemas de rotaciones en suelos cultivados sobre la diversidad de las comunidades fngicas presentes para, en el mediano plazo, poder establecer polticas adecuadas de manejo que permitan prevenir la incidencia de enfermedades fngicas de suelo y favorecer la sustentabilidad del mismo desde el punto de vista microbiolgico. Se analizaron 40 muestras de suelo provenientes de un ensayo de rotaciones (INTA, H. Ascasubi, Bs.As.) resultantes de un diseo en bloques completos aleatorizados con 8 tratamientos y 5 repeticiones (tamao de parcelas: 15x15 m) consistentes en monocultivo de cebolla o en rotaciones con otros cultivos (alfalfa, agropiro, raygras, vicia+avena, girasol, trigo y zapallo). Se tomaron dos repeticiones de cada tratamiento para los anlisis de aislamientos de hongos. El aislamiento y caracterizacin de hongos del
P286 - 27411 ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE EXTRACTOS CRUDOS DE HONGOS AISLADOS DE SUELO. ROMERO, STELLA MARIS(1); BUCCI, MARIA CONSTANZA(1); VAAMONDE, GRACIELA(1); ROMERO, ANDREA IRENE(1); COMERIO, RICARDO(2)
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gnero Trichoderma (potenciales biocontroladores) se realiz mediante el mtodo de diluciones seriadas de suelo. Para hongos fitopatgenos, se aplic el mtodo de trampas usando glomrulos de acelga estriles, los tips hifales obtenidos se sembraron en medio nutritivos para su posterior identificacin. Para el anlisis de diversidad de comunidades fngicas por mtodos moleculares se extrajo ADN total de las 40 muestras de suelo usando un sistema comercial (Power Soil DNA kit, MO BIO Laboratories, Inc.). Se realiz PCR sobre el ADN obtenido empleando iniciadores fngicos (ITS1, ITS4, ITS5) para evaluar su aplicacin en la metodologa de ARISA (Automated Ribosomal Internal Trasncribed Spacer Analysis). Se obtuvo un total de 13 aislamientos de Trichoderma sp. de las muestras de suelo analizadas que estn siendo identificados. Asimismo, se obtuvo una coleccin de 45 aislamientos de hongos potencialmente fitopatgenos, 28 de los cuales fueron identificados como Rhizoctonia solani, R. zeae, R. circinata, Ceratobasidium y Fusarium oxysporum. Los 17 restantes estn en proceso de identificacin. Para el anlisis de diversidad con mtodos moleculares, se inici la puesta a punto de la tcnica de ARISA. Se obtuvieron amplificaciones en 36 de las muestras, observndose un promedio de 4 fragmentos entre 500 y 750 pb, coherente con el tamao esperado para las secuencias de ITS. Se estn definiendo las condiciones adecuadas para su resolucin en un secuenciador automtico. Se realiz la puesta a punto de mtodos moleculares y la aplicacin de metodologas de aislamiento para el estudio de la micobiota de suelos. Las tcnicas disponibles permiten definir la abundancia y diversidad de hongos de importancia (biocontroladores, fitopatgenos) y evaluar la composicin de las comunidades fngicas de manera ms amplia para su posterior correlacin con los diferentes esquemas de rotaciones.
diado hasta el momento, nuevas especies presentes en el mismo y otras previamente descriptas en Patagonia. Contribuye as al estudio de la biodi-versidad de levaduras en ambientes naturales esta regin. La filsfera constituye un ambiente considerado extremo, por lo que los microorganismos asociados a sta poseen estrategias adap-tativas, como resistencia a cambios de temperatura y disponibilidad de agua, produccin de compuestos fotoprotectores y de fitohormonas. Se ha descripto que las especies de levaduras pertenecientes a algunos de los gneros aqu estudiados (Aureobasidium y Rhodotorula) son capaces de promover el crecimiento de la planta y el desarrollo de micorrizas en sus races, mientras que otras poseen propiedades de biocontrol en diferentes especies vegetales. Por lo tanto, las especies identificadas podran tener una influencia significativa en la germinacin de semillas de Raul y en el posterior desarrollo de las plntulas. Su estudio tiende entonces al desarrollo de aplicaciones biotecnolgicas de levaduras nativas en el mejoramiento de programas de domesticacin y en el desarrollo de actividades agrcolas y forestales sustentables.
P289 - 27516 TRATAMIENTO BACTERIANO DE RESIDUOS PROVENIENTES DE LA DESHIDRATACIN DEL PETRLEO. TONIN, N; PUCCI, OH; ACUA, AJ; PUCCI, GN
(1) Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. Centro de Estudios e Investigacin en Microbiologa Aplicada (CEIMA). Facultad de Ciencias Naturales. Comodoro Rivadavia. Chubut. Argentina. El porcentaje de agua en el petrleo que proviene de los yacimientos es variable y puede llegar a ms del 95%, por lo que ante de su despacho a las destileras debe tratarse. En este tratamiento se incluye la deshidratacin, desalinizacin y eliminacin de slidos. Estos procesos producen residuos empetrolados (RE) a los que hay que dar un tratamiento antes de su disposicin final. La composicin del residuo, si bien es variable en cuanto a los tipos de hidrocarburos, dependiendo del yacimiento y tipo de crudo est acompaado generalmente de arenas y arcillas que por lavado libran un porcentaje importante de petrleo, pero retienen petrleo en porcentajes superiores a los permitido por normas ambientales. En el presente trabajo se ensay un mtodo de biodegradacin por bacterias de los RE de instalaciones con y sin extraccin previa por mtodos fsicos. El mtodo con extraccin se efectu en dos modalidades, con y sin inoculacin de bacterias obtenidas del RE sin lavar. La identificacin de las cepas se efectu por determinacin de los metil steres de cidos grasos de membrana utilizando el sistema Sherlock MIDI. Las bacterias inoculadas con capacidad de degradacin de hidrocarburos fueron Kocuria rosea, Micrococcus luteus, Gordonias sp, Clavibacter michiganensis, Ochrobactrum antropi. Se realizaron anlisis fsicos de tanque por las tcnicas de espectroscopia infrarroja (EPA 418) y por la tcnica de extraccin por Soxhlet (EPA 1664), adems se realizaron recuentos bacterianos en medios con hidrocarburos. Los sistemas se estudiaron en su cintica por mineralizacin (determinacin de CO2). Los valores de las extracciones de soxhlet fueron superiores a los encontrados por el mtodo EPA 418.1, indicando una fuerte presencia de hidrocarburos de ms de treinta tomos de carbono, la concentracin de hidrocarburos polares fue de 18%. Los valores de mineralizacin obtenidos fueron de 15000mg CO2/ kg suelo en 100 das de experimento. La identificacin de cepas a partir de RE lavado a 65C no inoculado fue en una gran mayora Pseudomonas. Los resultados indican que se produce una buena biorremediacin en los tres casos siendo ligeramente menor en FT lavado sin inoculacin. La conclusin de la experiencia indica que si hay tiempo suficiente, se pueden eliminar los hidrocarburos hasta los lmites legales solo con biorremediacin asistida con nutrientes tanto en RE lavado como sin lavar
P288 - 27474 BIODIVERSIDAD DE LEVADURAS EN SEMILLAS DE Nothofagus nervosa (RAUL): POSIBLES APLICACIONES BIOTECNOLGICAS. NATALIA, FERNANDEZ(1); CECILIA, MESTRE(1); FONTENLA, SONIA(2); FONTENLA, PAULA(3)
(1) INIBIOMA-CONICET, Universidad Nacional del Comahue (2) UNIBIOMA, Universidad Nacional del Comahue, (3) INTACONICET La filsfera representa la interfase bisfera-atmsfera ms grande de la tierra. Las levaduras son abundantes en las comunidades microbianas presentes en la superficie de las plantas, siendo capaces de promover el metabolismo vegetal y de actuar como agentes de fitodefensa. Sin embargo, la influencia de las levaduras asociadas a especies autctonas sobre el incremento de la aptitud vegetal y su posible rol como agentes de biocontrol permanecen inexplorados. Nothofagus nervosa es una especie arbrea nativa de los Bosques Andino Patagnicos de gran importancia ecolgica y econmica. Dada su elevada calidad maderera, en el pasado esta especie fue objeto de una intensa explotacin sin manejo silvcola. Como consecuencia, su distribucin natural se ha reducido drsticamente. Esto ha llevado a la implementacin de programas de conservacin y domesticacin que permitan desarrollar actividades de reforestacin y de aprovechamiento forestal sustentable. El objetivo de este trabajo es describir la biodiversidad de levaduras asociadas a semillas de N. nervosa, que forman parte de su extensa filsfera, para luego poder estudiar como se relacionan estos microorganismos con el proceso de domesticacin de la especie y su posterior implantacin en el campo. Se aislaron levaduras de 30 semillas. stas fueron suspendidas en NaCl y agitadas con arena. Se sembraron las muestras en medio MYP con cloranfenicol y se incubaron 72 h a 20 C. Los aislamientos se agruparon segn macromor-fologa y en base al patrn de microsatlites (MSP-PCR). Se seleccionaron representantes de cada grupo para su secuenciacin. Se identificaron 17 especies a partir de los 144 aislamientos realizados, dos de ellas nuevas. El mayor nmero de especies (59%) y de aislamientos (77%) estuvieron incluidos en el Phylum Ascomycota. Los taxones ms abundantes respecto del total de cepas aisladas fueron: Dothichiza, Aureobasidium, una de las especies nuevas (Ascomycota), Cryptococcus y Rhodotorula (Basidiomycota). Este trabajo describe la biodiversidad de levaduras asociadas a un sustrato no estu-
P290 - 27517 OPTIMIZACIN DE UN SISTEMA DE BIORREMEDIACIN DE HIDROCARBUROS A ESCALA DE LABORATORIO. PUCCI, AJ; TONIN, NL; DIAZ, V; PUCCI, GN; PUCCI, OH
(1) Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. Centro de Estudios e Investigacin en Microbiologa Aplicada (CEIMA).
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Facultad de Ciencias Naturales. Comodoro Rivadavia. Chubut. Argentina La ciudad de Comodoro Rivadavia se caracteriza por la gran actividad de extraccin de petrleo que desarrolla, lo que produce accidentalmente derrames de hidrocarburos en suelos. Estos suelos deben ser remediados para una adecuada disposicin final. Uno de los mtodos aplicables es la biorremediacin, para lo que deben adecuarse diversos parmetros para lograr un proceso eficiente. El objeto de este trabajo fue optimizar los parmetros de humedad, temperatura y relacin de nutrientes para estimar la posibilidad de aplicar la tcnica de biorremediacin en un suelo contaminado con hidrocarburos. Para esto se realiz una caracterizacin inicial del suelo contaminado en funcin a sus caractersticas fsicas y qumicas, como tambin de la cantidad de microorganismos hetertrofos y degradadores de hidrocarburos, tambin se estudi la concentracin del contaminante por extraccin con soxlhet y cromatografa en columna de slica gel y por cromatografa gaseosa. Para la optimizacin de humedad y temperatura se trabaj en microcosmos sobre 100 g del suelo contaminado con humedades de 3%, 10%, 15% y 20% y temperaturas de 5 C, 15 C, 28 C y 37 C realizando un seguimiento de la mineralizacin de los hidrocarburos midiendo el CO2 producido durante 60 das. Para la optimizacin de la relacin de nutrientes (C:N:P) se disearon microcosmos diferentes con 100g de suelo que fueron monitoreados por el consumo de oxgeno y por determinacin de los hidrocarburos presentes por cromatografa gaseosa durante 30 das. Las relaciones C:N:P estudiadas fueron 100:20:2, 100:10:1, 100:5:0,5 y 100:1:0,1. Los resultados obtenidos indican que el suelo no posee limitantes fsicos y qumicos para el correcto desarrollo de microorganismos a excepcin del contenido de nutrientes biodisponibles (nitrato, nitrito, amonio y fosfato), ya que se observaron en concentraciones deficientes en el suelo. El nmero de microorganismos hetertrofos fue de 2,6x108 UFC/g y de degradadores de hidrocarburos de 1,2x108 UFC/ g. El contenido de hidrocarburos fue de 5,4% con un 35% de hidrocarburos alifticos, 14% de hidrocarburos aromticos y 51% de hidrocarburos polares. Los hidrocarburos determinados por cromatografa gaseosa fueron cercanos al 1,5% con valores de 0,05% de hidrocarburos poliaromticos y 0,5% de nalcanos compuestos de C13 a C20. La mineralizacin de hidrocarburos fue ptima para humedades en el suelo de 10% a 20% y a temperaturas de 25 C a 37C con valores de produccin de CO2 de 3000 a 4500 mgCO2 /kg. La relacin ptima de nutrientes C:N:P fue de 100:1:0,1 en la que se observ el mayor consumo de oxgeno y la remocin de un 83% de los hidrocarburos totales determinados por cromatografa gaseosa con un 78% y 89% de eliminacin de los hidrocarburos n-alcanos y poliaromticos, respectivamente. El presente desarrollo nos permite estimar que la aplicacin de la tcnica de biorremediacin es posible de ser aplicada en el suelo contaminado con hidrocarburos estudiado, en rangos de temperatura de 25 C a 37 C y de humedad de 10% a 20% con una relacin C:N:P de 100:1:0,1.
centr y lav (para disminuir su actividad) y se las sembr en distintos medios de cultivo. Las colonias que aparecieron tras 72 h de incubacin a 25 C (todas ellas aerobias) se aislaron y caracterizaron mediante la aplicacin de tcnicas bacteriolgicas convencionales. Por ltimo se procedi a la identificacin de los aislamientos mediante secuenciacin del gen del ARNr 16S. La evaluacin de la capacidad de formacin de biofilms se realiz en cultivos estacionarios de 14 das mediante el mtodo del tubo de ensayo empleando como medio de cultivo caldo nutritivo (CN) y caldo nutritivo diluido 30 veces en agua milliq (CN 1/30). Este ltimo es un medio pobre, de caractersticas cercanas a las del repositorio. Por otra parte se evaluaron cambios de pH en el medio como consecuencia de la accin microbiana. En la siguiente tabla se muestran aquellas cepas cuyos efectos resultaron ms marcados:
Cepa RNE9 RNE21 RE51 RE59 RNE12 Identificacin Pseudomonas sp Sinorhizobium sp Acinetobacter sp Rhodococcus sp Microbacterium sp pH (CN) 8.07 7.75 7.66 7.72 7.82 Biofilm (CN) ++++ ++ ++ ++ ++++ pH (CN1/30) 7.22 7.52 7.46 7.52 7.85 Biofilm (CN 1/30) ++ + + + +
Se identificaron 20 cepas bacterianas de las cuales 18 tienen capacidad de formar biofilms estables aun en un medio muy diludo. Por otra parte, todas las bacterias aisladas alcalinizan el medio desde un pH de 6 (pH del CN 1/30 estril) a valores de entre 7 y 8. En particular, las cepas RNE9, RNE21,RE51, RE59 y RNE12 seran las principales candidatas para estudios de corrosin microbiolgica, debido a que son las que maximizan estos efectos. En vista de los resultados obtenidos y considerando que la matriz de los elementos almacenados es de aleacin de aluminio AA6061, un material altamente susceptible a sufrir tanto corrosin bajo depsito como ataque alcalino en partculas catdicas a pH superiores a 6, se comprende tanto la necesidad de realizar estudios especficos de biocorrosin como de implementar un programa de monitoreo microbiolgico del repositorio.
P292 - 27571 BIODIVERSIDAD FNGICA ASOCIADA A TURBERAS COMPACTAS DE ASTELIA-DONATIA DE TIERRA DEL FUEGO. PAREDES, NI(1); ARAMBARRI, AM(2); PANCOTTO, VA(3); FRITZ, C(3); SALERNO, GL(1); CONSOLO, VF(1)
(1) CEBB-CIB-FIBA. Centro de Estudios de Biodiversidad y Biotecnologa. Ctro de Inv. Biolgicas-Fundacin para Inv. Biolgicas Aplicadas. (2) Instituto de Botnica C. Spegazzini. FCNYMUNLP. (3) CADIC. Centro Austral de Inv. Cientficas. CONICET. Ushuaia. Tierra del Fuego. Argentina. Las turberas son ecosistemas compuestos principalmente de materia orgnica que proviene en gran parte del remanente de plantas muertas parcialmente descompuestas y que se han acumulado por miles de aos. Es as que las turberas albergan una gran diversidad de microorganismos, siendo los hongos los principales descomponedores. Sin embargo, las comunidades fngicas de estos ambientes han sido muy poco investigadas. En Tierra del Fuego existen varios tipos de turberas, que cubren una superficie de 2400 km2. Actualmente, los estudios que se realizan sobre estas turberas no incluyen trabajos relacionados con la caracterizacin de microorganismos presentes en dichos ecosistemas. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar la comunidad fngica asociada a una turbera compacta de Astelia-Donatia en la regin Moat complementando tcnicas clsicas y estrategias basadas en metodologas moleculares. El muestreo se realiz en febrero 2010, en una turbera dominada por Astelia pumilla y Donatia fascicularis, en la regin de Moat. Se recolectaron 46 muestras de turba, obtenidas por el trazado de 3 transectas. Se sembraron porciones de turba en medios de cultivo apropiados a temperatura ambiente, hasta la aparicin de colonias fngicas, que fueron purificadas y determinadas utilizando claves taxonmicas. Para determinar la presencia de hongos difcilmente cultivables, se extrajo el ADN de las muestras y se aplic la tcnica de PCR utilizando cebadores especficos para detectar Ascomycetes y Basidiomycetes. Los productos de PCR
P291 - 27538 EVALUACIN DE LA POBLACIN BACTERIANA DE UN DEPSITO DE ALMACENAMIENTO INTERINO EN HMEDO DE COMBUSTIBLES GASTADOS DE REACTORES DE INVESTIGACIN. FORTE GIACOBONE, ANA F; PIZARRO, RAMON
Comisin Nacional de Energa Atmica La biocorrosin es un fenmeno que ocurre en los metales como consecuencia de la accin de microorganismos adheridos a los mismos. En la industria nuclear este proceso ocasiona no solamente prdidas econmicas sino tambin un alto riesgo medio ambiental. Para que exista biocorrosin es condicin necesaria aunque no suficiente la existencia de biofilms. El objetivo del presente trabajo ha sido identificar las cepas bacterianas cultivables presentes en un depsito de almacenamiento interino en hmedo de combustibles gastados de reactores de investigacin (repositorio nuclear) que pudiesen tener una mayor relevancia desde un punto de vista de la induccin de corrosin microbiolgica. Para ello se tomaron muestras de agua de los 50 cm superiores de los canales de monitoreo del repositorio, se las con-
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se clonaron y se transformaron clulas de E. coli. Se seleccionaron los clones positivos y se secuenciaron los fragmentos purificados. Las secuencias obtenidas fueron comparadas con bases de datos pblicas. De las 46 muestras procesadas se sembr 1 g de turba en 104 cajas de Petri y se aislaron 283 colonias. Del total de colonias analizadas el 41% de las mismas no pudo ser determinado por presentar micelio estril. En el resto de los aislamientos se determin la presencia de 13 gneros y 17 especies, principalmente de la divisin Ascomycotina (56%) y Zygomycotina (3%). Se pudo determinar la presencia de hongos pertenecientes a los gneros Acremonium, Alternaria, Aphanocladium, Aspergillus, Beauveria, Cladosporium, Mucor, Penicillium, Phoma, Scopulariopsis, Trichoderma, Ulocladium y Verticillium. Para el gnero Penicillium se observ la frecuencia ms alta (27%) y la mayor cantidad de especies (4). A travs de la secuenciacin de los productos de PCR observados se encontr similitud con hongos no cultivables, endofticos y ectomicorrizas. El uso de tcnicas clsicas y moleculares result complementario ya que su aplicacin permiti determinar especies fngicas cultivables y otras difcilmente cultivables. Estas herramientas contribuirn al conocimiento de la biodiversidad fngica en ambientes de turba en Tierra del Fuego.
tr la presencia de gran diversidad de bacterias tanto cultivables como no cultivables en el suelo del bosque nativo del Chaco Argentino lo que indicara que el suelo estudiado podra ser de gran utilidad en la prospeccin de nuevos genes que degraden celulosa.
P294 - 27591 EFECTIVIDAD DE INOCULATES BACTERIANOS AUTCTONOS EN SUELOS DE LA PATAGONIA CENTRAL CONTAMINADOS CON FENANTRENO: INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES ABITICAS. MADUEO, LAURA(1); ALVAREZ, HECTOR (2); MORELLI, IRMA(1)
(1) CINDEFI-CONICET, Universidad Nacional de La Plata (2) CRIDECIT-Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco En la Patagonia Central se encuentran unos de los ms grandes yacimientos petrolferos de la Argentina, a causa de su explotacin se produce a menudo la contaminacin de los suelos de la regin. La combinacin de factores ambientales (baja humedad y contenido de nutrientes) genera condiciones sub-ptimas de degradacin por parte de las comunidades microbianas naturales de la Patagonia semirida. La inoculacin con microorganismos autctonos degradadores, adaptados a las condiciones ambientales, podra favorecer los procesos de biorremediacin. En estudios anteriores a partir de suelos contaminados de la Patagonia se aislaron y caracterizaron tres cepas degradadoras de fenantreno (1A, 22A y 22B), filogenticamente relacionadas con Sphingomonas spp. El objetivo de ste trabajo fue determinar la eficiencia de la inoculacin con estos microorganismos autctonos sobre la degradacin de fenantreno en suelos artificialmente contaminados de la Patagonia, y el efecto de la modificacin de las condiciones abiticas. Se realizaron estudios de inoculacin de las tres cepas en sistemas biometers bajo tres condiciones: suelo natural (SN), relacin C/N/P 100/2/0,3 y 10% p/p de humedad (H). Suelo fertilizado (SF), C/N/P 100/5/2 y 10% H. Suelo hmedo (SH), C/N/P 100/2/0,3 y 15% H. Los sistemas fueron contaminados con 2000 mg/Kg de fenantreno e inoculados con 1,28 UFC/ g de suelo seco. Se utiliz suelo contaminado como control, los ensayos se realizaron por triplicado. Se determin la produccin de CO2 y la concentracin de fenantreno (HPLC) luego de 30 das. La contaminacin con fenantreno no produjo cambios en la produccin de CO2 en el sistema control en SN, demostrando que la actividad degradadora de fenantreno de la comunidad microbiana del suelo estara limitada por las condiciones abiticas del mismo. La cepa 22B, que haba demostrado una alta resistencia a la desecacin, fue el nico inculo que produjo un significativo aumento (P<0,05) en la mineralizacin inducida por fenantreno. Sin embargo no se observaron cambios significativos en la concentracin de fenantreno, esto podra deberse a que las condiciones de desecacin del suelo limitaran la disponibilidad del contaminante. Mientras que la incorporacin de N y P caus un leve incremento en la produccin de CO2 de los sistemas SF, la correccin de las condiciones de humedad (15%) produjo cambios significativos sobre la actividad degradadora de fenantreno. En los sistemas SH la produccin total de CO2 fue significativamente mayor (P<0.05) que en los sistemas SN y SF, encontrndose adems diferencias a nivel de la concentracin de fenantreno, tanto en el sistema control como en los inoculados. Estos resultados demostraran que la baja humedad relativa del suelo sera uno de los principales factores ambientales que limitara la actividad degradadora de fenantreno tanto de la comunidad microbiana natural del suelo como de los inoculantes. Slo la inoculacin con la cepa 22B, resistente a la desecacin, logr un efecto estimulatorio sobre la mineralizacin inducida por fenantreno en las condiciones abiticas tpicas del suelo Patagnico.
P293 - 27576 ANLISIS METAGENMICO DE POBLACIONES BACTERIANAS EN SUELO DE BOSQUE NATIVO DEL CHACO ARGENTINO. TALIA, PAOLA(1); CAMPOS, ELEONORA(1); RORIG, MARCELA(2); PRINCIPI, DARIO(1); GRASSO, DANIEL(2); CATALDI, ANGEL(1)
(1) Instituto de Biotecnologa, CICVyA, CNIA, INTA Castelar; (2) Instituto de Suelos, CIRN, CNIA, INTA Castelar Introduccin: El etanol celulsico generado a partir de biomasa es uno de los principales candidatos a ser utilizados como alternativa de los combustibles derivados del petrleo, debido a su gran potencial ambiental, econmico y social porque permite promover el uso de residuos forestales y de la agricultura creando una fuente renovable de combustible. En este contexto, y con el propsito de identificar nuevos genes involucrados en la degradacin de celulosa fue evaluada la biodiversidad de poblaciones bacterianas en una muestra metagenmica de suelo colectada en un bosque nativo del Chaco Argentino (S 26 52 0 W 60 43 48). Asimismo la misma muestra ambiental fue enriquecida utilizando carboxi-metil celulosa como medio de cultivo con el propsito de favorecer el crecimiento de organismos cultivables con capacidad celuloltica. Objetivo: Prospeccin de la biodiversidad de poblaciones bacterianas en suelo de bosque nativo del Chaco Argentino para identificar organismos celulolticos conteniendo nuevos genes codificantes para enzimas degradadoras de celulosa. Materiales y Mtodos: El DNA metagenmico de ambas muestras fue extrado y utilizado para amplificar la secuencia del gen 16S rRNA usando oligonucletidos especficos de la divisin eubacterias que amplifican dicha regin. Los productos de amplificacin fueron clonados en el vector TA cloning vector pCR2.1-TOPO y transformados utilizando clulas competentes DH5alfa. Los clones recombinantes obtenidos fueron secuenciados utilizando el oligonucletido T7. Las secuencias flanqueantes provenientes del vector fueron editadas utilizando el programa VecScreen (www.ncbi.nlm.nih.gov/ VecScreen). Las secuencias editadas fueron analizadas mediante la base de datos especfica de ADN ribosomal RDP (Ribosomal Database Projet II) y el GeneBank usando el programa BLAST. Resultados: Hasta el momento se analizaron 101 clones de la librera construida con ADN metagenmico total, tamao promedio fue de 850 pb. El anlisis realizado a nivel de phylum determino una mayor representacin del phylum Actinobacteria, seguido por Proteobacteria. Asimismo, la clase ms representativa fue Actinobacteria seguido por Acidobacteria y alfa-proteobacteria. El gnero mas representado fue Sphingomonas, y el gnero Gp6 perteneciente a la familia de Acidobacteria. Este estudio demostr la presencia de una gran diversidad microbiana en la muestra, incluyendo tanto bacterias cultivables como no cultivables e identificndose la presencia de gneros con miembros celulolticos tales como Micromonospora, Paenibacillus, Pseudonocardia, y la especie Acidothermus cellu-lolyticus. Conclusiones: este estudio demos-
P295 - 27601 BIOSORCIN DE COLORANTES SOBRE BACTERIAS PRESENTES EN PLANTAS DE TRATAMIENTO BIOLGICO. GUZ, LUCAS; CURUTCHET, GUSTAVO; CANDAL, ROBERTO
CEA-ECyT-3IA Universidad Nacional de San Martn, CONICET Antecedentes: La presencia de colorantes en los cuerpos de agua constituye un serio riesgo para los ecosistemas, la salud
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humana y animal y es un claro ejemplo de contaminacin paisajstica. El Partido de San Martn cuenta con un nmero importante de industrias textiles, muchas de ellas categorizadas como PyMES. Estas empresas utilizan una importante cantidad de agua (100-200 L/kg de producto), generando efluentes lquidos que contienen colorantes y otros productos empleados en estas industrias. La biosorcin se presenta como una alternativa viable para la eliminacin de colorantes en agua. Consiste en la adsorcin (adsorcin fsica o qumica, interaccin electrosttica, intercambio inico, complejacin, quelacin y microprecipitacin) de sustancias presentes en agua por biomasa. Se pueden describir dos procesos fundamentales: adsorcin sobre biomasa no viviente y captacin por biomasa metablicamente activa, lo cual ocurre naturalmente en los cuerpos de agua receptores y en las plantas de tratamiento biolgico. Objetivos: En este trabajo se estudi la biosorcin de un colorante modelo, cristal violeta (CV), sobre bacterias aisladas de un reactor de tratamiento biolgico de sales de alquil-amonio cuaternario. Materiales y Mtodos: Se aislaron 3 cepas bacterianas (cepas I, II y III). Se realizaron pruebas bioqumicas de las cepas aisladas utilizando el kit API 20E, se las caracteriz morfolgicamente utilizando la tcnica de tincin de Gram y se determin su movilidad electrofortica (Brookhaven 90 plus). Se determinaron la dinmica y las isotermas de adsorcin en sistemas agitados con concentracin variable de colorante y fija de biomasa, a diferentes pHs. La biomasa se separ por centrifugacin y se determin la concentracin de colorante en el sobrenadante. Resultados: Se realiz la caracterizacin bioqumica de las cepas aisladas, correspondiendo una de ellas al gnero Serratia (cepa II). Las otras dos cepas (cepas I y III) no se pudieron identificar por este medio, tratndose de bacilos gramnegativos aerobios facultativos. La dinmica del proceso mostr que el equilibrio de adsorcin se alcanza luego de 1 hora de incubacin ajustndose a un modelo de pseudo-segundo orden, sugiriendo que la adsorcin es del tipo de quimiosorcin. El efecto del pH sobre la adsorcin fue mnimo en el intervalo 5-8. La adsorcin del CV se ajust con isotermas del tipo Langmuir para las cepas I y II (monocapa homognea) y Freundlich para la cepa III (capas mltiples). La adsorcin especfica para las cepas I, II y III fue de 250 mg/g, 21,2 mg/g y 85,2 mg/g respectivamente para 25 mg/l iniciales de CV. Se determin que el punto isoelctrico de las 3 cepas es menor a pH 2,5 por lo cual se hallan cargadas negativamente en el rango de pH de este estudio. No se observaron cambios de movilidad por adsorcin de colorante. Conclusiones: Las diferentes cepas bacterianas aisladas presentaron muy distinta capacidad de adsorcin especfica del colorante. La seleccin de cepas adecuadas es fundamental para optimizar el proceso de biosorcin. La cepa I present una adecuada dinmica de adsorcin y alta capacidad especfica, la cual es poco afectada en un amplio rango de pH, lo que permitira realizar un proceso de biosorcin de colorantes catinicos en sistemas agitados.
lamiento multidimensional (MDS). Los valores de H variaron entre 2 y 4 y el nmero de bandas del DGGE entre 4 y 17. Ambos parmetros revelaron mayor diversidad bacteriana en la primera transecta al norte y particularmente en los frentes salinos del estuario (estaciones costeras de las transectas 1 y 2). Asimismo, en la transecta 4, al sur, el valor ms alto de diversidad fue hallado en la zona del frente trmico. Los recuentos bacterianos fluctuaron entre 4,80 E+05 y 5,42 E+06 cel/mL, la biomasa entre 2 y 120,5 g C/L y el volumen celular entre 0,004 y 0,156 m. Los valores ms altos de abundancia y biomasa se asociaron con los ambientes de mayor biodiversidad. Mediante el anlisis de MDS se evidenciaron asociaciones por transecta. Algunos grupos se encontraron ampliamente distribuidos, mientras que otros estuvieron bastante restringidos en el espacio. De este modo, en la transecta 1 se observ un marcado agrupamiento de los datos, sugiriendo una homogeneidad en la composicin bacteriana, como as tambin en la zona del frente salino de la transecta 2. Por otro lado, en las transectas 3 y 4 los datos se distribuyeron con mayor dispersin. El anlisis de algunas de las secuencias de las bandas de DGGE revel la presencia bacterias que mostraron alta similitud en el Genbank con bacterias no cultivables encontradas en ambientes ocenicos, pertenecientes a los phylum Proteobacterium y Bacteroidetes. En conclusin, los resultados encontrados indicaron diferencias en la estructura del bacterioplancton, mostrando mayor biomasa y biodiversidad en las zonas frontales de la plataforma bonaerense. Estas reas son particularmente relevantes desde el punto de vista biolgico debido a su elevada productividad, que favorece el asentamiento de larvas y juveniles de diversas especies de peces de importancia comercial.
P297 - 27607 CARACTERIZACIN DEL PLSMIDO PPL395 PRESENTE EN UNA CEPA DE Paenibacillus larvae CON RESISTENCIA A TETRACICLINA. LEON, IGNACIO E; LOPEZ, ANA C; ALIPPI, ADRIANA M
CIDEFI, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata La loque americana es la enfermedad ms grave y peligrosa que afecta a las larvas y pupas de las abejas melferas (Apis mellifera L.). La enfermedad est ampliamente difundida en todos los pases productores de miel y su agente causal es Paenibacillus larvae, bacteria gram (+) con la capacidad de formar esporas muy resistentes al calor, agentes qumicos y radiacin UV. En pases como Argentina, EE.UU y Canad, se emplea tetraciclina y oxitetraciclina para el control de esta enfermedad, pero, recientemente se ha detectado resistencia en poblaciones naturales del patgeno. Dentro de los mecanismos de resistencia a tetraciclina, los ms difundidos en las poblaciones bacterianas son el eflujo activo y la proteccin ribosomal y, en menor medida la modificacin de la molcula del antibitico. Los dos primeros se encuentran ampliamente distribuidos en bacterias gram (-) y (+). En bacterias gram (+) se han caracterizado 39 genes de resistencia a tetraciclina y oxitetraciclina y, algunos de estos determinantes, como el tet(K) y el tet(L) se transfieren en forma horizontal mediante plsmidos transferibles y/o transposones. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar el plsmido presente en la cepa PL 395 de Paenibacillus larvae con resistencia a tetraciclina. La deteccin de ADN plasmdico fue realizada por la tcnica de Eckhard donde se observ un plsmido de 5.0 Kb al cual se denomin pPl395. La extraccin del ADN plasmdico se efectu con el kit comercial Puriprep-P, con modificaciones, lo que permiti obtener una buena cantidad y calidad de ADN plasmdico en comparacin con mtodos tradicionales. Mediante PCR y usando como molde ADN plasmdico se busc la presencia de los amplicones correspondientes a los determinantes tet(K), tet(L) y tet(M), encontrndose slamente el tet(L) en la cepa estudiada. Para la caracterizacin de los genes involucrados en la replicacin y en la movilizacin, se disearon los primers CAI F/sso R; CAI/F-oriT y Mob1/Mob2. Los resultados de las secuencias obtenidas nos permitieron identificar el origen de replicacin simple hebra, el origen de transferencia y un segmento de los genes Mob que se traducira en la porcin funcional de las relaxasas. La tcnica empleada para la extraccin
P296 - 27604 BIODIVERSIDAD DEL BACTERIOPLANTON EN UN SECTOR DE LA PLATAFORMA COSTERA BONAERESNSE (34-41S). HOZBOR, MC1(1); COPPOTELLI, BM(2); MORELLI, IS(2); COSTAGLIOLA, MC(1); PERESSUTTI, SR(1)
(1) Instituto Nacional de Investigacin y Desarrollo Pesquero (INIDEP). (2) Centro de Investigaciones y Desarrollo en Fermentaciones Industriales, CINDEFI, UNLP, CCT-La Plata, CONICET El estudio de la diversidad y abundancia del bacterioplancton en ambientes marinos es fundamental para comprender el rol que poseen las bacterias en las cadenas alimenticias y en los ciclos biogeoqumicos. En el presente trabajo se analiz la biomasa y diversidad bacteriana y su relacin con los factores ambientales a lo largo de 4 transectas, distribuidas en la plataforma costera bonaerense durante la primavera del 2008. A partir de las muestras de agua se determinaron las caractersticas fsico-qumicas del ambiente. La abundancia bacteriana fue estimada por microscopa de epifluorescencia, utilizando DAPI (46- diamino-2fenilindol) y AO (naranja de acridina), y la diversidad mediante la tcnica de PCR-DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis). Los perfiles de bandas del DGGE fueron analizados mediante el ndice de diversidad de Shanon & Weaver (H) y el anlisis de esca-
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de plsmidos en cepas de P. larvae fue satisfactoria en cuanto a calidad y cantidad del ADN obtenido. Se encontr el determinante tet(L) asociado al plsmido que estara involucrado en la resistencia a tetraciclina en esta bacteria. Se caracteriz el origen de replicacin simple hebra (sso) involucrado en la replicacin del plsmido por el mecanismo del circulo rodante, as como el origen de transferencia dnde se identific el sitio de corte. Por ltimo se secuenci una porcin de los genes Mob que estaran involucrados en la movilizacin del plsmido. Estudio financiado por la ANPCyT (PICT2411) y la CIC. I.E.L. es becario de la CIC; A.C.L. y A.M.A. son investigadoras de CIC y CONICET, respectivamente.
NOS AIRES. FESTA, SABRINA; COPPOTELLI, BIBIANA; DEL PANNO, MARIA; MORELLI, IRMA
CINDEFI-CONICET, Universidad Nacional de La Plata En ambientes altamente modificados, como los representados por suelos antiguamente contaminados, el proceso de envejecimiento del contaminante hace difcil su biodegradacin debido a una disminucin de la biodisponibilidad por unin a la materia orgnica del suelo. Por estos motivos el xito de la biorremediacin de un suelo crnicamente contaminado con hidrocarburos policclicos aromticos (PAH) puede requerir la aplicacin de estrategias especiales dependiendo del tipo, grado y antigedad de la contaminacin. La estrategia de bioaumento utilizando consorcios bacterianos degradadores podra aumentar la diversidad microbiana y recuperar las capacidades funcionales de suelos crnicamente contaminados. El presente estudio tuvo como objetivo la obtencin y caracterizacin de un consorcio bacteriano degradador de fenantreno a partir de un suelo crnicamente contaminado con PAH. Se obtuvo un consorcio bacteriano degradador de fenantreno, mediante tcnicas de cultivos batch en medio mineral lquido (MML) con fenantreno, a partir de un suelo crnicamente contaminado del barrio Mosconi (Buenos Aires, Argentina) ubicado en la zona de influencia del polo petroqumico Ensenada. El consorcio obtenido se conserv fraccionado a -80 C. Se determin la composicin bacteriana del mismo a nivel de cultivables (aislamiento, caracterizacin fenotpica y secuenciacin del gen 16S RNA) y no cultivables (PCR-DGGE). El consorcio fue inoculado en MML con 200 mg. Kg-1 de fenantreno como nica fuente de carbono y energa, los cultivos fueron incubados a 26 C durante 15 das. Sobre estos cultivos se estudi: la cintica de degradacin de fenantreno y la aparicin del acido1-hidroxi 2naftoico (AHN) (metabolito intermediario de una de las vas de degradacin del fenantreno) (HPLC) y la dinmica en la estructura y composicin bacteriana (recuento de poblaciones hetertrofas en R2A y de degradadoras PAH por la tcnica del NMP y PCRDGGE). A partir del consorcio obtenido fue posible aislar 5 poblaciones bacterianas con caractersticas macroscpicas distintivas. Todos los aislados resultaron bacilos gram (-), nitrato (+) y oxidasa (-). La secuencia de gen 16SRNA del aislado que presentaba colonias amarillas mostr que estaba filogenticamente relacionada con Sphingobium spp, otro aislado (colonias transparentes y oxidador de glucosa) fue identificado como Pseudomonas spp, mientras 2 de los otros 3 aislados, fermentadores de glucosa que presentaban colonias blancas, fueron identificados como pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. El patrn de bandas del gel de DGGE revel que el consorcio posee mayor diversidad que la encontrada por el anlisis mediante las tcnicas de cultivo. Las curvas de eliminacin de fenantreno obtenidas a partir del consorcio creciendo en fenantreno mostraron una eliminacin del mismo del 59%, luego de 15 das de incubacin y un aumento sostenido en la concentracin de AHN. La dinmica de las poblaciones cultivables demostr importantes cambios en la composicin del consorcio durante toda la experiencia, que no pudieron observarse a nivel de estructura gentica (PCR-DGGE).
P298 - 27633 RELACIN ENTRE BIOMASA MICROBIANA DEL SUELO Y DISPONIBILIDAD DE RECURSOS EN SITIOS CON DISTINTA INTENSIDAD DE PASTOREO EN EL MONTE PATAGNICO. PRIETO, LUCIANO; BERTILLER, MONICA; OLIVERA, NELDA
Centro Nacional Patagnico (CENPAT-CONICET). Puerto Madryn, Chubut, Argentina La biomasa microbiana del suelo interviene en los procesos de reciclado de nutrientes y energa, por lo cual es considerada entre los indicadores de fertilidad del suelo para evaluar el impacto de los distintos usos del mismo. En estudios previos en ecosistemas del NE de la Provincia de Chubut observamos que el pastoreo indujo diferentes cambios en las propiedades microbiolgicas y qumicas del suelo debajo del canopeo respecto del suelo desnudo. Con el aumento del pastoreo se evidenci una disminucin de la biomasa microbiana en el suelo debajo del canopeo, mientras que en el suelo desnudo se registr un aumento posiblemente asociado al aporte de materia orgnica proveniente de los excrementos y la orina de los animales. As la microflora del suelo puede ser afectada por los recursos del mismo como el contenido de C y N, pero tambin por las escasas y errantes precipitaciones junto con las altas amplitudes trmicas que caracterizan a los ecosistemas ridos. El objetivo del presente estudio fue analizar el efecto del disturbio por pastoreo sobre la dinmica de la biomasa microbiana del suelo y la disponibilidad de recursos (C, N, humedad). Se estudiaron sitios con intensidades de pastoreo baja (PB), intermedia (PI) y alta (PA) ubicados a 3000, 300 y 100 m de una aguada, respectivamente. Por sitio se colectaron muestras de suelo superficial de 5 parches vegetados modales y de 5 reas de suelo desnudo en verano e invierno de 2008 y 2009. Se determin biomasa microbiana, C orgnico, N total y contenido de humedad del suelo; los resultados fueron evaluados mediante anlisis de la varianza y de correlacin. La temperatura media mensual de los muestreos de verano e invierno fue 21,3 y 7,8 C, respectivamente. Las precipitaciones durante los 10 das previos a los muestreos de verano de 2008 y 2009 fueron 0 y 8,8 mm respectivamente, mientras que en invierno de 2008 y 2009 fueron 12,6 y 9,5 mm, respectivamente. El contenido de humedad promedio del suelo en los muestreos de invierno fue 9,2% y en verano 3%. La biomasa microbiana mostr fluctuaciones estacionales alcanzando, en general, mximos valores en invierno de 2008 (coincidiendo con las mayores precipitaciones). Tanto en los parches vegetados como en los suelos desnudos, los cambios estacionales de biomasa microbiana en los sitios menos pastoreados se correlacionaron ms con la concentracin de N que con la de C, mientras que lo opuesto ocurri en PA. En conclusin, las precipitaciones favorecieron el desarrollo de la biomasa microbiana mientras que el N, que es un nutriente limitante en los ecosistemas ridos, fue un importante regulador de dicho desarrollo. Sin embargo, los resultados obtenidos sugieren que en los sitios ms pastoreados el C condicion la biomasa microbiana, posiblemente debido a los cambios que el pastoreo induce en la vegetacin cuyo mantillo contiene compuestos ms recalcitrantes y/o al aumento en la disponibilidad de N lbil proveniente de la orina de los animales.
P300 - 27658 CARACTERIZACIN GENTICA DE CEPAS AISLADAS DE SUELOS CON BORO. MORAGA, N(1); POMA, R(1); CRISTOBAL, H(2); AMOROSO, MJ(2); RAJAL, V(1)
(1) INIQUI-CONICET, (2) PROIMI-CONICET Introduccin: la provincia de Salta encabeza a nivel nacional la exportacin de minerales de boro y sus derivados. Como muchas otras explotaciones mineras genera problemas puntuales de contaminacin. La biorremediacin se plantea como una alternativa moderna para solucionar problemas ambientales. Es por ello y por ser productores de antibiticos, que los Actinomycetes, en particular el gnero de los Streptomyces, han sido ampliamente estudiados. Esto y la necesidad de patentar generaron un establecimiento descontrolado de nuevas especies, por lo que result imperioso establecer criterios estndares de clasificacin. Otros autores realizaron una extensa investigacin fentica en cepas de cultivo que permiti agrupar las cepas de Streptomyces en dife-
P299 - 27651 ESTUDIO DE UN CONSORCIO BACTERIANO DEGRADADOR DE PAH OBTENIDO A PARTIR DE SUELOS CRONICAMENTE CONTAMINADOS DE LA PROVINCIA DE BUE-
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rentes clusters detallados en el Manual de Sistemtica Bacteriolgica de Bergey. Los grupos generados empleando el anlisis de secuencias de ADNr 16S se corresponden satisfactoriamente con los grupos fenotpicos definidos por Williams. Objetivos: a partir de las secuencias del ADNr 16S obtenido de 9 cepas de Actinomycetes aisladas de suelos contaminados con Boro se plantearon: -Identificar las especies y ubicarlas taxonmicamente en la clasificacin existente para miembros del grupo Actinomycetae. Realizar un anlisis filogentico. Materiales y Mtodos: en trabajos previos se realizaron diferentes ensayos a partir de los cuales se seleccionaron las cepas gram-positivas que presentaron mayor tolerancia a Boro para su caracterizacin gentica. El ADN de las mismas se extrajo usando un kit comercial, realizando algunas variaciones en el protocolo provisto por el fabricante. Se amplific con primers universales publicados previamente usando un termociclador. Se detectaron los productos de PCR por electroforesis en gel de agarosa al 2%. Las dos cadenas de los fragmentos de ADN amplificados fueron secuenciadas (MACROGEN Korea) y las secuencias obtenidas se editaron con el programa Chromas Lite versin 2 y se subieron a la base de datos GeneBank. A partir de los fragmentos secuenciados y de secuencias pertenecientes a la misma especie o estrechamente relacionadas en el GeneBank, se realiz el alineamiento y anlisis filogentico utilizando el programa MEGA version 4. Para la construccin del rbol filogentico se emple el mtodo de NeighboringJoining con la distancia de Kimura. Resultados: mediante el anlisis filogentico se determin la posicin taxonmica de los organismos aislados dentro del marco provisto por la clasificacin establecida por Williams. En la tabla 1 se detallan los organismos que presentaron mayor homologa con los aislamientos realizados. Cepa, Especie, mayor % homologa, Cluster, segn Williams: 002 S. iakyrus 100 12; 048 S. achromogenes 99,4 19; 128 S. lincolnensis 99,8 19; 050 S. fradie 99,7 68; 051 S. ambofaciens 99,8 23; 053 S. albogriseolus 99,9 12; 130 S. polychromogenes 99,8 61; 133 Streptomyces sp. 98,2; 132 Lentzea sp. 99,2. Conclusiones: se identificaron los distintos aislamientos: 8 Streptomyces y uno del gnero Lentzea (Actinomy-cetae). La cepa 133 es la que posee menor homologa y no tiene asignada especie. Este trabajo identifica y sita taxonomicamente a cepas con gran inters biotecnolgico por presentar gran tolerancia a boro.
de sodio-fosfato dipotsico por siembra en profundidad e incubacin por 12 das a la misma temperatura. La microflora hetertrofa viable se realiz en agar extracto de suelo por siembra en profundidad e incubacin por 9 das a la misma temperatura. Los valores obtenidos para el recuento en placa fueron sometidos al mtodo de anlisis de varianza. Cuando se encontraron diferencias en el orden de p<0,05% se analizaron con el test de comparacin mltiple de Tukey con a = 0,05 % utilizando un programa computarizado (InfoStat). Resultados: Cuando evaluamos la poblacin microbiana total de UFC/g de suelo en base logartmica en cada uno de los suelos nos encontramos que el suelo virgen posee una poblacin significativamente mayor (8,72), comparado con los datos suelos con pradera (7,64), siembra directa 7,97 y labranza hortcola 6,87 y Al comparar las poblaciones en % de cada uno de los suelos, se observo un predominio de bacterias hetertrofas en suelo virgen (98,33%), hongos y levaduras en suelo pradera ( 64,48%), y siembra directa (77,72%), de bacterias hetertrofas en suelo labranza hortcola (78,36%). Ante distintas condiciones de uso y de manejo del suelo, existe una alteracin en el nmero total de microorganismos. En la metodologa de plaqueo suelo virgen tiene una poblacin significativamente mayor con respecto al resto de los suelos. La relacin entre los diferentes grupos microbianos se modifica notablemente frente a cada uno de los manejos de suelo.
P302 - 27724 EFECTO DE LA BACTERIVORA SOBRE LA PERSISTENCIA DE INDICADORES DE CONTAMINACIN FECAL EN AMBIENTES ACUTICOS. DOMNGUEZ, MS; FOLABELLA, AM; ZAMORA, AS; ESCALANTE, AH
Universidad Nacional de Mar del Plata La contaminacin fecal de las aguas superficiales suele producirse a travs de descargas cloacales, actividades agrcolas y ganaderas y por la presencia de animales silvestres. La predacin, por lo general, no ha sido reconocida por los microbilogos como un agente relevante en la determinacin de la supervivencia de las comunidades bacterianas y su evolucin en ambientes acuticos. Sin embargo, en el contexto de las enfermedades humanas de origen hdrico, se considera actualmente que muchos de los factores que condicionan la persistencia bacteriana en el agua podran tener origen en adaptaciones exitosas que permiten a las bacterias resistir a la predacin por protozoos. El objetivo de este trabajo fue determinar la posible diferencia en la respuesta de la comunidad autctona de protozoos bactervoros ante un eventual incremento, de origen propio o externo al sistema, de bacterias indicadoras de contaminacin fecal en la Laguna de Los Padres (Prov. de Buenos Aires, 37 5630" S, 57 4430" W). Se realizaron ensayos a microcosmos, simulando ambientes de la laguna, enfrentando suspensiones de protozoos bactervoros planctnicos autctonos con suspensiones de cepas autctonas y de coleccin de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis. El medio utilizado para los ensayos fue agua de la laguna envejecida, filtrada y esterilizada. Diariamente, se extrajeron alcuotas de cada ensayo para cuantificar las clulas bacterianas viables utilizando el mtodo de placa vertida. Se realizaron siembras de diluciones decimales seriadas hasta 10-7 en agar Mac Conkey, para recuento de E. coli, y en agar base sangre azida sin el agregado de sangre, para E. faecalis. Paralelamente, se efectuaron los recuentos de protozoos en cmara tipo Sedgwick-Rafter bajo microscopio ptico. Con los datos obtenidos se elaboraron curvas de supervivencia. Los datos se evaluaron estadsticamente mediante un test de Fisher. Los resultados indican que la comunidad de protozoos bactervoros autctonos no estara adaptada a responder en forma inmediata ante un eventual ingreso de material de origen fecal, de manera que la regulacin poblacional bacteriana mediada por protozoos se vera rezagada.
P301 - 27719 DISTRIBUCIN DE LOS ACTINOMICETES, BACTERIAS HETERTROFAS, HONGOS Y LEVADURAS EN SUELOS CON DISTINTOS USOS. OJEDA, PABLO; ANSELMO, RICARDO
Universidad Nacional de Lujn Introduccin. El uso del suelo con objetivos productivos produce alteraciones en la interaccin de las propiedades edficas, por este motivo es que, al modificar dichas caractersticas, esta interaccin promueve una reorganizacin de la componente viva. Por lo que resulta importante conocer la reorganizacin de esta componente biolgica frente a los distintos usos del suelo debido a su incidencia en la regulacin de sus propiedades. Los microorganismos responsables de tales procesos en el suelo pueden dividirse en tres grupos, 1) Hongos y levaduras, 2) Actinomicetes, 3) Microflora hetertrofa. Objetivo. Para cada uso del suelo determinar: a) las poblaciones microbianas edficas viables, b) cuantificar la poblacin microbiana edfica total, c) determinar las relaciones existentes entre los distintos grupos microbianos que habitan en l. Materiales y Mtodos. Se tomaron muestras de suelos con los siguientes usos: Suelo hortcola con remocin continua hace 3 aos. Suelo con pradera sin remocin hace 10 aos. Un suelo con agricultura continua a travs del sistema de Siembra Directa en donde hace 7 aos no realizar remocin. Por ltimo se tom una en la que se presume que jams sufri ningn disturbio ya que la misma se encontraba debajo de un alambrado. La metodologa seguida fue recuento en placa. El primer grupo est compuesto por hongos y levaduras, el segundo por actinomicetos, y el tercero bacterias hetertrofas. Para hongos y levaduras se realiz en agar papa -glucosa -cloranfenicol con 50 mg/L de cicloheximida (Actidiona) por siembra en superficie e incubacin a 25 C, 9 das. Para los Actinomicetos se realiz en agar glicerol-asparraginado
P303 - 27789 SELECCIN Y ESTUDIO DE CONSORCIOS BACTERIANOS DEGRADADORES DE FENANTRENO UTILIZANDO UNA RESINA HIDROFOBICA COMO MODELO DE SUELO. LOPEZ, AM; BOSCH, MA; BIANCHINI, FE; YANTORNO, O; DEL PANNO, MT
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CINDEFI (CCT), Universidad Nacional de La Plata La presencia y distribucin de los hidrocarburos policclicos aromticos (PAH) en suelo es de particular importancia por su toxicidad, mutagnesis y carcinognesis. Debido a sus caractersticas hidrofbicas se adsorben rpidamente a la materia orgnica del suelo, asocindose dbilmente a la superficie de las partculas y luego difundiendo lentamente hacia regiones hidrofbicas intrapartcula. Esta ltima etapa conduce a una significativa histresis de desorcin y sera un paso limitante en los procesos de biorremediacin en suelos y sedimentos. Dada la importancia de la adsorcin sobre la biodisponibilidad del PAH, la seleccin de cultivos mediante enriquecimiento microbiano con el PAH adsorbido a una fase orgnica, aportara una seleccin ambiental ms significativa y eventualmente podra conducir a un mejor entendimiento de los procesos microbianos en suelo. Con el fin de evaluar el efecto de la adsorcin y velocidad de transferencia de masas sobre la seleccin de microorganismos degradadores de PAH, se utiliz XAD2 (Sigma), un copolmero de poliestireno con reticulado hidrofbico, como modelo de suelo. Se determin su capacidad de adsorcin de fenantreno, KD = 1,29mg fenantreno/g XAD2 y el efecto producido durante el enriquecimiento a partir de un inculo bacteriano, obtenido de suelo crnicamente contaminado con hidrocarburos. La colonizacin del soporte se estudi sembrando 1mL del inculo en sistemas de 2g de XAD2 adsorbido con fenantreno en medio mineral lquido, incubando 30 das a 28 C. Como control de adsorcin inespecfica se determin la adherencia del cultivo al XAD2. Los sistemas se monitorearon por recuentos microbianos de poblaciones ssiles y planctnicas, y espectroscopia FTIR, evidenciando una comunidad bacteriana adherida al XAD2 y al XAD2-Fenantreno, durante los 30 das de incubacin. Luego, 10% del soporte colonizado y previamente lavado fue transferido a un sistema fresco para una nueva colonizacin. En total se realizaron 4 transferencias sucesivas observndose finalmente un incremento de 3 rdenes de magnitud en la poblacin ssil. Mediante FTIR se detect la acumulacin creciente de biomasa, a travs del aumento en la banda de absorcin Amida II (1546 cm-1), correspondiente a protenas y un aumento de las bandas de estiramiento simtrico y antisimtrico asignadas al grupo funcional CH2 (2920 y 2873 cm1) de lpidos de cadena larga. La relacin carbohidratos/protenas fue significativamente ms elevada durante las primeras transferencias. Luego de la ltima, dos cultivos bacterianos fueron aislados de la comunidad desarrollada sobre XAD2-Fenantreno, correspondiente a bacilos gram-negativos no fermentadores, degradadores de fenantreno, velocidad de crecimiento en caldo R2 de 0.006 min-1 para cepa-1 y 0,008 min-1 para cepa-4. El anlisis por FTIR evidenci un comportamiento similar de los cultivos, excepto la mayor produccin de carbohidratos por la cepa4. La posibilidad de interpretacin del espectro FT-IR en base a grupos funcionales y su correspondencia con la dinmica de poblaciones cultivables, resulta ser una estrategia aplicable al conocimiento de la respuesta adaptativa de las bacterias degra-dadoras al crecimiento en superficies hidrofbicas.
TAG ha sido reportada principalmente en actinobacterias de los gneros Rhodococcus, Mycobacterium y Streptomyces, entre otros. Los ambientes andinos extremos de la Puna situados entre 2.200 a 6.000 metros sobre el nivel del mar podran servir de fuente de nuevos microorganismos con capacidad de acumular lpidos con potencial biotecnolgico. Se investig la capacidad de producir lpidos neutros en cepas de una coleccin de bacterias extremfilas aisladas de lagunas y humedales del Altiplano Andino, con el objetivo de encontrar nuevos gneros acumuladores de TAG y/o ceras. Para ello las clulas fueron cultivadas en medio mineral con dficit de nitrgeno y exceso de diversas fuentes de carbono (sales orgnicas, azcares, alcoholes e hidrocarburos). La extraccin de lpidos fue realizada por una mezcla de metanol:cloroformo y las fracciones fueron identificadas por medio de cromatografa en capa delgada (CCD). La cuantificacin y composicin de cidos grasos fue realizada mediante cromatografa gaseosa (CG). Luego del anlisis de 18 cepas extremfilas de la Puna, se hallaron cinco bacterias con capacidad de producir TAG y/o ceras, pertenecientes a gneros no reportados previamente como productores de esos lpidos. Entre los gram-positivos se encontraron, Microbacterium arborescens CH5 (TAG: 25% peso seco celular-psc-, a partir de glucosa 1%), Agrococcus jenensis CH9 (ceras: 7% psc; a partir de acetato 0,2%), ambos pertenecientes a las actinobacterias; y Cohnella thermotolerans CH7 (ceras: 7% psc, a partir de glicerol 0,3%) perteneciente a los Firmicutes. Entre los gram-negativos se encontraron: Stenotrophomonas maltophilia Ver 10 (TAG: 4% psc, a partir de gluconato 1%) perteneciente a las gamma Proteobacterias y Janthinobacterium sp. V21 (ceras: 1% psc, a partir de acetato 0,2%) siendo este microorganismo una beta Proteobacteria. Este sera el primer reporte sobre la produccin de ceras en bacterias gram negativo que no pertenecen al grupo de las gamma-Proteobacterias. La produccin de TAG y ceras podra ser parte de la estrategia metablica de estas bacterias para adaptarse a los ambientes extremos de la Puna. Por otro lado, alguna de estas cepas podran servir como una fuente alternativa de lpidos o de las enzimas que intervienen en su sntesis.
P305 - 27817 CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGICA DE AGUA EN ESCUELAS DE LA CIUDAD DE DIAMANTE, ENTRE ROS. GIECO, ADRIANA (1); STERREN, MARIA ALEJANDRA(1); SAFENRAITER, MELANIA(1); VIVOT, EDUARDO(2)
(1) FCYT- Universidad Autnoma de Entre Ros, (2) FCA-Universidad Nacional de Entre Ros La calidad de agua tiene influencia en la salud humana y su conocimiento es escaso e inadecuado en la poblacin. Los parmetros utilizados para evaluar la calidad del agua para consumo humano (ACH) son: fsicos, qumicos y microbiolgicos Estos ltimos son importantes en la transmisin de enfermedades. Segn la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y el Fondo Internacional de la Naciones Unidas para la Infancia (UNICEF) el abastecimiento de agua y el saneamiento son componentes de la atencin primaria de la salud. Los nios en edad de escolaridad podran disminuir las posibilidades de aprendizaje, crecimiento y desarrollo normal. El Cdigo Alimentario Argentino (CAA) especifica los parmetros microbiolgicos y los lmites a cumplir en el ACH. En la ciudad de Diamante (Entre Ros) el agua proviene de varios pozos que se vuelcan a una cisterna y de all es bombeada a un tanque o directamente a la red. La hiptesis de este trabajo es que existe una variabilidad espacio temporal de contaminacin microbiolgica en las escuelas relacionada a las caractersticas de conservacin de las redes y tanques debido a desconocimiento o desidia. El objetivo fue evaluar la calidad microbiolgica de agua en escuelas de la ciudad de Diamante en distintas pocas del ao. Se realizaron muestreos mensuales de grifos conectados directamente a la caera de distribucin, cuyo ramal estuviera relacionado a los tanques de almacenamiento de las escuelas. Se trabaj en seis escuelas desde julio del ao 2009 hasta mayo del 2010 Los parmetros microbiolgicos evaluados fueron mesfilos aerobios totales (MAT) por recuento en placa y Coliformes Totales (Col.) por la tcnica del nmero ms probable. En paralelo se realizaron charlas educativas sobre la calidad
P304 - 27794 IDENTIFICACIN DE NUEVAS BACTERIAS CON CAPACIDAD DE SINTETIZAR LPIDOS NEUTROS AISLADAS DE AMBIENTES EXTREMOS DE LA PUNA ARGENTINA. BEQUER URBANO, S(1); FARIAS, ME(3); ALVAREZ, HM(1-3)
(1) CRIDECIT-Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco, (2) LIMLA-PROIMI, Tucumn (3) CONICET La demanda global de aceites y ceras ha incrementado en los ltimos aos debido al incremento de la poblacin mundial y a la demanda de biocombustibles. Esta situacin impulsa el uso de fuentes alternativas de lpidos, como los microoganismos, para la produccin de aceites en un futuro prximo. En este contexto, es importante identificar nuevas bacterias con capacidad de producir triglicridos (TAG) y ceras a partir de ambientes naturales. En los ltimos aos se ha reportado la acumulacin intracelular de ceras y TAG en bacterias gram-negativas, del grupo de las gamma-Proteobacteria como Acinetobacter, Marinobacter y Alcanivorax; mientras que en gram-positivos la acumulacin de
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de agua y cmo deben controlarse las posibles fuentes de contaminacin. Los resultados obtenidos muestran que en las pocas evaluadas los MAT presentaron mayor variabilidad en todas las escuelas en comparacin con los Col. En el primer trimestre el 72 % de las muestras presentaron recuentos mayores a 500 UFC/ mL (valores fuera de lo establecido por el CAA). En el trimestre siguiente los recuentos de MAT disminuyeren. El 27% super los lmites establecidos y en el ltimo trimestre una sola muestra presento problemas con MAT. Esta disminucin en el tiempo posiblemente se deba a las charlas dictadas sobre las posibles causas de contaminacin del agua; a partir de las cuales las escuelas implementaron medidas de control de limpieza de tanques y caillas Para Col. en el primer trimestre todas las muestras cumplimentaron con lo establecido por el CAA. En este caso, el 67% de las mismas no tuvieron recuentos de Col. y el resto (33%) tuvo recuentos iguales o menores a 2,2 col./100 mL de agua. En el segundo y tercer trimestre el 5% tuvo recuentos mayores a 3 col./ 100 mL Estos casos posiblemente se debieron a focos puntuales de contaminacin. Los anlisis microbiolgicos obtenidos hasta el momento informan que el ACH en las escuelas evaluadas de Diamante mejoraron a medida que se informo sobre las causas de contaminacin, la frecuencia y medidas de control de calidad.
significativamente posiblemente asociado a la interaccin con cationes liberados por descomposicin y por inmovilizacin microbiana. No se encontraron diferencias en los parmetros microbiolgicos y fisicoqumicos debidos al riego. El mezclado de material permiti la declinacin en el nmero de microorganismos y en la actividad biolgica total. El compost result un medio de elevada concentracin de nutrientes, con una dinmica dependiente de los procesos microbianos. Con residuos de alrededor del 50% humedad en peso el riego no result de utilidad.
P307 - 27895 METAGENMICA: CAZANDO GENES DEL SUELO ANTRTICO. BERLEMONT, RENAUD(1); PIPERS, DELPHINE(1); DELSAUTE, MAUD(1); FELLER, GEORGES(1); GALLENI, MORENO(1); POWER, PABLO(1,2)
(1)Centre dIngnirie des Protines, Universit de Lige, Belgica; (2)Laboratorio de Resistencia Bacteriana, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires, Argentina Introduccin: La metagenmica apunta al aislamiento de nuevos genes que codifiquen para diversas protenas a partir de microorganismos no cultivables, los cuales representan ms del 90% de las especies existentes. Generalmente incluye la construccin de libreras metagenmicas en hospedadores como Escherichia coli, evitando la necesidad de utilizar tcnicas de cultivo. El anlisis de metagenotecas comprende tanto un screening funcional (metagenmica basada en actividad) como genotpico (metagenmica por secuenciacin). La ventaja de la metagenmica es brindar la posibilidad de acceder a genes (y sus productos gnicos) a partir de microorganismos no cultivables. Objetivos: La Antrtida representa un lugar muy atractivo para la aplicacin de tcnicas de metagenmica debido a que la actividad asociada al humano es an mnima. El objetivo de este trabajo fue utilizar un screening funcional y genotpico para el aislamiento de nuevas enzimas adaptadas al fro con potencial aplicacin biotecnolgica, y detectar elementos gnicos asociados al reclutamiento y movilizacin de genes. Materiales y Mtodos: Las muestras fueron colectadas del archipilago Pointe Geologie (Ile des Petrels), Terre Adlie, Antrtida (6640S-14001E) en 2000. El DNA metagenmico (eDNA) fue extrado por un mtodo directo, parcialmente digerido con EcoRI, y los fragmentos ligados en un sistema CopyControl pCC1 BAC (Epicentre). La librera fue lograda por transformacin en clulas electrocompetentes de E. coli EPI300 cells. El screening para diferentes actividades fue realizado: celulasas, amilasas, lipasas/esterasas, proteasas, xilanasas. Los clones activos fueron aislados y se realiz un anlisis in silico sobre las secuencias de DNA y protenas deducidas. Se utiliz un screening por PCR con primers degenerados para la deteccin de genes codificantes de b-lactamasas e integrones. Resultados: La metagenoteca PP1 incluye 113.000 clones conteniendo insertos de 5,2 kb en promedio. Se obtuvieron 14, 14, 3 y 11 clones que hidrolizan tributirina, almidn, casena y CM-celulosa, respetivamente. La actividad hidroltica tambin se observ frente a extractos proteicos crudos de los clones ensayados frente a sustratos cromognicos. Las actividades mximas aparentes fueron determinadas en 35 C para las actividades amilolticas y lipolticas, y 55 C para las celulolticas. El screening por PCR permiti la deteccin de 6 clones portadores de genes int o tnp codificantes de integrasas y transposasas hipotticas, con hasta un 86% y 73% de identidad con enzimas conocidas, respectivamente. Conclusiones: La Metagenmica ofrece el acceso a nuevos productos metablicos con beneficios potenciales para aplicaciones biotecnolgicas. Por ejemplo, el aislamiento de nuevas celulasas adaptadas al fro a partir de la Antrtida representa un rasgo interesante para ser utilizado en la produccin de biocombustibles. Adems, la presencia de elementos compatibles con plataformas de movilizacin refuerza la hiptesis que los propone como una fuente de reclutamiento de genes involucrados en la movilizacin de diversos marcadores, como los genes de resistencia.
P306 - 27863 COMPOSTAJE DE RESIDUOS SLIDOS URBANOS DOMICILIARIOS. LA EXPERIENCIA DEL MUNICIPIO DE TAPALQU. RIVERO, GUIDO(1); ALONSO, ANDREA(1); MESTELAN, SILVIA(1); PORTELA, GABRIELA(1); MUGNOLO, ANGELA(2); LETT, LINA(1)
(1) Facultad de Agronoma, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, (2) Municipalidad de Tapalqu Introduccin: la utilizacin de compost como abono constituye una alternativa para una disposicin sustentable de los residuos de origen domiciliario. Con ese propsito se cre en al ao 1997 en la Municipalidad de Tapalqu, Buenos Aires, Argentina, la planta procesadora de residuos slidos urbanos domiciliarios (RSUD) Tapalim. En la misma se desempean las tareas de fraccionamiento, compostaje y estabilizado como lombricompuesto de los RSUD. Objetivo: cuantificar la actividad microbiana total y de grupos en particular, describiendo su relacin sobre los cambios fsicos y qumicos producidos durante el proceso de compostaje. Materiales y Mtodos: el ensayo fue realizado en el playn de la planta, disponiendo de cuatro pilas, conteniendo los residuos orgnicos del da. En la cspide, centro y base de cada pila se colocaron sensores para el registro horario de temperatura. Al sptimo da del compostaje se mezcl el material en todas las pilas, regando dos de ellas, originando un ensayo en DBCA. Una muestra compuesta fue extrada de la zona central de las pilas. Se midi CO 2 de actividad biolgica, concentracin de aerobios mesfilos totales, micoflora y coliformes fecales a los 0, 7 y 21 das, y el pH, N-NO3- y N-NH4+ y P extractable en el material bajo compostaje a los 7, 21 y 52 das. Se analizaron los datos por ANOVA y se emple el test LSD para la separacin de medias. Resultados: El proceso demostr dos fases de magnitud termoflica. A las 48 hs de dispuestas en el playn las pilas alcanzaron temperaturas de 45C o mayores durante ms de 3 das. La mxima actividad biolgica y concentracin de microflora del residuo fue registrada en el material de origen, no presentando diferencias significativas entre las pilas. Para el sptimo da se registr una reduccin significativa de la actividad biolgica, el recuento de bacterias, hongos y coliformes fecales, parmetros que descendieron no significativamente durante la segunda fase termoflica (21 das) del compostaje. A los 52 das los coliformes fecales no excedieron el lmite sugerido por norma EPA 503. Partiendo de pHs dbilmente cidos al sptimo da, las pilas alcanzaron valores significativamente alcalinos a los 21 y 52 das, acompaados de un mayor contenido de N-NH4+, resultado de protelisis nicamente a los 21 das. El N-NH4+ descendi significativamente a los 52 das y fue presumiblemente convertido a N-NO3-. La produccin de N-NO3- fue significativa en los tres muestreos, con un mximo a los 52 das. Si bien el contenido de P extractable result elevado durante todo el proceso, a los 21 das disminuy
P308 - 27896 IMPACTO A LARGO TIEMPO DE LA CONTAMINACIN CON CADMIO SOBRE LA DIVERSIDAD Y FUNCIONA-
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LIDAD DE LA COMUNIDAD MICROBIANA DEL SUELO. VICENTE, MARIANA (1); MORELLI, IRMA(1); DONATI, EDGARDO(1); VIERA, MARISA(1)
(1) Centro de Investigacin y Desarrollo en Fermentaciones Industriales, CINDEFI (CCT-CONICET), Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata En la actualidad ha surgido un creciente inters en lo que concierne a la importancia de la diversidad microbiana del suelo. Los microorganismos del suelo constituyen la mayor fuente y reservorio de nutrientes del ecosistema, adems de estar involucrados en el mantenimiento de la estructura del suelo, los procesos de humidificacin y la degradacin de contaminantes. Debido a su persistencia y toxicidad, los metales pesados podran causar un impacto negativo a largo plazo sobre la comunidad microbiana del suelo y los procesos bajo su control. Entre los metales pesados, el cadmio es uno de los que provoca mayor impacto en el ambiente a travs de las contaminaciones producidas por diversos procesos industriales (manufactura de pigmentos, estabilizacin de plsticos, produccin de hierro y cinc, etc). El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto a largo tiempo (3 aos) del Cadmio (II), sobre la estructura y funcin de la comunidad microbiana del suelo. Para ello se utiliz suelo prstino y se lo contamin con solucin de CdSO4 (1000 mg de Cd(II)/Kg de tierra seca). Luego de tres aos de producida la contaminacin se evalu la capacidad catablica de la comunidad microbiana del suelo midiendo la actividad deshidrogenasa (mediante la reduccin de cloruro de trifeniltetrazoilo, TTC) y ureasa (por medida de la concentracin de NH3 producido, mtodo de Berthelot). Se determin tambin la dinmica de las poblaciones hetertrofas cultivables en R2A y versatilidad catablica mediante la utilizacin de Biolog. El efecto del cadmio sobre la estructura de la comunidad microbiana se evalu a travs de los perfiles DGGE y diversidad a nivel del gen 16S RNA (librera genmica). La contaminacin de Cadmio (II) sobre la comunidad microbiana caus un efecto negativo sobre las actividades microbiolgicas estudiadas, lo que qued reflejado por la disminucin de la actividad deshidrogenasa y de la versatilidad catablica (Biolog) en el sistema contaminado, comparados con el sistema control. No se han encontrado cambios significativos a nivel de la actividad ureasa. Los perfiles de bandas obtenidos en los geles de DGGE muestran una variacin en la estructura de la comunidad destacndose una menor diversidad en el sistema contaminado. El anlisis filogentico de la librera genmica del gen 16 S RNA corrobor los cambios observados a nivel de PCR-DGGE. A pesar de que estudios anteriores demostraron que aproximadamente el 50% del Cd(II) se encontraba en las fracciones no biodisponibles, el efecto del metal sobre la comunidad microbiana y su funcin perduran luego de 3 aos de contaminado el sistema.
efluente de la industria citrcola. Materiales y mtodos: se utiliz un reactor tipo air lift de 3200 mL de capacidad. El efluente fue adicionado de sales: (NH4)2HPO4 0,2 g/l y urea 0,15 g/l. El flujo de alimentacin utilizado fue de 400mL/h. Se sigui la evolucin de la poblacin de protozoos durante 48 das. Cada 48 horas se tomaron 5 muestras de 2 mL cada una y posteriormente, previa homogeneizacin, 2 alcuotas de 1 o 5 l de acuerdo a la abundancia para observacin microscopica y se realiz el recuento. Se efectu la observacin del preparado fresco bajo lupa y microscopio binocular. Se us como narcotizante la carboximetilcelulosa y acetona y colorantes para detectar estructuras celulares: lugol para cilias y rojo neutro para organelas citoplasmticas. Se determin la composicin relativa de cada uno de los gneros investigados en cada muestra a partir del sptimo da de incubacin, momento en el cual el pH alcanz un valor de 7 y comenzaron a aparecer los protozoos. Resultados: en las primeras muestras proliferaron los flagelados que son indicadores de fango joven. Estos aumentaron hasta el dcimo da y luego comenzaron a disminuir. Una elevada densidad de flagelados en los reactores se relaciona con las primeras etapas de la puesta en marcha de la instalacin. A medida que comenzaron los fenmenos de floculacin, aparecieron los ciliados nadadores libres, caractersticos de etapas transitorias en el proceso de estabilizacin del fango activo y es lo que se observ hasta el da 19. Luego se mantuvieron en nmero bajo. Rpidamente comenz la colonizacin de los ciliados reptantes y los ciliados fijos o ssiles que se adhieren a los flculos. Estos protozoarios desplazaron a los ciliados nadadores. Se mantuvieron en nmero elevado a partir del da 22 hasta el da 46. Conclusin: la comunidad de protozoos observada durante el tiempo de experimentacin es la que caracteriza el proceso de maduracin y estabilizacin de los fangos, constituida por individuos representativos de todos los grupos funcionales. Esta informacin es til en el seguimiento del proceso de tratamiento de este efluente.
P310 - 27899 CARACTERIZACIN Y ACTIVIDAD INHIBITORIA DE DOS CEPAS DE ACTINOMICETOS MARINOS CONTRA ICTIOPATGENOS. VALLEJO, MARISOL(1); LEON, JORGE(2); APONTE, JUAN(2); CUADRA, DLOURDES(2); MARGUET, EMILIO(1)
(1) Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco, Sede Trelew, (2) Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Per Los microorganismos, especialmente bacterias que pertenecen al orden Actinomycetal, son los productores ms comunes de agentes antimicrobianos. Tradicionalmente, estos organismos se aislaron de fuentes terrestres, y slo en las dos ltimas dcadas lleg a ser evidente el potencial de actinomicetos marinos como virtuales productores de metabolitos antimicrobianos. Estos podran ser de gran utilidad en el control de enfermedades en la acuicultura en particular en patologas de peces, moluscos y crustceos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la actividad antimicrobiana de dos cepas marinas de actinomicetos contra patgenos habituales en acuicultura. La cepa B1 T61 se aisl de sedimento marino, mientras que la cepa ARG 12-II se aisl de Argopecten purpuratus (concha abanico), ambas de la costa central del Per. Para el aislamiento se utiliz agar marino adicionado con cicloheximida (10 g/mL) y cido nalidxico (20 g/mL), la incubacin se realiz durante 15-20 das a 28 C. Las caractersticas culturales de las colonias de actinomicetos marinos en medio lquido y slido se describieron segn su crecimiento en el caldo marino y agar marino respectivamente. Las observaciones microscpicas se realizaron a partir de microcultivos luego de su crecimiento por el mtodo de bloques de agar e incubados en cmara hmeda a 28 C por 5-7 das. Las caractersticas citadas se complementaron mediante las pruebas de hidrlisis de gelatina, almidn, casena, Tween-80, lecitina, urea, degradacin de esculina y utilizacin de citrato. La actividad antimicrobiana de los sobrenadantes de las cepas de actinomicetos se determin por el ensayo de difusin en placa, utilizando cepas gram-positivas y negativas de ictiopatgenos. Las pruebas morfolgicas, culturales y bioqumicas citadas permitieron clasificar a las dos cepa
P309 - 27898 EVOLUCIN DE LAS COMUNIDADES DE PROTOZOARIOS EN UN PROCESO CONTINUO DE TRATAMIENTO AERBICO DE AGUAS RESIDUALES DE UNA CITRCOLA. LOPEZ, ZONNIA OBDULIA; NAVARRO, ANTONIO ROBERTO; MALDONADO, MARIA CRISTINA
Universidad Nacional de Tucumn Introduccin: las plantas de tratamiento biolgico son ecosistemas donde los microorganismos presentes (bacterias y protozoos) se organizan formando una comunidad bitica caracterstica para cada planta. Desde el momento en que esta inicia su puesta en marcha, y hasta que logra su estabilizacin, es posible observar, en el tiempo, diferentes etapas que pueden ser identificadas por la aparicin o desaparicin sucesiva de distintas especies de los componentes de la biomasa. La observacin microscpica e identificacin de estos microorganismos, da a conocer las condiciones de funcionamiento del reactor, y cualquier alteracin que pueda haber sufrido el mismo; por ello se los puede considerar como indicadores biolgicos de gran utilidad. Objetivo: estudiar el desarrollo de la comunidad de protozoos encontrados en el proceso continuo de tratamiento aerbico de un
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como Streptomyces sp. Ambas cepas exhibieron actividad antagonista contra Carnobacterium piscicola, Lactococcus garvieae, Streptococcus ineae, Aeromonas salmonicida, Vibrio alginolyticus, V. anguilarum, V. harveyi, V. vulnificus y Yersinia ruckeri. Una amplia gama de bacterias gram-negativas y positivas han sido investigadas como potenciales probiticos para su aplicacin en acuicultura. La caracterstica ms estudiada en estos microorganismos es la capacidad de inhibir ictiopatgenos por mecanismos especficos, sin embargo en la mayora de los casos esta actividad es ejercida sobre bacterias cercanas desde el punto de vista filogentico. En el presente trabajo las cepas estudiadas mostraron un amplio espectro de capacidad antibitica debido a que ambas lograron ejercer su actividad sobre todos los patgenos que se utilizaron en el ensayo. Los resultados obtenidos indican que los actinomicetos se presentan como una alternativa para su futura aplicacin como probiticos en acuicultura.
P312 - 27916 PRESENCIA DE CEPAS DE E. coli RESISTENTES A ANTIBITICOS EN AGUA SUPERFICIAL Y SUBTERRNEA DE AMBIENTES RURALES. GAMBERO, MARIA LAURA(1-2); LOMBARDO, DANIELA(2); BETTERA, SUSANA(2); FRIGERIO, CECILIA(2); BLARASIN, MONICA(3)
(1)Foncyt (2) Dpto. de Microbiologa e Inmunologa (3) Dpto. de Geologa, Universidad Nacional de Rio Cuarto Las actividades que se desarrollan en los agroecosistemas pueden constituir verdaderas amenazas para los recursos hdricos. Escherichia coli es el ndice ms importante de contaminacin fecal. Su deteccin no proporciona informacin acerca de la fuente contaminante, sin embargo identificarla es de gran importancia ya que permite evaluar el riesgo potencial para la salud y controlar la fuente de contaminacin. La resistencia a antibiticos es una metodologa fenotpica usada para distinguir entre fuentes de contaminacin fecal humana y animal. En las prcticas ganaderas es comn el uso de sustancias antimicrobianas (teraputico, profilctico y promotor del crecimiento). Numerosos estudios destacaron la posible relacin entre el uso de antimicrobianos en animales y el aumento de resistencia a dichos compuestos en bacterias perteneciente al tracto digestivo. Cepas de E. coli resistentes a diferentes antibiticos pueden ser transportadas bajo ciertas circunstancias al agua y a los alimentos favoreciendo la recirculacin. Estudiar la resistencia a antibiticos de bacterias de origen ambiental es importante no solo para identificar la fuente contaminante, sino tambin para conocer su posible papel como reservorio de genes codificadores de resistencia. El objetivo de este estudio fue aislar, identificar y evaluar la resistencia a antibiticos de E. coli de dos mbitos rurales: cuencas de los arroyos Knutzen y El Barreal. Se extrajeron 72 muestras de agua (14 superficiales y 58 subterrneas-acufero fretico-). Se aisl E. coli y se confirm por pruebas metablicas (APHA 1995). A las cepas aisladas se les realiz la evaluacin de la resistencia a los siguientes antimicrobianos: ampicilina (AM), amoxilina+cido clavulnico (AMC), cefalotina (CEF), ciprofloxacina (CIP), cloranfenicol (CMP), tetraciclina (TET), eritromicina (ERY) y penicilina (PEN); mediante el mtodo de difusin en placa (Bauer et.al., 1966) y estandarizado por NCCLS 1997. Se aisl E. coli en el 47,2% de las muestras (34 cepas). El 100% fueron resistentes a uno o ms de los 8 antibiticos evaluados. Todas resultaron resistentes a PEN, el 73,5% a ERY, el 47,1% a TET y el 26,5% a AM, mientras que un elevado porcentaje (mayor al 80%) fueron sensibles a CIP, AMC, CMP y CEF. El patrn de resistencia observado para antibiticos comunes en medicina veterinaria (ERY y TET) en cepas aisladas de perforaciones o tramos del arroyo vinculados a actividad ganadera, indicara que la fuente de contaminacin fecal en el agua subterrnea y superficial sera aportada casi exclusivamente por residuos animales. El alto porcentaje de muestras que present E. coli, indica que las prcticas ganaderas son fuentes contaminantes del agua superficial y subterrnea. El patrn de resistencia a antibiticos observado, adems de los datos registrados a campo, permiti evidenciar que la fuente de contaminacin fecal deriva fundamentalmente de residuos animales. El uso de antimicrobianos contribuye a la seleccin y dispersin de bacterias resistentes en ambientes acuticos constituyendo un reservorio importante de cepas resistentes que podran pasar a travs de la cadena alimentara al ser humano.
P311 - 27901 APLICACIN DE TCNICAS DE MICROFERMENTACIN CON Stereum hirsutum Y Coriolus antarcticus PARA LA DECOLORACIN DE EFLUENTES INDUSTRIALES. SALVATIERRA FRCHOU, DAMIANA MARA; KAEN, RUTH MARIELA(1); DIORIO, LUIS ALBERTO(2)
(1) CONICET, (2) Laboratorio de Micologa Experimental, Departamento de Biodiversidad y Biologa Experimental FCEyN, Universidad de Buenos Aires El uso de colorantes sintticos en la industria textil se ha intensificado debido al bajo costo de su sntesis. Sus excesos acaban por contaminar las aguas en las que son vertidos. Dado los inconvenientes ambientales que esto representa y ms directamente los posibles efectos carcinognicos que acarrea, es de principal inters evitar que lleguen a las fuentes de agua naturales de un modo que sea ambientalmente amigable. Las enzimas lignolticas secretadas por los hongos de la pudricin blanca han demostrado ser efectivas decolorando compuestos recalcitrantes polifenlicos como los colorantes sintticos, siendo ms efectiva la decoloracin si se lleva a cabo por hongos crecidos con las tcnicas de fermentacin en estado slido (SSF). Este tipo de tcnica es apropiada debido a su bajo costo y a la falta de perjuicios secundarios. En el presente trabajo se analiz el comportamiento de microfermentadores en estado slido con los hongos Stereum hirsutum y Coriolus antarcticus, ante distintos colorantes sintticos. Los microfermentadores fueron esferas huecas de 26 mm de dimetro aproximadamente, construidas con malla de polietileno de alta densidad y rellenas con salvado de trigo conteniendo un 75% de agua. Se los inocul con cepas de S. hirsutum o C. antarcticus y se los incub a 28 C. Al da 14 de crecimiento, dos de estos microfermentadores fueron introducidos en un cilindro de 3 cm de dimetro por 15 cm de altura e inundados con una solucin acuosa del colorante a tratar (primera fase del sistema de decoloracin). Cuando se alcanz un 50% de decoloracin en la solucin, se retir el lquido y se coloc en un bao con agitacin a 50C hasta alcanzar el mximo de decoloracin. Se probaron los colorantes Verde de malaquita (VM) 20 M, Xilidina (Xil) 20 M y una mezcla de ambos cada uno 20 M. El volumen de prueba fue de 40 mL. Con C. antarcticus se obtuvo un 54,5% de decoloracin de VM a los 50 min y un mximo de decoloracin de 92,5% a los 240 min. Se detectaron actividades de las enzimas Lacasa y Manganeso peroxidasa. En la mezcla la decoloracin de VM fue del 34% a los 90 min antes de entrar al bao y finalmente del 14.4% a las 270 min. No hubo decoloracin de Xil en ningn caso. Con S. hirsutum se obtuvo un 56,6% de decoloracin de VM a los 30 min y un mximo de decoloracin de 98,2% a los 150 min. La decoloracin de Xil fue de un 30,5% a los 125 min y finalmente de 62,5% a los 365 min. Para la mezcla se obtuvo una decoloracin del 74,4% de VM y 39,6% de Xil, antes del bao y finalmente de 94,4% de VM y 51% de Xil a los 220 min. Se comprob la facilidad de la tcnica de microfermentacin. Los sistemas de dos fases probados mostraron que el potencial de decoloracin del sistema, dependi del hongo utilizado (S. hirsutum o C. antarcticus).
P313 - 27920 DECOLORACIN SIMULTNEA DE UNA MEZCLA DE COLORANTES POR UN NUEVO AISLAMIENTO DE Trametes versicolor. CASTIGLIA, VALERIA CAROLINA; PAPINUTTI, LEANDRO
PROPLAME-PRHIDEB, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires El grupo Trametes abarca 16 gneros de polporos caracterizados por causar pudricin blanca en la madera y por el tipo de esporas. Entre los gneros incluidos se encuentran Trametes,
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Pycnoporus, Lenzites, Stereum los cuales han demostrado ser eficientes productores de enzimas ligninolticas y degradadores de compuestos xenobiticos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la decoloracin simultnea de Azure B, Xilidina, RBBR, Verde de Malaquita e ndigo por T. versicolor creciendo en placas con medio agarizado y en cultivos lquidos y estudiar el efecto sobre las actividades de las enzimas ligninolticas Lacasa y Manganeso Peroxidasa (MnP). Para los cultivos en placas se utiliz medio AM (agar 2% extracto de malta 1,3% y glucosa 2%) y medio GA (glucosa 2% y asparagina 0,4%), se evalu la decoloracin de cada uno de los colorantes por separado a una concentracin de 50 M y de una mezcla equimolar (10 M) de cada uno de ellos. Las cajas fueron inoculadas y los halos de crecimiento y de decoloracin fueron registrados peridicamente midiendo su radio. Al da 11 de crecimiento se tomaron muestras con sacabocados y se midieron actividades de las enzimas ligninolticas. La decoloracin en medio lquido se evalu en cultivos estticos con medio GA y diferentes posibles inductores de actividad ligninolticas (cido cumrico, vainillina y cobre) a los cuales se agreg la mezcla de los 5 colorantes al da 9 de crecimiento coincidiendo con la trofofase en base a los valores de azucares y protenas. Para estimar el porcentaje de decoloracin de la mezcla de colorantes adicionada a los medios lquidos se midi la cada en absorbancia a las 5 longitudes de onda correspondientes a cada uno de los colorantes y se calcul el rea bajo la curva. En los cultivos en caja se observ decoloracin de todos los colorantes, las mayores velocidades de decoloracin se registraron en Xilidina (0,67 cm/da) y RBBR (0,7 cm/da) en AM donde su velocidad de crecimiento fue algo mayor. Se observ un incremento significativo en la actividad lacasa en las placas con los colorantes RBBR (en medio GA) y MG (en medios GA y AM), en la zona decolorada. Tambin se observ decoloracin simultanea en las placas con la mezcla equimolar de colorantes. Se observaron diferencias en los porcentajes de decoloracin obtenidos de acuerdo al inductor, los mayores valores se registraron con vainillina (88,1%) y cumrico (75,6%). Respecto de las actividades ligninolticas, los medios con vainillina y cobre registraron los mayores valores de actividad lacasa (0,18 y 0,08 U/mL, respectivamente), no se registraron diferencias en cuanto a la actividad MnP. En base a los resultados obtenidos tanto en medio agarizado como en medio lquido encontramos que este nuevo aislamiento de T. versicolor es capaz de degradar todos los colorantes ensayados. Con respecto a la actividad lacasa, los medios inducidos con vainillina y cumrico registraron los valores ms altos, no se encontraron diferencias en cuanto a la actividad MnP. Tampoco se encontr correlacin entre la actividad de las enzimas ligninolticas y el porcentaje de decoloracin obtenido.
ron 10 mL de agua en un erlermeyer con 2 g de muestra, se agit 20 minutos a 120 rpm y se centrifug. El sobrenadante se almacen a 4 C. Se estudi su cintica de crecimiento sobre alperujo (durante 45 das), y el comportamiento de las actividades de las enzimas celulolticas (endoglucanasa), xilanolticas (endoxilanasa), pectinoliticas (poligalacturonasa y polimetilgalacturonasa) y ligninolticas (lacasa y Mn-peroxidasa), Se evalu asimismo el porcentaje de degradacin de fenoles (por el mtodo de Folin-Ciocalteau). Ambos hongos crecieron en dicho sustrato aunque la biomasa de T. trogii fue 5 veces mayor. Se detect produccin de todas las enzimas degradadoras de polisacridos (celulasas, xilanasas y pectinasas), cuyos ttulos mximos se registraron en los primeros 15 das de crecimiento en coincidencia con los picos de azcares solubles. Slo T. trogii produjo Mn-peroxidasa. Se encontr actividad lacasa en ambos cultivos fngicos hacia el final del periodo de incubacin. A pesar de las diferencias registradas, el contenido de fenoles se redujo alrededor del 50% en todos los ensayos. Ambas cepas fngicas demostraron gran adaptabilidad a las tcnicas de cultivo aplicadas manifestando un importante crecimiento y produccin de todas las enzimas analizadas, as como tambin la reduccin del contenido fenlico, demostrando su potencial para degradar dichos compuestos.
P315 - 27929 VARIACION ESPACIALY TEMPORAL DE INDICADORES DE CALIDAD DE SUELO EN EL DESIERTO DEL MONTE, SAN JUAN, ARGENTINA. VEGA AVILA, ANGELA DANIELA; LOTO, FLAVIA(1); TORO, MARIA EUGENIA(2); FERNANDEZ, LUCIANA(2); MEDINA, EMILCE(2); PAROLDI, EMILIO (2); BAIGORI, MARIO(1); BABELIS, GERMAN(3); VAZQUEZ, FABIO(2)
(1) PROIMI, Tucumn (2) Instituto de Biotecnologia (3) INTA Introduccin: en los ambientes ridos la fertilidad del suelo est caracterizada por la heterogeneidad espacial y temporal. La heterogeneidad temporal de las propiedades del suelo es el resultado de la amplia variacin climtica; el principal factor limitante es la escasez de agua. La espacial se atribuye a la distribucin de las plantas en parches, denominadas Islas de Fertilidad con una alta cobertura vegetal, gran acumulacin de nutrientes, alta deposicin de residuos orgnicos y microorganismos asociados. Objetivo: evaluar indicadores de calidad de suelo tales como abundancia microbiana, parmetros fsico-qumicos y actividades enzimticas en el suelo de los Mdanos Grandes de Caucete, San Juan, Argentina. Materiales y Mtodos: La toma de muestras se realiz en tres micrositios: parches de Larrea divaricata , Bulnesia retama e Interparches, en los meses de Abril y Agosto (pocas de precipitaciones contrastantes). Se tomaron los primeros 5 cm de 6 muestras de suelo por micrositio. Se cuantific abundancia total por conteo de colonias. Los parmetros fisicoqumicos medidos fueron pH, conductividad, humedad, fsforo (P), potasio (K), materia orgnica (MO), carbono orgnico (CO) y nitrgeno (N). Tambin se determin textura del suelo y se evalu enzimas degradadoras de detritos vegetales: xilanasas, celulasas, amilasas. Los resultados fueron analizados con ANOVA y Anlisis Discriminante, Programa SPSS 11.5. Resultados: el suelo de los Mdanos presenta textura arenosa (91,95% arena; 5,53% limo; 3,87% arcilla). En el perodo de febrero a abril (volumen de precipitaciones 53,75 mm) se determin que el contenido de N fue mayor bajo la canopia de las dos especies estudiadas con respecto a interparches; el contenido de K fue elevado debajo de B. retama respecto de los otros micrositios y el contenido de P, CO, MO no mostr diferencias entre parches e interparches. En el perodo de julio a agosto (volumen de precipitaciones 17,55 mm) el contenido de N fue mayor en parches con respecto a interparches y el contenido de K y P fue mayor bajo la canopia de L. divaricata con respecto a los otros micrositios. No se observaron diferencias en el contenido de materia orgnica y carbono orgnico entre parches e interparches. En los dos muestreos la abundancia de microorganismos (bacterias, levaduras y hongos filamentosos) no mostr diferencias entre micrositios. El contenido de enzimas fue mayor en los parches que en los interparches. El anlisis discriminante realizado a los datos de abundancia,
P314 - 27926 BIODEGRADACIN DE FENOLES EN EL ALPERUJO POR HONGOS DE LA PUDRICIN BLANCA. KAEN, RUTH M; SALVATIERRA FRECHOU, DAMIANA M; LEVIN, LAURA N; DIORIO, LUIS A
Depto de Biodiversidad y Biologa Experimental Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires El alperujo es un subproducto del proceso de extraccin del aceite de oliva, y su toxicidad se debe en parte al elevado contenido de fenoles y a su alta tasa de carga orgnica. Estas caractersticas imposibilitan su uso directo en suelos agrcolas como enmienda. Los hongos basidiomicetes causantes de pudricin blanca de la madera son capaces de colonizar gran cantidad de residuos agrcolas y tienen un gran potencial para la biorremediacin de compuestos fenlicos y otros contaminantes. El objetivo del presente trabajo es evaluar la capacidad de Trametes trogii y Coriolus versicolor var. antarticus para disminuir el contenido de fenoles en el alperujo. Se usaron frascos plsticos de 10 cm de dimetro y 5 cm de alto conteniendo 30 g de alperujo hidratado al 70%. Los frascos fueron autoclavados y luego sembrados con 6 trozos de agar de 5 mm de lado. En los muestreos, se tomaron 4 recipientes cada 7 dias, cuyo contenido fue pesado y homogeneizado. 2 g de ese contenido fueron pesados para realizar su extraccin, el material restante se utiliz para peso seco, determinacin de quitina y fenoles. Para la extraccin se pusie-
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actividades enzimticas y parmetros fisicoqumicos mostr separacin entre parches e interparches. La funcin 1 (88.5%) estuvo influenciada predominantemente por el contenido de N y enzimas amilasas y la funcin 2 (6.4%) por el contenido de P, N, conductividad y enzimas amilasas y celulasas. Conclusin: los resultados muestran que quedan diferenciados los parches de los interparches, en base a las variables fisicoqumicas y actividades enzimticas analizadas en los dos muestreos realizados.
(1) Centro de Investigacin en Tecnologa de Pinturas CIDEPINTCONICET, (2) CINDEFI, Universidad Nacional de La Plata La contaminacin qumica y microbiolgica presente en redes de distribucin de agua potable provoca un deterioro en la calidad del agua transportada, pudiendo tener consecuencias severas sobre la salud humana. El arsnico es un contamimante habitual en aguas de nuestra regin, de origen tanto natural como antropognico. La presencia de microorganismos en el agua, puede originar la formacin de biopelculas sobre los materiales de los conductos que la transportan, ocasionando la obstruccin y/o corrosin de las tuberas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de este contaminante, sobre las biopelculas bacterianas formadas sobre materiales usualmente utilizados en la construccin de redes de distribucin de agua potable. Se construyeron dos sistemas de circulacin de agua de la red, en uno de ellos se agreg 5 ppm de As(V). Cupones de hierro, cinc, hidrobronce y polipropileno de 1x1x0,02 cm se sumergieron en ambos sistemas. A un mes de exposicin se retiraron tres cupones de cada material y se realiz el recuento de bacterias adheridas en cada uno de ellos, evaluando el nmero de UFC/cm2 en placas de agar nutritivo. Se aislaron y caracterizaron bacterias cultivables a partir de las biopelculas presentes en los distintos materiales. Se extrajo ADN de las biopelculas y de las clulas planctnicas para el anlisis mediante PCR-DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) de los perfiles de las comunidades bacterianas. Se observ la formacin de biopelculas sobre todos los materiales ensayados, obtenindose mayores recuentos de bacterias ssiles en los cupones retirados del circuito con arsnico. La comparacin de los recuentos obtenidos sobre los distintos materiales en ambas condiciones arroj el siguiente orden: cinc> hierro> hidrobronce= polipropileno. Los perfiles de DGGE mostraron diferencias entre las comunidades obtenidas de los circuitos en presencia y ausencia de arsnico, pudindose identificar los aislados en sus comunidades respectivas
P316 - 27931 EVALUACIN DE LA CAPACIDAD DE FORMAR BIOFILM DE UNA CEPA DE Mycobacterium gordonae AISLADA DE AGUA DE RED DE LA CIUDAD DE BAHA BLANCA. ORIANI, ALEJANDRA SOLEDAD; BALDINI, MONICA (1); GENTILI, ALEJANDRO(1); ORIANI, DELIA(2)
(1) Universidad nacional del Sur (2) Universidad nacional de la Pampa Las micobacterias ambientales (MA) son ubicuas y saprfitas. Algunas son potencialmente patgenas para el hombre y consideradas oportunistas. Producen las denominadas micobacteriosis que han cobrado importancia en la creciente poblacin con enfermedades crnicas o trastornos de inmunodeficiencia. Estudios epidemiolgicos sugieren que las aguas naturales y de bebida son la principal fuente de contaminacin de humanos. Ya que el tratamiento de las micobacteriosis es dificultoso y no siempre exitoso lo ms apropiado sera poner nfasis en la prevencin, sobre todo en la calidad de los suministros de agua de bebida. Muchas micobacterias pueden persistir en los sistemas de distribucin de agua potable debido a la capacidad de producir biofilms. stos se transforman en reservorios de patgenos oportunistas ya que las biopelculas les permiten sobrevivir a la decontaminacin. Adems la presencia de MA en el agua de un hospital puede causar infecciones intranosocomiales y confusiones en los diagnsticos. Mycobacterium gordonae es una bacteria ambiental que se puede encontrar en aguas naturales y de red. Objetivo: evaluar la capacidad de formar biofilm de una cepa de Mycobacterium gordonae tipo 3, aislado de agua de red de la ciudad de Baha Blanca. Se realiz un estudio in vitro, usando microplacas estriles con 96 pocillos. Como inculo se utiliz una suspensin en agua estril de M.gordonae (0,5 de McFarland) cultivado durante 7 das en Middlebrook 7H9 adicionado con OADC. Se sembraron 200 l de la suspensin bacteriana en los siguientes tratamientos: 1-agua de red estril ; 2- Middlebrook + glicerol, 3-Middlebrook + OADC. En todos los casos se consider un testigo que consisti en el medio sin el agregado de la bacteria. Se incub 14 das a 30 C sin agitacin. Los pocillos se lavaron con agua de la canilla para eliminar clulas no adheridas y el biofilm remanente se ti con cristal violeta al 1% (30 minutos a 25 C). Se enjuag tres veces para remover el exceso de colorante, y el biofilm teido se resuspendi en 250 l de alcohol-acetona (70:30). El biofilm se cuantific a DO de 595 nm. Los resultados se expresan como el valor medio de los tratamientos restando el valor medio de los controles negativos. Los resultados muestran la capacidad de formar biofilm de M.gordonae. Si bien en el agua de red presenta un valor de DO bajo se debe considerar que los mismos se obtuvieron en condiciones controladas de laboratorio y con una sola especie, posiblemente en un biofilm natural el intercambio de nutrientes y la interaccin con otros microorganismos podran modificar el resultado.
Tratamiento DO (media) 1 0,02 2 0,05 3 0,31
P318 - 27969 BIORREMEDIACIN DE SUELOS CONTAMINADOS CON LINDANO POR CONSORCIOS DEFINIDOS DE ACTINOMYCETES AUTCTONOS. SAEZ, JM(1); FUENTES, MS(1); BENIMELI, CS(1,2); AMOROSO, MJ(1,3)
(1) PROIMI-CONICET, Tucumn (2) Universidad del Norte Santo Toms de Aquino (3) Universidad Nacional de Tucumn Introduccin: el gamma-hexaclorociclohexano, tambin llamado lindano, es un plaguicida organoclorado (PO) de amplio espectro y elevada persistencia en el medioambiente, el cual se utiliz ampliamente debido a su bajo costo y elevada eficiencia. Actualmente ha sido prohibido o altamente restringido a nivel mundial. Sin embargo an se lo sigue empleando en algunos pases en vas de desarrollo. La biorremediacin es una tecnologa que involucra la remocin y/o degradacin de contaminantes ambientales mediante el uso de organismos vivos. Los actinomycetes se caracterizan por su gran diversidad metablica y su asociacin con el medio ambiente, es por ello que resulta promisorio su estudio con fines biotecnolgicos, especialmente en la biorremediacin de sustancias txicas tales como el lindano y otros POs. Objetivo: evaluar la capacidad de consorcios definidos de actinomycetes autctonos para crecer en suelos contaminados con lindano y para remover y/o utilizar dicho plaguicida organoclorado. Materiales y Mtodos: se tomaron muestras de suelo libre de POs, y se fraccionaron en frascos de vidrio (200 g en cada uno) ajustando la humedad al 20%. Posteriormente se contaminaron experimentalmente con lindano (1,66 mg/Kg) y se inocularon con tres cultivos mixtos de actinomycetes (I- A5Streptomyces sp. M7; II- A2-A5-A8 y III- A2-A5-A11-Streptomyces sp. M7) en una concentracin final de 2 g/Kg. Dichos consorcios, formados por microorganismos autctonos aislados de zonas contaminadas con POs, fueron seleccionados como los ms promisorios a partir de estudios previos. Los frascos con suelo se incubaron a 30 C durante 28 das, tomando muestras cada 7 das, en las que se determin el crecimiento microbiano, mediante recuento de colonias (UFC/g) y la remocin de lindano, mediante la determinacin de plaguicida residual por cromatografa gaseo-
Se requiere un anlisis ms completo de las condiciones que favorecen la formacin de biofilms (niveles de nutrientes presentes en el agua, T, caractersticas de la superficie, etc.) y estudios adicionales sobre la ecologa de estas MA en los suministros de agua, para un mejor entendimiento del rol que desempean en los sistemas de provisin de agua de bebida.
P317 - 27945 INFLUENCIA DEL AS EN LA FORMACIN DE BIOPELCULAS SOBRE DIFERENTES SUSTRATOS. RASTELLI, SILVIA E(1); VIERA, MARISA(2); ROSALES, BLANCA M(1)
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sa. Resultados: los tres consorcios de actinomycetes autctonos, cultivados en las muestras de suelo contaminadas con lindano, mostraron perfiles de crecimiento similares a los obtenidos en los controles biticos sin el agregado de lindano. En todos los casos se observ un marcado crecimiento hasta los 14 das de incubacin. El cultivo mixto doble, constituido por los actinomycetes A5-Streptomyces sp. M7, fue el que present los mximos valores de UFC/g. Por otro lado, teniendo en cuenta las concentraciones de plaguicida residual detectadas en las muestras de suelo, se observ que los tres consorcios microbianos removieron el plaguicida del suelo, logrando los mximos porcentajes de remocin (31-33%) a los 28 das de incubacin. El empleo de cultivos mixtos constituidos por actinomycetes autctonos se presenta como una alternativa promisoria para la biorremediacin de sitios contaminados con plaguicidas organoclorados.
diacin de sitios contaminados con CLD, por su eficiencia para la degradacin de este compuesto en diferentes condiciones ambientales y con elevadas concentraciones del plaguicida
P320 - 27971 BIORREMEDIACION DEL HERBICIDA GLIFOSATO A TRAVES DE HONGOS FILAMENTOSOS. FERNANDEZ DI PARDO, AGUSTINA(1); CHIOCCHIO, VIVIANA (2); GODEAS, ALICIA(1)
(1) Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires (2) Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires Con el fin de controlar las malezas que disminuyen el rendimiento de cultivos, en los ltimos aos se ha incrementado el uso de herbicidas. El herbicida ms utilizado en Argentina es el Nphosphonomethylglycine (nombre comercial: Glifosato). ste puede ser rpida y completamente degradado por los microorganismos, por lo que el tiempo de vida en el suelo es bajo. Sin embargo, el comportamiento del glifosato puede variar en funcin de las caractersticas fsico-qumicas del suelo sobre el que se aplique. Por lo tanto, el tiempo de permanencia en el suelo podra ser mayor. Creemos que es de importancia estudiar el comportamiento de este herbicida dado las potenciales alteraciones que puede provocar en las comunidades de microorganismos que viven en el suelo y en algunos de sus procesos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad degradadora de hongos filamentosos aislados a partir de un suelo con historia de aplicacin de glifosato de la localidad de Chivilcoy. Para ello, las muestras de suelo fueron lavadas con el aparato de lavado para muestras mltiples, y posteriormente las partculas de suelo fueron sembradas en placas de Petri con agar-malta y antibitico. Una vez obtenidos los aislamientos, se utilizaron los hongos que presentaron mayor frecuencia de aparicin: Trichoderma sp; Fusarium sp; Penicillium sp y Aspergillus sp. Se sembraron en placas de Petri con medio agar-agua mas distintas concentraciones del herbicida: 0; 2; 20 y 200 g/g agar. De esta manera, fue estudiada la cintica de crecimiento para cada concentracin de herbicida para cada cepa. Se encontraron diferencias significativas en el crecimiento de las distintas cepas, indicando un comportamiento diferencial de estos hongos en presencia del glifosato. Por otro lado, el crecimiento increment respecto al control, demostrando la capacidad para utilizar este xenobitico como sustrato carbonado.
P319 - 27970 BIODEGRADACIN DE CLORDANO POR Actinomycetes AISLADOS DE SUELOS CONTAMINADOS. BOURGUIGNON, N(1); CUOZZO, S(1,2); FUENTES, S(1); BENIMELI, C(1,3); AMOROSO, MJ(1,2,3)
(1) PROIMI, Tucumn (2) Universidad Nacional de Tucumn, (3) Universidad del Norte Santo Toms de Aquino El clordano (CLD) es un plaguicida organoclorado (PO) ampliamente utilizado con fines agrcolas o domsticos. El CLD tcnico es una mezcla de ms de 140 compuestos, prevaleciendo los ismeros alpha-clordano (a-CLD) y gamma-clordano (g-CLD). Actualmente su uso est prohibido debido a su toxicidad, persistencia ambiental, biomagnificacin y bioacumulacin en la cadena alimentaria; sin embargo an es detectado en la bisfera. La biorremediacin es una alternativa eco-amigable para la recuperacin de sitios contaminados con esta clase de xenobiticos y hasta el presente no hay reportes sobre la biodegradacin aerbica de CLD por actinomycetes. Los actinomycetes son bacterias aerbicas que por su diversidad metablica y ubicuidad en el medio ambiente, pueden considerarse como microorganismos adecuados para llevar a cabo los procesos de biorremediacin. Objetivo, optimizar la degradacin de CLD en medio de cultivo mnimo por actinomycetes autctonos. Identificacin molecular Se amplific el ADNr 16S de los actinomycetes designados A2, A5, A6, A13, previamente aislados a partir de suelos contaminados con POs de la localidad de Argentina, provincia de Santiago del Estero. A partir de las secuencias obtenidas se construy un rbol filogentico. Seleccin del actinomycete ms eficiente para la degradacin de CLD Se estudi el crecimiento de los aislamientos seleccionados, adems de las cepas Streptomyces sp. M7 y S. coelicolor A3, en medio mnimo (MM) adicionado con 1,66 mg/ L de CLD tcnico como nica fuente de carbono. Los cultivos se incubaron a 30 C y 200 rpm durante 7 das. Se determin crecimiento microbiano (peso seco), g-CLD residual (cromatografa gaseosa) y liberacin de iones cloruros (espectrofotometra). Optimizacin de los parmetros de degradacin. Los aislamientos seleccionados se cultivaron a 25, 30 y 35 C; pH iniciales de 5, 7 y 9 y en concentraciones de 1,66; 8,30 y 16,60 mg/L del PO. Se determin crecimiento microbiano, g-CLD residual y cloruros liberados. Resultados Los actinomycetes A2, A5, A6, A13 presentaron un porcentaje de identidad comprendido entre el 96,7 y 98,7% con la cepa de coleccin S. odorifer DSM 40347, por lo tanto se los consider pertenecientes al gnero Streptomyces. Todos los microorganismos analizados presentaron las mximas remociones de g-CLD (98,0 y 99,8%) al primer da de incubacin. Se seleccion el aislamiento A5 como el ms promisorio para la biodegradacin de CLD por presentar la mayor produccin de biomasa (0,29 mg/mL), el menor tiempo de duplicacin (6,44 h) y elevadas capacidades de remocin de g-CLD (99,8%) y de liberacin de iones cloruros (deltaA540=0,11). El actinomycete A5 demostr una remocin del 99% para g-CLD cuando se cultiv en todas las temperaturas y pH iniciales evaluados. Cuando se suplement el MM con una concentracin inicial de 16,60 mg/L de CLD, el aislamiento A5 fue capaz de crecer con g-CLD como nica fuente de carbono y energa y de remover el 99,6% del plaguicida del medio de cultivo. Estos resultados permiten postular a Streptomyces A5 como potencial agente para la biorreme-
P321 - 27990 TRATAMIENTO BIOLOGICO DE EFLUENTES CIANURADOS CON ESPECIES FUNGALES. GONZALEZ, RUBEN DARIO; ROBERT, ELIZABETH(1); PIGNATA, MARIA LUISA(2)
(1) Universidad Tecnolgica Nacional, Facultad de Crdoba, (2) F.C.E.F.N., Universidad Nacional de Crdoba Los efluentes y residuos de la industria galvanotcnica constituyen desechos altamente peligrosos debido a que presentan elevadas concentraciones de cianuro asociadas a metales pesados. Sin embargo, a pesar de ser una de las grandes generadoras de residuos y efluentes cianurados no se ha profundizado en la aplicacin de mtodos de biodegradacin como tecnologa alternativa para su tratamiento. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un mtodo qumico-biolgico que permita disminuir la toxicidad de lodos provenientes de baos electrolticos agotados de una industria de galvanizado en Crdoba, Argentina que realiza electrodeposicin de zinc en piezas de acero. A partir de muestras de suelo de la zona de descarga de los lodos se aislaron mohos que degradan cianuro, los que se cultivaron en condiciones controladas. Las colonias ms representativas, fueron sembradas en un reactor de operacin en sistema continuo y se evalu el efecto de diferentes concentraciones iniciales de glucosa, cianuro y de la relacin carbono/nitrgeno en la corriente de alimentacin. El reactor se aliment con un medio de cultivo que contena como fuente de nitrgeno el lixiviado obtenido mediante el lavado alcalino de los lodos, glucosa como fuente de carbono y nutrientes minerales. Las concentraciones de cianuros totales, glucosa y metales se determinaron segn mtodos estndar. En la evaluacin del efecto de las distintas concentraciones iniciales
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de glucosa, cianuros totales y de la relacin carbono/nitrgeno en la corriente de alimentacin se encontr que la mayor eficiencia de remocin (94%) correspondi a las menores concentraciones iniciales de cianuro (entre 11 y 15 mg/l) y a la mayor concentracin inicial de glucosa (4,98 g/l) en el biorreactor. La eficiencia de biodegradacin mostr una clara correlacin (Pearson) a medida que la relacin C/N aument desde 0,02 hasta 0,44. Los mximos valores de remocin (entre 89% y 94%) se lograron con valores de relacin C/N entre 0,2 y 0,44, los cuales sugieren la posible aplicacin del proceso a escala industrial.
Programa Plantas Txicas Y Medicinales, Metabolismo de Compuestos Sintticos y Naturales (PROPLAME)-PRHIDEB La caracterstica que define al grupo fisiolgico de hongos causantes de pudricin blanca es su capacidad de degradar la lignina. Esta es el polmero aromtico ms abundante de la naturaleza y sus unidades son molculas fenilpropanoides que se polimerizan al azar dando una estructura amorfa muy recalcitrante a la degradacin. Estos hongos tienen un sistema de enzimas oxidoreductasas ligninolticas que, al ser inespecficas, tienen actividad cataltica sobre muchos compuestos artificiales aromticos. Un gran nmero de estos compuestos son utilizados por la industria y luego volcados a travs de efluentes como residuos, ocasionando un grave problema de contaminacin ambiental. Por ello estos hongos representan en la actualidad uno de los recursos naturales ms promisorios en la biorremediacin de suelos y aguas. Se ha comprobado que algunos compuestos aromticos pueden ser potentes inductores de actividades ligninolticas, por lo tanto estudiar el efecto de compuestos aromticos contaminantes en la produccin de estas enzimas aumenta an ms las potencialidades de aplicacin de estos organismos para el desarrollo de tecnologa de proteccin ambiental. Se plante como objetivo estudiar el efecto en las actividades ligninolticas del agregado de cobre y del fungicida Verde de Malaquita (VM). Los experimentos se realizaron en cultivos estticos de 11 das de T. versicolor cultivados en medio lquido definido a base de asparagina y glucosa como fuentes de nitrgeno y carbono respectivamente. El VM se agreg a estos cultivos en diferentes concentraciones y se tomaron muestras peridicamente a las que se les midieron las actividades ligninolticas lacasa, manganeso peroxidasa y adems la decoloracin del VM. Se encontr que el VM 80 M es un potente inductor de la actividad lacasa, que se increment hasta 16 veces respecto del control sin VM, registrndose este pico a las 120 h luego de agregado el VM. Con valores ms altos en la concentracin de VM la induccin fue menor. Se estudi tambin el efecto del cobre, un conocido inductor de actividad lacasa, agregado al cultivo junto con el VM. Tras analizar los resultados se comprob que todas las combinaciones en las concentraciones de cobre y VM resultaron en incrementos significativos de la actividad lacasa. Adems las concentraciones ms altas de VM (80 y 160 M) produjeron aumentos mayores que los detectados en los cultivos sin cobre. Los cultivos a los que se agreg slo cobre tambin registraron aumentos de hasta 15 veces respecto de aquellos sin ningn agregado. Dado que se comprob que ambos compuestos (VM y cobre) son potentes inductores de actividad lacasa, el siguiente paso consisti en estudiar los patrones isoenzimticos de esta enzima para comprobar si exista algn tipo de induccin diferencial respecto del compuesto inductor utilizado. El revelado de los geles mostr idntico patrn de isoenzimas de lacasa para todos los tratamientos aplicados. El VM es un eficiente inductor de la actividad lacasa y puede reemplazar al cobre, que presenta problemas adicionales de contaminacin al tratarse de un metal pesado. El VM, no slo aumenta la actividad lacasa sino que adems es degradado por esta misma, resultando su agregado inocuo para el medioambiente.
P322 - 28010 ALTERACIN DE LA DIVERSIDAD FUNCIONAL MICROBIOLGICA Y LOS PARMETROS FSICOS DE SUELOS CONTAMINADOS CON BIODIESEL. RIOS, RUTH PAOLA; KIRSANOV, NATALIA; ROMANIUK, ROMINA; GIUFFRE, LIDIA
Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires Los microorganismos del suelo son muy sensibles a la perturbacin del ecosistema producto de la contaminacin, alterando rpidamente la diversidad y actividad. Los requisitos para la biodegradacin son la presencia de una comunidad microbiana grande y activa, y aceptores de electrones. Otros atributos del sitio que pueden limitar la biodegradacin son: disponibilidad optima de nutrientes, pH cercano a la neutralidad y temperaturas moderadas. La contaminacin puede genera una alteracin en el ambiente, por lo cual se debe realizar prcticas de remediacin para reducir su peligrosidad. La degradacin biolgica consiste bsicamente en la oxidacin de estos compuestos por parte de bacterias heterotrficas del suelo con el objetivo de obtener energa para su mantenimiento y crecimiento celular. La diversidad funcional es un componente de la diversidad microbiana que incluye un amplio rango de actividades de relativa expresin, involucrando la funcin de descomposicin que es la mayor dimensin. Los perfiles de respuesta catablica, son una medida del potencial catablico in situ de la comunidad microbiana, reflejando su actividad. Se basa en la medicin de las diferencias encontradas en la respiracin inducida por sustrato en un perodo corto de tiempo a la adicin al suelo de aminocidos, cidos carboxlicos, carbohidratos y polmeros orgnicos para caracterizar la diversidad funcional de la comunidad microbiana. Permite determinar la riqueza catablica, la cual es una medida del nmero de sustratos oxidados a CO2, y la uniformidad catablica, la cual es una medida de la respiracin aportada por cada sustrato. Los objetivos del presente trabajo fueron: (i) estudiar el efecto del agregado de biodiesel en el suelo sobre variables edficas y (ii) ver si la diversidad funcional microbiolgica se ve afectada producto de la contaminacin, en diferentes metodologas de remediacin. Se realiz un ensayo en macetas sobre un Argiudol tpico con 5 tratamientos: S (testigo), S+B (atenuacin natural), S+C+B (bioestimulacin orgnica), S+F+B (bioestimulacin inorgnica), S+M+B (bioaumentacin). Las muestras se tomaron al momento de la contaminacin y se determin los siguientes parmetros qumicos: pH, conductividad elctrica (CE), nitratos y fsforo. . El pH disminuyo 2 puntos en los tratamientos de S+B y S+C+B respecto a la situacin testigo, mientras que en el tratamiento S+F+B de solo disminuyo un punto. Los valores de Ce y fsforo no variaron significativamente entre tratamiento. Los tratamientos de bioestimulacin inorgnica y orgnica presentaron mayores valores de nitratos, con diferencias significativas, respecto de los restantes tratamientos. No hubo diferencias en la riqueza catablica entre tratamientos ya que todos los sustratos fueron metabolizados. El tratamiento de bioestimulacin orgnica present el mayor valor de uniformidad catablica seguido de la situacin testigo, atenuacin natural, estimulacin inorgnica y bioaumentacin. El agregado de compost produjo un aumento en la diversidad funcional microbiana incrementando la uniformidad catablica.
P324 - 28022 EFECTO DEL IMPACTO ANTRPICO SOBRE LOS GRUPOS METABLICOS MICROBIANOS RESPONSABLES DE LA DEPURACIN DEL RO SUQUA (CRDOBA, ARGENTINA). MERLO, CAROLINA; ABRIL, ADRIANA
Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad Nacional de Crdoba. En los ecosistemas acuticos los microorganismos tienen un rol clave no solo en el ciclado de nutrientes, sino tambin en la descomposicin de contaminantes orgnicos. Si bien es conocida la gran presin antrpica que soporta el ro Suqua, no se conoce la dinmica microbiana de los sedimentos del ro y su capacidad depuradora. El objetivo fue evaluar el efecto de la contaminacin antrpica sobre los grupos metablicos microbianos responsables de la depuracin en sedimentos del ro Suqua (Crdoba, Argentina), en las pocas de alto y bajo caudal de agua. Se tomaron muestras de sedimentos en 6 sitios a lo largo de 115
P323 - 28013 INCREMENTO DE LA ACTIVIDAD LACASA EN Trametes versicolor UTILIZANDO VERDE DE MALAQUITA COMO INDUCTOR. KUHAR, FRANCISCO; CASTIGLIA, VALERIA; PAPINUTTI, LEANDRO
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km: a) un sitio 20 km antes del ingreso del ro a la ciudad de Crdoba (La Calera); b) tres sitios en la ciudad (ingreso del ro, centro de la ciudad y salida del ro); c) un sitio 12 km despus de la planta depuradora de lquidos cloacales de Crdoba (Corazn de Mara) y d) un sitio alejado 50 km de la ciudad. Se determin la abundancia de grupos metablicos microbianos hetertrofos (fermentadores, amonificadores, sulfatoreductores, nitratoreductores, fijadores de N y celulolticos) y littrofos (nitrificadores) en medios especficos. Adems, se analiz la textura, el contenido de materia orgnica y nitrato y se determin in situ el contenido de oxgeno disuelto en el agua del ro. En general, en la poca de bajo caudal la mayor abundancia de microorganismos hetertrofos se presento en Corazn de Mara y la menor en La Calera, mientras que los nitrificadores no fueron detectados en Corazn de Mara y en La Calera presentaron su mayor abundancia. Contrariamente, en la poca de alto caudal la abundancia de grupos microbianos no mostr un patrn regular por sitio, y los fermentadores, celulolticos y fijadores de N no presentaron diferencias significativas. En ambas pocas de muestreo la mayora de los grupos microbianos hetertrofos mostraron correlacin con el contenido de materia orgnica, nitrato y limo y correlacin negativa con el contenido de arena. En cambio, los nitrificadores presentaron correlaciones negativas con el contenido de materia orgnica y nitrato en la poca de bajo caudal y correlacin positiva con el oxgeno en la de alto caudal. La abundancia de grupos metablicos microbianos tambin vari segn el caudal de agua, principalmente en los sitios La Calera e ingreso del ro a la ciudad donde aumentaron en la poca de alto caudal consistentemente con el aumento de los nutrientes. Esto es probablemente debido a la actividad de un gran centro turstico ubicado aguas arriba de los sitios de muestreo. La contaminacin antrpica afecta la abundancia de los grupos metablicos microbianos responsables de la depuracin del ro, aumentando la abundancia de microorganismos degradadores de contaminantes orgnicos y disminuyendo los nitrificadores debido a que son estrictamente aerbicos y muy sensibles a las variaciones ambientales. Adems, el aumento de la abundancia de microorganismos anaerbicos (fermentadores, nitratoreductores y sulfatoreductores) en los sitios con mayor impacto antrpico y en consecuencia su actividad anaerbica, produce algunos compuestos qumicos incluso ms txicos que los contaminantes originales.
brana filtrante en medio Endo. Los aislamientos compatibles con V. cholerae fueron identificados mediante pruebas bioqumicas clsicas y serologa. Posteriormente fueron remitidas al Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS Dr Carlos G. Malbrn para la deteccin de los factores de patogenicidad: toxina de clera, factor de colonizacin toxin corregulated pilus y toxina termoestable. En 8/31 muestras (26%) se obtuvieron resultados positivos para V. cholerae no-01 no-0139, todos carentes de genes que codifican para los factores de virulencia estudiados. En las muestras positivas se registraron los siguientes parmetros promedios: pH 8,1 (7,2 a 9,3), temperatura 27,0 C (20,1 a 32,5), recuento de coliformes totales 140000 UFC/100 mL (1000 a 1000000), recuento de E. coli 3200 UFC/100 mL (100 a 6900). Las muestras positivas se repartieron por igual con y sin lluvias previas. V. cholerae fue recuperado solamente de lagunas y de un ro con comportamiento lacustre. Aunque la deteccin de V. cholerae se relacion con pH alcalinos y recuentos de coliformes y E. coli elevados, stas no fueron condiciones suficientes para asegurar su presencia. Las lluvias previas y la temperatura no influyeron en la recuperacin de este patgeno, pero es de destacarse la influencia de los ecosistemas acuticos estacionarios en la positividad de las muestras. Estos resultados refuerzan la necesidad de realizar estudios de vigilancia de V. cholerae con el propsito de minimizar los riesgos de infeccin de la poblacin susceptible.
P326 - 28027 EFECTO DE FACTORES ABITICOS EN LA BIODEGRADACIN DE M-NITROFENOL POR UNA COMUNIDAD BACTERIANA AUTCTONA. GONZALEZ, ANA JULIETA; GEMINI, VIRGINIA; GALLEGO, ALFREDO; KOROL, SONIA
Ctedra de Higiene y Sanidad. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad de Buenos Aires El m-nitrofenol es un compuesto persistente y txico para los organismos acuticos empleado como intermediario en la sntesis de colorantes, como fungicida en productos de cuero y como reactivo en determinaciones analticas. Puede llegar a los cursos de agua superficial a travs del vertido de efluentes lquidos sin tratamiento previo. Los procesos de biodegradacin constituyen una alternativa eficiente para la depuracin de efluentes lquidos y aguas contaminadas con este compuesto, sin embargo estos procesos pueden ser afectados por la influencia de diversos factores. En trabajos previos se seleccion una comunidad bacteriana autctona capaz de degradar m-nitrofenol. El objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia de factores abiticos en la biodegradacin de m-nitrofenol por la comunidad bacteriana. Los ensayos de biodegradacin se llevaron a cabo en microfermentadores aerbicos de 2 litros de capacidad, a 28 C y con agitacin (200 rpm). Los factores estudiados fueron: a) concentracin inicial de m-nitrofenol: 50, 100, 150 y 200 mg/L; b) pH inicial del medio: 5, 7 y 9; y c) presencia simultnea de compuestos anlogos estructurales txicos: o-nitrofenol (20 mg/L) y p-nitrofenol (20 mg/L). La degradacin del compuesto fue determinada por espectrofotometra UV y el crecimiento bacteriano por el mtodo de recuento en placa. La comunidad bacteriana fue capaz de degradar 50, 100,150 y 200 mg/L dentro de las 24, 40, 48 y 72 horas respectivamente. Si bien se observ un incremento en el tiempo de degradacin al aumentar la concentracin del compuesto, en todos los casos la eficiencia del proceso fue superior a 90% expresada en trminos de remocin del compuesto. La biodegradacin de 100 mg/L de m-nitrofenol a pH 5, 7 y 9 tuvo lugar dentro de las 48 horas y la eficiencia del proceso fue superior a 90%. En presencia de 20 mg/L de o-nitrofenol o p-nitrofenol la degradacin de 100 mg/L del compuesto tuvo lugar dentro de las 48 horas con una eficiencia de 86%. Los resultados obtenidos demuestran la capacidad de la comunidad bacteriana seleccionada para degradar m-nitrofenol bajo diversas condiciones en tiempos compatibles con los tratamientos biolgicos de efluentes. Los procesos de bioaumentacin empleando esta comunidad bacteriana podran constituir una estrategia vlida para la optimizacin de procesos de depuracin de efluentes lquidos que contienen m-nitrofenol. Este trabajo forma parte del Proyecto B022 Programacin Cientfica UBACyT 2008-2010
P325 - 28025 DETECCIN DE Vibrio cholerae EN FUENTES DE AGUAS DE USO RECREACIONAL DE LAS PROVINCIAS DE CHACO Y CORRIENTES, ARGENTINA. TRACOGNA, MARIA FERNANDA; GARIBOGLIO VAZQUEZ, MARIA LUCRECIA; LOSCH, LILIANA SILVINA; MERINO, LUIS ANTONIO
Instituto de Medicina Regional- Universidad Nacional del Nordeste - UNNE Los patgenos relacionados con el agua, entre ellos Vibrio cholerae, pueden ser una amenaza para los ambientes acuticos utilizados con fines recreacionales. Tanto en reas endmicas como epidmicas, los brotes de clera siguen un patrn estacional, apareciendo de forma explosiva en varios focos simultneamente, indicando un posible rol de factores ambientales en la aparicin de las epidemias. Aunque slo V. cholerae O1 y O139 han causado epidemias de clera, algunas cepas pertenecientes a serogrupos no-O1 no-O139, han sido aisladas de pacientes con sntomas que van desde diarrea leve hasta deshidratacin severa semejante a clera y otras infecciones extraintestinales. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de V. cholerae en fuentes de aguas de las provincias de Chaco y Corrientes y relacionarlos con los factores ambientales. Durante las cuatro estaciones se estudiaron 31 muestras de agua de 4 lagunas y 2 ros utilizados con fines recreacionales. Se registraron datos de temperatura y pH del agua adems de la presencia de lluvias previas. De cada sitio de muestreo se recolectaron 5 litros de agua. La presencia de Vibrio spp. se estudi mediante filtracin por membrana, enriquecimiento en Agua Peptonada Alcalina y resiembra en Agar TCBS. El recuento de coliformes totales y Escherichia coli se llev a cabo mediante recuento sobre mem-
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P327 - 28071 BIODEGRADACIN DE CIDO 2,4-DICLOROFENOXIACTICO (2,4-D): INFLUENCIA DEL PH Y LA PRESENCIA DE COMPUESTOS ORGNICOS. GONZLEZ, ANA JULIETA; GALLEGO, ALFREDO(1); PAPALIA, MARIANA(2); RADICE, MARCELA(2); GUTKIND, GABRIEL(2); KOROL, SONIA(1)
(1) Ctedra de Higiene y Sanidad. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad de Buenos Aires. (2) Laboratorio de Resistencia Bacteriana. Ctedra de Microbiologa. Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad de Buenos Aires El cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D) es un herbicida ampliamente utilizado en Argentina. Es un compuesto persistente que puede llegar a las aguas superficiales a partir de los suelos agrcolas o del vertido de efluentes lquidos provenientes de las industrias productoras de agroqumicos. Los procesos de bioaumentacin empleando microorganismos especficamente seleccionados constituyen una alternativa vlida para la depuracin de efluentes lquidos que contienen 2,4-D. Sin embargo, diversas condiciones presentes en estos efluentes, tales como las variaciones de pH y la presencia simultnea de compuestos fcilmente biodegradables o de compuestos txicos, pueden afectar los procesos de biodegradacin. En este estudio se emple una cepa bacteriana autctona capaz de degradar 100 mg/L de 2,4-D en 24 horas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia del pH y la presencia de otros compuestos orgnicos en la degradacin de 2,4-D por la cepa autctona empleada. Los ensayos de biodegradacin se realizaron en microfermentadores aerbicos de 2 L de capacidad, a 28 C y con agitacin (200 rpm). Se trabaj con una concentracin inicial de 100 mg/L de 2,4-D y se evalu la influencia del pH inicial del medio (5, 7 y 9), la presencia simultnea de compuestos fcilmente biodegradables (100 mg/L de acetato o citrato) y de compuestos txicos (20 mg/L de 2-clorofenol o 4-clorofenol). La degradacin de 2,4-D fue determinada por espectrofotometra UV y el crecimiento bacteriano por el mtodo de recuento en placa. La cepa autctona fue identificada como Delftia sp. de acuerdo al sistema API 20NE y a la secuenciacin del gen del 16S rRNA. Delftia sp. fue capaz de emplear glutamato, acetato, piruvato, citrato, manitol, catecol, cido benzoico y 2,4diclorofenol como nica fuente de carbono, pero no otros derivados fenlicos como cloro y nitrofenoles. A pH 7 el tiempo de degradacin de 2,4-D fue de 24 horas, mientras que a pH 5 y 9 la degradacin tuvo lugar dentro de las 72 horas. La degradacin de 2,4-D en presencia de acetato tuvo lugar dentro de las 66 horas, mientras que la presencia de citrato no afect el proceso degradativo. 2-clorofenol y 4-clorofenol incrementaron el tiempo de degradacin del herbicida. En todos los casos la eficiencia del proceso de biodegradacin fue superior a 85%. Delftia sp. fue capaz de degradar 2,4-D an en condiciones desfavorables para el crecimiento bacteriano. El empleo de esta cepa autctona es una herramienta promisoria para la depuracin de efluentes lquidos y la remediacin de sitios contaminados con 2,4-D. Este trabajo forma parte del Proyecto B022 Programacin Cientfica UBACyT 2008-2010
ciacin del 16S ARN ribosomal, como Bacillus licheniformis (cepa ICR16). Esta cepa ICR16 deriva de plantas de tratamiento de efluentes y terrenos de landfarming de una industria petroqumica de la regin, por lo cual su ambiente natural rico en residuos de petrleo justific las capacidades metablicas de la misma. ICR16 fue capaz de crecer en presencia de mezclas complejas de HAP (antraceno, fluoreno, fenantreno, bifenilo, bifenilenos, etc.) como nica fuente de carbono y energa en medio mnimo salino. Al cabo de cinco das de incubacin a 37 C la degradacin de los HAP fue mayor al 97% tal cual lo demostrado por cromatografa gaseosa y espectrometra de masas. Siendo, adems de la contaminacin por hidrocarburos, la contaminacin por metales pesados un tema de cruda realidad en nuestra regin es que investigamos la capacidad de ICR16 de remediar la contaminacin por metales. Conociendo que el Cromo es un metal que suele estar asociado a la matriz de hidrocarburos del petrleo, se decidi evaluar si, adems de la capacidad de detoxificar hidrocarburos recalcitrantes, ICR16 poda detoxificar Cromo. El Cromo (Cr) existe en dos estados de valencia, Cr(VI) y Cr(III). El Cr(VI) es altamente soluble y por lo tanto biodisponible, es txico para la salud humana y carcinognico. Por otra parte, el Cr(III) es menos soluble y mucho menos txico, de hecho en concentraciones bajas es un metal esencial para nuestro metabolismo. Los mtodos qumicos para la reduccin del cromato son caros, por lo cual los tratamientos biolgicos revisten gran inters inclusive como complementarios de los tratamientos qumicos o como alternativas valederas ante la imposibilidad de aplicar mtodos qumicos. La cepa de B. licheniformis ICR16 fue capaz de reducir Cr(VI) a Cr(III) (tal cual lo evidenciado por tcnicas espectrofotomtricas con difenil-carbazida y por absorcin atmica) cuando se la creci en presencia de 10 ppm de Cr(VI). Ms an, ICR16 present una CIM de 50 ppm para Cr(VI) que representa una concentracin ms de mil veces superior al lmite permitido de Cr(VI) en agua de red. ICR16 fue capaz de desarrollar biofilms y remediar, bajo estas condiciones de crecimiento, tanto Cr(VI) como HAP presentes simultneamente. Las propiedades de ICR16 (destruccin de HAP, reduccin de Cr(VI) y formacin de biofilms), adems de su capacidad de formacin de esporas y por ende de almacenamiento bajo condiciones viables durante prolongados periodos de tiempo, tornan a la misma en una herramienta atractiva para su ensayo a campo como remediadora de contaminaciones mixtas por hidrocarburos y metales txicos.
P329 - 28089 DETERMINACIN DE BACTERIAS DE ORIGEN FECAL EN AGUA Y SUELO DE LOS HUMEDALES LAGUNAS DE GUANACACHE SECTOR NORTE. VERGARA, CINTIA; VARELA, PATRICIA; PASTOR, ALEJANDRA
Instituto de Biotecnologa (IBT)-Universidad Nacional de San Juan El Humedal Lagunas de Guanacache es el sptimo Sitio Ramsar argentino incluido en la Lista de Humedales de Importancia Internacional. Es un sistema endorreico de lagunas y baados encadenados, alimentados por los ros Mendoza y San Juan. En l habita una poblacin de origen hispano-aborigen cuya necesidad de agua se satisface con el consumo directo de cauces o espejos. Recibe los aportes que arrastran los ros y los liberados por la comunidad rural de la zona. Casos como este han determinado que organismos internacionales hayan desarrollado procedimientos tendientes a estimar los efectos adversos de contaminantes sobre los ecosistemas y sus componentes. Dentro de los agentes contaminantes, se encuentran gneros como Escherichia, Shigella y Salmonella. Estas bacterias entricas pueden contaminar las aguas de ros y de ambientes costeros. Esto genera un serio riesgo sanitario y ecolgico, sobre todo ante la posibilidad de propagar las infecciones bacterianas. Objetivos: 1. Determinar y cuantificar la presencia de bacterias coliformes totales. 2. Determinar y cuantificar la presencia de bacterias indicadoras de contaminacin fecal. 3. Determinar la presencia de E. coli, Shigella y Salmonella. Metodologa: rea de estudio: Este trabajo se realiz en muestras de tres sitios (S): S1 puente de Cochagual; S2 Ruta 20, puente de Encn; S3 meandro del ro San Juan al este de Encn. Estos sitios se escogieron por ser representativos de la zona y porque permanecen con agua todo el ao. Recoleccin de
P328 - 28083 BIORREMEDIACIN DE HIDROCARBUROS AROMTICOS POLICCLICOS (HAP) Y METALES PESADOS POR LA BACTERIA FORMADORA DE ESPORAS Bacillus licheniformis. BAUMAN, CARLOS; SUAREZ, IRINA; VERA, MARA NOEL; GRAU, ROBERTO
Facultad de Bioqumica y Farmacia, Universidad Nacional de Rosario. Laboratorio de Microbiologa Bsica y Aplicada. CONICET-Rosario. El desarrollo y escalamiento a nivel industrial de cepas bacterianas amigables para el entorno con la capacidad de depurar (biorremediar) lugares contaminados con hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) y metales pesados es de suma importancia para la proteccin del medio ambiente y el mejoramiento de la calidad de vida de las personas. En este trabajo describimos el aislamiento de una nueva cepa bacteriana biorremediadora, caracterizada bioqumica y molecularmente por secuen-
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Muestras: Se realiz en Agosto y Noviembre del 2009. Las de suelo se tomaron a una distancia de entre 0,5 m del sitio de la correspondiente muestra de agua. Anlisis de la calidad bacteriolgica: Las muestras de suelo fueron suspendidas en agua (1:10 p/v) y a partir de all se procesaron como las de agua. La cuantificacin e identificaciones se efectuaron conforme a los protocolos establecidos por la American Public Health Association (APHA, 1998).
Estacin fra Agua 1 Agua 2 Agua 3 Suelo 1 Suelo 2 Suelo 3 Coliformes Totales 11 x 10 2 x 10 0 5 x 104 4 x 10 20 Coliformes Fecales 8 x 10 20 0 3x 104 4 x 10 0 E.coli (NMP/100mL) Presencia Ausencia Ausencia Presencia Presencia Ausencia Salmonella (NMP/100mL) Presencia Presencia Ausencia Presencia Presencia Ausencia Shigella
Presencia Presencia Ausencia Presencia Presencia Ausencia
tegidas por la pubescencia y la cmara de aire debajo de las prulas en las yemas. La seleccin de cepas se realiza privilegiando la velocidad de fermentacin y las caractersticas sensoriales enolgicas. Por inquietudes de la industria se comenzar a realizar la bsqueda de levaduras de la coleccin que consuman altas cantidades de azcar por cada grado de alcohol producido, y otras que aumenten la acidez fija en los vinos. Se han registrado tres cepas en Davis (USA). Como cepas inditas a travs de la secuencia ribosmica de las mismas, constatando de esta manera que no son comerciales. Se llevan adelante convenios de cooperacin, produccin y comercializacin de levaduras con empresas de biotecnologa, nacional y extranjera.
La poblacin bacteriana del agua supera el permitido para coliformes en agua de consumo establecido por EPA (2,2 coliformes/100 mL). La poblacin bacteriana en las muestras de suelo es mayor que las del agua en la misma zona, lo que indicara que estos microorganismos sedimentan con las partculas de materia orgnica y son arrastradas a la rivera por los movimientos. La presencia de los gneros Salmonella, Shigella que son ms lbiles que los considerados Indicadores, muestra la posibilidad de encontrar cualquier otro gnero cuya patogenicidad tenga consecuencias impredecibles en todo el ecosistema.
P331 - 28150 BIORREMEDIACIN DE CIPERMETRINA POR ACCIN DE MOHOS AMBIENTALES. LAGGER, SILVANA; DE JESUS, JUAN JOSE; BELDOMENICO, HORACIO; BASILICO, JUAN CARLOS; FRISON, LAURA
Facultad de Ingeniera Qumica de la Universidad Nacional del Litoral El medio ambiente est siendo afectado enormemente por la liberacin de contaminantes generados por la actividad industrial, produciendo efectos negativos sobre los ecosistemas y la salud humana. En bsqueda de soluciones, se est investigando la utilizacin de microorganismos con capacidad de convertir desechos txicos en compuestos menos dainos para el ambiente. A la tecnologa que utiliza el potencial metablico de los microorganismos para transformar contaminantes orgnicos en compuestos mas inocuos, se la llama Biorremediacin. Cuando los microorganismos utilizados son hongos al proceso de Biorremediacin se lo llama Micorremediacin. La Cipermetrina (C22H19Cl2NO3) es un insecticida piretroide, sumamente activo contra una gran variedad de plagas habituales en agricultura y ganadera. Su degradacin natural se produce al cabo de siete meses. El objetivo de este trabajo ha sido estudiar a escala de laboratorio la degradacin de Cipermetrina en baos garrapaticidas para el ganado vacuno, utilizando tres cepas del moho Aspergillus niger (cepa 1, cepa 2 y cepa 3) provenientes del cepario del Laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ingeniera Qumica de la Universidad Nacional del Litoral. Las mismas fueron reactivadas en Agar Extracto de Malta (MEA) por 8 das a 28C y reservadas para inocular diferentes reactores. Se realizaron suspensiones de conidios de las tres cepas del moho en estudio por raspado de cajas de Petri y resuspendiendo los conidios en 5 mL de Tween 80 al 0,1%. Se realiz adems un pool con estas tres cepas. Se inocularon reactores conteniendo 50 mL de bao garrapaticida de concentracin conocida de Cipermetrina con 1 mL de suspensin de conidios del moho en estudio. Se evalu la degradacin por la accin individual de cada aislado y por un pool formado por las tres cepas, determinando la concentracin del principio activo por Cromatografa Lquida UVD. Se sigui la evolucin del microorganismo en funcin del tiempo, realizando recuentos microbiolgicos. Todos los ensayos se realizaron a hora cero y cada 24 horas en el transcurso de 1 semana. Los recuentos microbiolgicos se mantuvieron aproximadamente constantes a lo largo de una semana tanto para el pool de las tres cepas como para las cepas individuales. Se observ adems, una disminucin en la concentracin de Cipermetrina en las diferentes experiencias. Con el pool de las tres cepas de A. niger se logr una disminucin mayor que fue de 21,5%, mientras que con la cepa 1 fue de 15,5%, con la cepa 2 de 7,7% y con la cepa 3 de 8,44%. Esta mayor degradacin lograda con el pool frente a las cepas individuales podra deberse a un efecto de sinergismo entre los aislados. Resultara promisoria la utilizacin de este microorganismo debido al menor tiempo de degradacin que se alcanza, comparado con su descomposicin natural.
P330 - 28107 SELECCIN DE LEVADURAS ENOLGICAS AUTCTONAS DE LAS REGIONES VITIVINCOLAS DE MENDOZA. NUEVO PROCEDIMIENTO DE BSQUEDA EN LAS YEMAS DE VID. FORMENTO, JUAN CARLOS; SFREDDO, LIZ; LUQUEZ, CLAUDIA; GALIOTTI, HUGO; SANCHEZ, LAURA; NAZRALA, JORGE; BERNARDI, MARCELA
Universidad Nacional de Cuyo Introduccin: El agregado de cultivos iniciadores puros de Saccharomyces cerevisiae es una prctica muy difundida en Enologa. Comercialmente existe una variada oferta de levaduras seleccionadas provenientes de otros pases. Objetivos: Se conoce que cultivos aislados de una regin estn mejor adaptados a las caractersticas ecolgicas, manejos tecnolgicos y mejoran las caractersticas regionales de los vinos contribuyendo a su diferenciacin. Mtodos: Se extrajeron racimos y yemas en bolsas estriles, de diferentes viedos de distintas zonas vitcolas de Mendoza. Se trabajaron aspticamente, se incubaron a 28 C para aislar las cepas capaces de alcanzar el final de fermentacin. Se aislaron cepas de determinadas caractersticas microscpicas (clulas globosas con gemacin multipolar) y culturales (de 3-4 mm de dimetro, color beige, consistencia cremosa, con leve mameln en el centro). Se les realiza adems la cintica de fermentacin, llevando un registro diario de prdida de peso. Finalmente se decide seleccionar las cepas que liberan las mayores concentraciones de CO2 sobre el total de las aisladas inicialmente. A estas ltimas cepas se las caracteriza por su produccin de H2S, carcter floculante y capacidad positiva o negativa de metabolizar la galactosa. Se han aislado hasta el presente ms de 600 cepas de levaduras Saccharomyces cerevisiae, de caractersticas morfolgicas definidas. Se realizaron micro vinificaciones, anlisis qumicos y sensoriales, seleccionando aquellas levaduras con caractersticas enolgicas distintivas: baja produccin de acidez voltil, tolerancia a valores superiores al 14%v/v de alcohol, buena produccin de glicerina y excelentes caractersticas sensoriales. Se realizan vinificaciones piloto de distintas variedades de vid, observando el comportamiento a nivel industrial y la calidad de los vinos obtenidos. Conclusiones: El nuevo mtodo de bsqueda en yemas respondera a la especificidad varietal y consiste en la recoleccin asptica de muestras a campo de estos rganos areos durante todo el ciclo vegetativo. Se revel la importancia de las yemas como reservorios de levaduras. Los resultados indican que existen dos momentos de mxima poblacin: a fines de otoo en yema cerrada y a mediados de verano en yema axilar de hoja adulta. En invierno las levaduras encuentran refugio pro-
P332 - 28158 CARACTERIZACIN DE PARMETROS BIOTECNOLGICOS PARA RENDIMIENTOS EN BIOMASA DE JUGOS Y EFLUENTES CTRICOS DE NARANJA. FOURNIER, JULIO CSAR; VUARANT, CARLOS MARIA; SCHIAPPACASSE, EDUARDO A; GERARD, OSCAR A
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Universidad Nacional de Entre Rios Introduccin: la reduccin de volmenes de efluentes es beneficiosa en general para el medio ambiente. Objetivo: aprovechamiento de subproductos ctricos, en este caso de naranja. Materiales y Mtodos: Los efluentes lquidos ctricos seleccionados han sido tres: 1- descarga de 2 centrifugacin (peel oil o pulido). 2- lavado descargas de centrfuga. 3- licor de prensa ctrico. Estos sustratos han sido referidos al jugo natural de naranja y estn direccionados a la obtencin tanto sea de metabolitos secundarios como etanol, naringina, etc., como a la produccin de biomasa, ya sea a partir de flora autctona polimicrobiana, como tambin de flora especifica, generalmente de levaduras. Estos procesos aerbicos fueron realizados a travs de mtodos Shaker, Aireador de burbujas, y Biorreactor. Se han comparado, adems de parmetros fsicos y qumicos de cada lquido los biotecnolgicos referentes a rendimientos de biomasa (Yx/s) del 20 al 90 %, masa seca (X) 4-10 %, y velocidades especficas de crecimiento () compatibles con procesos industriales, etc. totalizando ms de 10 analitos. Se trabaj en todos los casos con 30 C de temperatura, pH adaptado a 4,5, suplementacin con N y P para cada lquido, y con el inculo al 10% en volumen de la flora seleccionada (polimicrobiana autctona-cido tolerante o monomicrobiana con levaduras Bayanus). Se utilizaron Biorreactor Bioflo 2000, Shaker Rotabit, y Aireador Henil 2000, adems de las metodologas del AOAC para los parmetros qumicos de azcares reductores y totales, y se utiliz en ellos en la lectura de la DO en cada proceso, el Espectrofotmetro Shimadzu UV 1605. Se evaluaron y seleccionaron distintas performances para la mejor conversin en biomasa, como as tambin para el mejoramiento de las relaciones DQO y DBO del lquido remanente (alrededor de 1,8). Los resultados obtenidos permiten diferenciar las escasas performances transformadoras (Yx/s) del efluente llamado lquido de lavado, con respecto al promisorio rendimiento del lquido de descarga posterior a la extraccin de aceite de la 2da centrifugacin, llamada pulidora, ambos comparados con el licor de prensa y el jugo natural de naranja, de probadas eficiencias en los rendimientos productivos de biomasa, han presentado un rendimiento en biomasa acorde a un buen aprovechamiento industrial con la correspondiente disminucin significativa en DBO.
en placas de ASC y ACH, no hemolticas, que no crecen en CLDE. En das posteriores tomaron aspecto dimrfico. Son cocobacilos gram-negativos, catalasa (+ en tubo), oxidasa (+), inmvil, TSI: cido/cido gas (-), OF lactosa: no fermentador, ONPG (-), citrato de Simmons (-), produccin de indol (-), urea de Christensen (+++ rpida), nitrato a nitrito (+), esculina (-), ornitina (-), manosa (+), manitol (+), xilosa (-). Este microorganismo no crece en agar MH. Se realiza antibiograma presuntivo en agar MHS, dando sensibilidad a todos los betalactmicos, aminoglucsidos, macrlidos, trimetoprima-sulfametoxazol, fluorquinolonas y polimixinas; y resistencia a vancomicina. El tratamiento antibitico se prolong durante 5 das, evolucionando favorablemente. El paciente complet el esquema antibitico de ceftriaxona + ampicilina por 14 das. Se otorga el alta. Se presenta este caso clnico dada la baja frecuencia de infecciones humanas reportadas por A. ureae. Desde su primera descripcin hay 28 casos publicados, de los cuales 15 son meningitis. Este caso podra estar relacionado con abuso de alcohol y/o con una posible infeccin odontal debido al mal estado bucal. En la coloracin de Gram del LCR se observan cocobacilos gram-negativos pleomrficos que se confunden fcilmente con H. influenzae. Estos 2 microorganismos comparten varias caractersticas bioqumicas, ambos son comensales del tracto respiratorio superior. La identificacin de A. ureae es lenta y compleja debido a su lento crecimiento y a que puede ser confundido con un contaminante. Considerar su aparicin fundamentalmente en pacientes inmunocomprometidos, aunque este paciente aparentemente no presentaba factores que afecten su inmunidad.
P334 - 27100 DIARREAS BACTERIANAS: EVALUACIN DE LOS MTODOS TRADICIONALES DE DIAGNSTICO, UTILIZANDO HERRAMIENTAS MOLECULARES. PIANCIOLA, LUIS (1); MAZZEO, MELINA (1); NAVELLO, MARIANO (1); GONZALEZ, GLADYS (2); BULGHERONI, FERNANDA (2); SAUER, HERMAN (2)
(1) Laboratorio Central, (2) Hospital Heller Introduccin: las diarreas constituyen una de las principales causas de morbi-mortalidad, principalmente en nios de pases en desarrollo. Dentro de las diarreas bacterianas, las dos especies mas frecuentemente involucradas son Shigella spp y Campylobacter spp. El rol de Yersinia spp como causa de gastroenteritis es mucho menos conocido y en nuestro medio recin comienza a investigarse. El diagnstico etiolgico de las diarreas es de gran importancia epidemiolgica y, en determinados casos, tiene incidencia en la recuperacin de los pacientes. Los mtodos microbiolgicos de uso habitual no estn estandarizados y la gran diversidad de medios y metodologas existentes impide una evaluacin adecuada de su desempeo. Objetivo: evaluar el diagnstico etiolgico de diarreas bacterianas por mtodos microbiolgicos, utilizando herramientas moleculares de alta sensibilidad y especificidad. Materiales y mtodos: se procesaron 427 muestras de pacientes con diarrea, 179 de ellas se estudiaron para Shigella spp, 243 para Campylobacter spp y 303 para Yersinia spp. En todos los casos se estudi cada muestra por mtodos microbiolgicos habituales y por PCR. Mtodos microbiolgicos: todas las muestras fueron procesadas por mtodos microbiolgicos normatizados segn manual de pocedimientos del Laboratorio de Microbiologa del Hospital Heller. Mtodos moleculares: para Shigella spp se utiliz una PCR que amplifica una secuencia del gen ipaH (Theron, 2001). Para Campylobacter spp se utiliz una PCR que amplifica una secuencia del gen 16 S rRNA (Linton, 1996). Para Yersinia spp se utiliz una PCR que amplifica en formato mltiple secuencias de los genes yadA y 16S rRNA (Knutsson, 2003). La extraccin y purificacin de DNA de materia fecal se realiz segn la metodologa de Millar et al (2001). Resultados: Los mtodos moleculares detectan 41,0% ms de Shigella spp y 64,9% ms de Campylobacter spp. En el caso de Yersinia spp la sensibilidad de ambas metodologas es coincidente. Conclusiones: los mtodos moleculares, por su sensibilidad y especificidad, son herramientas excelentes para su aplicacin al diagnstico microbiolgico. En el caso particular del estudio de las diarreas, a las cualidades anteriores se suma la rapidez. Segn los resultados mostrados en este estudio, existe una

P333 - 27074 MENINGITIS POR Actinobacillus ureae EN UN PACIENTE INMUNOCOMPETENTE. PAIRETTI, NATALIA ANDREA; WILLINER, NORBERTO ALEJANDRO; DELPONTE, MARTA BEATRIZ
Laboratorio Mega Actinobacillus ureae (ex Pasteurella ureae) es un cocobacilo gram-negativo, fermentador lento, inmvil, aerobio, miembro de la familia Pasteurellaceae. La mayora de las especies del gnero Actinobacillus constituyen parte de la microbiota gastrointestinal y respiratoria de mamferos y aves. Slo A. actinomycetemcomitans, A. hominis y A. ureae son comensales en humanos. A. ureae es un patgeno oportunista en seres humanos, causando neumona, abscesos pulmonares, conjuntivitis, bacteriemia, endocarditis, meningitis, entre otras. Se presenta un aislamiento de A. ureae a partir de una muestra de lquido cefalorraqudeo de un paciente masculino inmunocompetente, de 50 aos de edad, sin antecedentes patolgicos, medicamentosos, ni enfermedad de base; etilista, fumador, boca en mal estado, trabajador rural. Consulta por cefalea, mialgias, poliartralgias, astenia y fiebre. Debido a la persistencia de los sntomas se interna por sndrome febril de origen desconocido. Se extraen hemocultivos y LCR. Se diagnostica meningitis bacteriana aguda. Inicio tratamiento antibitico: ceftriaxona intravenosa. En la coloracin de Gram del LCR se observan cocobacilos gram-negativos pleomrficos, lo que hace sospechar Haemophilus influenzae; entonces deciden agregar ampicilina al esquema antibitico. A las 24 hs de incubacin del LCR se obtuvo desarrollo de pequeas colonias grises viscosas
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alta proporcin de cultivos con resultado falso negativo, por lo que resulta imprescindible mejorar el diagnstico etiolgico de diarreas por mtodos microbiolgicos. Es recomendable realizar una evaluacin y readecuacin de las metodologas actuales, especialmente lo referido a los medios de cultivo selectivos y diferenciales que se utilizan. En el caso de Campylobacter spp, una mejora en la atmsfera de incubacin redundar seguramente en un incremento en la sensibilidad de la metodologa. Se demuestra una muy baja prevalencia de Yersinia spp como agente etiolgico de gastroenteritis en nuestro medio (menor a 0,3%). Si bien es necesario estudiar un mayor nmero de muestras dada la baja prevalencia, aparentemente los mtodos microbiolgicos tienen la misma sensibilidad que los moleculares para la deteccin de Yersinia spp en materia fecal.
P336 - 27157 EVOLUCIN EN 20 AOS EN EL ESTUDIO DE SECRECIONES BRONQUIALES EN PACIENTES CON FIBROSIS QUSTICA EN CENTRO DE ARGENTINA. BETTIOL, MARISA; ODERIZ, SEBASTIAN; VESCINA, CECILIA; GATTI, BLANCA MARIA Sala Microbiologa, Laboratorio Central. Hospital de Nios sup Sor Maria Ludovica, La Plata Introduccin: el estudio microbiolgico de las secreciones bronquiales de pacientes con fibrosis qustica es importante para instaurar terapias especficas y as disminuir la carga bacteriana y con ello preservar la funcin pulmonar el mayor tiempo posible. Objetivo: mostrar la evolucin en 20 aos en el Centro de Fibrosis Qustica del Hospital de Nios sup Sor Mara Ludovica de La Plata, Argentina. Materiales y mtodos: se realiz un anlisis de los aos 1987, 1998, 2001 y 2007, en cuanto a pacientes, muestras y patgenos bacterianos involucrados en esta enfermedad. Las muestras (esputos, hisopos tosidos, lavados broncoalveolares) fueron sembradas en agar chocolate, agar eosina azul de metileno, agar manitol salado y en distintos medios selectivos para aislamiento de complejo Burkholderia cepacia (CBC). Hasta el ao 2003 la bsqueda de CBC se realiz, los meses de enero y julio, en medio PC y OFCL. A partir del 2003 se siembra en forma sistemtica en el agar selectivo BCSA todas las muestras. El rango de edades de los pacientes fue de 15 dias a 25 aos. Resultados: se muestran en la tabla. Abreviaturas: Pa (Pseudomonas aeruginosa), Sa (Staphylococcus aureus),Hi (Haemophilus spp), CBC (complejo Burkholderia cepacia), MR (meticilino resistente)
Ao N paN cientes Muestras 24 46 122 156 230 69 156 512 561 680 N p con P 71 65 51 48 46 N P con Sa 21 52 81 79 82 N P con Sa MR 4,2 11 42 44 40 N P con N P Hi con CBC 26 22 27 25 18 0 0 0 0,2 10
P335 - 27126 PRESENCIA DE Staphylococccus METICILINO RESISTENTES EN CERDOS CRIADOS EN FORMA INTENSIVA. GIACOBONI, GABRIELA (1); VIGO, GERMAN (1); MOLDES, SILVINA (1); CAPPUCCIO, JAVIER (1); PERFUMO, CARLOS (1); RAMIREZ, SOLEDAD (2); CENTRON, DANIELA (2)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Pata, (2) Facultad de Medicina, UBA El gnero Staphylococcus spp. comprende microorganismos que habitan la piel y mucosas tanto en animales como en el hombre. La especie S. aureus resistente a la meticilina (SAMR) es considerada un patgeno intranosocomial y de la comunidad. Actualmente existen 51 taxones diferentes dentro del gnero Staphylococcus. Muchos de ellos se encuentran ampliamente distribudos n animales y en el medio ambiente. Algunas de estas especies son portadoras de secuencias con cierto porcentaje de identidad con el gen mecA presente en SAMR. Desde el ao 1975 han sido informados aislamientos de SAMR en animales. Los caninos, bovinos, equinos y porcinos, son las especies en donde mas frecuentemente han sido aislados. En Salud Pblica este aspecto cobr mayor importancia cuando se conoci la presencia de SAMR en la cavidad nasal de los cerdos y se lo asoci con la posible transmisin a los hombres que trabajan en contacto con ellos. En nuestro pas no hay registros de Staphylococcus resistentes a la meticilina (SRM) en cerdos. La utilizacin de cefalosporinas de tercera generacin para el tratamiento de ciertas afecciones de los cerdos como la epidermitis exudativa y la tetraciclina para infecciones respiratorias ejerce una presin selectiva y explicara el surgimiento de aislamientos de SRM. El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de especies del gnero Staphylococcus que presenten resistencia a la meticilina en cerdos de crianza intensiva. Se tomaron 110 hisopados nasales de cerdos de cra intensiva (maternidad, cra y terminacin) de 4 granjas de la Pcia de Buenos Aires y Santa Fe. Las muestras fueron sembradas en medios de enriquecimiento y selectivos. La identificacin de especie fue determinada por pruebas bioqumicas y fisiolgicas. La caracterizacin fenotpica de resistencia a la meticilina fue determinada segn las normas del CLSI. Se la correlacion con mtodos moleculares para la presencia del gen mecA y el de la leucocidina de Panton-Valentin (PVL). Todos los animales estuvieron colonizados por Staphylococcus spp. Se aislaron 3 cepas coagulasa negativas resistentes a la meticilina de diferentes granjas. Dos se identificaron como S. sciuri (provenientes de maternidad y cra) y uno S. simulans (cra). La resistencia fenotpica se correlacion con la presencia del gen mecA. Ninguna cepa mostr la presencia del gen que codifica para PVL. En la cra intensiva de cerdos, existe un estrecho contacto entre el hombre y los animales. Los aislamientos registrados en este trabajo pertenecen a animales de pocos das de edad expuestos ms an al cuidado de personal capacitado para su cuidado y control. Es posible que los estafilococos coagulasa negativos de la flora normal de los cerdos sean posibles reservorios para la transmisin del gen mecA a cepas de S. aureus meticilino sensibles. Otra posibilidad es que las cepas de SAMR hayan sido adquiridas por los cerdos desde otras fuentes y el cerdo haya sido un reservorio adecuado para que se establezcan estas bacterias. La presencia de SRM en cerdos en un riesgo para la Salud Pblica y requiere de vigilancia para el control de su diseminacin.
1987 1993 1998 2003 2007
1- Se observa un aumento importante en el nmero de pacientes, proporcionalmente al nmero de muestras estudiadas. 2- Disminucin en el porcentaje de colonizacin con Pa a lo largo de los aos estudiados. 3- Aumento en la colonizacin con Sa y Sa MR. 4- Aparicin del complejo (CBC) apartir del ao 2001 (datos no mostrados).
P337 - 27178 MEDIASTINITIS MIXTA POST-CIRUGA CARDIOVASCULAR POR Haemophilus influenzae NO TIPIFICABLE Y Streptococcus pyogenes. AMALFA, FLAVIA; HERNANDEZ, CLAUDIA; RUVINSKY, SILVINA; LITTERIO, MIRTA; LENZ, ANA; KRINSKY, MARIELA; PINHEIRO, JOSE LUIS; LOPARDO, HORACIO
Hospital Garrahan Introduccin: la mediastinitis ocurre frecuentemente como complicacin severa de la ciruga cardiovascular y su etiologa principalmente es de origen intrahospitalario. Tambin puede ocurrir luego de manipulacin esofgica, heridas de armas blancas o de armas de fuego. En este trabajo se describe un caso de mediastinitis ocurrido luego de una ciruga cardiovascular producida por microorganismos de la orofaringe, asociados pocas veces a mediastinitis descendente, pero en ningn caso a la post-quirrgica. Caso clnico: el paciente era un nio con hipoplasia de ventrculo izquierdo que a los 5 das de vida haba sido sometido a una ciruga de Norwood, sin complicaciones. A los 4 meses se reoper (ciruga de Glenn) y recibi vancomicina profilctica. Presentaba todas las vacunas recomendadas para su edad. Se le implantaron catteres centrales arterial y venoso y estuvo en asistencia respiratoria mecnica durante 24 horas. Tena un acceso vascular femoral, otro arterial radial, dos vas perifricas, drenaje mediastinal y cables de marcapasos temporarios. A los 5 das de internacin se observ una efusin pleural bilateral. Al sptimo da estaba febril y al da siguiente se tomaron cultivos del catter central y hemocultivo perifrico, los cuales resultaron negativos. Un da despus, por persistir la fiebre y notarse dolor y enrojeci-
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miento de la herida se tomaron 2 hemocultivos que fueron negativos. Se cultiv el material de la herida obtenido por puncin, el que result positivo para Streptococcus pyogenes y Haemophilus influenzae no tipificable y sensible a la ampicilina. Recibi 4 das de tratamiento antibitico emprico inicial (meropenem + vancomicina), el que se rot a ampicilina i.v. A los 13 das se extern con ceftriaxona i.m., con lo que complet 4 semanas de tratamiento, con evolucin satisfactoria. Materiales y mtodos: el cultivo se realiz en agar sangre ovina, CLDE y caldo tioglicolato en aerobiosis, agar chocolate en 5% de CO2, agar sangre lacada con vitamina K y caldo anaerbico en anaerobiosis. La identificacin de los microorganismos se realiz segn mtodos manuales convencionales. La serotipificacin del aislamiento de H. influenzae fue realizada por el Servicio de Bacteriologa Clnica del INEI-ANLIS Dr Carlos G. Malbrn. Se destaca (1) la presencia inusual de H. influenzae y S. pyogenes en una infeccin mediastinal postciruga cardiovascular, teniendo en cuenta que ambos han estado implicados slo en mediastinitis descendentes y (2) la recuperacin inicial de S. pyogenes, slo en medios incubados en atmsfera anaerbica, lo que refuerza la importancia de esta metodologa de trabajo.
cin es habitualmente demorada y en ocasiones no se realiza. Es importante que se tenga en cuenta la posibilidad de aislar EVN ante la sospecha clnica de EI y sin desarrollo en medios slidos habituales.
P339 - 27202 EMERGENCIA Y DISEMINACIN EN MULTIPLES HOSPITALES DE ARGENTINA DEL CLON PANDMICO ST258 DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTOR DE KPC: CAMINO A LA ENDEMICIDAD? PASTERAN, FERNANDO (1); LUCERO, CELESTE (1); RAPOPORT, MELINA (1); ALBORNOZ, EZEQUIEL (1); GOMEZ, SONIA (1); FACCONE, DIEGO (1); PETRONI, ALEJANDRO (1); GRUPO KPC (2); CORSO, ALEJANDRA (1)
(1) Servicio Antimicrobianos, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn; (2) Grupo KPC Las infecciones por Enterobacterias (ENT) productoras de KPC se han convertido en un desafo para el sistema sanitario debido a su resistencia extrema y altas tasas de morbi-mortalidad. Ms an, Klebsiella pneumoniae (Kpn) KPC+ ha adquirido proporciones pandmicas debido a la diseminacin internacional del clon ST258. Desde la primera deteccin de KPC en Argentina en 2006, se implement un sistema de vigilancia prospectivo, disponible para los laboratorios de microbiologa del pas. Objetivo: caracterizar la diseminacin de ENT KPC+ en Argentina. Mtodos: desde 2007 a mayo 2010, todas las ENT con zona de inhibicin de imipenem (IMP) <22 mm y con sinergia entre IMP y cido bornico, fueron derivadas al INEI para su caracterizacin molecular mediante PCR para blaKPC, electroforesis en campo pulsado (PFGE, con XbaI) y por secuenciacin de mltiples locus (MLST). Se confirm la sensibilidad (S) por difusin para mltiples drogas (CLSI) y por agar dilucin para tigeciclina (TIG) y fosfomicina (FOS) (EUCAST). Resultados: se confirm blaKPC en un total de 72 cepas, recuperadas de 19 hospitales del AMBA (66 cepas), 1 hospital de Mendoza (4 cepas) y 1 de Neuqun (2 cepas). Kpn result el principal patgeno (89% de los casos), aunque tambin se detect KPC en Enterobacter cloacae (Ecl) (n=4), Citrobacter freundii (Cfr) (2), Escherichia coli (1) y Serratia marcescens (1). Por PFGE se detectaron 2 clones en Cfr, 3 en Ecl y 4 en Kpn. Alarmantemente, se detect un clon mayoritario de Kpn, representando el 88% de los aislados de esta especie y presente en 16 hospitales del AMBA, que correspondi al tipo clonal ST258 por MLST. Los % de S de Kpn fueron: 0% trimetoprima-sulfametoxazol y cloranfenicol; 3% ciprofloxacina, amicacina y gentamicina; 47% minociclina; 86% FOS (aplicando punto de corte para uso endovenoso) y 98% TIG. Un 10% de las Kpn presentaron ausencia de zona de inhibicin con el disco de colistina (COL). El perfil de S de clon epidmico ST258 result indistinguible fenotpicamente de los restantes clones de Kpn como as tambin del resto de las ENT KPC+
2007 2008 2009 2010 Total (2007-2010) 72 89% 88%
P338 - 27187 ENDOCARDITIS INFECCIOSA POR Granulicatella adiacens. STEPANIK, DEBORAH; ISASMENDI, ADELA; EDAT, LILIANA; TERUSI, LAURA
Sanatorio Trinidad Palermo Los estreptococos variante nutricional (EVN) fueron descriptos por primera vez en el ao 1961 como un nuevo tipo de estreptococos que requieren de medios enriquecidos con cistena o clorhidrato de piridoxal para su desarrollo y exhiben satelitismo (sat) alrededor de una estra de estafilococo. En 1989 se dividieron en dos grupos Streptococcus defectivus y Streptococcus adiacens. Por estudios filogenticos en el ao 1995 se crea un nuevo gnero llamado Abiotrophia y las dos especies fueron transferidas como Abiotrophia defectiva y Abiotrophia adiacens. Desde entonces tres nuevas especies han sido agregadas, Abiotrophia elegans, Abiotrophia balaenoptoreae y Abiotrophia para-adiacens. Recientemente Collins y Lawson reclasificaron las especies en un gnero nuevo llamado Granulicatella quedando G. adiacens, G. elegans, G. balaenoptoreae, A. defectiva y A. para-adiacens. Las especies de Granulicatella y Abiotrophia forman parte de la flora normal de la cavidad oral, del tracto urogenital e intestinal humano. Aproximadamente el 5% de las endocarditis infecciosas (EI) son causadas por EVN. Este es un reporte de un caso de endocarditis infecciosa causada por G. adiacens. Paciente de 61 aos, oriundo de Paraguay, sexo masculino con valvulopata mitral diagnosticada hace 2 aos. Present sndrome febril prolongado luego de un tratamiento odontolgico, evidencindose vegetacin valvular mitral en ecocardiograma transesofgico. Se tomaron 5 muestras de hemocultivos en 2 series que se procesaron con BacT/Alert (bioMerieux). La coloracin de Gram mostr cocos gram-positivos en cadenas y pleomrficos compatibles con estreptococo, no observndose desarrollo en los medios slidos (agar sangre y agar chocolate) a las 24 hs. Ante la sospecha clnica de endocarditis,se realizaron las siembras en agar sangre con estra de Staphylococcus aureus, obtenindose a las 24 hs. desarrollo de pequeas colonias alfa-hemolticas adyacentes a la estra (satelitismo). La cepa fue tipificada de acuerdo al esquema de Facklam y col. Los resultados obtenidos fueron: morfologa en caldo tioglicolato cocos gram-positivos en cadenas y pleomrficos, PYR positivo, LAP positivo, 6,5% NaCl negativo, BE negativa, sat positivo, ADH negativa, glucuronidasa positiva, galactosidasa negativa, sacarosa positiva, trehalosa negativa, rafinosa negativa, lactosa negativa. Tambin fue identificada por Vitek2 (bioMerieux) como Granulicatella adiacens (GP tarjeta). Se determin la CIM a penicilina: 0,12 g/ml por el mtodo de E-test, suplementando el agar Meller Hinton con 5% de sangre de carnero y llegando a una concentracin final de 0,001% de clorhidrato de piridoxal. El paciente fue tratado con ampicilina y gentamicina durante 6 semanas. Finalizado el tratamiento se tomaron hemocultivos de control Bact/Alert que resultaron negativos. Si bien EVN no son agentes inusuales de EI, su identifica-
N de aislamientos KPC+ % de Kpn % de ST258 en Kpn
0 0 0
6 33% 50%
12 83% 70%
54 96% 96%
Se describe por primera vez en la Argentina la emergencia del clon pandmico ST258, constituyendo el primer reporte de su hallazgo en Amrica Latina. La diseminacin de esta cepa pandmica de Kpn ST258 en 16 hospitales en el AMBA se constituye como el principal mecanismo de la movilizacin intra- e internosocomial de KPC en Argentina. El clon ST258 mostr resistencia extrema, siendo TIG la droga con mayor activad in vitro, seguida de FOS y COL. La dinmica creciente de la diseminacin de Kpn ST258 en Argentina presupone que cualquier institucin del pas estar expuesta a esta cepa hiper-epidmica.
P340 27230 SITUACIN DEL BOTULISMO DE LACTANTE EN ARGENTINA (1992-2009). FARACE, MARIA ISABEL (1); CASTELLI, EDGARDO (1); FERNANDEZ, RAFAEL (2); DE JONG, LAURA (2); BIANCO, ISABEL (2); BIANCO, ISABEL (2)
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(1) Instituto Nacional, (2) Area Microbiologa Esta enfermedad fue reconocida por primera vez en el pas en 1982. Se produce por ingesta de esporas de Clostridium botulinum que coloniza y produce su neurotoxina (NTBo) en el intestino. El perodo de incubacin se estima en 3 a 30 das. El espectro clnico vara de una forma leve a la muerte sbita, con hospitalizacin promedio de un mes. El reservorio de las esporas es el suelo y pueden ser ingeridas desde utensilios con polvillo ambiental, miel o t de hierbas. La constipacin acta como factor predisponente. Mundialmente se reportan casos por tipos A, B, E y F. En Argentina, todos los casos en lactante, fueron por tipo A, excepto uno en 2006 por tipo B. Se presenta con letargo, dificultad en la succin y deglucin, llanto dbil y debilidad muscular generalizada. Alrededor del 50% sufre falla respiratoria. Afecta a nios de una semana a 11 meses, con mayor incidencia entre los 2 y 4 meses. El objetivo del presente trabajo es describir las caractersticas y distribucin de la enfermedad en el pas. El diagnstico de laboratorio se realiza identificando por bioensayo en ratn la neurotoxina (NTBo) y el serotipo (con antitoxinas especficas) en suero, contenido intestinal (enema) y heces, y por cultivo en caldo Tarozzi. Durante el perodo en estudio se diagnosticaron 575 casos, distribuidos en todo el pas, excepto Formosa, Chaco y Santa Cruz. Con 12 casos en 1992 y un incremento progresivo, un pico de 44 casos en 2005, seguramente debido a mejor vigilancia y sospecha de casos, disminuyendo a 37 casos en 2009, posiblemente por derivacin de la prioridad a la pandemia de gripe A-H1N1. El mayor nmero de casos se concentr en las provincias de Buenos Aires 112 y Mendoza 124 donde se encuentran los nicos dos laboratorios que pueden confirmar el diagnstico en el pas. De Buenos Aires, 84 correspondieron a Baha Blanca que cuenta con dos hospitales peditricos con amplia experiencia en el diagnstico clnico, sumado a un clima seco y ventoso que favorece la dispersin de esporas en el ambiente y la aparicin de la enfermedad. Esta caracterstica climtica se repite en dos provincias con una importante casustica, Neuqun y Ro Negro. La baja incidencia en algunas provincias puede deberse a: diagnstico sospechoso no considerado en nios con hipotona, falta de vigilancia de las parlisis flccidas o difcil acceso a los laboratorios diagnsticos. Para mejorar la identificacin de los casos y conocer la incidencia real en el pas, es fundamental: una mayor informacin en los centros de salud y facilitar el acceso al diagnstico de laboratorio.
loga celular, las pruebas de PYR (+) y satelitismo (+) fueron determinantes para la orientacin inicial. Conclusiones: al menos de acuerdo a nuestro conocimiento, ste es el primer caso de artritis sptica primaria, en un nio, producido por A. defectiva. En adultos slo se notificaron cinco casos, dos de ellos clasificados como artritis post protsicas. Destacamos (1) el hallazgo de este microorganismo, infrecuente como agente de artritis sptica en general y (2) su recuperacin inicial slo en condiciones de anaerobiosis.
P342 - 27238 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL BIOSURFACTANTE PRODUCIDO POR Bacillus atrophaeus O9. OLIVERA, NELDA; VALLEJO, MARISOL (1); MARGUET, ROGELIO (1); SEQUEIROS, CYNTHIA (2)
(1) UNPSJB-Sede Trelew, (2) CENPAT-CONICET Los biosurfactantes constituyen un grupo estructuralmente diverso de molculas tensoactivas. En los ltimos aos ha crecido el inters por evaluar la utilidad de los biosurfactantes en las disciplinas mdicas y veterinarias por sus propiedades antibacterianas, antimicticas, antivirales e incluso antitumorales. Algunos biosurfactantes tambin han mostrado contrarrestar la adhesin y la formacin de biofilms de microorganismos patgenos. El control de las enfermedades es uno de los mayores problemas en acuicultura, que genera altos costos en antibiticos, vacunas y procesos operativos. El objetivo del estudio fue analizar el potencial antimicrobiano del biosurfactante producido por la cepa marina Bacillus atrophaeus O9 contra bacterias patgenas de peces frecuentes en piscicultura. La cepa fue cultivada con sacarosa como fuente de carbono y el biosurfactante recuperado en forma de extracto crudo mediante precipitacin en medio cido del sobrenadante de los cultivos. La concentracin de biosurfactante fue determinada midiendo la tensin superficial de diferentes diluciones del extracto con un tensimetro de anillo. La Concentracin Micelar Crtica (CMC) fue calculada del grfico tensin superficial vs. concentracin. La actividad antimicrobiana del biosurfactante se determin por el mtodo de difusin en placa midiendo el dimetro del halo de inhibicin del crecimiento de los microorganismos patgenos antes y despus de esterilizar (121 C 15 min) el extracto con el biosurfactante. Tambin se estudi el efecto de distintas concentraciones del biosurfactante sobre el crecimiento y la adhesin del patgeno Lactococcus garvieae. En el ensayo de adhesin se cultiv L. garvieae en tubos de vidrio donde la bacteria crece formando un biofilm adherido a las paredes del tubo en la interfase aire-agua; dicho biofilm fue tratado con concentraciones de biosurfactante entre 0,5 y 10 CMC. Las clulas que permanecieron adheridas fueron teidas con cristal violeta, luego el colorante fue solubilizado y la absorbancia medida a 595 nm. El biosurfactante inhibi el crecimiento de los patgenos L. garvieae, Carnobacterium piscicola, Lactococcus piscium y Streptococcus iniae. Por el contrario, no mostr actividad contra Vibrio anguillarum, Yersinia ruckerii y Aeromonas salmonicida. El biosurfactante mantuvo su efecto inhibitorio sobre el crecimiento de L. garvieae hasta una concentracin de aproximadamente 2 CMC. Se obtuvo el mismo resultado utilizando biosurfactante esterilizado lo que demuestra la elevada termoestabilidad del mismo. Por el contrario, el biosurfactante en ninguna de las concentraciones ensayadas favoreci la remocin de las clulas de L. garvieae adheridas a una superficie de vidrio. En general los biosurfactantes producidos por bacterias del gnero Bacillus son del tipo lipopeptdico variando de acuerdo a la cepa y las condiciones de cultivo. Los resultados obtenidos indican que el biosurfactante producido por B. atrophaeus O9 fue activo contra patgenos de peces gram positivo por lo que podra ser una herramienta promisoria en su tratamiento.
P341 - 27237 Abiotrophia defectiva: ARTRITIS SPTICA EN UN PACIENTE PEDITRICO. LITTERIO, MIRTA; DIRIALDI, NOELIA; LOPARDO, HORACIO
Hospital J. P. Garrahan Introduccin: Abiotrophia y Granulicatella inicialmente conocidas como variantes nutricionales de estreptococos, forman parte de la microbiota normal oral e intestinal del hombre. Estn ms asociadas a infecciones intravasculares y endocarditis y por eso se recuperan ms frecuentemente de hemocultivos. Su aislamiento a partir de otras muestras clnicas es poco comn debido a sus requerimientos nutricionales. En el presente trabajo informamos un caso de artritis sptica por Abiotrophia defectiva en un paciente peditrico previamente sano. Caso clnico: paciente de 5 aos de edad que ingres a la guardia del hospital con signos clnicos de artritis de rodilla secundaria a traumatismo. Se tomaron muestras de sangre y lquido articular para cultivo. Los hemocultivos fueron negativos. A. defectiva se recuper como nico microorganismo a partir de la siembra primaria del lquido articular luego de su incubacin en anaerobiosis. No desarroll en los medios incubados en otro tipo de atmsfera. El paciente fue tratado empricamente con cefalexina y posteriormente se rot a clindamicina. Su evolucin fue favorable. Materiales y mtodos: siguiendo las pautas establecidas en nuestro laboratorio para el procesamiento de materiales tomados por puncin aspiracin o biopsia, la muestra fue sembrada en agar sangre y caldo tioglicolato (incubados al aire), agar chocolate (en 5% CO2) y agar sangre lacada y caldo, suplementados (en anaerobiosis). La identificacin se llev a cabo mediante pruebas convencionales y mtodos comerciales. La morfo-
P343 - 27261 MENINGITIS POSTQUIRRGICA POR Pseudomonas stutzeri EN PACIENTE PEDITRICO. GONZALEZ, LILIANA; GRASSO, A; SANCHEZ, L; VIGNOLO, V; CORRES, M
Hospital Infantil Municipal de la Ciudad de Crdoba Introduccin: Pseudomonas stutzeri es un bacilo gram-negativo no fermentador, aerobio estricto, sin exigencias nutricionales,
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lo que le permite sobrevivir y multiplicarse sobre superficies hmedas. Es ubicuo y se encuentra tanto en la tierra y agua como en el medio hospitalario. Es un patgeno oportunista que raramente se asla de hemocultivos, lquido cefalorraqudeo (LCR), orina, lquido sinovial, esputo y heridas quirrgicas. La mayora de las infecciones son consideradas nosocomiales. El objetivo de este trabajo es presentar un caso clnico de meningitis postquirrgica debido a P. stutzeri. Caso Clnico: paciente previamente sano de diez aos de edad consulta al hospital por presentar cefaleas, desviacin del ojo izquierdo, vmitos post-alimenticios, torpeza al caminar y cambios en la conducta de dos meses de evolucin. Se realiza tomografa axial computada y se diagnstica tumor de fosa posterior. Se programa ciruga para excresis tumoral. Al tercer da de la ciruga presenta picos febriles y mal estado general, por lo cual se decide realizar hemocultivo, urocultivo y cultivo de LCR. Tanto los hemocultivos como urocultivos fueron negativos. La puncin lumbar arroj los siguientes resultados: 3200 leucocitos/mm3 (90% neutrfilos, 10% linfocitos), 4320 hemates/ mm3, glucorraquia 0,04 g/l, protenas totales 2,52 g/l. En la tincin de Gram se observaron bacilos gram-negativos. En el cultivo desarrollaron colonias de aspecto seco y verrugoso, con fuerte adherencia al agar y de color tostado. El cultivo se identific como P. stutzeri a travs de mtodos convencionales y con API 20NE (Biomerieux, Marcy LEtoile, France). El aislamiento se confirm por el Servicio de Bacteriologa Especial, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Se indic como antibioticoterapia meropenem debido al alto riesgo del paciente. El mismo respondi favorablemente al tratamiento, siendo los controles posteriores de LCR negativos. Existen en la literatura pocos casos documentados de infecciones por P. stutzeri, siendo la mayora de estas en adultos. Actan como factores de riesgo haber tenido una ciruga previa, ser inmunocomprometido, como as tambin haber sufrido un traumatismo. Por otra parte, la meningitis postquirrgica es una complicacin infrecuente que se acompaa de un incremento de la estancia hospitalaria y de una elevada morbimortalidad. P. stutzeri es un microorganismo que debe tenerse presente en este tipo de pacientes, siendo las cefalosporinas de tercera generacin y los carbapenemes de eleccin para su tratamiento.
VAN (1gr IV post dilisis). Luego de 15 das el paciente contina febril, se agrega rifampicina (RFA) (600 mg/da VO). Se asla nuevamente MRSA, RFA resistente (R), CIM VAN 2g/ml (h-VISA) y CIM DAP 0,25 g/ml (CAMRSA 2). Se suspenden VAN y RIF e inicia tratamiento con DAP (6 mg/kg post dilisis). Se asla de HC MRSA, RIF R, CIM VAN 4 g/ml (VISA) y CIM DAP 2 g/ml (NSDAP) (CAMRSA 3). Se suspende DAP e inicia linezolid (600 mg 2 veces por da IV). Tomografa axial computada revela probable foco de bacteriemia en cadera, se retira prtesis. El paciente se externa afebril, HC negativo. Tres meses despus reingresa con fiebre. Se asla de HC MRSA, RIF R, ciprofloxacina I, CIM VAN 1 g/ml y CIM DAP 0,25 g/ml (CAMRSA 4). Se realiza centellograma que muestra hipercaptacin en fstula arteriovenosa (FAV). Inicia tratamiento con linezolid (igual dosis) y TMP/SMX (800/160 mg/da IV), se retira prtesis de FAV. Se externa afebril, HC negativo. Las cepas CAMRSA 2, 3 y 4 posean SCCmec tipo IV, PVL+ y presentaron idntico perfil clonal. De acuerdo al perfil Smal-PFGE fueron indistinguibles del clon epidmico de CAMRSA dominante en la Argentina: ST5-SCCmec tipoIV, PVL+. Se decribe el primer caso en Argentina de CAMRSA VISA y NS-DAP. Durante el tratamiento con VAN y DAP se observ un aumento gradual de la CIM a VAN (h-VISA a VISA) y la emergencia de NSDAP. Al suspender VAN y DAP, la cepa revirti al fenotipo de sensibilidad a estas drogas. Es fundamental evaluar por CIM la sensibilidad a VAN y DAP durante el tratamiento de pacientes donde estas drogas van a ser usadas como terapia.
P345 - 27273 DISPERSIN DE UN CLON CON COMPORTAMIENTO EPIDMICO DE Serratia marcescens EN HOSPITALES DE BUENOS AIRES. MERKIER, ANDREA KARINA (1); RODRIGUEZ, CECILIA (1); TOGNERI, ANA (2); OSUNA, CAROLINA (2); SELLART, GRISELDA (2); SZTOKHAMER, DANIEL (2); MAYO, JORGELINA (2); CENTRON, DANIELA (1)
(1) Facultad de Medicina UBA, (2) Hospital Evita Introduccin: Serratia marcescens (Sm) es un bacilo gramnegativo de la familia Enterobacteriaceae capaz de colonizar el tracto gastrointestinal y la piel del hombre y sobrevivir en el ambiente y en reservorios como agua potable, caeras, desinfectantes hospitalarios, entre otros. En los ltimos aos se ha convertido en un microorganismo de gran relevancia clnica, responsable de brotes nosocomiales, provocando una gran diversidad de infecciones tales como neumona, infeccin de vas urinarias y sepsis, siendo cada vez ms frecuente el aislamiento de cepas multirresistentes. Los objetivos del presente trabajo fueron: 1. Estudiar la clonalidad de 11 aislamientos del hospital H1 provenientes de brotes acontecidos entre los aos 2007-2008 y compararlos con aislamientos provenientes de otros hospitales (n= 6: H2, H3 y H4). 2. Evaluar la presencia de integrones de clase 1 y -lactamasas asociadas a la transferencia horizontal de genes en los aislamientos de H1. Materiales y Mtodos: los aislamientos fueron identificados por las pruebas bioqumicas convencionales. Las pruebas de sensibilidad fueron realizadas por el mtodo de difusin en agar segn las recomendaciones del CLSI. Los mtodos de screening que se utilizaron para la deteccin de BLEEs y carbapenemasas fueron acorde a los lineamientos establecidos tanto en las normas del CLSI como en las recomendaciones del comit de expertos de la Subcomisin de Antimicrobianos (SADEBAC-AAM, 2005). Se analiz la clonalidad de 17 aislamientos de origen hospitalario pertenecientes a 4 centros de nuestro pas por la tcnica de REP-PCR. La deteccin de genes codificantes para -lactamasas, as como la caracterizacin de los integrones de clase 1 fueron realizadas por la tcnica de PCR y posterior secuenciacin de los productos obtenidos. Resultados: el anlisis de los perfiles obtenidos por REP-PCR revel la existencia de 4 patrones clonales diferentes a los cuales denominamos de manera arbitraria I, II, III, y IV distribuidos entre los 17 aislamientos, de los cuales 12 se correspondieron con el clon I presentes en 3 de los 4 hospitales estudiados. El clon I estuvo presente en 10 de los 11 aislamientos de H1, de los cuales 9 se relacionaron a brotes ocurridos durante los aos 2007-2008. Dichos aislamientos fueron positivos para el gen blaCTX-M2 el cual fue encontrado formando parte de un integrn complejo ubicado co-
P344 - 27266 PRIMER AISLAMIENTO EN ARGENTINA DE Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTE DE LA COMUNIDAD (CAMRSA) CON SENSIBILIDAD INTERMEDIA A VANCOMICINA (VISA) Y NO SENSIBILIDAD A DAPTOMICINA (NS-DAP). ERRECALDE, LAURA (1); CERIANA, PAOLA (3); GAGETTI, PAULA (3); ERBIN, MARIANA (1); CORSO, ALEJANDRA (3); DUARTE, ANDREA (2); ROLON, MARIA JOSE (2); CUATZ, DANIEL (2); KAUFMAN, SARA (1)
(1) Seccin Microbiologa y (2) Divisin Infectologa- Hospital General de Agudos J. Fernndez. (3) Servicio Antimicrobianos. INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Staphylococcus aureus es agente frecuente de infeccin hospitalaria y de la comunidad. Vancomicina (VAN) se utiliza como tratamiento emprico en infecciones por MRSA. Recientemente emergieron cepas VISA (CIM 4-8 ug/ml), hetero-VISA (h-VISA) sensibles por CIM (CIM = 2 g/ml) pero con subpoblaciones VISA y NS-DAP (CIM =2 g/ml). Estos mecanismos se asociaron a falla de tratamiento. Objetivos: describir el caso clnico y las caractersticas moleculares de la primera cepa de CAMRSA de Argentina que evoluciona a h-VISA, VISA y NS-DAP intratratamiento con VAN y DAP. Materiales y mtodos: la sensibilidad de 4 MRSA obtenidos de hemocultivos (HC) del mismo paciente se evalu, segn CLSI 2010, por: sistema automatizado Phoenix, CIM a VAN por dilucin en agar y CIM a DAP por E-test. El h-VISA se confirm por Macro-Etest y GRD VAN/TEI+S. La deteccin de pantonvalentine leukocidin factor (PVL) se realiz por PCR y la caracterizacin del SCCmec por PCR multiplex. Se estableci relacin clonal por Smal-PFGE. Caso clnico: paciente 22 aos masculino con antecedente de insuficiencia renal crnica en hemodilisis y osteosntesis de cadera debido a fractura. Consulta por sndrome febril persistente luego de desplazamiento de prtesis por un traumatismo. Se asla de HC MRSA con fenotipo de la comunidad y CIM a VAN =1g/ml (CAMRSA 1). Inicia tratamiento con
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rriente arriba del gen ISCR1 asociado a los cassette de resistencia aac(6)-Ib el cual confiere resistencia a amikacina y el cassette de resistencia aadA1, que otorga resistencia a estrepto-micina, ubicados en la RV-1. Adems un aislamiento present el gen blaPER-2 y 4 fueron positivos para el gen qnrB. Nuestros resultados evidencian la presencia de un clon con comportamiento epidmico presente en 3 de los 4 hospitales analizados y la presencia del gen blaCTX-M2 en los aislamientos de Sm pertenecientes a los brotes producidos durante el perodo 2007-2008 en H1.
del fabricante (EtestAB bioMerieux). Se evalu el mecanismo de resistencia a macrlidos a travs del mtodo del doble disco (eritromicina 15 g y clindamicina 2 g) Se analizaron los distintos fenotipos: fenotipo M (Eflujo), fenotipo MLSb constitutivo (MLSc) modificacin del sitio blanco por metilacin y el fenotipo MLSb inducible (MLSi). Resultados: se comprob una resistencia total Rt a E del 14% (66/458) cuadro N1; los mecanismos de resistencia observados se muestran en cuadro N2. Cepas E resistentes: 2/ 66 R a levofloxacina, 10/66 R a TMS, 0% R a penicilinas.
CUADRO N 1 2007 2008 2009 CUADRO N 2 N Mt 3079 2849 3027 M 34 Spn t 192 124 142 MLSc 31 Rt 38 (20%) 16 (13%) 12 (8%) MLSi 2
P346 - 27314 Aeromonas hydrophila: INFECCIN ASOCIADA A CATTER. MARTINEZ, MARIA VALERIA; BARRIOS, CRISTIAN; SPOLETI, MARIA JULIA; BOGADO, ISABEL; SUTICH, EMA
Universidad Nacional de Rosario La Aeromonas hydrophila es un bacilo gram-negativo flagelado, anaerobio facultativo, miembro de la familia Vibrionaceae. Su hbitat natural es el suelo y el agua (agua de bebida, piletas, lagos, ros). Crece entre 5-45 C y es resistente a bajas temperaturas. El cuadro clnico mas frecuente que produce es la gastroenteritis aguda y ocasionalmente puede producir infecciones extraintestinales como bacteriemia, meningitis, endocarditis, neumona e infecciones de piel y partes blandas. En este trabajo se presenta el caso clnico de un paciente varn de 63 aos, diabtico, hipertenso y con insuficiencia renal internado en la unidad de terapia intensiva (UTI) del Hospital Provincial del Centenario (HPC) del cual se ingresan 2 muestras de hemocultivos, 2 de retrocultivos arteriales y 2 de retrocultivos venosos al servicio de bacteriologa por presentarse el paciente con fiebre y escalofros durante sesiones de hemodilisis. Las muestras se cultivaron en el sistema automatizado para hemocultivos Bact-Alert (bioMerieux), generando todas una seal de positividad a pocas horas de su incubacin. Los retrocultivos se positivizaron 3 horas antes que los hemocultivos. En el examen directo se observaron bacilos gram-negativos por lo cual se realizaron subcultivos de las muestras en agar sangre (AS), agar chocolate y CLDE. En los mismos se obtuvo desarrollo de colonias de bacilos gram-negativos, con -hemlisis en AS, oxidasa positiva y prueba de oxidacin/fermentacin de glucosa positiva para ambos por lo cual se pens en un miembro de la familia Vibrionaceae. En base a las pruebas bioqumicas estandarizadas para diferenciacin en gnero y especie dentro de esta familia, el germen se identific como Aeromonas hydrophila y el personal mdico interpret el caso como infeccin asociada a catter de hemodilisis. Para confirmar el origen de la infeccin, hubiera sido adecuado haber remitido al servicio de bacteriologa muestras de agua del equipo de hemodilisis. Se puede concluir que se debe considerar a Aeromonas hydrophila como agente etiolgico en infecciones asociadas a catter en pacientes hemodializados.
Conclusiones: Si bien la eritromicina no es el antimicrobiano de eleccin para el tratamiento de infecciones causadas por Sp, la resistencia a eritromicina en nuestros aislamientos, coincide con la bibliografa consultada, verificando un descenso de la misma en el ao 2008 respecto del 2007. No se observa un mecanismo de resistencia predominante para los macrlidos. El mtodo de difusin de doble disco es sensible y rpido para detectar y caracterizar los aislamientos cepas resistentes a macrlidos.
P348 - 27342 DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DE UN CASO DE ENDOCARDITIS POR UN MICROORGANISMO FASTIDIOSO. PIERSIGILLI, ANDREA (1); COLOTTO, CELINA (1); ENRICO, CECILIA (1); LAMBERGHINI, RICARDO (2); CARRARO, ALICIA (3); PRETEL, MIGUEL (4); BILBAO, LILIANA (1); LEDESMA, ELIZABETH (1)
(1) Microbiologa; (2) Infectologa; (3) Clnica Mdica; (4) Terapia Intensiva. Sanatorio Privado Aconcagua El 5 al 20% de los casos de endocarditis infecciosa (EI) quedan sin diagnstico microbiolgico. Se estima que entre 3 y 6% de ellas responden a estreptococos nutricionalmente variables. El diagnstico temprano es esencial para el tratamiento correcto y la prevencin de potenciales complicaciones. Objetivo: reportar la microbiologa de un caso de EI por una bacteria con necesidades nutricionales especiales. Caso clnico: mujer de 74 aos, con antecedentes de osteosntesis espinal y plipos colnicos. Ingres por sndrome consuntivo con anemia y anorexia pertinaz. Present pico febril, sin escalofros. Ecocardiograma transesofgico: vegetaciones sobre vlvulas artica y mitral. Se tomaron dos muestras de hemocultivos (mtodo manual convencional); observndose a las 24 hs de incubacin, en los caldos de las dos muestras, cocos gram-positivos en cadenas. A las 48 hs, desarrolla en forma de fina ptina, en agar chocolate y en agar sangre, con base Columbia, sin agregados. Las colonias pequeas y brillantes, presentaron alfa-hemlisis, se observaron formas pleomrficas, bacilares y cadenas cortas de cocos gram-variables. Con la orientacin del Gram de los caldos de cultivo, se sigui la marcha diagnstica: catalasa, movilidad y bilis esculina, resultaron negativas; las pruebas de leucinaminopeptidasa (LAP), pirrolidonilarilamidasa (PYR) y la observacin del fenmeno de satelitismo, realizado en agar Mueller Hinton con 5% de sangre ovina (empleando como bacteria auxiliar Staphylococcus aureus, cepa ATCC 25923) resultaron positivas. La cepa fue identificada en el Servicio de Bacteriologa Especial, del Instituto Carlos G. Malbran, como: Abiotrophia defectiva. Las pruebas de sensibilidad in vitro interpretadas segn normas del Clinical and Laboratory Standards Institute, revelaron sensibilidad a: penicilina, vancomicina, ceftriaxona, eritromicina y clindamicina. Se le instaur terapia emprica (considerando el informe preliminar del servicio de microbiologa) con vancomicina y gentamicina y se realiz recambio valvular. Por efectos colaterales, debi rotarse luego el tratamiento a ceftriaxona y posteriormente a clindamicina. Se indic alta sanatorial luego de 50 das de internacin. Abiotrophia defectiva es un microorganismo con requerimientos nutricionales especiales y de crecimiento lento. El microbilogo, debe considerar que el desarrollo en forma de ptina en agar sangre con
P347 - 27339 Streptococcus pneumoniae. EVALUACIN DE LA RESISTENCIA A MACRLIDOS. COCO, BARBARA; GALLEGO, MARIA JOSE; CANTEROS, MARIA LORENA; RAINERI, MARGARITA; URSINO, VERONICA; OTHEGUY, STELLA MARIS
Hospital Mara Ferrer. GCABA Introduccin: Streptococcus pneumoniae (Sp) es el patgeno ms frecuentemente aislado de infecciones respiratorias de la comunidad. Frente a los macrolidos (M), utilizados para el tratamiento de estas patologas, se describen dos mecanismos de resistencia: modificacin de sitio blanco y eflujo activo. Objetivo: evaluar la sensibilidad a M y sus mecanismos de resistencia de los aislamientos de Sp de materiales respiratorios y hemocultivos (Mt). Materiales y mtodos: durante el perodo enero de 2007- diciembre de 2009, se procesaron 8955 Mt en el laboratorio de bacteriologa. Se aislaron 458 cepas de Sp. Se estudi la sensibilidad a oxacilina, levofloxacina (L), eritromicina (E), clindamicina (Cl), trimetoprimasulfametoxazol (TMS) por el mtodo de difusin en agar (Mueller Hinton sangre ovina al 5%) segn normas del CLSI; a los aislamientos resistentes se les practic prueba de concentracin inhibitoria mnima por tiras de gradiente siguiendo las indicaciones
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base Columbia, sin agregados, puede confundir el inicio de la identificacin, al aparentar no tener requerimientos nutricionales. La EI por Abiotrophia va asociada generalmente a mayor morbilidad y mortalidad que las causadas por estreptococos del grupo viridans. El diagnstico microbiolgico presuntivo precoz y el trabajo interdisciplinario como ocurri en el caso descripto redundan en un mejor pronstico para los pacientes.
P349 - 27346 ACTIVIDAD BACTERICIDA Y DETECCIN DE TOLERANCIA DE Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTES A VANCOMICINA. MENDEZ, EMILCE DE LOS ANGELES (1,2); NAGEL, ALICIA (1); BANDE, JOSEFINA (2); LURA, MARIA CRISTINA (2); SUTICH, EMMA (3)
(1) Hospital Cullen, (2) FBCB-UNL, (3) Bacteriologa FCBYF-UNR A pesar de los nuevos antimicrobianos incorporados al mercado, en nuestro pas vancomicina sigue siendo la terapia de eleccin para infecciones severas por Staphylococcus aureus meticilino resistentes (SAMR). Numerosos investigadores sugieren fracasos teraputicos de infecciones graves causadas por cepas tolerantes. Objetivos: a) determinar la actividad bactericida de vancomicina frente a SAMR aislados de muestras de importancia clnica; b) detectar presencia o ausencia de tolerancia mediante la relacin concentracin bactericida (CBM) e inhibitoria (CIM) mnimas y estudios de cintica de muerte. Materiales y mtodos: se estudiaron 112 aislamientos consecutivos y clnicamente significativos de SAMR obtenidos de diferentes muestras provenientes de pacientes que asistieron al Hospital J. M. Cullen de la ciudad de Santa Fe durante 30 meses (Febrero 2006 Julio 2008). Se efectuaron CIM y CBM de vancomicina segn normas del Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). A los aislamientos con una relacin CBM/CIM 8 se les realiz curva de tiempo de muerte (CM). Se consideraron tolerantes tanto a aquellos SAMR para los que se obtuvieron: CBM/CIM 32, como a los que presentaron CBM/CIM 16 con CBM = 16 g/ml y por CM (CLSI). Resultados: Se detectaron 108 aislamientos con CIM 1 g/ml y slo 4 con CIM = 2 g/ml. Efectuada la CM a los 39 aislamientos cuya relacin CBM/CIM fue 8, cuatro de ellos resultaron tolerantes ya que, en 24 h, no existi reduccin del inculo inicial ( 3 log10 UFC/ml). Al aplicar la relacin CBM/CIM 32, el nmero de aislamientos tolerantes ascendi a 10. Esta cifra result 2 cuando se tuvo en cuenta el criterio CBM/CIM 16 con CBM = 16 g/ ml. Se concluye que vancomicina result bactericida para el 96% de los SAMR, mientras que entre el 3,5% y 10,7% de los aislamientos resultaron tolerantes, segn fueran detectados por CM y por los dos criterios de tolerancia considerados, respectivamente.
co evidenci mal estado higinico general, falta de respuesta a rdenes simples, pupilas isocricas e hiporeactivas, sin foco motor. En la piel, se destacaba la presencia de livideces y, en ambas regiones inguinales, mltiples placas eritematosas, cubiertas por costras mielicricas. El cuadro se interpret como shock sptico, se realizaron hemocultivos. Se inici tratamiento emprico con ciprofloxacina y ampicilina sulbactam. Ingresa a la terapia intensiva donde inicia asistencia respiratoria mecnica y requiere hemodilisis de urgencia. Durante las primeras horas en UTI, el paciente presentaba hipotensin refractaria requiriendo inicio de vasopresores y transfusin sangunea. En los hemocultivos desarrollaron bacilos gram-negativos. El microorganismo fue identificado por pruebas bioqumicas convencionales como Gilardi Rod grupo 1 y por API20NE como Brevundimonas diminuta/Oligella urethralis (88.5%). El anlisis de secuenciacin del ARN ribosomal 16S revel 99% de identidad con la secuencia correspondiente al gen del ARN ribosomal 16S de Wohlfahrtiimonas chitiniclastica strain 5401129. La sensibilidad antibitica (CIM) determinada por Etest arroj los siguientes resultados (g/ml): penicilina, TMS, colistina y piperacilina: 0,25; gentamicina y tetraciclina: 1,0; amoxicilina: 0,064; ciprofloxacina y ceftazidima: 0,032; ceftriaxona: 0,008; meropenem: 0,004; imipenem: 0,125; minociclina: 2. Se rot el tratamiento a ceftazidima ms amicacina. El paciente persisti en estado de shock sptico con acidosis metablica e hipoglucemia refractarias al tratamiento falleciendo al 5to da del ingreso al hospital. El hbitat de W. chitiniclastica es la larva de la mosca Wohlfahrtia magnifica, aunque stas no se hallaron en las heridas del paciente al momento del ingreso. Podramos elucubrar que las lesiones de la piel en donde desarrollaron las larvas se colonizaron-infectaron con el microorganismo el que luego accedi al torrente sanguneo. Se destaca la importancia del aislamiento de bacterias cuyo hbitat son los distintos estados larvarios de una mosca parsita, de infecciones severas en pacientes deambulantes o con bajo status higinico.
P351 - 27359 ETIOLOGA DE LAS INFECCIONES VAGINALES EN MUJERES EMBARAZADAS Y NO EMBARAZADAS DEL HOSPITAL J. B. ITURRASPE DE LA CIUDAD DE SAN FRANCISCO. LUCATO, DIANA M; GOMEZ, ALEJANDRO; OLDRINO, MARCELA
Hospital J. B. Iturraspe La secrecin vaginal anormal es uno de los principales motivos de consulta en mujeres en edad frtil. En la mayora de los casos causa una gran molestia para la paciente. Este trabajo tuvo como objetivo determinar la prevalencia de los agentes etiolgicos de las infecciones vaginales en mujeres sexualmente activas, embarazadas y no embarazadas, que asisten a consulta ginecolgica en nuestro hospital. Determinar la prevalencia de las especies de Cndida en vaginitis producidas por hongos. Establecer el porcentaje de mujeres sintomticas que consultan por molestia genital y presentan exudado vaginal normal (EVN). Se estudiaron 276 pacientes, en un rango entre 15 y 60 aos de edad, desde noviembre de 2008 hasta diciembre de 2009. A todas ellas se les tom muestra de flujo vaginal. Se realiz medicin de PH, test de aminas, exmen en fresco indicando la presencia de clulas epiteliales, reaccin inflamatoria, Trichomonas vaginalis (TV), levaduras e hifas. Se evaluaron las muestras mediante la observacin del extendido de la coloracin de Gram. Se practicaron cultivos en agar sangre y Sabouroud. La identificacin de las levaduras se realiz segn el esquema de identificacin presuntiva de levaduras de micologa -INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. La significancia estadstica se realiz por test de chi cuadrado. De los 276 pacientes, 76 (28%) eran mujeres embarazadas (E) y 200 (72%) mujeres no embarazadas (no E). Del total de E 30 (39%) presentaron EVN, 21 (28%) VB por coco bacilos gram-variable tipo Gardnerella vaginalis y 22 (29%) candidiasis vaginal (CV) mientras que 3 pacientes (4%) presentaron infeccin por TV. En las no E se observ que 92 (46%) presentaron EVN, 55 (28%) VB por coco bacilos gram-variable tipo Gardnerella vaginalis, 39 (19%) CV mientras que 14 (7%) pacientes presentaron infeccin por TV. La principal especie de Cndida aislada fue Cndida
P350 - 27347 SEPSIS FULMINANTE POR Wohlfahrtiimonas chitiniclastica. ALMUZARA, MARISA (1,2); PALOMBARANI, SUSANA (2); TUDURI, ALICIA (2); FIGUEROA, SILVIA (2); GIANECINI, ARIEL (1); SABATER, LAURA (2); RAMIREZ, MARIA SOLEDAD (3); VAY, CARLOS (1)
(1) Laboratorio de Bacteriologa. Departamento de Fisiopatologa y Bioqumica Clnica. Facultad de Farmacia y Bioqumica. U.B.A. (2) Unidad de Bacteriologa y Unidad de Infectologa. H.I.G.A. Eva Pern. San Martn. Pcia de Buenos Aires. (3) Departamento de Microbiologa, Inmunologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. U.B.A. Wohlfahrtiimonas chitiniclastica, una bacteria de la Clase gamma- Proteobacteria, ha sido aislada de la larva de una mosca parsita: Wohlfahrtia magnifica. Aunque su patogenicidad en humanos es desconocida, est filogenticamente relacionada con Ignatzschineria larvae que causa miasis severas de heridas en el ganado y en el hombre, que constituyen la puerta de entrada para la bacteriemia. Paciente de 70 aos, deambulante en la va pblica, con antecedentes de enolismo, tabaquismo severo y arteriopata perifrica. Ingresa a la divisin emergencia con deterioro del sensorio, con tensin arterial no registrable, frecuencia cardiaca 75 latidos/min y respiratoria 40 resp/min, temperatura axilar 35 C y signos de hipoperfusin perifrica. El examen fsi-
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albicans, 52 (85%) seguida por 7 (11%) levaduras no Cndida albicans y 2 (3%) Cndida tropicalis. Del total de pacientes sintomticas estudiadas, 122 (44%) presentaron EVN. Se pudo establecer con un 95% de confianza (p<0,05) que los agentes etiolgicos de las infecciones vaginales dependen del estado de la mujer, si est o no embarazada. Teniendo en cuenta todas las pacientes la infeccin mas frecuente fue VB por Gardnerella vaginalis, seguida por CV e infeccin por TV en tercer lugar. La VB por Gardnerella vaginalis fue igual en E y noE. La mayora de las muestras con TV provinieron de pacientes noE. Mientras que la CV se evidenci en mayor medida en E. Para el correcto tratamiento de las infecciones vaginales se destaca el aporte de realizar el exmen directo del exudado vaginal mediante coloracin de Gram, siendo una herramienta sencilla y econmica, disponible en cualquier laboratorio. Es importante la identificacin de las especies de Cndida ya que no todas son sensibles a los antibiticos convencionales provocando sto fallas en el tratamiento.
P353 - 27364 OSTEOMIELITIS POR Nocardia cyriacigeorgica EN PACIENTE INMUNOCOMPETENTE. AGUIRRE, ALINA; D ANDREA, ELENA; MUOZ, VERONICA; RANTICA, NOELIA; PINO, GLADYS; LEON, LUCAS; RAMIA, VICTOR
Nuevo Hospital San Roque de Crdoba, Argentina Las nocardias son actinomicetos aerbicos gram-positivos, saprfitos habituales del suelo y la materia orgnica en descomposicin. Las infecciones por Nocardia spp. se adquieren generalmente a travs de inhalacin o inoculacin percutnea a partir de fuentes ambientales. La infeccin pulmonar por va inhalatoria se da en pacientes inmunodeprimidos o afectados de comorbilidad pulmonar crnica y que frecuentemente tienen una larga historia de exposicin a corticoides, mientras que la nocardiosis cutnea primaria afecta principalmente a pacientes inmunocompetentes siendo Nocardia brasiliensis la especie ms frecuentemente aislada. Se desarrolla con posterioridad a la inoculacin traumtica de los microorganismos en los tejidos subcutneos, afectando piel y partes blandas, caracterizndose por necrosis y formacin de abscesos. Nuestro objetivo es presentar el primer caso clnico de aislamiento de la especie Nocardia cyriacigeorgica en el Nuevo Hospital San Roque de Crdoba, en un paciente masculino, inmunocompetente, sin enfermedad de base de 25 aos de edad. Ingresa con fractura expuesta de tibia de pierna izquierda, sometindose a un tratamiento quirrgico con colocacin de clavo endomedular macizo con doble bloqueo proximal y distal. Seis meses ms tarde comienza con supuracin y con formacin de una fstula activa en zona de exposicin a la altura de un tercio medio de pierna izquierda, de donde se toman muestras para ser procesadas microbiolgicamente. De las dos punciones de la herida, realizadas con diez das de diferencia se aslan a las 72 hs. de incubacin a 35 C y en 5% CO2 en agar sangre Columbia y Polivitex (bioMerieux) colonias con caractersticas cerebriformes, secas, color blanco tiza con textura similar al yeso y al exmen microscpico se observan formas bacilares, filamentosas, ramificadas Gram positivas y parcialmente cido resistente con la coloracin de Kinyoun, las cuales fueron identificadas presuntivamente como Nocardia spp. La cepa fue derivada a la seccin de Bacteriologa Especial del Instituto Malbrn para su identificacin definitiva. Posteriormente con estudios complementarios como centellograma y TAC se arriba al diagnstico de osteomielitis por Nocardia cyriacigeorgica confirmada por el laboratorio de referencia. Resulta imposible impedir la exposicin a las nocardias debido a su ubicuidad y aunque la identificacin precisa a nivel de especie entraa ciertas dificultades, basta con reconocer que la cepa pertenece al gnero Nocardia. El paciente fue tratado empricamente con gentamicina y cefazolina y al conocer el agente etiolgico, se rot a trimetoprima-sulfametoxazol. Se procedi a retirar el clavo endomedular con evolucin favorable. El aislamiento precoz e identificacin del agente etiolgico constituye una herramienta fundamental para la instauracin de tratamiento adecuado, aumentando las posibilidades de xito teraputico y evitando complicaciones mayores que pudieren poner en riesgo de vida a nuestros pacientes. Debido a las dificultades en la identificacin fenotpica pudiere ser subestimado el nmero de casos por esta especie.
P352 - 27362 EVALUACIN DE LA MICROBIOTA VAGINAL EN EMBARAZADAS SINTOMTICAS Y ASINTOMTICAS. DE MARCO, M B (1); COPPOLILLO, E (2); MENGHI, C (3); LOSADA, M (1); CORA ELISEHT, M (2); GATTA, C (3); RUDA VEGA, H (2); VAY, C (1); FAMIGLIETTI, A (1); PERAZZI, B (1)
(1) Laboratorio de Bacteriologa Clnica. Depto de Bioqumica Clnica. Hospital de Clnicas. (2) Tracto Genital Inferior. Primera Ctedra de Obstetricia. Hospital de Clnicas. (3) Laboratorio de Parasitologa. Depto de Bioqumica Clnica. Hospital de Clnicas. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA Introduccin: durante el embarazo se producen cambios hormonales que predisponen con mayor frecuencia a la aparicin de infecciones del tracto genital inferior asociadas a complicaciones maternas y perinatolgicas. Objetivo: estudiar la prevalencia de infecciones vaginales, tales como candidiasis, vaginosis bacteriana (VB) y tricomonosis en embarazadas sintomticas y asintomticas. Materiales y mtodos: se analizaron 668 contenidos vaginales de pacientes embarazadas que concurrieron en forma consecutiva y prospectiva al consultorio de Obstetricia del hospital entre el 1 de enero de 2009 y 31 de marzo de 2010 inclusive. A todas las pacientes se les efectu examen clnico, colposcpico y estudio microbiolgico del contenido vaginal. La candidiasis se detect por observacin en fresco con solucin fisiolgica (SF) y con KOH 10% y por cultivo en agar sangre y agar Saboureaud. Para el diagnstico de vaginosis bacteriana (VB) se utilizaron los criterios de Nugent, y de Amsel. La investigacin de T. vaginalis se efectu por observacin en fresco con SF y con solucin actica formolada (SAF)/azul de metileno, coloracin de May-Grunwald Giemsa prolongado y cultivo en tioglicolato modificado. Resultados: se diagnostic la presencia de microbiota patgena en 314 de 668 (47,0%) pacientes, siendo 125(40%) sintomticas. La distribucin de los patgenos fue la siguiente: Candida spp. en 155/668 (23,2%) por cultivo, siendo 53 (34%) sintomticas, vaginosis bacteriana en 171/668 (25,6%) por criterio de Amsel y score de Nugent, siendo 63 (37%) sintomticas y T. vaginalis en 17/668 (2,5%) por cultivo, siendo 9 (53%) sintomticas. La candidiasis se detect por examen en fresco, sin agregado de KOH al 10%, en 74/668 casos (11,1%) (sensibilidad 47,7 % y especificidad 100%) y con el agregado del mismo en 121/668 (18,1%) (sensibilidad 78,1% y especificidad 100%). T. vaginalis fue detectada en fresco con solucin fisiolgica en 6/668 (0,9%) de las pacientes (sensibilidad 35,3% y especificidad 100%), por coloracin de MayGrunwald Giemsa prolongado en 7/668 (1%) (sensibilidad 41,2% y especificidad 100%) y por examen en fresco con SAF/azul de metileno en 9/668 (1,3%) (sensibilidad 52,9% y especificidad 100%). Al considerar la suma de los tres exmenes microscpicos se diagnostic el parsito en 9/668 pacientes (1,3%). La candidiasis y la VB fueron las patologas mas frecuentes. Cabe destacar el elevado porcentaje de pacientes asintomticas con los diferentes patgenos hallados, lo que obliga a efectuar el estudio microbiolgico descripto de fondo de saco vaginal durante el embarazo, con el objeto de instaurar un precoz y adecuado tratamiento, para prevenir las posibles complicaciones maternas y perinatolgicas.
P354 - 27371 EVALUACIN DEL DESEMPEO DE LAS TIRAS M.I.C EVALUATOR (MICE) DE IMIPENEM Y RECOMENDACIONES PARA SU USO EN LA DETECCIN DE ENTEROBACTERIAS PRODUCTORAS DE CARBAPENEMASAS DE CLASE A (CCA). LUCERO, M CELESTE; CORSO, ALEJANDRA; GUERRIERO, LEONOR; PASTERAN, FERNANDO
Servicio Antimicrobianos, INEIANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Las infecciones por Enterobacterias (ENT) productoras de CCA se han convertido en un desafo para el sistema sanitario debido a su resistencia extrema y altas tasas de morbi-mortalidad. El reconocimiento precoz de productores de CCA es crucial para guiar el ptimo tratamiento antimicrobiano y para evitar su propagacin. Recientemente ha sido desarrollado un nuevo mtodo
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para determinar la CIM de un aislado, basado en el uso de tiras inertes impregnadas con un gradiente de antibitico (MICE, Oxoid). Hasta la fecha, el desempeo global de las tiras MICE para imipenem (IMP) en ENT, y su utilidad para la deteccin de CCA no han sido evaluados. Objetivos: i) comparar el desempeo de las tiras MICE de IMP con el del mtodo de referencia (dilucin en agar, DA); ii) evaluar y optimizar su utilidad para la deteccin de CCA en ENT. Mtodos: se utiliz un panel de 39 ENT (15 Klebsiella spp., 10 Enterobacter spp., 6 Serratia marcescens, 4 Escherichia coli, 2 Morganella morganii, 1 Citrobacter koseri, 1 Proteus penneri) con distintos patrones de sensibilidad a los carbapenemes. El panel incluy 17 ENT productoras de carbapenemasas (n): KPCs (6) Sme (4), NMC-A/IMI (2), GES (2), MBLs (3); y 22 no productores de carbapenemasas: -lactamasas de espectro extendido (8), AmpCs (4 hiperproductores, 2 plasmdicos y 3 inducibles), mecanismos combinados (3), y otros (2). Los mecanismos de resistencia fueron determinados mediante PCR. Cada cepa fue estudiada aplicando una tira MICE en una placa de agar Mueller-Hinton previamente inoculada con una suspensin bacteriana con una turbidez equivalente al 0,5 de Mc Farland. Luego de incubacin en atmsfera de O2 por 16-18 hs, se obtuvo el valor de CIM en el punto de interseccin de la elipse de inhibicin de crecimiento con la tira. Se determin la CIM de referencia de cada cepa mediante DA (CLSI, M7-A8 y M100S20). Los resultados discordantes fueron repetidos. Resultados: La concordancia esencial en los valores de CIM de IMP obtenidos mediante MICE y DA fue del 100%. La concordancia por categora de interpretacin alcanz un 97,4%, registrndose slo un error menor en el grupo de las CCA. Para evaluar la capacidad de las tiras MICE para detectar CCA, se calcul la sensibilidad (SN) y especificidad (ES) para cada valor de CIM obtenido. El mejor desempeo para la deteccin de CCA por ambos mtodos (DA y MICE) fue obtenido cuando se utiliz como punto de corte de sospecha una CIM de IMP 1 mg/L. Para este punto de corte se obtuvo un 100% de SN y 64% de ES, tanto para MICE como para DA. Las tiras MICE presentaron una concordancia (esencial y de categoras de interpretacin) ptima cuando fueron comparadas con el mtodo de referencia para determinar la CIM a IMP en ENT. Su eficacia para la deteccin de CCA no result inferior al mtodo de referencia, presentando alta SE y las mismas limitaciones de ES que la DA. Las tiras MICE podran ser una buena opcin para determinar la CIM de IMP en ENT en el laboratorio clnico. El valor de CIM de IMP obtenido por MICE puede utilizarse para la deteccin de CCA, utilizando puntos de corte de sospecha apropiados.
parmetros clnicos-bioqumicos no fueron determinantes para la confirmacin del sndrome en una primera instancia, pero en el estudio bacteriolgico de materia fecal, con presencia de polimorfonucleares y hemates, se aisla Escherichia coli, se estudian colonias fermentadoras y no fermentadoras del sorbitol, encontrndose colonias fermentadoras del sorbitol con aglutinacin positiva con el antisuero polivalente 2 del Instituto Malbrn. Enfrentando las mismas con los antisueros monoclonales se obtuvo aglutinacin positiva para el antisuero monoclonal 0145, en un paso posterior se investig presencia de verotoxina por inmunocromatografa encontrndose bandas en las regiones correspondientes a STX1 y STX2.Las cepas aisladas se enviaron al Instituto Malbrn (Servicio de Fisiopatogenia) de acuerdo al protocolo de unidad centinela de SUH. El nio necesit 7 das de dilisis, con 15 das de terapia intensiva y 21 das de internacin. A 45 das del debut del sndrome el paciente no recupera su funcin renal. Dada la alta tasa de SUH, la carencia de un tratamiento especfico y la alta morbilidad, la prevencin primaria de las infecciones por STEC es fundamental para disminuir su impacto sanitario. En consecuencia, tambin se deben considerar, como estrategia fundamental, las acciones estatales implementadas para controlar y prevenir las infecciones por STEC y el desarrollo de SUH en la Argentina. Entre las polticas de control y prevencin del SUH por parte del Estado Nacional se implementan las estrategias de control del sistema de vigilancia epidemiolgica, las polticas destinadas al control de la industria de la carne y las estrategias de prevencin que apuntan a la educacin de la poblacin. Se pone de manifiesto la necesidad de realizar el estudio de produccin de verotoxina a todas las bacterias tipificadas bioqumicamente como Escherichia coli en pacientes con diagnostico presuntivo de SUH.
P356 - 27374 MARCADORES DE INVASIVIDAD EN CEPAS DE Streptococcus agalactiae. TORESANI, INES (1); LIMANSKY, ADRIANA (1,2); PEREZ, JORGELINA (1); EBNER, GUILLERMO (1); VIALE, ALEJANDRO (2); SUTICH, EMMA (1)
Ctedra Bacteriologa (1); IBR, CONICET (2); Departamento Microbiologa, Facultad Ciencias Bioqumicas UNR Streptococcus agalactiae (EGB) es un patgeno oportunista ampliamente reconocido por su asociacin a infecciones neonatales. En la actualidad, es asimismo considerado un patgeno emergente asociado a infecciones invasivas en adultos. Numerosos factores aumentan el riesgo a desarrollar enfermedad invasiva, incluyendo susceptibilidad del hospedador, presencia de elevado inculo del microorganismo y factores de patogenicidad del mismo. Ha sido objetivo de este trabajo evaluar comparativamente caracteres feno- y genotpicos de cepas invasivas y no invasivas, de manera de identificar marcadores asociados a invasividad. Para ello se incluyeron 65 aislamientos de materiales clnicos de pacientes ambulatorios e internados y los mismos fueron caracterizados como invasivos o no, segn su procedencia. As, se han considerado no invasivos a los recuperados de vagina o endocrvix; e invasivos, a los provenientes de sangre o sitios estriles tales como lquido cefalorraqudeo u otros lquidos de puncin. Se analizaron diferentes marcadores fenotpicos, incluyendo, serotipo (I, Ia, II- V), antgenos proteicos de superficie (c, X, R) y factores de virulencia como produccin de -hemolisina, capacidad de adherencia a fibronectina y produccin de hialuronidasa. Asimismo, se determin la diversidad genotpica de los aislamientos empleando reaccin en cadena de la polimerasa con oligonucletidos degenerados (OD-PCR). El criterio establecido permiti definir 3 poblaciones: 32 aislamientos no invasivos, 12 invasivos y 21 de dudoso rol. OD-PCR revel la presencia de 39 clones totales, 18 clones entre los primeros, 10 entre los invasivos y 11 entre los ltimos. Por su parte, la serotipificacin mostr que Ia fue el serotipo prevalente (33%) entre los invasivos, seguido por II y V (25%, cada caso). A su vez, el III ha sido el ms frecuente (37%) entre los no invasivos, mientras que III (28%) y II (24%), entre los EGB de dudoso rol. La evaluacin comparativa de los factores de virulencia en las 3 poblaciones mostr como resultados ms significativos actividad hialuronidasa en el 82% de los aislamientos invasivos (p: 0,07), as como presencia
P355 - 27372 SNDROME URMICO HEMOLTICO EN EL HOSPITAL DE CAUCETE DE LA PROVINCIA DE SAN JUAN. SALVA, LILIANA(1); CATTANEO, M(2); CALANOCCE, G(1); GUERRERO, L(2)
(1) Hospital Caucete, (2) Hospital Rawson Escherichia coli O157:H7, es el serotipo prevalente asociado a grandes brotes y casos espordicos de colitis hemorrgica (CH) y sndrome urmico hemoltico (SUH). Sin embargo, ms de 100 serotipos poseen un potencial patognico similar, entre ellos :O26:H11; O103:H2; O111:NM; O121:H19; O145:NM; O157:H7, llamadas Escherichia coli productoras de toxina Shiga (STEC).La situacin en Argentina respecto a SUH es la aparicin de 300 a 400 casos nuevos por ao, con una tasa de notificacin: 12,5/ 100.000 nios < 5 aos,responsable del 20% de transplantes renales con evidencia de infeccin por STEC en el 50% de casos de SUH con serotipo prevalente en un 60% de 0157:H7 y un 40% de otros serotipos. Las cepas STEC no-O157 no tienen una caracterstica bioqumica que los distinga del resto de los E. coli, a diferencia de lo que ocurre con O157, que no fermenta el sorbitol y no posee actividad de -glucuronidasa, entonces para su identificacin, se requiere la aplicacin de estrategias ms complejas. En la actualidad han aumentado los esfuerzos para la deteccin de los diferentes serotipos de STEC. El caso se presenta con un paciente de 1 ao y 6 meses, de la zona rural lindante al departamento de Caucete, de la provincia de San Juan que, ante la consulta, se sospecha como diagnostico presuntivo un SUH. Requiere internacin y es medicado con ceftriaxona endovenosa Los
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de protena R en el 25% de esta poblacin (p: 0,09). Por otra parte, se pudo observar que la mayora de los aislamientos invasivos y de dudoso rol presentaron una superficie celular hidrofbica. En contraposicin, los restantes factores analizados no mostraron asociacin significativa con las poblaciones descriptas. Es de destacar que la coexistencia de hialuronidasa y protena R ha sido atributo especfico de clones invasivos as como de los de dudoso rol; y especficamente detectada en 3 genotipos, Ia4, II6 y II7, sobre un total de 39 clones incluidos. Los resultados observados permiten concluir que las cepas con serotipo Ia y II se presentaron fuertemente asociadas a procesos invasivos; y que la deteccin de ambos marcadores de invasin (protena R y actividad hialuronidasa) proveera herramientas para la identificacin de clones predictivos de riesgo.
P357 - 27387 BSQUEDA DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA POR PCR MLTIPLE EN NIOS CON SNDROME URMICO HEMOLTICO EN LA PLATA, ARGENTINA. ODERIZ, SEBASTIAN (1); MILIWEBSKY, ELIZABETH (2); RIVAS, MARTA (2); GIUGNO, SILVINA (1)
(1) Sala de Microbiologa. Laboratorio Central. Hospital de Nios Sor Mara Ludovica. La Plata. Buenos Aires. (2) Servicio Fisipatogenia, Departamento Bacteriologa. INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Introduccin: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patgeno emergente transmitido por alimentos, que se asocia a casos espordicos y a brotes de diarrea, colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH). E. coli O157:H7 es fcilmente diferenciado de otros E. coli por su inhabilidad de fermentar rpidamente sorbitol; sin embargo, los STEC noO157:H7 son fenotpicamente similares a E. coli comensales no patognicos y no son detectados en al agar MacConkey con sorbitol (SMAC). Objetivo: el propsito de este estudio fue determinar la prevalencia de STEC en nios con SUH. Mtodos: entre febrero de 2006 y diciembre de 2009 se procesaron 99 muestras (1 por paciente) de materia fecal de pacientes peditricos (media: 16,3 meses; rango: 7 meses a 9 aos) con SUH. Las muestras fueron sembradas en agar SMAC. Luego de la incubacin por 18 hs a 37 C se aplic una tcnica de PCR mltiple (Leotta G., et al. 2005) para la deteccin de los genes stx1, stx2 y rfbO157 sobre colonias aisladas y en la zona de crecimiento confluente. Los aislamientos positivos fueron identificados por mtodos bioqumicos estndar. Para la identificacin serolgica se utilizaron antisueros monovalentes. Todos los aislamientos PCR positivos fueron enviados al Laboratorio Nacional de Referencia para su caracterizacin fenotpica y genotpica. Resultados: se detectaron un total de 27 (27,3 %) muestras positivas. Los serotipos/ genotipos de STEC detectados fueron: O157: H7/stx2 (n=20, 74.1%), O121: H19/stx2 (n=2, 7.4%), O145: HNM/stx2 (n=2, 7.4%), O174: HNM/stx2 (n=1, 3.7%) y ONT/stx2 (n=2, 7.4%). Las cepas fueron caracterizadas como EHEC-hlyA (enterohemolisina) y eae (intimina) positivos, excepto el aislamiento O121:H19/stx2 (eae negativo). Todos los aislamientos del serotipo O157 fueron no fermentadores del sorbitol y -glucuronidasa negativos. A excepcin del serotipo O157:H7, la gran diversidad de STEC asociados a enfermedades que afectan al hombre y la falta de marcadores bioqumicos especficos no hace posible la utilizacin de medios selectivos y diferenciales para la deteccin del gran nmero de E. coli verotoxignicos. La tcnica aplicada es una opcin apropiada para la deteccin y confirmacin de STEC O157 y no-O157 a partir de cultivos bacterianos debido a que detecta los principales factores de virulencia de STEC.
Introduccin: Neisseria meningitidis (Nm) es el agente causal de enfermedades graves como bacteriemia, meningitis y sindrome de shock sptico. El diagnstico rpido es de utilidad y con impacto en salud pblica para el establecimiento de la estrategia de intervencin para el control de foco familiar, institucional o comunitario (quimioprofilaxis/vacunacin especfica). Objetivo: desarrollar un mtodo molecular rpido de diagnstico de enfermedad invasiva meningocccica (EIM) a partir de LCR basado en la extraccin de ADN con un equipo comercial y una tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) previamente descrita. Materiales y mtodos: entre marzo 2006 y enero 2010 se procesaron 77 muestras de lquido cefalorraqudeo (LCR) provenientes de 77 pacientes (media: 5,3 aos, rango: 18 das - 14 aos) que presentaban dos o ms de los siguientes sntomas y signos: fiebre, sndrome menngeo y petequias. A las muestras se les realiz estudio citofisicoqumico (CFQ), observacin directa, cultivo por tcnicas estandarizadas, identificacin, tipificacin, antibiograma y PCR (Taha, M. 2000. J. Clin. Microbiol. 38:855857) para identificacin (presencia del gen crgA) y genoagrupamiento capsular (serogrupos A, B, C, Y y W135) de Nm. Resultados: 9 pacientes tenan CFQ normal, con estudio bacterioscpico, cultivo y PCR negativos (probable etiologa viral). En los restantes 68 el LCR era anormal, con alto conteo de clulas (>100 cel/ L), contenido de glucosa descendido (> 0,35g/L) e incremento de protenas (probable meningitis bacteriana). En 41 (60,3%) muestras estudiadas se detect Nm por PCR. Los organismos infectantes pertenecan al serogrupo B (n= 28; 68,3%), serogrupo C (n= 1; 2,4%) y serogrupo W135 (n= 4; 9,7%). En 8 casos (19,5%) no pudo ser determinado el serogrupo (crgA positivo, serogrupo no-A, B, C, Y ni W135). En 20 (48,8 %) de las muestras de LCR con PCR positiva, se obtuvo aislamiento de Nm por cultivo (7 de ellos con examen directo positivo). Las 21 (51,2 %) restantes donde la PCR fue positiva el examen directo y cultivo fueron negativos. El mtodo basado en PCR para identificar Nm permiti confirmar el diagnstico en el 30,9% de los casos sospechosos en los que el cultivo fall en el aislamiento de este germen. Esto es muy importante para el manejo de las infecciones meningoccicas, particularmente para el diagnstico urgente, caracterizar la dinmica de circulacin, la vigilancia epidemiolgica durante los brotes, y cuando el mtodo de cultivo no permite el aislamiento del germen.
P359 - 27405 DISFUNCIN VAGINAL EN MUJERES EN EDAD FRTIL EN UN HOSPITAL DE TUCUMAN. SANTOS DE ARAOZ, VIVIANA; CANGEMI DE GUTIERREZ, ROSA; AULET, OLGA CRISTINA; CECILIA DE CASTILLO, MARTA
Universidad nacional de Tucuman La disfuncin vaginal (DV) es la causa ms frecuente de consulta mdica en la atencin primaria de la mujer sexualmente activa. Es factor de riesgo para infecciones post quirrgicas, de transmisin sexual, enfermedad inflamatoria plvica, asociada a retardo de crecimiento fetal, parto prematuro, ruptura prematura de membranas e infecciones neonatales y maternas. DV incluye vaginosis bacteriana (VB) y vaginitis convencionales por levaduras (VL) y por Trichomonas vaginalis (VT), vaginitis microbiana inespecfica (VMI) y atrofias idiopticas. El objetivo del presente trabajo fue determinar mediante estudios bsicos de laboratorio la DV, en la atencin primaria de mujeres en edad frtil, embarazadas o no, para conocer la etiologa prevalente, estudiando el balance del contenido vaginal. Metodologa: se estudi 176 mujeres sexualmente activas (posmenarca y premenopusica) de 15 a 50 aos, 62 de ellas embarazadas (15 a 38 aos), que concurrieron al Instituto de Maternidad Nuestra Seora de las Mercedes de S. M. de Tucumn. Se tomaron muestras de fondo de saco vaginal con hisopos. Uno se coloc en solucin fisiolgica para examen microscpico en fresco. Se realizaron extendidos para colorear con Gram, Giemsa y Giemsa prolongado. Se determin pH y liberacin de olor a aminas por adicin de KOH al 10 %. Para estudiar el balance del contenido vaginal se sigui la metodologa de Bartolomeo y col (2002) y el manual de procedimientos (Fundacin Bioqumica Argentina), realizando examen en
P358 - 27404 DIAGNSTICO MOLECULAR DE MENINGITIS POR Neisseria meningitidis. ODERIZ, SEBASTIAN (1); AGOSTI, MARIA R (2); VESCINA, CECILIA (1); GONZALEZ AYALA, SILVIA (2)
(1) Sala de Microbiologa, Laboratorio Central. (2) Servicio de Enfermedades Infecciosas. Hospital de Nios Sor Maria Ludovica, La Plata, Argentina.
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fresco y coloreado. Se determin el valor numrico (VN), evaluando los morfotipos bacterianos (coloracin de Gram), segn criterio de Nugent. Se efectu la correccin de Lanzafame aumentando en dos puntos el VN ante la presencia de clulas guas. Se cuantific leucocitos por campo (Lcp), interpretando como reaccin inflamatoria vaginal (RIV) valores >10 Lpc. Se determin presencia de levaduras en fresco y Gram; y de T. vaginalis (TV) en freso y Giemsa prolongado. En coloracin de Giemsa se busc clulas no habituales para otras patologas (Coilocitos, Virocitos, Clulas redondas y formas proliferativas epiteliales). Resultados: se diagnostic DV en el 40,9% de las mujeres estudiadas, el 11,4% presentaron estado intermedio y el 47,7% microbiota habitual. La distribucin de DV en embarazadas fue: VB: 21,21%, VT: 15,13% y VL: 18,18% y en no embarazadas: VB: 25%, VT: 18,7%, VL:7,8%. En ninguna de las mujeres estudiadas se detectaron clulas redondas ni formas proliferativas epiteliales. Se detect presencia de coilocitos en 2 pacientes una embarazada con VB y otra no embarazada con VMI. En una paciente no embarazada con microbiota habitual se detect presencia de virocito y coilocito. Podemos concluir que la aplicacin de mtodos bsicos de laboratorio, estudiando el balance del contenido vaginal en atencin primaria de la mujer, permiti en forma rpida y correcta determinar la prevalencia de DV en mujeres en edad frtil.
P361 - 27428 ROL DE LOS SISTEMAS DE EFLUJO EN LA FISIOLOGA DE Staphylococcus epidermidis MULTIRESISTENTE. DELPINO, MARIA VICTORIA; CORREA, JORGE; TINTILAY, ALEJANDRA; PREDARI, SILVIA; DE PAULIS, ADRIANA; SORDELLI, DANIEL; JERIC, PAOLA
Facultad De Medicina UBA Staphylococcus epidermidis es un importante patgeno nosocomial causante de bacteriemias asociadas a catteres y vlvulas protsicas. Dichas infecciones se deben principalmente a la capacidad de ste microorganismo de producir biopelcula, la misma puede estar asociada o no a la expresin del opern icaABCD. Uno de los mecanismos de resistencia a los antibiticos descripto es a travs de los sistemas de expulsin entre ellas las que le otorgan resistencia a quinolonas. En dicho trabajo se evalu si existe alguna relacin entre los factores de virulencia descriptos y los sistemas de expulsin. Se analizaron 13 aislamientos clnicos provenientes de orinas, hemocultivos y catteres que mostraron expresin de algn sistema de expulsin a quinolonas (NorA, SepA y MdeA), y se estudi la produccin de biopelcula por dos mtodos, la tcnica cuantitativa de cristal violeta en placa de 96 wells de Cristensen modificado, que informa masa y la tcnica de reduccin de la resarzurina que evala viabilidad. A continuacin se evalu la presencia del opern ica mediante la tcnica de PCR convencional y la expresin de del mismo mediante transcriptasa reversa PCR. Se observ fiel coincidencia entre ambos mtodos, lo que muestra la viabilidad de las bacterias que forman la biopelcula. Se observ que las cepas que expresaban la bomba de eflujo NorA producan mayor cantidad de biopelcula que las que expresaban tres (MdeA, SepA y NorA) o dos bombas de eflujo (MdeA y SepA). Se observ que todos los aislamientos albergaban el opern ica pero en algunos la RT fue negativa. De lo observado podra concluirse que bajo ciertas circunstancias la expresin de un sistema de expulsin otorgara ventajas para la supervivencia dentro de la clula husped. Adems podra existir una relacin entre la produccin de biopelcula a expensas de la expresin del opern ica y la bomba de eflujo NorA.
P360 - 27412 EMERGENCIA DE Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTE CON FENOTIPO COMUNITARIO EN EL HOSPITAL DE QUEMADOS. BUCCA, ROSA; MENENDEZ, VERONICA; SNITMAN, GABRIELA; MASTROBERTI, MARISA; KOVENSKY, JAIME
Hospital de Quemados En los ltimos aos se ha incrementado la frecuencia de reportes la emergencia de infecciones de piel y partes blandas producidas por Staphylococcus aureus meticilino resistente en pacientes provenientes de la comunidad (SAMR-CO) sin contacto con el hospital, ni factores de riesgo. Estos aislamientos no expresan resistencia a los antimicrobianos no betalactmicos o lo hacen en forma muy restringida a diferencia de aquellos aislamientos de S. aureus meticilino resistente endmico en el hospital (SAMR-HO). Objetivos: reportar la emergencia de SAMR-CO en nuestro hospital y analizar su perfil epidemiolgico. Poblacin: todos los aislamientos de S. aureus provenientes de muestras clnicas recolectados en el perodo 2008 -2009. Materiales y mtodos: se defini SAMR-CO como un S. aureus meticilino resistente que no presenta resistencia a antibiticos no betalactmicos o lo hace a una sola familia de estos, y SAMR-HO a los que presentan multiresistencia a los no betalactmicos. Se analizaron en forma retrospectiva todos los aislamientos de S. aureus de muestras clnicas de los aos 2008 y 2009, incluyendo un solo aislamiento por paciente de cada fenotipo. Se consigno en cada SAMR-CO grupo etario, sexo, foco de infeccin, y condicin de internado o ambulatorio. La identificacin de los S. aureus meticilino resistente se realiz por mtodos convencionales y la resistencia a los antimicrobianos se determin por el mtodo de difusin de Kirby-Bauer e interpret con las recomendaciones del CLSI. Resultados: se aislaron 511 aislamientos de S. aureus siendo 229 SAMR (45%). De estos 121 (53%) fueron del fenotipo SAMR-HO y 108 (47%) al fenotipo SAMR-CO. De los ltimos 65% fueron aislados de pacientes peditricos (38% varones y 62% mujeres) y 35% de pacientes adultos (86% varones y 14% mujeres). Los SAMR-CO constituyeron el 82% de los SAMR de pacientes ambulatorios y el 36% de los internados. En cuanto a la distribucin segn foco result: herida quemadura 74%, bacteriemia: 12%, catter: 5,5%, respiratorio 1,85% y abscesos 6,5%. Conclusiones: 1) la emergencia de SAMR-CO signific un cambio en la epidemiologa de la infeccin por S. aureus meticilino resistente en nuestro hospital, constituyendo este fenotipo casi la mitad de los aislados. 2) si bien la prevalencia es mucho mayor en pacientes ambulatorios, su presencia constante en el tiempo ha transformado a SAMR-CO en parte de la flora endmica intrahospitalaria. 3) los datos obtenidos deberan hacer reevaluar el tratamiento utilizado en las infecciones producidas por S. aureus meticilino resistente en pacientes ambulatorios
P362 - 27431 SEROTIPOS DE Shigella spp. EN ARGENTINA, 2007-2009. CAFFER, MI; PANAGOPULO, M; ALCAIN, A; MORONI, M; VIAS, MR; TERRAGNO, R
Servicio Enterobacterias, INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn La shigelosis est ampliamente distribuida en todo el mundo, asociada a bajo nivel socioeconmico en pases en desarrollo, a grupos de riesgo (nios pequeos, gerontes e inmunocomprometidos) y a condiciones higinicas deficientes; tambin afecta a viajeros de pases industrializados que visitan zonas endmicas. Los brotes son frecuentes en comunidades cerradas. El objetivo de esta comunicacin, continuando con la vigilancia desde el laboratorio, es presentar los datos sobre la prevalencia de esta enterobacteria, en el perodo 2007-2009. En este perodo, se estudiaron 2324 aislamientos de Shigella spp. remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia (LNR), por laboratorios de la C.A.B.A y de las provincias. Todos los aislamientos fueron confirmados por pruebas bioqumicas y los serotipos se determinaron utilizando antisueros provistos por el Servicio Antgenos y Antisueros del Instituto Nacional de Produccin de Biolgicos, A.N.L.I.S Dr. Carlos G. Malbrn. De los resultados obtenidos se desprende que Shigella flexneri es el serogrupo prevalente, con 1695 aislamientos (72,9%), seguido por Shigella sonnei con 569 (24,5%) y en muy baja proporcin por Shigella boydii 40 (1,8%) y Shigella dysenteriae 19 (0,8%). Dentro de los serotipos de Shigella flexneri, el orden de frecuencia es S. flexneri 2 con 883 aislamientos (52,1%), S. flexneri 3 con 314 (18,5%), S. flexneri 1 con 271 (15,9%), S. flexneri 6 con 91 (5,4%), S. flexneri no tipificables con 62 (3,7%), S. flexneri 4 con 47 (2,8%) y S. flexneri 5 con 27 (1,6%). Con respecto a Sh. boydii se encontraron los serotipos 2, 4, 5 y 10 y para S. dysenteriae los serotipos 2 y 3, en muy bajo nmero de aislamientos. Durante este perodo se registraron 10 brotes,
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de los cuales 6 fueron causados por S. sonnei, 1 por S. flexneri 2, 1 por S. flexneri 3, 1 por S.flexneri 6 y 1 por S. boydii 2. De los resultados surge que se mantiene la prevalencia de S. flexneri y S. sonnei, como ocurre en Argentina, desde la dcada de los aos 90. Para Sh. flexneri el serotipo 2 sigue siendo el ms frecuente y los serotipos 3 y 1, al igual que en los dos trienios anteriores han superado ampliamente a S. flexneri 6. Es de destacar la presencia de aislamientos de S. flexneri no tipificables. El escaso nmero de aislamientos de S. boydii y S. dysenteriae, puede deberse a que se trata de serogrupos muy poco frecuentes en nuestro pas. A pesar de la subnotificacin de casos de shigelosis, ya que muchos aislamientos no son derivados al LNR, para su caracterizacin, se observa que Shigella spp. contina siendo un enteropatgeno que representa un riesgo de importancia para la salud pblica en nuestro pas. Esta situacin debera ser considerada, con el fin de tomar medidas de control y prevencin, tales como: provisin de agua segura, eliminacin sanitaria de excretas, educacin para la salud, especialmente en lo que se refiere a la higiene personal y de los alimentos, con el fin de disminuir la prevalencia de casos aislados de gastroenteritis y brotes comunitarios por Shigella spp.
neurosfilis resultaron 8 dils por USR; de acuerdo a Marra, la probabilidad de neurosfilis es mayor con ttulos >= 32dils determinados con RPR, sin embargo podemos inferir que la diferencia en dos ttulos puede deberse a que las determinaciones hechas con USR, resultan ttulos ligeramente menores en comparacin con RPR. Es de destacar que la VDRL actualmente continua siendo la nica prueba estandarizada y validada para ser utilizada en LCR.
P364 - 27462 ETIOLOGA DE LA DIARREA BACTERIANA AGUDA EN PACIENTES PEDITRICOS DE LA CIUDAD DE CRDOBA. CORTES, PAULO R; DICHIARA D (1); CONTRERAS FUNES, V (1); HUERTA, V (1); CAFFER, M I (2)
(1) HIGA San Martn, (2) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Los agentes etiolgicos causales de diarreas fueron estudiados en la poblacin atendida en este hospital entre el 1 de marzo de 2004 y el 30 de mayo de 2010. Un total de 4648 materias fecales (mf) fueron investigadas para Shigella spp. y Salmonella spp. y 3722 para E. coli O157:H7 y Campylobacter spp. Las mf fueron procesadas dentro de la media hora de ser remitidas, en los siguientes medios de cultivo: agar Levine, SS y SMAC y en caldo selenito. Tambin se inocul un tubo con medio de Cary Blair, que fue conservado a 4C por no ms de 4 das hasta la siembra en placas comerciales Campylosel e incubadas a 42 C en microaeroflia. Los aislamientos sospechosos fueron tipificados con pruebas bioqumicas convencionales y serotipificados con antisueros poli y monovalentes provistos por el Instituto Malbrn (IM). Todas las cepas de Salmonella fueron serotipificadas en el IM. Las frecuencias de aislamiento fueron: Shigella spp: 17,5 % (813/4648), Salmonella spp: 1,9% (86/4648), Campylobacter spp: 12,4% (463/ 3722) y E. coli O157:H7: 0,4 % (16/3722). En 7 pacientes se detect Yersinia enterocolitica como nico enteropa-tgeno. En 40 muestras se encontraron asociaciones entre dos especies bacterianas: Campylobacter spp. con: Shigella spp. (n=32), con E. coli O157:H7 (n=4) y con Salmonella spp. (n=2), tambin se encontr Salmonella spp. asociado con Shigella spp. (n=2). La especie predominante dentro del gnero Shigella fue S. flexneri seguida por S. sonnei y luego por S. dysenteriae con 544, 267 y 2 aislamientos respectivamente. Durante todo perodo estudiado S. flexneri predomin sobre S. sonnei (76% vs 24% respectivamente), salvo durante el ao 2010 donde se detect un desmesurado incremento en la frecuencia de S. sonnei respecto de S. flexneri (69% vs 31% respectivamente). Los serotipos de S. flexneri fueron los siguientes: 2, 3, 1, 6, 5 y 4 con 272, 181, 52, 18, 3 y 3 aislamientos respectivamente. Los 2 aislamientos de S. dysenteriae fueron serotipo 3. De los 86 aislamientos identificados como Salmonella spp. 28 fueron S. Enteritidis, 22 S. Typhimurium, 7 S. Newport, 4 S. Montevideo, 4 S. Agona, 2 S. Derby, 2 S. Saintpaul, 2 S. Oraniemburg, 2 S. Javiana y diversas serovariedades con 1 aislamiento cada una. La especie predominante dentro del gnero Campylobacter fue C. jejuni. Los principales agentes etiolgicos encontrados en las diarreas procesadas fueron: Shigella flexneri 2 (272 aislamientos), S. sonnei (267), S. flexneri 3 (181) y Campylobacter spp. (463). Las principales serovariedades dentro del gnero Salmonella fueron la Enteritidis y la Typhimurium. Se encontraron asociaciones entre dos entero-patgenos bacterianos en casi un 1% de las materias fecales procesadas Recomendamos la bsqueda rutinaria de Yersinia spp. que podra encontrarse subdiagnosticada. El porcentaje global de positividad del coprocultivo fue del 30,1%. Se hace indispensable la aplicacin de tcnicas moleculares para conocer en mayor profundidad la epidemiologa a nivel local de estos enteropatgenos.
P363 - 27451 NEUROSIFILIS: ESTUDIO DE LA REACTIVIDAD DE LA VDRL Y FTA-ABS EN LQUIDO CEFALORRAQUDEO Y SU ASOCIACIN CON EL TTULO DEL SUERO. DIAZ, MONICA (1); DIAZ, JORGE (1); MANCIOLA, ELIZABETH (2); GALARZA, PATRICIA (1)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn, (2) HIGA San Martn El diagnstico de la neurosfilis se basa en el examen clnico y en la evaluacin del lquido cefalorraqudeo (LCR). Las determinaciones que se le realizan son: la concentracin de glbulos blancos, de protenas y la prueba Venereal Disease Research Laboratory en placa (VDRL). sta es altamente especfica pero poco sensible, un resultado reactivo (R) en ausencia de contaminacin con sangre, es considerado diagnstico de neurosfilis. En cambio cuando resulta no reactiva (NR), se recomienda realizarle la prueba de Absorcin de Anticuerpos Treponmicos Fluorescentes (FTAabs), la cual es muy sensible pero inespecfica debido a la posible contaminacin con sangre. Un resultado negativo descartara la neurosfilis. En el 2003, el estudio multicntrico realizado por Marra y col., referente a las anormalidades del LCR en pacientes con sfilis, concluy que los ttulos en sueros iguales o mayores a 32 dils determinados con la prueba Rapid Plasma Reagin (RPR) indicaran una mayor probabilidad de la aparicin de neurosfilis. El objetivo de este trabajo fue estudiar la reactividad en LCR de la VDRL y FTAabs y el ttulo del suero correspondiente, en pacientes con sospechas de neurosfilis y de recin nacidos con sospechas de sfilis congnita. La determinacin de los ttulos de los sueros se realiz con la prueba VDRL modificada para suero no calentado (USR). Durante el perodo 2001-2010 ingresaron al CNR en ETS, INEI-ANLIS-Malbrn, 87 muestras de LCR, de las cuales hubo 71 pares de LCR/sueros y 16 LCRs sin sus correspondientes sueros. El rango de los ttulos de los 71 sueros que conformaron los pares, result entre NR y 512dils. Solamente 3 pares resultaron con LCR-VDRL reactivo, con ttulos en el suero de 8,16 y 64 dils. De los 87 LCRs, los resultados figuran en la tabla
N LCR (%) 6 (6,9) 64 (73,6) 17 (19,5) VDRL R NR NR FTAabs R NR R
En base a los resultados, podemos concluir que en el 6,9% de los casos se diagnostic la neurosfilis (VDRL: R, FTAabs: R). En el 73,6% de los casos se les descart neurosfilis (VDRL y FTAabs: NR). En el 19,5% no se pudo descartar, debido a que la VDRL result NR y la FTAabs: R. La FTAabs se considera un marcador predictivo negativo en LCR, por lo tanto su reactividad en los 17 casos no es concluyente; por otra parte la VDRL result NR y sto puede ocurrir an cuando la neurosfilis est presente. En este estudio, los ttulos de los sueros provenientes de los casos con
P365 - 27464 Streptococcus agalactiae: SIETE AOS DE RELEVAMIENTO EN UN HOSPITAL GENERAL DE AGUDOS. PEREZ, MARCELA; TOGNERI, ANA; PODESTA, LAURA; SANTISO, GABRIELA; RUGGIERI, DIEGO; GUSTINCIC, VIRGINIA
HIGA Evita, Lans Streptococcus agalactiae (EBH) es responsable de infecciones perinatales con alta morbi-mortalidad, y de infecciones
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invasivas en huspedes susceptibles. El objetivo es conocer la caracterstica de la poblacin en quienes se document EBH, el nmero de casos, la prevalencia segn la fuente de aislamiento y el perfil de sensibilidad (S) antibitica. Materiales y mtodos: se analiz retrospectivamente la informacin disponible en los registros microbiolgicos, desde enero de 2003 hasta diciembre de 2009, donde se document EBH. Las muestras se procesaron de acuerdo a procedimientos convencionales. El estudio de la portacin vaginal-anal (hva) en embarazadas, se implement en mayo de 2005 empleando caldo Todd-Hewitt con cido nalidxico (15 g/ml) y colistn (10 g/ml) y posterior subcultivo, segn describe la literatura. Todas las colonias de cocos (+), sospechosas de EBH se caracterizaron con las siguientes pruebas: catalasa (), hidrlisis de Bilis/esculina (-), hidrlisis de hipurato (+), factor Camp (+), serologa (+) para antgeno B de Lancefield. Se realiz la prueba de S antibitica por difusin en agar Mueler-Hinton con 5 % de sangre ovina segn normas del CLSI, empleando discos de penicilina, clindamicina, eritromicina y levofloxacina. Se investig el fenotipo de resistencia a macrlidos, lincosamidas y estreptograminas (MLS) empleando el D-test. Se realiz la CIM a penicilina (E-test) en aislados de sangre y LCR. Resultados: se rescat EBH de 561 muestras procesadas: 445 (79 %) para diagnstico microbiolgico y 116 estudios de portacin hva (21 %). Se documentaron 438 episodios de infeccin por EBH en 402 pacientes: 332 (83 %) mujeres y 70 (17 %) varones, distribuidos en los siguientes grupos etarios: 12 neonatos (3 %), 11 peditricos (3 %) y 379 (94 %) adultos. La prevalencia de EBH segn la fuente de aislamiento, excluidos las 116 muestras de portacin, fu (n): orina (239) 54 %, fondo de saco (123) 28 %, sangre (30) 7 %, supuraciones y abscesos (26) 5 %, placenta y restos ovulares (11) 2 %, abdominal (6) 1 %, LCR (5) 1 %, otros 2 % (conjuntiva, odo medio y uretra masculina). El 60 % de los pacientes infectados (242/402) present algn factor predisponente/enfermedad de base (n): embarazo (148), diabetes (58), prematurez (11), insuficiencia renal (9), tumor slido (7), litiasis (2), alcoholismo (2), VIH (2), hemodilisis (1), desnutricin severa (1), vejiga neurognica (1). Se realizaron 520 pruebas de S. La resistencia a eritromicina result 11,9 %: 43 aislados presentaron fenotipo MLSi (8,3 %), 16 MLSc (3 %), 3 fenotipo M (0,6 %) y 8 fenotipo L (1,5 %). En 284 EBH se test levofloxacina, 6 (2 %) resultaron resistentes. El 25 % (19/76) de todas las resistencias se detectaron por las pruebas de S efectuadas en aislados de los estudios de portacin. Todos los aislados fueron sensibles a penicilina (CIM90=0.03 g/ml). En nuestro medio EBH predomina en mujeres adultas, con mayor prevalencia en infecciones del sistema genitourinario, principalmente asociado a embarazo y diabetes. La resistencia a macrlidos supera levemente el valor esperado para Argentina, que sumada a la documentacin de resistencia a quinolonas, seala la importancia de realizar pruebas de S a todos los aislados. P366 - 27478 BACTERIEMIA POR BACILOS GRAM NEGATIVOS. IMPACTO DEL ANTIBIOGRAMA DIRECTO DEL FRASCO UTILIZANDO EL SISTEMA VITEK 2C EN LA CORRECTA ELECCIN INICIAL DE LA TERAPIA ANTIBITICA. CARRION, N A (1); SOLOAGA, R (1); PIDONE, J (1); MENDEZ ARANCIBIA (1), M; GIOVANAKIS, M (2); SUJEMECKI, A (2); BONDULICH, C (2); GUELFAND, L (1); MARGARI, A (1) (1) Hospital Naval. (2) Hospital Britnico. La sepsis por bacilos gram negativos tiene asociada una elevada mortalidad que ronda el 30-50 %. La demora en instaurar un tratamiento antibitico efectivo se relaciona con un incremento en la misma. El objetivo del trabajo fue determinar el impacto clnico en el cambio de teraputica producido por el antibiograma realizado directamente por medio del sistema Vitek 2C (Biomerieux, Francia) desde los frascos de hemocultivos positivos (Bact-Alert, Biomerieux, Francia). La mediana en horas para la deteccin de los episodios de bacteriemia fue de 14,4 hs (rango de 2,1-60 hs) y la mediana en horas para obtener un resultado de identificacin y sensibilidad con el sistema Vitek 2C a partir del frasco de hemocultivo fue de 8,7 hs (rango de 4 a 18 hs). Los resultados eran comunicados inmediatamente al mdico res-
ponsable. Se estudiaron 138 episodios de bacteriemia monomicrobiana por bacilos gram-negativos en 136 pacientes, 70 % de sexo masculino y 30 % de sexo femenino; la mediana de edad fue de 68,5 aos (rango de 1 a 94 aos). Las principales infecciones asociadas a los episodios de bacteriemia fueron: infecciones urinarias (47 %), infecciones de piel y partes blandas (9,4 %), infecciones abdominales (10 %), bacteriemia relacionada a catteres (13,7 %), neumona (6,5 %), diarreas (1,4 %), endocarditis (0,72 %) y origen desconocido (11 %). Un 43 % de los pacientes se encontraba inicialmente con tratamiento inadecuado o sin tratamiento para la bacteriemia. En 22 (15,9 %) episodios que correspondieron a pacientes que estaban sin tratamiento antibitico, el resultado directo permiti instaurar un antibitico adecuado desde el comienzo. En otros 18 (13 %) episodios llev al cambio de un antibitico -lactmico por otro -lactmico de menor espectro, en 28 (20 %) casos indic la necesidad de pasar de un -lactmico de menor espectro a otro de mayor actividad debido a la resistencia de la cepa. Finalmente en 21 (15 %) casos se cambi un antibitico -lactmico por una quinolona o colistin o viceversa; otros 9 pacientes fallecieron dentro de las 24 horas de obtenido el hemocultivo y no se pudo adaptar la terapia antimicrobiana. La mortalidad global fue del 23,5 %, en tanto que la correspondiente a los pacientes que recibieron tratamiento inicial adecuado fue del 16 % y la de los que recibieron tratamiento inadecuado fue del 32 % (p: 0,03). No hubo diferencia significativa en la mortalidad acorde a sexo ni a foco de la bacteriemia; Acinetobacter baumanni y Klebsiella pneumoniae se asociaron a mayor mortalidad (50 y 33 % respectivamente) que el resto de los grmenes (p<0,05). En los sobrevivientes, el resultado de la sensibilidad directa cambio el esquema en 72,1 % de los casos, en 24 % no hubo cambios porque el tratamiento era correcto y en 3,84 % se continuo con un antibitico no efectivo. Los resultados de sensibilidad realizados directamente desde el frasco permitieron la optimizacin de la terapia antimicrobiana dentro de las 24 horas de positivizacion de los hemocultivos en un alto porcentaje de los pacientes. P367 - 27483 INVESTIGACIN DE Staphylococcus aureus CON SENSIBILIDAD INTERMEDIA Y HETERO-INTERMEDIA A VANCOMICINA: APLICACIN DEL MTODO DE PREDIFUSIN CON TABLETAS Y DISCOS DE PAPEL. MOLLERACH, ANALIA (1); ALLIGNANI, LUCIANA (2); NAGEL, ALICIA (1); MENDOSA, MARIA ALEJANDRA (1); BODRONE, ROMINA (2); RAMIREZ, RODRIGO (2); MENDEZ, EMILCE DE LOS A (1) (1) Hospital Dr. J.M. Cullen. Santa Fe. (2) Especializando de la Carrera de Especializando en Bacteriologa Clnica. Fac. Bioqca y Cs. Biolgicas. UNL. Santa Fe. Introduccin: desde el ao 2008 el CLSI no recomienda la utilizacin del mtodo de difusin con discos para el estudio de la sensibilidad de vancomicina (VAN) frente a Staphylococcus aureus (SAU). Esto se debe a la pobre difusin de dicho antimicrobiano en el agar por lo que slo est normatizado la concentracin inhibitoria mnima (CIM) por el mtodo de dilucin o usando tiras con gradiente de concentracin de antibitico (TGA). El microbilogo dans Frolund-Thomsen desarroll la tcnica de predifusin (PD) con tabletas Neo-Sensitabs de ROSCO (TR) que se recomienda actualmente para la deteccin de SAU con sensibilidad intermedia (VISA) o htero-intermedia a vancomicina (h-VISA). Objetivos: i. investigar la presencia de VISA con TGA y h-VISA por el mtodo de PD con TR de VAN (30 g) y teicoplanina (TEI) (30 g) ya que esta ltima es la droga ms sensible para la deteccin de VISA y h-VISA. ii. aplicar la tcnica de PD utilizando discos de papel de VAN (30 g) y TEI (30 g), habitualmente disponibles en los laboratorios de nuestro pas. Materiales y mtodos: se estudiaron 40 SAU meticilino-resistente (SAMR) aislados de muestras clnicas a los que se les realiz: 1. CIM de VAN con TGA. 2. Placa screening con 4 g/ml de VAN en agar cerebro corazn. (VANBHI). 3. Mtodo de PD utilizando tabletas TR y discos de papel de VAN y TEI. Cepas controles: Staphylococcus aureus 43300 y Enterococcus faecalis ATCC 51299. Resultados: Todos los SAMR tuvieron una CIM a VAN <= 2 g/ml con TGA y no crecieron en la placa screening
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VANBHI. En el mtodo de PD se observ agrandamiento del halo tanto con las TR como con los discos de papel. Todas las cepas mostraron halos >= 23 para VAN y >= 21 para TEI con TR (punto de corte para deteccin de VISA y h-VISA: VAN <= 22 y TEI < 20) y >= 30 para Van y >= 29 para TEI con discos de papel. No se observaron cepas VISA con TGA ni h-VISA con PD. Conclusiones: se concluye que no se encontraron cepas VISA por ninguno de los mtodos estudiados ni tampoco h-VISA por el mtodo de PD. Se observ que la tcnica de PD con los discos de papel sera una buena opcin para la deteccin de estos microorganismos, por su disponibilidad en el laboratorio de microbiologa clnica. Nos proponemos continuar con el estudio de la sensibilidad de VAN con mayor nmero de cepas de SAMR utilizando ambas tcnicas de PD a los fines de establecer los puntos de corte de las zonas de inhibicin con discos de papel para detectar la emergencia de VISA y h-VISA.
P369 - 27493 ESTUDIO EPIDEMIOLGICO DE AISLAMIENTOS DE Achromobacter xylosoxidans subespecie denitrificans PROVENIENTES DE DOS HOSPITALES DE ROSARIO. BALLERINI, V (1); GUARDATI, C (1); LIMANSKY, A (2); ALMUZARA, M (3); VAY, C (3); MARTINICH, C (1); CASERIO, V (1)
(1) Lab. Microbiologa, Dpto Bioqumico, Municipalidad Rosario; (2) IBR (CONICET) Dpto Microbiologa, Fac. Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas, Universidad Nac. Rosario; (3) Lab. Bacteriologa, Fac. Farmacia y Bioqumica, Universidad Buenos Aires Achromobacter xylosoxidans subespecie denitrificans (Axd) es un bacilo gram-negativo aerbico que puede presentarse como contaminante y/o infectante en ambientes hospitalarios as como en humanos. Si bien se lo reconoce hoy como un patgeno nosocomial de creciente importancia, hay an escasos reportes acerca de la epidemiologa de las infecciones causadas por este microorganismo. Los mtodos fenotpicos constituyen una herramienta importante para caracterizar aislamientos bacterianos. Sin embargo, carecen de estabilidad y poder discriminatorio para definir las relaciones clonales entre los mismos. En contraposicin, los mtodos genotpicos resultan de utilidad para anlisis epidemiolgicos. Objetivo: analizar la diseminacin clonal de aislamientos de Axd provenientes de dos centros asistenciales de Rosario, as como la probable vinculacin epidemiolgica entre cepas de ambos nosocomios. Materiales: se incluyeron 21 aislamientos de Axd provenientes de muestras de sangre de pacientes internados en dos nosocomios (N1 y N2) pertenecientes a la red hospitalaria municipal de Rosario. Ocho de los mismos correspondieron a pacientes internados en N1 en el perodo 07/2009 03/2010 y los 13 restantes a pacientes internados en N2 en el perodo 08/2008 - 04/2010. La identificacin se efectu mediante API NE y VITEK II y los valores de concentracin inhibitoria mnima (CIM) frente a 17 antimicrobianos, mediante VITEK II. La relacin clonal de los aislamientos se efectu por PCR con oligonucletidos degenerados (OD-PCR) y Neighbor Joining, como mtodo de anlisis de grupos. Se incorporaron 7 cepas de Axd provenientes de centros asistenciales de Buenos Aires, como controles no relacionados epidemiolgicamente. Resultados: El ensayo de OD-PCR distingui 2 cepas diferentes en N1 (clones A y B). El clon A se present en 5 pacientes durante los primeros seis meses del perodo analizado (07/2009 - 01/2010). El clon B, presente en los 3 pacientes restantes, fue recuperado en 01/2010 y permaneci hasta el final del estudio (03/2010). En N2, OD-PCR mostr un nico clon (B) para los 13 pacientes durante el perodo evaluado (08/2008 - 04/2010). El anlisis de los valores de CIM para los 21 aislamientos no mostr diferencias entre los dos clones. Los resultados arrojados por los perfiles OD-PCR y el dendrograma, empleando los 2 clones locales y los 7 no relacionados, no slo evidencian la capacidad discriminatoria de la metodologa, sino que revelan que A y B se encuentran en diferentes subgrupos clonales. Conclusiones: la metodologa genotpica empleada permiti establecer la diseminacin intrahospitalaria en N1 del clon A (durante 6 meses) y sugiere adems que clon B reemplaz luego al clon A. Los resultados mostraron asimismo una elevada diseminacin del clon B en N2. La presencia de clon B en ambos nosocomios permite sospechar la diseminacin interhospitalaria entre N1 y N2 y remarca la importancia de estos estudios abordados desde la epidemiologa molecular.
P368 - 27489 COMPARACIN DE DOS INMUNOENSAYOS COMERCIALES PARA DIAGNSTICO DE INFECCIN POR Clostridium difficile. BERGER, M A; DOLCEMASCOLO, N; DOMECQ, P; FERNANDEZ CANIGIA, L
Microbiologa, Lab. Central, Hospital Alemn Lab. Domecq y Lafage La incidencia de infeccin por Clostridium difficile (CD) aument en los ltimos aos y se ha informado adems, un aumento en la morbimortalidad, lo que hace necesario el diagnstico rpido y preciso tanto para iniciar el tratamiento adecuado como para tomar las medidas de aislamiento preventivas. Objetivos: comparar el mtodo DIFF Quick Check Complete, Techlab, USA, para deteccin de toxina A y B (TECHtox) y antgeno de C. difficile (TECHAG) (inmunocromatogrfico), con el inmunoensayo, VIDAS C. difficile toxin A y B, Biomerieux SA, Francia (VIDAS). Materiales y mtodos: se analizaron 150 muestras sucesivas de materia fecal de pacientes con diarrea remitidas al laboratorio en el periodo de octubre de 2009 a mayo de 2010 para diagnstico de infeccin por C. difficile (ICD). Se detectaron las toxinas A y B de CD en materia fecal por los mtodos: VIDAS y TECHtox. Adems se detect antgeno (TECHAG) y se realiz el cultivo de materia fecal previo shock etanlico en agar Brucella suplementado con vitamina K, hemina y sangre lacada al 5% y en agar CFA (agar fructosa cefoxitina). Resultados: de las 150 muestras, 131 fueron negativas por VIDAS, 14 positivas (9,3%) y 5 dudosas (segn fabricante). En la tabla se muestra la comparacin de resultados positivos con los diferentes mtodos. El porcentaje de concordancia de positivos con TECHtox fue del 93% (13/14) y la de negativos 99% (130/131). Cuatro de 5 muestras con resultado dudoso fueron luego consideras positivas para el anlisis. El criterio de inclusin se bas en que el cut off de estas muestras fue 500 179,7, que no se superpone con el cut off de las muestras negativas 5025,5 y adems las 4 fueron cultivo positivo. Una muestra dudosa dio positiva por el mtodo TECH, tanto toxina como antgeno y 3 dieron TECHtox negativa y TECHAG positivo. La concordancia de positivos del mtodo TECHtox con el mtodo VIDAS en estas condiciones fue 78 % (14/18) y la de negativos 99 % (130/131). Una muestra dio positiva por TECHtox y negativa por AG, VIDAS y cultivo asumindose como falso positivo. El 90 % de los TECHAG (+) fueron positivos por cultivo. Y una muestra fue TECHtox negativa y positiva para los dems mtodos asumindolos como un falso negativo.
VIDAS+ Cultivo+ VIDAS+ TECHAG+ TECHtox+ Cultivo+ TECHAG+ TECHtox+
14 14 13 14
14 30 14 27
13 14 15 14
14 27 14 28
P370 - 27512 AISLAMIENTOS DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DE KPC (Klebsiella pneumoniae CARBAPENEMASE) EN LA PROVINCIA DE MENDOZA. BUCCIARELLI, RICARDO ADRIN; MARSONET, SILVINA (1); PUENTE, PABLO (2)
(1) Hospital Espaol Mendoza, (2) Hospital Militar Mendoza Introduccin: las carbapenemasas tipo Kpc fueron detectadas inicialmente en Estados Unidos en 2001 y en nuestro pas el primer aislamiento se report en Capital Federal en 2006. Estas betalactamasas se encuentran en elementos mviles/movilizables capaces de diseminarse a otras bacterias gam-negativas y poseen fuerte actividad hidroltica sobre penicilinas, cefalosporinas y
La concordancia entre ambos mtodos fue buena. Los valores dudosos por VIDAS aportan informacin valiosa, ya que pueden indicar bajos niveles de toxina, aunque sera necesario confirmarlas por otro mtodo. La utilidad de la deteccin de antgeno debera ser evaluada en el contexto clnico.
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monobactames, quedando restringidas las alternativas teraputicas a agentes no betalactmicos. Son inhibibles por cido clavulnico, tazobactam y por APB (cido 3-aminofenil bornico), pero no por sulbactama. Objetivo: reportar aislamientos de Klebsiella pneumoniae productora de Kpc en el Hospital Espaol de Mendoza, que hasta el momento son los nicos en la provincia. Materiales y mtodos: se realiz un estudio descriptivo-retrospectivo en el periodo comprendido entre octubre 2008 y abril 2010. Los datos fueron obtenidos de los registros de bacteriologa y de las historias clnicas de los pacientes. La tipificacin se realiz con sistema automatizado VITEKR (Biomrieux) y las pruebas de sensibilidad por difusin (mtodo de Kirby y Bauer) con interpretacin segn tablas del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) 2009. Como herramientas fenotpicas para sospecha y deteccin de Kpc se utiliz el algoritmo propuesto por el Servicio Antimicrobianos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Resultados: se aisl Klebsiella pneumoniae productora de Kpc en 7 pacientes, 5 de ellos internados en unidad de cuidados intensivos y 2 en clnica mdica. El nmero de aislamientos totales fue 16: 6 en BAL (lavados broncoalveolar), 3 en lquido asctico, 5 en urocultivo y 2 en hemocultivos. Todos los aislamientos presentaron el siguiente fenotipo: - resistencia a: imipenem, meropenem, ertapenem, cefotaxima, cefepime, ceftacidima, ampicilina-sulbactam, - sensibilidad intermedia a: amicacina. - sensibilidad a: minociclina, tigeciclina, colistin. - Sinergia imipenem-EDTA: negativo. - Sinergia imipenem-APB: positivo. Se confirm la presencia de carbapenemasa en todas las cepas remitidas y las mismas fueron identificadas a nivel molecular por el Servicio Antimicrobianos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbran como de la familia Kpc. La presencia de enterobacterias productoras de carbapenemasas tipo Kpc en Mendoza es una realidad, y considerando que en Argentina en el primer cuatrimestre de 2010 se ha observado un incremento del 800 % de los casos confirmados con respecto al mismo cuatrimestre del ao anterior, la presencia y permanencia en cualquier institucin de salud de este tipo de microorganismos panresistentes debido a la presencia de mecanismos de resistencia transferibles, deben ser considerados de alto riesgo. Por lo que resulta imprescindible el esfuerzo conjunto de todo el equipo de salud para la rpida deteccin y contencin de los mismos.
dilucin en caldo (determinacin de CIM y CBM) frente a 6 cepas de coleccin (ATCC): Escherichia coli 25922 (1), Escherichia coli 35218 (2), Enterococcus faecalis 29212 (3), Staphylococcus aureus 29213 (4) meticilino resistente, Staphylococcus aureus 25923 (5) y Pseudomonas aeruginosa 27853 (6). Los EA de LA, LR y CR y el EHA de las corolas de lapacho amarillo presentaron valores de CIM de 5000 ppm para las cepas 1, 2, 3, 4 y 5, y 2500 ppm para Pseudomonas aeruginosa 27853. Se determin el modo de accin del extracto con mayor actividad antimicrobiana sobre las cepas ms sensibles, mediante la curva de muerte. El subextracto cloroformico de LA fue el ms activo de todos los extractos y subextractos frente a dos cepas ATCC Staphylococcus aureus 25923 y Pseudomonas aeruginosa 27853. El valor de la CIM para ambas cepas fue de 300 ppm y la CBM 400 ppm. Mediante las curvas de muerte de estas 2 cepas se observ que entre las 4 y 6 horas el log de ufc/ml disminuy en 6 log para la primera y en 7 log para la segunda, al tratarlas con una concentracin de 600 ppm de SE clorofrmico de corolas de lapacho amarillo. Todos los extractos y subextractos presentaron actividad antimicrobiana frente a las seis cepas ATCC, siendo los microorganismos ms sensibles Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. El subextracto cloroformico de lapacho amarillo fue el ms activo de los ensayados frente a las dos cepas mencionadas, presentando un efecto bactericida a 600 ppm. Estos resultado representan una alternativa al tratamiento convencional con antibiticos una vez demostrada su inocuidad.
P372 - 27529 ANALISIS BAYESIANO DE TRES PRUEBAS SEROLOGICAS PARA EL DIAGNOSTICO DE LA BRUCELOSIS CANINA. DI LORENZO, CECILIA ; RISSO, MIGUEL; RISSO, PAULA; CABRAL , MARTA; MICELI, PAOLA; MICELI, GRACIELA
Facultad de Ciencias Veterinarias. UNLP La perspectiva bayesiana basada en una razn de verosimilitud ponderada, establece una relacin de sensibilidad-especificidad, dependiente de una probabilidad pre prueba o estado anterior. El objetivo del trabajo fue, analizar desde esta perspectiva, tres pruebas diagnosticas de brucelosis canina. Se utilizaron 125 casos remitidos por profesionales de la actividad privada entre los aos 2003 y 2008, provenientes de caninos naturalmente infectados. Anlisis y tratamiento de los datos: 1) probabilidades condicionales a priori: P(+/E) = sensibilidad, P(-/E) = falso negativo, P(+/NE) = falso positivo, P(-/NE) = especificidad. 2) probabilidades condicionales a posteriori o Bayesianas: P(E/+) = probabilidad posterior positiva de enfermedad (PPPE), P(E/-) = probabilidad posterior negativa de enfermedad (PPNE), P(NE/+) = probabilidad posterior positiva de no enfermedad, P(NE/-) = probabilidad posterior negativa de no enfermedad, LR+ = razn de verosimilitud positiva = (sensibilidad)/(1-especificidad), LR- = razn de verosimilitud negativa = (1-sensibilidad) / (especificidad). 3) para estimar la asociacin de eventos usamos una prueba de diferencia de proporciones Bayesiana, PDPBZ, basada en puntaje Z; partiendo de una distribucin a priori no informativa. Sobre los parmetros de la distribucin posterior construimos el intervalo de credibilidad Bayesiano del 95% (ICB95%) y luego una prueba de Z. 4) usamos una prueba de contraste de hiptesis Bayesiana (PCHB), para comparar valores estimados de PPNE. Se consider un nivel de significacin (?) del 5% como significativo (p<0.05). Resultados: la prueba de asociacin de eventos en las tres pruebas IFI, PARP, ID, fue altamente significativa, PDPBZ, (P < 0,01). La prueba IFI, present una razn de verosimilitud positiva (LR+) = 29,33, que da lugar a una alta PPPE = 0,96 (ICB95% = 0,870 1,000). Una razn de verosimilitud negativa (LR) = 0,02, que da lugar a una muy baja PPNE = 0,02, (ICB95% = 0,000 0,077). Estos valores estimados la colocan jerrquicamente en un primer lugar. La prueba PARP, present una LR+ = 27,60, que da lugar a una alta PPPE = 0,98 (ICB95% = 0,947 1,000). Una LR- = 0,08, que da lugar a una, intermedia, PPNE = 0,15 (ICB95% = 0,072 0,242). Jerrquicamente se ubica en un segundo lugar. La Prueba IDE, present una LR+ = 27.,94, que da lugar a una alta PPPE = 0,97 (ICB95% = 0,886 1,000). Una LR- = 0,45, que da lugar a una alta, PPNE = 0,38 (ICB95% = 0,278
P371 - 27515 EFECTO ANTIMICROBIANO DE FLORES Y CORTEZA DE ESPECIES DEL GNERO Tabebuia. LIZARRAGA, EMILIO; ANNAN, SOLEDAD; CANGEMI DE GUTIERREZ, ROSA DEL VALLE; PEROTTI, MARINA; GAUDIOSO DE ALLORI, MARA CRISTINA; CECILIA DE CASTILLO, MARTA
Universidad Nacional de Tucuman Las plantas medicinales, sin lugar a dudas, han conformado la base de los principales productos para la salud desde pocas antiguas. En los ltimos aos se ha incrementado ampliamente el uso de estas sustancias naturales en el tratamiento de diferentes enfermedades (o patologas), fundamentalmente por su escasa toxicidad, bajos costos de produccin y en respuesta a la creciente adquisicin de resistencia de ciertos microorganismos frente a agentes antimicrobianos utilizados comercialmente, que derivan de sntesis qumica. Dentro de las especies utilizadas se encuentra el gnero Tabebuia impetiginosa (lapacho rosado) y Tabebuia ochracea (lapacho amarillo) pertenecientes a las zonas tropicales de Amrica extendindose desde Mjico hasta Argentina. El uso medicinal del gnero Tabebuia (lapacho) es muy comn en toda la regin, atribuyndosele un sinnmero de propiedades, entre las que se destacan: antitumoral, antiinflamatoria, antimicrobiana, antioxidante e inmunoestimulante. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antimicrobiana de extractos alcohlicos (EA), hidroalcohlicos (EHA) y subextractos (SE) de corteza (CR) y corolas de lapacho rosado (LR) y lapacho amarillo (LA) que crecen en la ciudad de San Miguel de Tucumn, frente a cepas ATCC y diferentes bacterias patgenas. Se prepararon EA con etanol 96, EHA con etanol 80 y 50 y SE con solventes de diferente polaridad: hexano, cloroformo y acetato de etilo. La actividad antibacteriana se determin in vitro mediante el mtodo de
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0,488). Jerrquicamente se ubica en un tercer lugar. Los valores estimados de PPNE, presentados como falsos negativos (FN) y analizados usando una PCHB, presentaron diferencias significativas (P<0,05). Se desprende de estos resultados que, si bien las tres pruebas diagnsticas, presentan una adecuada especificidad y sensibilidad, la probabilidad posterior negativa de enfermedad evidencia valores significativamente crecientes. Bajos para IFI, intermedios para la PARP y altos para la ID. El enfoque bayesiano de las pruebas diagnosticas permitir al mdico veterinario, seleccionar ms naturalmente la prueba diagnostica adecuada, de modo de minimizar la incertidumbre propia del diagnostico clnico.
FIBROSIS QUSTICA. ODERIZ, SEBASTIAN (1); BETTIOL, MARISA (1); VESCINA, CECILIA (1); DIEZ, GRACIELA (2); GATTI, BLANCA (1)
(1) Sala de Microbiologa, Laboratorio Central. (2) Servicio de Neumonologa. Hospital sup Sor Mara Ludovica, La Plata Introduccin: el Staphylococcus aureus meticilino resistente (SaMR) es un patgeno comunmente aislado del tracto respiratorio de pacientes con fibrosis qustica (FQ). La resistencia a meticilina en estos pacientes ha aumentado progresivamente a lo largo de los aos: 4,2% en 1987, 11% en 1993 y 44% en 2003 (datos de nuestro centro). Los Staphylococcus aureus meticilino resistentes comunitarios (SaMR-AC) son patgenos emergentes en el mundo. Provocan infecciones leves (celulitis) o graves (neumona necrotizante) y pueden ocasionar la muerte del paciente, pero han sido poco descriptos en muestras respiratorias de pacientes con FQ. Se caracterizan por la presencia del gen mecA que se encuentra en un elemento gentico mvil o cassette de resistencia (SCCmec) tipo IV y/o V. Posee diversos factores de virulencia, entre los que se destaca la produccin de una toxina denominada leucocidina de Panton Valentine (PVL). Esta leucocidina posee dos componentes codificados por dos genes cotranscriptos, lukS-PV y lukF-PV y puede causar destruccin de leucocitos y necrosis tisular. Objetivos: tipificar por mtodos fenotpicos y moleculares las cepas Sa aisladas de pacientes con FQ, detectar los genes codificantes de la PVL y caracterizar molecularmente las cepas de SaMR con PVL positivas. Materiales y mtodos: se tomaron para este estudio 91 cepas de S. aureus aislados de 91 pacientes con FQ, durante un perodo de 6 meses (abril-octubre de 2008). Se realiz antibiograma por el mtodo de difusin para determinar la meticilino resistencia segn normas del CLSI. Posteriormente se realiz a cada aislamiento una PCR mltiple cuyos targets fueron: el gen 16S rRNA especfico del gnero Staphylococcus, los genes lukS/F-PV y el gen mecA, determinante de la meticilino resistencia. En los aislamientos lukS/F-PV y mecA positivos fue caracterizado y subtipificado el tipo de SCCmec (Zhang K., et al.2005. JCM. 43:5026-5033) Resultados: de los 91 aislamientos de Sa, 33 (36,2%) fueron meticilino resistentes y 58 (63,7%) fueron meticilino sensibles, por el mtodo de difusin y confirmados por PCR (presencia del gen mecA). Slo 4 cepas (4,4%) tuvieron PVL (+): 1 meticilino sensible y 3 resistentes a meticilina (sin resistencia acompaante). Las cepas meticilino resistente poseian el SCCmec tipo IV, compatibles con el Sa comunitario. Es notable el aumento de la meticilino resistencia en S. aureus aislados de pacientes con FQ, siendo en el perodo estudiado, del 36,2%. El Sa que predomina en nuestra poblacin de pacientes con FQ no es el comunitario, pero la aparicin del mismo en tres pacientes debe alertar sobre un posible cambio en la epidemiologa molecular de este microorganismo en estos pacientes, pudiendo tener repercusin en las presentaciones clnicas. Enfatizamos la importancia de vigilar las infecciones por S. aureus adquiridas en la comunidad en los pacientes FQ.
P373 - 27535 MENINGITIS POR Neisseria meningitidis GRUPO CAPSULAR 29E EN UN PACIENTE CON LUPUS. EFRON, A (1); PAREDES, M (2); MOSCOLONI, M (1); GAGETTI, P (1); CORSO, A (1); REGUEIRA, M (1)
(1) Departamento Bacteriologa. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS Dr. C. Malbrn (INEI). (2) Sanatorio Allende. Crdoba. Introduccin: el aislamiento de Neisseria meningitidis (Nm) grupo 29E de muestras clnicas de enfermedad invasiva ha sido reportado infrecuentemente y su patogenicidad es incierta. Los casos descriptos en la literatura de enfermedad invasiva son escasos, dos casos primarios (meningitis y meningococcemia) en pacientes con mieloma mltiple y dos casos de meningitis secundarios a otitis en paciente inmunocompetente. Est usualmente asociado al estado de portador. Objetivo: presentar un caso de meningitis por un serogrupo infrecuente de Nm en un paciente inmunocomprometido Caso clnico: paciente de 36 aos, sexo masculino, oriundo de la localidad de Ojo de Agua, provincia de Santigo del Estero. Antecedentes de lupus, insuficiencia renal crnica terminal secundaria a nefropata lpica (glomerulonefritis lpica clase IV con semilunas, fibrosis en el 60% de los glomrulos, fibrosis intersticial y atrofia tubular), monoreno de nacimiento, hipertensin arterial, hemodilisis desde hace dos aos. Tratado con corticoides. En la semana previa a la internacin comienza con artralgia de rodilla derecha que migra a mueca derecha, por lo que se aumenta la dosis de corticoides. El da antes de la internacin comienza con cefalea occipital pulstil de intensidad progresiva, asociada a malestar general, fiebre, fotofobia y rigidez de nuca. Se diagnostica sindrome menngeo y se deriva a un centro de Crdoba. Al ingreso el paciente se encuentra vigil, orientado en tiempo, espacio y persona. Se realiza TAC, anlisis de sangre y puncin lumbar. Se inicia tratamiento con meropenemvancomicina. A las 72 hs se informa desarrollo de Nm en el LCR y se rota a ceftriaxona con buena evolucin. TAC normal; resultados de laboratorio: GR 2950000, Hto 25%, Hb 8,13g%, GB 15500 (95% PMN), VSG 99 mm, glucemia 138 mg%. LCR: blanquecino, opalescente, protenas 183 mg%, glucosa 0,18 mg%, GB 5100 (80% PMN); coloracin de Gram: no se observan microorganismos; cultivo: desarrollo de diplococos gram-negativo, oxidasa positivo. El aislamiento se deriva al INEI para su caracterizacin. El grupo capsular se determin por PCR para deteccin de grupos B, C, Y y W135. Debido al resultado negativo se realiz PCR para deteccin de grupos 29E, X y Z, con resultado positivo para grupo 29E. Se evalu la sensibilidad a antibiticos por dilucin en agar segn CLSI. La cepa fue sensible (CIM mg/l) a: penicilina (0,25); ceftriaxona (0,002); rifampicina (0,015); ciprofloxacina (0,008); cloranfenicol (0,5) y tetraciclina (0,25). Hemos presentado un caso de enfermedad invasiva por Nm 29E, en un paciente inmunocomprometido. Cepas de ese serogrupo han sido aisladas principalmente en estudios de portacin. Dicho serogrupo slo puede ser identificado por sueros monoespecfcos o por PCR, habitualmente no disponibles en los laboratorios clnicos de microbiologa. Es importante continuar con la vigilancia de enfermedad invasiva por Nm para detectar serogrupos emergentes.
P375 - 27551 PATGENOS BACTERIANOS AISLADOS EN PACIENTES CON FIBROSIS QUSTICA: AISLAMIENTO CONVENCIONAL Y DETECCIN POR PCR. DELGADO, GABRIELA; GOBATTO, NADIA (1); GONZALEZ, MARIA LAURA (2); RUBIO MAS, MIGUEL (2); TREJO, ANA (2); VALDEZ, JUAN CARLOS (1)
(1) Universidad Nacional de Tucumn, (2) Hospital del Nio Jesus La fibrosis qustica (FQ) es una enfermedad gentica que se caracteriza por la afeccin pulmonar con infecciones producidas por Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y complejo Burkhloderia cepacia (BCC). Los aislamientos e identificacin con medios de cultivos convencionales no siempre son los adecuados debido a los diferentes requerimientos nutricionales de los patgenos, por lo cual es importante el uso de tcnicas moleculares. El objetivo de este trabajo fue analizar la frecuencia de patgenos aislados, por cultivos bacteriolgicos y PCR, en pacientes con FQ que concurren al servicio de neumonologa en el Hospital del Nio Jess. Se procesaron 42 muestras obtenidas por
P374 - 27542 ESTUDIO DE LA METICILINO RESISTENCIA Y LA PRESENCIA DE LA LEUCOCIDINA DE PANTON-VALENTINE EN Staphylococcus aureus AISLADOS DE PACIENTES CON
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expectoracin profunda, de pacientes que concurrieron al servicio de neumonologa durante noviembre 2009 a mayo 2010. Se consideraron como muestra representativa, segn los criterios de Murria a aquellas que presentaron un recuento al microscopio ptico (10x) de >10 clulas epiteliales escamosas por campo y <25 polimorfonucleares. La siembra se realiz por la tcnica semicuantitativa, utilizando el mtodo de cuatro cuadrantes en agar sangre, chocolate en 5% de CO2 a 37 C por 24-48 hs y medios selectivos como Levin y BCSA (agar selectivo para Burkholderia cepacia) incubndose por 4 das a 37C. El aislamiento e identificacin se realizo a travs de propiedades bioqumicas y confirmados por el mtodo comercial API 20NE Biomerieux. La tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se llevo a cabo para P. aeruginosa por PCR Multiplex con primers dirigidos a los genes oprl y el gen eta. Para BCC se realizo una PCR simple con primers especficos para el gen recA y el gen mecA para S. aureus meticilino resistente (SAMR). Los resultados obtenidos del total de 42 muestras fue: 42% (22) P. aeruginosa, 29% (15) S. aureus, 13% (7) BCC, 6% (3) Streptococcus pneumoniae y 4% (2) S. aureus meticilino resistente. En cuanto a los mtodos empleados, de las 22 muestras de P. aeruginosa la PCR fue positiva en 6 muestras que no presentaron desarrollo en los medios cultivos utilizados. Para las 7 muestras de BCC, 4 de ellas se detectaron por PCR con cultivos negativos. Sin embargo en el caso de SAMR todas las muestras resultaron positivas por ambos mtodos (p<0,001). En conclusin, P. aeruginosa es el patgeno mas frecuentemente aislado en nuestros pacientes, seguido de S. aureus y BCC, encontrndose un bajo porcentaje de SAMR. Con respecto a las mtodos empleados, la tcnica de PCR resulta ser ms especfica y sensible para el diagnostico e identificacin de estos patgenos a partir de las muestras de esputo para ser aplicado por el laboratorio de bacteriologa en el diagnostico y seguimiento de los pacientes con FQ.
Se aislaron n=81 y n=49 MO con gran variedad de especies, n=28 y n=29 en [A] y [B]. En [B] 1. menor frecuencia de aislamientos de cocos gram (+) (61,7% vs. 46,9%) a expensas de S. aureus y S. epidermidis; 2. el aumento de enterobacterias (16,1% vs. 26,5%) y de levaduras y hongos (3,7 % vs. 8,2%); los bacilos gram (-) no fermentadores se mantuvieron similares (17,3% vs. 16,3%). Resistencias (R) destacables: 9,1% y 0% de SAMR y 60 % y 100% de ECN-MR en [A] y [B]; 1 E. faecium [A] y 1 P. damnosus VANR [B]. Slo 1 E. coli BLEE. En los perodos se detectaron P recidivantes (6 y 1), refractarias (5 y 4); repetidas 2 en [A] y 1 reinfeccin por C. albicans en [B]; 4 ptes en [A] y en [B] fallecieron por P (15,38% y 13,33%). Conclusiones: entre ambos perodos hubo: 1. disminucin significativa de la proporcin de ptes con P; 2. aumento significativo de la PLP al cabo del 1er ao de tratamiento; 3. mltiples fueron los MO causales de las P lo cual amerita la necesidad del estudio microbiolgico de todos los epi para establecer el esquema teraputico adecuado y minimizar la morbilidad; 4. en nuestra poblacin continua siendo elevada la mortalidad asociada a las P.
P377 - 27557 ESTADO DE SITUACIN DE LOS Streptococcus pneumoniae SEROTIPO 6A Y 6C EN AISLAMIENTOS PEDITRICOS DE ARGENTINA ANTES DE LA INCORPORACIN DE LA VACUNA CONJUGADA AL CALENDARIO NACIONAL: 19932009. FOSSATI, S (1); GAGETTI, P (2); RODRIGUEZ, M (2); MOSCOLONI, M (1); CORSO, A (2); REGUEIRA, M (1); GRUPO SIREVA II, ARGENTINA (3)
(1) Servicio Bacteriologa Clnica. (2) Servicio Antimicrobianos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. (3) OPS Introduccin: en 2007 se describe en Streptococcus pneumoniae (Spn) el serotipo 6C que hasta el momento era serolgicamente indiferenciable del serotipo 6A por la tcnica de Quellung. Los loci biosintticos de los serotipos 6A y 6C son idnticos excepto por la presencia de los genes wciN que codifican para distintas glicosil tranferasas. Actualmente se ha reconocido el serotipo 6C en varios pases del mundo. En Estados Unidos se ha observado un aumento en la prevalencia de enfermedad invasiva causada por Spn serotipo 6C y una disminucin de los serotipos 6A y 6B. Objetivo: evaluar el estado de situacin de los Spn serotipo 6A y 6C en aislamientos peditricos de Argentina antes de la incorporacin de la vacuna conjugada al calendario nacional. Materiales y mtodos: entre los aos 1993 y 2009, en el marco de la vigilancia nacional de Spn se colectaron 2891 aislamientos de sitio estril, en pacientes =6 aos, con enfermedad invasiva. De los 2891 aislamientos 85 fueron serotipificados como 6A/6C (2,9%). De estos, 83 estuvieron disponibles para la diferenciacin entre los serotipos 6A y 6C. Se realiz la PCR-mltiple segn protocolo del CDC (http//www.cdc.gov/ncidod/biotech/ strp/pcr.htm) con la siguiente modificacin: se reemplaz el primer especfico de grupo 6 y el control interno cpsA por Lyt. Se evalu la sensibilidad a antibiticos por el mtodo de dilucin en agar y se interpret segn CLSI M100-S19. Resultados: la prevalencia de serotipo 6A/6C en tres perodos fue: 1993-99: 3,3%; 2000-04: 2,1% y 2005-09: 3,5%. De los 83 Spn estudiados por PCR, 53 fueron aislados de sangre, 20 de LCR, 7 de lquido pleural y 3 de artritis; 33 se aislaron de pacientes femeninos, 47 masculinos y 3 sin dato. Ocho de 83 (9.6%) Spn fueron identificados como 6C. La distribucin anual de 6C y 6A (n 6C/n 6A) fue: 1993 (0/0), 1994 (0/3), 1995 (3/6), 1996 (0/2), 1997 (1/3), 1998 (0/5), 1999 (0/8), 2000 (1/4), 2001 (0/2), 2002 (0/2), 2003 (0/3), 2004 (0/6), 2005 (0/7), 2006 (0/5), 2007 (0/7), 2008 (1/13), 2009 (2/7). Los 8 Spn 6C fueron aislados 6 de sangre y 2 de lquido pleural, de 5 pacientes masculinos y 3 femeninos. La resistencia% (6C/6A) fue: penicilina G meningitis (CIM 0.12 mg/l) 12/25; cefotaxima meningitis 0/3, meropenem 0/4; eritromicina 12/23; rifampicina 0/1; trimetoprima-sulfametoxazol 50/63, y tetraciclina 38/25. No hubo aislamientos resistentes a amoxicilina, cloranfenicol, ofloxacina y vancomicina. En Argentina hemos detectado Spn serotipo 6C, representando aproximadamente el 10% de los aislamientos previamente caracterizados como serotipo 6A. Si bien la frecuencia de ambos serotipos es baja, es importante con-
P376 - 27552 PERITONITIS EN DILISIS PERITONEAL. NDICES DE SEGUIMIENTO EN DOS PERODOS CONSECUTIVOS EN UN HOSPITAL UNIVERSITARIO. SANTOIANNI, J E (1); BARONE, R (2); DE PAULIS, A N (1); GUTIERREZ, M A (1); AGUIRRE, C (2); PREDARI, S C (1)
(1) Microbiologa, (2) Nefrologa. Instituto de investigaciones mdicas A. Lanari-UBA Introduccin: la peritonitis (P) ha sido la complicacin ms importante de la dilisis peritoneal crnica (DPC) y la causa ms frecuente de exclusin del programa. Objetivo: evaluar ndices de seguimiento de las P en DPC en 2 perodos consecutivos de 10 aos, tras avances de la tcnica dialtica y aplicacin de un programa de educacin mdica continua y de los ptes. Materiales y mtodos: perodo A [A] (01-1989 a 12-1998): 26 ptes, 7 diabticos (26,92%); 15 (57,69%) mujeres y 11 (42,31%) varones. Edad media: 57,71 16,24 aos, rango: 29-89. Tratamiento: 451,6 meses-pte con una media de 29,6 16,47. Entre 1989-96 se utiliz el sistema estndar, a partir de 1994 sistema de bolsas gemelas (SY) y desde 1996 todos los ptes utilizaron el sistema SY para DPCA y DPA. Perodo B [B] (01-1999 a 12-2008): 30 ptes, 2 diabticos (6,67%); 23 (76,66%) mujeres y 7 (23,34%) varones. Edad media: 54,22 20,53 aos, rango: 18-86. Tratamiento: 893 meses-pte, media 29,8 21,6. Se estudiaron: tasas de P, frecuencia y permanencia libre de P (PLP) al primer ao, los microorganismos (MO) causantes de P, el drop-out por falla de la tcnica y la mortalidad por P. Los episodios (epi) se estudiaron microbiolgicamente segn Vas y col. Resultados: [A]: el 88,4% de los ptes present P con 2,542,31 eventos/pte. Tasa P: 1,73 epi/pte-ao y frecuencia: 1 epi/6,9 meses-pte. [B]: el 50% de los ptes tuvo P con 1,62,7 eventos/pte. Tasa P anual: 0,65 y frecuencia: 1 epi/18,6 meses-pte. p=0,004 OR=7,66. El 38,5 % de los ptes de [A] y el 73,3% de [B], PLP en el 1er ao de tratamiento, p=0,01. [A]: 65 epi de P. Sensibilidad (S) del mtodo microbiolgico 96,92% y S de Gram 40%. El 86,15% de los epi fue mono y el 13,85% polimicrobiano (2 a 5 MO). Infecciones del sitio de salida (ISS): 5/35 (14,3%) relacionadas a P. [B]: en 46 epi, S cultivos: 97,83% y S Gram: 28,26%. El 89,13 de los epi fue mono y el 8,7% polimicrobiano (2 MO). Slo 2/26 ISS (7,7%) se relacionaron a P.
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tinuar con la vigilancia nacional para poder detectar posibles cambios en la distribucin de serotipos y sensibilidad antibitica en la era de las nuevas vacunas conjugadas.
P378 - 27577 ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS EN AISLAMIENTOS DE Campylobacter spp. PROVENIENTES DE MATERIA FECAL DE PACIENTES PEDITRICOS. CORTES, PAULO R (1); CONTRERAS FUNES, V (2); HUERTA, V (2)
(1) Hospital Peditrico, (2) HPNJ La campylobacteriosis es un importante problema de la salud pblica de pases tanto desarrollados como en aquellos en vas de desarrollo, donde Campylobacter jejuni y Campylobacter coli son las dos especies ms importantes que provocan gastroenteritis aguda asociada al consumo de alimentos y agua contaminados. En un estudio previo realizado en este Hospital, Campylobacter spp. ocup el segundo lugar de prevalencia en la etiologa de la diarrea bacteriana aguda precedido por Shigella spp. (11,4% vs 14,4% respectivamente). Si bien la diarrea se autolimita en la gran mayora de los casos, cuando esto no ocurre debe instaurarse un tratamiento antimicrobiano. Las drogas de eleccin para la campylobacteriosis son los macrlidos aunque tambin suele utilizarse ciprofloxacina. Debido a la emergencia de cepas resistentes a uno o ambos de estos antimicrobianos, le necesidad de realizar pruebas de susceptibilidad de rutina se ha convertido en una importante herramienta para un apropiado tratamiento antimicrobiano, cuando este se hace necesario. Tambin se detect coexistencia de Campylobacter spp. con Shigella spp. en un 6,9% de los pacientes, lo que lleva a pensar en un tratamiento antimicrobiano efectivo para ambos enteropatgenos en estos pacientes. Para tal efecto se evalo en 200 cepas de Campylobacter spp., aisladas de materia fecal de pacientes peditricos, la susceptibilidad antibitica a los siguientes antibiticos: nitrofurantoina (NIT), ciprofloxacina (CIP), tetraciclina (TET), gentamicina (GEN) y eritromicina (ERI) por la metodologa de difusin en agar siguiendo las recomendaciones del CLSI. Los porcentajes de resistencia a los antimicrobianos ensayados fueron los siguientes: CIP: 69,5%, TET: 34,5%, ERI: 6,5%, GEN: 1% y NIT: 0%. El 95% de los aislamientos fueron tipificados por pruebas convencionales (movilidad, Gram, catalasa, oxidasa, hidrlisis del indoxil acetato e hipurato) como Campylobacter jejuni y el 5% restantes como Campylobacter no-jejuni. La campylobacteriosis es una de las principales causas de gastroenteritis bacteriana aguda en los pacientes peditricos estudiados. La droga de eleccin en pediatra, en caso de ser necesaria, son los macrlidos, los cuales presentaron un bajo porcentaje de resistencia (6,5%) en Campylobacter spp., lo que sigue avalando su uso en la poblacin en estudio, de todos modos se hace necesario un monitoreo de la susceptibilidad a este grupo de antibiticos. La ciprofloxacina es un antibitico no utilizado de rutina en pediatra, sin embargo el alto porcentaje de resistencia encontrado en el presente estudio (69,5%), refleja su uso indiscriminado en medicina veterinaria (criaderos de pollos), situacin ya descripta a nivel mundial en diversos pases. En situacin similar se encuentra la tetraclina (cuyo uso est contraindicado en pediatra). No se detect ningn aislamiento resistente a NIT (dato ya descripto para Shigella spp.) lo que avalara su uso para tratar la campylobacteriosis en ausencia o en presencia de Shigella spp.
estos antimicrobianos. En un estudio previo de este mismo grupo de trabajo en el perodo 2005-2008 se observ una tendencia en la disminucin de la sensibilidad (S) y se hall una correlacin entre cido nalidxico (NAL) y ciprofloxacina (CIP) que permiti considerar a NAL como predictor de la resistencia a CIP. Objetivos: el objetivo del presente trabajo fue continuar con la vigilancia de la sensibilidad a NAL y CIP en enterobacterias aisladas de urocultivos. Materiales y mtodos: se estudiaron 1389 enterobacterias aisladas de muestras de orina de pacientes que concurrieron al Hospital J. M. Cullen durante el perodo comprendido entre el 1 de Junio de 2008 y el 30 de Septiembre de 2009. Se determin la S a NAL (30 g) y CIP (5 g) empleando el mtodo de difusin con discos (CLSI). Resultados: de las 1389 cepas aisladas; 1035 (74,5%) resultaron S a CIP; de las cuales 935 (67,3%) fueron S a NAL. No hubo aislamientos CIP resistente, NAL sensible. Mientras que en el 2005 se observ, sobre un total de 837 aislamientos, que el porcentaje de S a NAL y CIP fue 73% y 79,2% respectivamente. Se concluye que NAL sigue siendo un predictor (correlacin Pearson = 0,84) en la deteccin de la resistencia a CIP en nuestro hospital y que existi una disminucin de la S estadsticamente significativa tanto para NAL como para CIP (chi: 7,95; p=0,005, chi: 6,37; p=0,011 respectivamente).
P380 - 27587 ACCIN ANTIBACTERIANA IN VITRO DE EXTRACTOS DE YERBA MATE FRENTE A Bacillus subtilis Y Enterococus faecalis. SEUK, ISABEL A; SCHAPOVALOFF, MARIA E; BICH, GUSTAVO A; KRAMER, FERNANDO L; MEDVEDEFF, MARTHA G
Universidad Nacional de Misiones Introduccin: el empleo de extractos vegetales constituye una alternativa promisoria, debido a su alta efectividad, bajo costo y no ser contaminante para el ambiente. Considerando la continua evolucin de la resistencia de las cepas bacterianas a los anti-biticos, y el limitado nmero de ellos disponibles, la investigacin relacionada a la bsqueda de componentes con actividad biolgica aislados a partir de material vegetal posibilita una atractiva fuente de compuestos con actividad teraputica de origen natural. Es sabido que las plantas superiores producen ciertas molculas bioactivas que pueden actuar contra otros organismos de su ambiente, inhibiendo el crecimiento bacteriano o regulando el desarrollo de otras plantas. En el campo de la investigacin que involucra la bsqueda de compuestos bioactivos de origen vegetal nuestro inters se enfoc en Ilex paraguariensis St. Hilaire, conocida comnmente con el nombre de yerba mate, que es una especie autctona, cultivada en la regin del nordeste argentino, y ampliamente utilizada como infusin en la Argentina. Objetivo: evaluar la actividad antimicrobiana de extractos de yerba mate frente a las bacterias gram positivas Bacillus subtilis y Entero-coccus faecalis. Materiales y mtodos: para la elaboracin de los extractos acuosos se utilizaron hojas verdes de yerba mate de la regin sur de la provincia de Misiones. Luego se llev a desecacin para lograr as el extracto seco. A partir del mismo, se obtuvieron diferentes concentraciones desde 50 mg/mL hasta 500 mg/mL. Se utilizaron concentraciones crecientes del extracto vegetal para determinar la concentracin mnima a la cual se produce la inhibicin del crecimiento del microorganismo. Se prepararon los inocul de Bacillus subtilis ATCC 66300 y Enterococcus faecalis ATCC 29212 ajustados al 0,5 de Mac Farland equivalente a 1 x 108 UFC/mL. El procedimiento utilizado para la evaluacin de la actividad antibacteriana fue la tcnica de difusin en agar. El control negativo consisti en agua destilada estril y el control positivo fue un antibitico de amplio espectro. Las placas fueron incubadas 24 hs. a 35 C. Resultados: los extractos de yerba mate presentaron actividad biolgica frente a Bacillus subtilis desde una concentracin de 100 mg/mL hasta 500 mg/mL inhibiendo su crecimiento. La actividad presentada frente a Enterococcus faecalis se obtuvo desde 50 mg/mL hasta 500 mg/mL produciendo la inhibicin del microorganismo patgeno. Conclusiones: los resultados obtenidos en este estudio, permiten sugerir que los extractos acuosos de yerba mate (Ilex paraguariensis St. Hil.) constituyen una perspectiva para la obtencin de antibitico natural por presentar una evidente actividad antimicrobiana en diferentes concentraciones contra microorga-
P379 - 27584 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD A LAS FLUORQUINOLONAS DE ENTEROBACTERIAS AISLADAS DE UROCULTIVOS. ARO, CAROLINA; RAMOS, CLAUDIA; MOLLERACH, ANALIA; AHUMADA, CARLOS; MENDEZ, EMILCE DE LOS A
Seccin Microbiologa-Laboratorio Central-Hospital J. M. Cullen. Santa Fe Introduccin: el uso excesivo e inadecuado de fluorquinolonas (FQ) favorece la emergencia y diseminacin de cepas resistentes por lo que se hace necesaria la vigilancia epidemiolgica a
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nismos como Bacillus subtilis ATCC 66300 y Enterococcus faecalis ATCC 29212. De esta manera se vislumbra una nueva aplicacin de la yerba mate en el campo de la farmacologa.
P381 - 27598 FOSFOMICINA (FOS) ALTERNATIVA ECONOMICA SIN CO-RESISTENCIA PARA EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES POR ENTEROBACTERIAS (EB) PRODUCTORES DE BLEE Y CARBAPENEMASAS. CASELLAS, J M (1-3); FERNANDEZ, M I (2); TOME, G (3-4); BORDA, N (1); NOTARIO, R (1); FARINATI, A (2); MENDEZ, E (5); BOTTIGLIERI, M (6)
(1) Lab CIBIC Rosario (2) Ctedra de Microb USAL (3) Lab CEB SI (4) Lab CMI, Hosp Militar BA (5) Hosp Cullen Santa Fe, (6) Cca Univ Reina Fabiola Crdoba Introduccin: la panresistencia (PR) en EB debida a la produccin de BLEE y/o carbapenemasas resulta en altos costos, mayor tiempo de internacin, transmisin cruzada y empleo de antibacterianos necesarios para pacientes graves en el medio hospitalario que han incrementado su resistencia (fluoroquinolonas, aminoglucsidos). FOS es un ATB descubierto en Espaa en 1954 que se us y sigue usndose hoy da en toda Europa para infecciones graves como sal sdica (parenteral) o clcica (oral). En EUA slo existe la sal trometamol para infecciones urinarias bajas. Mltiples trabajos europeos y an de EUA destacan la actividad de FOS sobre EB-PR. En Argentina no se han presentado trabajos al respecto. Es hidrosoluble, semejante al fosfoenolpiruvato (PEP) y a ello debe su actividad impidiendo la incorporacin en el citoplasma del PEP para la sntesis del cido murmico de la pared celular. Su incorporacin depende de 2 permeasas: L-alfa-glicerolfosfato y D-glucosa. Puede presentar resistencia (R) cromosmica por la formacin de FOS-glutation transferasa que inactiva FOS, la R plasmdica se debe a la alteracin de la permeabilidad de la pared celular, es transferible. Es activa sobre S.aureus y S. epidermidis independientemente de su R a OXA, estreptococos beta hemolticos excepto S. agalactiae. Un 50-60% de aislados de P. aeruginosa son sensibles pero solo un 10-20% de Acinetobacter baumannii. FOS puede combinarse con otros ATB y con frecuente sinergia. FOS se presenta en 3 formas, son la sal sdica, parenteral y la sal clcica oral. La sal trometamol, oral da origen a frecuentes recurrencias. Objetivo: comprobar la actividad por diferentes mtodos de FOS frente a EB-Pan R. Mtodos: aislados: 50 EB-PR incluyendo Klebsiella pneumoniae (Kp), Escherichia coli (Ec) y Proteus mirabilis (Pm), recuperados de pacientes hospitalizados de BsAs, San Isidro, Rosario, Crdoba y Santa Fe. Todos los aislados fueron productores de BLEE (feno o genotipicamente) y se incluyeron 2 Kp con Kpc. Sensibilidad a FOS: se compararon 4 mtodos: tabletas Rosco de 200ug (Dinamarca), discos Britania de 50ug (Argentina), macrodilucin en agar empleando FOS sdica y microdilucin manual Sensititre USA en todos los casos con el agregado de glucosa-6-fosfato (SIGMA). Puntos de corte (PC) mg/L: parenteral (Rosco) clcica S = 16, R = 64; difusin mm: S = 22 R = 18; para IU bajas (trometamol) S = 16 (datos de CLSI, trometamol). Resultados: de 28 Kp fueron S (96.5 %), 15 Ec fueron todos S; 5 de 7 Pm fueron S (71 %). En total 47 de 50 aislados (94 %) fueron S. Los mtodos empleados sin diferencias con excepcin de discos de 50 ug que en relacin a CIM brindaron 3 falsos sensibles. Conclusin: FOS es efectiva in vitro frente a EB productoras de BLEE y puede sustituir, con un consorte adecuado, ATB de mayor costo necesarios en infecciones hospitalarias considerando adems ausencia de toxicidad y compatibilidad con otros ATB. Destacamos utilizar los PC diferenciando infecciones.
principal reservorio. Est reconocido como un patgeno importante que ocasiona una serie de infecciones que abarcan desde diarreas inespecficas hasta afecciones invasivas, dependiendo de la cepa, la dosis, factores genticos, edad y condiciones inmunolgicas del husped. Se considera que la yersiniosis se adquiere por ingestin de alimentos y/o aguas contaminadas con cepas patgenas. Los miembros del gnero Yersinia son bacilos gram-negativos, que desarrollan tanto en condiciones aerobias como anaerobias, crecen entre 0 y 45 C siendo su temperatura ptima entre 25 y 28 C.Si bien el hallazgo de Y. enterocoltica es comn en otros pases, resulta poco frecuente en Argentina. Se presentan aqu tres casos en los que se aisl Y. enterocoltica como nico enteropatgeno en pacientes de entre 1 y 12 aos de edad con diarrea mucosanguinolenta que concurrieron al Hospital Horacio Heller (HHH) de Neuqun. Entre enero y diciembre del 2009, en el Laboratorio de Microbiologa del HHH se estudiaron 384 muestras de materia fecal de nios y adultos para coprocultivo. Todas las muestras fueron sembradas en agar MacConkey, agar MacConkey con sorbitol, Skirrow modificado y caldo selenito. Para la bsqueda de Y. enterocoltica se estudiaron colonias pequeas lactosa negativas y sorbitol positivas a las que se les realiz una serie de pruebas bioqumicas tanto a 37 C como a 28 C. Las cepas identificadas como Y. enterocoltica fueron derivadas al Laboratorio Central de la provincia para la confirmacin de gnero y deteccin de factores de virulencia por tcnicas de biologa molecular. Se utilizaron tres PCR distintas, una amplifica en formato mltiple, secuencias de los genes yadA y 16SrRNA (Knutsson, 2003), y otras dos con formato simple yopT (Arnold 2001), e yst (Ibrahim, 1992). Dos de las cepas fueron positivas para las tres PCR, mientras que una solo fue positiva para la PCR con formato multiplex y para la PCR yst. A todas las cepas se les realiz antibiograma por difusin siguiendo las recomendaciones del Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI) y solo mostraron resistencia in vitro para la cefalotina, para el resto de los antibiticos ensayados fueron sensibles. Dado que no existen datos epidemiolgicos de este patgeno en nuestra regin, a la luz de estos resultados, obtenidos de medios de cultivos destinados a la bsqueda especfica de otros patgenos, concluimos que se hace necesario realizar una bsqueda activa del mismo, mejorando la metodologa de deteccin, especialmente en la poblacin peditrica donde la diarrea causa mayor incidencia de morbimortalidad.
P383 - 27670 DIFERENCIAS EN LA RESISTENCIA A MACRLIDOS EN ESTREPTOCOCOS AISLADOS DE DISTINTOS SECTORES POBLACIONALES. RUBINSTEIN, GABRIELA (1); BAVDAZ, BARBARA (2); DE BUNDER, SABRINA (3); BLAZQUEZ, NESTOR (3)
(1) HPR Bariloche, (2) Sanatorio San Carlos, (3) Htal. Ramn Carrillo Los macrlidos son antimicrobianos frecuentemente utilizados para el tratamiento de las infecciones respiratorias de la comunidad y son el tratamiento alternativo en pacientes alrgicos a la penicilina. A partir de la introduccin de los nuevos macrlidos de accin prolongada, la resistencia a estos antibiticos aument en distintas regiones geogrficas. El objetivo de este trabajo fue estudiar la resistencia en Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus pneumoniae a los mcrlidos durante el perodo 2002-2008 en Bariloche e investigar la asociacin entre la resistencia y el origen (servicio de salud pblico o privado) de los aislamientos. Fueron estudiados 4310 aislamientos de estreptococos (2615 S. pyogenes, 995 S. agalactiae y 700 S. pneumoniae) obtenidos de muestras clnicas, 1803 originadas en el hospital pblico y 2507 en instituciones privadas. Las pruebas de sensibilidad fueron realizadas por el mtodo de difusin en medio slido segn normas del CLSI. La resistencia global fue 1,5 % para S. pyogenes, 7,8% para S. agalactiae y 11,3% para S. pneumoniae. Estos valores de resistencia fueron significativamente diferentes entre si (tabla de contingencia chi= 164,52; p<0.0001) y estas diferencias fueron tambin observadas al analizar por separado los aislamientos obtenidos en el mbito pblico (chi = 44,19; p<0,0001) y en instituciones privadas (chi=
P382 - 27606 AISLAMIENTO DE Yersinia enterocoltica EN PACIENTES CON DIARREA EN UN HOSPITAL DE NEUQUN. GONZALEZ, G (1); SAUER, H (1); AMARILLA, A (1); MAZZEO, M (2); NAVELLO, M (2); PIANCIOLA, L (2); BULGHERONI, M F (1)
(1) Hospital Heller. (2) Laboratorio Central. Neuqun Yersinia enterocolitica es un microorganismo que aparece ampliamente distribuido en la naturaleza, siendo los roedores su
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188,31; p<0.0001). Los aislamientos obtenidos en el mbito privado fueron significativamente ms resistentes que los aislados en el hospital pblico para las tres especies: S. pyogenes (1,9% vs. 0,6%, chi =5,851 p<0,025), S. agalactiae (12,4% vs. 3,8%, chi =24,5 p<0,001) y S. pneumoniae (19,1% vs. 7,0%, chi=21,98 p<0.001). Considerando que el consumo de antimicrobianos es el principal factor involucrado en el desarrollo y aumento de la resistencia antibitica, nuestros resultados sugieren que habra mayor consumo de mcrolidos en la poblacin que utiliza servicios de salud privada en Bariloche. Los valores de consumo de macrlidos no pudieron obtenerse en ste estudio, sin embargo, segn comunicaciones personales, el hospital pblico dispone de una cantidad limitada de macrlidos para pacientes ambulatorios. Por el contrario, en las instituciones privadas sera mayor el consumo debido a una mayor provisin de macrlidos por laboratorios farmacuticos como as tambin por la mayor adquisicin de estos antibiticos por pacientes con obra social. En conclusin, en Bariloche la resistencia a macrlidos en S. pyogenes, S. agalactiae y S. pneumoniae es significativamente diferente para estos tres microorganismos. Asimismo, para las tres especies la resistencia es significativamente mayor en los aislamientos provenientes de instituciones privadas probablemente debido a un mayor consumo de este tipo de antibiticos. Nuestros resultados sealan la necesidad de investigar el consumo de antimicrobianos, como as tambin de otros factores que podran contribuir a explicar las diferencias existentes en la resistencia a los macrlidos en los distintos sectores poblacionales de Bariloche.
clulas ssiles que oscil entre el 90-99% pero no presentaron efecto disruptor del biofilm en todo el rango de concentraciones evaluado. Los biofilms de aislados clnicos y ambientales mostraron una susceptibilidad semejante frente a los antibiticos ensayados. Los aislados de B. contaminans poseen una mayor resistencia a los antibiticos cuando forman biofilms a excepcin de meropenem y ciprofloxacina, los cuales son igualmente efectivos frente a clulas planctnicas y ssiles. Asimismo estos dos antimicrobianos son capaces de reducir la biomasa del biofilm a concentraciones que pueden ser alcanzadas en la mucosa bronquial. Evidentemente estos resultados sugieren que ciprofloxacina y meropenem presentan ventajas sobre los dems antibiticos testeados al momento de implementar un tratamiento teraputico en infecciones respiratorias de pacientes FQ.
P385 - 27697 EPIDEMIOLOGA DE Staphylococcus aureus EN LA PROVINCIA DE MISIONES. ASPECTOS BIOQUMICOS Y MOLECULARES. KERBER, M (1); GRENON, S (1,2); GERLACH, E (3); JORDA, G (4); MIRANDA, A (5); LEGUIZAMON, L (2); VILLALBA, V (6); VON SPECHT, M (1,2)
(1) UNaM; (2) Htal. Prov Pediatra, HPP; (3) Ober, HSO; (4) IPS; (5) Eldorado, HSE; (5) Madariaga, HRM A fin de conocer la epidemiologa de Staphylococcus aureus (SA) en la Provincia de Misiones, y contribuir a establecer recomendaciones de diagnstico y teraputicas apropiadas encaramos este estudio. Se convoc a cinco laboratorios de hospitales de referencia zonales. Se incluyeron todos los aislamientos nuevos de SA entre septiembre y noviembre inclusive de 2009. Se recabaron datos epidemiolgicos y clnicos mediante una ficha diseada para este fin. Se efectuaron identificacin microbiolgica convencional, estudios de sensibilidad por difusin y tamizaje en agar infusin de cerebro y corazn con 6 ug/ml de vancomicina, siguiendo las normas del Clinical and Laboratory Sandards Institute. Posteriormente, reaccin en cadena de la polimerasa para genes mecA y Leucocidina de Panton Valentine (lukS-PV/lukF-PV: LPV) a una seleccin de aislamientos. Se obtuvieron 91 SA, los que provenan del HPP (31); HRM (25); IPS (11); HSE (13) y HSO (11). Fueron resistentes a meticilina (SARM) 52 aislamientos (57%). Las infecciones adquiridas en la comunidad (IAC) fueron 52 (57%), en el hospital (IAH) 32 (35%) y 7 (8%) de origen incierto. Entre las IAC, los ms afectados fueron los nios (30/52), y sexo masculino (39/ 52). No se detectaron factores predisponentes significativos. Entre las IAH, no se observaron factores de riesgo intrnsecos predominantes, ni diferencias en cuanto a edad o sexo. En todos los casos, el foco clnico ms frecuente de las infecciones fueron los abscesos (37) seguidos de celulitis (7). Entre las infecciones invasivas predominaron spsis (7), neumonas (5) y osteomielitis (5). Se detectaron 2 casos de meningitis, ambas adquiridas en la comunidad por SARM. La distribucin de PR entre los SARM causantes de IAC e IAH tuvo franco predominio de resistencia exclusiva a beta-lactmicos, observandose resistencia a gentamicina ms frecuentemente en IAH. No se detect sensibilidad disminuida a vancomicina. El gen mecA se comprob en todos los SARM seleccionados. LPV se detect en 23/53 aislamientos, 19 de los cuales eran infecciones de piel y partes blandas. Entre los SARM que fueron LPV+ predominaron las IAC (12/19) y entre los que fueron LPV- las IAH (10/12), no siendo significativas las diferencias entre los aislamiento sensibles a meticilina para este gen. Este estudio es el primer relevamiento en nuestra provincia, de la epidemiologa de Staphylococcus aureus, que incluye poblacin adulta y peditrica. El predominio observado de resistencia a meticilina en todos los centros participantes, particularmente asociadas a IAC, refuerza la necesidad de una continua vigilancia en trminos de control de prevalencia y de resistencia antibitica. Slo as se podrn establecer recomendaciones teraputicas apropiadas para cada regin. Si bien la resistencia a vancomicina no es crtica en nuestro pas, es de suma importancia la implementacin de estrategias rigurosas de monitorizacin, al momento no efectuadas rutinariamente en la regin. Esto permitir tomar medidas en cuanto a tratamiento y control de la diseminacin, y reforzar el uso correcto de los antibiticos.
P384 - 27679 EFECTO IN VITRO DE AGENTES ANTIMICROBIANOS EN BIOFILMS DE AISLADOS CLNICOS Y AMBIENTALES DE Burkholderia contaminans. MIAN, A (1); BOSCH, A (1); SERRA, D (1); MARTINA, P (1); VAY, C (2); BETTIOL, M (3); MONTANARO, P (4); YANTORNO, O (1)
(1) Centro de Investigacin y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI), (2) Hospital de Clnicas Jos de San Martn de Buenos Aires, (3) Hospital de Nios Sor Maria Ludovica de La Plata, (4) Hospital de Nios Santisima Trinidad de Cordoba Las infecciones respiratorias causadas por el complejo Burkholderia cepacia (cBc) se asocian a un pronstico no favorable en pacientes fibroqusticos (FQ). En los ltimos aos, B. contaminans ha sido la especie del cBc predominante tanto en muestras de esputo de pacientes FQ, como en productos de limpieza, farmacuticos y de cuidado personal. A causa de la resistencia intrnseca del cBc a numerosos antibiticos, las opciones teraputicas son limitadas. Asimismo la capacidad del cBc de crecer como biofilms en el pulmn incrementa su tolerancia a los antimicrobianos haciendo dificultosa su erradicacin. El objetivo del presente estudio fue determinar la eficacia de antibiticos de uso habitual en el tratamiento de infecciones del cBc sobre la viabilidad de aislados clnicos y ambientales de B. contaminans creciendo en biofilms, evaluando en paralelo el eventual efecto disruptor. En este trabajo se emplearon 4 aislados de B. contaminans provenientes de esputo de pacientes FQ y del ambiente. La susceptibilidad a los antimicrobianos fue determinada por el mtodo de microdilucin en caldo Muller Hinton (MH). Los biofilms de B. contaminans fueron formados en placas multipocillos de poliestireno en caldo MH a 37 C por 48 h. El nmero total de clulas viables en el biofilm antes y despus de la exposicin al antimicrobiano fue determinado por recuento en placa. La cuantificacin de la biomasa del biofilm antes y despus del tratamiento antibitico fue realizada por tincin con cristal violeta en placas de poliestireno y valorada espectrofotometricamente. Los resultados muestran que los antibiticos evaluados, con excepcin de meropenem y ciprofloxacina, presentan una disminucin en la actividad bactericida en biofilms de B. contaminans, comparado con su contraparte planctnica. Meropenem (8 mg/L) y ciprofloxacina (4 mg/L) exhibieron una disminucin de clulas viables del biofilm > 99,9% y de la biomasa total > 65% en todos los aislados de B. contaminans. Los antimicrobianos cotrimozaxol, ceftazidima y minociclina, a concentraciones alcanzables durante la terapia antimicrobiana, mostraron una accin bactericida en
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P386 - 27702 INFECCION URINARIA DURANTE EL EMBARAZO. MONTIBELLO, S; TUTZER, S; KAUFMAN, S

Servicio de Microbiologia. Hospital Juan A. Fernandez Introduccin: la infeccin urinaria en el embarazo tiene una incidencia del 8%, convirtindose en una de las complicaciones ms frecuente durante la gestacin. Los cambios fisiolgicos asociados al embarazo predisponen al desarrollo de complicaciones que pueden afectar significativamente a la madre y al feto. A pesar de los nuevos antibiticos la infeccin de vas urinarias contina asocindose a morbi-mortalidad elevada a nivel materno y fetal. La relacin entre infeccin de vas urinarias, parto prematuro y bajo peso al nacer est ampliamente documentada. Objetivo: analizar la frecuencia de los aislamientos en infecciones urinarias y bacteriurias asintomticas en pacientes embarazadas y su perfil de resistencia. Materiales y mtodos: estudio retrospectivo de pacientes embarazadas que consultaron al servicio de obstetricia del Hospital J. A Fernndez, desde enero de 2009 hasta mayo de 2010. Las muestras de orina fueron tomadas por la tcnica del chorro medio, se midi el pH y se las centrifug a 2000 r.p.m durante 10 minutos. Una gota del sedimento fue observada al microscopio entre porta y cubreobjetos con un aumento de 400 x. Luego se sembraron en CLDE y se incubaron 24 hs a 35 C. Se consideraron infecciones urinarias cuando el cultivo present recuentos mayores a 100.000 ufc/ml, acompaado de signos/sntomas y leucocitos mayor a 5 elementos por campo; este recuento se consider bacteriuria asintomtica en ausencia de dichos criterios. La sensibilidad se realiz por el mtodo de sensibilidad en disco segn normas de CLSI, frente a ampicilina, ampicilina-sulbactam, cefalotina, cefuroxima, ciprofloxacina, nitrofurantona, y trimetoprima-sulfametoxazol. Resultados: durante el estudio se evaluaron 1196 muestras de urocultivo de los cuales 133 (11,1%) representaron infecciones urinarias y 65 (5,43%) fueron bacteriurias asintomticas. Escherichia coli fue el microorganismo aislado con mayor frecuencia (64,4%), seguido por Enterococcus faecalis (8,5%), Streptococcus agalactiae (5,5%) y Staphylococcus saprophyticus (4,5%). Escherichia coli fue resistente a ampicilina en un 59,4%, a ampicilina-sulbactam en 21,6%, a cefalotina en 41,3% , a cefuroxima en 21,9% y a nitrofurantona en 0,87%. Por otra parte Enterococcus faecalis fue 100% sensible a ampicilina y a nitrofurantona, Streptococcus agalactiae no present resistencia a penicilina y Staphylococcus saprophyticus fue 100% sensible a nitrofurantona, gentamicina y meticilina. Discusin: nuestros resultados concuerdan con publicaciones previas que muestran una alta resistencia de los patgenos urinarios a antibiticos de primera eleccin en la mujer embarazada como ampicilina y a algunas cefalosporinas, por lo que se hace necesario buscar otras opciones de tratamiento antibitico. Conclusin: la eleccin de un antibitico para el tratamiento de la infeccin urinaria en el embarazo requiere un conocimiento de los microorganismos ms frecuentes y su perfil de resistencia para poder elegir la mejor opcin y aumentar las probabilidades de xito teraputico. La ampicilina no debera ser utilizada como opcin inicial por su alta resistencia en los patgenos urinarios ms frecuentes; nitrofurantona mostr valores muy bajos de resistencia en los microorganismos ms frecuentes.
se suma la resistencia a los carbapenemes que fue incrementndose a travs de los aos en nuestro medio. Las carbapenemasas derivadas de OXA no poseen, a diferencia de otras -lactamasas (MBL, carbapenemasas de Clase A) pruebas fenotpicas que sirvan para su rpida identificacin en el laboratorio de mediana complejidad. El objetivo de este trabajo fue investigar en A. baumannii las carbapenemasas responsables de la resistencia a IMI y su caracterizacin fenotpica. Se estudiaron 34 aislamientos de A. baumannii identificados mediante la tcnica de ARDRA (Amplified Ribosomal DNA restriction anlisis) que fueron recuperados de materiales clnicos de pacientes internados en la UCI del Hospital de Clnicas Jos de San Martn. 29 aislamientos fueron resistentes a los carbapenemes y 5 presentaron sensibilidad disminuida a imipenem (CIM a IMI entre 0,5-4 g/ ml). La relacin clonal entre los aislamientos se realiz mediante electroforesis en campo pulsado, determinndose la presencia de 5 clones. Mediante Multiplex-PCR se determin la presencia de blaoxa51-like en todos los aislamientos estudiados. En los aislamientos con CIM a IMI > 8 g / ml, se encontr, adems, blaoxa23 en todos los clones (I, II, IV y VI) excepto en el clon III donde se hall blaoxa58. Se utilizaron los siguientes mtodos fenotpicos para evidenciar las carbapenemasas: Hodge, EDTA/ SMA (difusin y dilucin), sinergia con cido bornico. Adems se incorpor ClNa al 2% en el MH para evidenciar la inhibicin de la actividad de OXA-58. Para determinar la accin del Cl Na 2 % sobre otras carbapenemasas y para evitar influencias de tipo clonal, dicha prueba se realiz en aislamientos de A. baumannii productores de OXA-23 y OXA-58 epidemiolgicamente no relacionados y con otros BGN productores de carbapenemasas (no derivadas de OXA). El mtodo de Hodge permiti evidenciar con 100% de sensibilidad y 80% de especificidad las carbapenemasas OXA-23 y OXA-58. En ninguno de los aislamientos se observ sinergia entre IMI-EDTA, ni con acido bornico por el mtodo de difusin. Todos los aislamientos en los que se detect blaOXA58 presentaron un halo de inhibicin a IMI = 22mm en presencia de ClNa al 2%, en cambio en aquellos en los que se determin la presencia de blaOXA23 los halos fueron = 20mm. Las siguientes carbapanemasas (KPC, VIM-2, NMC-A) no fueron inhibidas por el Cl Na 2%. La siguiente secuencia sugerira la presencia de una carbapenemasa derivada de OXA: Hodge (+), EDTA y APB (-). El efecto inhibitorio del ClNa se observ tanto en aislamientos en que se detect la presencia de blaoxa23 como de blaoxa58. En estos ltimos la magnitud del efecto fue mayor sugirindose un valor tentativo de 22 mm como referencia.
P388 - 27713 PERITONITIS BACTERIANA ESPONTNEA POR Listeria monocytogenes EN UN PACIENTE CON CIRROSIS HEPTICA. FLORES, SILVIA (1); RODRIGUEZ, PAULA (1); ANDRES, PATRICIA (1); FERNANDEZ, ANALIA (1); NAGEL, CLAUDIA (2); TOKUMOTO, MARTA (1)
(1) Seccin Microbiologa, Div. Laboratorio; (2) Div. Infectologa; Hospital Universitario Fundacin Favaloro La peritonitis bacteriana espontnea (PBE) es la infeccin bacteriana del lquido asctico (LA) en ausencia de un foco infeccioso intraabdominal. Es una complicacin frecuente y grave en la cirrosis. La incidencia de PBE en pacientes cirrticos con ascitis se sita entre el 10 y el 30%. En la mayora de los casos, las bacterias causantes de PBE son bacilos aerobios gram negativos procedentes de la propia flora intestinal, le siguen en frecuencia los cocos gram positivos. La PBE por Listeria monocytogenes es muy rara y slo afecta a pacientes inmunocomprometidos con enfermedades subyacentes. Caso clnico: varn, 56 aos, ingres al servicio de urgencias por dolor abdominal y fiebre de 5 das de evolucin. Present como antecedentes cirrosis por hemocromatosis en 2005, hepatocarcinoma en 2008, y diabetes. Ante la sospecha de PBE, se realiz paracentesis que evidenci LA de aspecto turbio, amarillento. Parmetros en LA: protenas 2,1 g/dl; recuento celular 2.200/mm3 con 90 % de polimorfonucleares; LDH 145 U/l; glucosa 334 mg/dl. Se remitieron 10 ml de LA en frasco convencional de hemocultivo (Britania) y 2 hemocultivos automatizados (Bact-Alert ). Se realiz tratamiento emprico con ampicilina-sulbactama (AMS). A las 48 horas de incubacin, se
P387 - 27708 DETECCIN FENOTPICA DE LA RESISTENCIA ENZIMTICA A LOS CARBAPENEMES EN Acinetobacter baumannii. RODRIGUEZ, HERNAN (1); BAJUK, MILENA (1); NASTRO, MARCELA (1); BOMBICINO, KARINA (1); GRANADOS, GABRIELA (1); RADICE, MARCELA (2); GUTKIND, GABRIEL (2); VAY, CARLOS (1); FAMIGLIETTI, ANGELA (1)
(1) Laboratorio de Bacteriologa, Departamento de Bioqumica Clnica, Hospital de Clnicas Jos de San Martn, (2) Ctedra de Microbiologa Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad de Buenos Aires. Buenos Aires, Argentina Las infecciones nosocomiales causadas por Acinetobacter baumannii en los diferentes centros asistenciales de Argentina han pasado de causar brotes espordicos a ser hiperendmico. A esto
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observ desarrollo de bacilos gram positivos en medio lquido, agar sangre y agar chocolate. El microorganismo fue identificado como L. monocytogenes mediante pruebas bioqumicas convencionales y mtodo miniaturizado (API Coryne Bio Merieux). Las concentraciones inhibitorias mnimas (CIM) por el mtodo de Etest (AB Biodisk Sweden) fueron (g/ml): ampicilina 0,5 y trimetroprima sulfametoxazol 0,015 (Sensible, CLSI); gentamicina 0,25 (CIM 90: 0,5) y ciprofloxacina 2,0 (CIM 90: 1,0). Los hemocultivos resultaron negativos. Ante la evolucin favorable se mantuvo el tratamiento con AMS durante la internacin. El paciente fue dado de alta y se indic tratamiento ambulatorio con ciprofloxacina. La teora ms aceptada para la patogenia de PBE por L. monocytogenes es la traslocacin bacteriana a travs del tubo digestivo. Es muy importante el diagnstico etiolgico preciso, ya que el manejo emprico convencional de la PBE es con cefalosporinas de 3 generacin y L. monocytogenes presenta resistencia natural a estas drogas. El tratamiento de eleccin para infecciones por esta bacteria es ampicilina en monoterapia o con el agregado de aminoglucsidos, con una duracin mnima de 10-14 das. En cuanto al origen de la infeccin, si bien en este caso no se investig la fuente, la va ms probable es la ingesta de alimentos contaminados.
identificacin, la resistencia a vancomicina de algunas especies es orientadora. La especie aislada en nuestro caso es la ms frecuente en infecciones por lactobacilos. El antecedente de extracciones dentarias podra relacionarse al origen de esta EI; no se investig consumo de yogures o probiticos. Adems suelen presentar alto nivel de resistencia a ciprofloxacina y su uso previo puede haber favorecido la seleccin. Se sospech la lesin lumbar como foco secundario pero no pudo demostrarse.
P390 - 27721 ACTIVIDAD IN VITRO DE ANTIBITICOS BETALACTMICOS EN ENTEROBACTERIAS SIN AMPC INDUCIBLE CON RESISTENCIA A CEFALOSPORINAS DE 3ERA GENERACIN. NASTRO, MARCELA; RODRIGUEZ, HERNAN; VAY, CARLOS; FAMIGLIETTI, ANGELA
Laboratorio de Bacteriologa, Depto. Bioq. Clin. Hospital de Clnicas Jos de San Martn, FFYB, UBA Introduccin: los antibiticos - lactmicos constituyen la familia ms usada de antimicrobianos. La progresiva aparicin de resistencia limita su uso. Objetivos: evaluar los fenotipos de resistencia a cefalosporinas de 3era generacin y carbapenemes en aislamientos de enterobacterias y los puntos de corte para antibiticos -lactmicos recomendados por el CLSI 2009 y CLSI 2010. Se estudiaron enterobacterias sin AmpC inducible en forma consecutiva e ininterrumpida desde julio 2008/abril 2009. Se realiz antibiograma semicuantitativo y se seleccionaron aislamientos con resistencia a cefalotina (CIM>32 g/ml) y a al menos una cefalosporina de 3era generacin (CIM>1 g/ml). La deteccin fenotpica de BLEE se realiz a travs de sinergia con amoxicilina clavulnico (AMC),ceftriaxona (CRO)y ceftazidima (CAZ)y disco de cefpodoxima (CPD) (halo 17mm), mientras que la deteccin de AmpC plasmdico se realiz a travs de la sinergia con acido fenilbornico (APB),cefoxitina (FOX) y CRO. La deteccin fenotpica de KPC se realiz con sinergia con IMI/APB/ MER. Se realiz la CIM por dilucin en agar a los siguientes ATBs: piperacilina/tazobactam, FOX, CRO, CAZ, cefepime (FEP), ETP, IMI y MER. Resultados: se aislaron 178 cepas. Se detect BLEE en 143/178 aislamientos (80%) con sinergia con AMC y con CPD en 134/178 (77%). En 17/178 aislamientos se observ sinergia con CRO/APB/FOX (9,5%) y en 5/178 aislamientos (2,8%) con IMI/ APB/MER. La evaluacin de la resistencia (% R), segn CLSI 2009 y 2010 se observa en la tabla 1 y la distribucin segn especie fue: K. pneumoniae (Kp)(98), E. coli (Ec)(59) y P. mirabilis (Pm)(21). La CIM90 en Kp fue >64, >64, >64, 4, 1 y 0,5 g/ml para CRO, CAZ, FEP,ETP, IMI y MER respectivamente y el rango de CIM para carbapenemes fue de <0,125-64 en ETP, de <0,125-16 en IMI y de <0,125-32 en MER. En Ec los valores fueron similares excepto en carbapenemes donde se obtuvo 1, 0,5 y <0,125 g/ml para ETP, IMI y MER respectivamente.
Fenotipos BLEE (143) AmpCp (17) KPC (5) CLSI 2009 2010 2009 2010 2009 2010 PTZ 15(10) 15(10) 1(6) 1(6) 5(100) 5(100) FOX CRO 10(7) 143(100) 10(7) 141(99) 8(47) 5(29) 8(47) 14(82) 5(100) 5(100) 5(100) 5(100) CAZ 143(100) 80(56) 3(18) 7(41) 5(100) 5(100) FEP ETP 143(100) 5(3) 101(71) 52(36) 3(18) 0(0) 3(18) 3(18) 5(100) 5(100) 5(100) 5(100) IMI 0(0) 1(0.7) 0(0) 0(0) 5(100) 5(100) MER 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 5(100) 5(100)
P389 - 27714 ENDOCARDITIS INFECCIOSA (EI) POR Lactobacillus. PRESENTACIN DE UN CASO. FERNANDEZ, ANALIA (1); ANDRES, PATRICIA (1); RODRIGUEZ, PAULA (1); FLORES, SILVIA (1); MADSEN, ELIZABETH (2); TOKUMOTO, MARTA (1)
(1) Seccin Microbiologa, Lab. Central Hospital Universitario Fundacin Favaloro. (2) Divisin Infectologa. Los lactobacilos son bacilos gram positivos no esporulados, ubicuos en la fitosfera y comensales de animales y humanos. Habitan tracto gastrointestinal y tracto genital femenino. Generalmente no son patgenos, pero pueden producir endocarditis en pacientes con valvulopatas, e infecciones locales o diseminadas en pacientes con enfermedades subyacentes y tratamiento antibitico y/o inmunosupresor que puedan favorecer su seleccin. Objetivo: presentar un caso de EI confirmada por Lactobacillus. Historia clnica: paciente masculino, 63 aos, sin factores de riesgo coronario con vlvula mitral mixomatosa, sin otra enfermedad de base. Procedimientos odontolgicos mltiples 6 meses antes de ingresar con profilaxis antibitica y 5 meses antes dolor lumbar (L2) asociado a un registro febril de 39 C. Se realiz biopsia vertebral que no revel atipia celular pero no se cultiv y se diagnostic espondilodiscitis. Recibi tratamiento antibitico con ciprofloxacina. Perdi 5 kg de peso en los siguientes meses. 10 das antes de la consulta comenz con fiebre y escalofros. Ingres febril con soplo sistlico. El ecocardiograma transtorcico revel imgenes compatibles con vegetaciones en valva coronaria derecha y valva no coronaria que generaban insuficiencia artica. Se tomaron hemocultivos y comenz tratamiento emprico con ampicilina (AMP), gentamicina (GEN) y ceftriaxona (CRO). Al tercer da se realiz reemplazo de vlvula mitral por mecnica y plstica de vlvula artica y el material extrado se cultiv. Evolucion favorablemente. Resultados: en 6/6 hemocultivos automatizados (BacT Alert- BioMerieux) recibidos y en el material quirrgico desarroll Lactobacillus rhamnosus, identificado usando pruebas bioqumicas y el perfil de fermentacin de carbohidratos en API 50 CH (BioMerieux). Se realiz la concentracin inhibitoria mnima por E-Test (AB Biodisk ) y los valores obtenidos para AMP, penicilina (PEN) y GEN fueron respectivamente de 2, 1, y 2 g/ml respectivamente (interpretacin sensible, CLSI). Se suspendi CRO y se realiz tratamiento parenteral endovenoso con AMP y GEN a travs de catter PICC. Posteriormente se envi material quirrgico de la espondilodiscitis pero los cultivos fueron negativos. En este paciente, se cumplieron los criterios clnicos y microbiolgicos para diagnosticar EI. Ante la grave presentacin, requiri ciruga. Si bien los lactobacilos poseen baja virulencia y son generalmente sensibles a PEN y AMP, en muchos casos de EI fue necesaria la ciruga. Es importante identificarlos dentro del gnero, pues pueden ser confundidos con otras bacterias frecuentes en EI que responden slo con tratamiento antibitico. En la
Los carbapenemes presentan mayor actividad, son slo inactivos frente a cepas con KPC.La actividad del ETP es inferior a la de PTZ. Segn recomendaciones de CLSI 2009 y 2010, se observa coincidencia para la deteccin de BLEE con CRO y no con CAZ, con disociacin en los % R segn CLSI 2010. (CRO: 99% / CAZ: 56 %), relacionndose con la BLEE endmica en nuestro pas (CTX-M).En cuanto a AmpCp, los nuevos puntos de corte seran ms eficaces para su deteccin.
P391 - 27728 BACTERIEMIA POR Capnocytophaga spp.: UN PATGENO DE PACIENTES ONCOHEMATOLGICOS? PROCOPIO, A (1); VAY, C (3); ALMUZARA, M (3); VIA, A (2); CRUZ, Y (1); GAMARRA, M (1); LOPEZ, E L (2); VAZQUEZ, M (1)
(1) Servicio de Microbiologa y (2) Infectologa, Hospital de Nios Dr. R. Gutirrez, GCBA. (3) Servicio de Bacteriologa, Hospital de Clnicas, UBA. CABA. Argentina
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Introduccin: Capnocytophaga es un bacilo gram negativo anaerobio facultativo que normalmente forma parte de la flora de la cavidad oral; en ocasiones puede causar bacteriemia en pacientes con neutropenia y cncer, y tambin en inmuno-competentes. La invasin de la bacteria al torrente sanguneo se producira al atravesar la mucosa en pacientes con mucositis orofarngea o enfermedad periodontal. Objetivos: a) establecer la frecuencia global de bacteriemia por Capnocytophaga spp en pacientes peditricos, y en oncohematolgicos en particular; b) evaluar las caractersticas y/o factores de riesgo de los pacientes con Capnocytophaga spp; c) analizar la susceptibilidad antibitica de las cepas. Materiales y mtodos: se realiz un estudio retrospectivo de las bacteriemias/funguemias ocurridas durante los aos 1996-2009. Se utiliz el sistema automatizado Bact/Alert para los hemocultivos. Se incluyeron slo los aislamientos clnicamente significativos. Los microorganismos fueron identificados por mtodos convencionales; a las cepas de Capnocytophaga spp se les realiz beta lactamasa por nitrocefin y sensibilidad antibitica por mtodo de E-test. Resultados: se aislaron en total 4131 microorganismos en sangre, 1907 gram negativos (GN), 1870 gram positivos (GP) y 354 hongos (H); 818 del total oncohematolgicos: 458 GN, 272 GP y 88 H. Del total correspondieron a pacientes de bacteriemias por GN, se recuper Capnocytophaga spp en 13 episodios (13/1907: 0.68%): 11 correspondieron a pacientes oncohematolgicos (11/458; 2.40%), 10 de ellos tenan neutropenia severa y mucositis oral (uno no evaluable); los otros 2 episodios ocurrieron: 1 en un paciente con aplasia medular y neutropenia, y otro en un paciente sin enfermedad de base, con politraumatismo y mal estado dentario (2/1449; 0.13%) (p< 0,001; RR: 17,40; 3,87<RR<78,22). La mediana de edad de pacientes fue de 7 aos (rango= 2-19 a). La evolucin fue favorable en 10 pacientes, 1 falleci y dos no pudieron ser evaluados. La mediana en horas correspondiente a la positivizacin de los hemocultivos fue 32,3 hs (rango=19-144 hs). En el Gram de las botellas se observaron bacilos GN fusiformes y filamentosos. Las especies correspondieron a C. sputigena 11, C. granulosa 1 y C. ochracea 1. La determinacin de beta lactamasa fue positiva en 10/12 cepas (83,3%) y 2/9 (22,2%) fueron resistentes a cefotaxima con CIM> a 32 g/ml (rango= 0,064->32 g/ml) a) La frecuencia de aislamiento en hemocultivos de este microorganismo es muy baja; sin embargo, la probabilidad de bacteriemia por Capnocytophaga spp es significativamente mayor en pacientes oncohematolgicos. b) Los factores de riesgo asociados fueron neutropenia severa y/o patologa oral. c) Es importante realizar en estas cepas tanto la determinacim de beta lactamasa como la sensibilidad a cefalosporinas de 3ra. generacin debido a la aparicin de cepas resistentes. P392 - 27759 PIPERACILINA TAZOBACTAM (PT) COMO TRATAMIENTO EMPIRICO INICIAL (TEI) EN NEUTROPENICOS FEBRILES (NF) CON TRASPLANTE DE CELULAS HEMATOPOYTICAS (TCH): EXPERIENCIA DE 12 AOS. HERRERA, F; FIGUERAS, L; MYKIETIUK, A; QUERCI, M; SANTAMARIA, C; BARBERIS, F; TEMPORITI, E; YAHNI, D; STRYJENSKY, M; RIERA, L; SMAYEVSKY, J; RELLOSO, S; ZARATE, S; BONVEHI, P Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas (CEMIC) Introduccin: PT demostr ser una opcin vlida como TEI para NF de alto riesgo; no obstante, solo en aos recientes ha sido incluido en guas de recomendaciones nacionales e internacionales. Objetivos: evaluar los resultados del TEI con PT en pacientes NF con TCH, en referencia a sensibilidad, respuesta y mortalidad. Material y mtodos: estudio prospectivo, observacional en pacientes internados por TCH y NF entre 1997 y 2009. Se incluyeron los episodios que fueron tratados con PT monoterapia o asociado a amicacina. Para el anlisis estadstico se utilizo el programa estadstico SPSS versin17 Chicago Illinois Se realiz un anlisis univariado. P significativa <0,050. Resultados: se analizaron 237 episodios de NF. Se clasificaron como microbiolgicamente documentados (MD): 82 (34,6%), clnicamente documentados (CD): 88 (37,1%) y fiebre de origen desconocido (FOD): 67 (28,3%). En los episodios MD 61 de 82 (74,39%) microorganismos
aislados fueron sensibles a PT. Otros resultados relevantes analizados se describen en la siguientes tablas:
Respuesta 72 hs 5to. dia > 5to dia Total Respuesta a TEI modif. Dias de neutropenia Mortalidad Mortalidad por infeccin MD (%) 48 (58,53) 10 (12,19) 4 (4,87) 62 (75,59) 13 (15,85) 13,27 (6,5) 7 (8,53) 3 (3,65) PT (179) 149 (83,24%) 58 (32,4%) 61 (43,07%) 60 (33,51%) 9 (5%) 6 (3%) CD (%) 53 (60,22) 2 (2,27) 7 (7,95) 62 (70,44) 18 (20,45) 14,3 (8) 6 (6,81) 4 (4,54) FOD (%) 52 (77,6) 5 (7,46) 4 (5,97) 61 (91,03) 5 (7,46) 12,8 (5) 3 (4,47) 1 (1,49) P 0,030 0,008 0,007 0,296 0,429 Total 6,75%; P 0,605 Total 3,37%; P 0,481 P <0,001 0,030
Respuesta. TEI FOD MD CD SHOCK Falla multiorganica
PT+ AMIKA (58) 35 (60,34%) 9 (15,5%) 21(36,20%) 28 (48,27%) 6 (10) 5 (8,6%)
0,210 0,143
Conclusiones: el TEI con PT en esta poblacin de pacientes NF de alto riesgo fue altamente eficaz. La respuesta fue significativamente mayor en pacientes sin documentacin clnica ni microbiolgica y una proporcin sustancial de pacientes respondi luego del tercer da. Se document mayor respuesta en el grupo que recibi monoterapia; no obstante, hubo mayor proporcin de pacientes con FOD en este grupo. La elevada proporcin de microorganismos sensibles a PT y la baja mortalidad relacionada a infeccin sustentan continuar con el uso de este TEI en nuestra poblacin.
P393 - 27763 EMERGENCIA DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DE KPC-CARBAPENEMASA EN UN HOSPITAL DE AGUDOS. AMALFA, FLAVIA (1); LUCERO, CELESTE (1, 2); MANZONI, GERARDO (1); PASTERAN, FERNANDO (2); ERSCHEN, AGUSTINA (1); ANGELERI, PATRICIA (1); LOPEZ, GRACIELA (1); BALLESTER, DANIELA (1)
(1) Hospital General de Agudos P. Piero, (2) Servicio Antimicrobianos. INEI- ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn KPC es una carbapenemasa de clase A que se ha diseminado entre las enterobacterias (ETB) a nivel mundial y da resistencia (R) a todos los -lactmicos incluso carbapenemes (CAR). La infeccin por ETB productoras de KPC incrementa la morbi-mortalidad en los pacientes hospitalizados. Estas enzimas presentan una gran capacidad de diseminacin y un fenotipo de multirresistencia, por lo que su rpida deteccin en el laboratorio es crucial para instaurar medidas de control de infecciones necesarias y el tratamiento antimicrobiano adecuado. Objetivo: describir los primeros aislamientos de Klebsiella pneumoniae (KPN) con KPC en un Hospital de Agudos de CABA. Describir las medidas de control de infecciones implementadas. Materiales y mtodos: Todas las ETB con halo de inhibicin de imipenem (IMI)=21mm, en el antibiograma por difusin, se estudiaron con el mtodo inhibicin con cido bornico (APB). Para ello, se ubic un disco de APB entre los discos de IMI y cefoxitina (FOX) en agar Mueller Hinton hisopado con un 0,5 de Mc Farland del aislado. La presencia de sinergia se consider positiva. Se estudi la actividad enzimtica sobre los CAR con el mtodo de Hodge modificado (MHM) (M100- S20-CLSI). Los fenotipos de resistencia se confirmaron por PCR. Simultneamente a los rescates obtenidos se implementaron medidas de control intensivas por parte del Comit de Control de Infecciones, que sesion en forma permanente, que implicaron la realizacin de lneas de tiempo de los casos, el estudio de portacin de ETB con KPC entre los contactos, la intensificacin de las medidas de control de infecciones as como de la capacitacin en servicios. Se cultivaron hisopados rectales en 5ml de caldo Todd Hewith con un disco de IMI 10 g. A las 24 hs, se repicaron a agar Levine y se estudiaron las colonias sospechosas. Se tomaron medidas de aislamiento en los casos positivos. Resultados: se detectaron 12 KPN R a CAR en 11 pacientes internados, entre octubre de 2009 y mayo de 2010. Las KPN se aislaron de las siguientes muestras: 2 urocultivos, 4 hemocultivos, 1 catter, 1 absceso pancretico, 1 lquido biliar, 1 aspirado traqueal y 2 cultivos de vigilancia. Todos los aislados presentaron sinergia entre IMI, FOX y APB, MHM positivo y PCR positi-
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va para KPC. Los aislados presentaron 100% de R a ceftacidima, cefotaxima, piperacilina-tazobactam, ciprofloxacina, gentamicina y trimetoprima-sulfametoxazol; 92% de R a cefepime, 75% a amikacina y 100% de S a tigeciclina (TIG) y colistn (COL) (un paciente present un aislado con R a COL intratratamiento). El 42% y 100% de los aislados presentaron halos de sensibilidad a meropenem e IMI respectivamente. La deteccin de KPC en el laboratorio puede ser deficiente si se utilizan los puntos de corte del CLSI, por lo que es necesario contar con mtodos de screening para realizar el diagnstico. La deteccin temprana es importante para elegir un tratamiento adecuado entren las limitadas opciones que se disponen (COL y TIG) y para elaborar una rpida respuesta por parte del comit de infecciones para contener su diseminacin. La labor conjunta del equipo de salud es el pilar en que debe basarse toda estrategia de control de infecciones.
medidas de control de infecciones. Resulta fundamental implementar mecanismos adecuados de vigilancia para reducir el impacto y diseminacin de estos microorganismos.
P395 - 27787 INFECCIONES POR Leifsonia acquatica. BARBERIS, CLAUDIA (1); ALMUZARA, MARISA (1); FERNANDEZ, ANALIA (2); ORELLANA, NORA (3); BIONDI, ESTEFANIA (4); TOKUMOTO, MARTA (2); PUDDU, MARCELO (4); RAMIREZ, MARIA SOLEDAD (5); FAMIGLIETTI, ANGELA (1); DEL CASTILLO, MARCELO (3); VAY, CARLOS (1)
(1) Instituto de Fisiopatologa y Bioqumica Clnica. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA. (2) Laboratorio de Bacteriologa Fundacin Favaloro. (3) Instituto Fleni. CABA. (4) Laboratorio Nefrolab. C.A.B.A. (5) Departamento de Microbiologa, Inmunologa y Parasitologa. Facultad de Medicina. U.B.A. Leifsonia acquatica es un bacilo gram-positivo, catalasa positivo, mvil que se encuentra distribuido principalmente en el ambiente acutico. Raramente causa infecciones humanas y afectan a pacientes inmunosuprimidos. Se describen tres casos de infecciones asociados con Leifsonia acquatica. La identificacin fenotpica se realiz siguiendo el esquema de Funke y von Graevenitz. Las caractersticas ms relevantes fueron: pigmento amarillo, movilidad positiva y esculina positiva. La identificacin genotpica se realiz a travs de la secuenciacin del ARNr 16S. La sensibilidad a los antimicrobianos fue determinada en agar Mueller Hinton con 5% sangre ovina por la tcnica de Etest. Los puntos de corte utilizados fueron aquellos establecidos por el CLSI (Norma MP-45, 2006) para Corynebacterium spp (no C. diphtheriae). Los rangos de CIM expresados en g/ml fueron: penicilina 0,75-1; vancomicina 0,5-1,5; ciprofloxacina 0,5-1,5; ceftriaxona 0,5-3; imipenem 1-2; gentamicina 1,5-2; meropenem 0,25- 1 y trimetoprima-sulfametoxazol 0,003-0,008. Los datos clnicos ms relevantes de los pacientes se consignan en la siguiente tabla:
Sexo/Edad (aos) Enfermedad de base/Factores predisponentes Caso 1 Masculino/53 Cirrosisencefalopata heptica crnica/ tratamiento inmunosupresor sangre Bacteriemia asociada a catter ceftriaxona favorable Caso 2 Femenino/23 Insuficiencia renal crnica/Trasplante renal-Hemodilisiscatter de Cook Caso 3 Masculino/29 Infeccin por VIH Linfoma de Burkitt/Insuficiencia renal/crnica/Contacto con medio acutico CD4 206 mm3 LCR Probable meningitis ampicilina favorable
P394 - 27780 CARACTERSTICAS CLNICO-EPIDEMIOLGICAS DE UN BROTE DE ENTEROBACTERIAS PRODUCTORAS DE CARBAPENEMASA KPC EN UN HOSPITAL UNIVERSITARIO. HERRERA, F; MARIN, J; BARBERIS, F; ARDUINO, S; STRYJEWSKI, M; RELLOSO, S; ALCALA, W; NICOLA, F; TEMPORITI, E; BONVEHI, P; VALENTINI, R; GARCIA, D; ZARATE, M; SMAYEVSKY, J
Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas (CEMIC) Introduccin: las enterobacterias productoras de carbapenemasas tipo KPC-1, 2 y 3 (EKPC) se han diseminado en el mundo ocasionando un grave problema de salud. Objetivos: describir las caractersticas clnico-epidemiolgicas de un brote de EKPC en un hospital universitario con dos centros de internacin. Materiales y mtodos: estudio retrospectivo de pacientes (pts) con aislamientos en muestras clnicas de Enterobacteriaceae con sensibilidad disminuida a carbapenemes (CAR). La sensibilidad antibi-tica se determin mediante el sistema VITEK 2, difusin por discos (CLSI 2009), test de Hodge modificado (HOD), inhibicin por cido bornico (BOR) y PCR para KPC. La relacin clonal se estableci por REP-PCR y se confirm por PFGE. Se evaluaron datos clnicos, epidemiolgicos y mortalidad. Resultados: se analizaron los casos ocurridos desde Junio-2009 hasta Marzo-2010. Se obtuvieron datos de 25 pts (22 infectados y 3 colonizados). La media de edad fue 63,4 (21,4) aos. Los aislamientos fueron de adquisicin hospitalaria en 80% y asociada al sistema de salud en 20% de los casos. Al diagnstico los pacientes se encontraban en: sala 44%, UTI 36%, y ambulatorios 20%. Las infecciones se clasificaron segn el sitio primario en: urinaria 32%, bacteriemia 27%, herida 14%, intraabdominal 9%, osteomielitis 9% y otras 9%. Las colonizaciones correspondieron a 2 aislamientos de orina y 1 hemocultivo transcatter. Se obtuvieron 25 aislamientos con sensibilidad disminuda a CAR: Klebsiella pneumoniae (21), Enterobacter cloacae (3) y Citrobacter freundii (1). Todos los aislamientos mostraron resultados positivos para el test de HOD, inhibicin por BOR y PCR para KPC. Tanto la REP-PCR como el PFGE para K. pneumoniae mostraron la presencia de mltiples clones, con predominio de uno de ellos. En 2 pacientes se aisl K. pneumoniae resistente a colistn durante el tratamiento con este antibitico. Todas las cepas aisladas fueron sensibles a tigeciclina. La mediana de das de internacin a la infeccin fue 13 (rango intercuartilo [RI] 1 a 27). Tuvieron hospitalizacin en los 6 meses previos y antibiticos en el mes previo, 60% y 88%, respectivamente. Los antibiticos ms utilizados previamente fueron piperacilina-tazobactam y carbapenemes. Tenan >2 comorbi-lidades y procedimientos invasivos el 72% y 93% de los pts respectivamente. La mediana de das de retraso de tratamiento emprico apropiado y duracin total del tratamiento fueron: 2 (RI 0,4) y 14 (RI 8, 14) respectivamente. La mortalidad cruda a 30 das fue del 32% y la relacionada del 27% respectivamente. Conclusiones: la mayora de las infecciones con EKPC fueron de adquisicin nosocomial y ocurrieron en pacientes con hospitalizacin prolongada y uso previo de antibiticos. La mortalidad fue elevada. El brote tuvo una rpida diseminacin en los dos centros de internacin, a pesar de la intensificacin de las
Sitio de aislamiento Tipo de infeccin Tratamiento Evolucin
Sangre Bacteiremia asociada a catter Vancomicina Favorable
Los pacientes sometidos a hemodilisis son susceptibles de adquirir infecciones por bacterias oportunistas entre las que pueden hallarse las del gnero Leifsonia. La meningitis ha sido comunicada slo en una oportunidad. En este caso el paciente VIH haba estado en contacto con el medio acutico durante sus recientes vacaciones en Brasil. La identificacin fenotpica de esta especie es, a menudo, dificultosa y puede requerir la confirmacin genotpica. Dado que Leifsonia es mvil y esculina positiva no debe confundirse con Listeria. Las CIMs elevadas de vancomicina comunicadas en la literatura, no fueron observadas en nuestros aislados.
P396 - 27788 PRODUCTOS NATURALES POTENCIALMENTE ACTIVOS EN EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES RESPIRATORIAS CAUSADAS POR Streptococcus pneumoniae. ZAMPINI, I C (1,2,4); VILLENA, J C (1); SALVA, S (1); HERRERA, M (3); BARBIERI, N (1); ISLA, M I (2,4); ALVAREZ, S (1,3)
(1) CERELA-CONICET. (2) INQUINOA-CONICET. (3) Inst. de Bioqumica Aplicada, (4) Inst. de Estudios Vegetales. Fac. de Bioq., Qca. y Fcia. Univ. Nac. de Tucumn. Tucumn. Argentina Streptococcus pneumoniae es una importante causa de morbimortalidad en todo el mundo, produce infecciones del tracto respiratorio superior en aproximadamente el 50% de los nios de menos de 2 aos de edad. Las resistencias bacterianas frente a
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los antibiticos han incrementado notablemente y los productos naturales de origen vegetal constituyen una interesante alternativa para el tratamiento. Zuccagnia punctata Cav. (Fabaceae), es una especie vegetal ampliamente distribuida en zonas ridas y semiridas de Argentina, utilizada en medicina popular en el tratamiento de infecciones bacterianas y fngicas. En trabajos previos se ha demostrado que extractos alcohlicos de Z. punctata y algunos de sus flavonoides aislados, presentan actividad frente a bacterias gram (-) incluyendo cepas multiresistentes a antibiticos. El objetivo del presente trabajo fue investigar la actividad antimicrobiana del extracto etanlico de Z. punctata y tres flavonoides estructuralmente relacionados aislados de esta especie: 7-hidroxiflavanona (HF), 2,4-dihidroxichalcona (DHC) y 3,7dihidroxiflavona (DHF), frente a S. pneumoniae usando modelos in vitro e in vivo. Materiales y mtodos: los valores de MIC (concentracin inhibitoria mnima) de las muestras fueron determinados, mediante el mtodo de macrodilucin en agar, frente a diferentes serotipos de S. pneumoniae: AV3, AV6, AV14 y AV23. Por otro lado, la actividad antibacteriana in vivo de los productos naturales fue examinada en un modelo de infeccin respiratoria en ratones albino-suizos infantes. Los ratones fueron infectados intranasalmente con 106 UFC de S. pneumoniae (AV6)/ratn, luego fueron tratados oralmente con el extracto crudo de Z. punctata (0,5 y 1mg/ratn) o HF (1mg/ratn) cada 12 o 24 hs durante 7 das. Los animales fueron sacrificados a 1, 3, 5 y 7 das post-infeccin, y muestras de sangre y pulmn fueron utilizadas para el examen bacteriolgico cuantitativo. El plasma fue utilizado para determinar niveles de alaninoaminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST), urea y creatinina. Resultados: los productos naturales estudiados fueron capaces de inhibir el crecimiento bacteriano in vitro. Los menores valores de CIM fueron obtenidos para las cepas AV6 y AV23, mientras que AV14 result la cepa ms resistente frente a los productos naturales evaluados. Los ratones tratados con Z. punctata (1mg/ratn) y 7hidroxiflavanona mostraron una significativa disminucin de los recuentos de patgenos en pulmn, y en sangre resultaron negativos. Los niveles de ALT, AST, urea y creatinina no fueron alterados en plasma durante todo el tratamiento indicando la ausencia de toxicidad heptica y renal de los productos ensayados. Conclusiones: los resultados de este estudio sugieren que Z. punctata y 7- hidroxifavanona seran potencialmente efectivos en el tratamiento de infecciones respiratorias causadas por S. pneumoniae.
gicos (Hodge y Masuda) frente a FEP; como lote negativo se utilizaron 20 ENT previamente caracterizadas como productores de CTXM (n=12) o PER (n=8) con distintos perfiles de S a CTX, CAZ y FEP (7 Eco, 8 Kpn, 5 Pmi). Resultados: las 7 cepas fueron caracterizadas como productoras de OXA-1/30 por PCR. Las zonas de inhibicin (en mm) fueron: FEP (14-26), CAZ (25-33) y CTX (21-32). El desempeo de los marcadores analizados se muestra en la Tabla: (NE: no evaluado)
N de positiSa CTX Sa CAZ Sa FEP Sinergia AMC FEP Sinergia CTX AMCCAZ Diferencia CAZFEP 4 mm 7 (100%) 8 (40%) Diferencia CTXFEP 4 mm 7 (57%) 0 Hodge FEP Masuda FEP
Lote OXA1/30+ Lote Negativo
3 (43%) 1 (5%)
7 (100%) 7 (35%)
5 (71%) 7 (35%)
7 7 (100%) (100%) 20 20 (100%) (100%)
4 (71% NE
NE
Se describe la emergencia de ENT OXA-1/30+ en Argentina en mltiples especies. Los mtodos de uso habitual en la prctica diaria (PC y sinergia CTX-AMC-CAZ) no permitieron diferenciar OXA-1/30 de otras BLEEs debido a una inusual sinergia con AMC en todas las cepas OXA-1/30+. La disociacin entre CTXFEP result el nico indicador fenotpico que permiti la diferenciacin de OXA-1/30 de CTXM y PER. Todas las ENT OXA-1/30+ permanecieron S a CAZ. La correcta identificacin de OXA-1/30 permitira optimizar el tratamiento antimicrobiano, puesto que a diferencia de las BLEEs tradicionales, CAZ sera una alternativa teraputica. Por ello en toda ENT con sinergia entre CTX-AMCCAZ, debera analizarse la disociacin entre CTX-FEP para la correcta identificacin de OXA-1/30.
P398 - 27815 PRIMEROS AISLAMIENTOS CLNICOS DE Cronobacter spp. (ANTES Enterobacter sakazakii) EN ARGENTINA: CARACTERIZACIN Y SUBTIPIFICACIN POR ELECTROFORESIS EN CAMPO PULSADO (PFGE). ASATO, V (1); VILCHES, V (2); PINEDA, M G (2); CASANUEVA, E V (2); CANE, A (2); MUSSANTE, G (2); BRENGI, S (1); MORONI, M (1); TERRAGNO, R (1); BINSZTEIN, N (1); PICHEL, M (1)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn, CABA, (2) Hosp Universitario Austral, Buenos Aires Cronobacter spp., antes Enterobacter sakazakii, es un patgeno oportunista que causa infecciones graves en neonatos e infantes inmunocomprometidos. Tiene amplia diseminacin en el ambiente y se ha aislado de distintos alimentos, siendo las frmulas infantiles lcteas en polvo (PIF) la principal fuente de infeccin descripta. En Argentina, hemos identificado este patgeno en dichas frmulas lcteas, pero no se conocan hasta ahora casos clnicos asociados a este microorganismo. En enero de 2009 se present un caso de meningitis y sepsis en un neonato gemelar pretermino asociado a infeccin por Cronobacter spp. y en marzo del 2009 un segundo caso de neonato pretermino asociado a sepsis, necrosis y perforacin intestinal present coinfeccion por Cronobacter spp., Enterobacter cloacae, Staphylococcus coagulasa negativa y Enterococcus faecalis (aislados del lquido abdominal). Ambos pacientes fallecieron. Se determin que los dos haban recibido leche de frmula en presentacin fluida y materna. Se estudiaron los lotes de leche fluida disponibles en neonatologa y los hisopados del lactario (mesada, canilla, pileta, piso, heladera y carro de transporte), todos con resultados negativos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los dos aislamientos de Cronobacter spp. provenientes de los pacientes neonatos y establecer la relacin gentica entre dichos aislamientos y con respecto a cepas de origen alimentario identificadas anteriormente en el pas. Los aislamientos fueron caracterizados por pruebas bioqumicas. La relacin gentica se determin por PFGE utilizando el protocolo estandarizado de la Red PulseNet Internacional para Shigella sonnei con las enzimas XbaI y SpeI. Los perfiles genticos se analizaron con el software BioNumerics (Applied Maths), coeficiente de DICE y UPGMA. Los dos aislamientos clnicos fueron identificados como C. sakazakii y C. malonaticus segn sus perfiles bioqumicos. Los resultados de
P397 - 27812 EMERGENCIA DE BETA-LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO (BLEES) DEL TIPO OXAXILINASAS (OXA) DEL GRUPO OXA-1/30 EN ENTEROBACTERIAS (ENT) DE ARGENTINA: RECOMENDACIONES PARA SU DETECCIN. RAPOPORT, M (1); CERIANA, P (1); LUCERO, C (1); GUERRIERO, L (1); GRUPO OXA (2); CORSO, A (1); PASTERAN, F (1)
(1) Servicio Antimcirobianos, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn; (2) Grupo OXA Las enzimas del grupo OXA-1/30 presentan un perfil hidroltico inusual sobre penicilinas, cefotaxima (CTX) y cefepima (FEP), pero no sobre ceftacidima (CAZ). Estas enzimas fueron reconocidas en Argentina en aislamientos clnicos de Pseudomonas aeruginosa (PAE). Se ha demostrado efectividad de CAZ en el tratamiento clnico de infecciones por PAE OXA-1/30+. Hasta la fecha, el hallazgo de OXA-1/30 en ENT no haba sido reportado an en Argentina, probablemente debido a que no existen recomendaciones del CLSI para su correcta deteccin. Objetivos: 1) describir la emergencia de ENT productoras de OXA-1/30; 2) analizar distintas tcnicas fenotpicas para detectar OXA-1/30 en ENT. Mtodos: se analizaron 7 ENT con sensibilidad (S) reducida a FEP y S a CAZ [Proteus mirabilis (Pmi) (n=4), Klebsiella pneumoniae (Kpn) (3) y Escherichia coli (Eco) (1)]. La presencia de OXA-1/30 se estudi por PCR. Se evaluaron diversas seales de alarma del antibiograma: puntos de corte (PC) de CTX, CAZ y FEP (CLSI M100-S20 2010); sinergia entre discos de amoxicilina/clavulanico (AMC)-FEP y CTX-AMC-CAZ (colocados a 25-30 mm de centro a centro); una diferencia significativa ( 4 mm) entre las zonas de inhibicin de CAZ y FEP y de CTX y FEP; y ensayos microbiol-
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PFGE mostraron patrones diferentes para ambos aislamientos, con un 52% y 75% de similitud con XbaI y BlnI, respectivamente. Los patrones de XbaI-PFGE se compararon con los perfiles de la Base de Datos Nacional (BDN) de Cronobacter spp., que contiene hasta ahora 16 subtipos correspondientes a 43 aislamientos de Cronobacter spp. de origen alimentario. Se observ que los perfiles de PFGE de los dos aislamientos clnicos fueron diferentes a aquellos incluidos en la BDN Los aislamientos clnicos fueron fenotpica y genticamente distintos, lo cual indica que probablemente derivaron de fuentes de infeccin diferentes. Este es el primer informe de aislamientos clnicos de C. malonaticus y C. sakazakii en el pas, el ltimo de los cuales fue identificado como nico agente causal de una infeccin fatal en un neonato. Se destaca la importancia de fortalecer la vigilancia de este patgeno en Argentina, en la poblacin susceptible de neonatos e infantes inmunocomprometidos
pida deteccin y contencin de este tipo de mecanismos de resistencia.
P400 - 27836 ESTUDIO EPIDEMIOLGICO DE INFECCIONES URINARIAS EN EL HOSPITAL PROVINCIAL DEL CENTENARIOROSARIO, ARGENTINA. REBAGLIATI, JUAN; PEREZ, JORGELINA; SUTICH, EMMA; BOGADO, ISABEL
Universidad Nacional de Rosario La infeccin urinaria (IU) es de frecuente aparicin en los laboratorios de microbiologa y constituye un motivo constante de vigilancia epidemiolgica, siendo las enterobacterias los microorganismos que se encuentran con mayor frecuencia. Por lo tanto, los objetivos del presente trabajo fueron: 1) determinar la prevalencia de las distintas especies bacterianas causantes de IU segn grupo etario, sexo y origen: ambulatorio (A) u hospitalario (H); 2) analizar la prevalencia de los grmenes involucrados en embarazadas teniendo en cuenta la alta incidencia de las IU en dicha poblacin; 3) realizar un relevamiento de la resistencia a los antimicrobianos en las especies ms frecuentes asociadas a IU. El estudio se realiz durante un perodo de 12 meses (junio de 2009 a mayo de 2010). Para el anlisis de los datos, se utilizaron como variables: sexo, edad y procedencia de los pacientes. Para el relevamiento de la resistencia a los antimicrobianos, se utiliz el programa en red diseado por la OMS (WHONET). Se analizaron 3713 urocultivos; de los cuales el 75,9% correspondi al sexo femenino y el 31,8% al sexo masculino. Segn la procedencia, 65,3% perteneci a pacientes ambulatorios, mientras 34,7% a internados. Del total de urocultivos 25,1% resultaron positivos. Escherichia coli result ser el germen ms frecuentemente aislado (59,1%), seguido por Klebsiella pneumoniae (9,1%), Enterococcus faecalis (6,6%), Proteus mirabilis (4,7%), Staphylococcus saprophyticus (3,1%), Pseudomonas aeruginosa (2,7%) y Streptococcus agalactiae (2,6%). No se encontraron diferencias significativas en la prevalencia de agentes etiolgicos segn grupo etario, destacndose en todos los grupos el predominio de Escherichia coli. En relacin a la procedencia, se observ un franco predominio de Escherichia coli tanto en muestras ambulatorias (65%) como hospitalarias (41%), aunque en este ltimo cobraron importancia otras especies tales como Klebsiella pneumoniae (17%), Enterococcus faecalis (9%), Pseudomonas aeruginosa (7%) y Enterobacter cloacae (4%). Se observ una mayor prevalencia de Escherichia coli en pacientes del sexo femenino (68%) respecto del masculino (39%). En los urocultivos positivos de mujeres embarazadas (17,1 % del total de embarazadas) Escherichia coli (55%) fue el germen recuperado en mayor proporcin, seguido de Proteus mirabilis (10%), Enterococcus faecalis (8 %) y Streptococcus agalactiae (7%). En lo que respecta al relevamiento de la resistencia a los antimicrobianos, en todos los casos se observ una mayor resistencia en los aislamientos hospitalarios. Los porcentajes de resistencia detectados fueron: 1) Escherichia coli: ampicilina 69,8% (A) y 75,8 (H), ciprofloxacina 21,8% (A) y 28,3% (H), trimetoprima-sulfametoxazol 36,4% (A) y 41,7% (H); 2) Klebsiella pneumoniae: cefalotina 45,7% (A) y 62,9% (H), ciprofloxacina 32,3% (A) y 54,5% (H); 3) Enterococcus faecalis: ciprofloxacina 61,1% (A) y 65,2% (H), ampicilina 0% (A) y 9,4% (H). La importancia de este tipo de relevamientos reside en la posibilidad de sugerir la implementacin de terapias empricas ms adecuadas.
P399 - 27835 AISLAMIENTOS DE Pseudomonas putida PRODUCTORA DE MBL (METALO--LACTAMASA) TIPO VIM EN UN HOSPITAL PRIVADO DE LA PROVINCIA DE MENDOZA. BUCCIARELLI, RICARDO ADRIN; MARSONET, SILVINA (1); PUENTE, PABLO (2)
(1) Hosp. Espaol Mendoza, (2) Hosp. Militar Mendoza Introduccin: Pseudomonas putida es un bacilo no fermentador que junto con Pseudomonas aeruginosa y a Pseudomonas fluorescens forman el grupo fluorescente. Normalmente coloniza los ambientes hospitalarios (soluciones, respiradores, catteres, etc.) y se considera de bajo nivel patgeno. Entre sus principales patologas encontramos bacteremias (inmunodeprimidos, hemodializados, etc) y pseudobacteremias. El principal valor que reviste este microorganismo es que acta como reservorio de genes de multiresistencia de alto riesgo, en particular de MBL. Estas MBL se encuentran en elementos mviles/movilizables capaces de diseminarse a otras bacterias gram-negativas y poseen fuerte actividad hidroltica sobre penicilinas, cefalosporinas y carbapenemes, quedando restringidas las alternativas terapeticas a monobactames y agentes no betalactmicos. No son inhibibles por cido clavulnico, sulbactam, tazobactam ni APB (cido 3aminofenil bornico) y s por EDTA que se utiliza como detector de la presencia de este tipo de betalactamasas. Las pruebas de difusin no son confiables para predecir sensibilidad en P. putida y deber establecerse la CIM (concentracin inhibitoria mnima) a las drogas no afectadas por la presencia de MBL. Materiales y mtodos: Se realiz un estudio descriptivo-retrospectivo en el periodo comprendido entre enero de 2009 y diciembre 2009. Los datos fueron obtenidos de los registros de bacteriologa y de las historias clnicas de los pacientes. La tipificacin se realiz con sistema automatizado VITEKR (Biomrieux) y como prueba adicional se realiz la hidrlisis de la gelatina. Se realizaron pruebas de difusin para evaluar posibles alternativas terapeticas para guiar el tratamiento emprico y se utilizaron los puntos de corte propuestos por el Servicio de Antimicrobianos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Como herramientas fenotpicas para sospecha y deteccin de MBL se utiliz el algoritmo propuesto por el mismo Servicio. Resultados: se aisl P. ptida productora de MBL en los hemocultivos de 3 pacientes, todos ellos internados en unidad de cuidados intensivos. Todos los aislamientos presentaron el siguiente fenotipo: - resistencia a: imipenem, meropenem, cefepime, ceftazidima, aztreonam. Con un halo de 6 mm en todos los casos. - sensibilidad a: amicacina con un halo de 29 mm y ciprofloxacina con una halo de 19 mm. - sinergia imipenem-EDTA: positivo. - sinergia imipenem-APB: negativo. Se confirm la presencia de MBL en todas las cepas remitidas y las mismas fueron identificadas a nivel molecular por el Servicio de Antimicrobianos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbran como MBL tipo VIM. Conclusiones: la confirmacin de MBL tipo VIM debido a su alta capacidad de diseminacin tanto vertical como horizontal debe llevar a extremar las medidas de control de infecciones. Por lo que resulta imprescindible el esfuerzo conjunto de todo el equipo de salud para la r-
P401 - 27843 RED PULSENET: BASE DE DATOS NACIONAL DE SUBTIPOS DE Listeria monocytogenes EN ARGENTINA. MARTINEZ, CLAUDIA; PRIETO, MONICA; AGUERRE, LORENA; ROCCA, MARIA FLORENCIA; CIPOLLA, LUCIA; CALLEJO, RAQUEL
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn

Introduccin: Listeria monocytogenes (LM) causa una infeccin, listeriosis, que puede presentarse como sepsis o afectar el
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sistema nervioso central, causando meningitis o provocar aborto o nacimiento prematuro. La listeriosis humana es relativamente poco frecuente, caracterizada por un largo perodo de incubacin, lo que dificulta determinar el origen de la infeccin. Requiere hospitalizacin en la mayora de los casos y presenta una alta tasa de mortalidad. Esto ltimo enfatiza la necesidad de una permanente vigilancia epidemiolgica. La vigilancia tradicional no permite en el caso de LM relacionar los pacientes con el alimento, especialmente cuando se trata de un nmero limitado de casos en un rea geogrfica extensa. Dentro de las tcnicas moleculares de subtipificacin utilizadas, la macrorestriccin del ADN y posterior electroforesis en campo pulsado (PFGE) ha demostrado ser un mtodo altamente discriminatorio y reproducible. En Argentina, listeriosis no es una patologa de comunicacin obligatoria, por lo que se desconoce la prevalencia, como as tambin la epidemiologa de este microorganismo. Objetivo: evaluar retrospectivamente la diversidad gentica de aislamientos de LM. Materiales y mtodos: se estudiaron 130 aislamientos de LM (52% de origen humano, 36% de alimentos, 10% ambientales y 2% de origen animal) correspondientes al periodo 1990-2010. Todos los aislamientos fueron confirmados mediante pruebas bioqumicas convencionales y serotipificados por PCR mltiple. El PFGE se realiz segn el protocolo estandarizado por el CDC, Atlanta, USA en el marco de PulseNet Internacional. Los patrones de PFGE fueron analizados y comparados con el programa BioNumerics. (Applied Maths). Se defini como cluster aquellos aislamientos que presentaron patrones de restriccin idnticos con ambas enzimas (Ascl y Apal). Resultados: el serotipo prevalente fue 4b (82%) seguido por el serotipo 1/2b (18%). Se obtuvieron 62 pulsotipos distribuidos en 21 clusters. Solamente 4 de los 21 clusters contenan 4 o ms aislamientos. Solo uno de dichos clusters correspondi al serotipo 1/2b y agrup aislamientos de origen alimentario durante el ao 2009. No se recibi durante dicho ao ningn aislamiento humano que pudiera asociarse a dichos patrones. En base al anlisis de los datos epidemiolgicos, no se detectaron clusters circulando en un rea geogrfica y periodo delimitado. En Argentina, las infecciones humanas por LM han sido considerados casos espordicos, dado que la vigilancia epidemiolgica molecular ha sido implementada muy recientemente. Se resalta la importancia de continuar el desarrollo de la base de datos nacional aplicando PFGE en tiempo real para la vigilancia de los clusters circulantes. Esta plataforma permite a nivel nacional, comparar aislamientos, detectar brotes en tiempo real, poder asociarlos a la fuente de infeccin y realizar intervenciones sanitarias. Asimismo, en el marco de la Red PulseNet Amrica Latina y Caribe y PulseNet Internacional, se pueden comparar los aislamientos circulantes en Argentina con los de otros pases.
contaminans en aislados clnicos e industriales. El estudio fue realizado con 75 aislados clnicos de B. contaminans incluyendo un brote del 2004 (12 pertenecientes a pacientes no-FQ) y 10 aislados industriales. La identificacin fue hecha por secuenciacin del gen recA y comparacin con base de secuencias ST del MLST http://pubmlst.org/bcc/. Todos los aislados fueron analizados por tcnicas de fingerprintitng (ERIC/Rep/BOX-PCRs). Se empleo espectroscopia FT-IR para analizar clulas bacterianas enteras, crecidas bajo estrictas condiciones de cultivo estndar y los espectros se adquirieron sin PHB. La mayor parte de los aislados clnicos no mostraron polimorfismo, siendo el 90% recA ST 71. Aislados pertenecientes a un brote del 2004 agruparon juntos. La mayor parte del resto de los aislados de pacientes No-FQ, industriales y ambiente hospitalario, mostraron diferentes alelos. BoxPCR fingerprinting revel un relativo elevado nivel de diversidad genotpica, observndose 9 diferentes genotipos (B1-B9). ERIC/ REP-PCRs mostraron menor poder de discriminacin. Los aislados del brote se distribuyeron en 5 grupos (B1, B3, B4, B6, B8). La diversidad de aislados perteneciente a un mismo paciente tambin fue evaluado. El anlisis por espectroscopia FT-IR, usando la primer derivada del espectro en 3 rangos de IR, mostr ser capaz de distinguir dentro de los aislados clnicos recA ST 71 aadiendo incluso mayores niveles de discriminacin que los PCR fingerprinting. Se concluye que tanto PCR fingerprint como espectroscopia FT-IR mostraron excelentes tipeabilidad, pudiendo ser herramientas tiles para estudios epidemiolgicos de B. contaminans a nivel mundial. En particular, la espectroscopia FTIR se puede considerar una metodologa sencilla y rpida para la diferenciacin de las cepas en grupos de aislamientos obtenidos durante los brotes, o respondiendo a las preguntas de clonalidad entre cepas microbianas.
P403 - 27889 SHOCK SEPTICO POR Shigella sonnei. SUSANA, ORTIZ; BERNALDO DE QUIROS, MARCIA; MAMY, GISELLA
Hospital Comodoro Rivadavia Las bacterias del gnero Shigella son bacilos gram-negativos, inmviles, anaerobios facultativos que son aislados frecuentemente del tracto gastrointestinal. Shigella sonnei es uno de los agentes etiolgicos de la diarrea aguda y raramente causa infecciones extraintestinales, describindose el hallazgo en pacientes desnutridos o inmunosuprimidos. El objetivo del trabajo es presentar un caso de shock sptico ocasionado por este germen. La prevalencia de hemocultivos positivos en adultos se estima en el 0,4%, siendo Shigella flexneri la ms predominante, con mayor frecuencia en nios que en adultos. Los factores predisponentes descritos en la literatura son edad mayor de 65 aos, malnutricin, insuficiencia renal, diabetes, leucemia, anemia de clulas falciformes, transplante de rgano slido, neutropenia, VIH, terapia crnica con esteroides y cirrosis. Caso clnico: mujer de 55 aos con diabetes tipo 2, ingresa con deterioro del sensorio, hiperglucemia y diarrea de 3 das de evolucin. Presentando los siguientes parmetros clnicos: TA 100/60 mmHg; FC 100/min, T 36 C y FR 20/min. Parmetros bioqumicos relevantes: hto 38%, leucocitosis 28500 clulas/mm3 con desviacin a la izquierda, glucemia 8,7 g/l, urea 1,08 g/l, creatinina 1,43 mg%; Na+ 143 meq/l, K+ 4,2 meq/l, Cl- 102 meq/l. EAB: compatible con acidosis metablica simple. GAP 38. Se establece diagnstico presuntivo de cetoacidosis diabtica y shock sptico con probable foco gastrointestinal. Se administra solucin fisiolgica, Ringer lactato, inotrpicos por persistir hipotensa (noradrenalina 0,1 g/k a 12 ml/h) e insulina. Se toman hemocultivos, urocultivo y coprocultivo; se medica empricamente con ceftriaxona (1 g/12 hs) y metronidazol (500 mg c/8 hs). A las 48 hs se aisla e identifica Shigella sonnei tanto en coprocultivo como en hemocultivos (2/2) por pruebas bioqumicas convencionales y serotipificacin con antisueros provistos por el ANLIS. La sensibilidad a los antimicrobianos se ensaya por el mtodo de difusin de Kirby Bauer segn CLSI, resultando sensible a ampicilina, cefotaxima, ceftazidima, piperatazobactam, imipenem, meropenem, gentamicina, amikacina, colistin, cefepime, tigecilina, ciprofloxacina y resistente a trimetroprima-sulfametoxazol. Se decide rotar la medicacin a ciprofloxacina (400 mg c/12 hs) y por presentar una evolucin favorable la paciente es
P402 - 27860 APLICACIN DE TCNICAS MOLECULARES Y ESPECTROSCOPIA FT-IR A LA EPIDEMIOLOGA DE Burkholderia contaminans EN INFECCIONES PULMONARES DE PACIENTES FIBROQUISTICOS. MARTINA, PABLO (1); BOSCH, ALEJANDRA (1); MANNINO, CONSTANZA (1); LAGARES, ANTONIO (2); YANTORNO, OSVALDO (2)
(1) CINDEFI; (2) IBBM Especies del complejo Burkholderia cepacia (CBC) tiene la capacidad para difundir entre la poblacin de pacientes con fibrosis qustica (FQ) y de causar graves brotes epidmicos. La aplicacin de medidas estrictas para el control de infecciones en hospitales y a la educacin de los pacientes, la transmisin de bacterias entre ellos se ha reducido significativamente en los ltimos aos. Sin embargo, estas medidas de control de la infeccin no impiden la adquisicin de los organismos CBC. Por lo tanto, la correcta identificacin y tipificacin es esencial para determinar la relacin epidemiolgica entre aislamientos clnicos y ambientales, y para la aplicacin de sistemas eficaces de control de la infeccin. Entre las 17 especies de bacterias que se han descrito en el CBC, B. contaminans ha sido aislado de cultivos de esputo de los pacientes con FQ, en el Reino Unido, Italia, Portugal, EE.UU., Canad, Brasil y Argentina, y en muestras ambientales. El objetivo de este estudio fue evaluar el uso de mltiples sistemas de tipificacin genmica para la tipificacin de B.
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dada de alta. Dado la alta morbimortalidad de las bacteriemias por Shigella sp, que oscila alrededor de un 20%, es nuestro inters hacer nfasis que ante la sospecha de infeccin por Shigella sp., en especial en pacientes con factores predisponentes, estara indicado tomar hemocultivos adems del coprocultivo para poder instaurar tratamiento antibitico, ya que se ha demostrado que el mismo es efectivo en estos casos, permitiendo disminuir la gravedad y duracin de la enfermedad, reduciendo as el perodo de eliminacin de los microorganismos y previniendo las complicaciones asociadas.
ARECHAVALA, A (3); MAIOLO, E (3); GOMEZ, L (2); GARCIA, P L (4); COLOMBRINI, A (5); ESSEN, O (6); LARA, C S (1)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn (2) Hospital Vicente Lpez y Planes (3) Hospital Muiz (4) Clnica Bessone (5) Clnica San Camilo (6) Hospital Abette La psitacosis es una zoonosis de denuncia obligatoria que requiere un diagnstico rpido para poder identificar la fuente de contagio y prevenir as la aparicin de nuevos casos. Objetivos: 1) describir 3 brotes de psitacosis ocurridos en la Pcia. de Bs. As. 2) discutir la metodologa apropiada para su confirmacin desde el laboratorio. Se defini como caso al paciente con alteraciones respiratorias y nexo epidemiolgico y como no caso al paciente con nexo epidemiolgico pero sin manifestaciones clnicas. En el 1er. brote la fuente fue de tipo continua (derrumbe de un entretecho donde habitaban palomas). Los trabajadores (25) continuaron concurriendo a ese lugar (23 casos y 2 no casos). Se procesaron muestras de suero (MS) y respiratorias (MR). En las primeras se determinaron anticuerpos de clase IgG por IFI. Se consider positivo border line a un ttulo de 40 en pacientes en contacto con aves y positivo confirmado a un ttulo = 80 en el 1er suero, conversin o cuadruplicacin de ttulo o ttulo conservado >160 en par de sueros. En MR se realiz una PCR mltiple anidada para C. psittaci. En 17/23 pacientes evaluados, la 1a. muestra de IgG para Chlamydophila spp fue positiva (73,9%). En un paciente slo la 2a. muestra fue positiva. Se realizaron adems pruebas diagnsticas para detectar infeccin por H. capsulatum y C. neoformans. Las 25 muestras fueron negativas para C. neoformans. Las serologas para H. capsulatum (inmunodifusin) fueron negativas y en 1 caso la CIE fue positiva. Las pruebas cutneas mostraron una positividad del 33,3%. En el 2do brote se procesaron MS de 5 personas (2 casos con neumona grave y 3 no casos) y MR de 1. Pertenecan a una comunidad cerrada y estaban expuestas a gallinas y a un loro sano. Uno de los 2 casos present serologa y PCR positiva. En una 2da muestra dieron un ttulo de 80, igual al obtenido para los no casos. Tercer brote: 3 pacientes expuestos a una cotorra enferma. Un varn adulto falleci por neumona grave con serologa positiva para M. pneumoniae y negativa para Chlamydophila spp. No se pudo efectuar PCR por falta de MR. Su esposa y su hija, tambin con neumona grave tuvieron iguales resultados serolgicos, pero las PCR fueron positivas para C. psittaci y negativas para M. pneumoniae. El estudio para grmenes comunes fue negativo en los pacientes con neumona tanto en el 2do como en el 3er brote. En el 1er. brote, el agente causal se asumi como C. psittaci. Las pruebas de PCR dieron indeterminadas por haberse tomado las muestras con materiales inadecuados. En el 2do. brote se determin el agente causal mediante serologa y PCR. En el tercer brote si se hubiese realizado solamente serologa, el diagnstico obtenido hubiera sido parcial: M. pneumoniae como nico agente. Gracias a la PCR, se pudo determinar el segundo agente causal y relacionarlo con la fuente. Es importante ante la presencia de individuos con infecciones respiratorias y nexo epidemiolgico tomar muestras respiratorias para PCR y sueros en forma adecuada para identificar correctamente al agente causal.
P404 - 27897 APLICACIN DE LA TCNICA DE MULTILOCUS VARIABLE NUMBER OF TANDEM REPEATS ANLISIS A LA VIGILANCIA EPIDEMIOLGICA DE Escherichia coli O157:H7 EN ARGENTINA. CHINEN, ISABEL (1); D ASTEK, B (1); HYYTIA TREES, E (2); ASHLEY, A (2); CISTERNA, D (1); MILIWEBSKY, E (1); DEZA, N (1); SUAREZ, M E (3); GONZALEZ, G (4); ESQUIVEL, P (5); PIANCIOLA, L (4); RIVAS, M (1)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn, (2) CDC, EE.UU, (3) Laboratorio Central Crdoba, (4) Hospital Heller, (5) EPI Cordoba La electroforesis de campo pulsado (PFGE - pulsed-field gel electrophoresis) es la tcnica considerada Gold Standard para la subtipificacin molecular de las cepas de Escherichia coli O157:H7 con fines epidemiolgicos. Sin embargo, dicha tcnica presenta limitaciones en la definicin de ciertas cepas. Actualmente la tcnica de multilocus variable number of tandem repeats anlisis (MLVA) es aplicada como tcnica complementaria por su alto poder discriminatorio. Dicha tcnica consiste en estudiar regiones intra- o inter-gnicas con secuencias cortas de ADN repetitivas, denominadas variable-number tandem repeat (VNTR) que pueden variar entre las cepas respecto del nmero de unidades repetidas presentes. El objetivo del presente estudio fue comparar los resultados obtenidos por MLVA y PFGE a fin de definir la implementacin, en Argentina, de MLVA como tcnica complementaria en estudios epidemiolgicos. Se estudi un total de 30 cepas E. coli O157:H7 aisladas de casos clnicos espordicos (15 cepas), del reservorio animal (1 cepa), de alimentos (1 cepa), del brote 1 en Neuqun-2008 (4 cepas) y del brote 2 en Crdoba-2009 (9 cepas). La tcnica consisti en realizar dos PCR mltiples con 4 pares de cebadores especficos cada una, para el estudio de 8 VNTRs descriptos para E. coli (Hyytia-Trees, 2010). Luego, los fragmentos amplificados fueron separados por electroforesis capilar en el equipo Genetic Analyzer 3500-AVANT (Applied Biosystems). Los resultados obtenidos fueron analizados utilizando el programa informtico Gene Mapper (Applied Biosystems), y la definicin y comparacin de perfiles se realiz mediante el programa BioNumerics (Applied Maths). En las 30 cepas estudiadas, se observaron diferentes variables allicas para los 8 locus VNTR: VNTR3 (8 alelos); VNTR34 (5); VNTR9 (9); VNTR25 (4); VNTR17 (5); VNTR19 (5); VNTR36 (5); y VNTR37 (4). Al analizar los resultados obtenidos del total de las 30 cepas se identificaron 17 perfiles MLVA diferentes. Los siguientes perfiles fueron detectados en ms de una cepa: ARMLVA.0002 (4 cepas); ARMLVA.0009 (2); ARMLVA.0010 (9); y ARMLVA.0018 (2). Al comparar los resultados generados por MLVA con los obtenidos por PFGE de los aislamientos espordicos se observ que MLVA pudo discriminar cepas con idnticos patrones XbaI- y BlnIPFGE. Las cepas correspondientes a cada uno de los brotes identificados con los patrones de PFGE AREXHX01.0331 (brote 1) y AREXHX01.0427 (brote 2), presentaron tambin idnticos perfiles por MLVA ARMLVA.0002 (brote 1) y ARMLVA.0010 (brote 2). La cepa de un caso de diarrea aislada simultneamente en la misma ciudad donde ocurri el brote 2 y que present el mismo patrn PFGE, fue diferenciada por MLVA. Estos resultados preliminares demuestran que MLVA presenta alto poder discriminatorio y que luego de la validacin correspondiente podra ser aplicada como tcnica complementaria en aquellas situaciones epidemiolgicas de difcil definicin por PFGE.
P406 - 27913 ABSCESO CEREBRAL POR Nocardia sp. SESMA, A; FRANCISETTI, V; MANGIATERRA, S
Seccin Bacteriologa. Laboratorio Central. Hospital Italiano de Crdoba Las bacterias pertenecientes al gnero Nocardia son bacilos gram-positivos filamentosos ramificados, aerobios y parcialmente cido-resistentes. Estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y no forman parte de la microbiota humana normal pero pueden aparecer como colonizantes del tracto respiratorio sin causar enfermedad. Sin embargo, cuando el microorganismo logra vencer los mecanismos de defensa del hospedador, hecho que se da especialmente en pacientes con alteracin de la inmunidad celular (HIV, trasplante, neoplasias, uso de corticoides, alcoholismo, enfermedad pulmonar obstructiva crnica, disgamaglobulinemias) pueden producir infecciones localizadas habitual-
P405 - 27911 ESTUDIO DE BROTES DE INFECCIONES POR Chlamydophila psittaci. CADARIO, M E (1); CUELLO, A (2);
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mente en piel, tejidos blandos, pulmn, huesos y articulaciones o diseminarse sistmicamente. La inhalacin es el principal mecanismo de ingreso, tambin puede ser a travs de traumas. Se presenta el caso de un paciente de 71 aos que concurri a consulta por somnolencia, prdida de estabilidad y astenia de 4 das de evolucin, con antecedentes de artritis reumatoidea en tratamiento con corticoides. Se realiz TAC cerebral donde se observ una masa ocupante compatible con tumor en fosa posterior de cerebelo. Se decidi ciruga donde se evidenci un tumor abscedado, obtenindose material purulento que se envi a anatoma patolgica y bacteriologa. En el examen microscpico directo del mismo se observaron bacterias filamentosas ramificadas grampositivas con cido resistencia parcial frente a la coloracin de Kinyoun. En el cultivo en agar sangre a las 48 horas de incubacin desarrollaron colonias blancas yesosas con tpico olor a tierra recin arada, que fueron identificadas presuntivamente como Nocardia sp. y confirmadas por el servicio de Bacteriologa Especial del Instituto Malbrn, el cual determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) para los siguientes antimicrobianos: trimetoprima-sulfametoxazol (TMS) 0,094 g/ml, meropenem (MEM) 1,0 g/ml, amicacina (AKN) 0,75 g/ml. El resultado de anatoma patolgica fue negativo para neoplasia. El paciente fue tratado con TMS y recibi el alta hospitalaria para continuar con el tratamiento en su domicilio. A las 48 horas regres por depresin del sensorio e hiponatremia por lo que requiri internacin en la unidad de terapia intensiva, complicndose luego con neumona y pancitopenia probablemente asociada a toxicidad debida a TMS. Se rot el esquema antibitico a imipenem ms AKN. A pesar de su mejora inicial el paciente falleci al mes por paro cardiorespiratorio. Es de destacar que, si bien la localizacin cerebral est descrita como consecuencia de la diseminacin hematgena de esta bacteria, su presentacin no resulta frecuente.
en el ltimo ao, OR= 13,5 (IC95% = 3,1 - 66,7) y con la ausencia de mtodos de barrera, OR=4,3 (IC95%=1,1-18,1). C. trachomatis se asoci con haber tenido ms de una pareja sexual en el ltimo ao, OR= 9,7 (IC95% = 2,1 - 50,8). Candida spp. se asoci con la presencia de respuesta inflamatoria, OR=2,17 (IC95% = 1,1 - 4,5) y VB con un pH>4,5, OR=3,4 (IC95% = 1,5 - 7,6) Los resultados de este trabajo muestran una moderada prevalencia de VB, similar a la descripta internacionalmente. La prevalencia de T. vaginalis y C. trachomatis en el grupo analizado result elevada (6,78% en total) y ambas infecciones estuvieron asociadas principalmente a ms de una pareja sexual en el ltimo ao. La infeccin por T. vaginalis se asoci tambin a la presencia de reaccin inflamatoria, no as la infeccin por C. trachomatis. Los resultados muestran la necesidad de profundizar el estudio de las infecciones genitales en mujeres de la ciudad de Baha Blanca, y encarar programas de prevencin de ITS.
P408 - 27985 DIAGNSTICO DE Streptococcus pneumoniae POR NESTED-PCR EN NIOS HOSPITALIZADOS CON NEUMONA ADQUIRIDA DE LA COMUNIDAD. GOMEZ, A (1); CHIANI, Y (1); ORTELLAO, L (2); CANTARUTTI, D (2); PIERINI, J (2); COCIGLIO, R (3); KARAKACHOF, M (3); SIOLI, N (2); KUSZNIERZ, G (1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (INER) Dr. E. Coni, (2) Hospital Iturraspe, (3) HNOA Introduccin: Streptococcus pneumoniae (Sp) es el principal agente etiolgico de la neumona bacteriana adquirida en la comunidad desarrollndose bacteriemia en el 20-25% de los casos. La baja concentracin del patgeno, volmenes pequeos de muestras, terapia antibitica previa a la toma de muestra o las autolisinas de los organismos contribuyen a la baja positividad en cultivos. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) ha hecho posible detectar bajo nmero de patgenos viables, no viables o fragmentos de DNA. Objetivos: evaluar una Nested PCR para el diagnstico de Sp en sangre entera (SE), plasma (P), fraccin de glbulos blancos (GB) y suero (S). Analizar aspectos clnicos-epidemiolgicos de los pacientes. Poblacin: se estudiaron desde julio 2008 a junio 2010, 156 pacientes hospitalizados menores de 14 aos de dos hospitales de Santa Fe, con sospecha de neumona bacteriana. Materiales y mtodos: se utiliz una Nested-PCR que detecta fragmentos del gen de la neumolisina. Se evaluaron 33 pacientes confirmados por laboratorio. Resultados: de 156 muestras, 31 (19,9%) resultaron positivas por PCR con hemocultivo negativo: 14 (45,2%) en GB, 16 (51,6%) SE, 11 (35,5%) P, 5 (16,1%) S. En 2 casos la PCR fue negativa y el hemocultivo positivo. Tuvieron ms de 1 resultado positivo de PCR 11: 2 GB y SE; 4 P y SE; 1 S y SE; 1 S y GB; 2 P, SE y GB; 1S, P, SE y GB. En 25 muestras se detect el gen en GB y/o SE. El 90,3% tuvo tratamiento antibiotico (ATB) previo a la toma de muestra con un promedio de 3,3 dias (1-11 das). Distribucin de la edad: < 1 ao: 9; 1-5: 18; 6-14: 4. Sexo: masculino 61%. Sntomas al ingreso: media de frecuencia respiratoria 48/ min; murmullo vestibular disminuido en todos los casos; tiraje: 51,6%, rales: 87%: subcrepitantes 64,5% y crepitantes 22%; tos: 87,1%; sibilancias 29%; soplo tubario 9,7%; saturacin de oxgeno media: 93%; distensin abdominal: 2. Hallazgos radiolgicos: 17 atrapamiento areo, 13 infiltrado intersticial, 5 derrame pleural, 11 infiltrado alveolar multilobular y 16 unilobular, 2 atelectasia.GB: media 16.700 /mm3 (rango: 5000-28.000/mm3) y de polimorfo-nucleares 65% (rango: 43-94). Requirieron oxgeno el 71% con una duracin media de 3,6 das (rango : 1-7). Fallecidos: 0. Duracin media de estada hospitalaria 6 das (rango: 1-12). El 77,4% us como esquema de tratamiento ampicilina durante la internacin. Conclusiones: la PCR es un recurso importante para llegar al diagnstico etiolgico ya que el hemocultivo tiene bajo rescate. Se encontr mayor positividad en glbulos blancos y sangre entera, sin embargo si se hubiera utilizado SE o GB slo el 52% vs 46 % de los casos hubiera sido diagnosticado. Utilizando la fraccin de GB y SE se diagnostic el 80,6% de los pacientes. Por lo tanto para arribar al diagnstico definitivo de todos los casos se necesitara los cuatro tipos de muestras. La evolucin clnica de los pacientes fue favorable y ninguno necesit estada en la unidad de cuidados intensivos.
P407 - 27943 INFECCIONES GENITALES Y VAGINOSIS BACTERIANA EN MUJERES SINTOMTICAS DE BAHA BLANCA: PREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO. OCCHIONERO, M (1); GALLO VAULET, L (2); ENTROCASSI, C (2); PANICCIA, L (1); PEDERSEN, D (1); ROSSI, G (1); MAZZUCCHINI, H (1); FERNANDEZ, D (3); RODRIGUEZ FERMEPIN, M (2)
(1) Ct. Microbiologa Especial, Dpto de Biol, Bioqca y Fcia, UNS, (2) Lab. Inmunologa Clnica, Ct. Anlisis Clnicos I, Dpto de Bioqumica Clnica, Facultad de Fcia y Bioqca, UBA, (3) Hospital Municipal de Agudos Dr. Lenidas Lucero, Baha Blanca Las infecciones genitales y la vaginosis bacteriana (VB) representan uno de los principales motivos de consulta en mujeres en edad frtil. Su presencia puede generar un dao directo en la salud reproductiva, una prdida sensible en la calidad de vida de la mujer y aumentar los riesgos de adquirir y transmitir la infeccin por HIV. El conocimiento sobre infecciones genitales es esencial para el diseo de polticas de prevencin y Salud Pblica. El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia y los factores de riesgo asociados a las infecciones por Chlamydia tracho-matis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Candida spp. y VB en mujeres sintomticas en la ciudad de Baha Blanca. Entre mayo 2006 a mayo 2007 se incorporaron al estudio las muestras vaginales y endocervicales de mujeres sexualmente activas que realizaron una consulta ginecolgica y a las que se les solicitaron estudios bacteriolgicos genitales que se realizaron en el laboratorio del Hospital Municipal de Agudos Dr. Lenidas Lucero. Se detect N. gonorrhoeae, T. vaginalis y Can-dida spp. por mtodos directos y cultivo. C. trachomatis se detect y genotipific mediante PCR-RFLP y el estado de VB se estableci con el valor numrico de Nugent. Todas las participantes completaron un consentimiento informado y un cuestionario estndar. Se estudiaron 295 muestras. Rango de edad 15-60 aos. El 36,27% de las muestras estudiadas (107/295) present alguno de los marcadores estudiados. La mayor prevalencia correspondi a VB 18,0%; luego se ubicaron Candida spp., T. vaginalis y C. trachomatis, con 13,9%, 3,7% y 3,1% respectivamente. No se detect infeccin por N. gonorrhoeae. La presencia de T. vaginalis se asoci con el aumento de reaccin inflamatoria, OR=14,9 (IC95% = 1,9 - 360,6), con haber tenido ms de una pareja sexual
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P409 - 28006 ANLISIS DE LOS FACTORES DE VIRULENCIA PRESENTES EN LOS PRINCIPALES CLONES DE Staphylococcus aureus. GARDELLA, N; FERNANDEZ, S; DI GREGORIO, S; MOLLERACH, M
Facultad de Farmacia y Bioqumica UBA Introduccin: S. aureus es un patgeno oportunista que expresa mltiples factores de virulencia. La mayora de las enfermedades provocadas por S. aureus resultan de la accin combinada de varios determinantes de patogenicidad. La caracterizacin de los factores de virulencia presentes en los principales linajes permite comprender mejor la patogenicidad y epidemicidad de los mismos. Objetivo: evaluar la presencia de los genes de virulencia en los principales clones de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SAMR) detectados en Argentina. Materiales y mtodos: se seleccionaron aislamientos representativos de los clones prevalentes de SAMR encontrados en Argentina en infecciones hospitalarias, adquiridas en la comunidad y portacin. Se incluyeron aislamientos del clon cordobs (1), del clon brasilero (1), del clon peditrico (1), de los 4 tipos clonales prevalentes asociados a infecciones adquiridas en la comunidad (SAMR-CA) (8) y de nios portadores (2). Todos ellos fueron previamente caracterizados, por lo que se conoce su patrn de PFGE, ST y tipo de SCCmec. Se determin por PCR la presencia de los genes que codifican para algunos factores de virulencia, entre ellos enterotoxinas (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej), hemolisina (hlg), Leucocidina de Panton Valentine (luk-PV), genes implicados en la formacin de biopelculas (ica), genes de adhesinas (fnbA, fnbB, clfA, clfB y fib) y el tipo de agr. Resultados: los genes seb, sec, sed, see y seh estn ausentes y los genes hlg, ica, fnbA y clfA presentes en todos los aislamientos analizados. Bra: clon brasilero; Cord: clon cordobs; Ped: clon peditrico; n: nmero de aislamientos; ND: no determinado.
Denominacin/ PFGE (n) SCC mec /ST Agr Sea Seg Sei luk-PV fnbB Fib clfB SAMRCA A (3) IV/5 II + + + + + + SAMRCA B (1) IV/SD III + + + SAMR- SAMRCA C CA D (2) (2) IV/30 III ND/+ -/+ -/+ + + + -/+ IV/282 III + + + Portacin A2 (1) IV/5 II + + + + Portacin A1 (1) IV/5 II + + + + + + SAMR- SAMRSAMRHA HA Ha Bra (1) Cord (1) Ped (1) III/239 I + + + + I/5 II + + I/5 II + + +
vios y posteriores al tratamiento con vancomicina respectivamente. Las pruebas de sensibilidad (mtodo de difusin con discos y CIM a vancomicina por microdilucin) fueron realizadas segn recomendaciones del CLSI. Se realiz adems screening en agar BHI con 3 g/ml y 6 g/ml de vancomicina y mtodo PAP-AUC (rea bajo la curva en el anlisis poblacional). Se consider probable hVISA cuando la relacin PAP-AUC fue mayor o igual a 0,9 con respecto a Mu3. Adems, mediante PCR se realiz la deteccin del gen mecA y luk-PV; y caracterizacin del SCCmec. Los aislamientos fueron genotipificados por PFGE, spa typing y MLST. En dos de los 3 pares se analiz el grosor de la pared mediante microscopa electrnica de transmisin (MET). Resultados: P1 y P2 resultaron ser sensibles a meticilina (SAMS), los pares D y B presentaron fenotipo resistente a meticilina adquirido en la comunidad (SAMR-AC). En todos los casos el aislamiento recuperado luego del tratamiento con vancomicina result isognico al inicial por PFGE. Los 6 aislamientos presentaron CIM a vancomicina entre 0,5g/ml y 1g/ml. D2 desarroll en el screening con 3g/ ml de vancomicina. Ninguno de los aislamientos present desarrollo en el screening BHI con 6g/ml de vancomicina. Mediante PAP-AUC resultaron ser hVISA D1 y D2. Mediante MET, se observ aumento del grosor de la pared celular en los aislamientos P y D. Los resultados de la caracterizacin genotpica son los siguientes: ND: No Determinado. NT: No Tipificable
P1 mecA SCCmec luk-PV Spa MLST t008 ST8 P2 t008 ST8 D1 + NT T002 ST100 D2 + NT t002 ST100 B1 + IV ND ND B2 + IV ND ND
Segn los valores de CIM por microdilucin ninguno de los aislamientos recuperados corresponde a cepas VISA. Sin embargo, por uno de los mtodos aplicados (PAP/AUC) fue posible detectar hVISA, lo cual explicara el fracaso teraputico a vancomicina. Este hallazgo alerta acerca de la necesidad de disponer de un mtodo apropiado para la deteccin de cepas con resistencia heterognea a vancomicina.
Conclusin: la diferencia en el perfil de genes de virulencia de las cepas pertenecientes al clon hospitalario (clon cordobs) y comunitario (CA-PFGE A), ambos ST5, consiste en la presencia adicional de los genes sea, seg, luk-PV y clf-B en la cepa de la comunidad. Uno de los subtipos clonales de CA-PFGE A prevalentes en colonizacin (A1) present idntico perfil de genes de virulencia; el otro (A2), en cambio no posee los genes sea ni luk-PV.
P411 - 28042 INFECCIONES DE PIEL Y PARTES BLANDAS POR Staphylococcus aureus RESISTENTES A METICILINA DE LA COMUNIDAD EN EL HOSPITAL ALVAREZ. TERZANO, M (2); RODRIGUEZ, L (2); SCHIJMAN, M (2); CORBELLA, S M (2); ANODAL, M (2); MEROLA, G (2); VILLANI, M E (2); GARDELLA, N (1); MOLLERACH, M (1)
(1) Ctedra de Microbiologa. FFyB. UBA, (2) Hospital General de Agudos Dr. Teodoro Alvarez Introduccin: las infecciones de piel y partes blandas (PPB) causadas por Staphylococcus aureus resistente a meticilina de la comunidad (SAMR-CA) son muy frecuentes en la consulta ambulatoria, generando infecciones recurrentes con gran morbilidad, en ocasiones asociadas a complicaciones graves. La verdadera incidencia de las infecciones por este germen es desconocida y el tratamiento ptimo no esta an determinado. El conocimiento de dicha informacin sera de utilidad para consensuar nuevas estrategias teraputicas. Objetivos: estimar la frecuencia de infecciones de piel y partes blandas producidas por SAMR-CA en la poblacin asistente al servicio de dermatologa del Hospital lvarez. Caracterizar los aislamientos de SAMR-CA recuperados de infecciones de piel en nuestro medio. Materiales y mtodos: realizamos un estudio prospectivo incluyendo todos pacientes con PPB refractarias al tratamiento emprico con cefalexina (100 mg/ kg/da). El estudio se realiz por un periodo de 3 meses, desde el 01/02/2009 al 30/04/2009. Se confeccionaron historias clnicas completas con datos demogrficos, forma clnica de presentacin de la infeccin de piel, factores de riesgo potenciales de infeccin por SAMR-CA, y antecedentes generales. Se incluyeron la totalidad de los pacientes de 2 a 90 aos que cumplieron con el seguimiento (a las 72 hs, 7 y 14 das) y firmaron consentimiento informado. Cuando no existi respuesta favorable al antibitico se tom muestra por puncin aspiracin para cultivo de SAMR. Se
P410 - 28038 Staphylococcus aureus Y FRACASO TERAPUTICO A VANCOMICINA: EMERGENCIA DE CEPAS CON SENSIBILIDAD DISMINUDA EN ARGENTINA? DI GREGORIO, S (1); PERAZZI, B (2); CUIROLO, A (1); GARDELLA, N (1); VAY, C (2); FAMIGLIETTI, A (2); MOLLERACH, M (1)
(1) Facultad de Farmacia y Bioqumica UBA, (2) Hospital de Clnicas Introduccin: en los ltimos aos, se ha documentado alrededor del mundo la emergencia de cepas de Staphylococcus aureus con sensibilidad disminuda a vancomicina (VISA) y cepas con resistencia heterognea (hVISA). Actualmente no hay un mtodo efectivo para detectar estas cepas en el laboratorio de rutina. Objetivos: caracterizar aislamientos de S. aureus, recuperados previos y posteriores al tratamiento con vancomicina. Mtodos: se estudiaron 3 pares de aislamientos recuperados pacientes con diferentes infecciones: endocarditis (P1 y P2), infeccin osteoarticular (D1 y D2), y bacteriemia sin foco conocido (B1 y B2) pre-
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estudi la sensibilidad a antibiticos mediante difusin con discos segn recomendaciones del CLSI y sistema automatizado Vitek. La presencia de los genes mecA y de la Leucocidina de Panton Valentine (LPV) y el tipo de SCCmec fueron analizados por PCR. Se realiz genotipificacin por PFGE. Resultados: 42 pacientes cumplieron los criterios de inclusin de este estudio, 19 de ellos evolucionaron favorablemente y 23 no respondieron adecuadamente al tratamiento instaurado. En 20 de ellos se recuper SAMR por puncin-aspiracin. Las lesiones clnicas de las cuales se aisl SAMR-CA fueron 17 fornculos y 3 abscesos. La frecuencia de infecciones de infecciones de piel y partes blandas por SAMR-CA fue del 47,6% (20/42). Todos los aislamientos fueron sensibles a trimetoprima-sulfametoxazol y 16/20 sensibles a eritromicina y clindamicina. En todos los casos donde fue posible se realiz drenaje. Ningn paciente present complicaciones ni requiri internacin. 9/20 SAMR-CA seleccionados al azar fueron caracterizados molecularmente. En todos ellos se confirm la presencia de los genes que codifican para la LPV y el SCCmec IV. Por PFGE se agruparon en dos tipos clonales; uno de ellos, constituido por 4/9 aislamientos es una variante del clon prevalente entre los SAMR-CA (CA-PFGE A, caracterizado como SAMR-IV-ST5-spa t311-LPV+). Conclusiones: se requieren estudios adecuados para conocer la verdadera prevalencia de infecciones de piel y partes blandas por SAMR-CA en nuestro medio, as como los factores de riesgo asociados para aportar al diseo de terapias empricas.
carbapenemes en K. pneumoniae y una mortalidad asociada de hasta un 60% de los pacientes. Un obstculo en la bsqueda de este mecanismo de resistencia es que puede cursar con aparente sensibilidad a los carbapenemes, por lo cual, podra ser subestimado. Esto nos alerta sobre la importancia de la lectura minuciosa de los halos de los antibiogramas en cualquier tipo de laboratorio de microbiologa. Medir correctamente los halos y probar sinergia con bornico en caso de sospecha no representa un costo adicional significativo. Es responsabilidad de todos los eslabones de la cadena sanitaria reducir la diseminacin de los microorganismos con extrema resistencia.
P413 - 28051 HOMOLOGA DE Streptococcus mutans EN EL BINOMIO MADRE-NIO. CARLETTO KORBER, F P M; GONZALEZ ITTIG, R E; JIMENEZ, M G; CORNEJO, L S
Universidad Nacional de Crdoba El propsito de esta investigacin fue evaluar, a traves de la tcnica de reacccin en cadena de la polimerasa con primers arbitrarios (AP-PCR) el grado de homologa de Streptococcus mutans en 24 binomios madre-nio, que concurrrieron al Hospital Universitario de Maternidad y Neonatologa de Crdoba. Se tomaron muestras de saliva total sin estimular del binomio a los 6 y 18 meses de edad del nio y muestras de placa dental a los 18 meses del nio. Las muestras fueron sembradas en agar Mitis Salivarius (Difco) 0,28 mg/ml de bacitracina, durante 48 hs a 37 C y 5% CO 2 para el desarrollo de Streptococcus del grupo mutans. Las colonias se identificaron morfolgica y bioqumicamente usando Api 20 Strep (BioMerieux) para diferenciar Streptococcus mutans (SM) y Streptococcus sobrinus (SS). Las colonias bacterianas se recuperaron en 5 ml de caldo cerebro corazn e incubaron a 37 C durante 48 hs. La extraccin de ADN se llev a cabo segn el mtodo de Bollet. La AP-PCR se realiz con los primers OPA-05 y OPA-02 en termociclador Biometra II Thermoblock, con 50 ciclos. Los productos de AP-PCR se observaron por electroforesis en gel de agarosa 1% (0,5 ug/ml de bromuro de etidio). El grado de similitud entre las muestras fue analizado vusualmente banda por banda, asignndose a cada banda amplificada 1 (presente) 0 (ausente). Los perfiles de ADN fueron considerados similares cuando todas las bandas mayores eran idnticas, y las bandas menores no tenan ms de dos diferencias. Cualquier diferencia con respecto a las bandas fuertes se consider discriminante. La informacin generada por estos datos binarios fue procesada en el programa infostat P 1.5, aplicando el indice de identidad Dice. La tcnica de AP-PCR utilizando los primers OPA-02 y OPA-05 puso en evidencia elevado polimorfismo gentico en las cepas de Streptococcus mutans aisladas. De los binomios madre-nio analizados, el 64,7% de las cepas aisladas en las madres presentaron similitud gentica con las de sus hijos. Si bien reconocemos a la madre como la fuente ms importante de infeccin para el nio, consideramos que se deben tener en cuenta otras fuentes de transmisin en la edad temprana.
P412 - 28047 DETECCIN DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTOR DE KPC EN PACIENTE AMBULATORIO. CERVANTES, G; CARBALLEIRA, N; FANJUL, G; MORAN, E; BARGADOS, K; ASTUDILLO, C
Laboratorio Menendez Introduccin: las carbapenemasas son enzimas que confieren resistencia a los carbapenems, penicilinas y cefalosporinas, todos los beta-lactmicos y usualmente tienen resistencia acompaante aminoglucsidos y quinolonas. Al ser transportadas en un transposn, presentan alto nivel de diseminacin. La bsqueda de resistencia a carbapenemes en enterobacterias no debe limitarse a hospitales, clnicas y sanatorios. La importancia de la deteccin de mecanismos de resistencia an en el laboratorio que recibe exclusivamente muestras de pacientes ambulatorios, es evitar la presencia endmica de estos microorganismos pan-resistentes. Objetivos: presentar un caso de paciente ambulatorio con infeccin urinaria producida por Klebsiella pneumoniae productora de KPC. Caso clnico: paciente ambulatorio. Sexo femenino. Edad: 85 aos. Material remitido: urocultivo. Se realiza la siembra del material obtenindose desarrollo de K. pneumoniae en un recuento mayor a 100.000 ufc/ml. Se realiza el antibiograma correspondiente por difusin obtenindose halo de imipenem < 20mm que sugiere la presencia de carbapenemasa. Se procede a realizar la prueba de screening con derivados del cido bornico. Resultados: el ensayo de sinergia con bornico positiva, junto con la identificacin del microorganismo aislado como K. pneumoniae hace sospechar que nos encontramos en presencia de una carbapenemasa del grupo de las serinproteasas. Se realiza un mtodo microbiolgico (HODGE) para confirmar mecanismo enzimtico. El mismo da positivo. Se procede a derivar la muestra al Instituto Malbrn y entregar un informe preliminar. El Servicio de Antimicrobianos del Instituto Malbrn confirma el aislamiento perteneciente al clon hiper-epidmico de K. pneumoniae productor de KPC (cepa con extrema resistencia) por biologa molecular. Por estudios de campo pulsado, se observ que el aislamiento remitido pertenece al tipo clonal hiper-epidmico de la regin del AMBA. Se comprueba que la paciente haba tenido dos internaciones previas en una clnica privada de esta ciudad, una cinco meses antes por traumatismo encfalocraneano sin prdida de conocimiento y otra un mes antes por infeccin urinaria. La paciente fue internada y tratada con colistn endovenoso. Al completar al tratamiento y con un resultado de urocultivo negativo proceden a darle el alta e indicar seguimiento con su mdico de cabecera. Nuestra experiencia nos alerta a esperar que an en pacientes ambulatorios se pueda presentar una cepa productora de KPC. Los datos del CDC reportan un 8 % de resistencia a
P414 - 28052 RED SUDAMERICANA PARA LA COOPERACIN EN LA INVESTIGACIN DE INFECCIONES POR CLAMIDIAS: INSTANTNEAS DE EPIDEMIOLOGA MOLECULAR DE LAS INFECCIONES POR Chlamydia trachomatis. GALLO VAULET, M L (1); ENTROCASSI, A C (1); CUFFINI, M C (2); CASTRO, E (3); MARTINEZ TAGLE, M A (4); OCCHIONERO, M (5); RODRIGUEZ FERMEPIN, M (1)
(1) Facultad de Farmacia y Bioqumica UBA, (2) Instituto de Virologa, UNC, (3) U. Concepcin, Chile, (4) F. Medicina, U. Chile, (5) Universidad Nacional del Sur Chlamydia trachomatis produce la infeccin bacteriana transmisible sexualmente de mayor prevalencia en el mundo. En adultos causa principalmente cervicitis, uretritis y conjuntivitis. Los recin nacidos pueden desarrollar conjuntivitis o neumona. La especie se clasifica en 18 serotipos que coinciden con los genotipos basados en la variabilidad del gen ompA. En el ao 2007 se inici la formalizacin de una Red Sudamericana Interuniver-
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sitaria para la Cooperacin en la Investigacin de Infecciones por Clamidias. Del trabajo realizado surgen los datos que a continuacin se presentan. Objetivo: relevar los genotipos de Chlamydia trachomatis presentes y describir su frecuencia relativa segn tipo de muestra. Metodologa: cada nodo de la red estudi uno o ms tipos de muestras de pacientes con infeccin por C. trachomatis. La Unidad de Estudios de Chlamydias (Universidad de Buenos Aires-U.B.A) estudi 104 muestras genitales masculinas y femeninas de adultos sintomticos. El Inst. de Virologa JM Vanella (Universidad Nacional de Crdoba-U.N.C.) estudi 37 muestras de jvenes de entre 18 y 25 aos de ambos sexos. La Universidad Nacional del Sur (UNS) genotipific 18 muestras genitales de mujeres trabajadoras sexuales y no trabajadoras sexuales de Baha Blanca. Las muestras de la Universidad de Concepcin fueron 49 de mujeres sintomticas, y la Universidad de Chile (Santiago) obtuvo los genotipos de 17 muestras de neumonas neonatales. Los resultados se detallan en la siguiente tabla: REF: M= hisopados uretrales masculinos, F= hisopados endocervicales, PN= secrecin nasofarngea de neumonas neonatales, TS= trabajadoras sexuales.
NODO y tipo Mtra UBA - M (n=50) UBA - F (n=54) UNC - M (n=9) UNC - F (n=28) UNS - F, TS (n=9) UNS - F,noTS (n=9) U. de Chile PN (n=17) U. de Concepcin, F (n=49) D 11 10 1 5 2 1 2 6 E 22 27 6 21 4 4 8 21 F 7 6 1 1 0 3 3 2 G 4 3 1 1 0 0 1 7 H 0 0 0 0 1 0 0 3 I/Ia 3 4 0 0 0 0 0 1 J/Ja K 1 2 0 0 0 0 3 9 1 1 0 0 0 0 0 0 H/I/J 1 3 0 0 2 1 0 0
tiples abscesos en regin parietal izquierda. El paciente es sometido a drenaje quirrgico de los mismos en el cual se obtienen muestras de tejido abscedado y lquido cefalorraqudeo. En todas las muestras analizadas se obtiene desarrollo de un bacilo grampositivo, parcialmente cido resistente, con colonias con pigmento amarillo-anaranjado compatibles morfolgicamente y bioqumicamente con Nocardia sp. Se inicia tratamiento con amicacina, meropenem, cotrimoxazol y linezolid con buena respuesta clnica e imagenolgica al mismo. El caso planteado presenta dos desafos, el clnico y el microbiolgico, por un lado la baja frecuencia de abscesos cerebrales causados por bacilos gram- positivos aerobios, especialmente en pacientes inmunocompetentes determina una bajsima sospecha diagnstica, lo cual retrasa el diagnstico y desfavorece por tanto el pronstico del paciente, a su vez la baja frecuencia de aislamiento de estos microorganismos en el laboratorio de microbiologa general determina problemas en su correcta tipificacin y el hecho de que no haya puntos de corte establecidos para evaluar la sensibilidad a los antimicrobianos, entorpece el rol del microbilogo en dar respuestas destinadas a orientar la teraputica
P416 - 28102 VALOR DEL CULTIVO EN EL DIAGNSTICO DE LA DIARREA POR Clostridium difficile. ROLLET, RAQUEL (1); CABRERA, RICARDO (1); VAUSTAT, DANIELA (2); CALLEJO, RAQUEL (1); HARDIE, NELIDA (1)
(1) U. Bactriologa. Hospital F.J. Muiz. (2) Residente de Microbiologa H.F.J. Muiz Clostridium difficile es la principal acusa de diarrea de adquisicin hospitalaria y sus factores de patogenidad reconocidos son una enterotoxina (toxina A) y una citotoxina (toxina B). El diagnstico de laboratorio de esta infeccin (ICD) se realiza mediante diferentes mtodos que detectan una o ambas toxinas en heces diarreicas de pacientes que hubieran recibido antibiticos o que hubieran estado internados en los dos meses previos. La citotoxicidad ha sido considerada la tcnica patrn, sin embargo, existen otras metodologas que difieren en sensibilidad y especificidad. El objetivo de este trabajo fue evaluar, mediante enzimoinmunoensayo, la toxicidad de C. difficile aislado de heces diarreicas con toxina A y/o B negativa en la Unidad Bacteriologia del Hospital F. J. Muiz. Materiales y mtodos: se consultaron los registros del sector de bacterias anaerobias. Se seleccionaron 54 aislamientos de C. difficile, conservados a -20 C que haban sido cultivados de heces de pacientes con diagnostico presuntivo de ICD. Se prob su toxicidad con Ridascreen toxin A/B, Biopharm. Los materiales de origen, estudiados entre abril de 2007 y mayo de 2010, haban sido negativos para toxinas A/B por mtodos inmunptico (36) (CDTOX A-B OIA, Biostar) e inmunocromatografa (31) (CD Xpect C. difficile ToxinaA+B, Remel). Los resultados se registraron, analizaron y evaluaron con el mtodo de las proporciones (Statistix 7.0 y SPSS 17.0). Resultados: de 253 muestras procesadas para toxinas, 85 (33,6%, I.C. 95%: 27,839,4) fueron positivas. C. difficile desarroll de 140 muestras cultivadas (55,3% I.C. 95%: 49,2-61,5). De estos, 54 procedian de muestras con toxinas negativas, pero 24 de ellas probaron ser toxignicas, y no se encontraron diferencias significativas en su distribucin respecto al mtodo empleado en las muestras de heces (13/27= 48,2% vs 11/27= 40,7% p-valor: 0,7842). Estos aislamientos toxignicos correspondieron al 9,48% de los materiales procesados. En la poblacin estudiada se hall una prevalencia de toxina/s de C. difficile en materia fecal mayor que en otras publicaciones, lo cual puede deberse a que est compuesta principalmente por pacientes HIV (+), con tratamientos antibiticos y/o internaciones previas. El cultivo contribuy a aumentar la sensibilidad diagnstica, no obstante es menester demostrar la toxicidad de los aislamientos y el tiempo requerido reduce su efectividad diagnstica. Si bien se dispone de equipos para el diagnstico rpido, el cultivo permitira reconocer ms casos de ICD, as como hacer estudios epidemiolgicos y de sensibilidad antibitica, por lo cual debe ser considerado como un mtodo complementario en el diagnstico microbiolgico de la ICD.
En todos los casos, independientemente del origen de la muestra, el genotipo E result el ms frecuente, lo que coincide con los reportes de otros pases. Sin embargo, existen apreciables diferencias en la distribucin de los genotipos entre las poblaciones estudiadas en nuestro pas y las estudiadas en Chile. En particular en cuanto a la frecuencia de los genotipos H, I y J, que es mayor en ese pas. Estos resultados fundamentan el diseo de proyectos tendientes a profundizar en el estudio de la epidemiologa molecular de Chlamydia en Sudamrica.
P415 - 28081 ABSCESOS CEREBRALES MLTIPLES CAUSADOS POR Nocardia sp. EN UN PACIENTE INMUNOCOMPETENTE. PRESENTACIN DE UN CASO. DE LA IGLESIA, AGUSTINA INS (1); PERRIN, CELESTE (2); INGARAMO, DAMIAN (1); SCAPINI, JUAN PABLO (1); VERA BLANCH, MARCELA (2)
(1) Instituto de Investigaciones Microbiolgicas y Clnicas (IDIMYC), (2) Servicio de Infectologa. Hospital Italiano de Rosario Las especies del gnero Nocardia se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza y forman parte de la poblacin bacteriana habitual de la cavidad oral y el tracto respiratorio superior. Estos microorganismos juegan un rol importante como patgeno oportunista en huspedes inmunodeprimidos, sin embargo, entre 10 y 40% de las nocardiosis se observan en pacientes sin patologas subyacentes. La afectacin del sistema nervioso central es frecuente tanto en la forma primaria como en la nocardiosis diseminada, siendo ste un factor de mal pronstico evolutivo. El objetivo de esta presentacin es la comunicacin de un caso de nocardiosis cerebral en un paciente inmunocompetente. Paciente de 61 aos con antecedentes de abscesos periodontales recidivantes (en tratamiento con amoxicilina y cido clavulnico y buena respuesta clnica la tratamiento) ingresa al hospital por convulsiones tnico-clnicas de miembros inferiores por lo que se realiza resonancia magntica (RM) de crneo que informa masa ocupante de espacio en regin parietal izquierda, la misma es resecada quirrgicamente y remitida a anatoma patolgica debido a la alta sospecha clnica de neoplasia cerebral. El informe antomo-patolgico revela tejido necrtico y fibrosis del material remitido. Tras buena evolucin clnica el paciente es dado de alta con tratamiento anticonvulsivante. Un mes despus, el paciente re-ingresa con hemipleja facio-braquio-crural derecha, disartria y fiebre, se realiza nueva RM que informa ml-
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P417 - 28120 SENSIBILIDAD A LA SERIE AMBULATORIA DE LAS Escherichia coli EN UROCULTIVOS DE MUESTRAS DE PACIENTES ADULTOS NO INTERNADOS. SALAZAR, ESTELA; CLARA, LILIANA; GRECO, GRACIELA; STANELONI, INES; KAWON, ALICIA; BARCAN, LAURA
Hospital Italiano Introduccin: conocer el patrn de sensibilidad es imprescindible para evaluar los tratamientos empricos. Debido a que puede haber diferencias segn grupo etario y sexo (referencia datos de Whonet 2007); revisamos datos de sensibilidad de los aislamientos de urocultivos en base a estos datos demogrficos. Objetivo: describir el patrn de sensibilidad a la serie de antibiticos ambulatorios de la Escherichia coli de urocultivos de pacientes adultos no internados que incluye la guardia. Material y mtodos: estudio descriptivo. Fuente: base de datos de bacteriologa. Urocultivos de guardia y ambulatorios no duplicados y su sensibilidad a la serie de antibiticos ambulatorios estratificndolos por sexo y edad entre 18 y 50 aos o >50 aos. Perodo analizado mes de agosto 2009. No se evaluaron antecedentes de internacin, cirugas o procedimientos urolgicos previos, uso de sonda vesical o consumo de ATB como factores de riesgo de resistencia a los antibiticos. Resultados: se clasificaron 4 grupos: mujeres >50 aos (A); mujeres<50 (B); hombres >50 (C), hombres <50 (D). Total de aislamientos, y total de enterobacterias aisladas por grupo: Grupo A: 215/197. Grupo B: 209/170. Grupo C: 110/76. Grupo D: 26/18 respectivamente. Del total de aislamientos, el porcentaje correspondiente a las Escherichia coli para los grupos: A, B, D, C fueron 74,9%, 68,9%, 42,3% y 36,3% respectivamente. De las cepas independientemente del grupo etario y sexo se observa muy buena sensibilidad a la nitrofurantoina (>91%. Rango 90,9% a 98,8%), seguida por cefalotina (>82%. Rango 81,6% a 92,4%) y AMS, que es similar a la cefalotina, (>82%. Rango 81,6% al 89%). Con respecto a ciprofloxacina: sensibilidad en mujeres jvenes (89,5%), seguida por mujeres >50 (72,7%) y es mucho ms baja en hombres de cualquier edad (63% en jvenes y 57,5% en mayores). Considerando globalmente sensibilidad a ciprofloxacina en mujeres 80% vs 58,8% en hombres. Chi2 0,00. Sensibilidad a TMS del (63,9% al 72,7%). Conclusin: la sensibilidad a la ciprofloxacina tiene una sensibilidad ms baja en varones que en mujeres. La sensibilidad a la cefalotina, AMS y nitrofurantona es alta en todos los grupos. Es necesario estratificar la poblacin para datos de sensibilidad siendo tambin importantes otros factores de resistencia no evaluados en esta muestra (antecedentes de internacin, cirugas o procedimientos urolgicos previos, uso de sonda vesical o consumo de ATB)
inmunizacin de los pacientes. Los aislamientos de B. pertussis fueron caracterizados en sus genotipos de la subunidad 1 de la toxina pertussis (ptxS1) y de la adhesina pertactina (prn). Se incluyeron comparaciones con las cepas vacunales en uso. Resultados: de 7140 pacientes con sintomatologa compatible con pertussis, 1811 fueron confirmados: 299 en 2006, 380 en 2007, 477 en 2008, 432 en 2009 y 223 durante el primer semestre del 2010. Aproximadamente el 55% de los casos fueron registrados en Buenos Aires y Crdoba, las regiones ms pobladas de nuestro pas sobre las que se realiza una vigilancia ms activa de la enfermedad. Si bien la mayor proporcin de casos se observa en los nios menores de 6 meses de edad y en pacientes con esquemas de inmunizacin incompleta para conferir proteccin, se registraron casos en contactos adolescentes y adultos. Adems, la caracterizacin molecular de los aislamientos clnicos obtenidos de los pacientes revel una divergencia genotpica entre ellos y las cepas vacunales. Mientras que las cepas de vacuna contienen prn1/7 y ptxS1 B/D alelos, los aislamientos locales han presentado en un 94% el alelo 2 para la pertactina y en un 95% el alelo A para la ptxS1. Conclusiones: la tos convulsa es un problema importante para la salud pblica en la Argentina. La circulacin en la poblacin adolescente adulta y la divergencia entre las cepas vacunales y aislamientos locales podran contribuir a la descripcin de la epidemiologa de la enfermedad y al mejoramiento de las estrategias preventivas
P419 - 28137 MTODOS FENOTPICOS PARA LA DETECCIN DE Klebsiella pneumoniae PRODUCTORA DE CARBAPENEMASA KPC. NICOLA, FEDERICO; NIEVAS, JIMENA; GARCIA RAMIREZ, DOLORES; ARDUINO, SONIA; SMAYEVSKY, JORGELINA
Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas (CEMIC) Introduccin: en los ltimos aos se ha descrito la emergencia de Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa KPC en diversos pases, incluyendo la Argentina. La correcta y rpida deteccin de estas bacterias resulta crtica tanto para la adecuada teraputica del paciente como para instaurar medidas de control tendientes a evitar su diseminacin. Objetivo: evaluar diversos mtodos fenotpicos para la deteccin de aislamientos de K. pneumoniae productores de KPC. Materiales y mtodos: se estudiaron 45 aislamientos clnicos nicos de K. pneumoniae con sensibilidad disminuida a carbapenemes (Carb), 30 productores de KPC y 15 KPC-negativos (confirmados por PCR en estudio previo SADI 2010). Utilizando los Carb imipenem (Imi), meropenem (Mero) y ertapenem (Erta) se realizaron los siguientes ensayos: Hodge modificado, sinergia con discos de cido bornico (Bor) (2cm entre centro de discos), y difusin con discos de cada Carb solo, Carb con Bor, y Carb con Bor y cido clavulnico (Cla). Este ltimo ensayo se consider positivo cuando el halo del Carb + inhibidor (Bor o Bor + Cla) sea 4 mm que halo del Carb solo. Resultados: los 30 aislamientos KPC-pos dieron halos 21 mm para Imi (media 15mm rango 6-21 mm) y para Erta (media 11,9 mm rango 6-19 mm), mientras que para Mero fueron 28/30 (media 15,6 mm rango 6-24 mm). Para los aislamientos KPCneg, los halos fueron 21 mm para 11/15 con Imi (media 20,4 mm rango 17-25 mm), 14/15 con Mero (media 14,4 mm rango 10-22 mm) y 15/15 con Erta (media 7,8 mm rango 6-15 mm). Todos los aislamientos KPC-pos dieron positivos el test de Hodge con los 3 Carb ensayados. Los 15 aislamientos KPC-neg fueron negativos para Hodge con Imi y Mero, aunque 2/15 fueron positivos en el Hodge con Erta. Se observ sinergia con Bor en 25/30 (83%) aislamientos KPC-pos para Imi; en 26/30 (87%) para Mero y 14/30 (47%) para Erta. Ningn aislamiento KPC-neg mostr sinergia entre los Carb y Bor. En las pruebas de inhibicin con discos de Carb solos y con Bor, con los aislamientos KPC-pos, 28/ 30 (93%) dieron positivo con Imi, 27/30 (90%) con Mero, y 24/30 (80%) con Erta. Ningn aislamiento KPC-neg mostr diferencias 4 mm entre los Carb solos y Carb + Bor. Los discos de Carb con Bor y Cla mostraron 2 aislamientos KPC-pos adicionales con diferencias mm para Mero (29/30) y Erta (26/30), pero no para Imi (mismos 27/30 que Imi+Bor); entre los KPC-neg, dieron resultados positivos 0/15 con Imi, 3/15 con Mero y 4/15 con Erta.
P418 - 28134 EPIDEMIOLOGA DE PERTUSSIS EN ARGENTINA DURANTE EL PERODO 2006-2010: TENDENCIAS POR GRUPO DE EDAD Y ESTADO DE VACUNACIN. LARA, C (1); FLORES, D (2); ZURITA, E (3); SORHOUET, C (1); FIORITI, A (2); FIORI, S (2); BOTTERO, D (2); BARBERO, P (4); BETTIOL, M (5); GATTI, B (5); GRAIEB, A (2); WELTMAN, G (1); GONZALEZ AYALA, S (5); GALAS, M (1); PIANCIOLA, L (6)
(1) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn, (2) IBBM UNLP, (3) IBBM UNLP (4) EPID. CBA, (5) HNLP, (6) LC NQN La tos convulsa o pertussis es una enfermedad respiratoria aguda prevenible por vacunacin causada por la bacteria gramnegativa Bordetella pertussis. En Argentina, como en otros pases, la incidencia de la enfermedad ha aumentado de manera sostenida. En particular en nuestro pas dicho aumento se registra a partir del ao 2002. Desde ese momento al presente se han detectado brotes epidmicos en distintas provincias y localidades marcando claramente la vigencia de esta enfermedad. Objetivos: describir la epidemiologa de la enfermedad en la Argentina durante el periodo 2006-2010 y discutir posibles causas que puedan explicar la resurgencia de la enfermedad. Materiales y mtodos: se utilizaron criterios del CDC y del Ministerio de Salud de La Nacin para el diagnstico de pertussis. Se analizaron las proporciones de casos de pertussis segn la edad y el estado de
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Aunque el CLSI propone como screening halos 21 mm solo para Mero o Erta, en nuestra experiencia tambin el Imi es til con este fin. Segn nuestros resultados, el mtodo de Hodge modificado, con Imi o Mero, fue el ms sensible y especfico para la deteccin de aislamientos con carbapenemasa. La inhibicin con discos de Carb con y sin Bor result un muy buen mtodo fenotpico para identificar presuntamente aislamientos KPC-pos. La sinergia con discos de Carb y Bor result til aunque menos sensible, siendo adems operador y tcnica dependiente (distancia entre discos). La deteccin de K. pneumoniae con carbapenemasa KPC puede realizarse rpida y eficientemente utilizando medios disponibles en los laboratorios de microbiologa clnica.
P420 - 28151 INFECCION DE SITIO QUIRRGICO POR Mycobacterium spp. NO TUBERCULOSIS. REPORTE DE 5 CASOS. PENNINI, MAGDALENA; MERKT, MARIELA; PIACENZA, LAURA; ALONSO, MIRIAM; DEGESE, FERNANDA; SUCARI, ADRIANA
Stamboulian Laboratorio Introduccin: las micobacterias no tuberculosas poseen una distribucin ubicua en el medio ambiente. Estos microorganismos se han reportado en forma creciente en infecciones humanas, entre las cuales se encuentran las osteoarticulares y de piel y partes blandas. Por este motivo es importante sospechar su presencia y mejorar la deteccin. Objetivo: evaluar la distribucin de especies y caractersticas microbiolgicas de los cultivos de muestras de piel y partes blandas en los que se aisl Mycobacterium spp. (Ms). Materiales y mtodos: anlisis retrospectivo de aislamientos consecutivos de Ms en muestras de piel y partes blandas en el perodo octubre 2008 a junio 2010. Los datos relevados fueron: tipo de muestra, medios de cultivo en los que se obtuvo desarrollo, tiempo de positivizacin del cultivo y presencia de implantes. La identificacin y sensibilidad de las cepas se realiz en el Servicio Micobacterias del INEI-ANLIS Malbran. Resultados: en el perodo estudiado se aisl Mycobacterium spp de 5 pacientes. La distribucin de especies fue: 2 M. fortuitum (MF), ambos aislados de abscesos mamarios en pacientes con prtesis mamaria y 3 M. abscessus (MA),dos aislados de miembro superior post artroscopia, uno de ellos con un implante y el tercero de absceso de miembro inferior. Cultivos: todas las muestras fueron procesadas con los medios de cultivo habituales para estudios bacteriolgicos; un MF desarroll en los medios slidos de cultivo primarios. Los aislamientos restantes se recuperaron de los medios de enriquecimiento (caldo tioglicolato). El tiempo de desarrollo vari entre 4 y 8 das, observndose opalescencia leve superficial. En la coloracin de Gram realizada al medio de enriquecimiento se observaron bacilos pleomrficos gram-variables, decidindose realizar coloracin de ZN y Kinyoun. Todas las muestras fueron ZN positivo. Uno de los MF fue Sensible (S) a sulfametoxazol y Resistente (R) a doxiciclina. Los tres aislamientos de MA presentaron multirresistencia, siendo sensibles a claritromicina, con sensibilidad variable a ciprofloxacina y cefotaxima. En todos los casos, con los hallazgos bacteriolgicos, se modific el tratamiento emprico inicial. Comentarios: se remarca la importancia del cultivo convencional para recuperar micobacterias de rpido crecimiento, evaluar el desarrollo tardo en medios de enriquecimiento y realizarles coloracin de ZN especialmente en aquellos casos en los que se observan bacilos pleomrficos gram-variables. Es importante sospechar infeccin por Mycobacterium spp. en pacientes con respuesta inadecuada al tratamiento con antibacterianos, principalmente en aquellos con antecedentes de procedimientos invasivos y presencia de implantes.
nicos y otros inmunocomprometidos y en aquellos con dispositivos mdicos como catteres, sistemas de derivacin ventrculo peritoneal, prtesis osteoarticulares, dilisis peritoneal, vlvula cardaca protsica, parches vaculares y lentes intraoculares. La exacta deteccin de resistencia a meticilina es fundamental para evitar el uso inapropiado de vancomicina que se puede asociar a costos elevados, nefrotoxicidad y seleccin de cepas resistentes en enterococos y con sensibilidad disminuda o resistentes en estafilococos. El objetivo de este trabajo fue comparar el rendimiento de la tarjeta AST-P577 del sistema Vitek 2C (Biomerieux, Francia) con la tcnica de difusin usando el disco de cefoxitina de 30 ug sugerido por el CLSI para determinar la resistencia a meticilina en estafilococos coagulasa negativa. Se analizaron 150 cepas de estafilococos coagulasa negativa aisladas de muestras clnicas, las mismas correspondieron a: S. epidermidis (n:71), S. hominis (n:28), S. haemolyticus (n:20), S. capitis (n:12), S. simulans (n:5), S. saprophyticus (n:5), S. cohnii subesp urealyticum (n:5), S. auricularis (n:1), S. cohnii subesp cohnii (n:1), S. warneri (n:1), S. xylosus (n:1). Las discrepancias entre los resultados obtenidos por Vitetk 2C para detectar resistencia a meticilina a travs del Sistema Experto que evala tanto la CIM de oxacilina como el cribaje para cefoxitina y los correspondientes a la difusin fueron resueltas por el test de aglutinacin para PLP2a. Sobre el total de cepas estudiadas, 86 fueron resistentes por ambas tcnicas, 63 sensibles por ambas y una fue resistente por Vitek pero sensible por difusin y PLP 2a negativa. No hubo errores muy mayores y solo se produjo un error mayor (0,81%). La correlacin esencial fue del 99,1%, la sensibilidad del 100% y la especificidad del 98%. El sistema Vitek 2C present una excelente sensibilidad y especificidad para determinar la resistencia en cepas de estafilococos coagulasa negativa a meticilina y de esta manera permite optimizar el tratamiento de las infecciones relacionadas a estos microorganismos.
MIRCOLES 20/10/2010
P422 - 27089 RELACIN GENTICA ENTRE AISLAMIENTOS DE Salmonella Heidelberg MULTIRRESISTENTES AISLADOS DE CERDOS FAENADOS. IBAR, MARIELA(1); GIACOBONI, GABRIELA(1); QUIROGA, PAULA(2); VIGO, GERMAN(1); CAFFER, MARIA INES(3); PERFUMO, CARLOS(1); CENTRON, DANIELA(2); PICHEL, MARIANA(3)
(1) FCV-UNLP, (2) FMED-UBA (3) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Introduccin. Las infecciones causadas por Salmonella spp. constituyen una de las enfermedades zoonticas ms importantes en Salud Pblica. Se transmiten al hombre principalmente a travs del consumo de alimentos contaminados de origen animal. En el estudio epidemiolgico transversal de cerdos faenados en frigorficos del cual parte este trabajo, la prevalencia de Salmonella fue del 24%, siendo S. Heidelberg la segunda serovariedad ms frecuente. En Argentina, S. Heidelberg fue una de las ocho serovariedades prevalentes en el ao 2009 segn los datos del INEI-ANLIS Dr. C. G. Malbrn y ha sido asociada a un brote de salmonelosis en humanos en el ao 2004. La multirresistencia a antimicrobianos en Salmonella, que ha sido relacionada a la presencia del integrn clase 1 y la Isla Genmica 1 de Salmonella (SGI1), es particularmente importante dado que este patgeno puede producir infecciones extraintestinales severas, que requieren terapia antimicrobiana. OBJETIVO. El objetivo de este trabajo fue determinar las relaciones genticas de S. Heidelberg multirresistentes aisladas en un estudio epidemiolgico transversal en cerdos de frigorficos e investigar la presencia de integrn clase 1 y SGI1, como posibles elementos genticos de transferencia de la resistencia antimicrobiana. Materiales y Mtodos: Se analizaron 15 aislamientos recuperados de contenido y/o linfondulo ileocecal de cerdos faenados procedentes de una misma granja, que mostraron resistencia a tetraciclina, ampicilina,
P421 - 28167 ESTAFILOCOCOS COAGULASA NEGATIVA. UTILIDAD DEL SISTEMA VITEK 2C EN LA DETECCIN DE METICILINO RESISTENCIA. SOLOAGA, R; CARRION, N; PIDONE, J; MENDEZ ARANIBAR, M; GUELFAND, L
Hospital Naval Los estafilococos coagulasa negativa producen una serie de infecciones graves en neonatos prematuros, pacientes neutrop-
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estreptomicina, cloranfenicol y trimetoprima-sulfametoxazol segn las normas del Clinical and Laboratory Standards Institute. Se determin la presencia del gen de la integrasa de tipo 1 (intI1) y de la SGI1 por PCR. Los perfiles genticos de los aislamientos se determinaron por Electroforesis en Campo Pulsado (PFGE) con la enzima XbaI, siguiendo el protocolo estandarizado de la Red PulseNet (CDC, USA). Los perfiles genticos se analizaron con el programa BioNumerics (Applied Maths), aplicando el coeficiente de Dice y el mtodo UPGMA. Resultados: Ninguno de los aislamientos de S. Heidelberg present la SGI1, mientras que 14/15 aislamientos portaron el gen intI1. Los resultados del PFGE evidenciaron una alta relacin gentica entre los aislamientos, que presentaron dos perfiles electroforticos muy similares, uno de los cuales agrup a 13 de los aislamientos, mientras que el otro subtipo difiri slo en una banda de bajo peso molecular con respecto al perfil predominante. Ninguno de los dos subtipos genticos fue identificado entre 15 aislamientos de S. Heidelberg de origen humano incorporados a la Base de Datos Nacional, aunque se encontraron aislamientos muy relacionados genticamente a los de origen porcino. La relacin gentica observada, como tambin la similitud en los perfiles de resistencia y portacin del gen intI1 sumada a la ausencia de la SGI1 entre los aislamientos estudiados de S. Heidelberg de origen porcino sugieren que los animales probablemente adquirieron la infeccin a partir de una fuente comn.
(r=0,146). El Plan CREHA analiz (2003-2008) 1456 muestras de leche cruda de las cuales el 26,16% presentaron valores de AFM1 entre 0,05 y 0,5 ppb. Si bien son inferiores, no se encuentran muy alejados de los predichos por el presente modelo. El silaje de maz y los balanceados son la principal fuente de micotoxinas en vacas lecheras, por lo que se recomienda su inclusin previo monitoreo. A pesar de los importantes niveles de micotoxinas en las dietas animales, la leche producida no se encuentra sensiblemente por fuera de los lmites internacionales mximos permitidos. No obstante, dado que los requerimientos de calidad son cada vez ms estrictos, cualquier reduccin en los lmites regulatorios significara un grave impacto para la produccin nacional.
P424 - 27118 MICOBIOTA MICOTOXIGNICA EN ALIMENTOS BALANCEADOS DESTINADOS A LA ALIMENTACIN DE TERNEROS. CASTELLARI, CLAUDIA(1); GONZALEZ, DAMIAN(1); FERNANDEZ, EDUARDO(2)
(1) Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) INTA La presencia de hongos en alimentos puede provocar, en los animales, rechazo debido a la alteracin de sus caractersticas organolpticas, disminucin de la eficiencia de conversin por deficiencias nutritivas y energticas y aparicin de enfermedades con distinto grado de importancia de acuerdo con la especie fngica presente, asociada a la inmunosupresin (Odriozola et al., 2008). Por otro lado, la presencia de micotoxinas, puede provocar la alteracin de la absorcin y del metabolismo de los nutrientes, cambios en las funciones endocrinas y neuroendocrinas, mutagnesis y teratognesis. Entre los sustratos ms susceptibles a la infeccin por especies fngicas micotoxignicas de los gneros Fusarium y Aspergillus, se encuentran el trigo, la cebada, la avena, el maz y otros cereales utilizados frecuentemente para la alimentacin animal. El objetivo del trabajo fue caracterizar la micobiota presente en alimentos balanceados, elaborados en base a harinas de diferentes cereales y oleaginosas, destinados a la alimentacin de terneros. Se analizaron 60 muestras, 30 correspondientes a alimentos de arranque (A) y 30 a recra (R). Se emple la tcnica de recuento en placa, a travs de diluciones seriadas en los medios de cultivos DG18 y DCPA. Las especies se identificaron empleando claves taxonmicas. Los gneros Fusarium, Penicillium, Aspergillus y Eurotium se aislaron tanto en las muestras de alimento A como R. Las poblaciones de Fusarium se aislaron en el 13% de las muestras de A y en el 16% de las muestras de R. Poblaciones fngicas pertenecientes a los gneros Aspergillus fueron aisladas en el 50% de las muestras, con mayor frecuencia en las de A, mientras que Penicillium se aisl en el 17% de las muestras, con mayor frecuencia en las de alimento de R. Los recuentos de ufc.g -1 para Penicillium y Aspergillus fueron del orden de 10-4, mientras que para Fusarium fueron de 10-3. A. flavus y F. verticillioides fueron las especies que se identificaron con mayor frecuencia en ambos tipos de alimentos. La presencia de hongos micotoxignicos en alimentos destinados al consumo animal, pone en riesgo la sanidad de stos y la salud humana, por la posible contaminacin de productos como carnes, leche y huevos que sern consumidos en las diferentes dietas.
P423 - 27116 EVALUACIN DE RIESGOS DE MICOTOXINAS EN LECHE BOVINA PRODUCIDA EN ARGENTINA. SIGNORINI, MARCELO; GAGGIOTTI, MONICA(1); MOLINERI, ANA(1); CHIERICATTI, CAROLINA(2); ZAPATA DE BASILICO, MARIA DE LA LUZ(2); BASILICO, JUAN CARLOS(2); PISANI, MARCELO(1)
(1) INTA EEA RAFAELA, (2) Facultad de Ingeniera Qumica UNL Antecedentes: Las micotoxinas son metabolitos secundarios producidos por hongos, los cuales son contaminantes habituales de los productos agrcolas usados en la alimentacin animal. Algunas micotoxinas pueden ser transferidas a la leche bovina siendo un riesgo considerable para los humanos dada la importancia que tiene este alimento en la dieta diaria, especialmente en nios. La evaluacin de riesgo es una metodologa empleada para analizar informacin cientfica y estimar la probabilidad y severidad de un efecto adverso para la salud pblica a lo largo de cadenas agroalimentarias. Objetivo: desarrollar una evaluacin cuantitativa de riesgo para micotoxinas en leche bovina producida en Argentina, con el propsito de generar una base cientfica para la toma de decisiones de manejo del riesgo y reducir los efectos sobre la salud animal y humana. Material y Mtodo: La prevalencia y concentracin de micotoxinas fue modelada cuantitativamente a lo largo de la cadena lctea. Este modelo fue creado empleando el software @Risk (Palisade Co., Nueva York). Las micotoxinas consideradas fueron: aflatoxina B1 (AFB1), deoxynivalenol (DON) y zearalenona (ZEA). El modelo fue desarrollado empleando informacin nacional y en aquellas ocasiones donde la misma no estaba disponible, se recurri a informacin cientfica internacional. Resultados: La concentracin de AFB1, DON y ZEA en las dietas para bovinos fue estimada en 5,8 ppb (1,07 29,21 ppb), 230,5 ppb (48,34 880,35 ppb) y 194,9 ppb (26,74 770,15 ppb), respectivamente, siendo la proporcin de dietas que excederan los niveles mximos permitidos por la Unin Europea (UE) del 5,72%, 0,14% y 57,82%, respectivamente. La concentracin de AFM1 en leche bovina fue estimada en 0,072 ppb (0,043 0,38 ppb), excediendo los niveles mximos permitidos por el MERCOSUR (0,5 ppb) y la UE (0,05 ppb), el 1,18% y 41,87%, respectivamente. La concentracin de AFM1 en leche fue sensible a la concentracin de AFB1 en los alimentos balanceados (r=0,469), en los silajes (r=0,207) y en semillas de algodn (r=0,146). La concentracin de DON en leche fue sensible a la concentracin de DON en los alimentos balanceados (r=0,403), silajes (r=0,137), pastura (r=-0,141) y semillas de algodn (r=0,079). La concentracin de ZEA en leche fue sensible a la concentracin de ZEA en los alimentos balanceados comerciales (r=0,155), en el silaje de maz (r=0,127) y en las pasturas
P425 - 27135 DEOXINIVALENOL (DON) EN ALIMENTOS BALANCEADOS DESTINADOS A LA ALIMENTACIN DE TERNEROS. FERNANDEZ, EDUARDO; GONZALEZ, DAMIAN; CASTELLARI, CLAUDIA
Universidad Nacional de Mar del Plata Especies fngicas de los gneros Fusarium, Penicillium, Aspergillus, y Alternaria son las ms estudiadas por la produccin de micotoxinas y los efectos que ellas provocan en la salud humana y animal. La presencia de micotoxinas en alimentos puede ocasionar inmunosupresin como as tambin la alteracin de la absorcin y del metabolismo de los nutrientes, cambios en las funciones endocrinas y neuroendocrinas, mutagnesis y teratognesis. Entre los sustratos ms susceptibles a la infeccin por especies fngicas micotoxignicas del gnero Fusarium, se en-
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cuentran el trigo, la cebada, la avena, el maz y otros cereales utilizados frecuentemente para la alimentacin animal. Distintas especies de Fusarium producen toxinas denominadas tricotecenos, entre ellas deoxinivalenol (DON), nivalenol (NIV), toxina T2, diacetoxiscirpenol (DAS). DON, conocida tambin como vomitoxina, es una de las ms estudiadas por su intenso efecto inmunosupresor. Por ello, los animales que consumen altas concentraciones de DON por varios das se encuentran ms predispuestos a contraer infecciones de origen viral y parasitario. Los niveles o factor de rechazo de la toxina se encuentran en 0,2 ppm en los cerdos y 0,25 ppm en vacas lecheras. El objetivo del trabajo fue determinar la presencia de DON en alimentos balanceados destinados a la alimentacin de terneros. Se analizaron 60 muestras de alimento balanceado comercial, compuesto por diferentes fracciones de cereales y oleaginosas, destinado a la alimentacin de terneros en un establecimiento de produccin de leche. Las muestras correspondieron a dos lotes de alimentos: arranque (n=30) recra (n=30). La deteccin de DON se realiz por la tcnica de cromatografa en capa delgada (TLC) y la cuantificacin por cromatografa lquida de alta performance (HPLC). Por la tcnica TLC, se detect DON en el 25% de las muestras, correspondiendo 20% a las de arranque y 30% a las de recra. Los niveles de toxina, determinados por la tcnica de HPLC fueron de entre 0,13 y 0,45 ppm. Considerando la presencia de DON en alimentos destinados al consumo animal y los efectos provocados por su ingestin, es de significativa importancia realizar el anlisis de las materias primas empleadas en su elaboracin, para asegurar la produccin de alimentos de consumo animal que presenten niveles aceptables de micotoxinas.
dos artesanalmente, representa un riesgo potencial para la salud de los consumidores, por lo que deben considerarse protocolos de elaboracin que incluyan el uso de cultivos iniciadores que desplacen la micobiota espontnea del ambiente, no deseada.
P427 - 27137 CARACTERIZACIN DE CEPAS DE Escherichia coli VEROTOXIGNICO AISLADAS DE ALIMENTOS CRNICOS MEDIANTE MLVA (MULTIPLE LOCI VNTR ANALYSIS). FRANCI, TOMAS(1); SANSO, A MARIEL(1,2); BUSTAMANTE, ANA V(1,2); LUCCHESI, PAULA MA(1,2); PARMA, ALBERTO E(1,3)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias - UNCPBA, (2) CONICET, (3) Comisin de Investigaciones Cientficas Escherichia coli verotoxignico (VTEC) representa un grupo muy importante de patgenos emergentes, causante de severas enfermedades en seres humanos. Si bien el serotipo O157:H7 es el ms frecuentemente asociado a casos de sndrome urmico hemoltico en diferentes pases, muchos otros serotipos estn tambin asociados a enfermedades en humanos. La principal va de contagio al hombre es la ingesta de alimentos contaminados. El anlisis de mltiples loci VNTR- Variable Number of Tandem Repeats (MLVA) se ha convertido en un mtodo muy utilizado para la subtipificacin de organismos patgenos como Escherichia coli O157:H7, entre otros. Los VNTRs constituyen excelentes marcadores moleculares cuya importancia a nivel epidemiolgico permite la asociacin entre muestras obtenidas de pacientes, con aislamientos provenientes de alimentos contaminados y reservorios. Con el objetivo de evaluar la diversidad gentica de cepas VTEC aisladas en Argentina, a partir de alimentos crnicos contaminados, se analizaron mediante MLVA 51 cepas pertenecientes a 13 serotipos no-O157:H7. Para ello se amplificaron por PCR 7 loci VNTR genricos para Escherichia coli y Shigella. Los productos de la amplificacin se analizaron mediante electroforesis en geles de poliacrilamida y se visualizaron por tincin con sales de plata. Los amplmeros de las distintas variantes allicas encontradas se enviaron a secuenciar. Todas las muestras pudieron ser tipificadas por este ensayo de MLVA y revelaron 21 perfiles diferentes, 11 de ellos, nicos. El nmero de alelos detectado por locus vari entre 1 (CVN002, CVN007 y CVN015) y 11 (CVN014). El locus CVN003 present alelo nulo para todos los serotipos estudiados. El nmero de repeticiones identificadas entre los 7 loci analizados estuvo comprendido entre 1 y 18 y se registr un total de 21 alelos. El anlisis de la diversidad intra-serotipo mostr ndices notablemente diferentes de acuerdo al serotipo (DN= 0 - 0,67), siendo el ms variable el O178:H19. Los resultados obtenidos muestran una importante diversidad gentica entre los aislamientos VTEC provenientes de alimentos crnicos. Sin embargo, tambin sealan la necesidad de encontrar ms loci VNTR que permitan una mejor discriminacin entre algunos aislamientos.
P426 - 27136 CAPACIDAD TOXIGNICA DE CEPAS FNGICAS AISLADAS DE PRODUCTOS CRNICOS EMBUTIDOS SECOS. IRAIZOZ, LEIRE (1); CASTELLARI, CLAUDIA(2); FERNANDEZ, EDUARDO(3)
(1) UPN, (2) Universidad Nacional de Mar del Plata, (3) INTA Durante la maduracin de los embutidos crnicos secos elaborados de forma artesanal, se desarrollan en la superficie diferentes especies fngicas, cuya fuente de inculo es el ambiente de las fbricas. Muchas de estas especies, pertenecientes a los gneros Penicillium y Aspergillus, son potencialmente micotoxignicas y constituyen una caracterstica no deseada desde el punto de vista sanitario, por la existencia del riesgo para la salud humana. En nuestro pas y particularmente en la zona sudeste de la provincia de Buenos Aires, los embutidos crnicos secos son elaborados en general, en forma artesanal y durante el proceso de elaboracin son colonizados superficialmente por la micobiota espontnea del ambiente de las cmaras de maduracin, constituida por especies de Penicillium y Aspergillus, con alta frecuencia de aislamiento. El objetivo del trabajo fue caracterizar la micobiota micotoxignica presente en la superficie de embutidos crnicos elaborados en la localidad de Balcarce, Buenos Aires y determinar la capacidad toxignica de los aislamientos obtenidos. Se recolectaron 62 muestras de la superficie de embutidos crnicos secos, de consumo habitual, tipo salami, elaborados en el partido de Balcarce durante las estaciones climticas de primavera (30) y verano (32). Los aislamientos se caracterizaron e identificaron utilizando claves taxonmicas convencionales. Posteriormente, se evalu el potencial toxignico de las cepas de especies reportadas como potenciales productoras de micotoxinas, empleando la tcnica de cromatografa en capa delgada (TLC). Se identificaron 5 gneros y 9 especies fngicas, de las cuales 4 de ellas, Penicillium verrucosum, Aspergillus terreus, A. fumigatus y Alternaria infectoria, son consideradas micotoxignicas. Las 4 especies representaron el 44,4% del total de especies identificadas en la fbrica, durante todo el perodo analizado. P. verrucosum fue la nica especie capaz de producir micotoxinas in vitro, a travs de la tcnica empleada. El 90,9% de los aislamientos produjeron ocratoxina A. Esta especie se aisl con una frecuencia de 96,5% en primavera y 43,8% en verano. La presencia de especies fngicas micotoxignicas en alimentos y en particular en productos crnicos embutidos secos, elabora-
P428 - 27142 ANLISIS DE LA DINMICA MUTACIONAL DE SECUENCIAS VNTR EN Escherichia coli VEROTOXIGNICO O157:H7 AISLADO EN ARGENTINA. SEGURA, DAMIAN OMAR(1); BUSTAMANTE, ANA VICTORIA(1,2); SANSO, ANDREA MARIEL(1,2); LUCCHESI, PAULA MA(1,2); PARMA, ALBERTO ERNESTO(1,3)
(1) Facultad de Ciencias Veterinarias - UNCPBA, (2) CONICET, (3) CICPBA Escherichia coli verotoxignico (VTEC) representa un importante grupo de patgenos emergentes que puede causar severas enfermedades en los seres humanos, tales como colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico. El bovino es el principal reservorio y los alimentos de origen animal, la principal fuente de infeccin en humanos. El anlisis de mltiples loci VNTR Variable Number Tandem Repeats- (MLVA) es una herramienta con un alto poder de discriminacin, capaz de establecer relaciones genticas para la vigilancia epidemiolgica y la subtipificacin molecular de organismos patgenos como VTEC. Conocer la tasa de mutacin de los VNTRs y los factores que la afectan es im-
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portante cuando se utiliza el MLVA para caracterizar aislamientos provenientes de un posible brote. El objetivo de este trabajo fue analizar la dinmica mutacional de 9 loci VNTR especficos del serotipo O157:H7, en poblaciones bacterianas generadas in vitro a partir de 5 aislamientos O157:H7. Los eventos de mutacin se estudiaron mediante ensayos de pasajes seriados y paralelos (EPSP), durante 10 das. En cada uno de estos ensayos se generaron 100 linajes clonales independientes a partir de una colonia nica, representativos de aproximadamente 23.500 generaciones. Se tomaron muestras de ADN de la colonia inicial (T0) y de los linajes, a los 5 (T5) y 10 das (T10). Los productos de PCR de los 9 loci se visualizaron en geles de poliacrilamida teidos con sales de plata y los eventos mutacionales observados en los diferentes VNTRs se secuenciaron para determinar qu clase de mutacin se haba generado. Se calcul la frecuencia de alelos mutados y se estimaron las tasas de mutacin. Los datos obtenidos mostraron que las mutaciones simples (insercin/delecin de una unidad de repeticin) ocurren ms frecuentemente que las mutaciones mltiples (de varias unidades de repeticin) y se produce una mayor proporcin de inserciones sobre las deleciones. Se observaron diferencias en la tasa de mutacin de diferentes loci entre cepas. Del total de las mutaciones en las 5 cepas, el locus ms mutable fue el O157-10 (68,75%), seguido por el TR4. Por otro lado, los loci Vhec2 y Vhec4 no registraron mutaciones en ninguno de los 5 ESPS. Las tasas de mutacin obtenidas fueron similares a las halladas por otros autores en este serotipo y en otras bacterias patgenas. Dada la alta variabilidad del locus O157-10 y de acuerdo al objetivo del estudio, la inclusin de dicho locus en el MLVA es discutible.
EVANGELINA; MALO, MARINA; MASEDA, JUAN PABLO; D ESPOSITO, LOURDES; RUARTE, SILVANA; GARBINI, ADRIANA; DE NICOLA, MATIAS
ANMAT - INAL Introduccin: Las micotoxinas son un grupo heterogneo de sustancias qumicas txicas producidas por hongos en determinadas condiciones ambientales favorables. Pueden existir en todos los lugares donde proliferen los hongos, pero el mximo peligro lo constituyen en los alimentos. Los cereales son vulnerables al ataque de los hongos tanto en el campo como durante el almacenamiento, pudiendo stos producir micotoxinas como metabolitos secundarios y su nivel en los alimentos puede variar de un ao a otro por factores ambientales. Los tricotecenos son micotoxinas producidas principalmente por hongos de los gneros Fusarium, Stachybotrys, Myrothecium y Tricothecium, entre otros. Se han aislado 148 tricotecenos, pero slo unos pocos se han detectado como contaminantes de alimentos. Estos se dividen en dos grandes grupos: A y B. El deoxinivalenol (DON) pertenece al grupo B y contamina diversos cereales, especialmente el trigo y el maz. Se conoce vulgarmente como vomitoxina debido a los brotes de sndromes emticos (y de rechazo a los alimentos) en el ganado ocasionados por su presencia. La toxicidad de los tricotecenos se debe en gran medida a su capacidad de inhibir la sntesis proteica. En el hombre causa Leucopenia Txica Alimentaria (ATA), una enfermedad que se caracteriza por la inflamacin de la piel y de las mucosas, fiebre, vmitos, inflamacin aguda del aparato digestivo y diversas alteraciones sanguneas, a lo que sigue una fase menos aguda cuya caracterstica clnica predominante es la depresin de la mdula sea. El Comit Mixto FAO/OMS de Expertos en Aditivos Alimentarios (JEFCA) ha evaluado los niveles de contaminacin con DON en productos alimenticios provenientes de diversos pases de Asia, Amrica y Europa, comprobndose la presencia de ste en el 57% de los productos derivados del trigo en un rango entre 1-5700 g/ kg. Objetivo: A partir de esta base cientfica se plante como objetivo del presente trabajo evaluar el nivel de contaminacin de alimentos nacionales y conocer los niveles de esta micotoxina a los que se encuentran expuestos los potenciales consumidores. Materiales y Mtodos: Se analizaron cincuenta (50) muestras de productos de consumo masivo derivados del trigo mediante purificacin con columna multifuncional, previa extraccin lquido-lquido de la toxina con metanol- agua, y posterior determinacin y cuantificacin por cromatografa gaseosa con detector de captura de electrones (GC-ECD) con un limite de deteccin de 30 g/ kg utilizando la mezcla derivatizante N, O-bis (trimetilsisil) acetamida + trimetilclorosilano + N-trimetilsilimidazol (BSA+ TMCS+TMSI). Resultados y Conclusiones: Los resultados obtenidos revelan que si bien se ha detectado la presencia de DON en el 100% de las muestras analizadas, las concentraciones encontradas no superan la Ingesta Diaria Tolerable (IDT) propuesta por JECFA, siendo la concentracin mxima hallada 660 g/kg.
P429 - 27172 COLONIZACIN INTESTINAL DE POLLOS BROILER POR Campylobacter jejuni COMO ENDOSIMBIONTE DE Acanthamoeba castellanii. FERNANDEZ, HERIBERTO(1); FLORES, SANDRA(1); VILLANUEVA, MARIA PAZ (1); GONZALEZ, MARIO(1)
(1) Instituto de Microbiologa Clnica. Universidad Austral de Chile. Valdivia. Chile Introduccin: La crianza de pollos posee caractersticas que pueden influir en el aumento de aves portadoras de agentes zoonticos, entre ellas Campylobacter jejuni. Se ha comprobado que C. jejuni, como endosimbionte, resiste la digestin de Acanthamoeba castellanii y es posible que utilice esta ameba de vida libre, de amplia distribucin en la naturaleza, como resguardo frente a ambientes adversos. De esta manera, A. castellanii podra servir de transporte o vector de C. jejuni desde el medio ambiente a aves y posiblemente al hombre. Objetivo: determinar la capacidad de C. jejuni como endosimbionte de A. castellanii, para colonizar el tracto intestinal de pollos Broiler. Material y mtodos: Se utiliz la cepa BP91/2760 de A. castellanii, aislada de crnea humana y la cepa 2409 de C. jejuni, aislada de una paciente que presentaba un cuadro de diarrea. Fueron utilizados pollos Broiler nacidos por eclosin en incubadora y organizados en tres grupos experimentales, de dos aves cada uno, ms un control positivo y otro negativo. Todas las aves, de siete das de edad, no eran portadoras de Campylobacter (coprocultivo control previo) y fueron inoculadas con 500l de cocultivo ameba/bacteria (en proporcin de 2,5 x 104/1,5 x 105), conteniendo 1,5x105 amebas/ml. Desde el tercer da y hasta el sexto da postinoculacin, se realiz coprocultivo para C. jejuni por filtracin por membrana (0,45m) sobre agar sangre y recuento en medio selectivo (Bolton). Resultados: Al segundo da post inoculacin, dos grupos de pollos presentaban colonizacin intestinal. Al cuarto da post inoculacin, todos los grupos estaban colonizados, recuperndose entre 4 a 21 x 104 u.f.c/g de materia fecal. Estos resultados indican que C. jejuni puede colonizar pollos Broiler al ser inoculado como endosimbionte de A. castellanii. Esta relacin endosimbitica puede representar una nueva va de transmisin para aves, otros animales y eventualmente el hombre. Financiamiento: PROYECTOS DID-UACH S-37-2007 y SE-1-2009
P431 - 27186 AISLAMIENTO DE Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis DE HGADO Y DIAFRAGMA DE CABRAS SEROLGICAMENTE POSITIVAS. VECHIARELLI, MARIA SOL(1); CIRONE, KARINA(2); ZEDDE, AINARA(1); FIORENTINO, MARIA ANDREA(2); MORSELLA, CLAUDIA(2); PAOLICCHI, FERNANDO(1,2)
(1) Universidad Nacional de Mar del Plata, (2) INTA Introduccin: Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) es el microorganismo causante de la Paratuberculosis (PTBC), enteritis crnica que afecta a animales domsticos y silvestres. Map ha sido vinculado a la enfermedad de Crohn en humanos. Una posible va de transmisin al humano seran los alimentos contaminados. Los alimentos lcteos han sido identificados como fuente de infeccin, ya que la pasteurizacin no lograra eliminar las clulas de Map viables. Existen muchos estudios sobre la presencia de Map en productos lcteos, otros sobre la deteccin en agua, pero hay pocos sobre la presencia de
P430 - 27176 OCURRENCIA DE DEOXINIVALENOL EN ALIMENTOS NACIONALES DERIVADOS DEL TRIGO. ULLUA,
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Map en carnes. Un estudio demostr la presencia de Map viables en hgados y cortes de carne bovina y se ha detectado ADN de Map mediante PCR para identificar el segmento IS900, hasta en un 54% de hisopados de carcasas bovinas y en el diafragma del 13% de animales infectados. No existen datos preliminares acerca de la presencia de Map en hgado y tejido muscular de cabras en Argentina. Objetivos: Identificar Map a partir de muestras de hgado y diafragma de cabras serolgicamente positivas. Materiales y mtodos: Se identific un tambo caprino con 200 animales en ordee con antecedentes clnicos de PTBC y aislamiento de Map en materia fecal. Se seleccionaron dos cabras adultas con sntomas de PTBC y serolgicamente positivas a ELISA y se sometieron a necropsia. Se tomaron muestras de hgado y diafragma de ambos animales las cuales fueron analizadas bacteriolgicamente mediante tcnicas de cultivo. Las muestras se decontaminaron con hexadecilpiridinium (HPC) al 0.75% durante 5 horas y se sembraron en los medios Herrold con micobactina, piruvato y antibiticos (HMPA). Se observaron los tubos semanalmente durante 4 meses y las colonias sospechosas desarrolladas fueron confirmadas por PCR IS900 usando la tcnica descripta por Zumrraga et al. (1999). Resultados: Los animales presentaron lesiones caractersticas de PTBC en linfondulos mesentricos y vasos linfticos, con un leve engrosamiento de la mucosa de la vlvula ileocecal. A los 35 das se observaron colonias con morfologa tpica de Map en los cultivos de las muestras de diafragma y a los 50 das en los de hgado. Cada una de estas muestras provena de dos animales diferentes. Las colonias fueron confirmadas al microscopio por tincin de Ziehl Neelsen y por PCR IS900. El aislamiento de Map a partir de muestras de hgado y tejido muscular de diafragma a partir de cabras con PTBC sugiere la diseminacin sistmica en animales infectados. Esto implica que los humanos estaran expuestos a este patgeno al consumir hgado o cortes de carne caprina, siendo ste el primer reporte de este tipo en Argentina. Estos hallazgos nos motivan a estudiar la presencia de Map en cortes de carnes de reses caprinas y bovinas y otras especies para asegurar la calidad microbiolgica de estos productos.
tracin. El ensayo se realiz en Agar Extracto de Malta, agregando los extractos correspondientes en una concentracin final de 500 g/ml. Las placas fueron inoculadas en el centro con 2 l de una suspensin de esporas. Los controles se prepararon agregando al medio la misma concentracin de etanol. Las placas se incubaron durante 7 das a 25 C. La inhibicin del crecimiento se midi en base a la diferencia porcentual del promedio del dimetro del control respecto al tratamiento. Resultados: En general los extractos de eucaliptus resultaron ms inhibitorios que los de calndula para ambas especies. La mayor inhibicin del crecimiento para A. alternata se obtuvo con los extractos de cloroformo y metanol de eucaliptus (72,7 y 64,9% respectivamente), al igual que para A. arborescens (77,2% ambos extractos). Los extractos de calndula ms efectivos para ambas especies fueron el de metanol: agua y cloroformo. Los extractos evaluados resultaron efectivos para reducir la tasa de crecimiento de cepas de Alternaria spp. toxicognicas. El uso de compuestos antifngicos naturales es importante para la preservacin de alimentos, control de contaminacin de cultivos y prevencin de riesgos para la salud humana y animal.
P433 - 27327 FRECUENCIA DE Salmonella enterica EN AVES DE TRASPATIO DE LA LOCALIDAD DE SAN LORENZO, DEPARTAMENTO CENTRAL, REPBLICA DEL PARAGUAY. LEOTTA, GERARDO (1); ALVAREZ, MERCEDES(2); NUEZ, LORENA(3); SUZUKI, KUNIAKI(4); SILVA, MARA GORETTI(3); ZARATE, NOEMI(2); CASTRO, LIZ(3); WEILER, NATALIE(2); FACCIOLI, MARIA(3); ALVAREZ, FREDI(3);
(1) FCV UNLP CONICET, (2) LCSP MSPBS PARAGUAY, (3) FCV UNA PARAGUAY, (4) JICA JAPN La salmonelosis es la enfermedad transmitida por alimentos de origen bacteriano ms importante a nivel mundial y su agente etiolgico es Salmonella enterica. En Paraguay, es habitual la cra de aves de traspatio para consumo de huevos y carne. El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de S. enterica en aves de traspatio de la Localidad de San Lorenzo, Departamento Central, Repblica del Paraguay. Se recolectaron 400 muestras cloacales de aves de traspatio. La deteccin de S. enterica se realiz por PCR. Para el aislamiento se utiliz la metodologa de separacin inmunomagntica y la siembra en agar XLT4. Las colonias sospechosas fueron caracterizadas por pruebas bioqumicas y serotipificacin. Se determin la susceptibilidad a 11 antimicrobianos. Se detectaron 25 (6,25%) muestras positivas por PCR y se aislaron 11 (2,75%) cepas de S. enterica: 8 S. Enteritidis, 2 S. Schwarzengrund y 1 S. Saintpaul. Todos los aislamientos fueron sensibles a 9 antimicrobianos probados. Sin embargo, todas las cepas de S. Enteritidis presentaron resistencia a cido nalidxico y nitrofurantona. Salmonella Enteritidis se encuentra entre las serovariedades ms comunes que causan salmonelosis en el ser humano y es el serotipo ms prevalente en casos de ETA en Paraguay. Consideramos necesario implementar medidas de intervencin relacionadas con la educacin de los propietarios de aves de traspatio. Este es el primer trabajo en el que se detect, aisl y caracteriz S. enterica en aves de traspatio de la Repblica del Paraguay.
P432 - 27286 EFECTO DE EXTRACTOS DE PLANTAS SOBRE EL CRECIMIENTO DE ALTERNARIA ALTERNATA Y ALTERNARIA ARBORESCENS. RIO CARRION, GERALDINE (1); REGGI, FERNANDO(1); PATRIARCA, ANDREA(1)
(1) Universidad de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Dto. de Qumica Orgnica. Introduccin: El deterioro fngico de los alimentos, adems de causar considerables prdidas econmicas, constituye un riesgo para la salud de los consumidores ya que un nmero importante de especies son productores de metabolitos txicos, las micotoxinas. El gnero Alternaria comprende numerosas especies tanto saprfitas como patgenas de plantas, muchas de las cuales son utilizadas como alimento. Algunas especies pueden producir micotoxinas en las plantas y en productos agrcolas, representando un riesgo para la salud humana y animal. El uso de conservantes qumicos y pesticidas sintticos para prevenir la contaminacin fngica de los alimentos causa la aparicin de microorganismos resistentes, adems de presentar alta toxicidad para los seres vivos y gran persistencia en el medio ambiente. Existe inters en la bsqueda de compuestos antifngicos alternativos de menor toxicidad para utilizarlos en sistemas de conservacin de alimentos. Numerosos estudios han demostrado que algunas plantas contienen compuestos de baja toxicidad capaces de inhibir el crecimiento microbiano. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de diversos extractos de plantas sobre el crecimiento de cepas toxicognicas de A.alternata y A.arborescens. Materiales y Mtodos: Las plantas utilizadas para este estudio fueron eucaliptus (Eucaliptus globulus) y calndula (Calendula officinalis). Los extractos fueron preparados mezclando 200 g de cada planta con 2,5 l del solvente. Los solventes utilizados fueron: etanol, metanol, cloroformo y metanol: agua (70:30). La mezcla fue homogenizada mecnicamente a 300 rpm por 6 hs. Los extractos fueron filtrados y evaporados a sequedad a 45C. Los extractos secos fueron disueltos en etanol y esterilizados por fil-
P434 - 27351 DETECCIN Y CARACTERIZACIN MOLECULAR DE Vibrio parahaemolyticus EN MOLUSCOS BIVALVOS DE LA COSTA DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. JURQUIZA, VERONICA(1); GONZALEZ FRAGA, SOL(2); PICHEL, MARIANA(2); COSTAGLIOLA, MARCELA(1)
(1)Instituto Nacional de Investigacin y Desarrollo Pesquero, Paseo Victoria Ocampo N1, Mar del Plata; (2)Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn Introduccin: Vibrio parahaemolyticus es habitante natural de los ambientes marinos costeros y de las reas estuariales; constituye uno de los principales patgenos de transmisin alimentaria asociado al consumo de productos pesqueros, particularmente moluscos bivalvos. Produce un cuadro intestinal caracterizado por
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diarrea acuosa y clicos abdominales, que pueden acompaarse de nuseas, vmitos, fiebre y cefalea. En los ltimos aos, este microorganismo ha causado importantes brotes epidmicos en diferentes pases, como Chile, donde se registraron ms de 7000 casos entre 2004 y 2007. Objetivo: Debido a la escasa informacin existente sobre la presencia de este microorganismo en Argentina y habindose registrado casos de gastroenteritis aparentemente debidos al consumo de moluscos bivalvos crudos, se realiz el presente trabajo que tuvo como objetivo estudiar la presencia de V. parahaemolyticus en moluscos bivalvos extrados en las playas de la costa de la provincia de Buenos Aires, determinar su frecuencia y detectar los genes especficos de especie y factores de virulencia. Materiales y Mtodos: Entre octubre de 2008 y abril de 2009 se realizaron 10 muestreos, en las playas de Santa Teresita, Villa Gesell y Mar Azul, Pcia. de Buenos Aires. Se recolectaron 15 muestras de moluscos bivalvos (berberechos y mejillones). Se cuantific por el mtodo de Nmero Ms Probable. Por la tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se determin la presencia de los genes toxR (gen especfico de la especie V. parahaemolyticus), tdh que codifica la hemolisina termoestable directa (TDH) y trh que codifica la hemolisina relacionada a TDH (TRH), ambas toxinas asociadas al potencial patognico de V. parahaemolyticus. Resultados: La frecuencia de aislamiento de V. parahaemolyticus fue del 60%. De las 15 muestras estudiadas 7 condujeron a recuentos entre 0,36 y 7,5 NMP/g de bivalvo. Se recuperaron 104 aislamientos sospechosos (colonias verde-azuladas en agar TCBS), de los cuales 44 fueron confirmados como V. parahaemolyticus mediante pruebas bioqumicas y la presencia del gen toxR. En un aislamiento se detect la presencia de los genes de virulencia tdh y trh. Estos resultados muestran que en moluscos bivalvos recolectados en la costa de la Pcia. de Buenos Aires hay presencia de aislamientos de V. parahaemolyticus, incluso se detect un aislamiento con marcadores de alta virulencia como son tdh y trh. Se evidencia as la necesidad de profundizar estos estudios, como tambin fortalecer el diagnstico clnico de este patgeno en las zonas de mayor riesgo, para aportar herramientas de vigilancia y monitoreo en el rea de Salud y en los reservorios del ambiente acutico, promoviendo la aplicacin de tcnicas estandarizadas de identificacin y subtipificacin a fin de facilitar la comparacin de aislamientos circulantes a nivel nacional, regional e internacional.
de Levadura con agregado de zinc y se incub en oscuridad a 25 C por 7 das. Se efectu la extraccin de todo el medio de cultivo con cloroformo con agitacin a 250 rpm durante 1 hora 30 min. El extracto se filtr, se evapor en estufa a 50 C y se resuspendi en 1 ml de cloroformo: eter: cido actico 17:3:1. Se sembr 10 l de las muestras, cepa patrn y estndar en placa cromatogrfica de Slica Gel 60. Se utiliz como solvente de desarrollo cloroformo:eter:cido actico 17:3:1. La OTA fue identificada bajo luz UV a 366 nm como una mancha fluorescente verde azulada con la misma movilidad del estndar de OTA. Como confirmacin la manchas se expusieron a vapores de amonaco, ya que en presencia de OTA la fluorescencia verde azulada vira a azul brillante. La caracterizacin taxonmica de las 279 cepas estudiadas correspondi en su mayora a A. japonicus var japonicus con un 69% (193 cepas), seguida de A. japonicus var aculeatus con 21% (59 cepas); A. niger var niger, 7% (19 cepas); A. carbonarius 1,5% (4 cepas) y A. niger var awamori 1,5% (4 cepa). De todas las cepas de Aspergillus de la Seccin Nigri aisladas de yerba mate canchada, ninguna de ellas mostr capacidad de produccin de ocratoxina A in vitro, con el lmite de deteccin del mtodo empleado.
P436 - 27427 DETECCIN DE ENTEROBACTERIAS EN ALIMENTOS BALANCEADOS Y MATERIA FECAL EN UNA GRANJA DE POLLOS PARRILLEROS. ESPERANZA, X; SALERNO, C; RODRIGUEZ GANDUGLIA, H; ARENAZ, F; PEREZ, M
Universidad Nacional del Sur El alimento balanceado constituye el punto de partida en la cadena de seguridad alimentaria dentro del modelo de la granja a la mesa. Su calidad microbiolgica influye sobre la sanidad de las aves, los rendimientos productivos y probablemente contribuya a la difusin de enfermedades zoonticas. El objetivo del trabajo fue establecer la calidad bacteriolgica del alimento balanceado y de la materia fecal de pollos parrilleros. Los estudios se realizaron en un criadero situado a 25 Km de Baha Blanca. Se investigaron dos galpones, uno destinado a la cra de pollitos y el otro a pollos con edad de faena. Se desarrollaron cuatro muestreos mensuales durante el ao 2009. En cada oportunidad, se tomaron de cada galpn cinco muestras de materia fecal con hisopos que fueron colocados en el medio de transporte CaryBlair. Adems se recolectaron cinco muestras de alimento balanceado, cuatro provenientes de los comederos y una del sitio de acopio. Se realizaron recuentos de coliformes totales (CT) a partir de diluciones decimales del alimento balanceado, utilizando el medio VRBA (37 C-24h). En el alimento balanceado y en la materia fecal, se busc Salmonella spp. Los medios utilizados fueron caldo de enriquecimiento selenito cistina, agar Salmonella Shigella y agar MacConkey, incubados a 37 C por 24h. A las colonias sospechosas, se les realizaron las pruebas bioqumicas de TSI, LIA, SIM, ONPG y ureasa (37 C-24h). El diseo estadstico aplicado fue un ANOVA doble mixto desbalanceado proporcionalmente. Si bien para alimentos balanceados no existe uniformidad de criterios a nivel internacional, se exige la ausencia de Salmonella spp. en 25 gramos de muestra. El valor promedio de CT en los comederos de los pollitos fue de 650 UFC/g mientras que en los sitios de acopio fue de 53 UFC/g. Hubo diferencias significativas entre comederos y sitios de acopio (p<<0,01) pero no entre fechas de muestreo. En el galpn de los pollos, las medias obtenidas de los recuentos fueron de 84 y 77 UFC/g, en comederos y sitios de acopio respectivamente, no encontrndose diferencias entre ambos. S se encontraron diferencias significativas entre las distintas fechas (p<0,05). Los valores registrados fueron menores a 10 UFC/g propuestos por Santom y Pontes. No se encontraron salmonelas en ningn tipo de muestra. Fueron frecuentes los aislamientos de Enterobacter aerogenes, Bacillus spp., corinebacterias y hongos. Segn los parmetros citados, el alimento sera apto para ser consumido por las aves. El nmero de CT en el alimento para pollitos alcanz las 960 UFC/ g. Dicho valor podra disminuirse si se utilizaran los comederos suspendidos como un criterio de higiene para mejorar la calidad microbiolgica del alimento balanceado.
P435 - 27379 YERBA MATE CANCHADA: CARACTERIZACIN DE CEPAS DE Aspergillus SECCION Nigri Y DETECCIN DE SU CAPACIDAD DE PRODUCIR OCRATOXINA A IN VITRO. JERKE, GLADIS; HORIANSKI, MARTA AURELIA; CASTRILLO, MARIA LORENA
Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Qumicas y Naturales. Mdulo de Bioqumica y Farmacia. Ctedra de Microbiologa e Inmunologa. Posadas. Misiones. Argentina La yerba mate canchada es una de las formas de comercializacin de la yerba mate que se obtiene en las primeras etapas del proceso de elaboracin de la yerba mate tradicional, mediante la trituracin gruesa de las hojas secas luego del zapecado y secado de las mismas. Estudios recientes demostraron que Aspergillus pertenecientes a la Seccin Nigri forman parte de la micota de diversos alimentos y son importantes productores de ocratoxina A, una micotoxina nefrotxica, inmunosupresora, teratognica y potencialmente cancergena, que expresa la enfermedad luego de una ingesta reiterada de alimentos o bebidas conteniendo concentraciones muy pequeas de la misma. El objetivo de nuestro trabajo fue caracterizar cepas de Aspergillus de la Seccin Nigri aisladas de yerba mate canchada y determinar su capacidad de producir ocratoxina A, empleando cromatografa en capa delgada. Se trabaj con 279 cepas de Aspergillus de la Seccin Nigri aisladas de 20 muestras de yerba mate canchada obtenidas de diferentes establecimientos yerbateros de la provincia de Misiones y una cepa de A. carbonarius productora de ocratoxina A. Las cepas se clasificaron empleando las claves de Klich (2002). Para la deteccin de su capacidad de producir ocratoxina A (OTA) cada cepa se cultiv en Agar Czapeck Extracto
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P437 - 27486 LEVADURAS EN CULTIVOS SIMPLES Y EN COCULTIVOS CON ENTEROCOCOS: SU PARTICIPACIN EN LA GENERACIN Y DEGRADACIN DE AMINAS BIGENAS EN ALIMENTOS LCTEOS. BARAGGIO, NANCY GUADALUPE; SIMONETTA, ARTURO CARLOS
Facultad de Ingeniera Qumica UNL Las aminas bigenas son bases orgnicas de bajo peso molecular que poseen actividad biolgica, y son normalmente producidas por decarboxilacin de aminocidos o por aminacin y transaminacin de aldehdos y cetonas. Se encuentran en niveles reducidos en alimentos de alto contenido proteico, dependiendo esos niveles de las condiciones microbiolgicas y de la actividad bioqumica de los mismos, y son consideradas indeseables por sus posibles efectos txicos, a veces agudos, sobre el consumidor. Las levaduras constituyen una parte importante de la microbiota presente en los quesos y pueden desempear importantes roles tecnolgicos durante el proceso de maduracin, entre los que se destaca su potencial capacidad reguladora de los niveles de aminas bigenas presentes en estos alimentos. Sin embargo, hasta el presente han sido poco estudiadas, y menos an relacionando el aspecto antedicho con las interacciones entre levaduras y bacterias cido lcticas. En funcin de esto se ha estudiado la biognesis y asimilacin de aminas y poliaminas por levaduras tpicas de quesos comerciales producidos en la regin santafesina, y de leche y quesos ovinos patagnicos. Asimismo, se ha investigado la interaccin entre levaduras y enterococos en lo que respecta a la generacin y metabolizacin de algunas aminas bigenas. Se obtuvieron 50 aislados de levaduras a partir de quesos santafesinos, y 27 de leche ovina y quesos patagnicos. Se determin su distribucin taxonmica y se analiz su capacidad para asimilar aminas bigenas (tiramina, histamina, triptamina, feniletilamina, putrescina, cadaverina, espermina y espermidina) y para generar estas aminas, en el medio de Joosten y Northolt y en leche. Adems se realizaron estudios de interaccin entre levaduras y enterococos provenientes de la regin del Valle Inferior del ro Chubut (VirCh), en lo que respecta a la evolucin de las concentraciones de aminas bigenas en cocultivos. Todos los aislados resultaron capaces de asimilar las aminas ensayadas, siendo esta capacidad de metabolizar aminas bigenas de gran inters en tecnologa y seguridad alimentarias. Tambin todos produjeron tiramina, resultando variable su capacidad de produccin de las restantes aminas estudiadas. Con respecto a la interaccin entre las levaduras y las cepas de enteroccos, se observ que en los cocultivos se produjo una notable disminucin en la concentracin de las aminas ensayadas. Los resultados demuestran que los aislados de levaduras pueden asimilar las aminas estudiadas y por lo tanto contribuir a la disminucin de la concentracin de estos compuestos en quesos, bajo las condiciones tecnolgicas propias de la elaboracin de estos alimentos lcteos fermentados. Sin embargo, se ha comprobado tambin una gran variabilidad entre especies, y an entre cepas, tanto en lo que se refiere a la capacidad de asimilacin como de biognesis de aminas y poliaminas, por lo que el estudio particular de cada una de estas caractersticas es de fundamental importancia como paso previo a la seleccin de cepas que podran integrar fermentos especficos.
estado natural o con un mnimo procesamiento. Este incremento trajo aparejado una mayor frecuencia de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos asociados con estos productos. Entre las bacterias patgenas involucradas en dichos brotes se destaca Listeria monocytogenes, que se caracteriza por su capacidad de desarrollar en condiciones de refrigeracin. La aplicacin de cultivos lcticos bioprotectores podra constituir una barrera para el desarrollo de este microorganismo durante su almacenamiento en fro. El objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia de la temperatura de almacenamiento y de la aplicacin de cultivos lcticos bioprotectores en la cintica de desarrollo de L. monocytogenes a bajas temperaturas en medio de cultivo lquido y en hortalizas mnimamente procesadas (brotes de soja, radicheta y zanahoria). Listeria monocytogenes ATCC 7644 se inocul en caldo triptona soja con 0,6% de extracto de levadura (concentracin: 10 ufc/ml) y en las hortalizas mnimamente procesadas (concentracin: 10 ufc/g), y se incub a 5, 10 y 15 C durante 8 das. Paralelamente, se inocularon en cocultivo Listeria (en idnticas condiciones a las mencionadas previamente) y cepas de bacterias lcticas con capacidad antagnica demostrada (concentracin de bacterias lcticas: 107 ufc/ml o g, segn sea en medio lquido o en el sustrato vegetal, respectivamente). Peridicamente, los tratamientos se sometieron a recuentos en placa de L. monocytogenes en medio Oxford. Todos los ensayos se hicieron por triplicado y los resultados se analizaron estadsticamente aplicando anlisis de varianza y de comparaciones mltiples (Test de Fisher). Los resultados indicaron que L. monocytogenes present cinticas de desarrollo dismiles en los diferentes sustratos y temperaturas de almacenamiento. Mientras que en cultivos planctnicos en caldo se obtuvo un incremento de 4 log a la menor temperatura ensayada (5 C) a los 6 das de incubacin, en las poblaciones celulares adheridas a los sustratos vegetales se alcanz un incremento mximo de 2 log a 15 C a los 8 das de incubacin. En zanahoria la poblacin de Listeria se mantuvo estable durante todo el perodo de incubacin o se redujo a niveles indetectables segn la temperatura de almacenamiento. Con respecto a la accin de cultivos lcticos bioprotectores, se observ un efecto bacteriosttico de los mismos sobre Listeria en los cultivos en caldo, pero no en los sustratos vegetales. Se concluye que la cintica de desarrollo de L. monocytogenes bajo condiciones de refrigeracin depende de la temperatura de almacenamiento y de la naturaleza de los sustratos que soportan el desarrollo. Estos mismos factores tambin inciden sobre la accin antagnica que pueden ejercer los cultivos bioprotectores sobre L. monocytogenes.
P439 - 27530 ESTUDIO DE LA MICOFLORA Y DE LA OCURRENCIA NATURAL DE MICOTOXINAS EN ALIMENTOS BALANCEADOS DESTINADOS A LA PRODUCCIN DE ANIMALES DE PELETERA. GRECO, MARIANA(1); LUDEMANN, VANESA(1); RICO GOLBA, SILVIA(2); PARDO, ALEJANDRO(1); MARTINO, PABLO(2); POSE, GRACIELA(1,3)
(1) Universidad Nacional de Quilmes, (2) Universidad Nacional de La Plata, (3) Universidad Nacional de Ro Negro / CONICET Las micotoxinas son compuestos qumicos de bajo peso molecular, producidos por hongos, que tienen efectos patognicos tanto en humanos como en animales. En este ltimo caso, el impacto econmico de las micotoxinas incluye prdidas de vida animal, incremento de los costos veterinarios, reduccin de la produccin, etc. En conejos, visones y chinchillas, tres especies alternativas de altsima productividad industrial en la provincia de Buenos Aires, las aflatoxicosis se manifiestan espontneamente, causando elevadas mortandades y prdidas econmicas en los criaderos. El objetivo del presente trabajo fue cuantificar, aislar e identificar la flora fngica y determinar la presencia de las principales toxinas implicadas en micotoxicosis en animales (aflatoxinas, deoxinivalenol, fumonisina, T2, ocratoxina y zearalenona) en alimentos balanceados destinados a la alimentacin de animales de peletera. Sobre 42 muestras de alimentos balanceados se llev a cabo el recuento total de mohos sobre tres medios de cultivo: DRBC, DG18 y DCPA (para recuento general, de hongos xerfilos y aislamiento de especies
P438 - 27496 INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO Y DE CULTIVOS LCTICOS BIOPROTECTORES EN LA CINTICA DE CRECIMIENTO DE Listeria monocytogenes EN MEDIO LQUIDO Y VEGETALES MNIMAMENTE PROCESADOS. ORTIZ, S; SHIGENAGA, R; DUVERNE, L; LOPEZ, O; RAFFELLINI, S; MANS, M C
Universidad nacional de Lujan En los ltimos aos se ha incrementado la demanda de los denominados productos frescos cortados o de IV GAMA, que se definen como frutas y hortalizas frescas o combinaciones de las mismas cuya forma original ha sido alterada fsicamente, pero permanecen en estado fresco, y se venden al consumidor en su
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de Alternaria y Fusarium, respectivamente). La determinacin de micotoxinas se realiz por la tcnica de ELISA empleando los tests R-Biopharm (aprobados por la AOAC). Se obtuvieron recuentos comprendidos entre 10 y 4,7.105 UFC/g en DRBC; entre 10 y 8,5.105 UFC/g en DG18 (predominan-cia de Eurotium spp.) y entre 10 y 2,7.10 5 colonias en DCPA (predominancia Fusarium spp.). En general, la frecuencia y los gneros fngicos determinados fueron Fusarium (17,93%), Aspergillus (16,78%), Penicillium (14,25%), Eurotium (13,56%), Cladosporium (9,43%) y Alternaria (0,23%), entre otros. Las especies halladas fueron Aspergillus candidus, A. flavipes, A. flavus, A. terreus, Penicillium expansum, P. brevicompactum, Scopula-riopsis brevicaulis, Cladosporium cladosporioides, Fusarium proliferatum, Eurotium amstelodami, E. chevalieri y Alternaria tenussima. Se detect la presencia de toxinas en todas las muestras analizadas. En el 100% de ellas se detect fumonisina B1 (promedio 0,929 mg/ kg); en el 80% se detect T2 (promedio 0,040 mg/kg); en el 93% se detect zearalenona (promedio 0,0467 mg/kg); en el 71% se detect aflatoxina (promedio 0,0714 mg/kg); en el 73% se detect deoxinivalenol (promedio 0,304 mg/kg); en el 93% de las muestras de detect ocratoxina (promedio 0,00594 mg/kg). Se determin la co-ocurrencia de micotoxinas en todas las muestras evaluadas. Si bien, en la mayora de los casos, en promedio, las concentraciones de toxinas determinadas no superan los lmites legales establecidos por la Unin Europea, se han detectado varias toxinas en bajas concentraciones en todas las muestras, lo cual podra conllevar a una respuesta de toxicidad sinrgica en los animales bajo este tipo de exposicin.
miento fngico se observa a los 15 das de incubacin en las Arepas fabricadas con cido actico casi duplicando el tiempo de deterioro en el control y la mezcla,en los que se apreci deterioro los das 8 y 9 respectivamente. Hasta el da 30 no se observ crecimiento en el tratamiento con acido lctico. A 20 C, el control y los tratamientos mostraron alteracin fngica los das 4 y 6 respectivamente sin mostrar diferencias por el tipo y concentracin de cidos empleados. El uso de las CIM y la CIF de cidos lctico y actico prolong la vida til de la Arepa Antioquea.La mejor alternativa para la conservacin de la Arepa a 10 C y 20 C es el uso de cido actico y lctico en concentraciones individuales. La resistencia de cidos a la contaminacin retrasa el deterioro en las Arepas slo si se combina el uso de cidos orgnicos y baja temperatura de almacenamiento.
P441 - 27631 PREVALENCIA DE Escherichia coli O157 EN CARNE MOLIDA COMERCIALIZADA EN CARNICERAS DEL GRAN SAN MIGUEL DE TUCUMN. JURE, M A (1); CONDORI, S(1); PRESTI, C(1); LOPEZ, C(2); AULET, O(1); CARBONARI, C(3); DEZA, N(3); CHINEN, I(3); RIVAS, M(3); CASTILLO, M(1)
(1) Universidad Nacional de Tucumn, (2) CMM, (3) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn Escherichia coli O157:H7 es un importante patgeno humano asociado a diarrea, colitis hemorrgica, y sndrome urmico hemoltico (SUH). En Tucumn el SUH es endmico, y E. coli O157:H7 es el serotipo predominante en la regin. En general, la mayora de los brotes por este microorganismo han sido asociados al consumo de carne molida insuficientemente cocida. La concentracin de E. coli O157 en carne molida es muy baja lo que determina la necesidad de utilizar mtodos altamente sensibles para su deteccin. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar E. coli O157 a partir de muestras de carne molida fresca a nivel de boca de expendio, en carniceras del Gran San Miguel de Tucumn, estudiar su prevalencia y establecer la relacin clonal entre las cepas aisladas. Metodologa: Entre Noviembre y Diciembre de 2009, se analizaron 60 muestras de carne molida recolectadas de carniceras de San Miguel de Tucumn que representan el 25% del total. Para el aislamiento y caracterizacin de E. coli O157 se realiz un enriquecimiento en TSBm con casaminocidos, seguido de un tamizaje con Rapichek: A las muestras positivas se les realiz Separacin Inmunomagntica (SIM) de acuerdo a la metodologa de la USDA-FSIS 2002 (United States Department of Agriculture-Food Safety Inspection Services). El inmunoconcentrado fue sembrado en agar MacConkey Sorbitol con agregado de cefixima y telurito (CT-SMAC) y en medio cromo-gnico CHROM agar. A partir de las colonias sospechosas se realiz la identificacin bioqumica mediante fermentacin de celobiosa, produccin de pigmento y lisina decarboxilasa. La deteccin de movilidad se realiz en medio de Craigie. La determinacin del biotipo se realiz mediante la fermentacin de sorbitol, dulcitol, rafinosa y ramnosa. La serotipificacin se realiz con los antisueros somtico O157 y flagelar H7. Las colonias identificadas como E. coli O157 fueron caracterizadas por PCR para los genes stx1, stx2, rfbO157, ehxA y eae. Las variantes de stx fueron determinadas por PCR-RFLP. La separacin de los fragmentos obtenidos por macrorrestriccin se realiz por electroforesis de campo pulsado (PFGE), utilizando el protocolo estandarizado de PulseNet para E. coli O157:H7. Resultados: En 8 (13,3%) de las 60 muestras analizadas, se aisl E. coli O157. Tres cepas fueron caracterizadas como STEC O157:H7, stx2c(vh-a), ehxA y eae. Cuatro cepas como E. coli O157:HNT, y una como O157H:NM, todas no toxignicas. La relacin clonal entre las cepas se estableci por PFGE. Este es el primer estudio realizado en la zona del Gran San Miguel de Tucumn para detectar E. coli O157 en carne molida fresca a nivel de boca de expendio. Los resultados obtenidos reflejan la importancia de implementar metodologas sensibles que permitan detectar O157 en productos crnicos, de manera de realizar un monitoreo eficiente en la etapa de comercializacin de la carne bovina en reas donde el SUH es endmico.
P440 - 27534 EFECTO DE LOS CIDOS LCTICO Y ACTICO EN LA VIDA TIL DE LA AREPA ANTIOQUEA. LEON, A(1); SERNA, C(2); QUINTERO, E(2); GAMBA, R(1); GIANNUZZI, L(1); DE ANTONI, G(1)
(1) Universidad Nacional de La Plata, (2) Universidad de Antioquia La Arepa Antioquea es un alimento bsico en la poblacin colombiana,derivado del maz,cuyo principal microorganismo alterador es Aspergillus flavus. Los cidos lctico y actico son inhibidores fngicos reconocidos como seguros para alimentos y se obtienen fcilmente en el mercado.Previamente hemos determinado la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de cada cido y la concentracin inhibitoria fraccional (CIF) de su mezcla para A. flavus. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la CIM y la CIF determinada para A.flavus con cido lctico y actico sobre la vida til de la Arepa Antioquea sin contaminar y contaminada con A. flavus. Metodologia: Para determinar el efecto en la vida til, 1000 g de harina de maz (PAN) se mezclaron con 1000 ml de agua con o sin cidos. Las concentraciones finales en el producto fueron:CIM para A.flavus de 357.67 mM lctico, CIM de 41.57 mM actico y mezcla de 56 mM lctico:30 mM actico.Las Arepas se almacenaron en bolsas selladas a 10 C y 20 C y se hicieron recuentos cada dos das en medio YGC (Yeast Glucose Chloramphenicol) determinando los das que tarda el producto en alcanzar 106 UFC/g.Para determinar la resistencia de los cidos a la contaminacin fngica,se cultiv A.flavus AFUNL1 por 7 das a 30 C en agar inclinado PDA (Potato Dextrose Agar) y al terminar la incubacin se hicieron diluciones seriadas en solucin de esporos hasta alcanzar 104 conidios/ml.Las arepas fabricadas con soluciones de cidos fueron rociadas con suspensin de 104 conidios/ml (1ml/100-g Arepa),se almacenaron en bolsas de polietileno a 10C y 20C y se revis a diario el crecimiento visible de hongos.La resistencia de los cidos a la contaminacin se defini como los das necesarios para que los hongos sean visibles en las Arepas.Resultados:A 10C,los cidos lctico y actico prolongaron la vida til de las arepas de manera significativa (p<0.05),mientras que la mezcla no present diferencia significativa (p<0.05) respecto al control.A 20C,hasta el da seis se observ mayor efecto preservante por la mezcla que por el cido actico,pero a partir de este da ocurri un efecto similar al obtenido a 10 C.La prueba LSD Fischer demostr que los tratamientos aumentaron de manera significativa (p<0.05) la vida til respecto al control pero que no hubo diferencia significativa entre ellos.En la prueba de resistencia de cidos,a 10 C, el creci-
P442 - 27657 SEROVARES DE Salmonella EN BROTES DE TIFOSIS AVIAR OCURRIDOS EN AVES DE POSTURA COMER-
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CIAL. BUENO, DANTE JAVIER (1); SORIA, MARIO ALBERTO(1); TERRAGNO, RAQUEL(2)
(1) EEA INTA C. Uruguay, (2)Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn En nuestro pas la tifosis aviar, causada por Salmonella Gallinarum, es una enfermedad frecuente en gallinas ponedoras y como profilaxis se utiliza una vacuna viva con la cepa S. Gallinarum 9R, cepa caracterizada por la ausencia de lipopolisacrido y rugosa por la prueba de acriflavina. Es la nica vacuna de tipo viva aprobada en el pas para su uso en aves. A pesar que se ha informado una posible reversin de la cepa de esta vacuna, no se conocen las posibles interacciones de distintas serovariedades de Salmonella en los brotes por esta bacteria en las aves. El objetivo de este trabajo fue estudiar distintos brotes de tifosis aviar ocurridos en aves de postura vacunadas con la cepa S. Gallinarum 9R. Se tomaron dos granjas de la provincia de Crdoba con un diagnstico clnico de tifosis aviar. De la granja A, ubicada en Dean Funes, se muestrearon 2 galpones y de la granja B, ubicada en Avellaneda, se muestre 1 galpn. En ambas granjas se tomaron muestras para el aislamiento de Salmonella a partir de excretas, hisopado cloacal, alimento balanceado, pool de rganos, maples, huevos y mdula sea de patas de aves muertas. Las muestras se incubaron en un medio de preenriquecimiento, caldo de enriquecimiento selectivo, y siembra en medios de cultivo selectivos. Adems se muestre el aire de los galpones por exposicin a medios selectivos-diferenciales. En todos los casos, las colonias sospechosas de Salmonella spp.se caracterizaron bioqumicamente, y las estructuras antignicas se determinaron mediante antisueros somticos y flagelares. Se realiz el antibiograma de las cepas aisladas por el mtodo de difusin en placa, empleando monodiscos de los siguientes antibiticos: ampicilina, enrofloxacina, trimetoprima-sulfametoxazol, kanamicina, colistin sulfato, tetraciclina, gentamicina, eritromicina (E), amoxicilina-clavulnico, fosfomicina, y florfenicol. Adems, se tomaron muestras de sangre de 10 aves por galpn. Se obtuvieron los sueros y se procesaron para la deteccin de anticuerpos contra Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum y S. Gallinarum-S. Pullorum, utilizando reactivos comerciales, mediante la prueba de aglutinacin rpida en placa (ARP). Ambas granjas resultaron negativas a infeccin por Mycoplasma. De la granja A se aislaron S. Gallinarum (rugosa) de la mdula sea de las patas de las aves del galpn 1 y S. Anatum del alimento y S. Muenster del aire del galpn 2. La infeccin de Salmonella por ARP slo se detect en el galpn 1. Del nico galpn muestreado en la granja 2, se aisl S. Gallinarum (rugosa) de hgado y bazo de aves muertas y S. Lexington del alimento. Todas las cepas aisladas resultaron sensibles a la mayora de los antibiticos ensayados, pero resistentes a E. El aislamiento de cepas de S. Gallinarum compatibles con la cepa vacunal demuestran translocacin en rganos o septicemia en brotes de tifosis aviar y pone en duda la eficacia de ese inmungeno. Por otro lado, la variedad de serotipos de Salmonella encontrados en los alimentos de uso avcola y hasta en el aire del galpn es un llamado de alerta a las posibles fuentes de contaminacin para fortalecer las medidas de control de este patgeno de manera de disminuir los efectos del mismo sobre la salud de las aves.
vera, especialmente en los pases en desarrollo. Se caracteriza por la capacidad de producir lesiones A/E (attaching and effacing) provocando la adherencia ntima de la bacteria a la clula husped, mediante la intimina (codificada por el gen eae), el borrado de las microvellosidades del enterocito y la formacin de un pedestal, caractersticas que son compartidas con algunas VTEC. EPEC se subdivide en dos grupos segn la presencia del plsmido EAF (EPEC adherence factor) el cual se encuentra en las cepas tpicas, mientras que est ausente en las atpicas. ste codifica los genes para la produccin de fimbrias denominadas BFP (bundle-forming pilus) que participaran en la adherencia inicial bacteria-enterocito. Objetivo. El objetivo de este trabajo fue caracterizar geno-fenotpicamente cepas VTEC y EPEC de muestras de pollo e hisopados de cloacas, tomadas en diferentes bocas de expendio y criaderos. Materiales y mtodos: Se caracterizaron 39 cepas de VTEC y EPEC aisladas de hamburguesas de pollo, menudos, carcasas y cloacas. Se emplearon una PCR multiplex para la deteccin de los genes de virulencia vt1, vt2, eae, exhA y saa, y PCRs monoplex para la deteccin de vt2f y bfp. La serotipificacin se realiz mediante aglutinaciones en placa y en tubo. Resultados: Los aislamientos VTEC de hamburguesas de pollo presentaron los siguientes perfiles geno-fenotpicos: vt2 (O117:H7, O153:H28, O160:H40, ONT:H- y ONT:H2), vt2 ehxA (O91:H14), vt2 saa ehxA (O113:H21), vt2 vt1 saa ehxA (O130:H11) y el aislamiento proveniente de menudos fue vt2 (ONT:H-). La variante vt2f identificada en aves, no se encontr en ninguna de las muestras. Las cepas EPEC (eae+) aisladas de menudos pertenecieron a los siguientes serotipos (O2:H-, O40:H-, O40:H10, O136:H26, O166:H45, ONT:H-, ONT:H9, OR:H32), carcasas (O5:H-, O19:H11, O45:H8, OR:H32), cloacas (O8:H19, O40:H10, O103:H-, O119:H4, O130:H11, O153:H49) y hamburguesa de pollo (O40:H10). Ninguna de las cepas present el gen bfp. Conclusiones: La presencia de VTEC en hamburguesas de pollo, indicara una posible contaminacin cruzada en el lugar de expendio, ya que algunos serotipos (O113:H21, O117:H7, O130:H11, O91:H14) son compartidos con cepas VTEC de origen bovino aisladas previamente en esta regin. Todas las cepas EPEC caracterizadas en este trabajo son atpicas (carecen del gen bfp). Entre ellas predomin el serotipo O40:H10 que se encontr en aislamientos provenientes de hamburguesas, menudos, y cloacas. El aislamiento de cepas EPEC previo a la faena (en cloacas) indicara que el pollo podra ser reservorio de este patotipo.
P444 - 27807 SUBTIPIFICACIN DE CEPAS STEC NO-O157 AISLADAS DE CASOS CLINICOS ESPORDICOS Y DE GANADO BOVINO EN ARGENTINA. D ASTEK, B(1); PALLADINO, M(2); MILIWEBSKY, E(INEI-ANLIS MALBRAN); DEL CASTILLO, L(2); CHINEN, I(1); CARBONARI, C(1); DEZA, N(1; BASCHKIER, A(1); MANFREDI, E(1); MASANA, M(2); RIVAS, M(1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn , (2) ITA-CIA, INTA Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patgeno emergente transmitido por alimentos, que se encuentra asociado a diarrea (D), diarrea sanguinolenta (DS), y sndrome urmico hemoltico (SUH). Los rumiantes, especialmente el ganado bovino, son el principal reservorio y la transmisin se produce a travs del consumo de carne poco cocida, productos lcteos sin pasteurizar y verduras o agua contaminada con heces de animales. STEC O157:H7 es el serotipo prevalente, sin embargo otros serotipos no-O157 se encuentran asociados a enfermedad humana. El objetivo de este estudio fue establecer la frecuencia de deteccin de diferentes serotipos de STEC no-O157 aislados de casos clnicos espordicos y de ganado bovino, y comparar su relacin clonal. Entre noviembre de 2006 y abril de 2008 un total de 352 cepas STEC no-O157 se aislaron de SUH (n=38), DS (n=17), D (n=11), contactos asintomticos (n=3), sin diagnstico (n=3), y de carcasas y materias fecales de bovinos provenientes de diferentes regiones geogrficas del pas obtenidas en distintos frigorficos (n=280). Las 352 cepas se agruparon en 55 serotipos, humanas correspondieron a 12 serotipos, y bovinas a 47. Los serotipos O111:NM (1 humana y 1 bovina ), O145:NM (40 humanas y 3 bovinas), y O174:H21 (1 humana y 9
P443 - 27746 SEROTIPOS Y FACTORES DE VIRULENCIA DE Escherichia coli VEROCITOTOXIGNICO (VTEC) Y ENTEROPATOGNICO (EPEC) EN MUESTRAS DE POLLO. ALONSO, MZ(1,2); IRINO, K(4); SANZ, ME(1); LUCCHESI, PMA(1,2); PADOLA, NL(1,3); PARMA, AE(1,3)
(1)Lab. Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV. UNCPBA. (2) CONICET. (3)Comisin de Investigaciones Cientficas PBA 4Instituto Adolfo Lutz Introduccin. VTEC produce colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico. El principal factor de virulencia son las verocitotoxinas codificadas por los genes vt1y vt2. Dentro de vt2 existen numerosas variantes, entre ellas la vt2f que se ha identificado principalmente en aves. EPEC produce diarrea infantil se-
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bovinas) fueron detectados en cepas de ambos orgenes. Los factores de virulencia stx, eae, ehxA, y saa fueron detectados por PCR. El genotipo stx2 fue prevalente tanto en cepas humanas (79,2%) como en bovinas (62,5%). El 18% de las cepas humanas port el gen stx1 versus el 10,3% de las bovinas. El genotipo stx1/stx2 fue ms frecuente en cepas provenientes del ganado (27,1%) que en humanas (2,8%). El perfil de virulencia prevalente en las cepas humanas fue stx2/eae/ehxA (79,2%), mientras que solo el 2,5% de las cepas bovinas port ese genotipo. En las cepas de origen animal el genotipo prevalente fue stx1/stx2/ehxA/ saa (17,1%). Por XbaI-PFGE, un total de 291 patrones diferentes fueron identificados entre las 352 cepas STEC, con un 60,5% de similitud. Los patrones XbaI-PFGE del serotipo O174:H21 presentaron una similitud del 93,9%, y los del O111:NM del 81,1%, en cepas de ambos orgenes. La combinacin O145:NM-stx2-PFGE ARENMX01.0084 fue la nica detectada en cepas de ambos orgenes (3 humanas, 2 bovinas). En Argentina, el serotipo O145:NM es el segundo en importancia luego del O157:H7 en enfermedad humana. O111:NM y O174:H21 tambin son detectados en cepas de origen clnico. La presencia de estos serotipos en el ganado vacuno, indica su importancia como reservorio de STEC noO157. El uso combinado de tcnicas de subtipificacin puede ayudar a detectar reservorios, y establecer variaciones temporales y geogrficas de clones de reciente aparicin.
stx2c de E. coli O157:H7 estn asociados a las formas clnicas severas en humanos. Si bien se requiere un estudio gentico ms completo para determinar si estas cepas y las aisladas de humanos en Argentina pertenecen a un genotipo nico, estos resultados sugieren una alta incidencia de cepas E. coli O157:H7 clado 8 que poseen las variantes de toxina Shiga ms frecuentes en casos de SUH por STEC O157 en Argentina.
P446 - 27830 EFECTOS DE UN PROBITICO SOBRE LA VARIACIN DE LA FLORA INTESTINAL Y EL NMERO DE CLULAS IGA+ EN RATAS. GIGOLA, GRACIELA(1); CARDOZO, CLARA(1); MELATINI, GABRIEL(1); PEREZ, JUAN(1); PERDIGON, GABRIELA(2)
(1) Universidad Nacional del Sur, (2) CERELA CONICET Los probiticos son microorganismos vivos que regulan el equilibrio entre bacterias beneficiosas de la microbiota intestinal y aquellas potencialmente dainas y al ser administrados en cantidades adecuadas estimulan la inmunidad humoral incrementando la cantidad disponible de IgA local y circulante. Objetivo: comparar dos dosis de probiticos y estudiar su efecto sobre la inmunidad local en el intestino en ratas y sobre los recuentos de lactobacilos y anaerobios totales en materia fecal. Materiales y mtodos: se emplearon 27 ratas Wistar divididas en tres grupos. Grupo control: 3 animales. Grupo A: 15 animales divididos en lotes de 3, a los que se suministr 1 ml de BIOFLORA (Lab. SIDUS). Los animales se sacrificaron a los das 3, 5, 8,10 y 15. Grupo B: 9 animales divididos en lotes de 3, a los que se suministr 0,2 ml del mismo probitico. Los animales se sacrificaron a los das 5, 8 y 10. Se extirp el intestino, se proces por tcnica de congelacin y se realiz inmunofluorescencia directa para determinar el nmero de clulas IgA+. Muestras de materia fecal fueron obtenidas en condiciones basales y antes de cada sacrificio en el grupo A. Se realizaron recuentos de anaerobios y lactobacilos totales. Resultados: BIOFLORA estimul la produccin de clulas IgA secretoras en el grupo A, con un mximo de expresin al da 3, mientras que en el grupo B no se observaron diferencias significativas respecto del control. El recuento de anaerobios totales decay significativamente el da 5 y el de lactobacilos sufri un leve aumento al da 3, que se mantuvo estable durante los das subsiguientes. Conclusin: el incremento del nmero de clulas IgA+ resulta dependiente de la dosis del probitico y decae al nivel basal luego de 8 das consumo. Los probiticos actan como microorganismos alctonos que transitan el tracto gastrointestinal sin colonizarlo, debido probablemente al efecto barrera ejercido por la microbiota autctona.
P445 - 27819 DETECCIN DE Escherichia coli O157:H7 PERTENECIENTE AL HIPERVIRULENTO CLADO 8 EN BOVINOS DE ARGENTINA. LARZABAL, M(1); RABINOVITZ, BC(2); BALDONE, V(3); MOREIRA, AR(4); ELIZONDO, AM(2); VILTE, DA(2); MAZZEO, M(5); CATALDI, A(1); PIANCIOLA, L(5); MERCADO, EC(2)
(1)Instituto de Biotecnologa e (2)Instituto de Patobiologa, (3)EEA G. Covas, (4)EEA Balcarce, Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA), (5)Direccin Red de Laboratorios, Subsecretara de Salud, Neuqun. Introduccin: Escherichia coli O157:H7 es el serotipo de E. coli productor de toxina Shiga (STEC) ms frecuentemente asociado con el sndrome urmico hemoltico (SUH) en humanos. El ganado bovino y otros rumiantes son considerados el reservorio primario de este serotipo. Recientemente se han identificado diferencias genotpicas y fenotpicas entre cepas aisladas de bovinos y humanos. Se ha determinado que STEC O157:H7 posee diversidad genmica relacionada a eventos de recombinacin gentica mediados por bacterifagos y otros mecanismos de transferencia gentica horizontal, algunos de los cuales resultan en diferencias en locus asociados a genes de virulencia, incluyendo los que codifican adhesinas, toxinas Shiga y protenas efectoras. Mediante anlisis de 96 polimorfismos de nucletido nico (SNP) se han identificado 39 genotipos agrupados en 9 clados. La emergencia del clado 8 en brotes recientes ocurridos en EE UU por consumo de vegetales contaminados ha sido relacionada con el elevado nmero de internaciones y casos de SUH. En Argentina el SUH es endmico, con ms de 500 casos reportados anualmente en nios. La presencia de cepas STEC O157:H7 pertenecientes a linajes hipervirulentos en el ganado bovino podra contribuir a dicha situacin epidemiolgica. Objetivo: caracterizar el toxinotipo y la pertenencia al clado 8 de cepas STEC O157:H7 de origen bovino. Materiales y Mtodos: Se estudiaron 16 cepas de STEC O157:H7 aisladas de 49 terneros de feedlot, cra y tambo de 3-8 meses provenientes de 4 establecimientos ubicados en Santa F, La Pampa, noreste y centro de Buenos Aires, respectivamente. La deteccin de los genes stx1, stx2, eae, ehxA, y rfbO157 de realiz por PCR mltiple. El antgeno H7 se determin por aglutinacin. Los subtipos de stx2 se determinaron por PCR-RFLP. Para identificar el clado 8, se realiz una PCR en tiempo real (RT-PCR) utilizando cebadores en horquilla (hairpin primers-HP-) dirigidos contra el SNP 539 ubicado en el marco de lectura ECs2357, caracterstico del clado 8. Resultados: Catorce cepas presentaron las variantes stx2 + stx2c, dos la variante stx2 y ninguna el gen stx1. Ninguna de las cepas present el gen stx2dactivable. Todas las cepas fueron positivas para los genes eae, ehxA y rfbO157, y aglutinaron con antisuero H7. De las 16 cepas, 12 (75%) pertenecieron al clado 8. El clado 8 y las variantes stx2-
P447 - 27879 CARACTERIZACIN DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA AISLADO DE ALIMENTOS EN EL PERODO 2007-2009. CHINEN,I; CARBONARI, C; D ASTEK, B; MILIWEBSKY, E; DEZA, N; MANFREDI, E; BASCHKIER, A; ZOLEZZI, G; RIVAS, M
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn Escherichia coli productor de toxina Shiga es un patgeno emergente que se transmite por alimentos capaz de causar diarrea no complicada, diarrea sanguinolenta, y sndrome urmico hemoltico (SUH). Un estudio de factores de riesgo realizado en Argentina en 2001-2002 (Rivas, 2004), demostr que el consumo de alimentos a base de carne picada, fuera o dentro de la casa, fue uno de los factores principales asociados a enfermedad. A nivel mundial, se demostr la transmisin a travs de productos crnicos, lcteos y vegetales. Actualmente, se observa una mayor variedad de productos alimenticios descriptos como vehculos de transmisin en diferentes brotes, como fueron los ocurridos en EE.UU en los aos 2006 y 2009, asociados a espinaca fresca y galletitas listas para hornear, respectivamente. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar cepas STEC aisladas de alimentos, recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia en el perodo 2007-2009. La caracterizacin se realiz mediante PCR para los diferentes factores de virulencia, el ensayo de citotoxi-
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cidad en clulas Vero, la deteccin fenotpica de la enterohemolisina, y serotipificacin. Para la subtipificacin se utilizaron las tcnicas de electroforesis de campo pulsado (PFGE), fagotipificacin y genotipificacin de stx. Los patrones de PFGE se compararon con la Base de Datos Nacional con cepas de diferentes orgenes aisladas desde el ao 1988. Del total de los 96 aislamientos recibidos, 68 (70.8%) fueron identificados como STEC. La frecuencia de aislamiento de STEC en cada tipo de alimento fue la siguiente: carne picada (24 cepas), hamburguesas (26), carne bovina (15), y chacinados (3). Un total de 34 cepas STEC fueron caracterizadas como O157:H7 stx2/eae/ehxA (11 cepas); O157:H7 stx1/stx2/eae/ehxA (6); O174:H21 stx2 (6); O91:H21 stx2/ehxA/saa (3); O113:H21 stx2/ehxA/saa (2); O22:HNT stx2 (2); O22:H11 stx1/stx2/ehxA/saa (1); O8:H19 stx2/ehxA (1); O104:H7 stx2 (1); y O128:HNT stx2 (1). Sin embargo, las restantes 34 cepas STEC con diferentes genotipos de stx no pudieron ser serotipificadas. Es importante destacar la deteccin de 14 cepas de E. coli O157 que no portaban el gen stx: O157:H7 eae/ehxA (1 cepa); O157:NM (5); O157:H16 eae (4); O157:HNT (4). Las 17 cepas STEC O157:H7 eae/ehxA con alto potencial virulento que se recuperaron de muestras de carne bovina y productos crnicos. Al realizar la comparacin con las cepas incluidas en la BDN, se observ que 3/17 cepas STEC O157:H7 eae/ehxA presentaron idntico perfil de virulencia y fueron indistinguibles por PFGE (AREXHX01.0011; AREXHX01.0093; AREXHX01.0153) de cepas aisladas fundamentalmente, de casos de SUH y diarrea sanguinolenta. Para la prevencin de las enfermedades asociadas a STEC, la deteccin de este patgeno en alimentos representa un desafo para la industria y los organismos de control. Para ello, es fundamental la aplicacin de metodologas estandardizadas y normatizadas a travs de la regulacin nacional.
Agar- azul de metileno (0,03%) tamponado (McIlvaine) a diferentes valores de pH: 4, 4,4 y 4,8. Las placas fueron incubadas a 25C, durante 72h. La presencia de actividad killer se confirm mediante la formacin de halos de inhibicin alrededor de las colonias de levaduras. Los mismos se midieron y se calcul el parmetro Pz (radio de la colonia/radio de la colonia + radio del halo). Resultados: Se obtuvo el mximo registro de levaduras biosupresoras cuando las mismas se desarrollaron a pH 4,4. A este valor de pH, las cepas Debaryomyces vanrijiae BDv566, Candida sake BCs403, C. parapsilosis BCp272 inhibieron a las levaduras contaminantes E9, F1 y MR6. La levadura C. sake BCs370 form halos de inhibicin en todos los lawn ensayados a pH 4,8 y 4 (excepto en NCYC1006). Conclusin: las levaduras noSaccharomyces ensayadas mostraron que poseen amplia actividad antimictica frente a levaduras contaminantes del ambiente enolgico. La aplicacin de levaduras killer puede considerarse una alternativa para eliminar levaduras que perjudican el vino.
P449 - 27925 OCURRENCIA DE VT2DACT EN Escherichia coli VEROTOXIGNICO AISLADO DE BOVINOS Y ALIMENTOS CRNICOS EN ARGENTINA, Y SU RELACIN CON OTROS FACTORES DE VIRULENCIA. KRUGER, ALEJANDRA(1,2); LUCCHESI, PAULA MA(1,2); PARMA, ALBERTO E(1,3)
(1) Lab. de Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV-UNCPBA. Tandil. (2) CONICET, (3) Comisin de Investigaciones Cientficas Introduccin: Escherichia coli verotoxignico (VTEC) es un patgeno entrico que puede causar severas enfermedades en humanos, tales como colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico (SUH). Las verotoxinas son el factor de virulencia ms importante de este patgeno. Diversos estudios identificaron variantes de los genes vt, y sugieren que el resultado clnico de la infeccin por VTEC depende del genotipo de la cepa infectante. En particular, las variantes vt2EDL933y vt2dact estn asociadas a cepas de mayor virulencia y al desarrollo de SUH. La caracterstica principal de la variante vt2dact es que puede activarse en presencia de mucus intestinal o elastasa, aumentando 10 a 1000 veces la citotoxicidad en clulas Vero. Al momento hay escasa informacin sobre la ocurrencia de la variante vt2dact en muestras obtenidas de ganado bovino, principal reservorio de VTEC. Objetivo: Nuestro objetivo fue investigar la presencia de vt2dact en cepas VTEC aisladas de bovinos y alimentos en Argentina y evaluar su relacin con otros factores de virulencia y el serotipo. Materiales y mtodos: Se estudiaron 161 aislamientos VTEC vt2positivos, previamente caracterizados respecto a otras variantes de vt2 y a la presencia de genes eae, saa (ambos codificantes de protenas de adherencia) y al gen ehxA (codificante de una enterohemolisina). La presencia del gen vt2dact se evalu por medio de una PCR especfica en la cual el primer forward es homlogo a la secuencia codificante de la regin peptdica A2 reconocida por la elastasa. Resultados: Detectamos el gen vt2dact en 13% (21/186) de los aislamientos vt2-positivos, pertenecientes a los serotipos O2:H25, O8:H19 O15:H21, O20:H19, O25:H19, O79:H19, O91:H21, O113:H21, O171:H2, O175:H8, ONT:H7 y ONT:H19. Todos los aislamientos vt2dact-positivos fueron eaenegativos. Doce (57%) de los aislamientos portaban el gen ehxA de los cuales siete tenan adems el gen saa. Se encontr que posean genotipo vt2dact cepas portadoras de la variante vt2EDL933 como tambin cepas portadoras de otras variantes de vt2, como vt2vha, vt2vhb y vt2g. Los resultados muestran que cepas VTEC aisladas de ganado bovino y productos crnicos en Argentina portan la variante vt2dact que ha sido propuesta como indicadora de VTEC con alto potencial patognico, y ha sido detectada en nuestro pas en un alto porcentaje de cepas VTEC eaenegativas aisladas de casos de SUH.
P448 - 27915 ACTIVIDAD KILLER DE LEVADURAS AISLADAS DE AMBIENTES ENOLGICOS FRENTE A LEVADURAS CONTAMINANTES DEL VINO, A DIFERENTES PH. MATURANO, YOLANDA PAOLA; ZAPATA, M JOSE(1,2); TORO, M EUGENIA(2); MUOZ, M ANDREA(1,2); COMBINA, MARIANA(3); STURM, M ELENA(3); ROJO, M CECILIA(3); VAZQUEZ, FABIO(2)
(1) Facultad de Ciencias Exactas, Fsicas y Naturales -UNSJ (2) Instituto de Biotecnologa - UNSJ, (3) CEE-EEA-INTA Introduccin: en la naturaleza, existen levaduras capaces de secretar toxinas (denominadas killer) que pueden ejercen un efecto letal sobre otras especies de levaduras y hongos filamentosos. Desde una perspectiva de microbiologa aplicada, las levaduras killer han sido postuladas como biocontroladoras de contaminaciones fngicas en alimentos y fermentaciones. Sin embargo, su uso industrial es limitado debido a la falta de datos cuantitativos sobre la productividad, actividad y estabilidad de las toxinas. Las levaduras de los gneros Brettanomyces y Zigosaccharomyces pueden contaminar vinificaciones produciendo flavors desagradables, adems de perjudicar la calidad general del producto. Para prevenir las contaminaciones por estas levaduras, se han implementado varias alternativas: higiene rigurosa en bodegas, uso de preservantes qumicos, filtracin, entre otras. Sin embargo, la presencia de microorganismos contaminantes en algunos vinos demuestra que estos mtodos tradicionales no son tan efectivos y evidencia la necesidad de nuevos mtodos que logren la estabilidad microbiolgica de los vinos. En este contexto, resulta interesante la exploracin de levaduras killer capaces de contrarrestar la actividad de microorganismos indeseados. Objetivo: detectar actividad killer de levaduras autctonas, a diferentes pH, contra levaduras contaminantes del vino. Materiales y Mtodos: Se emplearon 226 cepas de levadura autctonas pertenecientes al Cepario del Instituto de Biotecnologa-UNSJ: 91 noSaccharomyces, 135 Saccharomyces sp.; y 4 cepas de referencia, S. cerevisiae: CECT891 K(+), ATCC36900 K(+) ATCC38636 K(-), NCYC1006 K(-). La actividad killer se evalu en placa, mediante reaccin cruzada con las levaduras contaminantes Brettanomyces bruxellensis: E9, F1 y Zigosaccharomyces rouxii: MR6, MC10. Se usaron como controles positivos a S. cerevisiae ATCC38636 K(-) y NCYC1006 K(-). Se emple el medio YPD-
P450 - 27958 CARACTERIZACIN DE Escherichia coli VEROTOXIGNICA (VTEC) DEL SEROTIPO O130:H11 AISLADA DE BOVINOS DE TAMBOS DE ARGENTINA. FERNANDEZ, D(1,3); KRUGER, A(1,3); BUSTAMANTE, AV(1,3); SANSO, MA(1,3); POLIFRONI, R(1,3); SANZ, ME(1); ARROYO, GH(1,3); LUCCHESI, PA(1,3); PADOLA, NL(1,2); PARMA, AE(1,2)
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(1) Laboratorio de Inmunoqumica y Biotecnologa, - (2) CIC (3) CONICET, Dpto. de Sanidad Animal y Medicina Preventiva, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Centro, Tandil. Introduccin: VTEC es causante de brotes y casos espordicos de diarrea, colitis hemorrgica (CH) y sndrome urmico hemoltico (SUH) a travs de la produccin de verotoxinas (VT1 y VT2), y factores de virulencia adicionales. Argentina posee la mayor incidencia de SUH a nivel mundial (15,5/100000) en nios menores de 5 aos. Los tambos pueden contribuir al riesgo de infeccin por VTEC a travs de la leche y productos lcteos sin pasteurizar. En un estudio realizado en nuestro laboratorio se obtuvo una prevalencia de VTEC del 37,5% en bovinos lecheros de Argentina y el serotipo aislado con mayor frecuencia fue O130:H11. ste y otros de los serotipos identificados en ese trabajo, han sido aislados de pacientes con diarrea, CH y SUH en otros estudios. Objetivo: caracterizar geno-fenotipicamente cepas de VTEC del serotipo O130:H11. Materiales y mtodos: 37 cepas del serotipo O130:H11 obtenidas de 5 tambos diferentes fueron caracterizadas. Se determinaron los factores de virulencia (vt1, vt2, ehxA, eae y saa) por PCR multiplex y variantes vt por PCR y PCR-RFLP. Se realizaron PCR monoplex para los genes crl, csgD y csgA implicados en la sntesis de la fimbria curli, y para el gen sab que codifica para una nueva adhesina autotransportada. Adems, se determin el efecto citotxico en clulas Vero. Los aislamientos fueron subtipificados mediante MLVA (multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis) para lo cual se analizaron por PCR siete loci VNTRs genricos para E. coli. Se calcul la diversidad gentica para cada locus VNTR utilizando el ndice de Nei. Resultados: por multiplex PCR se determin que 36 cepas presentaron un perfil de virulencia: vt1, vt2, saa, ehxA y una cepa el perfil: vt1, saa, ehxA. La variante predominante entre las cepas vt2-positivas fue vt2EDL933. Se presentaron los genotipos vt2EDL933 (27/36), vt2vhb (6/36) y vt2EDL933-vt2vhb (3/36). Las variantes vt2vha, vt2d, vt2NV206 y vt2g no se detectaron entre los aislamientos estudiados. Todas las cepas presentaron efecto citotxico visible a las 48 h de cultivo. La totalidad de las cepas fueron portadoras de los genes crl, csgD y csgA, mientras que el gen sab se encontr en 23 de 37 cepas. Se encontr un nico perfil de MLVA y un locus, el CVN003, mostr alelo nulo. Conclusiones: La presencia de genes de virulencia relacionados con enfermedad en el hombre junto con la observacin del efecto citotxico en clulas sensibles a la accin de las VTs demuestra el potencial patognico de aislamientos de este serotipo. La falta de diversidad gentica evidenciada por los ensayos de MLVA, podra estar indicando que O130: H11 sera un serotipo emergente.
de fermentacin y las segundas ayudan a determinar la composicin qumica y la participacin en las cualidades sensoriales de los vinos. El objetivo de este trabajo es evaluar las cepas de los Departamentos de Lujn de Cuyo, Tupungato y Maip segn estas caractersticas con el fin de elaborar un catlogo de estos microorganismos con su descripcin para ser seleccionados segn objetivos particulares. En cada cepa se evalu viabilidad y pureza y se acondicionaron nuevamente para su mantenimiento. Se realizaron las descripciones macro y microscpicas y se evaluaron caractersticas tecnolgicas: tolerancia al etanol, cintica de fermentacin, resistencia el anhdrido sulfuroso, formacin de sedimento y de espuma y caractersticas cualitativas: formacin de cido actico y cido sulfhdrico. Hasta el momento se proces el 52% de un total de 221. La totalidad se mostraron viables y puras y respondieron a la descripcin de Saccharomyces spp. En cuanto a las caractersticas tecnolgicas, el 79% mostr tolerancia al etanol (15%v/v). En el poder de fermentacin, las levaduras de mayor desprendimiento de CO2 mostraron un promedio de 6,2g en 12 das de fermentacin. La resistencia al SO2 fue variable: el 20% toler concentraciones de 100 ppm, el 18% creci a 200 ppm, mientras que el 62% resisti 300 ppm. Todas las levaduras presentaron sedimento. La produccin de espuma fue mnima en el 64% y media en el 21% de las cepas. Con respecto a las caractersticas cualitativas, slo el 8% desarroll concentraciones medias de acidez voltil y el 30% produjo cantidades leves de H2S. Este trabajo permite optimizar recursos biolgicos para la fermentacin alcohlica de mostos. Es posible afirmar que en esta coleccin existen individuos capaces de fermentar vinos con elevados porcentajes de alcohol y que aseguren el final de fermentacin. Tambin hay levaduras poco productoras de espuma, acidez voltil y H2S. La seleccin de levaduras locales representa una clara ventaja frente a otras cepas comercialmente ms difundidas. Esto es importante para la preservacin y explotacin de la biodiversidad de levaduras de la Prov.de Mendoza
P452 - 27986 EVALUACIN DE LA MICOFLORA, OCURRENCIA NATURAL DE MICOTOXINAS Y COMPOSICIN NUTRICIONAL EN ALIMENTOS BALANCEADOS DESTINADOS A LA PRODUCCIN DE ANIMALES DE GRANJA EN ALTO VALLE (RN). GRECO, MARIANA(1,3); FRANCHI, LUISA(2); LUDEMANN, VANESA (1); PARDO, ALEJANDRO(1); POSE, GRACIELA(1,2,3)
(1) Universidad Nacional de Quilmes, (2) Universidad Nacional de Ro Negro, (3) CONICET La presencia de hongos y micotoxinas en alimentos balanceados deriva de la utilizacin de materias primas contaminadas durante los perodos de cosecha o posteriores. La ingesta excesiva de alimentos contaminados con micotoxinas puede tener efectos adversos tanto en la salud animal como en la productividad. En Argentina es muy escasa la informacin disponible acerca de la presencia natural de micotoxinas y micoflora en los alimentos destinados a aves de granja. El objetivo del presente trabajo fue cuantificar, aislar e identificar la flora fngica, determinar la presencia de las principales toxinas implicadas en micotoxicosis en animales (aflatoxinas, deoxinivalenol, fumonisina, T2, ocratoxina y zearalenona) y evaluar la calidad nutricional de los alimentos balanceados destinados a la alimentacin de aves de granja (pollo y choique). Sobre 17 muestras de alimentos balanceados analizados hasta el momento, se llev a cabo el recuento total de mohos en tres medios de cultivo: DRBC, DG18 y DCPA (para recuento general, de hongos xerfilos y aislamiento de especies de Alternaria y Fusarium, respectivamente). La determinacin de micotoxinas se realiz por la tcnica de ELISA empleando los tests R-Biopharm (aprobados por la AOAC). Se determinaron protenas por el mtodo Kjeldahl, lpidos por el mtodo de Soxhlet, humedad y cenizas. Se obtuvieron recuentos comprendidos entre 2.1 y 1,6.106 UFC/g en DRBC; entre 5.1 y 1,4.106 UFC/g en DG18 (predominancia de Eurotium spp.) y entre 1.1 y 1,3.10 6 colonias en DCPA. En general, la frecuencia y los gneros fngicos determinados fueron Fusarium (34,90%), levaduras (23,91%), Cladosporium (9,88%), Penicillium (7,29%), Aspergillus (7,27%), Eurotium (3,15%) y otros (13,60%). Las especies halladas fueron Fusarium proliferatum, Cladosporium cladosporioides,
P451 - 27982 CREACIN DE UN CEPARIO DE LEVADURAS VNICAS. SANCHEZ, MLAURA; PALADINO, S; BERNARDI, M; VARGAS, E; MAZA, M; FORMENTO, JC; SFREDDO, E; FARRANDO, S
Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Cuyo El uso de levaduras seleccionadas es una prctica habitual en las bodegas de Mendoza. Aunque la oferta comercial est basada en microorganismos importados, existe una tendencia a vinificar con levaduras autctonas de la misma zona de elaboracin por estar adaptadas a las condiciones agroclimticas y de materia prima. Los consumidores demandan nuevos estilos de vino proporcionando desafos en la innovacin de la tecnologa de fermentacin. De all la importancia de investigar levaduras con caractersticas adecuadas de vinificacin. La Facultad de Ciencias Agrarias (UNCuyo) cuenta con una coleccin de levaduras provenientes de uvas de viedos de la Prov. de Mendoza. Trabajos anteriores de aislamiento y seleccin de levaduras permitieron conformar un cepario de ms de 500 cepas. El objetivo principal de las colecciones de microorganismos es mantener a stos puros, viables y estables. Todo trabajo de microbiologa requiere conocer las propiedades de la poblacin a estudiar. La caracterizacin enolgica de levaduras consiste en identificar cepas que presenten adecuadas propiedades tecnolgicas y cualitativas. Las primeras responden a la eficiencia de la levadura en el proceso
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Aspergillus candidus, A. flavus, A. parasiticus, A. terreus, Penicillium chrysogenum, P. funiculosum, P. implicatum, P. nalgiovense, P. oxalicum, P. pinophilum, Eurotium amstelodami. El 100% de las muestras resultaron positivas para las 6 toxinas. Se detect fumonisina B1 (promedio 1,534 mg/kg); T2 (promedio 0,05 mg/kg); zearalenona (promedio 0,050 mg/kg); aflatoxina (promedio 0,0064 mg/kg); deoxinivalenol (promedio 0,234 mg/kg); ocratoxina (promedio 0,00827 mg/kg). Se determin la co-ocurrencia de micotoxinas en todas las muestras evaluadas. Respecto a la composicin nutricional, el contenido proteico fue determinado entre 15,26 y 23% y el de lpidos entre 1,43 y 3,65%. La humedad fue determinada en un rango de 4,59 a 12,75% y cenizas entre 4,78 y 12,22%. Si bien las concentraciones de micotoxinas determinadas no fueron elevadas segn los lmites establecidos por la Unin Europea, la ingestin de niveles muy bajos de micotoxinas no solo causa micotoxicosis sino que tambin conduce a un debilitamiento de la resistencia inmune a las infecciones que causan problemas de salud conllevando a prdidas econmicas en forma de disminucin de la productividad. Adems la co-ocurrencia podra conllevar a una respuesta de toxicidad sinrgica en los animales.
can que dichas condiciones de cultivo resultaran adecuadas para la obtencin de vinos con caractersticas organolpticas mejoradas. El aislado de I. orientalis, utilizado como cultivo adjunto de S. cerevisiae, podra aportar a la reduccin del contenido de cido mlico de estos vinos regionales y a la elaboracin de productos de calidad controlada y diferencial.
P454 - 28101 ECOLOGA DE LEVADURAS ASOCIADAS A LA ELABORACIN DE SIDRAS PATAGNICAS. BARBAGELATA, RAUL (1); MARCELA, SANGORRIN(1,2); CABALLERO, ADRIANA(1)
(1) Universidad Nacional del Comahue. Neuqun, Argentina. (2) CONICET Las levaduras impactan sobre la calidad de las bebidas fermentadas a travs de su ecologa y de sus actividades biolgicas. En este trabajo se caracterizaron la extensin y diversidad de la biota indgena de levaduras asociada a procesos de elaboracin de sidras realizados a escala industrial (10.000 L) y de laboratorio (1L) y su relacin con la calidad de los productos obtenidos. Los procesos se llevaron a cabo en dos sidreras del Alto Valle (Pcia. de Ro Negro, Norpatagonia argentina), identificadas como LR y LD, por el mtodo tradicional (fermentacin alcohlica espontnea) utilizando mostos de pera y de manzana como sustrato.Los procesos fermentativos se siguieron por evolucin de los slidos solubles (mtodo refractomtrico). El aislamiento y recuento de las levaduras se realiz en YEPD agar a partir de muestras de mostos de fermentacin iniciales, medios y finales y utilizando el mtodo de diluciones sucesivas. Para la identificacin de los aislados (167 en total) se utilizaron mtodos convencionales (pruebas bioqumicas) y moleculares (ITS1-5.8S ADNrITS2 PCRRFLP). La caracterizacin fisicoqumica de las sidras obtenidas (acidez titulable y voltil, contenido de azcares reductores, pH, dixido de azufre total y libre, graduacin alcohlica) se realiz conforme a los mtodos propuestos por el Instituto Nacional de Vitivinicultura. Los resultados evidenciaron que, en general, las poblaciones de levaduras estn mayoritariamente representadas por Saccharomyces cerevisiae (66%) y Kloeckera apiculata /Hanseniaspora uvarum (23%). Estas especies, comunes a todos los procesos estudiados, estuvieron acompaadas en menor extensin por Pichia kluyveri (6,0%), Debaryomyces hansenii var hansenii (3,5%), Torulaspora delbrueckii (1%) y Pichia membranifaciens (0,5%). En todos los casos las levaduras diferentes de Saccharomyces estuvieron asociadas a las etapas iniciales de los procesos y fueron gradualmente reemplazadas por S. cerevisiae, especie que finalmente domina y completa a todos ellos. No obstante, la proporcin y riqueza (nmero de especies identificadas) de levaduras no-Saccharomyces estuvieron significa-tivamente influenciados por la sidrera, por el sustrato y por la escala de elaboracin (prueba chi cuadrado p<0.02 para 3 g.l). Todos los procesos presentaron cinticas correspondientes a fermentaciones alcohlicas regulares y aunque la calidad fisicoqumica de las sidras obtenidas estuvo dentro de lo establecido por el Cdigo Alimentario Argentino, el contenido en acidez voltil vari significativamente entre ellas (ANOVA y Prueba de Tukey HSD, p= 0,000959 n=2) y estuvo estrechamente relacionado a la proporcin de levaduras no-Saccharomyces, K. apiculata, en particular, que se establecen en las etapas iniciales de los proceso (r=0.9771, p<0.01). Aunque S. cerevisiae es la especie mayoritaria y dominante en todos los procesos fermentativos, la extensin y composicin de la biota de levaduras no-Saccharomyces que se establece al inicio de los mismos, influenciadas por las caractersticas particulares de las sidreras, la calidad del sustrato y la escala de elaboracin, afectan significativamente la calidad fisicoqumica de las sidras obtenidas.
P453 - 27987 INFLUENCIA DE CULTIVOS MIXTOS DE Issatchenkia orientalis-Saccharomyces cerevisiae SOBRE LA CALIDAD FISICOQUIMICA DEL VINO. DEL MONACO, SILVANA M (1); CABALLERO, ADRIANA C (1)
(1) Laboratorio de Microbiologa y Biotecnologa, Facultad de Ingeniera e IDEPA CONICET - Universidad Nacional del Comahue. Neuqun, Argentina La fraccin de cidos no voltiles del vino, constituida mayoritariamente por tartrico y mlico, tiene un impacto directo sobre su impresin en boca y paladar. Desbalances en la misma pueden afectar negativamente la calidad sensorial del vino as como tambin poner en riesgo su estabilidad fisicoqumica y microbiolgica. En los mostos de uvas tintas de la regin del Comahue (norpatagonia argentina) el cido mlico constituye, en promedio, el 36% de la acidez total, alcanzando valores del 45% en variedades tempranas como el Pinot noir. En estudios previos hemos caracterizado molecular y bioqumicamente a la cepa Issatchenkia orientalis NI15 aislada de vinos patagnicos demostrando su capacidad de degradar cido mlico. El objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia de su uso en la forma de cultivo adjunto de Saccharomyces cerevisiae IF8, otra cepa indgena de la regin patagnica seleccionada por sus propiedades enolgicas, sobre la calidad fisicoqumica del vino. Para ello se realizaron microvinificaciones conducidas por cultivos mixtos de ambas cepas inoculadas i) simultaneamente (CoC), ii) secuencialmente, I. orientalis seguida de S. cerevisiae (7 da) (CSI) e iii) secuencialmente, S. cerevisiae seguida de I. orientalis (5 da) (CIS). Los ensayos se realizaron por duplicado a 25 C utilizando como sustrato un mosto sinttico de composicin similar a los mostos Pinot noir y pH 3,6. Una microvinificacin conducida por un monocultivo de S. cerevisiae (C) fue realizada como control. Los mostos se inocularon a una concentracin final de 106 clulas/mL excepto en el cultivo CoC donde el inculo de S. cerevisiae fue de 104 clulas/mL. El crecimiento celular se sigui por recuento de UFC/mL en placas de GPY y la evolucin de la fermentacin por diferencia de pesada. En los vinos obtenidos se evalu el pH, el contenido de cidos orgnicos (HPLC), etanol (GC) y de L-cido mlico, glucosa y fructosa (enzimticamente). La evolucin del crecimiento microbiano puso en evidencia la ausencia de interacciones negativas entre las cepas y cinticas de crecimiento aceptables para la escala ensayada, observndose en todos los casos una influencia significativa de I. orientalis sobre la calidad fisicoqumica del vino. En particular, los vinos obtenidos por las estrategias CoC y CIS presentaron menor contenido de cido mlico que el monocultivo control (1,60 0,02; 2,32 0,14 y 2,66 0,04 para CoC, CIS y C, respectivamente) y valores de pH significativamente mayores (3,47 0,03, 3,50 0,01 y 3,10 0,01 para CoC, CIS y C, respectivamente) (p < 0,05). A su vez, las estrategias CoC y CIS mostraron el mayor consumo de azcares reductores despus del control. Los parmetros estudiados indi-
P455 - 28112 IDENTIFICACIN DE Aspergillus DE LA SECCIN Nigri CONTAMINANTES DE ALIMENTOS. SOBRERO, SILVINA; CHIERICATTI, CAROLINA; ARINGOLI, ELENA E; FERNANDEZ, VERONICA; BASILICO, JUAN CARLOS; ZAPATA DE BASILICO, MARIA L
Facultad de Ingeniera Qumica - U.N.L.
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Los Aspergillus son mohos muy abundantes y ubicuamente distribuidos en la naturaleza. Se adaptan a nichos variados y son capaces de aprovechar diferentes sustratos. Es un gnero anamrfico, con ms de 180 especies que se pueden identificar analizando el aspecto macroscpico de las colonias y las caractersticas de las estructuras microscpicas, usando Microscopa Optica (MO) y Microscopa Electrnica de Barrido (SEM). Los Aspergillus del Subgenero Circumdati Seccin Nigri son altamente resistentes a los tratamientos de desinfeccin y causan enormes prdidas econmicas por deterioro de cosechas y contaminacin de ambientes de trabajo. Pueden afectar la salud por ser alergenos o por produccin de metabolitos secundarios. A. carbonarius es productor de ocratoxina que es carcinognica y nefrotxica, de all la importancia de su correcta identificacin. El propsito del presente trabajo fue identificar aislados de Aspergillus Seccin Nigri analizando sus caractersticas macro y microscpicas. Se estudiaron 5 aislados provenientes de alimentos contaminados o ambientes de plantas elaboradoras. Se sembraron los aislados en extracto de malta agar (MEA) a 28 por 7 das, se sigui la metodologa propuesta por M. A. Klich (2002). Los parmetros macroscpicos considerados fueron: color, tamao, aspecto, radiacin y produccin de pigmento. Los parmetros microscpicos considerados fueron: forma y textura del conidiforo y de los conidios. Se complet la identificacin con SEM segn la metodologa propuesta por Z. Kozakiewicz (1989). Se cultivaron los mohos en Czapek agar a 28C durante 30 das y se fijaron los cultivos con glutaraldehdo 6%. Las muestras se recubrieron con oro depositado por sputtering empleando un sistema de deposicin combinado metal/carbono, SPI SUPPLIES, modelo SPI Module, cat. SPI 12157-AX, operado en atmsfera de argn. Los especmenes se examinaron con un Microscopio Electrnico de Barrido, Marca JEOL, modelo JSM-35C equipado con un sistema de adquisicin de imgenes marca semAfore. La observacin de la rugosidad de los conidios se realiz bajo el modo de imgenes de electrones secundarios utilizando una tensin de aceleracin de 20kV. Los aislados se clasificaron como: Aislado 1: A. awamori, Nakazawa (Klich 2002), segn Klich, correspondiente a A. niger var. awamori, Nakazawa segn Kozakiewicz. Aislados 2 y 4: A. niger Tiegh segn Klich, correspondiente a A. niger var pulverulentus (Mac Alp.) segn Kozakiewicz. Aislado 3: A. niger Tiegh segn Klich, correspondiente a A. niger var.ficcum (Reichardt) segn Kozakiewicz. Aislado 5: A. carbonarius (Bainier) Thom segn Klich y Kozakiewicz. La MO sola no fue suficiente para clasificar estos aislados hacindose indispensable la realizacin de SEM. La combinacin de ambas metodologas permiti una mejor identificacin.
tando 1 mL de la suspensin de conidios de concentracin conocida con 9 mL de la disolucin de NaOCl dejando actuar 1, 5, 15 y 30 min, y neutralizando durante 10 minutos (UNE 1275/07). Luego se hicieron diluciones sucesivas para realizar los recuentos en extracto de malta agar (MEA) incubando 7 das a 28 C. Se calcul la eficiencia (E) comparando los recuentos iniciales y luego del tratamiento de desinfeccin. Se logran eficiencias del 100% (reduccin de ms de 4 log10) para C. cladosporioides con concentraciones de 50 ppm a pH 6 durante 15 y 30 min, dependiendo del aislado, mientras que se logra la misma eficiencia con 700 ppm por 1 min, independientemente del pH. Para los Aspergillus se observ que 1 min y 100 ppm con pH 6 mejora la eficiencia, mientras que no es necesario este ajuste para las concentraciones restantes lo que simplifica el trabajo de sanitizacin en la industria de alimentos. Para una eficiencia del 100% (reduccin de ms de 4 log10) es necesario un tratamiento de 700 ppm durante 15 min. EL NaOCl result eficiente frente a los mohos estudiados, y mejora su accin antimicrobiana a pH 6, cuando se trabaja a bajas concentraciones NaOCl.
P457 - 28122 EFECTO ANTIMICROBIANO DEL AGUA OZONIZADA. FRISON, LAURA N; OCAMPO, HORACIO; PONISIO, DARIO; BASILICO, JUAN CARLOS
Facultad de Ingeniera Qumica - U.N.L. El potencial del ozono en la industria de alimentos incluye: reduccin de microorganismos, extensin de la vida til de productos como pescado, carne, frutas y reduccin de niveles de contaminacin de ambientes de envasado de alimentos. Se puede utilizar en fase gas o como agua ozonizada. En fase acuosa es utilizada para purificacin de agua en industrias de bebida, para el tratamiento del agua de lavado de pollos y lavado de frutas y vegetales. Su mecanismo de accin est dado por su poder oxidante, inactiva enzimas respiratorias y destruye la membrana celular. Por su capacidad para dar reacciones de adicin sobre los dobles enlaces y por su tendencia a transformarse de nuevo en oxgeno molecular, esta tecnologa es limpia, segura y eficiente y no agrede al medio ambiente ya que deja como residuo molculas de oxgeno. El equipo utilizado genera ozono a partir de aire ambiental por el mtodo de descarga corona en un flujo de gas, siendo por tanto variable la concentracin en disolucin (entre 0,4 y 0,8 ppm). Por este motivo se procedi a determinar por yodometria la concentracin de saturacin en una alcuota de solucin tampn pH 7, sin agregado de cultivo, al momento de cada ensayo. La disolucin de ozono en la solucin se realiz por burbujeo a travs de un difusor de vidrio poroso. Se determin la actividad antimicrobiana frente a: Escherichia coli, Sthaphylo-coccus aureus, Salmonella sp, Zygosaccharomyces rouxii, Aspergillus niger, Alternaria alternata y Cladosporium cladospo-rioides. Se coloc 1 mL del cultivo del microorganismo en estudio en 500 mL de buffer fosfato pH 7 contenidos en el recipiente de prueba, se dej aclimatar 15 minutos y se realizaron recuentos microbiolgicos a hora cero, luego se comenz a generar ozono hasta una concentracin constante en el buffer y se tomaron muestras entre 2 y 30 min. Por diferencia entre el recuento a hora cero y a los tiempos ensayados se calcul la reduccin decimal. Se comprob que para las bacterias y la levadura para 2 minutos se logr una disminucin de 3-4 log10, para 5 minutos fue de 5-6 log10; mientras que al cabo de 10 min no se observ desarrollo. C. cladosporioides se comport similarmente a las bacterias. A. niger y A. alternata, slo disminuyeron 1 log10 entre 5 y 15 minutos y 2 log10 para 30 minutos. Los datos obtenidos sobre cultivos puros de varias bacterias patgenas y hongos contaminantes de alimentos y ambientes usados en esta investigacin podran servir de gua para futuros estudios sobre las aplicaciones del agua ozonizada en industrias de alimentos
P456 - 28116 ACCIN DEL HIPOCLORITO DE SODIO FRENTE A AISLADOS DE Aspergillus DE LA SECCIN Nigri Y Cladosporium cladosporioides . ARINGOLI, ELENA E; FRISON, LAURA N; GERARD, MELISA; BASILICO, JUAN CARLOS; ZAPATA DE BASILICO, MARIA L
Facultad de Ingeniera Qumica - U.N.L. Los mohos aerotransportados de pigmentacin oscura (micelio y/o conidios), son frecuentemente aislados en nuestra zona agrcola, urbana y plantas industriales. El gnero Cladosporium y los Aspergillus de la seccin Nigri, son contaminantes frecuentes de plantas elaboradoras de alimentos. Cladosporium es un gnero cosmopolita, presenta una elevada distancia media de dispersin (32 110 m), y alta frecuencia de aislamiento, es psicrotolerante, soporta bajas concentraciones de oxgeno y bajos pH. Los Aspergillus seccin Nigri tambin son mohos cosmopolitas con conidios muy resistentes a tratamientos fsicos y qumicos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la eficiencia de diferentes tratamientos de desinfeccin con hipoclorito de sodio (NaOCl). Se trabaj con 5 aislados de Cladosporium cladosporioides y 5 aislados de Aspergillus de la seccin Nigri procedentes de alimentos y ambientes industriales. Los tratamientos estudiados fueron NaOCl pH 6 y 9 (700, 100, 50 y 25 ppm) para los aislados de C. cladosporioides y (1300, 1000, 700, 100 ppm) para los aislados de Aspergillus de la seccin Nigri, a diferentes intervalos de tiempo. Se llev a cabo el Test de suspensin-neutralizacin enfren-
P458 - 28159 CARACTERIZACIN DE CEPAS DE Escherichia coli PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA (STEC) NO-O157 AISLADAS DE MASCOTAS. BENTANCOR, A(1); VILTE, DA(2); RUMI, MV(1); LARZABAL, M(3); PISTONE CREYDT, V(4); GERHARDT, E(4); CHINEN, I(5); IBARRA, C(4); CATALDI, A(3); MERCADO, EC(2)
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(1) Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires; (2) Instituto de Patobiologa e (3) Instituto de Biotecnologa, Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA); (4) Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires; (5) INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Introduccin: Los rumiantes son considerados el principal reservorio de Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC). Mundialmente, la mayora de los brotes y casos espordicos de sndrome urmico hemoltico han sido atribuidos a E. coli O157:H7. Sin embargo, un nmero importante de casos de enfermedad severa son causados por STEC no-O157. Si bien se ha demostrado que las mascotas pueden excretar distintos serotipos de STEC, existe escasa informacin respecto a las propiedades de virulencia de dichas cepas. Objetivos: Caracterizar cepas STEC aisladas de perros y gatos, determinar su potencial patognico y su relacin con cepas STEC aisladas en Argentina. Materiales y Mtodos: Se estudiaron 10 cepas STEC aisladas de perros o gatos. La deteccin de los genes stx1, stx2, subA (subtilasa), saa (adhesina autoaglutinante STEC), eae (intimina) y ehxA (enterohemolisina) se realiz por PCR. Los subtipos de stx2 se determinaron por PCR-RFLP. Se secuenciaron los productos de amplificacin de secuencias stx2dactivable. Se determin la DC50 de los sobrenadantes de cultivos en clulas Vero. Se midi el efecto sobre el flujo de agua transepitelial (Jw) en colon humano in vitro de una cepa serotipo O178:H19. Se realiz pulse-field gel electrophoresis (PFGE) y se compararon los patrones obtenidos con las cepas STEC de la base de datos del INEI-ANLIS. Resultados: Ninguna de las cepas present los genes stx1, subA, saa y eae. Las cepas presentaron las variantes sxt2, stx2 + stx2c(vhb), stx2c(vh-b). La cepa O91:H21 present segn anlisis de secuencia, stx2d activable. Slo las cepas O8:H19 fueron ehxA positivas. Nueve cepas de diversos serotipos presentaron elevada DC50 (mayor a 10-4), mientras que la DC50 de la cepa O91:H21 fue de slo 10-2. La cepa O178:H19 redujo el Jw a travs de colon humano (P < 0,05). Ambas cepas O178:H19 mostraron un patrn XbaI-PFGE con > 85% similitud con cepas aisladas de bovinos. La cepa O91:H21 mostr un patrn XbaI-PFGE indistinguible de cepas aisladas de un caso de diarrea sanguinolenta y de hamburguesa. Las cepas O8:H19 presentaron patrones XbaI-PFGE indistinguibles o con > 85% similitud con cepas aisladas de bovino y carne picada. La cepa O22:H8 mostr un patrn XbaI-PFGE indistinguible de cepas aisladas de hamburguesa y carne bovina, mientras que la cepa O22:H- mostr > 85% de similitud con una cepa de origen bovino. Las cepas STEC aisladas de mascotas mostraron perfiles de virulencia de patgenos de alto riesgo. Los patrones de PFGE sugieren que podran provenir de la alimentacin con carne bovina que reciben las mascotas. STECs O91:H21 y O178:H19 se han aislado en casos de SUH en Argentina. Estos resultados acentan el rol epidemiolgico de las mascotas como fuente de infecciones por STEC en humanos.
de por lo menos un nucletido y hasta un 2% respecto del prototipo. Las variantes han sido analizadas en relacin a su comportamiento biolgico en el desarrollo de la enfermedad y tambin en estudios de taxonoma y filogenia. En este trabajo se realiz la caracterizacin de 6 variantes de HPVs sobre un anlisis preliminar de muestras infectadas pertenecientes a mujeres asistentes al servicio de patologa del Hospital San Juan Bautista de la Ciudad de Santo Tom (Corrientes). Estas variantes fueron descriptas en base a la amplificacin por PCR-MY09/11 y posterior secuenciacin de 450 pb del gen L1 (protena mayor de la cpside viral), regin considerada de valor taxonmico. Como templado se emple ADN genmico total de hisopados exoendocervicales. Las secuencias obtenidas fueron comparadas mediante Blast con aquellas disponibles en Genbank. Resultados. Se encontraron tres nuevas variantes para HPVs: HPV69 (6809 T/C); HPV31 (6772 G/A; 6796 G/A; 6880 G/A) y HPV62 (6790 T/ C; 6793 G/A; 6937 C/T). Las mutaciones fueron numeradas de acuerdo a la secuencias de referencia gi 333048 para HPV31; gi. 6970418 para HPV69, gi.39932599 para HPV62. El resto de las muestras presentaban secuencias publicadas en GenBank: una variante asitico americana de HPV-16 (gi 29468132); una variante del este asitico de HPV-16 (gi 33330060) y una variante de HPV-31 reportada para las Filipinas (gi 217883985). CONCLUSIONES. Los estudios de variabilidad gentica en HPVs a nivel mundial han posibilitado el desarrollo de herramientas diagnsticas eficientes y vacunas, el estudio de las relaciones entre genotipo y fenotipo de ciertas variantes y el desarrollo del cncer cervical, la definicin de marcadores genticos virales para el monitoreo de la infeccin en poblaciones definidas, y estudios evolutivos y taxonmicos. Estos estudios son escasos en la literatura argentina. A pesar del tamao muestral, este trabajo representa el primer reporte de secuencias de HPVs para tipos virales no 16 de la regin. La continuidad de estos estudios permitir generar una base de datos de secuencias de HPV para el noroeste argentino. Parcialmente financiado por la Fundacin Barcel (Sede Santo Tom).
P460 - 27800 GENOTIPIFICACIN DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EN DONANTES DEL BANCO DE SANGRE CENTRAL DE LA PROVINCIA DE MISIONES. MOJSIEJCZUK, LAURA(1); DECOMBARD, GABRIELA(2); MALAN, RICHARD(2); FLICHMAN, DIEGO(3); CAMPOS, RODOLFO(3); LIOTTA, JAVIER(1)
(1)Laboratorio de Biologa Molecular Aplicada, FCEQyN-UNaM; (2)Banco de Sangre Central de la Provincia de Misiones; (3)Ctedra de Virologa, FFyB-UBA El virus de la hepatitis B (HBV) es uno de los principales agentes causantes de enfermedades hepticas humanas de etiologa viral, incluyendo hepatitis aguda y crnica, cirrosis y carcinoma hepatocelular. Pertenece a la familia Hepadnaviridae y posee un genoma circular de DNA parcialmente doble cadena. En base a secuencias de genoma completo, el HBV ha sido clasificado en ocho genotipos (A-H, con una divergencia entre grupos mayor al 8%) que presentan una distribucin geogrfica caracterstica. Los estudios de epidemiologa molecular realizados en Argentina han demostrado la circulacin predominante de los genotipos A, D y F con una distribucin diferencial en cada localizacin geogrfica. El objetivo del presente trabajo fue investigar la prevalencia de genotipos del HBV en la poblacin de donantes del Banco de Sangre Central de la Provincia de Misiones (BSCM). Se evaluaron 54 muestras de plasma con serologa positiva (HBsAg y AntiHBc positivos) para infeccin crnica por HBV pertenecientes a donantes del BSCM. Se realiz la deteccin de HBV-DNA mediante un protocolo de PCR anidada con cebadores especficos para una regin del ORF-S del genoma viral (Mbayed y col, 2009). Se amplific y secuenci el fragmento de 585 pb en el 61,1% (33/ 54) de las muestras analizadas. El tratamiento bioinformtico de las secuencias obtenidas se realiz con Clustal X y MEGA 4 (Neighbor-Joining, Kimura dos parmetros, Bootstrap con 1.000 repeticiones). La frecuencia observada fue para el genotipo D 57,6% (19/33), genotipo F 39,4% (13/33) y genotipo A 3% (1/33). Los estudios de epidemiologa molecular realizados en otras provincias del norte de Argentina han demostrado una predominancia del genotipo F nativo americano. En contraste, en el presente
VIROLOGA
P459 - 27765 ANLISIS PRELIMINAR DE VARIABILIDAD GENTICA DE LA REGIN L1 DE VIRUS PAPILOMA HUMANO DE ALTO Y BAJO RIESGO. BUEMO, CARLA(1); BADANO, INES(1); GRAZIANI, JAVIER(2); COLLADO, SOLEDAD(1); BALETTE, ILEANA(1); MOJSIEJCZUK, LAURA(1); ROISMAN, ALEJANDRO(1); LIOTTA, JAVIER(1)
(1) Laboratorio de Biologa Molecular Aplicada. Universidad Nacional de Misiones. (2) IUCS- Barcel. Santo Tom. Corrientes El desarrollo de cncer cervical requiere de la infeccin persistente por tipos de virus papiloma humano (HPV) denominados de alto riesgo. Estos HPVs de importancia clnica pertenecen a la familia Papillomaviridae, gnero Alpha papillomavirus. Estructuralmente son virus desnudos, cuyo dimetro aproximado es de 55 nm. Su genoma est constituido por ADN doble cadena de 8Kb que contiene 8 marcos de lectura abiertos. Los tipos de HPVs se clasifican en variantes, considerando diferencias en su genoma
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estudio se ha evidenciado que el genotipo D de origen europeo es ms prevalente en la provincia de Misiones; esto podra estar relacionado con la ascendencia europea de gran parte de los pobladores de la regin. El aislamiento identificado como genotipo A se agrup en el subgenotipo A1 de origen africano escasamente reportado en Argentina. El mismo corresponde a un paciente residente de una localidad fronteriza con Brasil, pas donde se ha demostrado una alta prevalencia de este subgenotipo asociado principalmente a comunidades afrobrasileas. El presente trabajo constituye el primer registro de epidemiologa molecular del HBV en la provincia de Misiones, planteando la posible existencia de correlacin entre los genotipos virales circulantes y el origen de las corrientes migratorias que han contribuido a la poblacin de la regin.
dos rutinariamente, como NoV, y en la vigilancia de la posible aparicin de poliovirus derivados de cepas vacunales.
P462 - 27914 HERPES VIRUS ASOCIADOS A CASOS DE PARLISIS AGUDA FLCCIDA EN MENORES DE 15 AOS. ILLAN, H E; LEMA, C; CISTERNA, D; JURADO, V; CAPARELLI, M(2); FREIRE, M C(1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn, (2) Ministerio de Salud En 1988, la Asamblea Mundial de la Salud resolvi erradicar la poliomielitis en todo el mundo. Para ello se decidi realizar la vigilancia de la circulacin del poliovirus salvaje, crendose el concepto epidemiolgico de parlisis aguda flccida (PAF). Dentro de esta definicin se incluyen por su orden de frecuencia: el sndrome de Guilln Barr, la mielitis transversa, botulismo, neuropatias y otros desordenes del sistema nervioso. Desde 1984 en nuestro pas no hay circulacin de poliovirus salvaje, a pesar de lo cual se contina con la vigilancia epidemiolgica de las PAFs. Los virus de la familia Herpetoviridae son algunos de los principales causantes de enfermedades neurolgicas, especialmente de aquellas definidas como PAF. En este contexto nos planteamos conocer la asociacin de los herpesvirus con los casos de parlisis aguda flccida en pacientes menores de 15 aos. Para ello se estudiaron en un perodo de 3 aos (2003-2006) 86 muestras de lquido cefalorraqudeo (LCR) de pacientes includos dentro del Programa de Erradicacin de la Poliomielitis. Se determin la presencia de herpes simplex (HSV), citomegalovirus (CMV), varicela (VZV) y virus Epstein Barr (EBV) mediante tcnicas de Nested-PCR, que amplifican la regin de la DNA polimerasa viral, especfica para cada uno de los agentes virales. Del total de las muestras analizadas, 32 (37%) fueron positivas para todos los virus estudiados: 9 EBV, 9 VZV, 9 CMV y 5 HSV. De los 86 casos estudiados: 54 (63%) eran sndromes de Guilln Barr, en los que se detectaron: 9 VZV, 6 CMV, 6 EBV, 2 HSV y 31 negativos para todos los agentes; 6 (7%) fueron mielitis transversas, en las que se detectaron 3 HSV, 1 EBV y 2 negativas; 6 (7%) botulismos en los que se detect 1 EBV y 1 CMV; 3 (3.5%) fueron encefalitis y en 1 de ellas se detect CMV; 1 (1%) encefalomielitis en la cual se diagnostic EBV; 1 (1%) polineuritis en la que se hall CMV. Los 15 (17.5%) diagnsticos restantes fueron: cerebelitis, cuadriplejia, dermatomiositis, rombencefalitis, hemiparesia, meningitis y polineuropatias; fueron negativos para todos los agentes estudiados. La deteccin de Herpesvirus permiti una mejor aproximacin diagnstica en los casos de PAF ocurridos en nuestro pas durante el perodo estudiado. El hallazgo de VZV, CMV y EBV en el sndrome de Guilln Barr, as como la asociacin de HSV con la aparicin de la mielitis transversa coincide con los datos publicados por otros autores. La presencia de EBV y CMV en el LCR de 2 casos con diagnstico de botulismo podra responder a un hallazgo casual. A pesar de los avances en el diagnstico de las patologas neurolgicas, est descrito que aproximadamente entre el 40 y 60% permanecen sin diagnstico etiolgico.
P461 - 27846 VIRUS ENTRICOS EN AGUAS SUPERFICIALES. BLANCO FERNANDEZ, MD(1); RIVIELLO LOPEZ, G(2); ABELANDO, M(2); ALMADA, P(2); BOSSIO, J(2); CAMPOS, RH(1); CISTERNA, D(3); MBAYED, VA(1)
(1)Ctedra de Virologa, Fac. de Farmacia y Bioqumica, UBA; (2) Prefectura Naval Argentina; (3)Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Malbrn. Los enterovirus (EV), virus de hepatitis A (HAV) y norovirus (NoV) son agentes virales de transmisin fecal-oral que causan enfermedades de importancia mundial en humanos. Son liberados en aguas superficiales como parte de efluentes cloacales crudos o tratados y su presencia no correlaciona satisfactoriamente con los indicadores bacterianos de contaminacin microbiolgica. La cuenca del Ro Matanza-Riachuelo, el Ro de La Plata y el Ro Lujan reciben aportes de efluentes cloacales de plantas de tratamiento y de descargas domiciliarias no reguladas. La baja dosis infecciosa de los virus y la estrecha relacin de los ros con la poblacin riberea representa un riesgo sanitario-ambiental. El objetivo de este trabajo fue evaluar y caracterizar la contaminacin viral en muestras de aguas superficiales del Ro de la Plata, Ro Lujn y la cuenca Matanza-Riachuelo. Se tomaron muestras mensuales (perodo 2005-2006) en 3 puntos del Matanza-Riachuelo. Posteriormente, se recolectaron muestras en 5 puntos situados en el Ro de la Plata y 3 en el Ro Lujn durante el periodo 2008-2010, seleccionando 4 de ellos para una evaluacin longitudinal. Las muestras fueron concentradas por adsorcinelusin a membranas cargadas y ultrafiltracin. Se evalu la presencia de EV, HAV y NoV por RT-PCR. Las muestras positivas fueron secuenciadas y analizadas filogenticamente. La infectividad de EV fue evaluada mediante cultivo in vitro. Como resultado, el 100% de las muestras de la cuenca Matanza-Riachuelo fue positiva para al menos un tipo viral. En cambio, slo el 31% de las muestras del Ro de La Plata y Ro Lujn fueron positivas. En este ltimo caso, todas las muestras positivas provenan de 2 de los 8 puntos evaluados, que corresponden a la descarga cloacal de Berazategui y a la interseccin del Ro Lujn con el canal aliviador del Reconquista, que recibe tambin descargas de efluentes cloacales. La caracterizacin molecular de los EV mostr la presencia de coxsackievirus CA9, CA15, CA21, CB2, CB3 y CB5; echovirus E3, E6, E7, E11, E14, E16, E19, E20, E29, E30; poliovirus Sabin S2 y S3; EV76 y enterovirus animales, bovino y porcino. Todos los aislamientos de HAV secuenciados pertenecieron al genotipo 1A. La presencia de NoV se debi en su totalidad al genogrupo II, genotipos GII.2, GII.4 y GII.6. Se detect la presencia de virus entricos (EV, HAV y NoV) en aguas superficiales del Ro de la Plata, del Lujn-Reconquista y de la cuenca Matanza-Riachuelo. Las muestras positivas corresponden slo a sitios que reciben descargas de efluentes domiciliarios, evidenciando el efecto de la dilucin en ros caudalosos como el de la Plata. Sin embargo, la baja eficiencia del mtodo de concentracin y los inhibidores podran generar falsos negativos. Los tipos virales detectados se correspondieron en general con los reportados de casos clnicos, pero en proporciones variables. La importancia del monitoreo radica no slo en la evaluacin de la calidad microbiolgica por indicadores no bacterianos, sino tambin en la descripcin de los tipos circulantes de virus no diagnostica-
P463 - 27946 EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR DE LA INFECCIN POR HBV Y HDV EN DONANTES DE SANGRE DE LA CIUDAD AUTONOMA DE BUENOS AIRES: DETECCIN DEL GENOTIPO 1 DEL HDV. DELFINO, CECILIA MARIA(1,2); BLEJER, JORGELINA(3); EIRIN, MARIA EMILIA(1); CASTILLO, AMALIA(2); GENTILE, EMILIANO(2); BERINI, CAROLINA(1); SALAMONE, HORACIO(3); MATHET, VERONICA (2); BIGLIONE, MIRNA(1)
(1) CNRS (2) CEHV, (3) FUNDACIN FAVALORO Antecedentes. El virus de la hepatitis B (HBV) tiene un genoma de DNA. Segn la OMS, existen 2.000 millones de personas infectadas con HBV en el mundo y ms de 350 millones con infeccin heptica crnica, est causa cirrosis y hepatocarcinoma celular. Existen en el mundo reas con alta (+ 8%), media (2-8%) y baja (- 2%) endemicidad basada en HBsAg. Argentina se ubica en un rea de baja endemicidad corroborada por cifras del Programa Nacional de Control de Hepatitis Virales(IE2006). Se han
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identificado 9 genotipos (A-H, J) y mltiples sub-genotipos con amplia distribucin mundial. El virus de la hepatitis D (HDV) tiene un genoma de RNA. La infeccin HDV es HBV asociada en eventos de co-infeccin o sobreinfeccin. Se estima que 20 millones de personas infectadas crnicamente por HBV, estn tambin infectados con HDV. Este virus es altamente endmico en varios pases de frica, Cuenca Amaznica y en la regin Mediterrnea. El HDV est clasificado en ocho genotipos (1-8), presentando el genotipo 1 distribucin mundial. Hasta el momento en nuestro pas, slo se ha registrado HDV en poblaciones con conductas de riesgo. Objetivos. Determinar retrospectivamente la prevalencia de infeccin por HBV y HDV e identificar los genotipos en una poblacin de donantes de sangre de la CABA. Materiales y Mtodos. HBV: se estudiaron 42.055 muestras de donantes que concurrieron a la Fundacin Favaloro (2004-2008).HDV: del total, se estudiaron 37 muestras. Para el diagnstico serolgico por infeccin con HBV y HDV se utiliz kits comerciales: HBsAg (Abbott/ Biomerieux), anti-HBcore (Biomerieux/Abbott/Ortho) y anti-HDV (Abbott). 37 muestras (27 anti-HBc+/HBsAg+ y10 HBsAg+) fueron analizadas molecularmente, se les realiz extraccin de DNA por lisis alcalina y extraccin de RNA con Trizol. Las regiones S y Precore/Core DNA-HBV fueron amplificadas por PCR en reacciones independientes. La regin Delta RNA-HDV se realiz mediante RT-nested PCR. Se Secuenciaron las muestras molecularmente positivas y se alinearon usando el programa Clustal W. Se construyeron los rboles filogenticos utilizando Neighbor-Joining .Resultados. La prevalencia para HBsAg fue 0,12%, anti-HBcore fue 1.52% y para ambos marcadores fue 0,08%. Cinco muestras resultaron molecularmente positivas, 4 en ambas regiones y slo una en la regin Precore/core. El anlisis filogentico identific los genotipos/sub-genotipos A2, B2, D3, F1b y F4. Ninguna de las muestras analizadas serolgicamente para HDV resulto reactiva. El anlisis molecular mostr amplificacin en 1de las 37 muestras y el anlisis filogentico la clasific dentro del genotipo 1. La seroprevalencia observada para HBsAg fue menor por registrada por el Programa Nacional de Control de Hepatitis Virales, confirmando a nuestro pas como una regin de baja endemicidad para esta infeccin. Tambin anti-HBc fue menor al mostrado por este registro, esto puede deberse a una mejor seleccin del donante. Nuestro estudio mostr la circulacin nuevos sub-genotipos para HBV y sienta un precedente sobre la circulacin del HDV en donantes de sangre de Argentina.
de 20 l de sacarosa 3M filtrada. Finalmente, a cada ampolla se le adicionaron 20 l de un lisado filtrado del fago CA933P de E. coli enterohemorrgica (ttulo inicial 5.107 UFP/ampolla). Un grupo de ampollas de cada condicin se congel a -20 C, otro a 80 C y un tercero se liofiliz y se almacen a 4 C. Se determin el nmero de partculas infectivas por recuento despus de 1, 60, 90 y 120 das de almacenamiento de los congelados y liofilizados. Todos los liofilizados fueron reconstituidos en 200 l de SM buffer ([100 mM NaCl, 8 mM MgSO4.7H2O, 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), gelatina 2% (p/v)]). Resultados: Se observ una retencin total del ttulo de fagos al cabo de 120 das de almacenamiento a -20 C y a -80 C en todas las condiciones ensayadas. En los liofilizados se observ una cada del ttulo de fagos 24 hs despus del proceso de liofilizacin, siendo de 1,3 logarit-mos para el PSK, 2 logaritmos para el control y 3 logaritmos para sacarosa 0,3M. Durante los 119 das posteriores de almacenamiento a 4 C el ttulo se mantuvo estable en el caso de PSK y sacarosa, mientras que se detect una cada de 2,5 logaritmos para el control en PBS. Los liofilizados en los tres casos fueron fciles de resuspender, pero con el PSK se observa una mayor integridad en la estructura del liofilizado. Conclusiones: La estabilidad de las 3 formulaciones despus de los procesos de congelacin, tanto a -20 C como a -80 C, indicara que la desestabilizacin del fago durante la liofilizacin ocurre en el proceso de deshidratacin. El permeado de suero de quesera fermentado con kfir demostr ser un muy buen estabilizante de los fagos durante el proceso de liofilizacin y en el almacenamiento a 4 C de los liofilizados.
P465 - 28082 VIRUS DISTEMPER CANINO EN URUGUAY: DETECCIN POR REAL-TIME PCR Y CARACTERIZACIN MOLECULAR DE LAS CEPAS CIRCULANTES. SARUTE, LEITES; HERNANDEZ, MARTIN; FRANCIA, LOURDES; PEREZ, RUBEN; PANZERA, YANINA
Facultad de Ciencias - Uruguay Introduccin: El virus distemper canino (CDV) (Paramyxoviridae, Morbillivirus) presenta un genoma de ARN monohebra de polaridad negativa. CDV es el agente etiolgico de la enfermedad denominada distemper canino o moquillo, una de las principales afecciones de cnidos domsticos y silvestres. Aunque la enfermedad se controla mediante vacunas con virus atenuados, recientemente se han observado brotes infecciosos, incluso en canes correctamente vacunados, en varias regiones del mundo. Debido al aparente incremento de casos en Uruguay y a la dificultad de establecer un diagnstico clnico preciso, implementamos por primera vez en el pas un mtodo de diagnstico basado en Real-Time PCR con sondas TaqMan. De forma paralela, hemos comenzado la caracterizacin gentica de las cepas circulantes en Uruguay mediante el anlisis del gen de la hemaglutinina (H) y de la regin F0 del gen de la protena de fusin (F). La elevada variabilidad gentica del gen H y la regin F0 permite determinar el grado de relacin entre los aislamientos de campo y diferenciarlos de las cepas vacunales. Materiales y Mtodos: Muestras de orina, sangre y secreciones culo-nasales de canes con sntomas clnicos de Moquillo y una muestra de una vacuna comercial (cepa Onderstepoort) ampliamente utilizada en el pas, fueron sometidas a extraccin de RNA, retrotranscripcin con cebadores especficos y se analizaron mediante Real-Time PCR con una sonda TaqMan que hibrida en la regin conservada del gen de la nucleocpside (N). La amplificacin de la secuencia completa del gen H y de la regin F0 se realiz mediante la reaccin en cadena de la polimerasa precedida de retrotranscripcin (RT-PCR) con cebadores especficos. Los amplicones fueron clonados y secuenciados en ambas direcciones. Resultados: Mediante Real-Time PCR se detect la presencia del genoma viral en el 70% de las muestras analizadas. Adems, se ha obtenido la secuencia del gen H de cuatro aislamientos de campo y la secuencia correspondiente a F0 de seis aislamientos. Conclusiones: El anlisis de las secuencias del gen H y la regin F0 revel la existencia de una elevada similitud nucleotdica entre ellas. La comparacin con otras cepas de campo circulantes indic que los aislamientos de CDV uruguayos estn relacionados con varian-
P464 - 28040 PRESERVACIN DE FAGOS DE Escherichia coli ENTEROHEMORRGICA POR LIOFILIZACIN. DINI, CECILIA(1,2); DE URRAZA, PATRICIO(1,2)
(1)Ctedra de Microbiologa, Facultad de Cs. Exactas, UNLP, Bs As, Argentina. (2)Centro de investigacin y desarrollo en Criotec-nologa de Alimentos (CIDCA-CONICET) La Plata, Bs As, Argentina Introduccin: La fagoterapia como mtodo de biocontrol de patgenos ha tenido un fuerte desarrollo en occidente en la ltima dcada. La utilizacin masiva de fagos en el tratamiento y prevencin de infecciones bacterianas requiere del desarrollo de tcnicas de conservacin adecuadas. La liofilizacin es un mtodo ampliamente utilizado en la conservacin de fermentos industriales bacterianos. Los productos liofilizados suelen contener lioprotectores (Lp) que disminuyen el dao celular durante el proceso y el almacenamiento posterior. En general se prefieren los Lp complejos, como la leche descremada, porque aportan varias molculas naturales simultneamente, como lactosa y protenas. El objetivo de este trabajo es estudiar la preservacin de fagos de E. coli enterohemorrgica (ECEH) por liofilizacin, y ensayar la efectividad del permeado de suero de quesera fermentado con kfir (PSK) como Lp natural y en el almacenamiento refrigerado de fagos liofilizados. Se compar el efecto crio- y lioprotector del PSK respecto a un sistema control (buffer fosfato, PBS) y con el efecto protector de la sacarosa, que ha sido descripto en bacterias. Materiales y mtodos: En ampollas de vidrio de 2 ml se colocaron 180 l de PSK (permeado de suero fermentado 72hs a 20C con grnulos de kefir al 10% p/v, neutralizado con NaOH, filtrado para eliminar las protenas precipitadas y autoclavado), o 180 l PBS estril pH=7,2 (control), o 160 l de PBS adicionado
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tes aisladas en Sudamrica y Europa. Por otro lado, las cepas uruguayas difieren marcadamente de la cepa vacunal, tanto en la secuencia nucleotdica (7,6% gen H; 17,7% regin F0) como aminoacdica (7,8% gen H; 28% regin F0). El anlisis de un nmero mayor de muestras procedentes de distintas localidades del pas y de muestras provinentes de carnvoros silvestres, ser fundamental para continuar con la caracterizacin gentica de las cepas circulantes en nuestro pas, a fin de comprender la epidemiologa de la enfermedad y la dispersin de CDV en Uruguay.
P466 - 27370 CARACTERIZACION DE FACTORES GENETICOS QUE PODRIAN CONTRIBUIR A LA HIPERVIRULENCIA DE CEPAS DE Escherichia coli O157:H7. GALLI, LUCIA (1); D ASTEK, BEATRIZ (1); CHINEN, ISABEL (1); RIVAS, MARTA (1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas-ANLIS Carlos G. Malbrn La infeccin por Escherichia coli O157:H7, puede causar diarrea (D) y sndrome urmico hemoltico (SUH), enfermedad severa caracterizada por anemia hemoltica microangioptica e insuficiencia renal, que puede resultar en un dao terminal con dilisis crnica o transplante. En diferentes brotes asociados a E. coli O157:H7 se ha observado una diferencia en la frecuencia de casos de SUH producidos, indicando que existen factores de virulencia adicionales a los ya conocidos (toxina Shiga-Stx1 y Stx2, intimina y enterohemolisina), que podran aumentar la patogenicidad de algunas cepas. En el 2006, durante un brote asociado al consumo de espinaca cruda en EE.UU., se registr una alta frecuencia de casos de SUH, lo que llev a la secuenciacin de la cepa involucrada y a la identificacin de factores genticos putativos determinantes de virulencia, incluyendo dos protenas efectoras del sistema de secrecin tipo III (ECSP_2687 y ECSP_1773); dos protenas que podran conferir adaptacin de la bacteria a los vegetales como hospedadores (ECSP_2870 y ECSP_2872); una protena transportadora de hemo extracelular (ECSP_3286); una protena con dominio de interaccin protenaprotena (ECSP_0242), y una ntrico-xido reductasa - NorV (ECSP_3620). En el presente trabajo se estudi la presencia de los siete factores de virulencia putativos en 50 cepas de E. coli O157:H7 aisladas de casos de enfermedad humana (SUH=18, D=18), reservorio bovino (n=10) y alimentos (n=4), por PCR. Todos los aislamientos portaron el gen norV en su tamao completo. La frecuencia de los otros factores de virulencia fue la siguiente: ECSP_0242, 100%; ECSP_2870 y ECSP_2872, 90% cada una; ECSP_3286, 88%; ECSP_2687, 80%; y ECSP_1773, 28%. La portacin de una forma deleteada del gen norV causara una reduccin en la colonizacin o la persistencia intestinal. Una delecin en norV tambin se vera reflejada en una atenuacin de la virulencia dado que el xido ntrico tambin inhibe la expresin de Stx2. Las cepas estudiadas portaron el gen norV completo, lo que facilitara tanto su colonizacin como la produccin de toxina. Las cepas argentinas poseen una mayor similitud con la cepa hipervirulenta causante del brote en EE.UU. que con las cepas EDL933 y Sakai. Esto podra explicar la alta incidencia de SUH en nuestro pas.
ligada al ciclo ltico del fago y su liberacin depende de la lisis de la bacteria, ya que no poseen un mecanismo especfico para su secrecin. La induccin de los fagos VT adems de influir sobre la patogenicidad de VTEC, puede contribuir a la diseminacin de los mismos y al desarrollo de nuevos patotipos VTEC. El objetivo de este trabajo fue evaluar la induccin del ciclo ltico de bacterifagos de distintos aislamientos VTEC a travs de diferentes metodologas. Se estudiaron cepas VTEC autctonas de los serotipos O157:H7 (4 cepas vt2-positivas) y O145:H- (2 cepas vt2positivas y 2 cepas vt1-positivas). Se cultivaron en caldo LB a 37 C con agitacin hasta una DO entre 0,2-0,3. Parte del cultivo se indujo con mitomicina C (0,5g/ml). La lisis de los cultivos se monitore a travs de la densidad ptica (DO) a 600 nm. A las 3 hs post-induccin se tomaron alcuotas de sobrenadantes de los cultivos y se procesaron para la deteccin de fagos por 2 mtodos: titulacin en doble capa de gar y mtodo de la gota. Los ensayos se realizaron por triplicado, utilizando la cepa VTEC EDL933 como control positivo. En todos los cultivos se observ efecto de la mitomicina C, las DO determinadas en presencia de este agente inductor fueron menores que en los cultivos sin inducir. Las curvas de crecimiento/lisis mostraron que todos los aislamientos en presencia de mitomicina C alcanzaron un mximo de crecimiento a las 2 hs. post-induccin, con valores de DO2 a partir del cual se observ la lisis. Los cultivos en ausencia de mitomicina C alcanzaron valores mximos de DO de 4 que se mantuvieron durante el transcurso del experimento. En los ensayos de titulacin se observaron placas de lisis ntidas con los sobrenadantes de la cepa control y slo de uno de los aislamientos O157:H7 y 2 aislamientos O145:H- vt2-positivos, presentado todos un mayor ttulo cuando correspondan a cultivos inducidos. En el mtodo de la gota tambin se observaron placas de lisis con sobrenadantes de estos aislamientos, pero no en el caso de los otros aislamientos O157:H7, en los cuales se observ un efecto ltico que indicara presencia de colicinas. No se observ efecto ltico sobre la cepa hospedadora con sobrenadantes de las 2 cepas O145:H- portadoras de vt1. En todos los aislamientos VTEC se observ lisis por efecto de la induccin con mitomicina C, con curvas de crecimiento/lisis semejantes tanto para aislamientos vt1 comovt2-positivos. Sin embargo, se hallaron diferencias en cuanto a la deteccin de fagos en los respectivos sobrenadantes. El comportamiento diferencial observado entre los distintos aislamientos sugiere que el estudio de la induccin ltica de fagos de VTEC requiere el empleo de varias metodologas.
P468 - 27844 DETECCIN MOLECULAR DE BACTERIAS ANAEROBIAS CELULOLTICAS EN EL COMPARTIMIENTO 1 DE LA LLAMA (Lama glama). CERON CUCCHI, MARIA (1); ROJAS, DORA (1); MARCOPPIDO, GISELA (1); ARAKAKI, CRISTINA (1); CRAVERO, SILVIO (2)
(1) Instituto de Patobiologa, (2) Instituto de Biotecnologa CICVyA, INTA CASTELAR Las bacterias celulolticas juegan un rol protagnico en la degradacin de los carbohidratos de la ingesta. Estos carbohidratos pueden ser no estructurales como azucares sencillos y almidn, o estructurales, que incluyen el material fibroso vegetal como la celulosa y hemicelulosa. Los carbohidratos constituyen el mayor porcentaje del alimento ingerido por las llamas, que estn mejor adaptadas a forrajes de pobre calidad que los bovinos, ovinos y caprinos, criados bajo las mismas condiciones. El estmago de la llama est dividido en 3 compartimientos (C-1, C-2 y C-3), los cuales comprenden el 83, 11 y 6% del volumen total del estmago, siendo el compartimento 1 (C-1) el ms grande de los tres y equivalente al rumen de los verdaderos rumiantes. Las comunidades bacterianas presentes en C-1 conforman un ecosistema natural aun no explorado que incluye una importante diversidad microbiana y gentica que poseen funciones metablicas relevantes para la digestin de las fibras vegetales de la ingesta. Debido a que las bacterias ruminales son anerobias estrictas, la complejidad en el cultivo y aislamiento de estas bacterias dificultan la caracterizacin de las mismas. Este trabajo propone el uso de pruebas moleculares para la deteccin de bacterias ruminales celulolticas anaerobias estrictas de difcil aislamiento. Se utiliz
P467 - 27778 INDUCCIN DEL CICLO LITICO DE BACTERIOFAGOS EN AISLAMIENTOS DE Escherichia coli VEROTOXIGENICO O157:H7 Y O145:H- . GRANOBLES VELANDIA, C (1, 2); KRUGER, A (1, 2); LUCCHESI, PMA (1, 2); PARMA, AE (1, 3)
(1) Lab. de Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV-UNCPBA. Tandil, (2) CONICET, (3) CIC Escherichia coli verotoxignico (VTEC) es un patgeno emergente involucrado en cuadros de intoxicaciones alimentarias, causante de diarrea y severas enfermedades en el hombre. Su principal factor de virulencia son las verotoxinas (VT1 y VT2) que se encuentran codificadas en fagos temperados y son responsables de muchas de las caractersticas patolgicas y de las complicaciones severas de la infeccin por VTEC. La expresin de VT est
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el contenido de C-1 del sistema digestivo de cinco llamas adultas. Las llamas fueron alimentadas con heno de alfalfa ad libitum. La extraccin del ADN total fue realizada mediante el Kit QIAamp DNA Stool y Fast DNA Spin Kit for soil. Se realiz la prueba de reaccin en cadena por la polimerasa (PCR) empleando cebadores especficos para la amplificacin de secuencias del 16S rARN que identifican gnero y especie de bacterias anaerobias reconocidas como celulolticas. Los productos de PCR fueron separados mediante electroforesis en 1,5% de agarosa, el gel fue teido con bromuro de etidio y observado bajo luz ultravioleta. En este ensayo se logr detectar la presencia de Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus albus y Ruminococcus flavefaciens. Ecosistemas complejos como el C-1 de la llama constituyen una fuente importante para el entendimiento de la nutricin de estos animales. Esta es la primera descripcin acerca de la identificacin de bacterias en el rumen de la llama. La suplementacin de esta estrategia con el aislamiento microbiano en condiciones de anoxia y el anlisis de genotecas del 16s rRNA contribuirn a una descripcin abarcativa de la composicin del microbioma del C-1 de la llama.
VIALE, MARIANA (1); ECHEVERRIA, GABRIELA (1); MON, LAURA (1); ROMANO, MARIA I (1); GIOFFRE, ANDREA (1)
(1) Instituto de Biotecnologa, CICVyA-INTA Castelar-Argentina. M. avium subsp. paratuberculosis (MPTB) es un patgeno intestinal que afecta principalmente a rumiantes. Se conoce que para una unin eficiente y para el ingreso de MPTB en clulas epiteliales, es necesaria la expresin de una protena que une fibronectina denominada FAP-P o APA. La invasin ocurre a travs de las clulas M que expresan en su cara luminal el receptor de fibronectina (FN), una integrina 5 alfa-1 beta. Sin embargo, las evidencias sugieren que otras protenas podran ser importantes en la interaccin con las clulas eucariotas. El presente trabajo se propone identificar protenas de la bacteria con capacidad de unin a los componentes de la matriz extracelular (MEC) como la FN, con el fin de definir futuras estrategias que permitan interrumpir la interaccin primaria de la bacteria con el hospedador, as como tambin evaluar la capacidad antignica de las protenas halladas con el fin de emplearlas en mtodos diagnsticos. Se resolvieron por electroforesis bidimensional las protenas de la pared de la micobacteria. Se obtuvieron distintos spots correspondientes a las protenas ms abundantes de la pared celular, identificndose por Maldi-Tof aquellos spots seroreactivos. Se realiz un anlisis en las bases de datos con el fin de identificar posibles homlogos a protenas que unen FN descriptas en otros microorganismos. Se identificaron las siguientes protenas: EF-Tu (Mycoplasma pneumoniae, 65% de identidad); GlnA1 (Mycobacterium tuberculosis, 90%), GAPDH (Candida albicans, 52%). La segunda estrategia consisti en realizar una bsqueda por evaluacin de la interaccin de protenas del sobrenadante de cultivo y del extracto celular con FN. Se realiz una separacin electrofortica de las fracciones por 12% SDS-PAGE y una transferencia a membrana de nitrocelulosa para su evaluacin por farwestern blotting. Para esta tcnica se emple FN y anticuerpos policlonales anti-FN que se generaron en ratn. Para el revelado de la interaccin se emple quimioluminiscencia. Se cortaron del gel rplica las protenas reactivas en cada fraccin y se secuenciaron. De las secuencias parciales a la fecha, se pudieron identificar los siguientes candidatos: una DNA binding protein (homlogo a histona H1), la enzima malato sintasa y DNA K, cuyos homlogos fueron caracterizados en M. tuberculosis por su unin a molculas de la MEC distintas de FN. Tambin se identificaron las siguientes protenas, sin antecedentes previos de unir molculas de la MEC: S-adenosil-L-homocistena hidrolasa, FadE, una superxido dismutasa y la subunidad beta de la FoF1 ATP sintasa. Si bien la caracterizacin funcional est en marcha, las primeras evidencias experimentales empleando protenas recombinantes confirman la interaccin de las protenas identificadas con FN. Se identificaron distintos candidatos potenciales, algunos de estos novedosos, por dos metodologas. Este trabajo ampla la descripcin de molculas que pueden ser importantes en la interaccin con el hospedador y podran mejorar el conocimiento a nivel molecular del mecanismo de invasin de MPTB.
P469 - 27910 SUSCEPTIBILIDAD DE Staphylococcus aureus A MIEL DE ABEJA YATEI (Tetragonisca angustula). GARCIA, MYRIAM (1); NOVAK, PAULA (1); KUMMRITZ, SILVANA (1)
(1) Laboratorio de Microbiologa de Alimentos y Biotecnologa (LAMABI). Facultad de Ciencias Exactas Qumicas y Naturales. Universidad Nacional de Misiones (UNaM) Introduccin. Tetragonisca angustula (subfamilia Meliponinae) es una abeja sin aguijn que produce una miel de caractersticas particulares conocida en Misiones como miel de Yate. Las propiedades medicinales de esta miel estn popularmente difundidas en la sociedad misionera desde la poca de los aborgenes guaranes, pero no cuentan con estudios cientficos que avalen dicha creencia. La aparicin de cepas bacterianas resistentes a antibiticos, origin el inters por el posible uso de la miel como terapia alternativa, esto ha llevado a un gran nmero de investigaciones a nivel mundial a probar la efectividad de la miel en el tratamiento de infecciones. Se han notificado cepas bacterianas resistentes a antibiticos, que presentan sensibilidad a la miel y adems ha sido probada en el tratamiento de heridas que no responden a los antibiticos convencionales, con buenos resultados. En trabajos previos se comprob la capacidad de la miel de Yate para inhibir el desarrollo de microorganismos patgenos del gnero Staphylococcus. Objetivo. En este estudio se evalu la susceptibilidad de bacterias pertenecientes al gnero Staphylococcus (S.) frente a miel de abeja Yate producida en la provincia de Misiones. Materiales y Mtodos. Se evaluaron la concentracin inhibitoria mnima (CIM), la concentracin bactericida mnima (CBM) y el coeficiente fenlico de la miel en concentraciones entre 5 y 80% (v/v), sobre S. aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 6538 y a S. aureus cepa salvaje meticilino resistente. Se sigui metodologa de estndares internacionales, segn adaptaciones del Clinical And Laboratory Standards Institute (CLSI) y de la Comisin Internacional de Especificaciones Microbiolgicas de los Alimentos (ICMSF). La CIM se determin por la prueba de dilucin en serie en caldo Mueller-Hinton y la CBM sobre agar tripticasa soya (TSA), agar infusin cerebro corazn (BHIA) y agar Mueller-Hinton. Resultados. Se determin un 100% de efecto antimicrobiano de las mieles ensayadas correspondiendo en promedio a CIM del 20% (v/v) y CBM del 50% (v/v), no se observaron diferencias significativas entre los distintos microorganismos evaluados. No se pudo determinar el coeficiente fenlico ya que no se detect efecto antimicrobiano en las condiciones de ensayo para determinar dicho coeficiente. La miel de abeja Yatei presenta actividad antibacteriana a una concentracin de 50% (v/v) sobre las cepas ensayadas pertenecientes a la especie Staphylococcus aureus.
P471 - 27954 CURVAS DE CRECIMIENTO/LISIS DE AISLAMIENTOS DE Escherichia coli VEROTOXIGNICO VT2G-POSITIVOS Y SU RELACIN CON CITOTOXICIDAD. GRANOBLES VELANDIA, C (1, 2); LUCAS, N (1); KRUGER, A (1, 2); LUCCHESI, P (1, 2); PARMA, A (1, 3)
(1) Lab. de Inmunoqumica y Biotecnologa. FCV-UNCPBA. Tandil, (2) CONICET, (3) CIC Introduccin. E. coli verotoxignico (VTEC) puede causar severas enfermedades en humanos como colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico. El bovino es considerado su principal reservorio. El factor de virulencia ms importante de este patgeno es la produccin de verotoxinas (VTs), las cuales estn codificadas por genes vt que se encuentran en profagos lamboides insertos en el cromosoma bacteriano y su liberacin depende de la lisis bacteriana. Las VTs estn clasificadas en dos tipos (VT1, VT2). El grupo VT2 presenta diferentes variantes, entre ellas la
P470 - 27912 INTERACCIN DE Mycobacterium avium SUBSP. paratuberculosis CON EL HOSPEDADOR: IDENTIFICACIN DE PROTENAS DE LA BACTERIA QUE UNEN FIBRONECTINA.
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VT2g. Esta variante fue descripta por primera vez en una cepa VTEC aislada de materia fecal de bovino. Los escasos estudios que se han realizado hasta el momento determinaron que vt2g se encuentra en baja prevalencia en ganado bovino y sugieren que podra ser una variante emergente. El objetivo de este trabajo fue evaluar la induccin del ciclo ltico de bacterifagos de aislamientos VTEC vt2g-positivos autctonos, de origen bovino, a travs de la medicin de la densidad ptica de cultivos, y su relacin con la citotoxicidad. Materiales y Mtodos. Se analizaron 4 aislamientos VTEC portadores de vt2g (como nica variante de verotoxina) pertenecientes a los serotipos O2:H25, O15:H21 y O175:H8 (2 aislamientos). Se construyeron curvas de crecimiento/lisis con los datos de densidad ptica a 600 nm de cultivos incubados a 37 C y 180 rpm, con y sin induccin con mitomicina C (0,5 ug/ml). Adems se construyeron curvas con cultivos de las cepas DH5 (como control negativo de lisis por fagos) y EDL933 (como control positivo de lisis por fagos) incubados en las mismas condiciones. Se cuantific la produccin de verotoxinas mediante ELISA (Ridascreen). Los resultados se relacionaron con datos previos de citotoxicidad en clulas Vero. Resultados. Las curvas de crecimiento en ausencia de induccin mostraron un patrn similar en los aislamientos. Sin embargo, se observaron 2 patrones de curvas de crecimiento/lisis entre los aislamientos vt2g -positivos post-induccin: A) present un pico de crecimiento muy notorio a las 2 hs. y luego una disminucin muy marcada de la densidad (aislamientos correspondientes a los serotipos O2:H25 y O15:H21), y B) sin pico de crecimiento marcado y menor disminucin de la densidad. La cepa EDL933 inducida present un pico de crecimiento no tan marcado, pero s una notoria disminucin de la densidad, mientras que la DH5 inducida mostr un patrn similar al del cultivo sin inducir pero con menores valores de DO. La cuantificacin de verotoxina mediante ELISA mostr mayor ttulo con la cepa del serotipo O2:H25 correspondiente al patrn A que con la correspondiente al perfil B (serotipo O175:H8), datos que correlacionan con los estudios previos de citotoxicidad. Entre los aislamientos vt2g -positivos, la lisis marcada en los cultivos inducidos se correlacion con una mayor citotoxicidad y una mayor concentracin de verotoxina. Las curvas correspondientes al perfil B reflejaran una induccin baja o nula de los fagos portadores de vt2g en estos aislamientos.
PRESENTACIONES DE PSTERES -SALON B13:00 - 20/10/2010 (MIE) - DE POSTERS B

P473 - 27329 GENES PUTATIVOS DE VIRULENCIA EN Helicobacter spp. DE MAMFEROS MARINOS. RODRIGUEZ AREVALO, KAREN (1, 2); MATTEO, MARIO (3); MANTERO, PAULA (1); LOUREIRO, JULIO (4); BOCCIO, JOSE (1); ZUBILLAGA, MARCELA (1); CREMASCHI, GRACIELA (1); CATALANO, MARIANA (3); CABALLERO GAITAN, SUSANA (2); GOLDMAN, CINTHIA G (1)
(1) Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires, Argentina, (2) Universidad de los Andes, Bogot, Colombia, (3) Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Argentina, (4) Fundacin Mundo Marino, San Clemente del Tuy, Argentina. Introduccin: Nuestro grupo ha reportado previamente la presencia de H. cetorum y otras especies del gnero Helicobacter en placa dental y fluido gstrico de cetceos y pinnpedos que habitan un medio ambiente controlado en Argentina. Los hallazgos de dichas bacterias en mamferos marinos generan la hiptesis de su posible asociacin con el desarrollo de patologa gstrica. Objetivo: El objetivo de nuestro trabajo consisti en investigar si las bacterias del gnero Helicobacter presentes en mamferos marinos poseen genes putativos de virulencia descriptos en H. pylori. Materiales y Mtodos: Se incluyeron en este estudio muestras de tejido gstrico, fluido gstrico y placa dental de cetceos y pinnpedos que fueron positivas para Helicobacter spp. mediante secuenciacin del ADNr 16S y/o cultivo. Asimismo se incluy el ADN de H. cetorum MIT99-5656. Se realiz la amplificacin de fragmentos de los genes putativos de virulencia cagA y cagG pertenecientes a la isla de patogenicidad cagPAI mediante Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) y anlisis bioinformtico de secuencias. Resultados: La presencia de cagA y cagG fue evidenciada en 17/24 y 7/24 muestras respectivamente, incluyendo la cepa H. cetorum MIT99-5656 que present amplicones para ambos genes. Los porcentajes de identidad entre las secuencias de cagA de H. cetorum y Helicobacter spp. de cetceos y pinnpedos vari entre 93-99%, un rango de variabilidad similar al reportado entre aislamientos de H. pylori. Asimismo, se encontr un 98% de homologa entre fragmentos de cagA de H. cetorum MIT99-5656 y H. pylori J99. Las especies del gnero Helicobacter que infectan mamferos marinos pueden portar genes putativos de virulencia descriptos en H. pylori. La identidad entre las secuencias sugiere que podran derivar de un ancestro comn y habran sido adquiridas por transferencia gentica horizontal.
P472 - 28163 EVALUATION OF A DOT-BLOT ASSAY TO IDENTIFY SEROLOGIC RESPONSES OF CATTLE INFECTED WITH Leptospira spp. SINNOTT, F (1); LEAL, F (1); MESQUITA, JP (1); HARTWIG, D (1); BROD, C (1); SEIXAS, F (1); BRIHUEGA, B (2); DELLAGOSTIN, O (1); SAMARTINO, L (2); HARTLEBEN, CP (1)
(1) Universidade Federal de Pelotas, (2) Instituto de PatobiologiaInstituto Nacional de Tecnologia Agropecuria. Introduction: Pathogenic serovars of Leptospira have a wide antigenic diversity attributed mainly to the lipopolysacharide (LPS) present in the outer membrane. Microscopic agglutination test (MAT) is the standard leptospirosis diagnostic test and is base on Leptospira LPS detection by antibodies blood serum from infected hosts. However, MAT is a laborious technique and time consuming. In contrast to Leptospira LPS, antigens conserved among pathogenic serovars are mainly represented by outer membrane proteins. Between that, the major and highly conserved outer membrane lipoprotein (LipL32) was recently demonstrated as promising antigen to leptospirosis diagnosis. Objectives: Evaluate the use of LipL32 in its recombinant form (rLipL32) in a dot-blot assay to identify serologic responses of cattle naturally infected with Leptospira spp. Material and Methods: Sixty bovine serum samples, thirty MAT positive and thirty MAT negative, both diluted 1:50 were carried on to reacted with rLipL32 immobilized in an nitrocellulose membrane, followed by anti bovine IgG peroxidase conjugate and substrate addition. Results and conclusions: From 30 negative serum samples 1 was positive in dot blot using rLipL32 and from thirty positive serum, 28 identify the immobilized antigen in a dilution ranging from 1:50 to 1:100. We conclude that dot blot rLipL32 could be useful as an alternative screening test before carry on MAT and rapidly identify negative samples.
P474 - 27443 DETECCIN DE Salmonella POR TCNICAS DE AISLAMIENTO Y PCR EN POOL DE CLARA Y YEMA CONTAMINADAS ARTIFICIALMENTE. SORIA, MARIO ALBERTO (1); SORIA, MARIA CECILIA (1, 2); BUENO, DANTE JAVIER (1)
(1) Laboratorio de Sanidad Aviar, INTA EEA Concepcin del Uruguay, Casilla de Correo N 6, 3260, Concepcin del Uruguay, Entre Ros, Argentina, (2) CONICET Introduccin: Los huevos son una importante fuente nutritiva para toda la poblacin y un nutriente esencial. Entre las desventajas que presenta es que pueden ser infectados por microorganismos, principalmente los del gnero Salmonella, de gran impacto en la salud pblica. Los mtodos ms usados para su deteccin son tcnicas de cultivos microbiolgicos, aunque tambin se han desarrollado mtodos rpidos basados en la deteccin molecular de dicho microorganismo. En este trabajo se evaluaron dos tcnicas de aislamiento bacteriolgico (BAM con modificaciones e ISO 6579) y PCR para la deteccin de Salmonella spp. en pooles de clara y yema (CY) contaminados artificialmente. Materiales y Metodos: Se utilizaron 8 cepas de Salmonella: S. Enteritidis ATCC 13076 (SE), S. Typhimurium ATCC 13311 (ST), S. Pullorum ATCC 13036 (SP); S. Pullorum INTA Balcarce 90/142 (SP 90/142.), S. Gallinarun INTA Balcarce 03/121 (SG 03/121), S. Infantis CUB 05/08 (SI), S. Hadar CUB 13/08 (SH) y S.
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Gallinarum aislada de pool de CY de huevo (SG). Se tom 25 ml de pool CY libre de Salmonella spp. Se realizaron diluciones seriadas de las cepas en agua peptona 0,1%, y se sembraron 1 ml en CY, desde 5 a 1 x 106 UFC/ml. Luego se realiz un preenriquecimiento no selectivo seguido por enriquecimiento selectivo y luego de 24 y 120 hs de incubacin a 37 C, fueron sembrados en estras por agotamiento en agar Hektoen y agar Xilosa Lisina Desoxicolato. Las colonias compatibles con Salmonella spp. fueron confirmadas por pruebas bioqumicas y serolgicas. La tcnica de PCR se bas en la deteccin del gen invA; el templado de ADN se obtuvo a partir de 1 ml del preenriquecimiento no selectivo desde cada tcnica bacteriolgica (BAM e ISO). Se consider como lmite de deteccin (LD) de la tcnica la menor cantidad de UFC/25 ml recuperada en la muestra de CY. Se determin sensibilidad (S), especificidad (E) y precisin (P) de las tcnicas empleadas. Resultados: El LD en las tcnicas BAM e ISO estuvo entre 5 y 54 UFC/25ml para todas las cepas ensayadas, mientras que la S, E, y P fue del 100% para ambas tcnicas. En la tcnica de PCR, el LD para SE y SH fue de 54 UFC/25ml y de 6 UFC/25ml respectivamente, tanto para BAM e ISO. Para SG 03/ 121, el LD fue de 1 x 103 UFC/25ml para la tcnica BAM y de 10 UFC/25ml para la tcnica de ISO. Las cepas ST, SG, SP 90/142, SP ATCC 13036 y SI no pudieron detectarse mediante PCR. La S, E, y P fue del 100% para SE tanto para BAM como ISO. Para SH, la S, E, y P fue del 100% para BAM y del 72%, 100% y 75% para ISO, respectivamente. La S, E, y P para SG 03/121 fue de 72%, 100%, 75% para BAM, respectivamente y 100% todos los parmetros cuando se utiliz la tcnica ISO. Con estos resultados podemos concluir que las dos tcnicas empleadas para el aislamiento bacteriolgico son adecuadas para detectar Salmonella spp. Sin embargo para PCR, la presencia de resultados falsos negativos para diversas serovariedades puede subestimar el grado de contaminacin de dicha matriz y bajo las condiciones de este estudio no seran indicadas como prueba de deteccin rpida de Salmonella en clara y yema.
y sin el agregado de Tergitol 4 (XLDT y XLD, respectivamente), y agar EF-18. Para la tcnica TT, se sembraron en los medios selectivos-diferenciales luego de 1 y 5 das de incubacin a 37 C. Se tomaron colonias compatibles con Salmonella y se realizaron pruebas bioqumicas para su confirmacin. La deteccin por PCR, utilizando el gen InvA (PCR), se realiz a partir de las muestras preenriquecidas en APT. Para cada tcnica, se calcul la sensibilidad (SE), especificidad (ESP) y precisin (PR) y el lmite de deteccin. Para el anlisis estadstico se realiz una prueba de hiptesis para diferencia de proporciones asumiendo que todos los valores son igualmente probables. Resultados. Los valores de SE, ESP y PR para las cuatro cepas fueron 1. Las tres tcnicas fueron capaces de detectar las cepas inoculadas desde 5-7 UFC/ 25 ml de agua. No se encontraron diferencias estadsticas para XLD, XLDT, y EF18, siendo los tres medios igualmente eficaces en la recuperacin de las cepas en todos los niveles de inoculacin ensayados.. Las tcnicas de aislamiento bacteriolgico y de PCR utilizadas son adecuadas para la deteccin de Salmonella spp. en muestras de agua. Los medios XLD, XLDT, y EF18 son igualmente recomendables para este tipo de muestra.
P476 - 27485 ESTUDIO MOLECULAR DE AISLAMIENTOS CLNICOS DE Staphylococcus haemolyticus PROVENIENTES DE DISTINTOS CENTROS HOSPITALARIOS DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. CORREA, JORGE E (1); DELPINO, M VICTORIA (1); TINTILAY, ALEJANDRA S (1); PREDARI, SILVIA C (INST 2); DE PAULIS, ADRIANA (2); MORTARINI, MIRIAM (3); ERDOIZ, JUAN (3); ROLLET, RAQUEL (3); SORDELLI, DANIEL O (1); JERIC, PAOLA E (1)
(1) Facultad de Medicina UBA, (2) Instituto LANARI UBA, (3) Bacteriologa Hospital Muiz Introduccin: Los estafilococos coagulasa negativos (ECN) son microorganismos reconocidos en el medio hospitalario y S. haemolyticus es causante del 10% de infecciones provocadas por ECN lo cual aumentara su implicancia en ciertas infecciones intrahospitalarias. Para combatir estas infecciones se ha desarrollado el uso de biocidas. Dentro de los mecanismos de resistencia de S. haemolyticus se destaca la bomba de eflujo, que tiene como funcin liberar al medio extracelular el compuesto txico. Materiales y Mtodos: En el siguiente trabajo se recolectaron 30 aislamientos clnicos de infecciones producidas por S. haemolyticus de distintos centros nosocomiales de la Ciudad de Buenos Aires. Se analiz el perfil de resistencia a diferentes biocidas como SDS, PHBM, cloruro de benzalconio y deoxicolato de sodio mediante la determinacin de la CIM en presencia y ausencia de un inhibidor de bomba CCCP. Luego se realiz la bsqueda, mediante PCR, de los genes que confieren resistencia a tales compuestos y se analiz la diversidad clonal de los aislamientos mediante electroforesis de campo pulsado. Resultados: De los 30 aislamientos clnicos 21 (70%) presentaron eflujo a SDS, mientras que 22 (73%) a Deoxicolato de sodio, siendo destacable las altas tasas de CIMs y de menor susceptibilidad a tales compuestos. 17 (57%) presentaron eflujo a Cloruro de Benzalconio y 8 (27%) a PHBM. Se observ la presencia de qacAB y smr en 87% de las cepas estudiadas y de qacG en 83% de las mismas, en cambio qacH y qacJ fue detectado en slo el 3% de las mismas. Conclusiones: Se observaron en todos los aislamientos, valores de CIM elevados para SDS y deoxicolato de sodio lo cual podra estar relacionado con un uso ms indiscriminado de estos compuestos. Se observ que qacG esta ampliamente distribuido en los aislamientos de S. haemolyticus junto con qacAB y smr lo cual estara indicando la presencia de un elemento extracromosomal plsmido o transposn que explicara dicha diseminacin. Se observ la presencia de 14 clones por lo que la diseminacin del sistema de expulsin es policlonal.
P475 - 27466 COMPARACIN DE DOS TCNICAS BACTERIOLGICAS Y PCR PARA LA DETECCIN DE Salmonella spp. EN AGUA DE BEBIDA PARA AVES DE CORRAL. SORIA, MARIA CECILIA (1, 2); SORIA, MARIO ALBERTO (1); BUENO, DANTE JAVIER (1)
(1) Laboratorio de Sanidad Aviar, EEA INTA Concepcin del Uruguay, Casilla de correo N 6, 3260, Concepcin del Uruguay, Entre Ros, (2) Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET) Introduccin. La salmonelosis en granjas de aves de produccin constituye un problema econmico por las prdidas sustanciales que produce por mortalidad directa o merma en peso y/o produccin de huevo. Si bien una de las causas ms comunes del ingreso de salmonelas a la granja se debe a la entrada de nuevos animales, el agua de bebida tambin es una fuente de contaminacin. La presencia de salmonelas en el agua es muy variable, existiendo limitaciones y variaciones tanto en la sensibilidad como en la selectividad de los procedimientos aceptados para el aislamiento de Salmonella y la deteccin de los serotipos conocidos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad discriminatoria y lmite de deteccin de dos tcnicas bacte-riolgicas y una utilizando PCR en muestras de agua para uso avcola, artificialmente contaminadas con Salmonella. Materiales y Mtodos. Se emplearon cuatro cepas de Salmonella: S. Enteritidis ATCC 13076, S. Typhimurium ATCC 13311, S. Kentuky CUB 19/08 y S. Infantis CUB 08/08. Se inocularon 1 ml de las diluciones correspondientes a concentraciones de 6600 a 5 UFC/ml de cada cepa en 25 ml de agua, con una concentracin de cloro libre < 0,1 mg/l y cloro total de 0,1 mg/l. Cada muestra fue ensayada por triplicado. El preenriquecimiento se realiz en 225 ml de agua de peptona (tamponada) a doble concentracin (APT); seguido de un enriquecimiento en caldo tetrationato, adicionado con novobiocina, verde brillante, y solucin de iodo-ioduro de potasio (Tcnica TT) o medio Rappaport Vassiliadis Semislido modificado (Tcnica MRSV). Posteriormente, para ambas tcnicas se utilizaron tres medios agarizados selectivos-diferenciales: Xilosa Lisina Desoxicolato con
P477 - 27506 EMERGENCIA DE CEPAS DE Enterococcus spp. CON FACTORES DE VIRULENCIA Y RESISTENCIA A GLUCOPPTIDOS AISLADAS DE ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL. SCHELL, C (1); DELPECH, G (2); POURCEL, N (2); BERNSTEIN, J (1); CECI, M (3); GRENOVERO, S (4); DE LUCA, M (1); BASUALDO, J (1); SPARO, M (3)
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(1) FCM-UNLP, (2) UNICEN, (3) HOSP RS), (4) FB-UNER Introduccin. El gnero Enterococcus tiene amplia distribucin en la naturaleza, se aisla de suelos, agua, vegetales y alimentos de origen animal. Es considerado patgeno humano oportunista y se han documentado infecciones invasivas por cepas con factores de virulencia (FV) y resistencia a varios antimicrobianos de utilizacin habitual como glucopptidos y -lactmicos. La documentacin sobre cepas con FV y resistencia antimicrobiana asociada aisladas de alimentos de origen animal, es escasa en Argentina. Objetivo. Investigar la emergencia de cepas de Ente-rococcus spp. con expresin de FV y resistencia a glucopptidos aisladas de alimentos de origen animal. Material y Mtodos. Estudio de diseo prospectivo transversal realizado durante el periodo 2008-2009. Las muestras de alimentos de origen animal fueron tomadas de establecimientos artesanales y de carniceras, aleatoriamente, durante 3 semanas alternas, de diferentes zonas suburbanas de la ciudad de Tandil. Las muestras correspondieron a salamines (n=36), quesos (n=15), leche de cabra (n=30) y carne picada (n=21). Se colocaron 10 g de cada muestra en bolsa estril con 90 ml de agua peptonada; se trituraron y homo-geneizaron. Las muestras de leche se recolectaron directamente en frascos estriles. Cada muestra fue sembrada en agar bilis esculina-azida. La identificacin de cepas se realiz por pruebas bioqumicas convencionales y anlisis de protenas totales (elec-troforesis vertical con dodecil sulfato en gel de poliacrilamida). La Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) a vancomicina (VAN), teicoplanina (TEI) y penicilina (PEN) se realiz mediante el mtodo de dilucin en agar (CLSI, 2009). Los FV investigados fueron: hemolisina (agar-sangre humana 5%), proteinasa (hidrlisis de leche desnatada, 10%) y sustancia de agregacin (SA), mediante formacin de agregados celulares. Resultados. En las muestras de salamn se aislaron y tipificaron 7 cepas de E. faecalis y 2 de E. faecium; en quesos 6 cepas de E. faecalis, 2 de E. faecium y 1 de E. gallinarum; en leche de cabra 4 cepas de E. faecalis, 2 de E. raffinosus y 1 de E. faecium y en carne picada 11 cepas de E. faecalis. En los estudios de CIMs para VAN ( 32-4 g/ml), 96,4% de las cepas de E. faecalis fueron sensibles (S), en E. faecium 80% resultaron con resistencia (R) y en E. raffinosus y E. gallinarum una cepa de cada especie fue S. Para TEI (32-8 g/ml) nicamente en E. faecium se observ R (60%) acompaada por R a PEN (16-8 g/ml). Las cepas con R a glucopptidos presentaron fenotipos Van A y Van B. En 7/36 cepas aisladas se detect hemolisina, en 15/36 gelatinasa y en 13/ 36 SA. Conclusiones. Esta investigacin confirma que los alimentos de origen animal son reservorios y vehculos de cepas emergentes de Enterococcus spp. con expresin de FV y resistencia a glucopptidos.
en la Seccin Bacteriologa del Hospital de Clnicas durante 20042010. Como mtodo de screening se emple una modificacin del ensayo CAS en placa, utilizando como medio de cultivo StainerScholte sin suplemento, con el agregado de agar-agar 1,5% (p/ v) y Casamino cidos 0,1% (p/v) (SSAmod), y se evalu la influencia del agregado de 2,2'-dipiridilo (Dip). Para determinar la naturaleza qumica de los siderforos se emplearon las tcnicas de Csky y Arnow que detectan compuestos tipo hidroxamato y catecol respectivamente. Para ello se utilizaron sobrenadantes de cultivo, en medio SS-mod con el agregado de Dip 100 M o de FeCl3 100 M. Bordetella bronchiseptica CCUG7865 y Acinetobacter baumannii ATCC19606 se emplearon como controles de cepas productoras de siderforos tipo hidroxamato y catecol respectivamente. La modificacin de la tcnica de CAS agar puso en evidencia la produccin de siderforos de Sm, visualizada como un halo naranja alrededor de las colonias. En ausencia de Dip slo se detectaron halos grandes en los controles y halos muy pequeos alrededor de 4 aislamientos de Sm. El agregado de Dip 100 M al medio SSAmod permiti la deteccin de siderforos en los 31 aislamientos, que se dividieron segn el dimetro de los halos en 3 grupos: productores de halos grandes (9-14 mm), medianos (6-9 mm) y pequeos (4-6 mm). El ensayo de Arnow revel la produccin de siderforos de tipo catecol en todos los sobrenadantes de cultivo en presencia de Dip, dicha produccin fue inhibida en presencia de hierro. Ninguno de los aislamientos estudiados produjo siderforos de tipo hidroxamato. La tcnica de CAS agar modificada es til para la deteccin rpida de siderforos de Sm. La necesidad de agregar Dip al medio para alcanzar condiciones de limitacin de hierro sugiere una diferencia en los requerimientos fisiolgicos de Sm respecto a los de las cepas control. Los resultados obtenidos indican que Sm produce siderforos de tipo catecol pero no hidroxamatos.
P479 - 27514 ESTUDIO EN UN MODELO IN VITRO DEL ROL DE Chlamydophila pneumoniae EN LA ETIOPATOGENIA DE LA ENFERMEDAD ATEROSCLERTICA. CUFFINI, CECILIA (1, 2); KIGUEN, XIMENA (1); FRUTOS, MARA CELIA (1); VENEZUELA, FERNANDO (1)
(1) INVIV, (2) FCM UNC La aterosclerosis (ATE) es una enfermedad considerada cronicodegenerativa, silenciosa, generalmente ignorada y desconocida. La posibilidad de que ciertos microorganismos desempeen un papel clave en la fisiopatologa de la ATE dependera de su capacidad de producir un proceso inflamatorio, de infectar las clulas del endotelio vascular (por ej: macrfago), y perpetuarse hasta producir la lesin. Demostramos la existencia de la Chlamydophila pneumoniae (C.pn) viable, su ADN y antgenos chlamydiales en el seno de la lesin ateromatosa de muestras obtenidas por endarterectomas (Cuffini et al EIMC 2006). Cabe destacar que los macrfagos son los principales generadores de xido nitrico (ON) y su liberacin aumenta para proteger a las clulas de la infeccin y de la apoptosis. El objetivo de este trabajo fue evaluar la participacin de la C.pn y sus componentes en el proceso inflamatorio y en la formacin de las clulas espumosas en un modelo in vitro. Se utilizaron clulas macrofgicas RAW 264.7 en medio de cultivo sin rojo fenol. Se utiliz la cepa Twar de C.pn, amplificada en clulas LLCMK2. Se obtuvieron los antgenos de C.pn: MOMP, HSP y LPS, por gradientes de Tryosol. A partir de sueros hiperlipmicos se obtuvo una suspensin de colesterol por centrifugacin y fueron valoradas por el mtodo enzimtico (Wiener). La determinacin del porcentaje de clulas RAW 264.7 que fagocitaban colesterol (clulas espumosas) se realiz por la coloracin de Putts & Chiffelle. Las concentraciones de ON liberado fueron determinadas por el mtodo de Griess. Se determin la concentracin de colesterol consumido por las clulas RAW 264.7, el porcentaje de clulas espumosas formadas y la produccin de xido ntrico en los siguientes modelos in Vitro de clulas RAW 264.7: a) sin infectar; b) con C.pn; c) con LPS; d) con MOMP y e) con HSP. A cada modelo se lo enfrent con las mismas concentraciones de colesterol. C.pn infect las clulas macrofgicas RAW 264.7, confirmado por Inmunofluorescencia con Acs especficos. Los macrfagos infectados con C.pn
P478 - 27511 ESTUDIO DE LA PRODUCCION DE SIDEROFOROS EN AISLAMIENTOS CLINICOS DE Stenotrophomonas maltophilia. GARCIA, CARLOS (1); PASSERINI DE ROSSI, BEATRIZ (1); FELDMAN, LAUREANA (1); SALIBA PINEDA, MARIA (1); VAY, CARLOS (2); FRANCO, MIRTA (1)
(1) Ctedra de Microbiologa, Facultad de Farmacia y Bioqumica, UBA, (2) Laboratorio de Bacteriologa, Dpto. Bioqumica Clnica, FFyB, Hospital de Clnicas UBA Stenotrophomonas maltophilia (Sm) es un patgeno nosocomial emergente, multiresistente, que causa infecciones en pacientes inmunocomprometidos o sometidos al uso de productos mdicos. A pesar de la variedad de infecciones producidas por Sm poco se sabe acerca de sus factores de virulencia, incluido la produccin de siderforos. Los siderforos son un importante factor de virulencia en muchos patgenos ya que permiten la persistencia del microorganismo en el husped donde la biodisponibilidad de hierro es limitada. Algunos autores no detectaron siderforos por el ensayo convencional cromoazurol S (CAS) en Sm mientras que en un trabajo se describieron halos muy pequeos (3-5 mm), adems, se ha sugerido la presencia de enterobactina. Nuestros objetivos fueron la deteccin de siderforos en aislamientos clnicos de Sm y la determinacin de su naturaleza qumica. Se estudiaron 31 aislamientos de Sm provenientes de infecciones asociados al uso de productos mdicos, obtenidos
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captaban ms lpidos y se transformaban en un mayor porcentaje a clulas espumosas; que aquellos macrfagos no infectados. El LPS aument la formacin de clulas espumosas, mientras que los antgenos MOMP y HSP fueron poderosos inductores de la produccin del ON, en comparacin con las clulas infectadas con C.pn. Teniendo en cuenta que en la bacteria viable, se encuentran los 3 antgenos, creemos que cada uno estara desempeando su funcin pero en forma inhibida. Este estudio despierta un inters en ampliar las investigaciones del potencial teraputico que representa la manipulacin del ON en la ATE.
(1) Instituto de Biotecnologa, INTA Castelar, Argentina, (2) Instituto de Patobiologa, INTA Castelar, Argentina Introduccin: La Leptospirosis es una enfermedad infecciosa emergente considerada la zoonosis de mayor distribucin mundial y fue descripta como un serio problema en salud pblica y animal. Los brotes de Leptospirosis en Argentina estn asociados a cambios climticos y a inundaciones. A pesar de ello no existen en nuestro pas programas de control o erradicacin adecuados debido al desconocimiento de la situacin epidemiolgica real y actual de la enfermedad, en particular en Leptospirosis bovina donde la enfermedad persiste de forma endmica. Objetivo: Tipificacin de Leptospira sp. mediante la estrategia Multilocus Sequence Typing (MLST). Esta tecnologa permite la comparacin de perfiles allicos (sequence type o ST) obtenidos a partir de aislamientos locales con la base de datos global: http:// leptospira.mlst.net, de acceso libre. Materiales y Mtodos: Los aislamientos analizados fueron obtenidos a partir de diferentes hospedadores: humanos, ganado, perros y roedores, en nuestro pas entre 1960 y 2009. Dichas cepas se caracterizaron serolgicamente por el test de microaglutinacin (MAT), como pertenecientes a los serovares Pomona e Icterohaemorragiae. Resultados: Entre las diferentes cepas, los perfiles allicos encontrados fueron el ST37 y el ST17, siendo el ST37 perteneciente a muestras provenientes de ganado de la mayor regin ganadera en Argentina. Dicho perfil tambin fue encontrado en Tailandia, Jamaica, Holanda, Australia y Brasil, donde el aislamiento australiano tambin fue descripto como L. interrogans serovar Pomona. El segundo perfil encontrado, el ST17 corresponde a aislamientos caracterizados como pertenecientes a L. interrogans serovar Icterohaemorragiae. Conclusiones: Si bien en este trabajo no se analizaron un alto nmero de cepas, se pudo observar que los ST obtenidos para los dos serovares estudiados correlacionaron con lo determinado mediante la tcnica de serotipificacin. Por otro lado, esta estrategia permiti a su vez la descripcin de nuevas variantes allicas de los genes fadD y pfkB correspondientes a muestras de L. interrogans serovar Pomona, que no se encontraban presentes en la base de datos internacional, lo que indica que se trata de un nuevo perfil allico dentro de este serovar. Asimismo, el ST 37 est presente en nuestro pas desde 1960 indicando que este perfil allico estara representando aislamientos con una alta capacidad de adaptabilidad a condiciones medio-ambientales variables as como de predominar sobre otras variantes genticas. Los resultados demuestran la capacidad de la metodologa de MLST para discriminar entre diferentes serovares. Por otro lado, los resultados obtenidos demuestran la potencialidad de esta estrategia para establecer conjuntos de perfiles allicos para cada serovar estudiado sumando as un nivel superior de discriminacin entre aislamientos circulantes en la Argentina.
P480 - 27539 EVALUACION DEL ROL DE SISTEMAS ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS Y NO ENZIMATICOS EN LA RESISTENCIA DE Proteus mirabilis A CIPROFLOXACINA. AIASSA, V (1); BARNES, A (1); SMANIA, A (2); ALBESA, I (1)
(1) Dpto de Farmacia, Fac de Cs Qcas, UNC. Crdoba, Argentina, (2) Centro de Investigaciones en Qca Biolgica de Cba, CONICET, Dpto de Qca Biolgica, Fac de Cs Qcas, UNC, Crdoba, Argentina Introduccin. Los mecanismos primarios de resistencia a quinolonas son las mutaciones en la ADN girasa y topoisomerasa IV y la disminucin de la cantidad de droga acumulada debido a procesos de eflujo o a cambios en las protenas de membrana externa. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que varios antibiticos (ATB), incluyendo ciprofloxacina (CIP), estimulan la produccin de especies reactivas del oxgeno (ROS) en clulas bacterianas. Posteriormente, se relacionaron a las ROS con la resistencia a ATB ya que niveles subletales de estos inducen mutagnesis resultando en un incremento de resistencia a los mismos. Objetivo. Evaluar en variantes resistentes (VR) a CIP de P. mirabilis mecanismos clsicos de resistencia a CIP (mutaciones en GyrA, GyrB y ParC) y sistemas de defensas antioxidantes tales como superxido dismutasa (SOD), glutatin (GSH) y capacidad antioxidante total para investigar la posible asociacin de las defensas antioxidantes en la resistencia de esta bacteria a CIP. Materiales y mtodos. Se utilizaron 3 cepas bacterianas de origen clnico 2 sensibles (S1, S2) y 1 resistente (R3) y 4 VR obtenidas en nuestro laboratorio a partir de S1 y S2 denominadas R1a, R1b, R2a y R2b. Los fragmentos de gyrA, gyrB y parC donde se hallan las mutaciones mas frecuentes de cada cepa bajo estudio fueron amplificados por PCR y secuenciados directamente por Macrogene Corp USA. La actividad SOD se determin a 560 nm utilizando Azul de Nitrotetrazolio en presencia de riboflavina. El GSH total se analiz mediante la reaccin del GSH reducido con el cido 5,5-ditiobis-nitrobenzoico en presencia de GSH reductasa y NADPH en exceso. La capacidad antioxidante total se cuantific por el ensayo FRAP (Ferric reducing antioxidant power assay) por reduccin del complejo Fe+-2,4,6-tris (2-piridil)-1,3,5-triazina (TPTZ) a su forma ferrosa y posterior monitoreo a 593 nm. Resultados. Notablemente, no se hallaron mutaciones en GyrA, GyrB o ParC en ninguna de las VR, las cuales mostraron secuencias inalteradas al ser comparadas con las secuencias correspondientes a P. mirabilis ATCC 29906. Por su parte la cepa clnica R3 usada como control positivo mostr las mutaciones descriptas para esta bacteria en la regin determinante de resistencia a quinolonas (QRDR), S83 (GyrA), E466 y S80 (GyrB) y E84 (Par C). En cuanto a las VR, stas adems de mostrar mayor resistencia a CIP (CIM: R1a 16 g/ml, R1b 4 g/ml, R2a 8 g/ml y R2b 4 g/ml) que sus respectivas wild type (wt, CIM: S1 0,125 g/ml y S2 2 g/ml) exhibieron mayor actividad SOD intra y extracelular, mayores niveles de GSH y adems las VR con mayor CIM (R1a y R2a) tuvieron una capacidad antioxidante total significativamente mayor que sus wt. Conclusiones. Los resultados obtenidos sugieren que CIP induce resistencia al estrs oxidativo en P. mirabilis, lo que puede consecuentemente actuar como mecanismo de resistencia al mismo ATB. Este aspecto puede ser sumado a la lista de factores que regulan la susceptibilidad a CIP, teniendo en cuenta la naturaleza multifactorial de la resistencia a ATB.
P482 - 27667 EVALUACIN FENOTPICA Y GENOTPICA DEL EFECTO DE EXTRACTO DE Oreganum vulgare SOBRE LA ACTIVIDAD DE UREASA Y MOVILIDAD EN CEPAS DE Helicobacter pylori. DALFOVO, MARIA C (1); CORTIAS, TERESA I (1); SILVA, HUMBERTO (1); VEGA, ALBA EDITH (1)
(1) UNSL Helicobacter pylori coloniza la mucosa gstrica gracias a la actividad de la enzima ureasa y la movilidad por flagelos polares que le permiten atravesar la capa de moco y evadir el pH cido del estmago. Extractos de origen vegetal como ajo, brcoli, arndanos y plantas de la regin de Cuyo, tales como jarilla (Larrea divaricada Cav), matico (Artemisia douglasiana Besser) o molle (Lithraea molleoides) son utilizados como infusin en medicina popular para tratamiento de trastornos disppticos por sus propiedades antiulcerosas y antiinflamatorias adems de su actividad anti-H. pylori. Sin embargo no existen estudios del efecto de extractos naturales sobre la expresin de genes de virulencia en cepas de H. pylori. El objetivo del trabajo fue caracterizar fenotpica y genotpicamente el efecto de extracto de Oreganum vulgare (organo) en la expresin de los factores de virulencia, ureasa y movilidad, claves en la colonizacin del estmago y la
P481 - 27597 DIVERSIDAD GENTICA DE SEROVARES DE Leptospira spp. EN LA ARGENTINA. MELENDEZ, YAMIL; BRIHUEGA, BIBIANA (2); RUYBAL, PAULA (1); CAIMI, KARINA (1)
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formacin de biofilms de H pylori. Se usaron dos cepas de H. pylori, una de referencia NCTC 11638 y un aislamiento clnico, HP796. El efecto sobre la actividad ureasa se determin adicionando urea al medio de cultivo a una concentracin de 10mM, rojo fenol como indicador, y pH del medio a 6,0. Se inocul 100 l de cada cepa y se coloc 10 l del extracto (2,5 mg/ml) en un pocillo en el centro de la placa. La inhibicin de la actividad ureasa se determin midiendo el halo de color amarillo alrededor del pocillo. El ensayo del efecto de organo sobre la movilidad de H. pylori se realiz en agar sangre al 0,3% adicionado de 2,5 mg/ml de extracto. Se sembr 1l de suspensin de cada cepa, se incub en microaerofilia 5 das y se midi el dimetro del halo de migracin. Se calcul el rea de migracin comparando con el rea de referencia para cada cepa. En el estudio genotpico se analiz la expresin de los genes de virulencia ureA, flaA y housekeeping: 16SrRNA. La extraccin de ARN, se realiz por el mtodo del TRIzol. El cDNA se amplific con random hexamer primer y 200 U de la transcriptasa inversa del virus leucemia murina Moloney (MML-V). Los resultados muestran que extracto de organo inhibe la actividad ureasa en las dos cepas en un rango de 40-100 mm para HP796 y NCTC 11638 respectivamente y disminuye la capacidad de movilidad entre un 2,5 -3 veces para NCTC 11638 y de 3,75-5 veces para HP796 (p0.005). Disminuye la capacidad de expresin de ureA en ambas cepas, 2,5 veces en HP796 y 1,25 veces en NCTC 11638. Adems, disminuye la expresin del gen flaA entre 1,5 veces para NCTC 11638 y 1,2 veces para HP796 respectivamente. Se ha postulado que los compuestos fenlicos presentes en el extracto podran alterar no solo la actividad ureasa sino tambin la movilidad en la bacteria impidindole contrarrestar el pH del medio. Teniendo en cuenta que ureasa y movilidad son factores de virulencia fundamentales en el proceso de infeccin de H. pylori y en la formacin de biofilms, la posibilidad de disminuir la expresin de dichos factores utilizando extracto de organo como ingrediente antimicro-biano en alimentos es una alternativa de tratamiento para inhibir H. pylori.
gicamente es menos demandante que PCR (no se necesita un termociclador ni sistema de electroforesis) es de esperar que esta metodologa vaya ganando espacio en laboratorios de bajo equipamiento o que sea empleada en condiciones de campo.
P484 - 27744 IMPORTANCIA DEL POLISACRIDO CAPSULAR (PC) Y DE LA PROTENA DE ADHESIN EXTRACELULAR (EAP) EN LA INTERNALIZACIN DE Staphylococcus aureus. ALVAREZ, LUCIA (1); GORDIOLA, MARIANA (1); BARBAGELATA, MARIA SOL (1); SORDELLI, DANIEL (1); BUZZOLA, FERNANDA (1)
(1) Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina La patognesis de S. aureus es un proceso complejo que involucra diferentes factores de virulencia, los cuales son expresados coordinadamente durante la infeccin. La prdida de PC facilita la internalizacin de S. aureus en clulas endoteliales. Se demostr que Eap es importante en la adherencia de S. aureus a clulas eucariotas. El sistema regulatorio sae regula positivamente a Eap. El factor de transcripcin MgrA regula positivamente la expresin de PC. El objetivo de este trabajo fue estudiar la importancia del PC serotipo 5 (PC5) y Eap y de sus principales reguladores sae y mgrA en la invasin de S. aureus en distintos tipos celulares. Para ello se infectaron clulas epiteliales MAC-T con suspensiones de las cepas Newman (PC5+), RN6390 (PC5-), Reynolds PC5+ y su isognica PC5-, y las mutantes Newmaneap-, Newmansae-, RN6390sae- y NewmanmgrA-. Luego del tratamiento con lisostafin y a las 2 h postinfeccin, se sembraron los lisados celulares a fin de contar las UFC/ml. Se obtuvieron los siguientes resultados de internalizacin en clulas MAC-T: Newman: 17% vs RN6390: 100%, *p<0.01. Cepas Reynolds, PC5+: 16.3% vs PC5-: 100%, *p<0.01. Newman: 100% vs AH12: 16%, *p=0,001. Newman: 100% vs Newmansae: 17.6%, *p<0.01. RN6390: 100% vs RN6390sae: 9.4%, *p<0.01. Newman: 100% vs Newmanmgr: 260% *p<0.01, Mann-Whitney test. Adems, se observ mediante SDS-PAGE que la mutante Newmansae no expres Eap y mediante ouchterlony se comprob que la mutante NewmanmgrA no expres PC. Luego, se realizaron los ensayos de invasin en clulas endoteliales. La cepa Newman no fue capaz de invadir este tipo celular, por lo cual se utilizaron la cepa Newman reparada R11 (adhesina FnBP salvaje) y su mutante R11eap-. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: R11: 100% vs R11eap: 33.8%. *p<0.01; Mann-Whitney test. Los resultados demuestran que la presencia de cpsula interfiere con la internalizacin de S. aureus, mientras que Eap favorece la invasin de la cepa Newman en clulas epiteliales y endoteliales. Las mutantes sae al no expresar Eap poseen una capacidad diminuida para invadir clulas epiteliales, mientras que la mutante mgrA al no expresar PC5 presenta un aumento en su internalizacin con respecto a la cepa salvaje. Los resultados permiten concluir que los factores de virulencia PC5 y Eap, as como tambin sus principales reguladores sae y mgrA intervienen en la internalizacin celular de S. aureus.
P483 - 27709 IDENTIFICACIN RPIDA Y SENSIBLE DE Brucella SPP MEDIANTE LA TCNICA DE LAMP (LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION). TRANGONI, MARCOS (1); CERON CUCCHI, MARIA (2); CRAVERO, SILVIO (1)
(1) Instituto de Biotecnologa, 2 Instituto de Patobiologa - CICVyA, INTA Castelar Las tcnicas moleculares basadas en la amplificacin de cidos nucleicos han revolucionado el diagnstico directo y la tipificacin de patgenos tanto en medicina humana como animal. El campo metodolgico est dominado por la tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Sin embargo, nuevas tcnicas de amplificacin siguen emergiendo. Una de ellas es LAMP, donde no es necesario disponer de un termociclador ya que la reaccin es isotrmica y debido a robustez de la amplificacin el producto obtenido puede ser detectado en forma visual y directa. Las bacterias del gnero Brucella son patgenos de animales y algunas especies son virulentas para humanos. La identificacin y tipificacin de Brucella requiere la manipulacin de la bacteria en condiciones de bioseguridad. Basndonos en las secuencias genmicas de diversas especies de la familia brucellaceae, hemos desarrollado oligonucleotidos que permiten la discriminacin mediante LAMP de las principales especies patognicas para humanos: B. abortus,B. melitensis y B. suis y a la cepa vacunal bovina S19. Tambin hemos desarrollado oligonucletidos para LAMP que hibridan en la regin del gen bcsp31, conservado y especfico en la familia brucellaceae. Comparando la sensibilidad con PCR empleando los oligonucletidos B4-B5 para la deteccin de ADN de Brucella, LAMP present idntica sensibilidad: 50 fg o el equivalente a 20 unidades formadoras de colonias. La especificidad fue evaluada empleando como templado DNA de Ochrobactrum. Las amplificaciones mediante LAMP la hemos evaluado de manera tradicional mediante electroforesis en geles de agarosa y tincin con bromuro de etidio y observacin a la luz ultravioleta o mediante la deteccin visual empleando SYBR Green o azul de hidroxinaftol. LAMP es un mtodo sensible y especfico para detectar ADN de Brucella. Debido a que tecnol-
P485 - 27777 IMPACTO DEL POLIMORFISMO DE LA PROTENA A DE Staphylococcus aureus EN LA INDUCCIN DE RESPUESTA INFLAMATORIA. GAROFALO, AILIN (1); GIAI, CONSTANZA (1); GOMEZ, MARISA (1)
(1) Dpto. de Microbiologa, Parasitologa e InmunologaFMED-UBA Staphylococcus aureus es un patgeno de gran importancia mdica que cuenta con mltiples mecanismos de patogenicidad. Las infecciones estafilocccicas se caracterizan por una intensa respuesta inflamatoria mediada por el reclutamiento de neutrfilos al sitio de la infeccin. La protena A (SpA), presente en la superficie de todos los aislamientos de S. aureus, posee una regin polimrfica denominada Xr que consiste de un nmero variable, entre 1 y 26, de secuencias cortas repetitivas (SSR) de 24 pares de bases. Nuestro grupo de investigacin ha demostrado el rol crtico de SpA en la induccin de respuesta inflamatoria. La regin Xr induce la secrecin de interfern- e IL-6 en clulas epiteliales de las vas areas lo cual conduce al reclutamiento de
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neutrfilos al pulmn. El objetivo de este trabajo fue determinar el impacto del nmero de SSR presentes en la regin polimrfica Xr de SpA en la induccin de respuesta inflamatoria. Se utilizaron protenas Xr recombinantes conteniendo diferente nmero de SSR (Xr1, Xr8, Xr12) para estimular clulas epiteliales de las vas areas en cultivo primario y macrfagos y se determin la activacin de la cascada de sealizacin de IFN-. Para los estudios in vivo, grupos de ratones fueron inoculados con las diferentes protenas recombinantes (Xr1, Xr8, Xr12, 0,125 nmoles/gr) por ruta intraperitoneal y se determin la presencia de neutrfilos en el peritoneo por citometra de flujo. A fin de evaluar la respuesta inflamatoria en pulmn, grupos de ratones fueron inoculados con Xr1, Xr8 o Xr12 (0,25 nmoles/gr) y se determin la produccin de IFN- e IL-6 por PCR de tiempo real, la activacin de los factores de transcripcin STAT1 y STAT3 por western blot y el reclutamiento de neutrfilos en homogenatos de pulmn. Se determin que existe una correlacin entre el nmero de SSR de la regin Xr y la induccin de la cascada de sealizacin de IFN- en macrfagos y clulas epiteliales. Se observ mayor grado de activacin de STAT1 en clulas estimuladas con Xr8 con respecto a clulas estimuladas con Xr1. La activacin de STAT3 no fue dependiente del nmero de SSR. Se demostr que la presencia de un mayor nmero de SSR en la regin Xr estimula mayor induccin de genes regulados por IFN- tales como IP-10 e IL-6. Mediante los experimentos in vivo se determin que la presencia de 8 SSR en la regin polimrfica Xr es suficiente para la activacin de STAT1 y STAT3 lo cual se correlacion con un mayor grado de induccin de IL-6 y con el reclutamiento de un mayor porcentaje de neutrfilos a pulmn (p < 0,05, Test Mann Whitney comparado con Xr1). No se observaron diferencias significativas entre Xr8 y Xr12 en el modelo de neumona. En el modelo de inoculacin sistmica se observ que la regin polimrfica Xr induce el reclutamiento de neutrfilos al peritoneo y, en forma similar a los resultados obtenidos en macrfagos in vitro, se requiere de ms de 8 SSR para la induccin de respuesta inflamatoria en este modelo. Los resultados obtenidos permiten demostrar que la presencia de un mayor nmero de SSR en la regin polimrfica Xr de la protena A de S. aureus se correlacionara con una mayor capacidad de induccin respuesta inflamatoria mediada por IFN-.
en caldo, tomando como base el mtodo de referencia MP38 (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI), con modificaciones. Todos los ensayos se realizaron por duplicado. Para evaluar los resultados, se aplicaron el Test de Cochran y pruebas sobre dos proporciones. Resultados CK19 result ser el aislamiento ms resistente a los 3 compuestos ensayados y CK21 el ms sensible. Los resultados de las CIM y la comparacin entre los valores hallados para cada hongo, se muestran en la Tabla.
Tabla1. Concentracin inhibitoria mnima, expresada en g/mL, de los diferentes antifngicos frente a Cercospora kikuchi Productos PA PB PC (1) aislam. regionales Compuestos Azostribobina Trifloxistrobina Ciproconazol Piraclostrobina Epoxiconazol (2) C. kikuchii NBRC 6711 CK14(1) 1,22a 234,38c 100c 5,20a 1,95a a y b: p< 0,1 CK16(1) 2,44a,b 468,75c 200c 1,30 0,49 c y d: p< 0,05 CK19(1) 9,77a,c 468,75c 200c 10,39c 3,91c CK21(1) 0,31b,c,d 14,65a,c 6,25a,c 0,65a,c 0,24a,c CK26(1) 1,22a 117,19a 50a 0,65a,c 0,24a,c CK6711(2) 4,88d 117,19a 50a 0,65a,c 0,24a,c
Se comprob que, in vitro, los aislamientos de C. kikuchii con variaciones en su genoma, presentaron diferentes respuestas a los fungicidas analizados.
P487 - 27070 DISEO IN SILICO DE ESTRATEGIAS PARA LA IDENTIFICACIN DE GENES DE Bacillus thuringiensis CODIFICANTES DE PROTENAS TXICAS PARA COLEPTEROS. SAUKA, DIEGO; MONELLA, RODRIGO; BENINTENDE, GRACIELA
Instituto de Microbiologa y Zoologa Agricola - INTA Las toxinas de Bacillus thuringiensis con toxicidad para insectos colepteros pertenecen a tres familias que son estructuralmente diferentes: las protenas Cry, las Vip y las Sip. La importancia de su estudio se basa en que podran ser empleadas como herramientas para incrementar la actividad txica de algunos insecticidas microbianos y combatir la resistencia. Teniendo en cuenta este planteo, emerge la necesidad de disponer de estrategias para identificar sus genes codificantes en B. thuringiensis, que posteriormente permitan el descubrimiento de variantes novedosas. Se disearon diversas estrategias basadas en amplificacin gnica (PCR) para detectar e identificar genes cry14, cry23, cry37 y sip1, PCR multiplex para cry34, y otras seguidas de un anlisis de restriccin (RFLP) para cry3, cry7, cry8, cry35, vip1 y vip2. Se disearon 23 cebadores especficos en base al anlisis de regiones conservadas por alineamientos mltiples de sus secuencias de DNA disponibles a travs del sitio Bacillus thuringiensis toxin nomenclature (http://www.lifesci.sussex.ac.uk/ home/Neil_Crickmore/Bt/), empleando ClustalW (http://www.ebi. ac.uk/clustalw/) y Oligoanalyzer 3.0 (http://scitools.idtdna.com/ scitools/Applications/OligoAnalyzer/). Los fragmentos de DNA esperados son de alrededor de 820 pb para cry3, 434 pb para cry7, 930 pb para cry8, 394 pb para cry14, 702 pb para cry23, 156 pb para cry34A, 274 pb para cry34B, 290 pb para cry35, 330 pb para cry37, 530 pb para vip1, 826 pb para vip2 y 1103 pb para sip1. Los fragmentos de aquellos genes por los que se opt por una posterior RFLP fueron digeridos in silico empleando el software Restriction Mapper (http://www.restrictionmapper.org/). Mediante el uso de la enzima HinfI se podran distinguir 4 subclases de genes cry3 y 11 de cry8, con TaqI+RsaI 4 de cry7, y con RsaI 4 de cry35. La utilidad de estas estrategias desarrolladas in silico se ha iniciado a comprobar experimentalmente, lo que nos da la posibilidad de su uso en estudios de tamizaje de colecciones de B. thuringiensis como fuentes de potencial gentico.

P486 - 27060 COMPUESTOS FUNGICIDAS. SU ACTIVIDAD FRENTE A AISLAMIENTOS REGIONALES DE Cercospora kikuchii. PERETTI, L(1); MACHUCA, L(1); LATORRE RAPELA, MG(1); MAUMARY, R(1); PIOLI, R(2); GONZALEZ, AM(1); HERZOG, L(1); LURA, MC(1)
(1) Universidad Nacional del Litoral, (2) Universidad Nacional de Rosario Introduccin. Las condiciones climticas de la provincia de Santa Fe, no slo permiten el desarrollo de la soja, sino tambin la aparicin de enfermedades que produce Cercospora kikuchii (Matsumoto & Tomoyasu) M. W. Gardner. Diferentes estudios de la gentica poblacional de este patgeno sugieren que, en los ltimos aos, ha aumentado su severidad y patogenicidad. Tambin se ha reportado que algunas de sus genovariedades han desarrollado resistencia a varios compuestos benzimidazlicos, por lo que resulta importante monitorear la evolucin de la sensibilidad a los fungicidas. Se plante como hiptesis de trabajo, que la variabilidad gentica comprobada en aislamientos regionales de C. kikuchii, podra generar diferencias en las respuestas a los distintos compuestos fungicidas. Objetivos. Evaluar la actividad antifngica de diferentes productos frente a aislamientos regionales de C. kikuchii que presenten variaciones en su genoma. Materiales y Mtodos. Se estudiaron 5 aislamientos regionales de C. kikuchii obtenidos de soja enferma con tizn de la hoja (Ck14, Ck16, Ck19, Ck21 y Ck26) y la cepa de referencia C. kikuchii NBRC 6711. Se ensayaron 3 productos de origen comercial: PA (azoxistrobina), PB (trifloxistrobina + ciproconazol) y PC (piraclostrobina + epoxiconazol). Para la determinacin de la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM), se aplic la tcnica de macrodilucin
P488 - 27086 AMPLIFICACION, CLONADO Y SECUENCIACION DE GENES VIP3A DE Bacillus thuringiensis. RODRIGUEZ, SONIA; BENINTENDE, GRACIELA; SAUKA, DIEGO
Instituto de Microbiologa y Zoologa Agricola - INTA Diversos factores de virulencia presentes en Bacillus thuringiensis, le permiten a esta bacteria ser una herramienta fundamental en el control microbiano de plagas. Entre estos factores se encuentra un grupo de protenas llamadas Vegetative Insecticidal Protein (Vip), que poseen la caracterstica de ser secretadas en fase vegetativa del crecimiento bacteriano. Particularmente, la
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clase Vip3A esta formada por protenas de 88 kDa, toxicas frente a larvas de insectos lepidpteros. El estudio de los genes codificantes, podra conducir al hallazgo de variantes nuevas o combinaciones proteicas ms eficientes que las conocidas para el control de plagas agrcolas, de gran impacto econmico. El objetivo de este estudio, fue plantear una estrategia para la amplificacin, clonado y secuenciacin de genes vip3A en B. thuringiensis. Para tal fin, se disearon 4 pares de cebadores especficos en base al anlisis de regiones conservadas, por alineamientos mltiples de sus secuencias de DNA, disponibles a travs del sitio Bacillus thuringiensis toxin nomenclature (http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/), empleando ClustalW (http://www.ebi.ac.uk/clustalw/) y Oligoanalyzer 3.0 (http://scitools.idtdna.com/scitools/Applications/OligoAnalyzer/). Estos se utilizaron para amplificacin del marco de lectura completo de genes vip3A (2370 pb), mediante PCR hot start manual. La cepa nativa de B. thuringiensis INTA TA24-6 y las exticas pertenecientes a los serovares kurstaki HD-1 y entomocidus HD110 se emplearon como controles positivos, mientras que la cepa perteneciente al serovar israelensis HD-567, fue empleado como control negativo. A posteriori, los productos de amplificacin fueron extraidos de la matriz del gel y purificados mediante kit Wizard SV Gel y PCR Clean-Up System (Promega), clonados en vector pGem-T Easy (Promega) y transformados en clulas de Escherichia coli JM109. Se seleccionaron al menos 10 colonias blancas para cada caso, a partir de cultivos en Agar LB conteniendo IPTG y X-gal. Se verifico presencia por PCR del plsmido transformado, utilizando los cebadores del vector SP6 y T7.Tres clones de cada cepa fueron secuenciados en la Unidad de Genmica (Instituto de Biotecnologa, INTA.), mediante el uso de los mencionados cebadores del vector y otros 16 cebadores internos especficamente diseados para tal fin, empleando las herramientas bioinformticas descriptas anteriormente. Las secuencias de nucletidos de vip3A de las cepas HD-1, TA24-6 y HD-110 fueron depositadas en la base de datos de GenBank (http://www.ncbi. nnm.nih.gov/) con los numeros de acceso GUO73128 , GUO73129 y HM132031 respectivamente, y denominadas por el Comit de nomenclatura de toxinas de B. thuringiensis como vip3Aa33, vip3Aa34 y vip3Aa37, correspondientemente. Se estableci una estrategia con una lista detallada de cebadores, que resulto factible para la amplificacin, clonado y secuenciacin de genes vip3A en B. thuringiensis. Siguiendo esta estrategia se identificaron tres variantes nuevas de estos genes.
pozos (Nunc 143928). El cultivo se obtuvo tras sembrar 50 l de una suspensin espora-cristal de la cepa en 50 mL de caldo de esporulacin BM e incubado en agitacin durante 72 hs. Para el control negativo slo se agreg a la dieta agua destilada estril. En cada pocillo se coloc una larva neonata transferida con la ayuda de un pincel. La mortalidad se registr luego de 7 das de incubacin a 28 C y los resultados fueron corregidos por la frmula de Schneider-Orelli. Se obtuvieron 25 cepas nativas con una mortalidad menor a 20%, 20 entre 20 y 30%, 9 entre 30 y 40%, 4 entre 40 y 50% y 1 con ms del 50%. Dentro de las cepas exticas, 10 presentaron un porcentaje de mortalidad menor a 20%, 6 entre 20 y 30%, 5 entre 30 y 40%, 1 entre 40 y 50% y 5 con porcentajes mayores a 50%. La cepa nativa INTA H48-5 con una mortalidad del 69,6 2,9%, y las cepas exticas de los serovares thompsoni HD542 con 77,1 2,5% y tolworthi HD125 con 63,6 6,4% resultaron las ms txicas. Estos estudios toxicolgicos preliminares permitieron la seleccin de cepas nativas y exticas de B. thuringiensis con una patogenicidad moderada para Anthonomus grandis. Estudios toxicolgicos posteriores empleando la biomasa y sobrenadante de cultivo por separado permitirn determinar la fraccin responsable de esa actividad txica y la potencialidad de la misma para el biocontrol de la plaga.
P490 - 27121 SELECCIN DE HONGOS ENTOMOPATGENOS, PARA SU USO COMO AGENTES DE CONTROL BIOLGICO DE Tropidacris collaris (ORTHOPTERA: ACRIDOIDEA). PELIZZA, SEBASTIAN ALBERTO(1); CABELLO, MARTA NOEMI(2); ELIADES, LORENA ALEJANDRA(2); SCORSETTI, ANA CLARA(2); LANGE, CARLOS ERNESTO (1)
(1) Centro de Estudios Parasitolgicos y de Vectores (CEPAVE), (2) Instituto Spegazzini Los acridios (tucuras y langostas) ocasionan prdidas econmicas muy importantes en la agricultura a nivel mundial. En Argentina, la importancia econmica de estos insectos ha sido reconocida desde mediados del siglo XIX, en relacin con el progresivo desarrollo agropecuario en el pas.Tropidacris collaris (Stoll), la tucura quebrachera, es un insecto muy grande cuyos ejemplares adultos figuran entre los de mayor tamao que se conocen en las especies de tucuras. En nuestro pas, T. collaris tiene una amplia distribucin geogrfica. Aunque es considerada una especie polfaga, los adultos prefieren el follaje de rboles de hoja dura como los quebrachos (Aspidosperma spp., Schi-nopsis spp.), los algarrobos (Prosopis spp.) y el mistol (Zizy-phus mistol). Sin embargo, las ninfas, de hbitos gregarios, consumen prcticamente todo material vegetal que encuentran a su paso. Los hongos son los microorganismos parsitos de insectos mas frecuentemente encontrados en la naturaleza y la mayora de las investigaciones con hongos entomopatgenos se ha centrado en su desarrollo como bioplaguicidas. El objetivo de este trabajo fue obtener un aislamiento fngico que pueda llegar a utilizarse como controlador biolgico de T. collaris. Durante el mes de Enero de 2010 se recolectaron ninfas de I estadio de T. collaris en las proximidades de Tres Estacas (Chaco) (27 8 21.9 S; 61 34 23.8 W). Estos acridios fueron llevados en jaulas al laboratorio, en donde fueron colocadas en grupos de 15 dentro de tubos de acetato, y rociadas con 1 mL de una suspensin 1x108 conidios/mL. Se utilizaron para este ensayo 59 aislamientos nativos de hongos entomopatgenos. El ensayo se extendi por 10 das y se registro la mortalidad diaria. Los acridios se alimentaron con hojas de lechugas durante el tiempo que duro el experimento. Se realizaron tres replicas y un control para cada tratamiento. Se observaron diferencias significativas (p<0,0001) en los porcentajes de mortalidad causados por los diferentes aislamientos fngicos sobre las ninfas de T. collaris, siendo los aislamientos LPS 1067 (Beauveria bassiana) y 906 (Metarrhizium aniso-pliae) los mas patognicos 97,7 1,2% y 91 1,5% respectivamente. Si bien faltan realizar estudios complementarios, tales como el efecto de estos aislamientos fngicos sobre la fauna no blanco y su patogenicidad sobre T. collaris en condiciones naturales; se pueden proponer a los aislamientos LPS 1067 y 906 como posibles agentes de control biologico de T. collaris. Este estudio fue financiado por ANPCyT PICT N 914, CONICET, CICPBA, UNLP.
P489 - 27097 BSQUEDA DE Bacillus thuringiensis TXICOS PARA Anthonomus grandis BOHEMAN (COLEOPTERA: CURCULIONIDAE). PEREZ, MELISA; SAUKA, DIEGO; ONCO, MARIA INES; MONELLA, RODRIGO; BENINTENDE, GRACIELA
Instituto de Microbiologa y Zoologa Agricola - INTA El picudo del algodonero, Anthonomus grandis Boheman, es la plaga principal de la planta de algodn en el noroeste argentino. El uso de insecticidas qumicos para su control produce alteraciones al medio ambiente, por lo que el empleo de estrategias biolgicas no contaminantes constituye alternativas para el control de esta plaga. El empleo de bioinsecticidas que poseen a la bacteria Bacillus thuringiensis como ingrediente activo, representara una interesante alternativa. B. thuringiensis se caracteriza por producir cristales paraesporales de naturaleza proteica durante la esporulacin, los que junto a otros factores de virulencia liberados al medio durante la fase vegetativa de crecimiento son txicos para larvas de insectos. El objetivo del trabajo es la bsqueda de B. thuringiensis que sean txicos para larvas de dicha plaga, ya sea a travs de protenas cristalinas y/o de otras que pueda secretar al medio. Se analizaron 59 cepas nativas de B. thuringiensis de diferentes regiones del pas y 27 cepas exticas provenientes de colecciones internacionales, todas pertenecientes al cepario del IMYZA-INTA. Los bioensayos de toxicidad fueron realizados utilizando el mtodo de incorporacin en dieta. Se prepar 40 mL de dieta artificial a la que se le agreg en proporcin 1/ 10 el volumen de cultivo completo de la cepa en estudio y se fraccion de a 300 l por pocillo en dos placas de poliestireno de 24
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P491 - 27139 AISLAMIENTOS ARGENTINOS DE Fusarium poae CON EL POTENCIAL DE PRODUCIR ENNIATINAS. DINOLFO, MARIA INES(1); STENGLEIN, SEBASTIAN ALBERTO(1,2); MORENO, MARIA VIRGINIA(1,2); CASTAARES, ELIANA(1); SALERNO, GRACIELA(2,3)
(1) Laboratorio de Biologa Funcional y Biotecnologa (BIOLAB)CEBB, (2) CONICET, (3) Fundacin para Investigaciones Biolgicas Aplicadas (FIBA)-CEBB La fusariosis de la espiga es una enfermedad, principalmente de los cereales, causada por un complejo de hongos del gnero Fusarium. Esta enfermedad no solo produce prdidas en los rendimientos de los cultivos, sino que tambin, produce prdidas en la calidad de sus granos por la presencia de toxinas nocivas para la salud del hombre y de los animales. Fusarium poae es una especie perteneciente a este complejo, que en los ltimos aos, ha cobrado especial importancia debido al aumento de su presencia en muestras de cereales, fundamentalmente de trigo y cebada. F. poae no produce sntomas fcilmente detectables en los granos y es conocido por su capacidad de producir distintos tipos de toxinas, como diacetoxyscirpenol, neosolaniol, nivalenol, beauvericina y enniatinas, entre otras. Las enniatinas, depsipptidos cclicos, son unas toxinas poco estudiadas, que pueden causar citotoxicidad en tejidos animales. El objetivo de este trabajo fue evaluar, mediante la tcnica de PCR, la presencia de un fragmento especfico basado en la enzima enniatina sintetasa codificada por el gen ensyn1 para la deteccin de potenciales productores de enniatinas. Los cebadores utilizados fueron esysp1 y esysp2 cuya secuencia es 5-ggccttgagccatccagatc-3 y 5-ctcgttggtagcctgcgatcg3, respectivamente. Se analizaron 63 aislamientos monospricos de F. poae provenientes de distintas localidades de la Argentina. De la observacin de los resultados obtenidos, se pudo comprobar la presencia del fragmento especfico de aproximadamente 270pb en todos los aislamientos evaluados, lo que confirma la capacidad potencial del patgeno para producir esta toxina, en condiciones ptimas para su expresin, en muestras de semillas destinadas al consumo humano y/o de los animales.
con sintomatologa de tizn de la hoja y mancha ojo de rana respectivamente. El estudio de las estructuras de fructificacin mostr diferencias en el tamao de los conidios y nmeros de tabiques de los mismos. En ambas especies el dimetro de las colonias en APD estuvo comprendido entre 36 y 60 mm, y presentaron tonalidades de blanco, verde-grisceo y rosado dependiendo del aislamiento. El tamao de la secuencia correspondiente a la regin ITS fue de 518 bp, para los aislamientos identificados como C. kikuchii y C. sojina y las cepas patrones, mostrando un 99.6% de identidad entre ellas, con diferencias en 1 o 2 nucletidos. Las secuencias mostraron un 99% de identidad con las disponibles en GenBank (N de acceso AY633838 para C.kikuchii y AY266157 para C.sojina). -Se observaron diferencias en las caractersticas microscpicas de cada una de las 2 especies estudiadas. -Las caractersticas macroscpicas fueron similares para todos los aislamientos. -El estudio de la variabilidad de la regin ITS del ADNr no permiti establecer una adecuada diferenciacin de especies entre los aislamientos pertenecientes al gnero Cercospora estudiados.
P493 - 27177 BIODEGRADACIN DE RESIDUOS DE CEBOLLA PARA OBTENER ENMIENDAS CON CAPACIDADES ANTIFNGICAS. RINLAND, ME(1,2); MIGLIERINA, AM(2); RODRIGUEZ, RA(2); GOMEZ, MA(1,2)
(1) Centro de Recursos Naturales Renovables de la Zona Semirida, (2) Universidad Nacional del Sur Antecedentes. Los desechos generados en la produccin de cebolla en el sur de la provincia de Buenos Aires son alrededor de 10.000 t/ao. La eliminacin de estos residuos se realiza arbitrariamente y sin un mtodo que permita reutilizarlos. La accin de los microorganismos sobre la cebolla durante la degradacin anaerobia produce productos azufrados txicos debido a su alta concentracin de azufre. Estos compuestos pueden lograr un efecto antifngico similar al de la biofumigacin con crucferas. Objetivo. Analizar la degradacin anaerobia del descarte de cebolla en diferentes mezclas para obtener enmiendas orgnicas con capacidades antifngicas. Materiales y Mtodos. Se prepararon diferentes mezclas en recipientes plsticos de 17 l con tapa hermtica. Se hicieron 5 tratamientos con 3 repeticiones (R1, R2 y R3) cada uno: 1) Cebolla entera (CE), 2) Cebolla cortada (CC), 3) CC + estircol (E) proporcin 2:1, 4) CC + E proporcin 1:1, 5) CC + E + fruto de Melia azedarach, proporcin 1:1:1 (el fruto del paraso posee propiedades antifngicas). Cada recipiente pesaba 6 kg, se mantuvieron a 28C. Se evalu la relacin C/N y el contenido de macronutrientes en el producto final de cada tratamiento. A los 30 das se recolect el lixiviado de CE, CC y CCE 2:1 (en los otros tratamientos no hubo produccin del mismo). Luego de la recoleccin se dejaron los recipientes abiertos, para la estabilizacin del residuo degradado, durante 15 das. Con los lixiviados se realizaron tests de antagonismo (por triplicado) contra Stigmina carpophila, Colletotrichum gloeosporioides, Phoma terrestris, Rhizoctonia solani, Phytophtora capsici. A los 6 das se determin el grado de inhibicin del crecimiento fngico, utilizando un mtodo similar al del antibiograma. Resultados. Transcurridos 45 das, slo en los tratamientos que incluan estircol, se logr un producto con adecuada estructura y cantidad de nutrientres (valores mn-mx: C/N= 4-5; P= 0,21-0,28%; K=0,420,78%; S=0,26-0,35%; Ca=0,86-1,32%; Mg= 0,25-0,29%) para ser usado como enmienda, aunque todava no estaba estabilizado.
Tabla: Grado de antagonismo producido por los lixiviados
Tratamiento CE (R1) ++ 0 ++ 0 0 CE (R2) ++ + ++ + ++ CE (R3) ++ + ++ 0 0 CC (R1) ++ ++ ++ ++ ++ CC (R2) ++ ++ ++ ++ ++ CC CCE 2:1 CCE 2:1 CCE 2:1 (R3) (R1) (R2) (R3) ++ ++ ++ ++ ++ 0 + + 0 + 0 + + 0 ++ 0 + 0 0 0
P492 - 27161 ESPECIES DE Cercospora PATGENOS DE SOJA AISLADAS EN LA PROVINCIA DE SANTA FE: IDENTIFICACIN Y DIFERENCIACIN. LATORRE RAPELA, MG(1); VACCARI, MC(1); SANTOS, M(1); MAUMARY, R(2); LURA, MC(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas - Universidad Nacional del Litoral (UNL) - Santa Fe. (2) Facultad de Ciencias Agrarias - Universidad Nacional del Litoral (UNL) - Santa Fe Introduccin: Desde principio de la presente dcada, Cercospora kikuchii, es el hongo fitopatgeno predominante que afecta la soja en la regin centro-norte de la provincia de Santa Fe. Durante la campaa 2008/2009, caracterizada por temperaturas elevadas, precipitaciones frecuentes y muchas horas de roco, Cercospora sojina, causante de la mancha ojo de rana (MOR), afect con diferentes niveles de intensidad al cultivo de soja en nuestra regin. El diagnstico preciso de las enfermedades, mediante la deteccin del patgeno, es fundamental para el manejo y control adecuado de plagas. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue identificar y diferenciar las especies de Cercospora que infectan la soja, mediante el estudio de sus aspectos morfolgicos y moleculares. Materiales y mtodos: Muestras de soja con sintomatologa de Tizn de la hoja y Mancha ojo de rana se incubaron en cmaras hmedas a 25 C bajo ciclos alternados de luz. Verificado el crecimiento conidial se procedi al estudio de las estructuras de fructificacin y se realizaron cultivos monos-pricos en Agar Papa Dextrosa (APD) ().Los aislamientos obtenidos se estudiaron fenotipicamente a partir de los cultivos en APD y genotipicamente mediante la amplificacin y secuenciacin de la regin ITS (Internal Transcribed Spacer) del ADN ribosomal con los cebadores ITS4 e ITS5. El anlisis informtico de las secuencias se realiz con el programa Chromas y el Software Vector NTI suite 9. Simultneamente se procesaron C. kikuchii NBRC 6711 y C. sojina NBRC 6715. Resultados: Se obtuvieron 21 aislamientos, 11 se identificaron como C. kikuchii y 10 como C. sojina aislados de plantas
S. carpophila C. gloeosporioides P. terrestris P. capsici R. solani
0: no hay inhibicin; +: lixiviado inhibe dbilmente al hongo; ++: lixiviado inhibe fuertemente al hongo. La incorporacin de estircol a la cebolla produce un abono con buena proporcin de nutrientes pero sin capacidad antifngica. Cuando la cebolla se degrada anaerbicamente y en
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especial, al cortarla, se obtiene un lixiviado con capacidades antifngicas interesantes. Este lixiviado, in vitro, inhibe fuertemente el crecimiento de los cinco hongos utilizados en este ensayo.
P494 - 27182 EFICACIA GERMICIDA IN VITRO DE ALGUNOS DESINFECTANTES FRENTE A AISLAMIENTOS DE ORIGEN ANIMAL. GENTILINI, ELIDA; GRUPO COLABORADOR
F acultad de Veterinaria, Universidad de Buenos Aires Introduccin: En la prctica veterinaria, los antispticos y desinfectantes son utilizados con fines teraputicos locales, baos antispticos de pezones en ganado lechero, equipo de ordee, tanques, desinfeccin de ambientes, entre otros. Estos son utilizados por clnicas, bioterios, plantas elaboradoras de alimentos y para transporte de animales con cierto margen de seguridad. Objetivo: Recopilar la informacin existente sobre la eficacia germicida de algunos desinfectantes comerciales de uso convencional, frente a diferentes aislamientos clnicos provenientes de equinos y de perros. Materiales y Mtodos: Ensayos realizados con soluciones comerciales: Iodo Povidona 10% (IP), hipoclorito de sodio (ClOHNa - 80g de Cl/l), cloroxilenol 4,8% (P), clorhexidina 0,5% (CH), amonios cuaternarios al 15% (AC), frente a aislamientos de origen equino: Streptococcus equi (Se), Streptococcus zooepidemicus (Sz), Staphylococcus aureus (Sa), esporas de Clostriduim tetani (Ct), Pseudomonas aeruginosa (Pa), Escherichia coli (Ec), Salmonella spp. (S), Candida albicans (Ca), Rhodococcus equi (Re) y, Pa provenientes de infecciones en perros. La metodologa utilizada: test de Rideal-Walter modificado con agregado de materia orgnica (materia fecal equina estril y extracto de levadura al 5%). Resultados: IP: bactericida frente a Sz en 20 minutos sin diluir y para el resto de las bacterias, hasta dilucin 1/10. Present efecto esporicida lento, requiriendo 60 minutos de exposicin hasta dilucin 1/30. ClOHNa: efecto bactericida hasta dilucin 1/80. AC: poderosa accin bactericida sobre bacterias gram-positivas hasta 1/300. Esporicida y fungicida hasta 1/100. Sobre bacilos gram-negativos la accin se mantiene hasta 1/10. En dilucin 1/10, pierde accin frente a Pa. CH: Puro fue germicida y fungicida. P: efecto bactericida frente a Se, Sz, esporas de Ct hasta 1/300. Activo 1/100 frente a bacilos Gram negativos y Ca; diluido 1/10 frente a Sa y puro frente a Pa. Conclusin: La industria farmacutica ha desarrollado numerosos productos comerciales de accin microbicida, constituyendo una alternativa en la teraputica antiinfecciosa. Algunos compuestos no presentan toxicidad y su uso en piel y mucosas puede ser tolerado. Entre estos: IP y CH, de uso muy extendido en la clnica, como antisptico de pezones, en preparacin del campo quirrgico. Presentan desventajas: el primero produce reacciones cutneas en algunos animales y el segundo el elevado costo. Algunos compuestos son corrosivos como el hipoclorito de sodio; otros no lo son, pero su uso sobre mucosas puede ser irritante P.
to del hallazgo del cadver, ocurrido 25 das despus del deceso, el cual presentaba avanzado estado de descomposicin con las extremidades y el crneo parcialmente esqueletizados. El lugar del hallazgo, que corresponde a la provincia de Buenos Aires, presentaba charcos y vegetacin principalmente herbcea con predominancia de sorgo. Las temperaturas promedio durante ese perodo estuvieron entre 15,3 y 24,1 C, mientras que las precipitaciones variaron entre 0 y 41 mm. Las muestras fueron analizadas en el laboratorio mediante las tcnicas de cmara hmeda, dilucin y lavado de suelos. Las colonias obtenidas en cultivos in vitro fueron observadas al microscopio ptico y electrnico de barrido (MEB), e identificadas a nivel especfico. Mediante cmaras hmedas de partculas de suelo, se aisl e identific Dichotomomyces cejpii (Milko) Scott (Ascomycota, Eurotiomycetes). Con la tcnica de lavado de suelos, fueron establecidas las siguientes frecuencias de aparicin de las especies identificadas como: D. cejpii (42%), Talaromyces trachyspermus (Shear) Stolk y Samson (8%), Talaromyces udagawae Stolk y Samson (2%), Talaromyces flavus (Klocker) Stolk y Samson, (1%), Penicillium frequentans (Wehmer) Westling, (1%) Penicillium restrictum Gilman y Abbott (1%) y Penicillium purpurescens (Sopp) Raper y Thom (1%). Por medio de la tcnica de diluciones seriadas, se pudieron cuantificar 156+37,6x104 UFC de D. cejpii y 8,5+4,94x104 UFC de T. trachyspermus. Las especies pertenecientes al Phylum Ascomycota fueron dominantes en la muestra tomada bajo el cadver. En trabajos previos realizados en Japn, se menciona la presencia de hongos del Phylum Ascomycota, Clase Sordariomycetes, como especies relacionadas a la descomposicin temprana de restos humanos, mientras que las especies dominantes aqu, D. cejpii, T. trachyspermus, T. udagawae y T. flavus, corresponden a la Clase Eurotiomycetes. La micobiota hallada en este sitio result diferente a la descrita previamente para otros suelos de la provincia de Bs As. Esto podra estar relacionado con los compuestos nitrogenados que se incorporan al suelo a partir de la descomposicin del cadver. En el caso aqu presentado, el hallazgo de geo-hongos Eurotiomycetes concordara con la data de muerte de 25 das previos al hallazgo del cadver.
P496 - 27249 INHIBICIN DEL CRECIMIENTO DE Cercospora Kikuchii POR Bacillus spp. SOLDANO, ANABEL(1); VACCARI, MARIA CELIA(1); MAUMARY, ROXANA(2); LURA, MARIA CRISTINA(1); GONZALEZ, ANA MARIA(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas (UNL); (2) Facultad de Ciencias Agrarias (UNL) Introduccin: Cercospora kikuchii (Matsumoto & Tomoyasu) Gardner es un fitopatgeno que tiene una amplia distribucin mundial y es uno de los hongos prevalentes en la soja cultivada en la Provincia de Santa Fe, Argentina. El biocontrol, mediante el uso de bacterias, es considerado como una opcin para reducir el ataque de hongos a numerosos cultivos agrcolas y es una alternativa para evitar el uso de fungicidas que pueden afectar el agroecosistema y la salud del hombre. Algunas bacterias saprfitas tales como Bacillus spp., pueden utilizarse como agentes biocontroladores contra patgenos de plantas. No se disponen de datos de control biolgico sobre C. kikuchii en esta regin. Objetivos: Estudiar la capacidad de inhibicin del crecimiento de C. kikuchii por distintos aislamientos de Bacillus y seleccionar aqul con mayor potencial antagnico. Materiales y Mtodos: Se analizaron 7 aislamientos de Bacillus spp. provenientes de la rizosfera de plantas de soja sanas (B. cereus 82, B. cereus 88, B. megaterium 73, B. thuringensis 31, B. licheniformis 85, B. licheniformis 51, B. licheniformis 52) y uno obtenido a partir del ambiente (B. subtilis 94). Se ensayaron 2 aislamientos regionales de C. kikuchii (CK31 y CK43) y la cepa de coleccin C. kikuchii NBRC 6711 (CK6711). Se realiz un mtodo de cultivo dual: se efectuaron 8 toques equidistantes sobre placas de Agar Papa Dextrosa, con una suspensin bacteriana de 108 UFC/ml, alrededor de un cilindro de 10 mm de dimetro con crecimiento fngico. Como control se utilizaron placas con el hongo, sin las bacterias. A los 4, 8, 12 y 15 das de incubacin a 26 0,5 C se midi el dimetro del desarrollo fngico. Se calcul el porcentaje de inhibicin del crecimiento micelial luego de 15 das de incubacin.
P495 - 27219 HONGOS DE SUELO: POTENCIAL USO COMO HERRAMIENTA FORENSE. TRANCHIDA, MARIA C(1); CABELLO, MARTA N(1); ELIADES, LORENA A(1); BRAVO BERRUEZO, LUCAS E; CENTENO, NESTOR (2)
(1) Instituto de botnica Carlos Spegazzini, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de La Plata, (2) Universidad Nacional de Quilmes La descomposicin de un cadver es un proceso que lleva consigo una serie de cambios, en los cuales participan activamente organismos como vertebrados carroeros, bacterias, hongos y artrpodos, los cuales lo vuelven disponible para el ciclo de nutrientes, finalizando con la incorporacin de los restos al suelo. El estudio de los hongos presentes en los cadveres humanos y relacionados a cuerpos en descomposicin es escaso, pero la identificacin de las especies que participan en la descomposicin o se asocian a ella, resulta una herramienta til para estimar intervalos post-mortem. El objetivo de este trabajo fue identificar geo-hongos presentes en un sitio donde fue hallado un cuerpo humano en avanzado estado de descomposicin. Se colectaron muestras de suelo en contacto con el cuerpo al momen-
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Tambin se determin la velocidad de crecimiento y el tiempo de la fase de latencia, utilizando: r = (t - L). Donde r: crecimiento micelial (cm), : velocidad de crecimiento (cm/h), t: tiempo de cultivo (h), L: tiempo de la fase de latencia (h). En el anlisis estadstico de los resultados se aplic el test-T y el test LSD Fisher. Resultados: Las bacterias ensayadas ejercieron un efecto inhibitorio significativo (p= o < 0,05) y redujeron significativamente (p= < 0,05) la velocidad de crecimiento de CK43 y CK6711 respecto al control. B. cereus 88 y B.licheniformis 51 no causaron dichos efectos sobre CK31. B. subtilis 94 produjo el mayor porcentaje de inhibicin frente a CK31, CK43 y CK6711 (78,95%, 77,18% y 70,51%, respectivamente) y fue la nica bacteria capaz de incrementar significativamente el tiempo de la fase de latencia de las tres cepas fngicas estudiadas. La mayora de las bacterias estudiadas ejerci efecto inhibitorio in vitro frente a C. kikuchii. B. subtilis 94 fue el aislamiento que exhibi la mejor actividad antagnica al aplicar el mtodo de enfrentamiento de cultivos duales.
P497 - 27253 DETECCIN DE GENES VIP1 Y VIP2 EN CEPAS EXTICAS Y NATIVAS DE Bacillus thuringiensis MEDIANTE AMPLIFICACIN GNICA. ONCO, MARIA INES; PEREZ, MELISA; BENINTENDE, GRACIELA; SAUKA, DIEGO
Instituto de Microbiologa y Zoologa Agricola INTA La principal caracterstica de Bacillus thuringiensis es que produce durante la esporulacin uno o ms cuerpos cristalinos constituidos por protenas denominadas Cry que son txicas para larvas de insectos. Debido a su toxicidad selectiva alta y al impacto casi nulo que genera al incorporarlo al ecosistema bajo la modalidad de larvicidas biolgicos, constituye una alternativa viable a los insecticidas qumicos en el control de diversas plagas insectiles. Adems de las Cry, B. thuringiensis posee otros factores de virulencia que le confieren la capacidad de sobrevivir y multiplicarse dentro del husped, evadir su sistema inmune y producir una septicemia generalizada. Entre stos se encuentran un grupo de protenas llamadas Vegetative Insecticidal Proteins (Vip) que son expresadas durante la fase vegetativa de crecimiento de la bacteria. En particular, las Vip1 y Vip2 constituyen una toxina binaria con toxicidad para ciertos colepteros. La distribucin de los genes que la codifican no se conoce ampliamente, siendo nulo el conocimiento de su existencia en cepas nativas. Por esta razn, con el objetivo de aportar informacin sobre la presencia de estos genes en cepas exticas y nativas de B. thuringiensis, se desarrollaron 2 estrategias basadas en amplificacin gnica (PCR) empleando un par de cebadores especficos en cada caso. Se analizaron 50 cepas exticas y 36 nativas pertenecientes a la coleccin del IMYZA-INTA. La combinacin de genes vip1 y vip2 se detect simultneamente en 7 cepas exticas (14,0%) y en 1 nativa (2,7%). No se encontraron cepas con estos genes en forma individual. Se confirm la presencia de genes vip1 y vip2 en cepas exticas y nativas de B. thuringiensis. La posibilidad de disponer de cepas productoras de esta toxina binaria constituye una herramienta de potencial importancia en el biocontrol de colepteros de inters agropecuario.
se encuentran: la produccin de siderforos, de antibiticos, de enzimas hidrolticas de la pared celular de los hongos, las bacteriocinas y el cido cianhdrico. Los objetivos fueron determinar y comparar algunas de las caractersticas de las PGPRs y evaluar el efecto inhibitorio in vitro de los mismos sobre el crecimiento de hongos fitopatgenos. Los hongos habitualmente se cultivaron en medio PDA y las bacterias en medio TSA. Se determin la produccin por las bacterias de: cido indol actico (AIA), siderforos, cido cianhdrico, exopolisacridos y la solubilizacin de fosfato monoclcico y triclcico. Se determinaron las actividades lipasa, lecitinasa, celulasa, amilasa y caseinoltica. La determinacin de la inhibicin del crecimiento de los hongos por bacterias diferentes, se realiz en medio TSA al 25% de dos maneras. En la simultnea, las bacterias y los hongos se inocularon al mismo tiempo, mientras que en la no simultnea, las bacterias se inocularon previamente. Transcurridos 7 das de incubacin en la presencia de los hongos, se determin el porcentaje de inhibicin (PI). Con respecto a las caractersticas PGPRs se utilizaron diversos microorganismos pertenecientes a los gneros Pseudomonas (P), Azospirillum (A) y Serratia (S). La mayor productora de siderforos fue P. fluorescens, aislada de un producto comercial (PC), de cido cianhdrico P. aurantiaca y de exopolisacridos S. marcescens wf. Todos los gneros fueron productores de AIA. P. putida y tres cepas de P. fluorescens fueron buenas solubilizadoras de fsforo y en magnitud similar. Dos cepas de P. fluorescens y A no presentaron actividad proteoltica. Todas las bacterias fueron productoras de lipasa. P. fluorescens CHA0, A y S. marcescens fueron productoras de lecitinasa mientras que ninguna present actividad celulasa y amilasa. Los PI fueron siempre mayores en la prueba no simultnea. Con respecto a la prueba no simultnea, los mayores PI correspondieron a: P. fluorescens (PC)-Fusarium (F) solani, 70%; P. fluorescens (PC)F. verticilloides, 63%; P. putida-F. graminearum, 60%; P. fluorescens wcs 417r-F. virguliforme, 75%; P. fluorescens wcs 417r-Macrophomina phaseolina, 73%. En todos los casos, utilizando la prueba simultnea, con pocas excepciones, los PI fueron importantes y nunca inferiores al 50%. En base a las caractersticas determinadas, no se puede establecer una correlacin estrecha entre las mismas y el efecto inhibitorio.
P499 - 27283 DIVERSIDAD GENTICA DE POBLACIONES DE Fusarium Graminearum PRESENTES EN TRIGO DE DIFERENTES AMBIENTES DE LA REGIN PAMPEANA. KIKOT, GISELE(1); CONSOLO, FABIANA(2); ROJO, RODRIGO(3); SALERNO, GRACIELA(2); ARAMBARRI, ANGELICA(4); GASONI, LAURA(3); MOSCHINI, RICARDO(4); ALCONADA, TERESA(1)
(1) CINDEFI, Universidad Nacional de La Plata (2) Fundacin para Investigaciones Biolgicas Aplicadas, Mar del Plata (3) IMYZAINTA, (4) Instituto de Botnica Carlos Spegazzini, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de La Plata (5) CIRN-INTA La Fusariosis de la espiga de trigo (FET) afecta al rendimiento y calidad de la produccin de granos. En la Argentina, la severidad de la enfermedad vara segn la ubicacin geogrfica, disminuyendo de NO a SO. El agente etiolgico de la FET es atribuido principalmente a Fusarium graminearum. Diferentes anlisis filogenticos han demostrado la existencia de un alto grado de diversidad dentro de esta especie, lo cual puede relacionarse con su grado de virulencia. Objetivo: analizar la diversidad gentica entre poblaciones de F. graminearum de distintas localidades trigueras en base a mtodos moleculares. Materiales y Mtodos: Los aislamientos de F. graminearum se obtuvieron a partir de muestras de trigo (compuesta de 3 repeticiones, cosecha mecnica) de un nmero reducido de variedades comerciales sembradas en el marco de la Red de ensayos conducidos por las EEA INTA M. Jurez, Pergamino, Oliveros, Paran, C. del Uruguay, Balcarce y Barrow (Chacra integrada), en las campaas 2006 y 2007. Se analiz la relacin gentica entre los aislamientos mediante la tcnica de PCR seguida de RFLP (restricton fragments length polymorphisms) de la regin intergnica (IGS) del ARN ribosomal, utilizando 6 enzimas de restriccin y la tcnica ISSR (Inter-simple sequence repeat) utilizando 8 pares de
P498 - 27277 CARACTERSTICAS DE MICROORGANISMOS PROMOTORES DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS (PGPRS) Y SU EFECTO INHIBITORIO IN VITRO SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FITOPATGENOS. GONZALEZ, N; IRIARTE, H; ROSAS, S; BERGESSE, J
Universidad Nacional de Ro Cuarto El control biolgico de las enfermedades de las plantas, provocadas por microorganismos patgenos, mediante la utilizacin de microorganismos antagonistas, ha surgido como una alternativa a la utilizacin de agentes qumicos, que generan un importante impacto medioambiental. Dentro de los mecanismos de promocin del crecimiento se encuentran los directos y los indirectos. Los directos corresponden a: fijacin del nitrgeno, produccin de fitohormonas, inhibicin de la sntesis de etileno, aumento de la permeabilidad de la raz y solubilizacin de fosfatos. Dentro de los indirectos, adems de la competencia en la rizsfera,
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primers. A partir de las imgenes capturadas en geles de agarosa al 1.5% se compararon de a pares los perfiles de bandas generados, se contruyeron matrices de similitud utilizando el coeficiente de Nei y Li, y luego dendrogramas por el mtodo de agrupamiento UPGMA (agrupamiento promedio no ponderado de las medias aritmticas). Resultados: Se obtuvieron 55 aislamientos monospricos a partir de las muestras de trigo. Los respectivos cultivos fueron identificados taxonmicamente de acuerdo a tcnicas morfolgicas y moleculares y posteriormente analizados en cuanto a variabilidad intraespecfica. A partir de las tcnicas PCR-RFLP y ISSR se obtuvieron 20 y 15 haplotipos respectivamente. El nmero de bandas analizadas para PCR-RFLP fueron 41 y para ISSR fueron 87, las cuales tuvieron un peso molecular entre 200 y 1500 pb. Los dendogramas obtenidos para ambas tcnicas muestran dos grandes grupos filogentcos, pero de distinta conformacin. Las tcnicas moleculares utilizadas permitieron detectar variabilidad gentica intraespecfica en base a los patrones de bandas o haplotipos generados. La interpretacin de los agrupamientos obtenidos en los dendogramas revelan que la tcnica PCR-RFLP result ms efectiva que la tcnica ISSR para evaluar diversidad en el presente estudio. - Perspectivas: Se ha iniciado el anlisis de la variabilidad intraespecfica a partir de la tcnica de espectroscopia vibracional FT-IR. Se han comenzado los ensayos de patogenicidad bajo condiciones controladas para determinar el grado de virulencia de los aislamientos. La profundizacin en cuanto a la caracterizacin de poblaciones de F.graminearum nos permitir avanzar en el conocimiento de la enfermedad, tendiente a reducir las prdidas econmicas que ocasiona este importante fitopatgeno en nuestro pas.
cuando se combin con 1 y 2 g/mL de surfactina. Se determin que en 4 cepas hubo sinergismo y en 1 parcial sinergismo. Conclusin: La mezcla de dos compuestos naturales como surfactina con el EH presentaron un importante efecto sinrgico sobre P. larvae y constituira una alternativa interesante y no contaminante para el sector apcola.
P501 - 27322 ACTIVIDAD BIOLGICA DE METABOLITOS EXTRACELULARES PRODUCIDOS POR AISLADOS DE Trichoderma spp. SOBRE Botrytis Cinerea. HAPON, MARIA VANDA(1,2,3); PIZZUOLO, PABLO(1); LUCERO, GABRIELA(1,3); BOITEUX, JOANA(1)
(1) Ctedra Fitopatologa, FCA, Universidad Nacional de Cuyo; (2) rea Biologa, ICB, Universidad Nacional de Cuyo; (3). CONICET, Mendoza Botrytis cinerea es el microorganismo ms importante involucrado en la Podredumbre de los racimos de la vid. Para su control se utilizan fundamentalmente fungicidas de sntesis. Actualmente se prioriza a nivel mundial el uso de prcticas agrcolas que produzcan un mnimo impacto negativo sobre el medio ambiente Adems, a nivel de exportacin existe tolerancia cero a la presencia en los alimentos de elementos potencialmente nocivos a la salud. Esto motiva la continua bsqueda de alternativas para su control. Una de ellas consiste en el empleo de agentes de biocontrol, destacndose entre otros, los hongos del gnero Trichoderma. Algunos de ellos tienen la capacidad de producir metabolitos extracelulares como micotoxinas (gliotoxin, viridin, gliovirin, etc.) y enzimas (celulasas, quitinasas, glucanasas, etc), entre otras sustancias; la mayora de las cuales son potenciales armas ofensivas contra otros microorganismos. A su vez, stos hongos pueden emplear como mecanismo de ataque contra otros organismos el micoparasitismo y la competencia por espacio y nutrientes. Su uso en aplicaciones foliares en viedos de Cuyo, ha presentado resultados errticos. El empleo, en Mendoza, de productos comerciales obtenidos en pases con condiciones climticas muy dismiles a las nuestras, podra ser la causa de estos resultados variables. Los objetivos de este trabajo fueron: Determinar la capacidad de aislados autctonos de Trichoderma spp. de producir sustancias extracelulares que inhiban la germinacin de conidios de B. cinerea y determinar la variacin temporal en la produccin de estas sustancias. Para esto se cultivaron 8 aislados de Trichoderma spp., aisladas en la regin Cuyo, en medio lquido Czapec Dox; por 7, 15 y 21 das. Para la determinacin de su capacidad de inhibicin se emplearon mezclas de reaccin formadas por una alcuota de los filtrados culturales obtenidos y una suspensin de conidios del patgeno. En el control se reemplaz el filtrado cultural por el medio base estril. Las pruebas se realizaron por triplicado. La variable medida fue porcentaje de germinacin y se calcul el porcentaje de inhibicin de germinacin con respecto al testigo. Todos los aislados fueron capaces de inhibir en forma variable la germinacin de los conidios de B. cinerea diferencindose estadsticamente entre ellos (p menor o igual a 0,05). La inhibicin tom valores comprendidos entre 100% y 25%. En cuanto a la variacin temporal de las sustancias inhibitorias de los filtrados culturales se observ una tendencia a una mayor actividad inhibitoria a los 15 das de cultivo, pero no se diferenciaron estadsiticamente. Existen aislados de Trichoderma spp. autctonos capaces de producir metabolitos extracelulares con accin fungisttica contra B. cinerea. Esta accin qued demostrada a travs de la inhibicin de la germinacin de sus conidios en mayor o menor grado. Esta capacidad de inhibicin de los aislados de Trichoderma spp. podra ser empleada para la seleccin de microorganismos ms eficientes en el biocontrol de B. cinerea.
P500 - 27285 EFECTOS SINRGICOS DE SURFACTINA SINTETIZADA POR Bacillus subtilis C4 Y DERIVADOS DE Achyrocline satureioides SOBRE LA VIABILIDAD DE Paenibacillus larvae. SABATE, DANIELA CONSTANZA(1); GONZALEZ, MARIA JULIANA(2); MARIOLI, JUAN MANUEL(2); AUDISIO, MARCELA CARINA(1)
(1) INIQUI-CONICET, UNAS, (2) Universidad Nacional de Ro Cuarto Introduccin: Loque Americana (AFB) es una enfermedad que afecta a la abeja melfera en los estados de larva o pupa y es causada por la bacteria esporulada Paenibacillus larvae. Una de las medidas de control es el uso de antibiticos como Oxitetraciclina (OTC). Sin embargo la aparicin de cepas resistentes a estos compuestos hace necesaria la bsqueda de alternativas que puedan ser utilizadas en su reemplazo. Objetivo: Determinar el efecto de la combinacin del lipopptido surfactina, sintetizado por Bacillus subtilis C4, con derivados vegetales provenientes de Achyrocline satureioides sobre la viabilidad de diferentes cepas de P. larvae. Materiales y Mtodos: Se estudi el efecto antibacteriano de un aceite esencial (AE), extracto en hexano (EH) y en benceno (EB) obtenidos a partir del vegetal A. satureioides sobre cepas de P. larvae y se seleccion el derivado que present un mayor efecto antagnico sobre dicha bacteria. Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) del antibitico OTC, de la surfactina y del derivado vegetal seleccionado. Surfactina y el derivado vegetal seleccionado fueron utilizados para realizar pruebas de sinergismo por la tcnica Checkerboard (tablero de ajedrez) empleando concentraciones por encima y por debajo de las CIMs individuales de ambos compuestos. Se calcularon las concentraciones fraccionales inhibitorias (CIF) y el ndice CIF sobre las cepas de P. larvae. Los resultados fueron representados mediante isobologramas. Resultados: El EH present mayor efecto antagnico por lo que se seleccion para estudios posteriores. Cuando se analizaron las CIMs de los diferentes compuestos se observ que el 80% de las cepas presentaron CIMs de 0,5 g/ mL y el resto de 1 g/mL frente a OTC. La CIM de surfactina fue de 32 g/mL en todos los casos, y las CIMs para el EH estuvieron en un intervalo de 16 g/mL a 32 g/mL. En la mezcla de compuestos naturales se observ inhibicin del patgeno a dosis inferiores a sus CIMs individuales debido a que la concentracin de surfactina necesaria para inhibir 4 cepas disminuy de 32 a 1 g/mL combinada con concentraciones del EH que variaron entre 4 y 16 g/mL; y la concentracin del EH disminuy a 4 g/mL
P502 - 27335 INDUCCIN DE LA SNTESIS DE CALOSA MEDIADA POR Azopirillum brasilense EN PLANTAS DE FRUTILLA (Fragaria ananassa). TORTORA, MARIA LAURA(1); GUERRERO MOLINA, MARIA FERNANDA(1); DIAZ RICCI, JUAN CARLOS(2); PEDRAZA, RAUL OSVALDO(1)
(1) FAZ-Universidad Nacional de Tucumn, (2) INSIBIO-Universidad Nacional de Tucumn -CONICET
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Existen distintos gneros de bacterias promotoras del crecimiento de las plantas (PGPB) que al asociarse con las races son tambin capaces de inducir diferentes mecanismos de resistencia, protegiendo a las plantas frente a microorganismos fitopatgenos. Debido a esto, muchas PGPB son consideradas una alternativa en el control de enfermedades en cultivos de importancia agrcola. Azospirillum es una de las PGPB ms estudiadas y numerosos mecanismos han sido propuestos para explicar su capacidad de biocontrol de enfermedades, entre ellos la competencia por nutrientes, antibiosis y la produccin de siderforos. Sin embargo, algunos autores han reportado que esta bacteria no es capaz de inducir mecanismos de resistencia sistmicos. La calosa es un polmero de glucosa con enlaces 1-3 cuya acumulacin refuerza las paredes celulares, constituyendo un mecanismo de resistencia que permite a las plantas defenderse frente al ataque de patgenos. El objetivo del presente trabajo fue investigar la deposicin de calosa sobre las paredes celulares de hojas de plantas de frutilla, como un mecanismo de resistencia sistmico inducido por A. brasilense frente a la infeccin con Colletotrichum acutatum M11, agente causal de la antracnosis en frutilla. Para ello, plantas de frutilla cv. Camarosa fueron inoculadas por riego con la cepa A. brasilense REC3 y posteriormente infectadas por pulverizacin foliar con C. acutatum M11. Los tratamientos fueron: i) plantas tratadas solo con agua destilada estril, ii) plantas infectadas con M11, iii) plantas inoculadas con REC3 y , iv) plantas inoculadas con REC3 e infectadas con M11. La determinacin de calosa se realiz utilizando la tcnica de tincin con azul de anilina. Para ello, las hojas de las plantas inoculadas y control fueron decoloradas en EtOH 96 durante 24 hs, y lavadas utilizando buffer K2HPO4 67 mM pH 12. Los lavados se realizaron durante 30 min utilizando cantidades crecientes de buffer y decrecientes de EtOH 96. Luego las hojas fueron teidas por inmersin en una solucin 0,05% (p/v) de azul de anilina en buffer K2HPO4 67 mM pH 12 durante 1 hora. Mediante microscopa de fluorescencia (Olympus BX51, filtro U-MWU2) se observaron las deposiciones de calosa como puntos verdes brillantes sobre las hojas. Los resultados mostraron que las hojas de plantas inoculadas con A. brasilense REC3 y conjuntamente con el hongo presentaron depsitos de calosa, mientras que en las hojas tratadas con agua y con C. acutatum M11 no se observ la presencia de este compuesto. Esto sugiere que A. brasilense REC3 al asociarse con las races de las plantas de frutilla es capaz de inducir la deposicin foliar de calosa, constituyendo un mecanismo de defensa frente patgenos fngicos. Esto podra explicar los resultados obtenidos en trabajos previos donde se observ que plantas de frutilla inoculadas con la cepa REC3 y posteriormente infectadas con el patgeno virulento C. acutatum M11, presentaron una disminucin en la severidad de los sntomas de la antracnosis.
son depositadas sobre las rocas donde habitan, sin ningn tipo de adhesin y perduran libres en el intermareal hasta su eclosin. El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de biopelicula de bacterias epibioticas sobre la masa de huevos de S. lessoni y analizar si esta masa de huevos asociada a bacterias posee actividad antimicrobiana contra Escherichia coli. Masas de huevos de S. lessoni fueron colectadas en playa Waikiki, Mar del Plata, Buenos Aires (38 04 S; 57 32 O) y colocadas en agua de mar estril. En laboratorio, estas fueron lavadas enrgicamente 5 veces utilizando vortex entre cada lavado. Masas de huevos se colocaron en el centro de placas de Petri con medio Marine Agar 2216 y fueron incubadas a 18 C por 3 das. Para el anlisis por microscopia electrnica de barrido, masas de huevos fueron deshidratadas y finalmente fijadas. Las muestras fueron metalizadas con Ag/Pd y se observaron con un microscopio Jeol JSM 6460LV. Por otro lado 1) masas de huevos intactas o 2) masas de huevos homogenizadas fueron colocadas en placas de Petri conteniendo un csped de E. coli en medio LB. Como controles se utiliz agua esteril o Kanamicina (2,5 mg/mL). Se observ gran crecimiento de bacterias alrededor de las masas de huevos en placas medio Marine Agar 2216. Los reiterados y enrgicos lavados realizados para eliminar microorganismos dbilmente asociados o arrastrados involuntariamente en la toma de la muestra no pudieron quitar los microorganismos, indicando fuerte adherencia a la superficie de la masa. La microscopia electrnica de barrido mostr la presencia de una biopelicula sobre la superficie, observndose adems la presencia de material extracelular microfibrilar de unin entre las estas. Por otro lado, las masas de huevos intactas u homogenato no mostraron actividad antimicrobiana, indicando la ausencia de este mecanismo contra E. coli en particular. Los resultados reportados muestran la presencia de biopelicula sobre la masa de huevos de S. lessoni y sirven como lnea de base para estudiar el rol de esta epibiosis bacteriana en la biologa de este organismo.
P504 - 27356 HONGOS PATGENOS DE INSECTOS, ESTUDIO DE SU INTERACCIN CON ENEMIGOS NATURALES. SCORSETTI, ANA CLARA; CABELLO, MARTA N; PELIZZA, SEBASTIAN
Instituto de botnica Carlos Spegazzini, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de La Plata Entre las principales plagas que afectan a los cultivos hortcolas se encuentran los fidos (Hemiptera: Aphididae). Estos insectos son causantes de importantes daos debido a que interfieren con los procesos fisiolgicos de desarrollo y a la transmisin de diversos virus fitopatgenos. Entre los microorganismos utilizados para el control biolgico de insectos, los hongos constituyen un importante grupo de patgenos de insectos y otros artrpodos plaga Hasta el momento 16 especies de hongos entomopatgenos han sido citadas en el mundo infectando fidos en la naturaleza. Las caractersticas bio-ecolgicas de los hongos entomopatgenos, as como la capacidad de los mismos de provocar en la naturaleza altos niveles de epizootias, los convierten en excelentes candidatos para ser utilizados como agentes de control biolgico de insectos plagas. Diversas especies de enemigos naturales pueden interactuar sinrgicamente, aditivamente o antagonistamente unas con otras. Los hongos entomopatgenos en conjunto con insectos depredadores podran ser empleados en estrategias de control biolgico. Con el objetivo de evaluar la patogenicidad de los hongos entomopatgenos contra fidos y sus principales enemigos naturales se han realizados pruebas de patogenicidad en laboratorio contra el fido Myzus persicae, utilizando aislamientos de hongos obtenidos en estudios previos y depositados en la Coleccin Micolgica del Instituto Spegazzini (Ascomycota: Hypocreales). Fueron utilizados distintos aislamientos de las especies: Beauveria brongniartii, Lecanicillium longisporum, L. muscarium, L. lecanii, Isaria fumosorosea e I. javanica). Los bioensayos fueron realizados para estimar la actividad biolgica de cada uno de los hongos entomopatgenos siguiendo la metodologa descrita por Goettel & Inglis (1997) utilizada para hongos Hypocreales. Los resultados de los mismos variaron entre un 88% y un 100% de mortalidad. Estos entomopatgenos fueron utilizados en distintas dosis contra todos los
P503 - 27345 BIOPELICULA DE BACTERIAS EPIBIOTICAS SOBRE LA MASA DE HUEVOS DEL MOLUSCO PULMONADO MARINO Siphonaria lessoni. ARRUEBARRENA DIPALMA, ANDRES(*1,3); NUEZ, JESUS DARIO(*2,3)
(1) Area Biomolecular, FCA-INTA, Balcarce; (2) Lab. de Bioecologa de Crustceos y Moluscos, Dpto. Cs. Marinas, FCEyN, Universidad Nacional de Mar del Plata; (3) CONICET (*)ex aequo. Las biopeliculas bacterianas pueden ser definidas como un conjunto de microorganismos mono- o multi-especfico unidos a una superficie biotica como abiotica. En ambientes acuticos virtualmente todas las superficies estn colonizadas por bacterias. As mismo las superficies mucosas de huevos y larvas sirven como sustrato para microorganismos marinos patgenos como no patgenos. Uno de los mecanismos utilizado por algunos moluscos para evitar la colonizacin de bacterias patgenas es la defensa qumica antimicrobiana. Por otro lado, la presencia de biopelcula de bacterias no patogenas sobre estas superficies podra ser importante para la biologa de estos moluscos, aspecto no estudiado en profundidad aun. Siphonaria lessoni es una especie netamente intermareal que habita costas rocosas sobre mejilln, grietas en rocas y pozas de marea. Presenta un desarrollo indirecto con una fase larvaria libre. Las masas de huevos
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estadios del Coleoptero Eriopis connexa. Los resultados variaron segn las especies y el estadio entre 0% (Lecanicillium muscarium) y 54% (Beauveria brongniartii). El estadio ms susceptible fue la larva I, siendo los adultos los menos susceptibles. Estos resultados demuestran que distintos enemigos naturales pueden ser usados en forma conjunta para un efectivo control de plagas.
P505 - 27357 BIOCONTROL DE Penicillium POR Bacillus. BENITEZ AHRENTDS, MR; CARRILLO, L
Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Jujuy Los objetivos fueron determinar la accin antagnica de colonias y lipopptidos de Bacillus ssp. frente a patgenos post-cosecha de ctricos, in vitro e in vivo. Se aislaron cepas de Bacillus de suelo y superficies de ctricos sobre agar nutritivo con sulfato de manganeso. Se identificaron mediante pruebas bioqumicas y morfolgicas segn el Bergeys Manual of Systematic Bacteriology. Se cultivaron en medio lquido sacarosa asparagina sales a 28 C por 72 hs con agitacin y los lipopptidos se precipitaron a pH 2, resuspendieron en lcali diludo, extrajeron con cloroformo metanol (2 + 1) y determinaron por cromatografa en capa fina usando como testigo una cepa productora de surfactina e iturin A. Se prepararon suspensiones de Penicillium digitatum, P. italicum y P. ulaiense con 10000 conidios/mL. Los ensayos in vitro de la accin inhibitoria de las colonias bacterianas y las soluciones de lipopptidos sobre el desarrollo de los hongos se hicieron en agar malta levadura. En las pruebas in vivo, segn diseo completamente aleatorizado, los frutos de Citrus sinensis (variedad Valencia late) fueron desinfectados y cada unidad fue rociada con los extractos (80 g lipopptidos/mL). Se dej secar y se hicieron 3 punciones de 4 mm de profundidad mediante una aguja cargada con la suspensin de conidios. Se determin el rea de dao a las 96 y 168 horas a temperatura ambiente. Los ensayos se sometieron a ANOVA y test de Tukey con p = 0,05 y p = 0,01. Se seleccionaron los aislados bacterianos con un halo mayor a 1 cm en los ensayos in vitro, uno se identific como B. licheniformis (B2) y dos pertenecian al grupo B. subtilis (B3 y B1). Entre otros lipopptidos, B1 produca bacilomicina e iturin A, B2 fungicina y B3 surfactina e iturin A. Los extractos contenan 0,42 (B1), 0,30 (B2) y 0,54 (B3) mg lipopptidos/mL. En las pruebas in vitro con lipopptidos, el dimetro de P. digitatum se redujo casi 50% con los tratamientos, sin diferencias estadsticas entre ellos. Frente a P. italicum no haba diferencias estadsticas entre los extractos de B1 y B2 que redujeron las colonias en 41 a 36% respectivamente y el de B3 lo hizo en 50% respecto del testigo. En el caso de P. ulaiense los extractos de B1 y B3 no presentaron diferencias estadsticas y fueron capaces de inhibirlo en 20 y 30% respectivamente, mientras que el de B2 lo inhibi en 53% mostrando diferencias significativas frente a los anteriores. En los ensayos in vivo con los lipopptidos, el test de Tukey revel diferencias altamente significativas entre los 3 tratamientos sobre P. digitatum, los que mostraron un rea afectada promedio de 25% (B1), 12% (B2) y 6,2% (B3) del fruto. No existieron diferencias significativas en el rea afectada por P. italicum entre los tratamientos de B1 (4,4%) y B3 (3,8%), mientras que B1 y B2 (1,2%) presentaron diferencias altamente significativas. No se registr desarrollo de P. ulaiense en los tratamientos con los 3 extractos. Los lipopptidos obtenidos de los aislados de Bacillus controlan in vitro e in vivo el desarrollo de los Penicillium patgenos postcosecha de ctricos.
agrcola, pueden producir modificaciones en los procesos microbianos del suelo. Los perfiles fisiolgicos de las comunidades microbianas (CLPP) obtenidos a travs de la metabolizacin de diferentes sustratos, permiten detectar cambios en respuesta al ambiente edfico. El objetivo del presente trabajo fue evaluar mediante el sistema BD Oxygen Biosensor la influencia del uso de la tierra y la topografa en los CLPP. El estudio se realiz en Argiudoles tpicos en la cuenca del Arroyo del Tala (San Pedro, Bs As). Se analizaron los CLPP de lotes con cultivos de Soja (Glycine max) en siembra directa (S), y pastizal natural (PN), en dos posiciones del relieve: loma (L) y bajo (B). El suelo se diluy en agua destilada estril y se inocularon placas BD-Oxy, previamente diseadas con la adicin individual de soluciones de manosa, cido cumrico, asparagina (50g/mL), y un control. Las placas se incubaron a 30C 24 h, cuantificndose la fluorescencia con un fluormetro Dynex MFX a intervalos de 15 minutos a 604 nm. Se registraron y analizaron (ANOVA y Test de Tuckey p<0,05 para separacin de medias) los mximos picos de fluorescencia normalizada (NRFU) y el tiempo a la mnima respuesta (TMR). Tabla. Intensidad (NRFU) y Velocidad (TMR) de respuesta de las comunidades microbianas ante el agregado de distintos sustratos. Se encontraron diferencias significativas entre L y B, y entre S y PN en NRFU y TMR. El cido cumrico, seguido por asparagina, estimul el consumo de oxgeno (mayores valores de NRFU) en PN respecto de S y en la posicin de B. El cido cumrico, a pesar de ser una estructura compleja, mostr una alta actividad, pero debido a su estructura compleja y a que la molcula carece de N, la velocidad de reaccin (TMR) fue mayor que en asparagina. Los resultados muestran un gradiente topogrfico para la actividad microbiana, consecuente con el alto background de carbono encontrado en situacin de relieve correspondiente al B, debido a la deposicin de material proveniente de las posiciones ms altas.
P507 - 27400 BIOFILMS FOTOTRFICOS Y SU RELACIN CON EL AMBIENTE. GOMEZ DE SARAVIA, SANDRA(1, 2); FONTANA, JUAN MARTIN(1); GUIAMET, PATRICIA(1, 3)
(1) Instituto de Investigaciones Fisicoqumicas Tericas y Aplicadas (INIFTA), Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP, CCT La Plata- CONICET; (2) Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Universidad Nacional de La Plata. CICBA; (3) Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de La Plata. CONICET Introduccin. Los biofilms fototrficos pueden desarrollar sobre las superficies de construcciones. Las caractersticas del sustrato y factores ambientales como humedad, temperatura y luz, influyen en el desarrollo de los mismos. Otro factor de singular importancia es la contaminacin atmosfrica caracterstica de los cascos urbanos. Los compuestos qumicos en una atmsfera contaminada incluyen, SO4, NO3, NH3, provenientes principalmente de la combustin de los automviles. Estos contaminantes son nutrientes para las microalgas. OBJETIVO. El objetivo de este trabajo fue comparar la formacin de biofilms fototrficos sobre construcciones ubicadas en reas urbanas de la ciudad de La Plata con los biofilms formados sobre construcciones ubicadas en reas rurales. Materiales y Mtodos. Las muestras fueron tomadas de ladrillos rojos, que son un sustrato muy adecuado para el crecimiento de los biofilms por su porosidad y consecuentemente por la caracterstica de retener humedad. La toma de muestras se realiz utilizando tcnicas no destructivas. El muestreo se llev a cabo con el auxilio de una lupa de mano y un bistur, con el cual se rasp una superficie de 2 cm. Las muestras se conservaron en formol. La revisin de cada una de las muestras incluy la descripcin morfolgica y dibujos de cada una de las especies encontradas, utilizando un microscopio ptico equipado con una cmara clara. La informacin obtenida se analiz consultando claves de sistemtica y bibliografa especializada. Resultados. Once gneros de algas eucariotas y cinco de cianobacterias fueron identificados en las construcciones del rea urbana. En las construcciones de reas rurales se determinaron solo tres gneros de cianobacterias. Las cianobacterias encontradas en el rea urbana, no pueden fijar el nitrgeno atmosfrico. Los tres
P506 - 27390 USO DEL SUELO Y POSICIONES TOPOGRFICAS: SU INFLUENCIA EN LOS PERFILES FISIOLGICOS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS. COMESE, ROMINA VIVIANA(1); GOMEZ, ELENA DEL VALLE(2); CONTI, MARTA E(1)
(1) Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires, (2) Universidad Nacional de Rosario Los microorganismos responden sensiblemente a cambios en el ambiente, por lo que constituyen indicadores potenciales de calidad de suelo. La redistribucin espacial de materia orgnica y mineral, y humedad, determinada por la topografa y el manejo
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gneros de cianobacterias de las zonas rurales son fijadoras de nitrgeno. Conclusiones. Estos resultados muestran la mayor competitividad de las especies fijadoras de nitrgeno en los sitios donde su disponibilidad es limitada. Al mismo tiempo, la existencia de algas eucariotas y cianobacterias fijadoras de nitrgeno no se puede relacionar directamente con el flujo de nutrientes de la atmsfera contaminada.
P508 - 27421 COMUNIDADES MICROBIANAS RIZOSFRICAS EN CULTIVOS DE COBERTURA SECADOS CON GLIFOSATO. ESCOBAR ORTEGA, J; D AURIA, F; GATICA, M S; DI SALVO, L P; GARCIA DE SALAMONE, I E
Ctedra de Microbiologa Agrcola y Ambiental, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires (FAUBA) Los cultivos de cobertura (CC) son una alternativa tecnolgica para mejorar las propiedades fsicas y qumicas de los suelos. Para su secado comnmente se utiliza el herbicida glifosato. En este sentido, es preciso evaluar el efecto de las interacciones entre los CC y el glifosato sobre las comunidades microbianas rizosfricas (CMR). Por ello se condujo un ensayo en la localidad de 30 de Agosto, Buenos Aires. El diseo fue DBCA con arreglo factorial. Los factores fueron los 3 CC: centeno var. Quehu; avena: var. Aurora y soja contina sin CC (testigo), y 2 niveles de fertilizacin: 0 y 46 kgN/ha aplicado a la siembra. Se muestre suelo rizosfrico en dos momentos de secado: Julio y Septiembre en dos profundidades de 0-10 y 10-20 cm. en tres oportunidades para cada momento: antes del secado, luego de ste y justo previo a la cosecha de soja. Se obtuvieron los perfiles de uso de fuentes carbonadas mediante anlisis multivariado de Componentes Principales, e ndices de Diversidad de Shannon-Weaver (H). El perfil de uso de las fuentes carbonadas de las CMR present diferencias significativas (DS) (p: 0.05) para los dos momentos de secado. Tambin se observaron DS en las CMR de los distintos muestreos en ambos momentos de aplicacin del glifosato. El anlisis de las posibles interacciones fue significativo para las CMR en todos los casos. En el primer momento de secado, en el muestreo antes de la cosecha de soja, se observ que las CMR presentan DS con respecto a los dos muestreos anteriores. En cambio, en el segundo momento de secado, el muestreo despus de la aplicacin de glifosato, mostr DS con respecto a los otros dos muestreos. El efecto de la fertilizacin sobre la fisiologa de las CMR se observ solamente en el primer momento de secado antes y despus de la aplicacin del glifosato, pero este se anula previo a la cosecha de soja donde se evidencia el efecto de la profundidad. El ndice de diversidad H del primer momento de secado fue igual a 1.96, significativamente mayor que el valor 1.72 obtenido en septiembre. En julio, antes de la aplicacin de glifosato, la rizosfera de centeno present el mayor ndice H que difiri del obtenido para el suelo testigo. En cambio en el segundo momento de secado la diferencia se observ antes de la cosecha de soja y los valores de este ndice fueron significativamente menores. El anlisis de las interacciones entre muestreos, CC, fertilizacin y profundidad mostr DS para el ndice H en ambos momentos de secado. La presencia de los CC modifica la fisiologa de CMR y el ndice de diversidad H evidencindose efectos negativos de la aplicacin del glifosato solo en forma temporaria para un ciclo productivo.
llo y actividad de la microflora. El objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia sobre el suelo de dos especies arbreas implantadas, con distinta composicin del residuo vegetal aportado al suelo. El suelo considerado est clasificado como Andisol y est ubicado en la Estacin Forestal de Treveln, Chubut, Argentina, Lat. 43 Sur, Longitud 71 31 Oeste, altitud 470 m s.n.m. Las muestras se extrajeron de suelo superficial de dos parcelas de bosque implantado con una especie dominante cada una: Pino radiata (Pinus radiata D. Don.) y Roble europeo (Quercus robur) con igual tiempo de implantacin. Se determin Carbono orgnico (Corg) y porcentajes de lignina y celulosa foliar en el residuo. Adems se evalu respiracin microbiana, actividad de la enzima deshidrogenada, diversidad funcional de las comunidades microbianas asociadas y el ndice de diversidad de Shanon Weaver (H). Se cuantificaron hongos cultivables, bacterias amilolticas y actinomicetes. Los datos se analizaron con el programa estadstico INFOSTAT. Los valores de respiracin microbiana y Corg resultaron significativamente superiores en el suelo de la especie roble. No se encontraron diferencias significativas entre los valores de deshidrogenada medidos en el suelo debajo de ambas especies. Las bacterias amilolticas y los actinomicetes totales dieron mayores valores en el suelo debajo de roble, pero los hongos se presentaron en menor nmero en esta especie. El contenido de lignina foliar y la relacin lignina-celulosa obtenidas fueron mayores para el material vegetal proveniente de la especie pino radiata. El anlisis de componentes principales mostr variaciones significativas en la fisiologa de las comunidades microbianas asociadas a estas dos especies forestales. La microflora asociada a pino radiata utiliz ms dextrosa y celobiosa mientras que las comunidades microbianas asociadas al roble utilizaron ms fenilalanina. Por otra parte el ndice de diversidad H de la microflora fue significativamente mayor para pino radiata. Los residuos de la especie roble poseen menor contenido de sustancias recalcitrantes como lignina, y esto asociado al mayor desarrollo de microorganismos cultivables podra favorecer una mayor descomposicin del residuo vegetal aportado al suelo y as a una mayor acumulacin de Corg. Sin embargo las propiedades del residuo de pino radiata favorecen una mayor diversidad funcional de la comunidad microbiana asociada a esta especie forestal.
P510 - 27500 DETECCIN DE Cercospora Kikuchii POR UNA TCNICA MOLECULAR EN PLANTAS DE SOJA INOCULADAS EXPERIMENTALMENTE. SANTOS, MI(1); LATORRE RAPELA, MG(1); MAUMARY, R(2); MARCIPAR, I(1); LURA, MC(1)
(1) Facultad de Bioqumica y Cs. Biolgicas, Universidad Nacional del Litoral (2) Facultad de Cs. Agrarias, Universidad Nacional del Litoral Entre los factores que limitan la productividad de la soja se encuentran las enfermedades producidas por el gnero Cercospora, las cuales ocasionan severas reducciones del rendimiento y calidad, con el consecuente impacto negativo en la produccin y rentabilidad del cultivo. El desarrollo de un mtodo de diagnstico de patgenos de plantas basado en tcnicas moleculares ofrece una elevada especificidad, sensibilidad y rapidez en comparacin con los mtodos tradicionales. Por otro lado la posibilidad de reproducir un modelo experimental de inoculacin de plantas con el hongo patgeno, bajo condiciones controladas, permite obtener informacin sobre aspectos de la interaccin husped-patgeno y conocer en forma anticipada las etapas previas a la aparicin de signos y sntomas de la enfermedad; permite adems, la evaluacin de tcnicas para la deteccin precoz de la infeccin. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una tcnica de PCR para la deteccin precoz de la infeccin por Cercospora kikuchii, en tejidos foliar de plantas de soja inoculadas con el hongo y cultivadas bajo condiciones controladas. Para detectar la presencia de C. kikuchii en muestras de soja, se llev a cabo una tcnica de PCR, usando primers especficos del hongo (CFP1 y CFP2), los cuales fueron diseados para amplificar un fragmento de 264 bp correspondiente al gen cfp (cercosporin facilitador protein), que codifica una protena de 65,4 KDa, CFP, que regula la produccin de la toxina cercosporina y la exporta hacia el exterior del hongo. Se trabaj con plantas infectadas por aspersin, con la
P509 - 27461 PROPIEDADES MICROBIOLGICAS EN UN SUELO DE LA PATAGONIA ARGENTINA BAJO LA INFLUENCIA DE ESPECIES FORESTALES IMPLANTADAS. EFFRON, DIANA; DEFRIERI, ROSA L; SARTI, GABRIELA; ESCOBAR ORTEGA, JHOVANA; GARCIA DE SALAMONE, INES
Ctedra de Microbiologa Agrcola y Ambiental, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires (FAUBA) En los sistemas forestales, la hojarasca es generalmente la principal fuente de nutrientes para la vegetacin y los microorganismos pudiendo variar stos en relacin a la biomasa y a la calidad de los materiales aportados por diferentes especies. Asimismo, las races de los rboles ejercen influencia en el desarro-
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cepa patrn C. kikuchii NBRC 6711 productora de alta concentracin de cercosporina y, con dos cepas salvajes de C. kikuchii productoras de media y baja concentracin de la toxina, con un hongo de otro gnero, Cladosporium y con la cepa patrn Cercospora sojina NBRC 6715 como otra especie de Cercospora. Como control negativo se proces una planta tratada con agua estril. Los muestreos se llevaron a cabo los das 5, 7 y 13 postinoculacin. La extraccin del material gentico se realiz utilizando el protocolo del Wizard Genomic DNA Purification Kit. Para el diseo de los primers se tuvo en cuenta la secuencia codificante del ltimo exn del gen cfp, utilizando el programa DNAstar Windows 32 Primer Select 400. La amplificacin fue llevada a cabo utilizando un MJ Research Thermal Cycler en las siguientes condiciones: 1 ciclo de 3 min a 95 C, 36 ciclos de 1 min a 58 C, 1 min a 72C, 1 min 95 C y 1 ciclo final de 5 min a 72 C. Los productos de amplificacin fueron separados mediante electroforesis en gel de agarosa al 1.5% w/v. Se observaron lesiones en las hojas desde el 5 da de inoculadas. Coincidentemente con la observacin de la lesin, los das 5, 7 y 13 postinoculacin, se determin la presencia del patgeno en los tejidos vegetales por la tcnica de PCR, presentando los productos de amplificacin, una banda de 290 bp. La tcnica de PCR desarrollada es una herramienta prctica y efectiva para el diagnstico de hongos del gnero Cercospora causantes de enfermedades en plantas de soja.
Rango Momento de muestreo Mn. Mx. Mn. 0,00 Mx. Barbecho Barbecho Cultivo 0,00 de trigo Cultivo de trigo
AB (mg N-NH4+ N-NO3CO2/kg/da) (mg/kg) (mg/kg) 7,07 0,00 74,01 5,04 16,74 1,70E+02 2,00E+03 60,58 26,57 0,00 7,00 0,00 27,37
NMP-H
NMP-R
NMP-A
NMP-N
2,14E+03 1,87E+03 0,00E+0 0,00 2,06E+04 2,06E+04 7,64E+01 4,45E+02 1,34E+02 1,99E+04 2,03E+04 7,34E+01 1,65E+03
Los suelos con mayor disturbio y exposicin al oxgeno (LC, NoP), reflejan mayor actividad microbiana heterotrfica; mientras que en los suelos con menor disturbio (SD, P), prevalecen las bacterias anaerobias facultativas. Los efectos climticos (sequa) superaron a los efectos de manejo sobre la microbiota edfica.
P512 - 27548 DETECCIN DE Chlamydophila EN EQUINOS DE LA CIUDAD DE VICUA MACKENNA, CRDOBA, ARGENTINA. FRUTOS, MARA CELIA; BERRON, CLARA; KIGUEN, XIMENA; VENEZUELA, FERNANDO; RE, VIVIANA; CUFFINI, CECILIA
Instituto de Virologa Dr. Jos Mara Vanella - FCM UNC Crdoba La familia Chlamydiaceae est conformada por bacterias Gram-negativas patgenas de animales de produccin, de vida silvestre y de compaa, de distribucin mundial, que desarrollan su ciclo de vida nicamente dentro de inclusiones citoplasmticas. En esta familia se encuentra el gnero Chlamydophila con 6 especies, Chlamydophila psittaci, C. abortus, C. felis, C. caviae, C. pecorum, y C. pneumoniae. C. psittaci, C. caviae, C. pecorum y C. pneumoniae, infectan animales vertebrados y ocasionalmente, humanos. En equinos (Equus caballus) algunas especies clamidiales producen infecciones oculares y respiratorias, recurrentes sino recibe el tratamiento adecuado. Estas patologas poseen gran impacto en ganadera y redundan en prdidas econmicas. El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de Chlamydophila en hisopados conjuntivales de equinos en la ciudad de Vicua Mackenna (Crdoba). En el mes de mayo 2010 se colectaron 24 hisopados conjuntivales de equinos asintomticos y con signos visibles de conjuntivitis, provenientes de la zona rural (335601,2S; 642148,8O) en cercanas de la ciudad de Vicua Mackenna provincia de Crdoba, que fueron analizados por PCR genrica. Se detect ADN de Chamydophila en 3 equinos asintomticos (una potranca de 3 aos, un potrillo de 1 ao, un potrillo de ao y medio de edad); en un equino de 12 aos de edad y en un potrillo de 5 meses, estos ltimos animales presentaban signos visibles de enfermedad ocular (conjuntivitis) recurrente. Estos resultados indican circulacin de esta bacteria en nuestra provincia y cabe resaltar que es el primer registro de este patgeno en conjuntiva de equinos en Crdoba. Son necesarios ms estudios para determinar el rol de este hospedador natural para estos agentes y anlisis filogenticos para profundizar en el origen y diversificacin de estos patgenos en nuestra provincia. As mismo, es necesaria la implementacin de programas de vigilancia para la deteccin de estas bacterias, a fin de realizar deteccin precoz de posibles brotes, mediante un diagnstico diferencial y evaluar su impacto en la salud pblica.
P511 - 27520 DETERMINACIN DEL NMERO Y ACTIVIDAD MICROBIANA EN DISTINTOS SISTEMAS DE MANEJO AGRCOLA. VERCELLINO, M(1); KRUGER, HR(2); GOMEZ, MA(1)
(1) Centro de Recursos Naturales Renovables de la Zona Semirida-Universidad Nacional del Sur (2) INTA Antecedentes: El manejo del suelo puede tener un gran impacto sobre la composicin y actividad de los microorganismos, en consecuencia, es importante el uso responsable de los suelos para mantener su biodiversidad. La biomasa microbiana del suelo est compuesta por diversos grupos que pueden reflejar diferencias de actividad, de acuerdo al sistema agrcola implantado. Las comunidades microbianas tambin pueden sufrir cambios en respuesta a variaciones fsicas y qumicas del suelo y climticas, que pueden ser dominantes sobre los efectos del sistema de manejo. Objetivo: Analizar el efecto de distintas prcticas de manejo agrcola, sobre la actividad y el nmero de bacterias involucradas en el ciclo del nitrgeno. Materiales y Mtodos: El estudio se llev a cabo en un ensayo de labranzas a largo plazo iniciado en 1999 en EEA-Bordenave del INTA, donde se hace rotacin de cultivos trigo-avena-soja. El diseo experimental es en bloques completamente aleatorizados, con tres rplicas. Los factores considerados son: a) Sistemas de labranza: Convencional (LC) y Siembra Directa (SD); b) Fertilizacin nitrogenada: 0, 30 y 60 kg N/ha; y c) Manejo del verdeo: Pastoreo directo (P) y Corte mecnico del forraje (NoP). Se realizaron muestreos durante el barbecho y el cultivo de trigo, y se determin: a) Actividad Biolgica (AB); b) Contenido de N-NO3- y N-NH4+; y c) Nmero ms probable (NMP) de bacterias hetertrofas aerobias (H), oxidadoras de amonio (A), oxidadoras de nitrito (N) y reductoras de nitrato (R). Resultados: En ninguna muestra analizada se encontr efectos significativos de la fertilizacin, y en la mayora de las variables no hubo diferencias respecto al sistema de labranza y manejo del verdeo, debido probablemente a la severa sequa que afecta a la zona, provocando, la prdida de los cultivos, falla en fertilizacion, etc. Solo se encontr diferencias (P<0.05) en: a) AB, fue mayor en los tratamientos NoP que en P bajo LC durante el barbecho; b) NMP-H, fue mayor en LC que en SD bajo NoP durante el barbecho; c) NMP-R, fue mayor en P que en NoP sobre todo en SD durante el cultivo de trigo, debido a la baja concentracin de O2. El NMP de A y N fue bajo y variable, casi en el lmite de deteccin de la tcnica, y se relaciona con la baja concentracin de amonio y nitrato en el suelo. La variacin de datos obtenidos se resume en la tabla: Rango en las determinaciones obtenidas para las distintas variables
P513 - 27563 EFECTOS DETRIMENTALES EN EL CRECIMIENTO DE PLNTULAS DE ALFALFA EJERCIDOS POR AISLAMIENTOS DE BACTERIAS BIODEGRADADORAS DE IMAZAPIR. MOLDES, CARLOS ALBERTO; DURAN, KATIA; BELLOZAS, MONICA; ABASCAL, SERGIO; GRASSANO, ALICIA
Universidad Nacional de La Pampa El herbicida Imazapir es utilizado en post emergencia para el control de malezas frecuentes en el cultivo de girasol. Si bien un amplio rango de microorganismos es capaz de degradar este herbicida, existe una diversidad de efectos que tales microorganismos pueden ejercer sobre la salud del cultivo. El presente
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trabajo pretende identificar aislamientos de bacterias degradadoras de Imazapir que ejerzan efectos detrimentales sobre plntulas de alfalfa. Muestras de suelos con fertilidad limitada de varias localidades de la provincia de La Pampa se colocaron en medios de cultivo mnimo con IMAZAPIR como nica fuente de C y N. Despus de tres das se trasvas 1 mL de la suspensin al mismo medio slido realizando sucesivos estriados hasta lograr la purificacin de bacterias. A travs de MLEE (electro-foresis multilocus enzimtico) de alfa y beta esterasas fue posible identificar 9 perfiles de bandas diferentes de un total de 17 bacterias obtenidas con el procedimiento anterior. Esto se utiliz como criterio para identificar aislamientos bacterianos diferentes. Plantas de alfalfa crecidas en medio Jensen (suplementada con 5% de N) a 20 C con un fotoperiodo de 16 h luz de dos semanas de edad fueron inoculadas con cultivo bacteriano de los aislamientos seleccionados. Dos semanas despus se hicieron determinaciones de peso fresco y peso seco de raz y parte area. Se pudo observar que hubo una disminucin significativa del peso seco y fresco de las races causada en mayor o menor medida por todos los aislamientos frente al testigo. Solo dos aislamientos provocaron disminucin de peso fresco y seco de parte area frente al testigo. Los resultados indican que ningn aislamiento produce un mejoramiento en la calidad del cultivo; todos ejercen algn tipo de inhibicin en el desarrollo de races pero que no afectan la produccin de parte area a excepcin de dos aislamientos que podran estar ejerciendo algn efecto fitopatognico.
Los aislamientos correspondientes a C. sojina se distribuyeron en los Grupos 3, 4, 6, 7, 9, pero ninguno coincidi con el que incluye la cepa patrn C. sojina NBRC 6715. - Entre el origen geogrfico de los aislamientos y su genotipo no se observ un patrn de asociacin: no se verific un genotipo propio de cada regin, con excepcin del Grupo 1. - Se comprob la variabilidad gentica tanto dentro de una misma regin como de regiones distintas.
P515 - 27668 MECANISMO DE ACCIN DEL SESQUITERPENO BICCLICO BOTRIDIAL, UNA TOXINA PRODUCIDA POR EL HONGO FITOPATGENO Botrytis cinerea, Y SU RELACIN CON LOS MECANISMOS DE DEFENSA DE LA PLANTA. ROSSI, FRANCO R(1); GARRIZ, ANDRES(1); MARINA, MARIA(1); ROMERO, FERNANDO M(1); GONZALEZ, MARIA E(1); COLLADO, ISIDRO G(2); PIECKENSTAIN, FERNANDO L(1)
(1) IIB-INTECh (UNSAM-CONICET), Chascoms, ARGENTINA. (2) Departamento de Qumica Orgnica, Universidad de Cdiz, Campus Ciencia y Tecnologa, Espaa Antecedentes: B. cinerea es un hongo fitopatgeno necrotrofo, y como tal provoca la muerte de las clulas hospedadoras para su nutricin. Este patgeno secreta una variedad de compuestos fitotxicos, siendo uno de los ms conocidos el botridial, sesquiterpeno bicclico considerado como un factor de virulencia. La respuesta hipersensible (HR), casi universalmente aceptada como una forma de muerte celular programada, es disparada en la planta como consecuencia del reconocimiento de un patgeno. Esta respuesta favorece la resistencia de la planta a patgenos biotrficos, dado que restringe el acceso de los mismos a clulas vivas, pero incrementa la virulencia de patgenos necrotrficos. Es sabido que B. cinerea promueve la HR en el hospedante, y se ha propuesto que tal induccin es mediada por elicitores que actan como factores de virulencia. Sin embargo, la identidad de dichos elicitores no ha sido establecida hasta el presente. Objetivo: Determinar si el botridial producido por B. cinerea acta meramente como una toxina plana o si, en cambio tiene la capacidad de inducir la HR del hospedador y depende de los mecanismos de defensa de la planta para ejercer su toxicidad. Metodologa y Resultados: Se analizaron indicadores moleculares y bioqumicos de la HR en hojas de Arabidopsis thaliana tratadas con botridial. La tincin con azul de anilina y la observacin al microscopio revel la induccin temprana de la deposicin de callosa, a las 3 horas post-tratamiento (p.t), la cual fue ms notoria a las 24 horas p.t. Adems, el anlisis de autofluorescencia mostr que el botridial induce la acumulacin de compuestos fenlicos a los dos tiempos p.t ensayados. Por otro lado, la tincin con diclorofluorescena evidenci una rpida acumulacin de especies reactivas del oxgeno. Adems, se comprob por RT-PCR cuantitativa un incremento rpido y transiente de los niveles de ARNm de Athsr3, un gen conocido por su induccin temprana durante la HR de A. thaliana. Por otra parte, se evalu la toxicidad del botridial sobre plantas genticamente modificadas, defectivas en las vas de sealizacin mediadas por el cido saliclico (AS) y el cido jasmnico (AJ). Las primeras fueron ms resistentes al botridial que las plantas de tipo salvaje, mientras que las plantas defectivas en la va sealizacin del AJ fueron ms sensibles. Adems, el botridial caus en plantas de tipo salvaje un incremento de los mensajeros de PR1 y PDF1.2, dos protenas PR (pathogenesis-related) cuya expresin es mediada por AS y AJ, respectivamente. El botridial no es una toxina plana, sino que aumenta la virulencia de B. cinerea actuando como un efector de la HR del hospedante. Ms an, la toxicidad del botridial depende de las respuestas de defensa de la planta mediadas por el AS y el AJ, hormonas que desempean roles opuestos en los procesos de muerte celular desencadenados por esta toxina.
P514 - 27627 VARIABILIDAD GENTICA DE Cercospora PATGENAS DE SOJA: EVALUACIN DEL PERODO 2005-2009. LATORRE RAPELA, MG; SOLDANO, A; COLOMBINI, M; VACCARI, M; GONZALEZ, AM; CARRERA, E; LURA, MC
Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional del Litoral Las enfermedades de la soja producidas por el gnero Cercospora, ocasionan prdidas considerables en su rendimiento. A fin de controlar dichas enfermedades se elaboran diversas estrategias que no siempre resultan efectivas. Una de las causas del fracaso es la capacidad de cambio de las poblaciones de los fitopatgenos las que pueden evolucionar rpidamente y adaptarse a las condiciones que se imponen con las medidas de control. El marcador molecular basado en las regiones microsatlites denominado Inter Simple Sequence Repeat (ISSR) permite detectar ADN polimrfico y es til para estudiar las relaciones inter e intraespecficas de distintos aislamientos de Cercospora. Los objetivos de este trabajo fueron: evaluar la variabilidad gentica de especies de Cercospora aisladas de soja cultivada en diferentes regiones de la provincia de Santa Fe y analizar la distribucin espacial de los diferentes clones hallados. Se estudiaron 52 aislamientos de Cercospora obtenidos de muestras provenientes de las 6 regiones isoagronmicas definidas por el programa RiiA en la Provincia de Santa Fe (Regin 1-6), durante las campaas 2005-2006, 2006-2007, 2007-2008, 2008-2009. La variabilidad gentica entre los hongos se determin mediante ISSR utilizando el oligonuclotido (GTG)5. Simultneamente se procesaron C. kikuchii NBRC 6711 y C. sojina NBRC 6715. A partir del anlisis del patrn de bandas y aplicando el coeficiente de Dice, se obtuvo una matriz de distancias genticas entre los aislamientos. Con dicha matriz se construy un dendrograma aplicando el anlisis de agrupamiento con el mtodo estadstico AGNES (Agglomerative Nesting) utilizando el mtodo de Ward. Se fij un N de grupos igual a 12, evaluando el mximo coeficiente Average silhouette width obtenido como resultado de aplicar un mtodo particional de clustering (Fanny). Se hallaron, en total, 58 bandas, resultando polimrficas el 100%. El rango de los tamaos de amplificacin vari entre 164 y 2.403 pares de bases y se produjeron entre 5 y 17 fragmentos amplificados. De los 12 grupos conformados, en el Grupo 8 qued incluida la mayor cantidad de aislamientos. Los aislamientos que integraron el Grupo 5 presentaron similitud con las cepas patrones C. kikuchii NBRC 6711 y C. sojina NBRC 6715. La Regin 4 fue la que present la mayor variabilidad entre los aislamientos de Cercospora. El genotipo correspondiente al Grupo 1 se detect nicamente en esta zona.
P516 - 27669 MICORRIZAS EN SUELOS DE MONTE CITRICOLA Y CAMPO NATURAL Y SU RELACION CON EL FOSFORO EN LA REGION DE BELLA VISTA, CORRIENTES. PEREZ, GERMAN L; DRIUTTI, ARTENIO A; IGLESIAS, MARIA C
Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Nordeste La citricultura es una de las principales actividades en la provincia de Corrientes. Los hongos micorrcicos se asocian simbi-
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ticamente a plantas superiores otorgndole diversos beneficios en aspectos nutricionales, sanitarios y de agregacin del suelo. Este trabajo tiene por objetivos: registrar y cuantificar la presencia de micorrizas vesculo-arbusculares en suelos de montes citrcolas y campo natural y evaluar la relacin existente entre el grado de micorrizacin y el contenido de fsforo. Las muestras de suelo se extrajeron dentro de los lotes pertenecientes a la EEA INTA de Bella Vista, Corrientes, (282639.85S de latitud y 585923.38"O de longitud). Dentro de cada uno de estos se muestre en los puntos cardinales, debajo de la copa de diez rboles tomados al azar siguiendo una diagonal. A estas muestras se le realiz anlisis de P (fsforo) por el mtodo de Bray Kurtz I y pH. Posteriormente, se realiz un nuevo muestreo para hacer un recuento de esporas viables. Para registrar y cuantificar la presencia de micorrizas, se realiz un ensayo en invernculo, en maceta, utilizando pepino (Cucumis sativus L.) como planta trampa. El ensayo se realiz en bloques completos al azar con cuatro tratamientos correspondientes a los suelos de lotes de mandarina, naranja, limn y campo natural, con diez repeticiones cada uno. A los 30 das de sembrado el pepino se tieron las races por el mtodo de Phillips y Hayman para su observacin microscpica. Para esto se cortaron diez segmentos de raz de 1cm por planta y se colocaron en portaobjetos para la obtencin de datos porcentuales de infeccin por planta. Los resultados se analizaron mediante ANOVA y prueba de Tukey para comprobacin de los promedios. Los valores de P en suelo presentaron diferencias estadsticamente significativas a favor de los lotes de mandarina (M) y naranja(N) debido a las peridicas fertilizaciones en suelo, teniendo menor valor el lote de limn(L) debido a que las fertilizaciones, en el mismo, solo se realizan en forma foliar. El campo natural (CN) fue el que menor contenido present. Los valores de pH mostraron diferencia estadstica significativa entre CN, L y M, N .El mayor porcentaje de micorrizacin fue para el tratamiento CN mostrando una amplia diferencia con respecto a L y mayor aun con M y N . Con estas dos primeras variables se efectu una correlacin de Pearson el cual di un resultado de r=-0,65 lo que representa una relacin negativa. Los datos de recuento de esporas viables por 100g de suelo seco fueron para CN 102, seguido de naranja con 73, limn 52 y mandarina 35.
Tratamiento CN L M N Fsforo (ppm) 1,24 a 21,56 a 76,96 b 95,62 b pH 6,47 6,53 6,66 6,74 a a b b Micorrizacin (%) 87 36 11 10 c b a a
bono Orgnico (CO) y Carbono de la Biomasa Microbiana (CBM) de estos suelos fueron presentados anteriormente por integrantes del grupo de trabajo. Para el anlisis estadstico se utiliz el paquete estadstico INFOSTAT. Se establecieron los coeficientes de correlacin entre las variables analizadas. Se aplic anlisis de componentes principales para la seleccin de variables capaces de separar los suelos. La mayor actividad -glucosidasa se encontr en el suelo Argiudol acuico con valores que en promedio alcanzaron 214,2 g de p-nitrophenol/gr de suelo seco.h, mientras que la menor actividad enzimtica se registr en el Peluderte argico con valores de 86,9 g de p-nitrophenol/gr de suelo seco.h. Se encontr una relacin negativa entre la actividad -glucosidasa y el contenido de arcilla de los suelos evaluados, con un coeficiente de correlacin que alcanz -0,91*. Los mayores valores de actividad -glucosidasa se encontraron en los suelos que presentaron los menores contenidos de arcilla, probablemente porque una porcin de esta enzima est adsorbida sobre las superficies de las arcillas y/o a los complejos hmicos coloidales. No se hall correlacin significativa entre la actividad -glucosidasa y el CO de los suelos analizados (p= 0,05). En el presente estudio se encontr relacin positiva entre la actividad -glucosidasa y el CBM con un coeficiente de correlacin de 0,70**. En el anlisis de componentes principales se encontr que el 71% de la variabilidad fue explicado por las componentes 1 y 2. Las variables de mayor peso del componente 1 en la separacin de los suelos fueron la actividad -glucosidasa, el CBM y la proporcin de humedad respecto a la humedad equivalente. Los suelos de menor contenido de arcilla (Argiudol acuico y Ochracualf vertico) se separaron de los dems suelos analizados y la variable que mayor peso tuvo en este sentido fue la actividad -glucosidasa. Trabajo realizado en el marco del PID-UNER 2127
P518 - 27683 MICROSCOPA ELECTRNICA DE TRANSMISIN EN EL ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTAGNICA DE Bacillus IBA 33 FRENTE A Geotrichum candidum, HONGO PATGENO DE LIMN. GORDILLO, MARIA ANTONIETA; BERMUDEZ, IMELDA PILAR; NAVARRO, ANTONIO ROBERTO; MALDONADO, MARIA CRISTINA
Universidad Nacional de Tucumn Antecedentes: Uno de los principales problemas fitosanitarios del cultivo de ctricos es la enfermedad conocida como podredumbre amarga (Sour rot) causada por Geotrichum candidum. Se intenta combatir esta enfermedad mediante la utilizacin de productos qumicos sintticos. Debido al problema que representan los residuos de dichos productos para la salud humana y a lmites mximos de residuos establecidos por los pases ms desarrollados, se estn implementando sistemas alternativos para el control de plagas. En trabajos anteriores se demostr, mediante ensayos in vitro e in vivo, el efecto antifngico de los metabolitos producidos por Bacillus IBA 33. Objetivo: El presente trabajo abordar el estudio del posible mecanismo de accin de dichos metabolitos frente a G. candidum. Materiales y Mtodos: Microorganismos: - Bacillus IBA 33 cepa aislada del suelo cultivado con plantas de limn de la provincia de Tucumn, Argentina. Fue identificada mediante estudios de macromorfologa, micromorfologa, propiedades bioqumicas y secuenciacin gentica. Fue mantenida en tubos en bisel con agar nutritivo a pH 7.2. - Hongo patgeno de limn: Geotrichum candidum. Cepa aislada e identificada de limones enfermos correspondientes a nuestra zona citrcola. Metabolitos de Bacillus IBA 33: Estos metabolitos fueron recuperados luego de cultivar dicha cepa en Medio Landy luego de 72 h de cultivo a 28C. Ensayos de Antagonismo: En Erlenmeyers de 250 mL, se colocaron 45 mL de caldo papa dextrosa pH 5; 2,5 mL de inculo de G. candidum (10 6 clulas/mL) y 2,5 mL de metabolitos de Bacillus IBA 33. Se incub en shaker a 28 C y 250 rpm durante 5 das. Se realizaron ensayos control, los cuales no contenan metabolitos. Microscopa electrnica de Transmisin (MET): La preparacin de las muestras para su observacin en el MET correspondientes al crecimiento fngico (control) as como de crecimiento fngico en presencia de metabolitos de Bacillus IBA 33, fueron procesadas segn Fras y col, 2008. Resultados: Las caractersticas morfolgicas de los artroconidios de
Analizando estas tres variables se observa que al aumentar el contenido de fsforo en el suelo disminuye el porcentaje de micorrizacin y la cantidad de esporas en los suelos.
P517 - 27680 ACTIVIDAD DE LA ENZIMA B-GLUCOSIDASA EN SUELOS CON DIFERENTES CONTENIDOS DE ARCILLAS DE LA PROVINCIA DE ENTRE ROS (ARGENTINA). SANCHEZ, CECILIA ISABEL; BENINTENDE, MARIA CRISTINA; BENINTENDE, SILVIA MERCEDES
Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Entre Ros La -glucosidasa es una enzima seleccionada, entre otras, como indicador de calidad de suelo por estar relacionada a la presencia de carbohidratos de bajo peso molecular, fuente de energa para los microorganismos. El objetivo del presente trabajo fue analizar los niveles de -glucosidasa en suelos de la provincia de Entre Ros (Argentina). Los suelos de la regin pertenecen a un clima templado hmedo y estn ubicados en paisajes ondulados con pendientes de mediana intensidad. El promedio de precipitaciones en la regin es de 1000 mm anuales. Se trabaj con suelos en situacin de equilibrio con diferentes contenidos de arcillas, pertenecientes a los subgrupos Argiudol acuico (27,6% de arcilla), Argiudol vertico (35,4% de arcilla), Peluderte argiudolico (36,8% de arcilla), Peluderte argico (40,5% de arcilla) y Ochracualf vertico (29,9% de arcilla). La determinacin de la actividad -glucosidasa se realiz en suelo hmedo usando la tcnica propuesta por Tabatabai. Los valores de humedad, Car-
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G. candidum procedentes del cultivo puro y del cultivo con antagonismo frente a metabolitos de Bacillus IBA 33 fueron analizadas por MET, observndose en estos ltimos clulas hinchadas y lisadas. A mayores aumentos se observaron alteraciones de la membrana plasmtica. Conclusiones: Los resultados obtenidos con MET demuestran que el mecanismo de accin que presentan los metabolitos de Bacillus IBA 33 contra G. candidum es producir alteraciones morfolgicas sucesivas en las estructuras del hongo, presentando deformaciones, plasmlisis y colapso.
P519 - 27705 INHIBICIN DE HONGOS FITOPATGENOS DE UVA DE MESA MEDIANTE LA APLICACIN DE RADIACIN UVC. NALLY, MARIA CRISTINA(1); MUOZ, MARIA ANDREA(1,3); ZAPATA, MARIA JOSE(1,3); PESCE, VIRGINIA MERCEDES(1); TORO, MARIA EUGENIA(1); C DE FIGUEROA, LUCIA INES(2); VAZQUEZ, FABIO(1)
(1) IBT-FI, Universidad Nacional de San Juan (2) PROIMI-Universidad Nacional de Tucumn (3) FCEyN- Universidad Nacional de San Juan Introduccin: Diferentes mtodos se utilizan para combatir hongos como sustancias qumicas, biolgicas y mediante procesos fsicos. La irradiacin ultravioleta (UV-C) se utiliza como una alternativa a la esterilizacin qumica, reduciendo el crecimiento de microorganismos. Este tipo de irradiacin tiene su pico de emisin a 254 nm y posee accin germicida. Recientemente, la irradiacin UV-C ha sido considerada como un tratamiento alternativo para preservar la calidad de frutas y hortalizas. Una de las principales ventajas de usar UV-C es que no deja residuos en el producto tratado. Objetivo: Evaluar la capacidad germicida de la aplicacin de UV-C sobre hongos fitopatgenos aislados de uvas con pudricin cida y gris. Materiales y Mtodos: a)- Microor-ganismos: Aspergillus caelatus, A. terreus, A. versicolor, Fusarium oxysporum, Rhizopus stolonifer, Penicillium comune, Botrytis cinerea. Discos de micelio (9 mm) se sembraron en frascos Erlenmeyers de 250 mL con medio Czapeck Agarizado (20 mL), pH 5.6 e incubados durante 7 das a 22- 25 C, en oscuridad. Luego se coloc 10 mL de solucin de Tween 80 al 0.015% para desprender esporas del medio slido. Se realizaron conteos de esporas en Cmara de Neubauer y posteriormente diluciones con agua destilada estril hasta obtener una concentracin de 104 conidios/mL. b)- Ensayo de germinacin de esporas bajo radiacin UV-C: Esporas de hongos (100 por cajas) se sembraron en placas Czapeck-Agar y sometidos a radiacin ultravioleta (254 nm) durante: 10, 30, 60, 300 y 600 segundos. Los resultados se compararon con un control (placas con hongos no sometidas a radiacin UV-C). Este ensayo se realiz por triplicado y los resultados obtenidos fueron sometidos a un Anlisis de Varianza, SPSS versin 17. Resultados: Las placas sometidas a UV-C durante 600 segundos, no presentaron desarrollo fngico. La exposicin a radiacin UV-C durante 300 segundos inhibi completamente la germinacin de esporas de B. cinerea, R. stolonifer y A. versicolor. Conclusin: Trescientos segundos de aplicacin de UV-C inhibe B. cinerea y algunos hongos fitopatgenos de la pudricin cida. Seiscientos segundos inhiben completamente los hongos que participan tanto en la pudricin cida como en la gris. Este tiempo de exposicin permitira mantener la calidad y reducir el deterioro de la uva tanto en cmaras frigorficas como en lugares de empaque para su exportacin.
vegetales Schinus fasciculatus, Porlieria microphylla, Typha latifolia, Clematis montevidensis, Phytolacca dioica, Erythrina crista-galli y Blepharocalyx salicifolius, recolectadas en el rea de influencia de la FCA-UNER. Se calcul la concentracin mnima inhibitoria (CIM) de los extractos que fueron positivos en el screening primario. Los microorganismos evaluados fueron aislados a partir de frutos que presentaban sntomas de enfermedades producidas por microorganismos fitopatgenos. Los mismos fueron identificados microscpicamente y a travs de pruebas bioqumicas y fisiolgicas. Los resultados presentados corresponden a la actividad in vitro de los extractos vegetales. En estudios previos todas las especies vegetales revelaron actividad contra al menos un microorganismo que produce enfermedades en humanos. El screening primario mostr que 5 de las 7 especies vegetales tuvieron actividad biolgica frente a organismos fitopatgenos. Las especies vegetales P. microphylla y T. latifolia no evidenciaron actividad antimicrobiana en ninguno de sus extractos. El 33% de los extractos del total evaluado, revel bioactividad frente a la bacteria y los hongos aislados (3 metanlicos, 3 etanlicos y 1 diclorometnico). En general, se encontr que los extractos vegetales tuvieron mayor control frente a Xanthomonas spp. respecto de los hongos fitopatgenos. Los extractos etanlicos y metanlicos de S. fasciculatus y B. salicifolius, y el extracto etanlicos de C. montevidensis evidenciaron actividad antibacteriana con CIM que oscilaron entre 50 y 500 g/mL. En general las CIM determinadas para la actividad antibacteriana fue menor que la hallada para la actividad antifngica. Se destaca el extracto metanlico de B. salicifolius que present una CIM igual a 62,5 g/mL contra Rhizopus spp. La especie vegetal de mayor bioactividad fue S. fasciculatus, ya que el extracto etanlico de la misma redujo el crecimiento del micelio de Fusarium spp. y Rhizopus spp. con CIM superiores a los 500 g/mL. As mismo, los extractos etanlicos y metanlicos de esta especie vegetal mostraron actividad frente a Xanthomonas spp. Nota: se agradece a la Ing. Agr. Blanca Garca por su colaboracin
P521 - 27720 AISLAMIENTOS DE Bacillus QUE INHIBEN EL CRECIMIENTO DE Beauveria bassiana, UN HONGO BIOCONTROLADOR DE CICADLIDOS Y DELFCIDOS PLAGA DEL MAZ. TOLEDO, ANDREA (1); SIMURRO, EUGENIA (1); BALATTI, PEDRO (1); ALIPPI, ADRIANA (1); MARINO, ANA (2)
(1) Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata. (2) Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de La Plata Los Cicadlidos y Delfcidos ocasionan grandes prdidas en los cultivos de maz al transmitir patgenos y al provocar daos clorticos en tallos y hojas. Dalbulus maidis (Hemiptera: Cicadellidae) es vector del maize rayado fino virus, Spiroplasma kunkelii y maize bushy stunt mycoplasm. Estos fitopatgenos, solos o en combinacin, causan grandes prdidas econmicas en Mjico y Centro y Sudamrica. Delphacodes kuscheli (Hemiptera: Delphacidae), especie nativa de la Argentina, es el vector principal del virus del Mal de Ro Cuarto del maz, causal de la enfermedad ms importante de este cultivo en el pas. Debido a que los hongos entomopatgenos generalmente invaden a sus hospedadores a travs de la cutcula, son los nicos microorganismos que pueden ser desarrollados para el control de insectos picadores suctores. Beauveria bassiana (Hypocreales: Clavicipitaceae), resulta ser un promisorio agente de control biolgico, aunque su virulencia puede estar condicionada por factores fsicos, qumicos (conformacin y composicin de la cutcula del hospedador) y biolgicos (interacciones con la microbiota alojada sobre la superficie cuticular). El objetivo del presente estudio fue investigar las interacciones entre B. bassiana y la microbiota bacteriana aislada de la superficie cuticular de D. maidis y D. kuscheli, a fin de detectar interacciones antagnicas que interfieran con su potencial biocontrolador. En ensayos previos se aislaron 155 cepas bacterianas a partir de adultos de D. maidis y D. kuscheli mantenidos en invernadero. Del total de cepas evaluadas, 91 produjeron inhibicin del crecimiento de B. bassiana CEP147. Las 10 mejores antagonistas identificadas, mediante pruebas bioqumicas y secuenciacin del gen 16S del ADN ribosmico, como Bacillus licheniformis, B. pumilus y B. subtilis fueron selec-
P520 - 27715 EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTOS VEGETALES FRENTE A MICROORGANISMOS FITOPATGENOS. SEQUIN, CHRISTIAN JAVIER; VIVOT, EDUARDO PEDRO; SANCHEZ, CECILIA ISABEL
Ctedra Qumica General, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Entre Ros Las plantas pueden producir sustancias que actan como inhibidores frente a agentes biticos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la actividad antimicrobiana contra hongos y una bacteria fitopatgenos (Rhizopus spp.; Penicillium spp.; Fusarium spp.; Xanthomonas spp.) de los extractos de siete especies vegetales de la flora nativa de Entre Ros. Se emplearon los extractos diclorometnicos, etanlicos y metanlicos de las especies
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cionadas para evaluar su actividad contra 14 aislamientos nativos de B. bassiana. Los ensayos se realizaron utilizando el mtodo del disco. Por cada tratamiento se utilizaron tres rplicas y un control, los cuales fueron incubados a 29 1 C durante 7 das. La evaluacin fue realizada midiendo el dimetro de la colonia fngica. El porcentaje de inhibicin fue calculado por medio de una frmula matemtica. Las diferencias entre los tratamientos fueron analizadas utilizando el test de Kruskal-Wallis. Todos los aislamientos de B. bassiana, excepto dos resultaron ser altamente inhibidos por todas las bacterias (K = 307,7; P = 0,00). Bacillus licheniformis, B. pumilus, B. subtilis, B. atrophaeus y B. amyloliquefaciens conforman el grupo subtilis, el cual ha sido citado previamente como productor de antibiticos, bacteriocinas y/o compuestos antifngicos, los cuales pueden tener un importante rol en las interacciones antagnicas entre los microorga-nismos. Nuestros hallazgos sugieren un efecto antibitico de estos bacilos asociados con Cicadlidos y Delfcidos que puede reducir o inhibir el desarrollo de B. bassiana y constituir un obstculo en la utilizacin de este biocontrolador en el cultivo de maz. Estudio financiado por CONICET, UNLP y FONCYT-PICT-2007-00143-03.
de las dos especies de Phytophthora estudiadas, dado que no resulta perjudicial para el medio ambiente y por su comprobada accin txica in vitro en la formacin de zoosporangios, y crecimiento miceliar.
P523 - 27754 DEFOLIACIN EN Lotus tenuis: ABSORCIN DE NUTRIENTES Y SIMBIOSIS MICORRCICA ARBUSCULAR. GARCIA, ILEANA (1); MENDOZA, RODOLFO (1); POMAR, MARIA CRISTINA (1); MARBAN, LILIANA (2)
(1) Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia (CONICET). (2) Instituto de Geocronologa y Geologa Isotpica (CONICET) Introduccin: La defoliacin afecta al sistema radical debido a la prdida de tejido fotosinttico. Factores que influyen la capacidad fotosinttica de la planta tambin afectaran el funcionamiento de la simbiosis micorrcica arbuscular (MA). L. tenuis es una leguminosa naturalizada en la Cuenca del Ro Salado de gran valor forrajero que presenta alta colonizacin y dependencia de la simbiosis para crecer en suelos deficientes en P. Objetivo: Estudiar el efecto de la intensidad de defoliacin sobre la recuperacin de la biomasa escindida por corte en plantas de L. tenuis, movilizacin de nutrientes y simbiosis con hongos MA y Rhizobium en un suelo salino-sdico de la Cuenca del Ro Salado. Materiales y Mtodos: L. tenuis cv. Chaja se sembr y creci en macetas de un Natraqualf tpico en invernculo. A los 70 das, 5 macetas fueron cosechadas (ti) y las remanentes sometidas a intensidades de defoliacin que consistieron en la remocin del 25, 50, 75 y 100% del vstago con respecto a las macetas cosechadas en ti. Para el 100%, la biomasa area se cort a 0,5 cm por encima de la superficie del suelo. Plantas no defoliadas se usaron como control (5 repeticiones). Plantas control y defoliadas crecieron por un perodo adicional de 35 das (etapa de recuperacin) y posteriormente se cosecharon (tf=105 das). Luego de ti y tf, se determin la biomasa acumulada (tallo y raz), colonizacin MA, nodulacin,%P,%N,%Na+ y concentracin de clorofila total en tejido, y tasas relativas de crecimiento (RGR) en cada tratamiento. Resultados: Al 100%, el vstago removido a ti ms el recuperado a tf no alcanz a compensar el vstago producido por plantas control o defoliadas al 25%. El RGR del vstago aument con la intensidad del corte. El vstago total (corte+cosecha) no fue afectado ante cortes desde 25 a 75% con respecto al control. La biomasa radical disminuy 6%, 47%, 56% y 90% en el 25, 50, 75 y 100% respectivamente, con respecto al control que se reflej en una disminucin de su RGR. El largo total de raz colonizada como el colonizado por las diferentes estructuras MA disminuyen con la intensidad de defoliacin. Los puntos de entrada y la densidad de esporas no difieren entre plantas defoliadas y control. La cantidad de ndulos fue mayor al 100%. El%P y%N en vstago y raz aumentaron con la intensidad de defoliacin. El%Na+ en vstago aument al 100% y la clorofila total disminuy con la defoliacin. Lotus tenuis es tolerante a defoliaciones hasta un 75% de su biomasa area y es capaz de recuperar la biomasa escindida en 30 das en un suelo salino-sdico. Ante intensidades de corte severas la estrategia de la comunidad MA es la misma que en intensidades bajas: la simbiosis permanece activa, favoreciendo el desarrollo de arbsculos, manteniendo una absorcin activa de nutrientes, pudiendo suplir al sistema radical y contribuir as al crecimiento vegetal. Los hongos MA invertiran los compuestos carbonados en el mantenimiento preferencial del inculo en el suelo y en menor medida en estructuras intraradicales como vesculas. La nodulacin radical no es afectada por la defoliacin.
P522 - 27751 EFECTO IN VITRO DEL ACEITE ESENCIAL DE ORGANO EN EL CRECIMIENTO MICELIAR, PRODUCCIN DE ZOOSPORANGIOS Y ZOOSPORAS DE Phytophthora palmivora Y P. nicotianae. LUCERO, G (1,3); PIZZUOLO, P (1); HAPON, MV (1, 2, 3); BOITEUX, J (1); CASTROVIEJO, L (1); VALLEJO, G (1)
Lujn, Provincia de Mendoza, Argentina Phytophthora es uno de los gneros ms tristemente conocido en el campo fitopatolgico debido a que incluye numerosas especies que causan graves prdidas econmicas en todo el mundo. Es un microorganismo que se encuentra presente en los suelos infectados y es denominado hongo de agua ya que es favorecido ecolgicamente por la presencia de agua libre. P. nicotianae y P. palmivora son unas de las especies ms destruc-tivas de muchas plantas de inters agrario y forestal tanto a nivel mundial como nacional. Estn asociadas a ms de 200 gneros de hospederos, el primer microorganismo y 124 gneros distintos el segundo. En sus hospederos causan en general, podredumbre de cuello, races, frutos y decaimiento generalizado. Las estrategias para su control se basan esencialmente en la reduccin del inculo en el suelo principalmente a travs de fungicidas. Los productos usados son normalmente cobre en distintas formula-ciones y metalaxyl, si bien no son recomendables sucesivas aplicaciones de estos productos. Otras alternativas al uso de productos qumicos de sntesis son actualmente investigadas, debido a la contaminacin que stos producen al medio ambiente. En este sentido, los tratamientos biolgicos son una estrategia viable. En bibliografa hay estudios que prueban la eficacia de extractos de plantas sobre microorganismos que habitan el suelo como Fusarium, Verticillium y Phytophthora. Si estos productos pudieran reducir las poblaciones de patgenos habitantes del suelo y el desarrollo de enfermedades, seran una alternativa potencialmente segura para el ecosistema y utilizable en programas de manejo integrado. El objetivo del trabajo fue evaluar la accin del aceite esencial de organo sobre el crecimiento miceliar y la produccin de esporangios de P. nicotianae y P. palmivora. El efecto de las distintas concentraciones de aceite sobre el crecimiento miceliar fue evaluado in vitro a travs de la tcnica del medio envenado y sobre la produccin de zoosporangios a travs de la tcnica de Simpfendorfer et al. (2001). Con los datos obtenidos fue calculado el porcentaje de Inhibicin, utilizando la frmula I%=((dc-dt)/dc)*100, donde dc es el valor del control y dt del tratamiento. Todos los datos fueron procesados con el paquete estadstico SPSS 9.0. Fueron calculados los intervalos de confianza y la significancia. La diferencia de medias fue determinada por el test LSD (P<0,05). El aceite esencial de organo produjo una inhibicin del crecimiento miceliar importante en ambas especies de Phytophthora a partir de las 50 ppm, a concentraciones menores la inhibicin fue mnima e inclusive, en algunos casos, estimul el crecimiento. A pesar de ello, a estas bajas concentraciones se redujo en forma significativa el nmero de zoosporangios que generaron. El uso de esta sustancia de origen vegetal podra ser considerada como una alternativa vlida en el control
P524 - 27802 AISLAMIENTO, SELECCIN Y EVALUACION IN VITRO DE HONGOS DEGRADADORES DE LIGNINA Y CELULOSA A PARTIR DE SUELO Y MATERIAL VEGETAL DE PALMA DE ACEITE DE LAS REGIONES GUAINIA Y VICHADA DE COLOMBIA. CARRERO, MARTHA (1); RINCON, LORENA (2); AREVALO, PAULA (1); NUBIA, MORENO (2)
(1) Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional de Colombia, (2) Departamento de Ingeniera Qumica
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Introduccin. La degradacin de la materia es esencial para garantizar la biodisponibilidad y la dinmica de los nutrientes en el suelo. Los hongos degradadores de lignina y celulosa son responsables del ciclaje del carbono, al degradar estos polmeros en compuestos de menor peso molecular asequibles para las plantas y para los microorganismos del suelo. Objetivos Aislar y seleccionar hongos degradadores de lignina y celulosa a partir de suelo y material vegetal de palma de aceite de las regiones Guaina y Vichada, estimacin de la degradacin de tamo de arroz por parte de los microorganismos (MO) aislados, y su evaluacin para la produccin de biomasa en tres medios de cultivo. Materiales y Mtodos. Se realiz un aislamiento primario de microorganismos en medios selectivos (carboximetilcelulosa CMC y Lignina) y medio suplementado con tamo de arroz. La evaluacin cualitativa de la actividad celuloltica se determin bajo la tcnica de revelado de rojo congo, los hongos aislados se seleccionaron mediante la medicin de halos de hidrlisis. Se seleccionaron como hongos ligninolticos (con actividad manganeso peroxidada) aquellos que presentaron oxidacin del guayacol produciendo viraje del medio a color caf rojizo. La estimacin de la degradacin del tamo de arroz se realizo calculando la prdida de peso seco del tamo en bandejas de suelo no estril inoculadas con cada uno de los hongos seleccionados sin control de temperatura ni humedad. Para la produccin de biomasa fueron evaluados los medios de cultivo papa dextrosa, Saboureaud y harina de arroz y se determin la biomasa producida por peso seco. Resultados Se obtuvieron en total 57 aislamientos fngicos, de los cuales se seleccionaron los tres que presentaron mayor actividad celuloltica en relacin al espesor del halo de hidrlisis y tres que produjeron oxidacin del guayacol como cepas ligninolticas. La prueba para estimar la degradacin de tamo de arroz no arroj diferencias significativas entre los ensayos realizados con relacin al control negativo, probablemente debido a las condiciones no controladas de humedad y temperatura, estos ensayos se encuentran nuevamente en evaluacin bajo condiciones controladas de estas variables Para las tres cepas celulolticas se obtuvo una mayor produccin de biomasa en el medio Sabouraud y para las ligninolticas el medio de harina de arroz. Conclusiones. Los medios de cultivo CMC y lignina cuya fuente de carbono es un sustrato fcilmente disponible para los microorganismos fueron ms selectivos para el aislamiento en comparacin con el medio enriquecido con tamo de arroz. Se seleccionaron las cepas que presentaron mayor actividad celuloltica y ligninoltica, mediante su evaluacin cualitativa. Se evalu la produccin de biomasa obtenindose hasta 17g de biomasa/litro, sin embargo es recomendable realizar la evaluacin de otros medios para la produccin de extractos enzimticos y biomasa simultneamente.
rrollo consideradas ptimas. Los insectos provinieron de colonias mantenidas en bioterio y alimentados con avena. Se seleccionaron 100 huevos y 10 individuos maduros de cada uno de los 5 estadios ninfales y adultos de ambos sexos en estado prereproductivo; reproductivo y post-reproductivo. La localizacin y caracterizacin morfolgica de los YLS se llev a cabo a partir de preparaciones histolgicas de adultos y ninfas incluidos en resina. Las secciones fueron teidas con azul de toluidina y observadas con microscopio ptico. Para la cuantificacin se utiliz una cmara de Neubauer para lo cual los insectos se maceraron individualmente. La carga de YLS se expres como nmero de YLS/husped. Los YLS de forma elipsoidal (12 x 4m) se localizaron en el polo posterior de los huevos; en el cuerpo graso del abdomen en ninfas y adultos y en relacin a las ovariolas y a los apodemas esternales en las hembras. El menor nmero de YLS se registr en el estado de huevo (1.211) y se increment exponencialmente hasta un mximo de 404.167 YLS/hembra reproductiva, para decrecer durante la etapa post-reproductiva debido a la transmisin transovarial de YLS. A lo largo del ciclo vital, considerando slo a las hembras adultas y hasta la etapa reproductiva, el incremento de YLS/husped fue marcado y se ajust satisfactoriamente (R = 0,86) mediante la ecuacin: YLS (t) = YLS(o) EXP (2024.t), donde YLS(o) y YLS (t) representan, respectivamente, la carga de YLS/husped inicial y la correspondiente al tiempo t, y el exponente representa la tasa de incremento diario per cpita. En el estado adulto los machos exhibieron una cantidad de YLS sensiblemente menor que las hembras: el mximo fue 105.263. La morfologa, tamao, localizacin y carga de YLS/husped fue similar a la descripta para especies de delfcidos de otras latitudes. En condiciones ptimas el incremento de YLS a lo largo del ciclo vital del husped fue exponencial. En futuros estudios se manipularn recursos y/o condiciones de cra de D. kuscheli a fin de reducir la tasa de incremento de YLS que podran afectar negativamente la viabilidad de sus huevos. Financiamiento: CIC, CONICET, UNLP, FONCYT PICT-200700143-03.
P526 - 27828 BIOCONVERSION DE VINAZA A BIOMASA PROTEICA MEDIANTE LEVADURAS. SCARONI, ELSA; MARTEARENA, MARA RITA; ALFARO, JUAN MANUEL; LOCATELLI, SILVANO
CIUNSA-INIQUI- Universidad Nacional de Salta Introduccin: En el Noroeste Argentino la mayora de los ingenios producen etanol a partir de la melaza y jugo de caa de azcar, obtenindose como subproducto vinaza. Este desecho industrial tiene un alto contenido de materia orgnica en solucin (5-10%). Mediante el empleo de microorganismos es posible la utilizacin de vinaza como fuente energtica y de biomasa a travs de una bioconversin lo que permite un biotratamiento de efluentes orgnicos de la industria azucarera y alcoholera. Objetivos: Utilizar vinaza como sustrato para la produccin de biomasa con el fin de ser usada como enmienda orgnica con alto contenido de nitrgeno en suelos. Disminuir la demanda qumica de oxgeno del efluente y por lo tanto la contaminacin ambiental que ste produce. Materiales y Mtodos: Se trabaj con vinaza proveniente de un ingenio de la provincia de Salta, la que se inocul con la levadura Rhodotorula mucilaginosa aislada de cachaza de la zona prxima al rea de influencia de esta industria. Las levaduras se desarrollaron primero en un medio para inculo conteniendo sacarosa durante 24 horas y posteriormente en vinaza diluida (1:2), a 30 C y con agitacin., durante 10 das en sistema batch. Se cont el nmero de clulas por mL, utilizando la cmara de Neubauer a distintos tiempos, al final de la experiencia se separ la biomasa obtenida por centrifugacin, se calcul su peso sobre base seca y se determin nitrgeno por el mtodo de Kjieldhal. En la vinaza utilizada como sustrato y en el sobrenadante al final de la reaccin se determin demanda qumica de oxgeno (DQO). Resultados: El mximo nmero de clulas se obtuvo en el octavo da (14,7x108 clulas/mL) y la cantidad de biomasa seca fue de 3,97g para un volumen de 150mL de sustrato, con un contenido de nitrgeno de 7,7% p/p. El DQO disminuy de 30.062 mg/L a 6.675mg/L, logrndose una remocin de
P525 - 27818 ENDOSIMBIONTES OBLIGADOS (YEAST-LIKE SYMBIOTES) DE Delphacodes kuscheli (HEMIPTERA: DELPHACIDAE), VECTOR NATURAL DEL MAL RO CUARTO DEL MAZ EN ARGENTINA. CUANTIFICACIN Y CARACTERIZACIN MORFOLGICA. BRENTASSI, M E (1); LILJESTHROM, G (1,2); MARINO, A (1)
(1) Universidad Nacional de La Plata-CIC, (2) Centro de Estudios Parasitolgicos y de Vectores Delphacodes kuscheli Fennah es el principal vector del Mal de Ro Cuarto enfermedad del maz producida por un Fijivirus. Esta virosis se detect tambin en gramneas cultivadas y silvestres. La transmisin del virus al maz ocurre en los primeros estados fenolgicos cuando los adultos infectados se dispersan debido a la escasez de recursos alternativos. Estudios demogrficos de D. kuscheli mostraron que la avena es un hospedante de alta calidad nutricional. En delfcidos es conocida la intervencin de endosimbiontes intracelulares obligados, yeast-like symbiotes YLS (Clase Pyrenomycetes), en el metabolismo del esterol, en el desarrollo embrionario y en la capacidad vectora. Esta contribucin representa el primer estudio en la regin neotropical que aborda a los endosimbiontes de especies plagas de gramneas con miras a su utilizacin en programas sustentables de manejo y control. El objetivo fue localizar y cuantificar a los YLS en distintos estados de desarrollo del vector en condiciones de desa-
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77,8% de la materia orgnica. La vinaza es un buen sustrato para el desarrollo de Rhodotorula mucilaginosa, permitiendo una remocin del 78% de la carga orgnica del efluente. La velocidad de produccin fue 0,055g/L.h. Debido al alto contenido de nitrgeno en la biomasa, el inters es que sea utilizada como enmienda orgnica en suelos con bajo contenido de nitrgeno de la zona.
P527 - 27855 ACTIVIDAD ENZIMTICA Y FRECUENCIA DE HONGOS EN SUELOS AGRCOLAS SOMETIDOS A DIFERENTES PRCTICAS DE MANEJO. GOMEZ, ROMINA (1); ARAMBARRI, ANGELICA (2); SAPARRAT, MARIO (2, 3, 4); BALATTI, PEDRO (1, 3, 4); CORDO, CRISTINA (1)
(1) CIDEFI, Fac. Cs. Agrarias y Forestales, UNLP, La Plata (2) Instituto de Botnica Spegazzini, Fac. Cs. Naturales y Museo, UNLP, La Plata. (3) INFIVE, UNLP-CCT-CONICET, La Plata, (4) Ctedra de Microbiologa Agrcola, Fac. Cs. Agrarias y Forestales, UNLP, La Plata, Argentina El uso intensivo del suelo atenta contra la calidad del recurso incluyendo a la microflora y con ello a la dinmica de los nutrientes, que hacen al rendimiento de los cultivos. Este efecto se atena implementando prcticas y manejos culturales conservacionistas. Por ello una manera de evaluar la calidad de los suelos sometidos a diversas prcticas agrcolas es a travs del anlisis de grupos fisiolgicos y/o test de actividad enzimtica del suelo. Objetivo: Determinar la frecuencia de hongos y la actividad celuloltica y de deshidrogenasas en dos suelos cultivados bajo distintas prcticas de manejo. Materiales y Mtodos: El suelo del lote experimental es un Argiudol Tpico sometido a un sistema de Siembra Directa (SD) con labranza reducida utilizando dos secuencias distintas de cultivo una trigo/soja/avena/trigo/soja (TS) y otra trigo y reposo (TR). Se utilizaron dos dosis de fertilizante nitrogenado: 80 Kg N ha-1 en el tratamiento F1 y 160 Kg N ha-1 en el tratamiento F2, incluyendo un control 0 Kg N ha-1. Las muestras en todos los casos fueron compuestas e incluyeron los primeros 5 cm de profundidad. A partir de la siembra de partculas de suelo se realiz el aislamiento de los hongos sobre un medio de cultivo agarizado para su posterior identificacin. La evaluacin de actividad celulasa y deshidrogenasa se realiz a partir de alcuotas de las muestras utilizando sustratos especficos. Los resultados se analizaron estadsticamente a travs de un ANOVA de una va, utilizando el test de Tukey. Resultados: Aspergillus, Fusarium y Trichoderma fueron los gneros ms frecuentes en ambos sistemas de manejo. La actividad celulasa fue similar en los suelos del tratamiento TS y TR sin fertilizacin (0,33 y 0,13 mU gr-1 de suelo respectivamente). La actividad celulasa fue alterada por la fertilizacin con 80 Kg N ha-1 (F1) en los sistemas de manejo empleados (p < 0,05), no as por los niveles ms altos de fertilizacin como 160 Kg N ha-1. En contraposicin, la actividad de deshidrogenasas fue significante superior en los suelos bajo labranza TS que en los suelos bajo TR (p < 0,05). La fertilizacin slo modific los niveles de actividad deshidrogenada en el sistema TS, cuyo tratamiento control fue el que mostr menor actividad. Conclusiones: La prctica de manejo no afect la micobiota del suelo, pero modific el nivel de actividad de celulasa y deshidrogenasa, las que son adicionalmente alteradas por la dosis de fertilizante.
misma manera que otros patgenos de P. vulgaris, coevolucion con su hospedante, en los centros de diversificacin. En el caso del poroto existen dos pooles gnicos: porotos mesoamericanos y andinos, a partir de los cuales se generaron formas intra-especficas del hongo, una mesoamericana (P. griseola f. mesoamericana) y otra andina (P. griseola f. griseola). Estudios previos revelaron que P. griseola sintetiza melaninas de tipo 1,8dihidroxinaftaleno, del que se desconocen la sntesis y su regulacin as como el rol de las mismas en la patognesis. Objetivos: Analizar la pigmentacin y el contenido de pigmentos oscuros, entre ellos la melanina, en cultivos agarizados de dos cepas de P. griseola, una correspondiente al pool gnico mesoamericano y otra al pool andino. Adems se evalu el nivel de actividad enzimtica oxidativa con el fin de asociarla a la sntesis de pigmentos oscuros. Materiales y Mtodos: Los hongos se cultivaron sobre el medio agar-glucosa-extracto de papa a 24 ?1,5 C durante 21 das. Al cabo de este tiempo, se estim el crecimiento miceliar y la pigmentacin. Este ltimo parmetro se determin a travs de los niveles de oscuridad de las imgenes digitalizadas de la superficie de las colonias utilizando el programa Adobe Photoshop (versin 8.0.1.). Se realiz tambin la extraccin de melanina, cuya presencia se estim en base a la absorbancia de una solucin alcalina a 280 nm, 430 nm y 460 nm. Por otro lado se determinaron las actividades enzimticas oxidativas como lacasa, peroxidasa, tirosinasa y cresolasa sobre alcuotas de fracciones intracelulares y asociadas a pared. Resultados: P. griseola f. griseola aislamiento S3b creci ms y present una pigmentacin menos intensa (68,2 K) que P. griseola f. mesoamericana T4 (80,1 K; p < 0,01) que mostr menor crecimiento. Sin embargo, un contenido superior en melanina se observ en el aislamiento S3b (absorbancia a 280 nm: 18,3 2,3 a partir de 50 mg de micelio) comparado con T4 (14,9 1,1, p < 0,01). Por otro lado, slo se detect actividad lacasa asociada a fracciones intracelulares y a pared celular, siendo similares los niveles en los aislamientos analizados. Los representantes de P. griseola f. griseola y P. griseola f. mesoamericana difieren en su tasa de crecimiento y en la sntesis de melanina, existiendo una relacin inversa entre los mismos. Sin embargo, la actividad de enzimas oxidativas involucradas en la sntesis de melaninas, como las lacasas, es similar en los aislamientos analizados. Estos resultados sugieren un rol de las melaninas en el crecimiento de este hongo, siendo la pigmentacin un carcter con alto potencial diagnstico para la identificacin de formas especficas del hongo.
P529 - 27885 EVALUACIN PRELIMINAR DE LA CEPA M6C DE Bacillus cereus COMO ANTAGONISTA DE Paenibacillus larvae, AGENTE CAUSAL DE LA LOQUE AMERICANA DE LAS ABEJAS. ALIPPI, ADRIANA MONICA; MINNAARD, JESSICA
CIDEFI, Fac. Cs. Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata, La Plata La enfermedad ms grave de la etapa larval de las abejas (Apis mellifera L.) es la loque americana ocasionada por la bacteria esporulada Paenibacillus larvae. La misma tiene difusin mundial y en la Argentina est ampliamente diseminada en todas las zonas productoras de miel. El empleo de antibiticos para su control como alternativa a la quema de colmenas ha facilitado la aparicin de cepas resistentes a oxitetraciclina y contaminacin de las mieles con residuos de estas sustancias. Con el objeto de disponer de opciones de control no contaminantes para la enfermedad se plante investigar el antagonismo entre especies bacterianas productoras de bacteriocinas y P. larvae. En nuestro laboratorio, se han encontrado cepas aerbicas esporuladas aisladas de mieles capaces de inhibir el desarrollo de P. larvae en medios slidos. Con este antecedente, se plante el objetivo de caracterizar la o las sustancias antagnicas producidas por la cepa m6c de Bacillus cereus. Para ello se realizaron cultivos en fase estacionaria temprana de esta cepa en medio tripticasa soya a 32 C en agitacin. Luego se separaron las bacterias mediante centrifugacin y se precipitaron las protenas del sobrenadante filtrado con sulfato de amonio al 65%. El precipitado obtenido luego de centrifugar se resuspendi en buffer fosfato (PBS) y se ultrafiltr en columnas Amicon Ultra-15 de 3K concentrando las
P528 - 27864 PIGMENTACIN Y ACTIVIDAD ENZIMTICA OXIDATIVA DE DOS CEPAS REPRESENTATIVAS DE Pseudocercospora griseola, AGENTE CAUSAL DE LA MANCHA ANGULAR DEL POROTO. BARCENA, ALEJANDRA (1); LLORENTE, CARLA (1); TRONCOZO, MARIA (1,2); SAPARRAT, MARIO (1,2,3); BALATTI, PEDRO (1,3,4)
(1) INFIVE, UNLP-CCT-CONICET, La Plata; (2) Instituto de Botnica Spegazzini, FCNyM, UNLP, La Plata; (3) Ctedra de Microbiologa Agrcola, FCAyF, UNLP, La Plata (4) CIDEFI, FCAyF, UNLP, La Plata, Argentina Introduccin: Pseudocercospora griseola (Sacc.) Crous & U. Braun es el agente causal de la mancha angular del poroto (Phaseolus vulgaris L.). El hongo presenta micelio oscuro y de la
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muestras 100 veces. Finalmente, se purific mediante extraccin con butanol (2:3) 1 h a T ambiente y el solvente se evapor en rotavapor a 40 C. La capacidad inhibitoria de las muestras se evalu mediante la tcnica del spot test utilizando como microorganismo indicador la cepa P. larvae ATCC 9545 y se determin la concentracin de protenas por el mtodo de Bradford. Paralelamente se realiz el mismo procedimiento con medio de cultivo sin inocular como control. La muestra obtenida luego de la purificacin con butanol resuspendida en PBS se trat con proteinasa K (1 mg/mL) durante 1 h a 37 C. La actividad enzimtica se inactiv por incubacin a 100 C durante 3 minutos. Los resultados demuestran que la sustancia inhibitoria produce un halo de inhibicin de 18,7 0,28 mm de dimetro con una concentracin de protenas de 0,24 mg/mL. El procedimiento de purificacin con butanol demostr que el 83% de las protenas quedan en la fase acuosa pero no poseen capacidad inhibitoria. En geles de SDSPAGE de glicina se observaron bandas de 94 KDa, 20 KDa y una de aproximadamente 50 KDa. El tratamiento con proteinasa K no inhibi la capacidad inhibitoria de las muestras, arrojando halos de inhibicin sin diferencias significativas (p < 0.05) con respecto a la muestra sin tratar (17,5 0,85 mm). El control no produjo halos de inhibicin. Los datos presentados demuestran que la cepa m6c de B. cereus produce una sustancia inhibitoria contra P. larvae que no sera de naturaleza proteica. Estudio financiado por la ANPCyT (PICT2411) y la CIC.
P531 - 27894 POTENCIAL APLICACIN DE Pseudomonas sp. PCI2 PARA EL CONTROL DE PATGENOS FNGICOS DE TOMATE. PASTOR, NICOLAS (1); CORDERO, PAULA (1); ROSAS, SUSANA (1); ROVERA, MARISA (1)
Ro Cuarto, Provincia de Crdoba, Argentina Antecedentes: Las enfermedades fngicas son uno de los principales factores que limitan la produccin de los cultivos hortcolas. El control biolgico ofrece una estrategia para aumentar las prcticas actualmente disponibles para el manejo de las enfermedades vegetales. En aos recientes, varios estudios han sealado que las pseudomonas fluorescentes tienen un potencial considerable como agentes de control de patgenos fngicos, dado que son nutricionalmente verstiles, tienen tasas de crecimiento rpidas, y producen metabolitos antifngicos. En ensayos previos se aisl una cepa bacteriana (Pseudomonas sp. PCI2) a partir del sistema radical de plantas sanas de tomate. In vitro, PCI2 inhibe a S. rolfsii y A. alternata, presenta actividad quitinoltica y produce siderforos. En ensayos de inoculacin realizados en tomate, increment un 29% el porcentaje de plantas paradas, evidencia de la potencial capacidad de control del damping-off de tomate causado por S. rolfsii. Objetivos: (1) caracterizar genotpicamente a Pseudomonas sp. PCI2, (2) detectar genes codificantes de antibiticos en la cepa PCI2, y (3) analizar su efecto sobre el tizn foliar causado por A. alternata. Materiales y Mtodos: Caracterizacin genotpica. MACROGEN Inc. realiz la amplificacin y el secuenciamiento del gen 16S rRNA. La secuencia de 780 pb resultante se analiz mediante el algoritmo BLASTN, disponible en el GenBank. La secuencia de la cepa PCI2 se aline, usando el programa BioEdit V 7.0.9.0, con secuencias obtenidas a partir de la base de datos del Genbank. Adicionalmente, se us el programa PAUP* V 4.08b para conducir el anlisis de las secuencias del gen 16S rRNA. Deteccin de genes codificantes de antibiticos. Se realizaron ensayos de PCR para detectar los genes phlD, phz, pltC y prnD involucrados en la biosntesis de 2,4-diacetilfloroglucinol, 1-cido carboxlico fenazina, pioluteorina y pirrolnitrina, respectivamente, en PCI2. Efecto sobre el tizn foliar por A. alternata. Las partes areas de plantas de tomate de 30 das se atomizaron con una suspensin de PCI2 en caldo tripticasa soya (TSB) (7x106 UFC/ mL). Las plantas se colocaron en cmara de crecimiento a 28C. 24 horas despus, las hojas se infestaron en ocho sitios diferentes (10 l por gota) de una suspensin de A. alternata (4,6x104 conidios/ mL). Como controles, se usaron plntulas no tratadas y no infestadas con A. alternata, y plntulas tratadas con TSB estril. Los resultados se registraron mediante el conteo de hojas sanas luego de cuatro das. Resultados y Conclusiones: PCI2 mostr un 100% de identidad con especies de Pseudomonas. Particularmente, PCI2 se agrup dentro de la especie P. putida. No se amplific ninguno de los fragmentos de DNA correspondientes a los antibiticos probados. El pre-tratamiento de plntulas de tomate con PCI2 increment el porcentaje de hojas sanas en un 10%, La cepa PCI2 representa una alternativa promisoria para el control de patgenos de plantas de tomate, tales como S. rolfsii y A. alternata, en invernaderos comerciales.
P530 - 27890 EL CU+2 MODIFICA EL CRECIMIENTO Y LA ACTIVIDAD LACASA DEL HONGO LIGNINOLTICO Peniophora albobadia (SCHW.: FR.) BOIDIN (Basidiomycota) CEPA LPSC # 285. TRONCOZO, MARIA INES; BARCENA, ALEJANDRA (1); SAPARRAT, MARIO (1, 2, 3); ARAMBARRI, ANGELICA (2); BALATTI, PEDRO (1,3)
(1) Instituto de Fisiologa Vegetal (INFIVE), Universidad Nacional de La Plata (UNLP)- - Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET). (2) Instituto de Botnica Spegazzini, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, UNLP, (3) Ctedra de Microbiologa Agrcola, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, UNLP Introduccin: Los hongos ligninolticos tienen potencial biotecnolgico porque sintetizan lacasas y peroxidasas, enzimas importantes para procesos de la industria papelera, la biorremediacin y otras reas. Sin embargo, an no se dispone de sistemas enzimticos para un uso a escala industrial. Una estrategia para incrementar su produccin es utilizar inductores enzimticos como el Cu +2. Peniophora albobadia (Schw.: Fr.) Boidin (Basidiomycota) LPSC # 285 es una cepa autctona aislada a partir de una fructificacin desarrollada sobre restos leosos de bosques de Misiones (Argentina). Este aislamiento degrada a una alta tasa compuestos recalcitrantes como lignina y otros aromticos que usualmente generan problemas ambientales. Sin embargo, se desconoce de qu manera el Cu+2 regula el crecimiento de este hongo y los niveles de actividad lacasa-peroxidasa. Objetivos: Evaluar el efecto de un rango de concentraciones de Cu+2 adicionadas al medio de cultivo sobre el crecimiento del hongo y los niveles de actividad lacasa y peroxidasa extracelular. Materiales y Mtodos: El hongo se cultiv bajo agitacin (175 rpm) a 25 1,5 C en un medio lquido basal, Czapek Dox modificado (control), suplementado con un rango de concentraciones de CuSO4.5H2O (0,15-1,2 mM). A los 7 y 14 das de incubacin, se tomaron muestras del sobrenadante de los cultivos para la determinacin de actividad lacasa-peroxidasa. La biomasa fngica se estim en base al peso seco (60 5 C) del micelio a los de 14 das de cultivo. El anlisis estadstico se realiz por medio de un anova y un Tukey a posteriori (P < 0,05). Resultados: A los 14 das de cultivo, la suplementacin con 0,15 mM de Cu+2 gener los mximos niveles de actividad lacasa (63 veces superior al cultivo no suplementado, Tukey, P < 0,05), no detectndose actividad peroxidasa. Sin embargo, el Cu+2 provoc una reduccin en el crecimiento del hongo en relacin al control (Tukey, P < 0,05). Estos resultados mostraron que el Cu+2 indujo un aumento en la actividad lacasa de este hongo, probablemente debido que acta como cofactor de estas enzimas.
P532 - 27917 SOBRE ENSAYOS NORMALIZADOS PARA DETERMINAR BIODEGRADABILIDAD AERBICA DE PELCULAS PLSTICAS EN COMPOST. YASHCHUK, OXANA (1); HERMIDA, ELIDA (1,2)
(1) CONICET-Comisin Nacional de Energa Atmica, (2) Universidad Nacional de San Martn En diferentes regiones de Argentina se han sancionado leyes tendientes a sustituir el empleo de bolsas de plstico petroqumico por otras fabricadas con materiales que no afecten el medio ambiente. Simultneamente en el mbito de la Gerencia de Energa y Ambiente de la Direccin de Normalizacin del IRAM se cre una Comisin de estudio con el objetivo de elaborar un documento normativo para la determinacin de la biodegradabilidad de las bolsas plsticas. Para ello es menester establecer las condiciones ptimas del proceso de biodegradacin en diferentes ambientes: compost, agua dulce, agua de mar, medios anaerbicos, etc.
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Este trabajo intenta establecer un ensayo para determinar la cintica de biodegradacin de pelculas plsticas en compost, que garantice reproducibilidad y precisin dentro de la normativa internacional vigente. Para la biodegradacin aerbica se mezclaron muestras de pelculas polimricas de 2x2 cm con compost estabilizado de guano de ave (relacin 6:1 en peso seco) y se incubaron en recipientes estticos a una temperatura constante 582 C; se asegur una aireacin homognea y libre de dixido de carbono (CO2). Se analizaron pelculas fabricadas con materiales: oxo-degradables, de base almidn, rotuladas como biodegradables y de polihidroxibutirato-co-hidroxivalerato (PHBV); como control positivo se utiliz papel de filtro (celulosa). En todos los recipientes se midi la produccin acumulada de CO2 a intervalos regulares, utilizando el mtodo de determinacin discontinua por absorcin en la solucin de hidrxido de bario y la titulacin con cido clorhdrico. El porcentaje de biodegradacin se determin mediante la relacin entre CO2 medido y la cantidad terica (TOC) mxima de CO2 que puede producirse. Durante el experimento los niveles de humedad se mantuvieron dentro de los lmites permitidos, 40-60%. Lo mismo se observa para los valores de pH, que estn dentro del rango permitido de 7.0 a 8.0, por lo tanto los monmeros resultantes de la degradacin de las pelculas no producen acidificacin del medio y la flora microbiana no se ve afectada. Regulando el flujo de aire en los recipientes se logr una concentracin de oxgeno estable dentro del 6%. Se observa clara diferencia en la produccin de CO2 entre los recipientes blanco y aquellos que contienen las muestras ensayadas. Con respecto al blanco, la concentracin de CO2 aumenta muy lentamente como consecuencia de la evolucin de la materia orgnica; lo mismo se observa en los recipientes con las muestras oxo-degradables. En los recipientes con las otras pelculas se observan claramente diferentes fases: una etapa inicial donde la biodegradacin no supera el 10% a una tasa baja que aumenta abruptamente hasta llegar a la fase de estabilizacin. Se observa una tendencia de mayor grado de biodegradacin en las pelculas de PHBV que en las de base almidn. Los resultados obtenidos sugieren, por un lado, que el mtodo de ensayo rene las condiciones buscadas de precisin y reproducibilidad dentro de los lineamientos de las normativas internacionales. Por otra parte, se demuestra que las pelculas estudiadas, excepto las oxodegradables son compostables.
(p<0,0001). Para esta situacin, de ensayo in vitro, uno de los factores que ms influenciaron en el efecto inhibitorio de Fusarium spp. fue la composicin del medio de cultivo. Este juega un papel importante en la expresin del comportamiento y fisiologa lo que puede ser muy significativo al momento de formular un inculo, tanto para BC como para promocin del crecimiento.
P534 - 27934 IMPACTO DE LA MICORRIZACIN SOBRE LA TOLERANCIA AL ESTRS HDRICO EN TOMATE EFECTO SOBRE EL CRECIMIENTO, CONTENIDO EN PROLINA Y MALONILDIALDEHDO. RUSCITTI, M (1); GARITA, S (1); ARANGO, C (1); RONCO, M (1); BELTRANO, J (1,2)
(1) Universidad Nacional de La Plata, (2) Centro de Investigaciones Clnicas Buenos Aires El estrs hdrico afecta el metabolismo celular y el crecimiento de las plantas. Las micorrizas son una simbiosis mutualista entre hongos del phylum Glomeromycota y las races de la mayora de las plantas. El uso de las micorrizas permite incrementar la habilidad de los cultivos para soportar situaciones de estrs. El objetivo del trabajo fue estudiar la respuesta de plantas de tomate, al estrs hdrico y la inoculacin con diferentes hongos micorrcicos sobre el crecimiento, la estabilidad de las membranas celulares y la acumulacin de prolina. Plantas de tomate no inoculadas (NI) o inoculadas (I) con Glomus mosseae (GM), Glomus intraradices A4 (GIA4) y Glomus intraradices B1 (GIB1), se trasplantaron a recipientes con una mezcla de tierra y arena (1:1) y se sometieron a estrs hdrico, por suspensin de riego. Tratamientos: plantas regadas regularmente Potencial Agua = 0.03 MPa y estrs Potencial Agua = -1.2 MPa. Despus de 21 das de iniciado el estrs, en 6 plantas por tratamiento se determin: porcentaje de micorrizacin (%M), rea foliar (AF) y peso seco total (PST), contenido de malonildialdehdo (MDA) y de prolina (Pr) en hoja y raz. Los datos se analizaron estadsticamente por ANOVA (p<0.05). El%M fue del 60, 60 y del 90% en las plantas inoculadas con GM, GIA4 y GIB1 respectivamente, el estrs disminuy la micorrizacin. Con alta disponibilidad hdrica, las plantas inoculadas presentaron mayor AF y PST, con un incremento del AF del 12, 28 y 64% para GM, GIA4 y GIB1 respectivamente y del PST del 20, 21 y 42%. En condiciones no estresantes la produccin de MDA y la acumulacin de Pr no se vieron afectadas por la inoculacin. El estrs increment la sntesis de MDA 76, 52, 80 y 30% en las plantas NI, GM, GIA4 y GIB1 respectivamente. Tabla 1.Contenido de MDA y Pr, AF y PST de plantas de tomate no estresadas y estresadas, no inoculadas (NI) o inoculadas (I) con G. mosseae (GM), G. intraradices A4 (GIA4) y G. intraradices B1 (GIB1).
MDA (nmol. g-1PF) Raz 2.52a 2.25a 2.32a 2.26a 4.44c 3.41b 4.18c 2.96ab MDA (nmol. g-1 PF) Hoja 2.39a 2.19a 1.89a 1.89a 2.30a 1.45a 1.39a 1.60a Prolina (mol. g-1PF) Raz 98.7a 92.5a 79.9a 53.1a 468.6b 588.4c 699.1d 959.8e Prolina (mol. g-1PF) Hoja 456.3a 444.3a 478.9a 484.2a 1315.9b 2396.1c 1944.2c 2295.4c AF (cm2) PST (g)
P533 - 27923 EMPLEO DE PSEUDOMONAS FLUORESCENTES EN EL BIOCONTROL DE LA PODREDUMBRE DE RAZ (Fusarium spp.) EN SOJA. DOBRUSKIN, JUDITH (1); PEREZ BRANDAN, CAROLINA (2); TORRES, NANCY (2); ALTAMIRANO, FANNY (3)
(1) Universidad Nacional Agraria de la Selva, Per (2) Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (3) Universidad Nacional de Jujuy Las interacciones microbianas adems de las PGPR incluyen las relaciones con el biocontrol (BC) de patgenos, ampliamente estudiado usando cepas en inculo simple o mixto. Una alternativa en agricultura sostenible es el empleo de antagonistas microbianos, como controladores biolgicos de patgenos habitantes naturales de los suelos ya que constituye una opcin viable para el control de este tipo de enfermedades. Especial atencin han recibido las pseudomonas fluorescentes como agentes de BC como as tambin por su accin PGPR, promoviendo mejoras en la calidad fisiolgica de los cultivos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el potencial antagnico de cepas de Pseudomonas como agentes de biocontrol para Fusarium spp. causante de pudriciones radiculares en cultivos de soja en el noroeste Argentino. Las especies bacterianas utilizadas fueron P. fluorescens 51B, P. aurantiaca, Pseudomonas H19, H8 y H13 aisladas de rizsfera de plantas de soja y de lombricompuesto de residuos del tabaco. Se realizaron ensayos de actividad PGPR de biocontrol en inculo simple y mixto sobre distintos sustratos: TSA y APG mediante la tcnica de cultivo dual. Los resultados obtenidos demuestran que todas las cepas de Pseudomonas controlan en diferente grado al patgeno. El rango de inhibicin fngica va de un 5-20% en las primeras 48 horas a un 30-50% en un periodo de 8 das. La cepa H13 fue la ms eficaz en medio APG y TSA
Tratamiento =-0.03 MPa NI =-0.03 MPaGM =-0.03 MPaGIA4 =-0.03 MPaGIB1 =-1.2 MPa NI =-1.2 MPa GM =-1.2 MPa GIA4 =-1.2 MPa GIB1
129.2b 146.0bc 166.2c 213.2d 91.9a 99.1a 94.6a 110.4b
4.9b 5.9c 6.0c 7.0d 4.2a 4.4a 4.6ab 4.7b
En condiciones no estresantes, las plantas inoculadas mostraron mayor crecimiento y bajo estrs expresaron capacidad de adaptacin. De los inculos utilizados Glomus intraradices B1 fue el ms eficiente, con mayor acumulacin de prolina y menor dao en las membranas celulares (MDA).
P535 - 27936 MICOBIOTA DEL SUELO ASOCIADA A DIFERENTES PRCTICAS DE MANEJO EN UN SISTEMA DE MONOCULTIVO DE TRIGO. GOMEZ, ROMINA (1,2); SCHALAMUK, SANTIAGO (1,2); CORDO, CRISTINA (1,3)
(1) CIDEFI, Fac. Cs. Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata, (2) CONICET, (3) CIC
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Actualmente en la agricultura se implementan prcticas de manejo conservacionistas las cuales tienen como objetivo evitar un excesivo laboreo del suelo. Las comunidades fngicas del suelo cumplen roles ecolgicos importantes, entre ellos la transformacin de la materia orgnica. El objetivo del presente trabajo consisti en evaluar la diversidad fngica asociada a la implementacin de tres prcticas de manejo de suelo: siembra directa (SD) y labranza convencional (LC) y parcelas en reposo (R). Materiales y Mtodos: El ensayo a campo fue conducido en la Estacin Experimental Julio Hirschhorn de la Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Universidad Nacional de La Plata, sobre un suelo Argiudol tpico. El experimento se desarrollo bajo un sistema de monocultivo de trigo. Los tratamientos de labranza fueron: Siembra Directa (SD), Labranza Convencional (LC) y un rea circundante a dicho ensayo que permanece en reposo con cobertura espontnea (R). El ensayo fue organizado en un arreglo factorial: 3 sistemas de manejo x 3 tiempos x 3 repeticiones. Se realizaron muestreos en Enero (T1), Mayo (T2), Septiembre (T3). Se extrajeron muestras al azar de los primeros 0-10 cm de profundidad, las mismas se dejaron secar al aire y luego se tamizaron con una malla de 0,5 mm. El aislamiento fngico se realiz en un medio de cultivo general (Bilis de Buey). Las placas se incubaron 7 das a 25 C, posteriormente se realiz el recuento de colonias como unidades formadoras de colonias (UFC) por gramo de suelo. Con los gneros determinados se calculo el Indice de biodiversidad de Shannon & Weaver (H). Los datos fueron analizaron estadsticamente a travs de un ANOVA factorial utilizando el test LSD. Resultados: En todos los momentos de muestreo y tratamientos se encontraron 23 gneros dentro de los cuales los ms frecuentes fueron Trichoderma, Aspergillus, Penicillium, Fusarium y Nigrospora. El nmero de UFC disminuy a travs del tiempo. Para sta variable se registr interaccin entre los factores tiempo y manejo de suelo (p<0,01). En T1 se observaron diferencias para los 3 tratamientos, siendo mayor el nmero de UFC en SD (p<0,01), intermedia en R y menor en LC. En T2 no se observaron diferencias significativas entre los tratamientos, mientras que en T3 se cuantificaron mayores UFC en R que en LC y SD (p<0,01). El nmero de gneros permaneci estable en T1 y T2, disminuyendo en T3 (p<0,01). Los mayores valores se registraron en las parcelas R en T1 (18). En LC y SD se mantuvo entre 8 y 12. La diversidad fngica present diferencias entre los diferentes tiempos de muestreo (p<0,01) y entre los tratamientos de manejo (p<0,05). En T1 y T2 la diversidad fue similar pero disminuy significativamente en T3. En los tratamientos no laboreados (SD y R) el ndice fue significativamente mayor que en LC. Conclusiones: El nmero de UFC al igual que el nmero de gneros y la diversidad fngica disminuyeron a travs del tiempo. El disturbio ocasionado por la labranza convencional redujo la diversidad de los hongos presente en el suelo.
manecan en el mismo lugar. Los animales con diarrea eran aislados y tratados. La alimentacin se bas en sustituto lcteo y balanceado iniciador. En el establecimiento B (EB), la crianza de terneros se realizaba combinando sistema de jaulas y estacas, en una superficie de 1/2 ha. El suelo estaba cubierto por gramilla y tierra sin barro. No se encontraron moscas ni animales de otras especies en el lugar. Los terneros se rotaban y estaban provistos de un reparo o media sombra. Aquellos que presentaban diarrea reciban tratamiento y eran aislados del resto. La alimentacin estaba constituida por leche, alimento balanceado iniciador y heno. En EA se evaluaron 106 terneros y 123 en EB. En ambos, la edad de los animales estaba comprendida entre 1 da y 2 meses. Las muestras de materia fecal se tomaron por la maniobra de estimulacin del esfnter anal y se concentraron por el mtodo de Sheather. Los extendidos se colorearon con la tcnica de Kinyoun y la identificacin de ooquistes de Cryptosporidium se realiz teniendo en cuenta su tamao, tincin y caractersticas morfolgicas. El porcentaje de excrecin de Cryptosporidium fue 84% y 20% para EA y EB respectivamente. De acuerdo a la consistencia, las heces se clasificaron en diarreicas y en normales. En EA, el 46% de las muestras positivas fueron diarreicas y 63% en EB. Las condiciones higinico-sanitarias deficientes aumentan el riesgo de infeccin y probablemente contribuyeron a la alta proporcin de excrecin de ooquistes de Cryptosporidium registrada en EA. El control de dicho parsito en los establecimientos ganaderos depende, en gran parte, del manejo sanitario que se lleve a cabo, ya que los animales se infectan a travs de las heces eliminadas por los enfermos y por los portadores sanos, contaminndose as los espacios fsicos, el agua y el alimento. Para reducir el riesgo de infeccin de los animales y la contaminacin con ooquistes de las aguas de escorrentas pecuarias, y por ende, de las fuentes de agua, es recomendable mantener la higiene de las reas de crianza artificial de los terneros y evitar el hacinamiento.
P537 - 27989 FACTORES DE VIRULENCIA DE LEVADURAS AISLADAS DE AMBIENTES OLIVCOLAS. PESCE, VIRGINIA MERCEDES; NALLY, MARIA CRISTINA(1); TORO, MARIA EUGENIA(1); C DE FIGUEROA, LUCIA INES(2); VAZQUEZ, FABIO(1)
(1)Instituto de Biotecnologa-FI-UNSJ; (2)PROIMI. San Miguel de Tucumn Introduccin: Las levaduras son principalmente saprfitas y se encuentran ampliamente distribuidas en diversos ambientes. Existe un creciente inters para utilizar levaduras como agentes de biocontrol de hongos fitopatgenos. Si bien las levaduras son consideradas microorganismos no-patgenos para el ser humano, su empleo como biocontroladoras hace necesario la evaluacin de su potencial patogenicidad. Los gneros Candida y Cryptococcus son citados ampliamente como patgenos oportunistas, principalmente en pacientes inmunodeprimidos. La habilidad infectiva de las levaduras depende de varios factores como el crecimiento a altas temperaturas, la formacin de pseudohifas, y la produccin de enzimas hidrolticas (proteasas y fosfolipasas). Varios factores de virulencia convergentes hacen que la levadura se considere ms infectiva. Objetivo: Determinar la presencia de factores de virulencia en las levaduras aisladas e identificadas de ambientes olivcolas. Materiales y Mtodos: Se tomaron muestras al azar de olivos (hojas, frutos, ramas), de suelo olivcola y alperujo. El aislamiento de levaduras se realiz en medio YEPD (extracto de levadura-peptona-dextrosa) a 25C. Los aislamientos se identificaron por caractersticas fisiolgicas y bioqumicas. En todos los ensayos se sembraron puntualmente 10 l de los distintos aislamientos. Para el ensayo de crecimiento a 37 C, las levaduras se sembraron en medio YEPD y se incubaron por 72h a 37 C. Luego se registr crecimiento (+) o (-). Para la formacin de pseudohifas se sembr cada aislamiento en medio para determinar morfologa y se incubaron durante 4 das a 25 C. Posteriormente se observ la presencia o ausencia de pseudohifas. Actividad proteoltica y fosfolipdica: para detectar la actividad proteoltica se utiliz el medio con albmina bovina como sustrato. Las placas se incubaron durante 4 das a 37 C. En el caso de actividad fosfolipdica se emple el medio yema de huevo y las placas se incubaron 7 das a 37 C. Para las actividades
P536 - 27952 INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES HIGINICOSANITARIAS DE ESTABLECIMIENTOS GANADEROS SOBRE LA EXCRECIN DE Cryptosporidium EN TERNEROS. MODINI, LAURA(1); ZERBATTO, MARIEL(1); ELIGGI, M SUSANA(1); OTERO, JOSE(2); LERMAN DE ABRAMOVICH, BEATRIZ(1)
(1) Seccin Aguas- Fac. de Bioquimica y Cs. Biolgicas-UNL, (2) Dpto. de Salud Pblica- Fac. de Cs Veterinarias-UNL Cryptosporidium es un protozoo que ha producido numerosos brotes de origen hdrico. El agua contaminada con heces de origen humano o animal es la va ms importante de transmisin ambiental. Debido a que los ooquistes son muy resistentes a las condiciones ambientales y a los agentes desinfectantes utilizados en el tratamiento de potabilizacin, es una zoonosis ampliamente distribuida en la naturaleza, siendo su principal reservorio ecolgico el ganado vacuno. El objetivo fue evaluar la relacin entre la excrecin de ooquistes de Cryptosporidium sp y las condiciones higinico-sanitarias de establecimientos ganaderos. Este trabajo fue realizado en 2 establecimientos situados en la Cuenca lechera santafesina. El establecimiento A (EA) dispone de 1/4 ha para la crianza en sistema de estaca. El suelo era de tierra con zonas de barro. Se observ la presencia de moscas y de otras especies animales. Los terneros no contaban con refugio y per-
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enzimticas se observ la presencia de halos de degradacin alrededor de las colonias de levaduras y se determin el valor Pz (radio de la colonia/radio de la colonia + halo). Los ensayos se realizaron por triplicado. Resultados: Se aisl 12 levaduras pertenecientes a los gneros Aureobasidium, Candida, Cryptococcus y Rhodotorula. Todos los aislamientos presentaron al menos un factor de virulencia. Los aislamientos Aureobasidium pullulans BAp7 y Cryptoccocus laurentii BCl25 presentaron tres factores de virulencia. BAp7 mostr actividad proteoltica (Pz = 0.73), fosfolipdica (Pz = 0.436) y formacin de pseudohifas. BCa19 present actividad fosfolipdica (Pz = 0.791), formacin de pseudohifas y crecimiento a 37 C. Los resultados de este trabajo muestran que levaduras de los gneros Aureobasidium y Cryptococcus aisladas de ambientes olivcolas presentan una potencial patogenicidad, factor a tener en cuenta para su empleo como agente de biocontrol.
DE Burkholderia glumae Y Pseudomonas fuscovaginae causant. AREVALO P, PAULA(1); CARRERO, MARTHA(1); MORENO SARMIENTO, NUBIA(2)
(1) Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia, (2) Departamento de Qumica, Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia Introduccin. Dentro de los patgenos de importancia econmica en el cultivo de arroz se encuentran las bacterias Burkholderia glumae y Pseudomonas fuscovaginae, las cuales producen la pudricin bacterial de la pancula del arroz; convirtindose en una gran amenaza para la produccin y estabilidad de los cultivos, los cuales se han visto afectados por dicha enfermedad reflejndose en una reduccin del 50% de la produccin. La persistencia bacteriana se ha incrementado debido a condiciones climticas y al uso cotidiano de semillas no certificadas por pequeos agricultores. Lo anterior ha hecho que instituciones como FEDEARROZ promuevan la realizacin de trabajos de investigacin que ofrezcan soluciones permitiendo el control sobre la enfermedad. Objetivo. Evaluar in vitro el efecto de Penicillium janthinellum, Trichoderma viride y diferentes productos qumicos sobre el crecimiento de Burkholderia glumae y Pseudomonas fuscovaginae. Materiales y Mtodos. Las bacterias fueron suministradas por el laboratorio de patologa de arroz del CIAT a travs de FEDEARROZ. Se evaluaron los extractos de cultivo de cada hongo para observar su control frente a las bacterias mediante la produccin de metabolitos no voltiles y ensayos de determinacin de la actividad antagnica ejercida por T. viride. Los productos qumicos se evaluaron en dos concentraciones cercanas a la dosis de aplicacin comercial, los ensayos se hicieron en cultivo lquido (100 mL en caldo nutritivo) y medio slido, inoculados con 20 L de cada bacteria 1x104 UFC/mL; Se realizaron dos ensayos adicionando el qumico a las cero y 24 horas de incubacin, se evalo el crecimiento de las bacterias a las 48 horas de la adicin del qumico, mediante recuento y siembra en placa. Se evalo en medio slido la resistencia de las bacterias a dos concentraciones de tetraciclina 30 y 60 mg/L. Resultados La produccin de metabolitos voltiles por parte de los hongos evaluados fue negativo comparado con el control, se observo crecimiento de las bacterias en el medio de cultivo con los extractos fngicos, en la prueba de antagonismo se pudo determinar que no hay control completo por parte del hongo ya que se observo formacin de halo de resistencia por las bacterias. Los productos qumicos evaluados en medio liquido no mostraron ningn control significativo sobre el crecimiento bacteriano debido a que los resultados del recuento en placa fueron iguales o superiores pero nunca menores a los iniciales, en tanto que en el medio slido con cobretane y acido oxolinico no se observa crecimiento bacteriano. B. glumae y P. fuscovaginae mostraron resistencia a la tetraciclina a una concentracin de 30 mg/L pero no a la de 60mg/L. Conclusiones. No se evidencio ningn efecto significativo sobre el crecimiento de las bacterias por parte de las cepas fngicas ni los productos qumicos evaluados, estos resultados permiten recomendar al agricultor un uso mas racional de estos qumicos ya que se evidencia que no ejercer control sobre los patogenos. Se recomienda realizar estudios adicionales que permitan encontrar un control efectivo que junto con las buenas prcticas de cultivo ayuden a la disminucin de las enfermedades.
P538 - 27995 EXCLUSIN COMPETITIVA ENTRE LEVADURAS BIOSUPRESORAS Y HONGOS FITOPATGENOS DE UVA: NDICE DE SUPERPOSICIN DE NICHOS. MUOZ, MARIA ANDREA(1,3); NALLY, MARIA CRISTINA (1); PESCE, VIRGINIA MERCEDES(1); VALLEJO, MARTHA(1); TORO, MARIA EUGENIA (1); C DE FIGUEROA, LUCIA INES(2); VAZQUEZ, FABIO(1)
(1) IBT-FI-UNSJ, San Juan; (2) PROIMI-Universidad Nacional de Tucumn, San Miguel de Tucumn; (3) FCEyN, UNSJ, San Juan. Introduccin: La competencia microbiana tiene lugar cuando dos organismos usan un mismo recurso, ya sea el espacio o nutriente limitante. La competencia tiende a producir separaciones ecolgicas de poblaciones estrechamente relacionadas, conocido como exclusin competitiva. La similitud ecolgica de microorganismos interactuantes puede ser estimada a partir del ndice de Superposicin de Nichos (NOIs). Objetivo: Evaluar el ndice de superposicin de nichos entre levaduras biosupresoras y hongos fitopatgenos de uva, en conidiciones in vitro. Materiales y Mtodos: Botrytis cinerea, Aspergillus carbonarius, A. terrus, A.versicolor, A.caelatus, Penicillium comune, Rhizopus stolonifer, Fusarium oxysporum, Ulocladium sp y levaduras antagonistas, aisladas de diferentes ambientes enolgicos, fueron sembrados en Agar- agua con diferentes fuentes carbonadas de la uva (prolina, asparagina, ramnosa, alanina, melibiosa, cido glutmico, tirosina, rafinosa, arginina, lisina, fructosa, metionina, glicina, cido mlico, glucosa y cido tartrico). El ndice de Superposicin de Nichos (NOIs) se determin como el nmero de fuentes carbonadas utilizadas por ambos aislamientos (Levadura biosupresoraHongo) en relacin al nmero total de fuentes utilizadas por el patgeno filamentoso. Los valores de NOIs>0.9 representan ocupacin de mismo nicho (exclusin competitiva), mientras que valores <0.9 representan ocupacin de nichos separados (coexistencia). Resultados: Once pares interactuantes de antagonistahongo presentaron valores de NOIs entre 0.92 y 0.93, lo cual indica un alto grado de similaridad ecolgica entre los mismos (S.cerevisiae BSc16-B.cinerea, S.cerevisiae BSc49-B.cinerea, S.cerevisiae BSc119-A.caelatus, S.cerevisiae BSc169-A.terreus, S.cerevisiae BSc169-Ulocladium sp., Schizosaccharomyces pombe BSchp67-B.cinerea, Debaryomyces vanrijiae Dv179-A. terreus, Torulaspora delbrueckii BTd125-P. comune, T. delbrueckii BTd126-P. comune, Candida famata BCf210-A. terreus, T. delbrueckii BTd152-A. terreus). Tres levaduras presentaron valores de NOIs igual a 1: C. sake BCs186-A. terreus, C. sake BCs198-A. carbonarius, C.c atenulata BCc180-R. stolonifer). Conclusin: A partir de los resultados se concluye que B. cinerea compite por sustrato con diferentes levaduras S. cerevisiae y Sch. pombe, R. stolonifer con C. catenulata; P. comune con T. delbrueckii; A. terreus con D. vanrijiae; C. sake, C. famata, T. delbrueckii y S. cerevisiae; A. carbonarius con C. sake; Ulocladium sp y A. caelatus con S. cerevisiae. Por lo tanto, la competencia por sustrato puede ser uno de los principales mecanismos de accin antagnica entre levaduras y hongos fitopatgenos.
P540 - 28037 EVALUACION DE LA TOLERANCIA A ATRAZINA Y AL CIDO 2,4-DICLOROFENOXIACTICO DE LA COMUNIDAD BACTERIANA DEL AGUA DEL EMBALSE LOS MOLINOS (CRDOBA, ARGENTINA). ROSSEN, ARIANA; CALVO, DANIEL(1); HIGA, LUIS(1); KOROL, SONIA(2)
(1) Instituto Nacional del Agua, (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires Las prcticas agrcolas constituyen una importante fuente de contaminacin por pesticidas y fertilizantes que son utilizados en forma peridica sobre grandes extensiones de terreno. En la cuenca del embalse Los Molinos de la Provincia de Crdoba se ha registrado un crecimiento en los ltimos aos de los cultivos de
P539 - 28005 EVALUACION IN VITRO DEL CONTROL EJERCIDO POR Penicillium janthinellun, Trichoderma viride Y DIFERENTES PRODUCTOS QUIMICOS SOBRE EL CRECIMIENTO
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soja, maz y trigo, con el consecuente incremento en el uso de herbicidas como atrazina y cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D). Estos herbicidas pueden ingresar a los ecosistemas acuticos por aspersin accidental o por escorrenta superficial. Los objetivos del presente trabajo fueron: a) determinar bacterias tolerantes a atrazina y 2,4-D, y b) evaluar cambios en la comunidad bacteriana expuesta a los pesticidas a travs del perfil de utilizacin de fuentes de carbono. En muestras de agua provenientes de la desembocadura del ro Los Reartes (LR) y del Dique (D) del embalse Los Molinos se determin la tolerancia a atrazina y 2,4-D de la comunidad bacteriana. Las concentraciones ensayadas fueron 0,02; 0,2 y 2 mg/L de atrazina y 2; 20; 200 mg/L de 2,4-D. Los ensayos se realizaron a 20 C durante 5 das. Se efectuaron recuentos en placas de Petri conteniendo agar R2A a tiempo cero, 24 y 120 horas. Posteriormente se aislaron y caracterizaron las bacterias tolerantes mediante pruebas bioqumicas. Adems se tomaron muestras al inicio y al final del ensayo de tolerancia a atrazina y a 2,4-D con el fin de estudiar los cambios en el perfil de utilizacin de fuentes de carbono. Los ensayos se efectuaron en microplacas a 20 C durante 10 das. Se utilizaron 36 fuentes de carbono y resazurina como indicador redox. El consumo de fuentes de carbono se determin en un lector de microplacas por espectrofotometra a 600 nm. Los recuentos de bacterias no mostraron diferencias significativas para ninguna de las tres concentraciones de atrazina evaluadas respecto al control. Luego de la exposicin a 2,4-D slo se obtuvo una reduccin del nmero de microorganismos significativa (p<0.05) al final del ensayo para la concentracin de 200 mg/L. Se seleccionaron 19 y 10 bacterias tolerantes a atrazina y a 2,4-D, respectivamente. El 80% de las cepas tolerantes seleccionadas pertenecen al gnero Pseudomonas. Del anlisis de los perfiles de consumo de fuentes de carbono se observ que: 1) existen diferencias en los perfiles de consumo de los sitios de monitoreo LR y D, 2) las comunidades bacterianas expuestas a atrazina mostraron una disminucin en el nmero de fuentes de carbono utilizadas y en los niveles de consumo, y 3) el nmero de fuentes de carbono utilizadas respecto al control disminuy para las tres concentracin de 2,4-D ensayadas. Debido a que las bacterias cumplen un rol esencial en los ambientes acuticos contaminados contribuyendo con los procesos de atenuacin natural y autodepuracion, ste trabajo permite prever la respuesta de la comunidad bacteriana del agua del embalse Los Molinos ante diferentes escenarios de impacto por herbicidas de uso regional.
cas conteniendo los medios de cultivo agar agua (AA), ASA o ASA con antibiticos (ASAanti) (ampicilina, rifampicina y tetraciclina). En el centro de cada placa se ubic un trozo de 3x3 mm de papel de filtro colonizado o un disco de agar colonizado. Los cultivos se incubaron a 251 y luz blanca permanente. Se utiliz un diseo completamente aleatorizado, con 3 repeticiones. Se registr el dimetro de las colonias y la formacin de esclerocios (proporcin de colonia cubierta con esclerocios), luego de 2, 6 y 9 das. Se realiz anlisis de varianza y pruebas de LSD o WallerDuncan. Resultados. Se recuperaron los aislamientos tanto de DA como de PF, en la totalidad de las placas. El testigo present mayor dimetro de colonias a los 2 y 6 das (P < 0.05; R2 0.680.87), pero no se diferenci a los 9 das (P > 0.20; R2 0.68-0.87). Para dimetro de colonias, se detect interaccin entre forma y tiempo de conservacin. No se detectaron diferencias de dimetro de colonias entre los 8 y 17 meses de conservacin en DA, en ninguna de las observaciones (P > 0.15, R2 0,52-0.89). En cambio, los tratamientos con 8 meses de conservacin en PF tuvieron mayor dimetro de colonias que los tratamientos de 17 meses de conservacin en PF (P < 0.04; R2 0.83-0.91). No se detect interaccin entre forma de conservacin y aislamiento (P < 0.016), o entre forma de conservacin y medio de cultivo utilizado para la recuperacin de los hongos. Los resultados para formacin de esclerocios fueron similares a los de dimetro de colonias. Tanto la conservacin en DA como en PF resultaron efectivas para conservar S. oryzae por el perodo de 17 meses. Tanto DA como PF resultan prcticas y econmicas para el mantenimiento de colecciones de S. oryzae.
P542 - 28152 EVALUACIN DE LA SENSIBILIDAD DE LA HIDRLISIS DEL DIACETATO DE FLUORESCEINA COMO INDICADOR BIOLGICO. ROMAGNOLI, MARIA VALERIA; MANCINI, MICAELA; TORESANI, SILVIA MARIA INES
Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional Rosario Las enzimas, estearasas no especficas, proteasas y lipasas, responsables de la hidrlisis del diacetato de fluorescena (FDA) son abundantes en el suelo. Ms del 90% del flujo de energa en los sistemas de suelo pasa a travs de microorganismos mineralizadores de la materia orgnica como bacterias y hongos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la sensibilidad de la FDA como indicador de la actividad microbiana global en suelos sometidos a diferentes situaciones de uso. El mtodo se basa en la estimacin de la fluorescena por colorimetra a 490nm (Schnrer y Rosswall, 1982 modificado). Las situaciones de uso del suelo fueron: 1) monocultivo de soja y rotacin maz-soja-trigo/soja con y sin cobertura en un ensayo de rotaciones de la EEA INTA Oliveros instalado en la primavera de 2006, sobre un suelo Arguidol tpico serie Maciel; 2) suelo con diferentes dosis de hidrocarburos (1% (B) y 2% (A) de gasoil); 3) suelo agrcola afectado por fuego no prescripto; 4) suelo proveniente de un relleno sanitario destinado a huertas urbanas desde noviembre de 2009; 5) suelo agrcola Argiudol Tpico serie Peyrano clase 1 con monocultivo de soja y soja en rotacin con gramneas con diferentes estados de deterioro de la fertilidad fsica. Los resultados fueron: 1) en mayo de 2008 la situacin soja-soja con cultivo de cobertura se asemej a la del testigo (suelo casi prstino) con valores de 119,80 y 139,93 g fluorescena h-1g-1suelo respectivamente, sin embargo en las determinaciones de noviembre 2008 y 2009 no se registraron diferencias estadsticamente significativas; 2) el suelo testigo registr los menores valores en relacin con los que recibieron dosis de gasoil (79,36 (T); 92,57 (B) y 102,12 (A) g fluorescena h-1g-1suelo), indicando que la microflora edfica est utilizando el hidrocarburo como fuente de carbono y energa; 3) el suelo sin quemar present 127,3 y 113,9 g fluorescena h-1g-1suelo a los 3 y 45 das del incendio espontneo, mientras que el suelo quemado registr valores de 98,9 y 93,71 g fluorescena h-1g-1suelo; 4) los valores de FDA se encuentraron entre un 37 y 64% ms bajos que los de un suelo testigo; 5) a la profundidad de 0 a 7 cm el suelo con un 13% de agregados present 73,59 g fluorescena h-1g-1suelo mientras que el de menor estado de deterioro (20% de agregados) mostr una actividad de 115,22 g fluoresceina h-1g-1suelo; no registrndose
P541 - 28086 CONSERVACIN DE sclerotium oryzae EN AGUA Y EN PAPEL. PEDRAZA, MARA VIRGINIA; CLAUDIA, LIBERMAN; ASSELBORN, MIRIAM
Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA) Sclerotium oryzae Catt. causa la Podredumbre del Tallo de arroz. Los estudios acerca del patgeno son necesarios para poder disear estrategias de manejo de la enfermedad. No se han encontrado referencias respecto a formas de conservacin de aislamientos de S. oryzae por perodos prolongados. Objetivo. Se evalu la conservacin de S. oryzae en agua y en papel de filtro. Materiales y Mtodos. Se utilizaron 4 aislamientos de S. oryzae de la coleccin de EEA CdU INTA. Se evalu la conservacin en discos de agar en agua (DA) y en papel de filtro (PF). Para DA, los aislamientos se cultivaron en placas de Petri de 9 cm conteniendo agar salvado de arroz (ASA) durante 48 horas, a 261 C y luz blanca permanente. De los bordes de las colonias se extrajeron discos de agar colonizado de 5 mm de dimetro, y se ubicaron en tubos Eppendorf de 1,5 mL con 1 mL de agua destilada estril (4 discos por tubo). Se mantuvieron en oscuridad, a 202 C. Para PF, los aislamientos de cultivaron en placas ASA, en cuya superficie superficie se ubicaron trozos (2 x 2 cm) de papel de filtro Munktell, de uso general. Se incubaron por 7 das, a 251 C y luz blanca permanente. Los trozos de papel colonizado se ubicaron en sobres estriles de papel de 8x16 cm (5 por sobre), y se conservaron a 4C en recipientes plsticos hermticos. Se evaluaron dos perodos de conservacin, 8 y 17 meses. Cultivos de 48 horas en ASA de cada aislamiento fueron incluidos como testigos. La recuperacin de los aislamientos fue evaluada en pla-
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diferencias significativas a la profundidad de 7 a 20 cm. La FDA mostr un promisorio comportamiento como bioindicador temprano para detectar diferencias en la actividad microbiana en diferentes situaciones de uso del suelo en un tiempo relativamente corto.
P543 - 28157 CONTAMINACIN MICROBIANA DE CURSOS DE AGUA POR CRA DE GANADO CONFINADA (FEED-LOT). CLCULO DEL RIESGO SANITARIO. PAZ, MARTA(1); NUEZ, LIDIA(1); CHAGAS, CELIO(2); MORETTON, JUAN(1)
(1)Higiene y Sanidad, Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires; (2)Manejo y Conservacin de Suelos, Facultad de Agronoma, Universidad de Buenos Aires Introduccin: La contaminacin fecal debido a la actividad ganadera en establecimientos denominados feedlot genera un impacto considerable sobre la calidad de aguas del ecosistema de la provincia de Buenos Aires. En Argentina, la legislacin con respecto a la instalacin de feedlots es incipiente. Se calcula que un bovino elimina como estircol un 5 a 6% de su peso vivo por da. Una gran proporcin de estircol se recoge para producir compost, pero quedan en el terreno cantidades de materia fecal importantes que son arrastradas por las lluvias hacia los canales de desage naturales y terminan contaminando los cursos de agua. Existe as un importante riesgo de contaminacin biolgica del agua asociado a la actividad ganadera. Para evaluar la calidad bacteriolgica de las aguas superficiales en las cuencas se debe establecer correlaciones entre densidades de microorga-nismos patgenos o indicadores, y el efecto sobre la salud humana. La cuantificacin de riesgo microbiano (ACRM) constituye una herramienta valiosa para la estimacin de este tipo de riesgos, Objetivo: cuantificar y comparar los riesgos de adquirir gastroenteritis para la poblacin expuesta al agua proveniente de diferentes sectores pertenecientes a la cuenca del arroyo del Tala en el partido de San Pedro, provincia de Buenos Aires, afectada por la actividad de cra confinada de ganado. Se pudieron as comparar los parmetros microbiolgicos y los correspondientes valores de riesgo para la situacin actual del arroyo y los escenarios provocados por la instalacin de un feedlot que vertiera sus residuos en este arroyo. Materiales y Mtodos Se tomaron muestras de agua en la cuenca media del arroyo del Tala y en la zona de vertido de aguas residuales del feedlot Santa Luca. Durante las cuatro estaciones del ao (2004 y 2005), bajo distintas condiciones de precipitacin pluvial. Se realizaron experiencias de lluvia artificial en la zona de la desembocadura del feedlot. Se cuantific la presencia de bacterias indicadoras de contaminacin fecal (enterococos y coliformes totales) y bacterias mesfilas viables en aguas y sedimentos. Se estim la probabilidad de adquirir una infeccin gastrointestinal estableciendo la relacin dosis-respuesta para la concentracin presente de bacterias indicadoras (enterococos) en las diferentes muestras. Resultados y Conclusiones: La concentracin media bacteriana en las muestras de agua y sedimento fue de 10x106 UFC de bacterias mesfilos viables, 3x105 UFC de coliformes y 2x104 UFC de enterococos por 100 mL. En los ensayos de lluvia simulada aplicada sobre el feedlot se observ los siguientes valores: 8x106 UFC de mesfilos viables, 9x105 UFC de coliformes totales y 8x104 UFC de enterococos por 100 mL. En el feedlot se detectaron de 1x107 UFC de bacterias mesfilas viables, 2x106 UFC de coliformes y 1x105 UFC de enterococos por 100 mL. En el caso de instalarse un feedlot, al lado de un arroyo, ste tendra una carga microbiana con una probabilidad de riesgo para la poblacin expuesta de adquirir una enfermedad gastrointestinal que varan de 5 al 1% de acuerdo a las caractersticas del arroyo. En el canal de desage del feedlot se obtuvo un riesgo de 70%.
La salmonelosis es un problema de salud pblica a nivel mundial. En la Argentina, Salmonella spp. representa una de las principales causas de gastroenteritis infecciosa junto a rotavirus y parsitos. Comprender su epidemiologa resulta fundamental para conseguir el control sanitario de esta bacteria. La serotipificacin es el mtodo de eleccin para la tipificacin de las cepas. Conocer los serotipos de Salmonella spp. y su distribucin en una zona geogrfica determinada permite detectar brotes y distinguirlos de los casos espordicos, identificar fuentes de infeccin y averiguar si existe asociacin entre los diferentes serotipos y la resistencia a los antimicrobianos. Se hace necesaria la utilizacin de tcnicas complementarias como la fagotipificacin para diferenciar cepas pertenecientes a un mismo serotipo. Esta tcnica de caracterizacin fenotpica permite ampliar la informacin necesaria para establecer posibles relaciones epidemiolgicas. El objetivo de este trabajo fue la obtencin de un juego de bacterifagos contra Salmonella Enteritidis de aguas del ro Lujn, Argentina, que permita fagotipificar cepas de origen humano, animal, ambiental y de otras fuentes de la zona de Lujn y sus alrededores. El muestreo se realiz siguiendo la tcnica de la torunda de Moore. Se efectuaron 10 tomas mensuales y simultneas de enero a diciembre de 2008. Se investig un total de 23 cepas de S. Enteritidis, un pool de 2 mensuales, que provenan de aguas del ro Lujn, aisladas e identificadas bioqumica y antignicamente entre 1987 y 1990. A cada torunda de Moore se le adicion 100 mL de Phage Assay Broth (PAB) y 1 mL de cada cultivo en medio PAB de S. Enteritidis de 24 h a 35 C. Se incub 15 h a 35 C y luego se procedi a la descontaminacin de una alcuota del concentrado con la adicin de cloroformo al 50% v/v, agitacin por 60 seg y conservacin a 4 C. La confirmacin se realiz siguiendo la tcnica de doble capa de agar (DAL) utilizando el medio PAB agarizado y observando la aparicin de zonas de lisis a 35 C al cabo de 4 a 15 h. De las 120 muestras de agua solamente 60 (50%) dieron resultado positivo aislndose 600 bacterifagos de morfologa diferente. Se sometieron a criterios de seleccin basados en estabilidad ltica, reproducibilidad, conservacin del ttulo, tipabilidad y poder discriminatorio quedando solamente 24 bacterifagos que fueron identificados numricamente del 1 al 24. Este juego de bacterifagos fue utilizado para fagotipar 23 cepas de S. Enteritidis de aguas del ro Lujn, 33 provenientes de 4 brotes de origen alimentario y 3 de casos espordicos investigados desde 1988 a 2010, con la misma tcnica de DAL. Los resultados revelan un alto grado de susceptibilidad de una cepa a la coleccin de fagos utilizados. Empleando un simple juego de 24 fagos, fuimos capaces de fagotipificar 59 cepas de S. Enteritidis, 14 de origen humano (24%), 8 de origen animal (13%) y 23 de aguas del ro Lujn (39%) y 14 (24%) de otras fuentes. Pudieron observarse dos patrones uno seguido por todas las cepas provenientes de aguas del ro Lujn y el otro manifestado por las restantes cepas estudiadas. Aunque este juego de fagos sera aplicable nicamente a cepas de S. Enteritidis de la zona de Lujn y sus alrededores, contribuira como mtodo rpido de identificacin del serotipio Enteritidis.
P545 - 27099 ENDOCARDITIS POR Moraxella catarrhalis. STEPANIK, DEBORAH; ISASMENDI, ADELA; EDAT, LILIANA; ZITTO, TERESA; LOPEZ, HORACIO; DAGOSTINO, M LAURA
Sanatorio de la Trinidad Palermo M. catarrhalis es un diplococo gram-negativo, aerobio, oxidasa positiva. Desde su descubrimiento, en 1896 ha sido objeto tanto de cambios en la nomenclatura y clasificacin taxonmica como de su consideracin de comensal o patgeno. Se conoci como Micrococcus catarrhalis, Neisseria catarrhalis y Branhamella catarrhalis. Flora habitual de las cavidades nasal, bucal, orofaringe y tracto genital, colonizando exclusivamente a humanos. La endocarditis por M.catarrhalis es infrecuente, se han descripto 6 casos en la literatura mdica. Se presenta el caso y la evolucin de endocarditis infecciosa (EI) por M. catarrhalis en un husped inmunocompetente. Se describe el caso en una paciente adulta de 77 aos, sexo femenino derivada de otra institucin con cuadro de insuficiencia cardaca asociada a neumona severa y accidente cerebro vascular. Se evidenci por ecocardiagrama

P544 - 27094 OBTENCIN DE UN SISTEMA DE FAGOTIPIFICACIN DE Salmonella Enteritidis. ANSELMO, RICARDO J; BARRIOS, HEBE A
Universidad Nacional de Lujan
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transesofgico vlvula mitral con insuficiencia severa y vegetaciones. Se realizaron hemocultivos que resultaron negativos y fue tratada con vancomicina, gentamicina y rifampicina con sospecha de etiologa nosocomial. La paciente reingresa con insuficiencia cardaca refractaria al tratamiento mdico, se decide realizar ciruga de reemplazo valvular con vlvula biolgica. Se aisla M. catarrhalis del cultivo de la vlvula mitral. Desarroll en 24 hs en agar sangre y agar chocolate, formando colonias redondas, opacas, convexas, de color gris y no hemolticas. Test de hockey puck positivo. La coloracin de Gram mostr diplococos gram-negativos. La cepa fue tipificada por el esquema de Janda y Knapp. Los resultados obtenidos fueron: oxidasa positiva, DNAsa positiva, catalasa positIva, hidrlisis de tributirina positiva, ausencia de produccin de cido de glucosa, maltosa, sacarosa y fructosa, reduccin de nitratos y test de beta lactamasa positvo. Tambin fue identificada por medio de la tarjeta NH (vitek2-bioMrieux) como Moraxella catarrhalis. Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) por el mtodo de E-test: ceftriaxona: 0.5 g/ml y amoxicilina-clavulnico 0.25 g/ml. Fue tratada con ceftriaxona 2 g/da. Completando 6 semanas de tratamiento con hemocultivos de control (Bact/Alert) negativos. El ecocardiograma transesofgico de control mostr una vlvula mitral normoinserta sin complicaciones ni evidencia de vegetaciones. La paciente tuvo muy buena evolucin. La endocarditis por Moraxella spp. es infrecuente y segn la literatura la tasa de mortalidad es mayor del 50%. Es importante jerarquizar en EI, la deteccin de estos microorganismos para instaurar el tratamiento antibitico eficaz y precozmente.
complicaciones de la VB, adems de representar un costo econmico elevado, tienen un fuerte impacto en morbi-mortalidad perinatal. En lo particular representa muchas veces la frustracin de un embarazo deseado siendo una infeccin fcilmente diagnosticada mediante la utilizacin de mtodos de bajo costo y fcilmente tratada. Debido al porcentaje hallado de pacientes asintomaticas (30.77%), consideramos conveniente, en nuestra poblacin, realizar el estudio microbiolgico de fondo de saco vaginal antes de la semana 24 de gestacin pudindose instaurar un tratamiento adecuado y evitar las posibles consecuencias.
P547 - 27153 PREVALENCIA DE MICROORGANISMOS (MO) AISLADOS DE CATETERES EN UN HOSPITAL UNIVERSITARIO DE ADULTOS: ANALISIS DE 3 AOS. MOLLO, V; MONTERISI, A; CARILLO, N; NAVARRO, M; ARTICO, J; ROMERO, V; AVILES, N; OCAA, V; GASPAROTTO, A; ROCCHI, M
Hospital Nacional de Clnicas, Crdoba La va parenteral es utilizada en aproximadamente el 70% de los pacientes internados. Ms del 90% de las bacteriemias nosocomiales involucran a catteres venosos centrales, como consecuencia de la migracin de los MO de la piel a nivel del sitio de insercin del catter con la posterior colonizacin del mismo. Por ser comensales de la piel, los estafilococos coagulasa negativa (ECN) son unos de los principales agentes etiolgicos de las infecciones asociadas a catteres. El objetivo de este estudio fue analizar los catteres remitidos a nuestro laboratorio, los servicios de los que provenan, los MO involucrados destacando las especies de ECN y la sensibilidad a los antimicrobianos. Durante Enero de 2007 a Diciembre de 2009 se analizaron 217 catteres que provenan de Ciruga (CX) (88), Unidad de Terapia Intensiva (UTI) (62), Clnica Mdica (CM) (26), Urologa (10), Traumatologa (11), Oncologa (6), Neurologa (5), UCI (7), Ginecologa (2), los cuales se sembraron por la tcnica semicuantitativa de MAKI en agar sangre (punto de corte 15 UFC). La identificacin bioqumica se realiz por pruebas estndar y la sensibilidad a los antimicrobianos por mtodo de difusin (CLSI). De los catteres remitidos, 111 (51,1%) fueron positivos; el 61,2% present flora monomicrobiana (MM) y el 38,7% polimicrobiana (PM). Los MO aislados correspondieron a: ECN 53 (32%), S. aureus 34 (20,6%), A. baumannii (Aba) 26 (15,7%), Enterococus spp.13 (7,8%), Corynebacterium spp.12 (7,3%), Klebsiella spp. 9 (5,4%), S. marcescens 6 (3,6%), P. aeruginosa 6 (3,6%) y otros 6 (3,6%). Las especies de ECN correspondieron a: S. epidermidis 22 (41,5%), S. haemolyticus 6 (11,3%), S. hominis subsp. hominis 5 (9,4%), S. capitis subsp. urealyticus 5 (9,4%), S. lugdunensis 3 (5,6%), S. caprae 2 (3,8%), S. warneri 2 (3,8%), S. schleiferi subsp. schleiferi 2 (3,8%), S. capitis subsp. capitis 2 (3,8%), S. auricularis 2 (3,8%), S. xylosus 1 (1,9%) y S. casseolyticus 1 (1,9%). El 80,8% de los ECN fueron meticilino resistente (MR), donde S. epidermidis present un 83,3% y S. haemolyticus un 100%. El 88% de los S. aureus furon MR. El 34,7% de Aba fue multirresistente (includo resistencia a carbapenemes) y un 77,2% present resistencia a ampicilina-sulbactama (AMS). Enterococus spp. fue el cuarto MO en prevalencia, siendo 3/13 E. faecium, uno de ellos resistente a vancomicina (fenotipo Van A). No se aisl ningn C. jeikeium. Concluimos que: *ECN fue el MO prevalente en todos los servicios, donde S. epidermidis ocup el primer lugar seguido de S. haemolyticus presentando una resistencia a meticilina del 83,3% y 100% respectivamente. *Aba, mayormente aislado en UTI, present una elevada multiresistencia (includo carbapenemes) y una alta resistencia a AMS. *S. aureus MR se encontr diseminado en la mayora de los servicios. *El mayor nmero de catteres ingresados provenan de CX, UTI y CM. *Consideramos importante una restringida vigilancia del control de infecciones haciendo hincapi en lavado de manos y aislamiento de contacto.
P546 - 27148 VAGINOSIS BACTERIANA Y EMBARAZO: UTILIZACIN DE MTODOS DIAGNSTICOS DE BAJO COSTO PARA LA PREVENCIN DE SUS COMPLICACIONES. CHAVERO, GABRIELA G; BRODA, PAMELA; GIACOMINO, MARTA; MARRAMA, MARCELA G.
Municipalidad de Crdoba Introduccin: La vaginosis bacteriana (VB) es una entidad clnica polimicrobiana que se caracteriza por presentar una secrecin vaginal anormal con desplazamiento de los lactobacilos por Gardnerella vaginalis, Micoplasma hominis y microorganismos anaerobios, entre otros, pero no se caracteriza por una respuesta inflamatoria. Es la causa ms comn de afeccin vaginal en mujeres en edad reproductiva y hasta un 50% de las pacientes pueden cursar asintomticas. Las complicaciones de la VB en el embarazo son: amenaza de parto prematuro (APP), parto prematuro (PP) y rotura prematura de membranas (RPM). La presencia de VB en embarazos menores de 24 semanas es un fuerte factor de riesgo para aborto espontneo y parto pretrmino. OBJETIVO: Determinar la presencia de VB en las mujeres embarazadas de nuestro servicio, mediante el empleo de medios de bajo costo, para evitar las posibles consecuencias. Materiales y Mtodos: Se estudiaron 153 mujeres gestantes entre 14 y 39 aos, la mayora se encontraba entre la semana 35-37 de gestacin debido a que llegaban a realizarse el estudio de portacin de estreptococo betahemoltico grupo B (EGB) al Laboratorio de Microbiologa de esta Institucin, desde Junio a Noviembre de 2009. Se evaluaron las siguientes variables: edad; motivo de consulta (aumento de flujo, prurito, ardor, olor, control post tratamiento, otros) y semanas de embarazo. Las muestras se obtuvieron por hisopado vaginal, fueron conservadas en Cary Blair y se les realiz: examen en fresco; coloracin de Gram aplicando el score de Nugent, test de aminas y siembra en Agar Sabouraud. Resultados: De las 153 pacientes, 83 tuvieron flujo normal (54,25%), 24 tuvieron respuesta inflamatoria sin aislamiento (15,68%), y 46 presentaron alguna afeccin vaginal (30,07%). Del total de pacientes estudiadas, el 8,5% (13 casos) present VB como afeccin nica; el 13,07% (20 casos) candidiasis vaginal (CV) como afeccin nica y un 3,28% (5 casos) tricomoniasis vaginal (TV) como afeccin nica. Se observ infecciones mixtas en 8 pacientes, 4 correspondieron a VB ms CV (2,61%) y 4 a VB ms TV (2,61%). Los sntomas y signos asociadas a VB fueron: flujo vaginal (69,23%), prurito (15,38%), ardor (7,69%) y asintomticas (30,77%). El test de aminas realizado al flujo de las pacientes con VB result positivo en un 92,31%. Las
P548 - 27220 ESTUDIO COMPARATIVO DE DETECCIN DE Kingella kingae EN MUESTRAS DE LQUIDO ARTICULAR POR PCR EN TIEMPO REAL VS. MTODOS MICROBIOLGICOS. GOMEZ BONDUEL, MV; CHAYEP, D; VENUTA, ME; HERNANDEZ, C; CASIMIR, L; PINHEIRO, JL; MASTROIANNI, A; LOPARDO, H
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Hospital de Pediatra Prof. Dr. Juan P. Garrahan Introduccin: Kingella kingae parece ser una causa no tan infrecuente de artritis sptica en pacientes peditricos. Es un anaerobio facultativo de crecimiento lento, con requerimientos nutricionales, lo que puede dificultar su recuperacin a partir de materiales clnicos. Es por ello que se ha intentado su bsqueda por inoculacin de lquido articular en frascos de hemocultivo y/o por mtodos moleculares. Objetivos: (1) Desarrollar y poner a punto un mtodo de amplificacin por PCR en tiempo real (PCR-TR), especfica para K. kingae (2) Implementar esta tcnica para el diagnstico rpido de este agente en las infecciones osteoarticulares y (3) Comparar la capacidad de la PCR-TR de detectar K. kingae en nios con infecciones osteoarticulares respecto de un mtodo microbiolgico convencional y otro no convencional. Materiales y mtodos: El mtodo convencional consisti en la siembra de las muestras de lquido articular en agar sangre, agar chocolate y caldo BHI. Estos medios se incubaron a 37 C en atmsfera enriquecida con 5% de CO2 y se observaron a las 24, 48 y 72 hs. El caldo BHI se repic en forma ciega en agar chocolate a las 24 hs y se ley a las 24, 48 y 72 hs. El mtodo no convencional consisti en sembrar directamente el material en botellas de hemocultivos anaerbicas adicionadas con 1 ml de sangre humana, las que fueron monitorizadas en forma continua en un instrumento Bact/Alert 3D durante 15 das. El mtodo molecular consisti en una PCR-TR especfica, con iniciadores dirigidos a las regiones rtxA y rtxB del locus RTX de K. kingae en forma independiente. El nivel de deteccin de este mtodo result de 3,2 ufc/tubo. Resultados: Se utilizaron 60 lquidos articulares provenientes de nios con sospecha de artritis sptica aguda. Slo 28 muestras resultaron evaluables y de stas slo una result positiva. En las restantes no se observ la amplificacin del control interno. Se repiti el ensayo con las 32 muestras no evaluables, pero efectuando distintas diluciones. Finalmente, de un total de 58 muestras evaluadas (28 en forma directa y 30 post-dilucin), tres (5,2%) resultaron positivas para K. kingae por PCR-TR y ninguna fue recuperada por mtodos microbiolgicos. De 60 muestras de lquido articular ensayadas, slo 2 no pudieron ser evaluadas. De las restantes, 30 requirieron diluciones del templado para eliminar la presencia de inhibidores. Solamente 3 arrojaron resultados positivos para K. kingae ( 5,2%), dato que se correlaciona con trabajos previamente publicados. Cabe recalcar la importancia de adicionar mtodos moleculares para aumentar la recuperacin de este patgeno. Se sugiere la recoleccin de los lquidos articulares en tubos apropiados para estudios moleculares (tubo nuevo) a los efectos de evitar diluir el templado en la reaccin de amplificacin. En el caso de emplear algn agente anticoagulante se debe preferir la heparina al polianetolsulfonato de sodio, involucrado en la mayora de las muestras que presentaron inhibicin. Diluyendo las muestras, se pueden eliminar estos inhibidores, pero disminuye la probabilidad de recuperacin del patgeno.
en miembros inferiores, enfermedad debilitante severa, pobre higiene y bajo nivel socioeconmico. Por lo general son sensibles a la mayora de los antimicrobianos (ATM), excepto ampicilina y cefalosporinas de primera generacin. Presentamos un caso de bacteriemia por S. putrefaciens en un paciente con Leucemia Promieloctica Aguda (LPA), posterior al primer ciclo de consolidacin con quimioterapia, con un hallazgo de resistencia inusual (presencia de BLEE). Paciente de sexo femenino de 54 aos con diagnstico (dx) de LPA en diciembre de 2009. Hizo tratamiento (TTO) de induccin en el momento del dx y primer ciclo de consolidacin en enero de 2010. A los 8 das de internacin se encuentra febril, neutropnica y con diarrea lquida. Se toman hemocultivos y se comienza TTO emprico: ceftazidima, amikacina (AKN) y metronidazol. A las 48 hs contina febril con flebitis dolorosa en brazo izquierdo por lo que se agrega vancomicina (VAN). En 2/2 hemocultivos desarroll S. putrefaciens productora de BLEE, informada en forma preliminar como sensible a piperacilina-tazobactam (PTZ), carbapenemes, AKN, gentamicina y TMS. Se rota el tratamiento a PTZ y se mantiene AKN y VAN. Present una buena evolucin clnica y fue dada de alta al cumplir el TTO. El aislamiento se envi para su confirmacin al Hosp. de Clnicas Gral. San Martn. Esta paciente inmunocomprometida present una bacteriemia intrahospitalaria, con probable foco en piel y partes blandas. La produccin de BLEE en S. putrefaciens no ha sido registrada hasta el momento. Concluimos que: a) S. putrefaciens es infrecuente pero su hallazgo en hemocultivos es significativo. b) Es importante tener presente a este gnero en pacientes inmunocomprometidos o con enfermedades predisponentes. c) Si bien se trata del primer reporte de BLEE en esta especie, para un TTO adecuado, sera de gran utilidad confirmar la sensibilidad a los ATM.
P550 - 27222 BROTE DE NEUMONA ASOCIADA A ASISTENCIA RESPIRATORIA MECANICA POR Acinetobacter baumannii (ABA) PRODUCTOR DE PIGMENTO NDIGO EN UN HOSPITAL GENERAL. COLOMBO, LAURA( ); RINAUDO, MARIANGEL(); DALMAN, MARIA(); GREGORINI, EDUARDO(); NICOLET, CLARA(); MARCHIARO, PATRICIA(); LIMANSKY, ADRIANA()
() Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas UNR, () Hospital Escuela Eva Pern La neumona asociada a asistencia respiratoria mecnica (NARM) es la infeccin hospitalaria con mayor morbi-mortalidad. La presencia de va area artificial sumada a alteraciones del proceso de deglucin y del mecanismo de la tos predisponen a microaspiraciones y colonizacin bacteriana que preceden a la invasin del parnquima pulmonar. El diagnstico de esta patologa se basa en criterios clnicos, radiolgicos y microbiolgicos. Un resultado precoz del estudio bacteriolgico mejora notablemente el prnostico ya que permite acelerar la instauracin de una terapia adecuada. La metodologa utilizada para su estudio comprende: 1) un examen directo del material respiratorio obtenido por mtodos broncoscpicos (lavado broncoalveolar ,cepillo protegido) o no broncoscpicos (miniBal o aspirado traqueal) que permite evaluar la calidad del mismo, 2) coloracin de Gram orientada especialmente a la bsqueda de bacterias intracelulares y 3) cultivo cuantitativo con puntos de corte adecuados al tipo de muestra (Criterios SADEBAC 2006). Desde el ao 2006 la NARM tarda causada por Aba fue la patologa intrahospitalaria prevalente en nuestra Unidad de Terapia Intensiva. Entre el 21 de julio y el 20 de agosto de 2008 se produjeron 6 casos de NARM confirmados clnicamente (presencia de fiebre, leucocitosis y aparicin de infiltrado pulmonar difuso). En 4 de los pacientes se recogieron secreciones por miniBal y en 2 por aspirado traqueal. Todos los exmenes directos fueron representativos. En las 6 muestras se obtuvo recuento significativo de un microorganismo identificado como Aba por mtodos convencionales. Ha sido llamativo que los 6 aislamientos presentaron pigmento ndigo en agar hierro triple azcar (TSI) y en medio sulfhdrico-indol-movilidad (SIM). Asimismo presentaron igual perfil de resistencia, siendo slo sensibles a colistina, minociclina y tigeciclina. La confirmacin de la identificacin de la especie se realiz por ribotipificacin y el estudio de relacin clonal se efectu mediante reaccin de
P549 - 27221 BACTERIEMIA INTRAHOSPITALARIA POR Shewanella putrefaciens PRODUCTORA DE BETA LACTAMASA DE ESPECTRO EXTENDIDO (BLEE). REPORTE DE UN CASO. OCAA CARRIZO, V(1); ROCCHI, M(1); TRUCCHIA, R(1); VAY, C(2); ALMUZARA, M(2); AVILES, N(1); GASPAROTTO, A(1); MONTERISI, A(1)
(1) Hospital Nacional de Clnicas, Crdoba. (2) Hospital de Clnicas Gral. San Martn, CABA El gnero Shewanella comprende un grupo heterogneo de bacilos gram-negativos no fermentadores ampliamente distribuidos en la naturaleza en ambientes acuticos, reservas energticas naturales y productos procedentes de diferentes animales. S. putrefaciens y S. algae son las nicas especies del gnero aisladas en humanos y aunque con baja frecuencia, se han asociado con un amplio espectro de infecciones como abscesos, celulitis, otitis, artritis, endocarditis, bacteriemia y sepsis. Son patgenos oportunistas emergentes responsables de infecciones, fundamentalmente en inmunocomprometidos. Los principales factores de riesgo son: enfermedad hepatobiliar, malignidad, lcera crnica
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polimerasa en cadena con oligonucletidos degenerados (ODPCR). Los resultados obtenidos mostraron que todos los aislamientos pigmentados correspondieron a Aba y pertenecieron al mismo clon. Por otra parte se confirm la presencia de carbapenemasa tipo Oxa-23 en todos los aislamientos. El anlisis retrospectivo de la coleccin de cepas de nuestro Servicio han dado cuenta de la presencia de cepas con caractersticas fenotpicas similares desde 2006. Los resultados obtenidos nos permiten confirmar la presencia de un brote de NARM asociado a un clon de Aba. Es interesante destacar la presencia de Aba productora de pigmento persistente en el hospital, pudiendo constituir este marcador fenotpico una til herramienta para seguimiento epidemiolgico. Al presente, no hemos encontrado antecedentes de un aislamiento similar en el mbito de la Microbiologa Clnica, aunque s en la Microbiologa Ambiental. Nuestros resultados sugeriran que la produccin de pigmentos puede conferir ventajas adaptativas a cepas de esta especie para sobrevivir en mbitos hospitalarios.
de bacterias aerobias/anaerobias facultativas solo en 7%(36/513) de las muestras y el impacto en el cambio de los esquemas antibiticos se observ en solo 9% de los episodios y 3% del total de pacientes. Adems, todos los contaminantes de piel se aislaron solo de caldo y podran eventualmente conducir a tratamientos innecesarios.
P552 - 27254 PREVALENCIA DE GENES REGULADORES DETERMINANTES DE VIRULENCIA VA QUORUM SENSING Y METICILINO RESISTENCIA EN AISLAMIENTOS DE Staphylococcus aureus DE PACIENTES CON ENFERMEDAD PERIODONTAL EN ARGENTINA. CUESTA, ALICIA(1); JEWTUCHOWICZ, VIRGINIA(1); BRUSCA, MARISA(1); MUJICA, M TERESA(2); ROSA, ALCIRA(1)
(1) Facultad de Odontologa - UBA, (2) Facultad de Medicina - UBA Introduccin: La cavidad nasal, bucal y la bolsa periodontal son nichos ecolgicos propicios para albergar Staphylococcus aureus que podra actuar como patgeno oportunista. El locus agr (accessory gene regulator) de S. aureus es el responsable del control de la expresin de numerosos determinantes de virulencia va quorum sensing (Jarraud et al. 2002). Las cepas de S. aureus se dividen en cuatro tipos de genes reguladores accesorios (agr I, II, III, IV). En la bibliografa se describe la asociacin de cada grupo con la produccin de un determinado tipo de enfermedad estafiloccica: mediadas por toxinas exfoliativas, mediadas por enterotoxina, mediada por TSST-1, infecciones supurativas, enterocolitis y capacidad de colonizacin. S. aureus es uno de los microorganismos ms frecuentemente aislados, tanto en infecciones nosocomiales como comunitarias. En particular el S. aureus resistente a la meticilina (SARM) es un patgeno emergente que constituye un grave problema sanitario. Objetivo: el propsito de ste trabajo fue evaluar la frecuencia relativa de aislamientos obtenidos en los diferentes sitios y caracterizar genotpicamente las cepas en cuanto a los tipos de genes reguladores accesorios presentes en biofilm de placa subgingival, cavidad bucal y fosas nasales de individuos con enfermedad periodontal, establecer su prevalencia y resistencia a la meticilina. Materiales y Mtodos: se determinaron los ndices periodontales de 121 pacientes adultos inmunocompetentes que concurrieron a la consulta. Se tomaron muestras de cavidad bucal, subgingivales y nasales, se sembraron en medios de cultivo selectivos y diferenciales. Se estudiaron 53 aislamientos de S. aureus. Se realizaron pruebas bioqumicas y pruebas de antimicrobianos a las colonias sospechosas. Posteriormente se efectuaron pruebas de Multiplex-PCR para la identificacin de SARM y tipos de genes reguladores accesorios (agr I, II, III, IV). Resultados: La portacin nasal, en cavidad bucal y subgingival de S. aureus fueron 25,5%, 19,8 y 12,4% respectivamente en pacientes con enfermedad periodontal. Los genotipos agr I (41,5%) y II (39,6%) fueron predominantes en los tres nichos ecolgicos, nasal, bucal y subgingival, mientras que en ninguna muestra se aislaron cepas agr IV. El 26,4% (n= 14 de 53) de las cepas aisladas fueron SARM. El 66,3% de los aislamientos resistentes presentaron el genotipo agr II. Conclusiones: La colonizacin de S. aureus resistente y sus factores de virulencia en pacientes inmunocompetentes, indican la presencia de un reservorio potencialmente peligroso para el paciente y como fuente de propagacin en la comunidad. Este estudio aporta datos acerca de la importancia de evaluar pacientes con enfermedad periodontal como un posible factor de riesgo para enfermedades infecciosas sistmicas por S. aureus.
P551 - 27242 IMPACTO CLNICO DEL USO DE CALDO EN EL AISLAMIENTO DE BACTERIAS AEROBIAS DESDE MATERIALES OBTENIDOS POR PUNCIN O BIOPSIA. CARRION, NATALIA; SOLOAGA, ROLANDO; PIDONE, JUAN; GUELFAND, LILIANA; ALVAREZ, VERONICA; SALINAS, ANDREA; SUAR, MARIA; MARGARI, ALEJANDRA
Hospital Naval Usualmente el agregado de caldo a los medios slidos para la siembra de muestras obtenidas por puncin o biopsia tiene como finalidad aislar microorganismos no documentados con estos ltimos sea por tratarse de grmenes fastidiosos, bajo inculo y/o tratamiento antibitico y adems servir como resguardo frente a la contaminacin de los medios slidos. Sin embargo, esto ha sido cuestionado desde el punto de vista de costo/beneficio. Los objetivos de este trabajo fueron los de establecer la utilidad en la mejora de la deteccin de microorganismos aerbicos/ anaerbicos facultativos no aislados en los medios slidos y el impacto clnico que ello tendra en el cambio de teraputica antibitica. En el Hospital Naval de la ciudad de Buenos Aires se analizaron 286 pacientes y 513 muestras obtenidas por puncin o biopsia que correspondieron a 156 muestras de piel y partes blandas, 128 osteoarticulares, 83 lquidos/biopsias pleurales, 34 muestras abdominales, 17 lquidos ascticos, 6 lquidos/biopsia pericrdicos, 4 LCR y 2 prtesis. En 97 pacientes se documentaron clnica y microbiolgicamente 99 episodios de diversas infecciones sobre un total de 214 muestras positivas. En las mismas se aislaron 235 microorganismos que correspondieron a: S.aureus (n:41), E. faecalis (n:43), E. faecium (n:18), E. cloacae (n:17), E. coli (n:17), A. baumannii (n:17), C. albicans (n.13), K. pneumoniae (n.11), P. aeruginosa (n:8), S. milleri (n:6), S. epidermidis (n:5), M. morganii (n:5), S. marcescens (n:5), P. vulgaris (n:5), S. pneumoniae (n.4), P. mirabilis (n:4), S. pyogenes (n:2), S. galactiae (n:2), C. neoformans (n.2), A. hydrophila (n:2), R. radiobacter (n:2), S. beta hemoltico grupo C (n:1), S. maltophilia (n:1), C. freundii (n:1), E. agglomerans (n:1), E. rushiopathiae (n:1) y S. mitis (n:1). Por otra parte se aislaron 56 contaminantes que correspondieron a estafilococos coagulasa negativos (n:33), Bacillus spp. (n:13), Corynebacterium spp. (n:4), S. viridans (n:3), S. aureus (n:2) y Leuconostoc spp. (n:1). En 88 muestras solo el cultivo en medio lquido fue positivo y de ellas solo 36 (41%) permitieron el aislamiento de un germen que se jerarquiz clnicamente y que correspondieron a 15 episodios de infecciones en 15 pacientes; las otras 52 (59%) muestras rindieron un germen considerado contaminante desde el punto de vista clnico. Los microorganismos asociados a los episodios detectados solo en caldo fueron: E. faecium (n:4), S. aureus (n:4), E. faecalis (n:2), E. coli (n:1), A. baumannii (n:1), K. pneumoniae (n:1), E. cloacae (n:1), S. epidermidis (n:1), C. neoformans (n:1), C. albicans (n:1) y P. mirabilis (n:1). Estos llevaron a cambios en la teraputica tan solo en 3% (9/286) del total de pacientes y en 9% (9/99) de los episodios de infeccin. En tanto que de los 56 microorganismos contaminantes, 54 (96,4%) se aislaron solo en caldo. En conclusin, la siembra en caldo mejor la recuperacin
P553 - 27265 ESTUDIO DE PREVALENCIA Y COMPARACIN DE MTODOS DE BUSQUEDA DE ESTREPTOCOCO GRUPO B EN EMBARAZADAS. GONZALEZ, MARIAVIRGINIA; CIFARELLI, MAXIMILIANO; CARABALLO, TERESITA; SAMUDIA, GUSTAVO; CATTANI, ALEJANDRA
Sanatorio de la Trinidad Quilmes Introduccin. Los estreptococos grupo B (EGB) forman parte de la flora normal del intestino, desde donde colonizan el tracto
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genital. Dicha colonizacin es de gran importancia en las embarazadas ya que puede transmitirse al recin nacido durante el trabajo de parto causando infeccin clnica, como neumona, sepsis o meningitis, en el 1-2% de los colonizados. La prevalencia de colonizacin en el mundo flucta entre un 10 y 30%. El Center for Disease Control and Prevention (CDC) recomienda la bsqueda de EGB entre las semanas 35 a 37 de embarazo mediante el cultivo de hisopados vaginal y perianal en caldo selectivo. OBJETIVO. Determinar la proporcin de gestantes colonizadas con EGB en nuestra poblacin y la utilidad de tres diferentes mtodos diagnsticos. Materiales y Mtodos. Estudio comprendido entre noviembre de 2009 y febrero de 2010 con 236 embarazadas (32 a 39 semanas de gestacin). Toma de muestra: Hisopado de zona perianal y vaginal por triplicado. Mtodos diagnsticos: Mtodo recomendado por el CDC: Inoculacin de caldo Todd-Hewitt suplementado con colistn + cido nalidxico. Estudiar colonias beta o gama hemolticas. Identificacin bioqumica: catalasa, CAMP y serologa. Caldo bifsico GRANADA TM T Ref: 42722. Laboratorio Biomerieux S.A. Medio selectivo para la seleccin e identificacin de estreptococo grupo B. Mtodo de cassette. Laboratorio VEDA.LAB FRANCIA Ref: 7003- 7033. Inmunocromatografa marcada con oro coloidal. Anlisis estadstico: Se efectu la valoracin de cada mtodo mediante el clculo de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo y los correspondientes intervalos de confianza del 95% (IC 95%) (EPI INFO 6.0). Resultados: TH: N: 236, (+) 29. Prevalencia: 12.3%; Granada: N: 236, (+) 27. [2 (+) no detectados por TH y 1 falso (+) confirmados por repique y tipificacin]. Prevalencia: 11.1%; Cassette: N: 157, (+) 3. Prevalecia: 1.9%; Global: N: 236, (+) Totales: 31 ( 29+2). Prevalencia: 13.1%
Sensibilidad, Especificidad, Valores Predictivos Positivos y Negativos de los diferentes mtodos. Sensibilidad % IC 95% Especificidad % IC 95% Valor predictivo positivo % Valor perdictivo negativo %
y posterior electroforesis de campos pulsados (PFGE). Adems, se analiz por PCR la presencia de los genes cap5, cap8, mecA, pvl y se determin el grupo de agr al cual pertenecan. El 30% (n=19) de los aislamientos expres PC5, otro 30% (n=19) PC8 y el 40% (n=25) restante no expres cpsula. Sin embargo, la presencia del gen cap5 se detect en un 40% (n=25), el gen cap8 en un 51% (n=32) y no se encontr ninguno de los genes cap en un 9% (n=6). El 68% (n=43) de los aislamientos fue capaz de formar biopelculas. Respecto a los grupos de agr se observ la siguiente distribucin: agrI: 26% (n=16); agrII: 35% (n=22); agrIII: 26% (n=16) y agrIV: 13% (n=8). El 17% (n=11) de los S. aureus aislados mostraron resistencia a oxacilina (SAMR) y la presencia del gen mecA. Dentro de este grupo un 18% (n=2) poseen el gen pvl. Los SAMR determinados se agruparon en 8 clones, todos diferentes al clon peditrico prevalente en la comunidad. El estudio por PFGE identific en la totalidad de los aislamientos nasales de S. aureus ms de 25 clones con diferentes subtipos. Entre los resultados obtenidos en este trabajo se destaca el elevado nmero de SAMR detectados que se encuentra distribuida en la comunidad en las narinas de portadores sanos. Este hallazgo enfatiza la importancia de la determinacin del estado de portacin nasal de S. aureus de un paciente al momento de ser hospitalizado para prevenir infecciones diseminadas por este patgeno de origen endgeno.
P555 - 27295 DETECCIN DE AISLADOS DE Acinetobacter baumannii HETERORRESISTENTES A COLISTN. HERRERA, MELINA; MOBILIA, LILIANA; POSSE, GRACIELA
(1) Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad Adventista del Plata, Libertador San Martn, Entre Ros. (2) Laboratorio Domingo Nanni, Paran, Entre Ros. (3) Sanatorio Adventista del Plata, Libertador San Martn, Entre Ros Introduccin: Acinetobacter baumannii (Aba) presenta una gran capacidad para adquirir determinantes de resistencia frente a la mayora de los antimicrobianos, esto hace que sea cada vez mas difcil el tratamiento de las infecciones principalmente nosocomiales producidas por este patgeno. Es por esto y sumado a la carencia de nuevos antibiticos, que en los ltimos aos colistn (Col) ha vuelto a ser considerada una opcin vlida en estos casos. Por otra parte se ha demostrado la emergencia de heterorresistencia en aislados de Aba sensibles a Col, lo cual podra llevar al fallo teraputico. Objetivo: detectar in vitro aislados de Aba heterorresistentes a Col. Materiales y Mtodos: se trat de un trabajo experimental prospectivo in vitro. Se estudiaron 75 aislados de Aba provenientes de materiales clnicamente significativos. Luego de su identificacin a nivel de gnero y especie se les determin su sensibilidad a Col por CIM en medio slido, usando colistn sulfato. Se realiz la deteccin de heterorresistencia a Col por mtodo de eficiencia de plaqueo y a aquellas colonias que mostraron resistencia se les volvi a determinar su CIM a Col. Resultados: todos los aislados resultaron sensibles a Col, con CIMs de 0.5, 1 y 2 ug/ml, siendo la CIM 90 y CIM 50 igual a 1 ug/ ml. En 14 de los aislados (18.7%) se seleccionaron colonias resistentes a Col, dentro de estos se incluyeron aislados con CIMs iniciales de 2 ug/ml, 1 ug/ml y 0.5 ug/ml, dando como resultado, 22.2%, 21.8% y 41.6% de heterorresistencia respectivamente, mostrando en algunos casos aumentos de mas de 8 veces su CIM. En concordancia con trabajos publicados, se obtuvieron aislados heterorresistentes a Col, independientemente del valor de su CIM inicial, con un aumento de mas de 8 veces su CIM en algunos casos. Esto sera indetectable utilizando slo la CIM como mtodo de eleccin para determinar la sensibilidad de Aba a Colistn, lo que resulta de marcada importancia, ya que de no ser puesto en evidencia podra llevar al fracaso teraputico.
IC 95% (96,4-100) (98,4-99,7) (96,4-100)
IC 95% (98,0-99,4) (96,4-98,5) (86,6-90,6)
Todd-Hewitt 93,5 Granada 83,9 Cassette 15,8
(91,8-94,9) 100 (81,5-86,1) 99,5 (13,6-18,2) 100
(96,4-100) (98,8-99,8) (96,4-100)
100 99,2 100
98,9 97,6 88,7
La prevalencia hallada en la poblacin analizada fue del 13,3%. El mtodo recomendado por el CDC presenta una mayor sensibilidad (93,5%) y especificidad (100%) en comparacin con el mtodo Granada bifsico cuyos valores son respectivamente (83,9%) y (99,5%) aunque no hay diferencias estadsticamente significativas. El mtodo Granada tiene como desventajas el ser un mtodo dependiente de operador ya que se basa en la visualizacin directa del medio, lo que le confiere un alto grado de subjetividad. El mtodo rpido en cassette presenta baja sensibilidad (15,8%), probablemente por ser un mtodo dependiente de inculo.
P554 - 27274 CARACTERIZACIN DE AISLAMIENTOS DE Staphylococcus aureus PROVENIENTES DE NARINAS DE INDIVIDUOS DE LA COMUNIDAD EN ARGENTINA. BARBAGELATA, MA SOL; LATTAR, SANTIAGO; GORDIOLA, MARIANA; ALVAREZ, LUCIA; SORDELLI, DANIEL; BUZZOLA, FERNANDA
Departamento de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa. Facultad de Medicina. UBA La portacin nasal de S. aureus ha mostrado ser un factor predisponente de infecciones diseminadas en pacientes hospitalizados. En la poblacin adulta sana se distinguen tres patrones de portacin nasal asintomtica de S. aureus: 20% de los individuos son portadores persistentes, 60% son portadores intermitentes y el 20% restante nunca son colonizados. El objetivo de este trabajo fue analizar gentica y fenotpicamente aislamientos de S. aureus obtenidos de hisopados nasales de individuos de la comunidad al momento del ingreso a dos nosocomios en la Ciudad Autnoma de Buenos Aires en el perodo 2009-2010. Los 63 aislamientos obtenidos fueron tipificados bioqumicamente por mtodos convencionales. Fenotpicamente se estudi la expresin de los serotipos capsulares 5 y 8 (PC5 y PC8), la formacin de biopelcula y la resistencia a oxacilina. Genticamente se analiz la clonalidad de los aislamientos por macrorestriccin con SmaI
P556 - 27305 RESISTENCIA A PENICILINA EN NEUMOCOCOS AISLADOS DE PACIENTES PEDITRICOS CON OTITIS MEDIA AGUDA: EXPERIENCIA DE ONCE AOS. HERNANDEZ, C; PINHEIRO, JL; REIJTMAN, RV; BERNALDEZ, P; SOMMERFLECK, P; LOPARDO, H
Hospital de Pediatra Prof. Dr. Juan P. Garrahan
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Introduccin: Streptococcus pneumoniae es uno de los dos microorganismos aislados con mayor frecuencia en nios con otitis media aguda (OMA). La resistencia a penicilina (PEN) parecera no tener mayor impacto en el xito del tratamiento de estas infecciones. No obstante, su conocimiento es fundamental para entender la dinmica de la resistencia en general de los neumococos aislados de diversos sitios. Objetivo: (1) Conocer la evolucin de la resistencia a PEN en los neumococos obtenidos de nios con OMA a lo largo de once aos. Materiales y mtodos: Se estudiaron los pacientes que consultaron por OMA al Servicio de ORL del hospital entre enero de 1999 y diciembre de 2009. Las muestras fueron obtenidas por puncin timpnica. Los pacientes, sus padres o tutores acordaron la realizacin de este procedimiento mediante la firma de una planilla de consentimiento informado. La identificacin a nivel de especie se realiz mediante las pruebas de catalasa, hemlisis en agar sangre ovina, optoquina y solubilidad en bilis. Se realiz la prueba de screening con discos de oxacilina (1g) por el mtodo de difusin. Los microorganismos que dieron halos de inhibicin menores de 20 mm fueron estudiados por Etest. Los puntos de corte fueron los recomendados por el CLSI para guiar el tratamiento por va oral. Resultados: En total se estudiaron 1.390 nios con OMA. En la tabla, por problemas de formato slo se pudieron incluir los resultados de los aos impares. El ao 1999 fue el nico en el que se detect ms del 10% de aislamientos resistentes (>= 2 g/ml). Posteriormente se registr una importante reduccin en la resistencia, la que actualmente prcticamente es nula. Slo se observaron neumococos sensibles y con sensibilidad intermedia en los aos 2003, 2008 y 2009.
Ao I% R% R+I% Total 1999 25,6 15,1 40,7 172 2001 27,7 3,4 31,1 148 2003 16,7 0 16,7 133 2005 30,4 0,8 31,2 128 2007 20,6 4,1 24,7 73 2009 35,1 0 35,1 168
utilizando el sistema ABI3730 XL y comparada con el GeneBank. En ambos aislamientos se observ la presencia de los genes qacH, qacG; qacA/B, qacJ y smr en ADN plasmdico. La regin secuenciada entre los genes qacA/B (de 1545 pb) y qacH (de 324 pb) mostr homologa con una enzima penicilina amidasa cuyo gen codificante tiene un tamao de 962 pb. Concluimos que la presencia de una penicilino amidasa entre dos genes que codifican bombas de eflujo indicara la presencia de un elemento transponible que facilitara la diseminacin de genes de resistencia a antispticos y antibiticos. Si bien ya haba sido descripto en S. aureus la presencia de una -lactamasa junto a qacA/B, se observ que en nuestras cepas de S. haemolyticus tambin se diseminara qacH junto a los otros genes aportando un hallazgo nunca descripto.
P558 - 27344 ACTIVIDAD COMPARATIVA DE TIGECICLINA Y DISTINTAS TETRACICLINAS SOBRE BACILOS GRAM-NEGATIVOS NO FERMENTADORES (EXCLUDOS P. aeruginosa Y Acinetobacter spp.). ALMUZARA, MARISA(1); ENCALADA, MARIA ISABEL(1); FAMIGLIETTI, ANGELA(1); VAY, CARLOS(1)
1. Laboratorio de Bacteriologa. Instituto de Fisiopatologa y Bioqumica Clnica. Hospital de Clnicas. Facultad de Farmacia y Bioqumica. U.B.A Pese a ser ampliamente conocida su actividad sobre bacterias gram-positivas multiresistentes, bacilos gram-negativos multiresistentes y anaerobios, no se describe en la literatura la actividad de tigeciclina (TIGE) sobre bacilos no fermentadores (BNF) excluidos Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia y complejo Burkholderia cepacia. Se describe la actividad de TIGE en comparacin con doxiciclina, tetraciclina y minociclina frente a una variedad de especies de BNF (n = 195). La sensibilidad se determin por dilucin en agar de acuerdo a las normas CLSI. Resultados: Los rangos de CIMs (g/ml) fueron los siguientes: tetraciclina: B. cepacia: 0.03-256; Burkholderia gladioli: 4-64; Bordetella hinzii: 0.5-4; Bordetella bronchiseptica: 0.5-0.5; Chryseobacterium gleum-indologenes: 0.06-32; Elizabethkingia meningoseptica: 2-128; Delftia acidovorans: 0.5-2; Myroides spp.: 2-128; Ochrobactrum antrophi: 0.5-16; Pseudomonas oryzihabitans: 0.5-4; Pseudomonas pseudoalcaligenes: 0.5-2; Pseudomonas putida: 0.125-256; Pseudomonas grupo stutzeri: 0.125-8; Rhizobium radiobacter: 0.25-4; Shewanella algae: 0.25-1; S. maltophilia: 0.5-64; Sphingobacterium multivorum: 2-4; Sphingomonas paucimobilis: 0.25-4; Alcaligenes faecalis: 4-32; Achromobacter spp.: 2-256. Doxiciclina: B. cepacia: 0.0616; B. gladioli: 2-4; B. hinzii: 0.25-1; B. bronchiseptica: 0.25-0.25; C. gleum-indologenes: 0.125-16; E. meningoseptica: 1-32; D. acidovorans: 0.125-0.25; Myroides spp.: 0.5-16; O. antrophi: 0.068; P. oryzihabitans: 0.25-4; P. pseudoalcaligenes: 2-4; P. putida: 0.06-128; P. grupo stutzeri: 0.25-8; R. radiobacter: 0.25-0.5; S. algae: 0.25-1; S. maltophilia:1-4; S. multivorum: 1-2; S. paucimobilis: 0.125-1; A. faecalis: 2-16; Achromobacter spp.: 0.564. Minociclina: B. cepacia: 0.03-8; B. gladioli: 1-4; B. hinzii: 0.250.5; B. bronchiseptica: 0.25-0.25; C. gleum-indologenes: 0.03-2; E. meningoseptica: 0.06-2; D. acidovorans: 0.06-0.25; Myroides spp: 0.06-0.5; O. antrophi: 0.03-2; P. oryzihabitans: 0.25-4; P. pseudoalcaligenes: 2-4; P. putida: 0.06-32; P. grupo stutzeri: 0.58; ; R. radiobacter: 0.06-0.5; S. algae: 0.06-0.25; S. maltophilia: 0.25-2; S. multivorum: 0.06-0.25; S. paucimobilis: 0.03-0.06; A. faecalis:1-8; Achromobacter spp.: 0.5-16. Tigeciclina: B. cepacia: 0.03-2; B. gladioli: 1-2; B. hinzii: 0.25-0.5; B. bronchiseptica: 0.250.25; C. gleum-indologenes: 0.03-4; E. meningoseptica: 0.25-8; D. acidovorans: 0.125-0.5; Myroides spp: 0.5-4; O. antrophi: 0.25-2; P. oryzihabitans: 0.03-4; P. pseudoalcaligenes: 0.25-1; P. putida: 0.25-16; P. grupo stutzeri: 0.06-4; R. radiobacter: 0.5-0.5; S. algae: 0.125-0.5; S. maltophilia: 0.125-8; S. multivorum: 0.25-0.25; S. paucimobilis: 0.25-1; A. faecalis: 1-8; Achromobacter spp.: 0.5-4. TIGE podra ser una alternativa terapetica para el tratamiento de infecciones causadas por especies de BNF menos frecuentes, incluso multiresistentes, como complejo B. cepacia, B. gladioli, Achromobacter spp. y S. maltophilia, entre otros.
Conclusiones: A partir de 1999 se observ una disminucin sostenida tanto de los valores de CIM (datos no mostrados) como de los porcentajes de resistencia. Puede notarse un descenso adicional importante de aislamientos con sensibilidad intermedia y resistentes en el ao 2003 (p<0,05 respecto de 2001). Estos resultados son coincidentes a lo observado en neumococos aislados de infecciones invasivas a nivel nacional, probablemente por causa de la diseminacin de ciertos clones.
P557 - 27333 PRESENCIA DE UN GEN PENICILINO AMIDASA ENTRE DOS GENES qac EN Staphylococcus haemolyticus: NUEVO ELEMENTO TRANSPONIBLE? TINTILAY, ALEJANDRO(1); CORREA, JORGE(1); DELPINO, MARIA VICTORIA(1); PREDARI, SILVIA(2); DE PAULIS, ADRIANA(2); SORDELLI, DANIEL(1); JERIC, PAOLA(1)
(1) Facultad de medicina UBA; (2) Instituto de Investigaciones Mdicas Alfredo Lanari Los estafilococos coagulasa negativos (CONS) forman parte de la flora normal de la piel, sin embargo en los ltimos tiempos se lo ha relacionado con las infecciones tanto en animales como humanos. Dentro de los CONS, el que se ha aislado con mayor frecuencia y puede provocar septicemias, peritonitis, otitis es Staphylococcus haemolyticus. En este trabajo se analizaron dos cepas de Staphyloccus haemolyticus a las que se denomino 11 y 26, y poseen como mecanismos de resistencia las denominadas bombas de eflujo, pertenecientes a las familias Small Multidrug Resistance (SMR) representada por los genes qacH, qacG, qacJ y smr y Major facilitador Superfamily (MFS) representada por el gen qacA/B. Estos genes generalmente residen en plsmidos. Los objetivos de este trabajo son: 1) identificar del elemento en el que se encuentran los genes de resistencia en las cepas 11 y 26, 2) establecer la relacin proximal entre los genes hallados. La identificacin de los genes de resistencia qacH, G, A/B, J y smr, en las cepas se efectu por PCR. Confirmada la presencia de genes qac se estableci la relacin de proximidad entre ellos. Tambin por medio de PCR se amplific la regin comprendida entre qacH y qacA/B usando como cebador directo qacA/BF y cebador inverso qacHR. La regin fue secuenciada por secuenciacin automtica
P559 - 27354 ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS Y ANALISIS FENO-GENOTIPICO DE LA RESIS-
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TENCIA A MACROLIDOS Y CLINDAMICINA EN AISLAMIENTOS DE Streptococcus agalactiae. TORESANI, INES(1); ROMERO, MERCEDES(1); SUTICH, EMMA(1); GRASSO, PAULA(1); PEREZ, JORGELINA(1); BOGADO, ISABEL(1); EBNER, GUILLERMO(1); LIMANSKY, ADRIANA(1,2).
(1) Ctedra de Bacteriologa; (2) IBR, CONICET; Departamento de Micorbiologa, Facultad de Ciencias Bioqumicas - UNR Streptococcus agalactiae (Estreptococo Grupo B, EGB) es un patgeno oportunista responsable de un gran nmero de infecciones y representa en la actualidad una de las mayores causas de sepsis neonatal e infeccin materna perinatal. EGB es un microorganismo ampliamente sensible a la mayora de los antimicrobianos y presenta slo resistencias aisladas. La terapia antimicrobiana de eleccin contina siendo penicilina G (pen) y ampicilina (amp), mientras que eritromicina (eri) o clindamicina (cli) constituyen tratamientos alternativos en pacientes alrgicos. Los mecanismos de resistencia (R) a eri en EGB pueden ser: i- produccin de metilasa modificadora del sitio blanco, codificada por genes erm, que conlleva a R a lincosamidas y streptograminas (MLSB). Su expresin fenotpica puede ser constitutiva (MLSc) o inducible (MLSi), y/o ii- mecanismo de eflujo, codificada por genes mef (fenotipo M). Por otra parte, se ha descripto resistencia a cli por inactivacin enzimtica (genes lin, fenotipo L). En este trabajo se analizaron, i) la sensibilidad (S) a 11 antimicrobianos, ii) la resistencia a altos niveles de gentamicina (gen), y iii) la presencia de genes de resistencia ermA, ermB, mefA y linB, en una poblacin de 182 aislamientos de EGB. Se efectu mtodo de difusin en agar con gen (10 g y 120 g), pen (10 U), amp (10 g) vancomicina (van 30 g), tetraciclina (tet 30 g), ofloxacina (ofx 5 g), levofloxacina (lev 5 g), ceftriaxona (cro 30 g), azitromicina (azi 15 g), eri (15 g) y cli (2 g) como mtodo de S. Los 2 ltimos se ubicaron prximos (test del doble disco, TDD) para detectar mecanismos de R MLS. Los ensayos de S mostraron 180 aislamientos con R a gen de baja carga (98%) y 10 a gen de alta carga (5,5%), 75 a tet (41%), 14 a lev y ofx (7,7%), 12 a eri y azi (6,6%) y 9 a cli (4,9%). Todos los aislamientos resultaron sensibles a pen, amp, cro y van, segn la metodologa utilizada. El TDD mostr 8 aislamientos fenotipo MLSc, 1 MLSi y 3 fenotipo M, entre 12 aislamientos R a eri. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) detect un fragmento de amplificacin del tamao esperado para ermA en 4/8 aislamientos con fenotipo MLSc as como en el fenotipo MLSi; y ermB en los otros 4 aislamientos con fenotipo MLSc. En los 3 EGB que mostraron fenotipo M se obtuvo una banda de amplificacin del tamao esperado para mefA. Por otra parte, entre los 9 aislamientos con R a cli, slo 1 se mostr sensible a eri, presentando un fragmento de amplificacin del tamao esperado para linB, de ~ 940 pb. Asimismo, es interesante destacar que el mismo se detect en 5 de los aislamientos con fenotipo MLSc. Estos resultados sealan la importancia del estudio de sensibilidad para asegurar el xito en el tratamiento de pacientes alrgicos a pen, as como tambin asegurar su posible asociacin con gen. Asimismo, destacan la necesidad de efectuar una vigilancia epidemiolgica de los genes de resistencia. En este sentido es importante resaltar la coexistencia de genes linB con genes erm en aislamientos que presentan fenotipo MLSc.
jo fue detectar y caracterizar feno y genotpicamente cepas de SARM en fosas nasales de estudiantes de la Facultad de Medicina. En 220 alumnos de la Facultad de Medicina de la Ciudad de Corrientes (44 por cada ao) se tomaron muestras de hisopado de la regin anterior de mucosa de ambas narinas las cuales fueron colocadas en un medio de transporte hasta su procesamiento. Las muestras se sembraron en agar manitol salado para detectar todas las cepas de S. aureus y en un medio cromognico para detectar las cepas de SARM. Las placas fueron examinadas luego de 24 hs de incubacin aerbica a 35C y de cada muestra se estudi una colonia compatible con S. aureus la cual fue identificada mediante pruebas bioqumicas. La resistencia a meticilina se estudi utilizando discos de oxacilina y cefoxitina mediante la tcnica de difusin con discos segn las recomendaciones del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se estudi la presencia de los genes codificantes de la resistencia a meticilina (mecA) y de la Leucocidina de Pantone Valentine (lukPV) siguiendo tcnicas previamente descriptas. Como controles positivos y negativos para ambas pruebas se utilizaron cepas cedidas por el Servicio de Antimicrobianos del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas - ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Sobre 220 muestras de hisopados nasales se obtuvieron 66 aislamientos de S. aureus. Fenotpicamente 3/220 aislamientos (1,4%) fueron resistentes a meticilina. Los 3 presentaron el gen mecA pero fueron negativos para el gen luk-PV. Los protocolos de PCR aplicados permitieron estudiar los genes que codifican para la resistencia a meticilina y para la Leucocidina de PantonValentine en menos de 24 horas de procesamiento desde el aislamiento inicial en medios cromognicos. La prevalencia de portacin nasal de SARM encontrada en estudiantes de Medicina fue inferior a la publicada por otros investigadores, que en algunos casos lleg al 30%. El hecho de que todas las cepas estudiadas carezcan del gen que codifica para la Leucocidina de Panton-Valentine, estara indicando que dichos aislamientos poseen con mayor probabilidad un origen hospitalario que de la comunidad, en los cuales ese gen de virulencia est presente con mayor frecuencia.
P561 - 27367 EVALUACIN DE LA SENSIBILIDAD A MUPIROCINA DE Staphylococcus aureus DE PORTADORES NASALES PREQUIRRGICOS. IMPACTO CLNICO. NAGEL, A(1); MENDOSA, MA(1,2); RAMIREZ, R(3); MOLLERACH, A(1); BARONI, MR(2); CRISTOBAL, S(2); MORERA, G(1); MENDEZ, E DE LOS A(1,2)
(1) Seccin Microbiologa, Laboratorio Central, Hosp. Jos M. Cullen; (2) Ctedra Bacteriologa, Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional del Litoral. (3) Especializando de la carrera Bacteriologa Clnica - FBCB - UNL, Santa Fe, Argentina Introduccin: Mupirocina es uno de los antibiticos tpicos ms utilizado para decolonizar pacientes portadores de Staphylococcus aureus (S. aureus) en fosas nasales. Reportes actuales indican la aparicin de cepas con baja y alta resistencia por lo que en los centros donde se utiliza se sugiere el monitoreo de dicho antimicrobiano y su relacin con la resistencia acompaante. Objetivos: 1-conocer la sensibilidad a mupirocina y otros antimicrobianos de S. aureus de portacin nasal en pacientes prequirrgicos cardiovasculares. 2-Investigar el impacto clnico de la decolonizacin evaluando la presencia o ausencia de infeccin postquirrgica por dicho agente. 3-Detectar la leucocidina PantonValentine (PVL). Materiales y mtodos: Se realizaron 51 hisopados de fosas nasales en pacientes adultos prequirrgicos cardiovasculares de un Hospital Pblico desde el 1 de noviembre de 2009 al 31 de mayo de 2010 para investigar portacin de S. aureus. Se estudi la sensibilidad por mtodo de difusin con tabletas de mupirocina (10 g) y discos de cefoxitina (30 g), minociclina (30 g), eritromicina (15 g)(Ery), clindamicina (2 g), rifampicina (5 g)(Rfa), trimetoprima-sulfametoxasol (25 g ) y cido fusdico (10 g). La meticilino resistencia se confirm con placa screening de 6 g/ml de oxacilina-ClNa 4% (CLSI). Se revisaron retrospectivamente las historias clnicas para evaluar la
P560 - 27361 CARACTERIZACIN FENO-GENOTPICA DE CEPAS DE Staphylococcus aureus RESISTENTES A METICILINA AISLADAS DE FOSAS NASALES DE ESTUDIANTES DE MEDICINA. FORD, MARIA LOURDES; ESQUIVEL, PATRICIA; LIFSCHITZ, VIVIANA; GOMEZ, MARIA VERONICA; MERINO, LUIS
Facultad de Medicina Universidad Nacional del Nordeste Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) aparece como uno de los patgenos hospitalarios ms importantes y su transmisin se produce generalmente desde un portador que lo alberga en las fosas nasales o piel. Existen trabajos previos que indican que los estudiantes de Medicina pueden transformarse en portadores de SARM en funcin del contacto que tengan con personal hospitalario y pacientes. El objetivo del presente traba-
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presencia de infecciones postquirrgicas a dicho agente. La investigacin de PVL se determin por PCR. Resultados: De los 51 hisopados se recuperaron 17 (33,3%) S. aureus. Todos resultaron sensibles a mupirocina. Tres aislamientos fueron meticilino resistentes, dos de los cuales tenan resistencia a otro antimicrobiano (Ery o Rfa). No se document microbiolgicamente ninguna infeccin postquirrgica por dicho agente. No se detect PVL en ninguno de los aislamientos. La utilizacin emprica de mupirocina tpica contina siendo de eleccin en nuestro hospital para decolonizar S. aureus en portacin nasal. Su uso demostr eficacia clnica ya que no se documentaron infecciones postquirrgicas. La ausencia de aislamientos PVL(+) sugiere que, hasta el momento, no sera un factor de comorbilidad a considerar.
P562 - 27384 ABSCESO SUBMENTONIANO POR Eikenella corrodens EN PACIENTE ONCOLGICO: REPORTE DE UN CASO. MARIANSKY, ANA LAURA(1); AMALFA, FLAVIA(1); ERSCHEN, AGUSTINA(1); CARRION, NATALIA(2); SOLOAGA, ROLANDO(2); BALLESTER, DANIELA(1)
(1) Hospital P. Piero. Microbiologa. Laboratorio Central. (2) Hospital Naval Eikenella corrodens es un bacilo Gram-negativo anaerobio facultativo perteneciente al grupo HACEK. Se encuentra en la cavidad oral humana, tracto respiratorio superior y mucosas. La infeccin por este microorganismo es de curso indolente, asociada a infecciones orales como la periodontitis e infecciones por mordeduras humanas y animales, endocarditis, infecciones de cabeza y cuello y ginecolgicas. Generalmente se recupera en cultivos mixtos junto con estreptococos. Caso clnico: Paciente de sexo femenino que ingresa por dolor no controlado con diagnstico de carcinoma verrugoso de Ackerman en lengua de estadio avanzado en tratamiento con radioterapia. Presenta un absceso submentoniano, posteriormente drenado. La paciente recibe tratamiento para el dolor y fallece cuatro das despus del ingreso. Materiales y mtodos: la muestra obtenida por puncin se sembr en agar sangre ovina 5%, agar chocolate, caldo tioglicolato en aerobiosis y agar Brucella con sangre lacada y vitamina K en anaerobiosis. Desarroll como flora nica Eikenella corrodens, tipificada por pruebas bioqumicas convencionales y mtodo automatizado Vitek 2 (Biomerieux). Se describe la presencia de Eikenella corrodens en un absceso como flora nica. La enfermedad de base de la paciente y el tratamiento al que estaba sometida podran haber favorecido la formacin del absceso por este microorganismo de la cavidad oral. Se destaca la importancia en la identificacin de microorganismos poco habituales y fastidiosos mediante un equipo automatizado, logrando acortar los tiempos en el diagnstico.
MRSA, recuperados de materiales clnicamente significativos procedentes de diferentes centros con valores de CIM a tigeciclina entre 0.125 g/ml y 0.25 g/ml. Dichos aislamientos fueron genotipificados por electroforesis en campo pulsado (PFGE). Los patrones de bandas fueron comparados con los de clones circulantes en nuestro pas. La seleccin in vitro de mutantes fue realizada por pasajes seriados en caldo Mueller-Hinton con concentraciones crecientes de tigeciclina, hasta un lmite de 15 pasajes. Se compar el antibiotipo de las cepas mutantes versus parentales mediante el mtodo de difusin por discos segn CLSI. La isogenicidad de las cepas mutantes fue corroborada mediante PFGE. Resultados: En 3/5 aislamientos de MRSA se pudieron seleccionar mutantes que aumentaron sus valores de CIM a tigeciclina entre 64 y 128 veces. Las cepas mutantes mostraron ser isognicas con sus correspondientes cepas parentales. Ms all de la marcada reduccin del tamao del halo de tigeciclina, las mutantes presentaron antibiotipos coincidentes con la cepa parental excepto para una de ellas en la cual se detect un aumento considerable del tamao del halo de oxacilina. Si bien hasta la actualidad no se han reportado casos de seleccin in vivo de S. aureus resistentes a tigeciclina, el presente estudio demuestra la factibilidad de dicho evento en esta especie bacteriana y debe ser considerado como una seal de alerta que aporte al uso prudente de este antimicrobiano. Estos resultados preliminares requieren de aproximaciones experimentales que nos permitan la elucidacin del/los mecanismos de resistencia involucrados.
P564 - 27433 DETECCION DE Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, AGENTES IMPLICADOS EN INFERTILIDAD MASCULINA. GOMEZ, MARIA VERONICA; DELUCA, GERARDO DANIEL; MERINO, LUIS ANTONIO
Facultad de Medicina Universidad Nacional del Nordeste La infertilidad es un problema que afecta tanto al hombre como a la mujer y en ocasiones a ambos miembros de la pareja. Se estima que el factor masculino es el responsable en un 30 a 50% de los casos de infertilidad Si bien existen diversos factores causantes de infertilidad, las infecciones genitales han sido reconocidas como una de ellas observandose que microorganismos como Mycoplasma hominis (Mh), Ureaplasma urealyticum (Uu.)y Chlamydia trachomatis (Ct) producen daos en los espermatozoides, mediante diversos mecanismos, alterando su capacidad de fecundar al vulo. El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum y Chlamydia trachomatis mediante PCR mltiple, en muestras de semen de hombres con problemas de infertilidad. Para este trabajo se estudiaron 72 muestras de semen, provenientes de hombres con problemas de infertilidad. El material genmico de dichas muestra se obtuvo mediante la aplicacin de un Kit de extraccin comercial. Para la deteccin de Mh, Uu y Ct se emple una PCR mltiple que permite amplificar de manera simultnea secuencias genmicas caractersticas de cada uno de los microorganismos estudiados. Las condiciones de mxima sensibilidad y especificidad de la PCR mltiple determinada experimentalmente para un volumen final de 20 ul fueron: 10 mM de Tris-HCl (pH8,3), 50 mM de KCl, 3 mM de MgCl2 , 200 uM de dNTPs c/u, primers (0.1 uM de Ct, 0.5 uM de Mh y Uu). El ciclado consisti en una desnaturalizacin inicial de 3 minutos a 94 C, 40 ciclos de 94 C por 1 min, 60 C por 1 min, 72 C por 2 min y una extensin final a 72 C por 7 min.El material amplificado se corri en un gel de agarosa al 2.5%, y posteriormente se ti con una solucin de bromuro de etidio y se visualiz con transiluminador UV. De las 72 muestras estudiadas, resultaron positivas para Ct 11/72 (15,3%), para Uu 12/72 (16,7%) y para Mh 2/72 (2,7%). Del total de muestras positivas(16), el 50% (8/16) presentaron coinfeccin. Conclusion: Si bien los factores que producen infertilidad son diversos, est demostrado que las patologas infecciosas son uno de los factores causantes de infertilidad. Debido a esto y teniendo en cuenta la alta prevalencia con la que se presentan estos microorganismos y su capacidad de producir coinfecciones, resulta sumamente importante realizar la deteccin de estos microorganismo de manera rutinaria, fundamentalmente en parejas con problemas de infertilidad. Tambin es impor-
P563 - 27424 SELECCIN IN VITRO DE MUTANTES DE Staphylococcus aureus CON SENSIBILIDAD DISMINUIDA A TIGECICLINA. HERRERA, MELINA(1); GARDELLA, NOELLA(2); POSSE, GRACIELA(1); MOBILIA, LILIANA (1); DI GREGORIO, SABRINA(2); MOLLERACH, MARTA(2); DI CONZA, JOSE(2)
(1) Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Adventista del Plata. Entre Ros. (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica UBA Introduccin: Staphylococcus aureus meticilino resistente (MRSA) representa una preocupacin cada vez mayor en salud pblica, debido a que ha ido incrementando su perfil de resistencia a lo largo de los ltimos aos. La tigeciclina es un nuevo antibitico perteneciente a la familia de las glicilciclinas con actividad frente a un amplio espectro de patgenos incluyendo MRSA y aislamientos de S. aureus con sensibilidad disminuida a vancomicina. Los estudios de vigilancia realizados sobre S. aureus no han detectado la emergencia de aislamientos con sensibilidad disminuida a tigeciclina. Sin embargo, esta especie bacteriana ha demostrado la capacidad de desarrollar resistencia a los diferentes antimicrobianos introducidos en la prctica clnica. Objetivo: Seleccionar in vitro mutantes de S. aureus resistentes a tigeciclina, a partir de aislamientos clnicos de MRSA previamente caracterizados. Materiales y Mtodos: Se estudiaron 5 aislamientos de
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tante resaltar la importancia que tiene la aplicacin de las tcnicas moleculares en la deteccin de grmenes fastidiosos como Mh, Uu y Ch.
(Neuqun), D Ballester (CABA). Las especies pertenecientes a Bacteroides grupo fragilis son las ms frecuentes en infecciones por anaerobios y presentan las ms altas tasas de resistencia a varios antibiticos. Objetivo: evaluar la sensibilidad (S) a 10 antibiticos (ATB) segn el origen de los aislamientos. Se estudiaron los siguientes ATB: ampicilinasulbactama (AMS), piperacilina-tazobactama (PTZ), cefoxitina (FOX), ertapenem (ETP), imipenem (IMI), doripenem (DOR), clindamicina (CLI), metronidazol (MTZ), moxifloxacina (MXF) y tigeciclina (TIG). Se incluyeron 363 aislamientos colectados entre 2006 y 2009, de 17 centros de la CABA y de las Pcias. de Buenos Aires, Crdoba, Chaco, Santa Fe y Neuqun: B. fragilis (Bf) (198), otros Bacteroides grupo fragilis (Bgf) (165). Se determin la CIM empleando el mtodo de dilucin en agar (CLSI, M11 - A7, 2007). La S global de los aislamientos fue: AMS 92%, PTZ 99%, FOX 72%, IMI 99%, DOR 98%, ETP 96%, CLI 52%, MXF 91%, TIG 99%, MTZ 100%. El origen de la infeccin estuvo disponible en 320/363 (88,15%) de los aislamientos: abdominal 66%, de piel y partes blandas (PyPB) 16%, genitourinario (GURI) 9% y otros 9%. Los% de S por origen se observan en la tabla. El MTZ mostr muy buena actividad con CIM90= 1 g/ml (rango: <= 0,06 - 4 g/ml).
Origen/antibiticos Abdomen- Bf (n=102) Abdomen-Bgf (n=108) PyPB - Bf (n=34) PyPB- Bgf (n=16) Genitourinario- Bf (n=9) Genitourinario- Bgf (n=21) Otros- Bf (n=15) Otros- Bgf (n=15) AMS PTZ FOX IMI 96 99 85 98 100 100 69 94 100 100 95 100 87 93 87 100 83 65 94 38 67 76 67 33 98 99 100 100 100 100 93 100 DOR 96 99 100 93 100 100 93 92 ETP MXF CLI TIG 94 95 100 92 100 100 92 92 92 87 79 81 89 95 100 87 75 58 65 44 78 67 80 13 100 99 97 100 100 100 100 100
P565 - 27438 INTEGRN CLASE 1 INUSUAL CON GENES blaVIM-2 Y aacA4 EN UN PLSMIDO AUTO-TRANSMISIBLE DE UNA CEPA CLNICA DE Pseudomonas putida. MARCHIARO, PATRICIA(1); VIALE, ALEJANDRO M(1); BALLERINI, VIVIANA (2); ROSSIGNOL, GUSTAVO(3); SPALDING, TAMARA(1); VILA, ALEJANDRO J(4); LIMANSKY, ADRIANA(1)
(1) IBR, Departamento de Microbiologa, FCByF, UNR; (2) Laboratorio de Bacteriologa, Hospital Municipal Carrasco; (3) Laboratorio de Bacteriologa, Hospital Provincial; (4) IBR, Departamento de Qumica Biolgica, FCByF, UNR Pseudomonas putida es un colonizante de superficies biticas y abiticas, raramente involucrado en infecciones humanas. Sin embargo, recientemente se han descripto cepas multiresistentes portadoras de metalo--lactamasas (MLs), situacin que ha conducido a proponer a este microorganismo como reservorio de dichas enzimas. Especficamente blaVIM-2 constituye la ML de mayor diseminacin mundial y se halla generalmente insertada en integrones clase 1. As, el anlisis del entorno genmico de blaVIMen microorganismos ambientales como P. putida aportar he2 rramientas para comprender el fenmeno de transferencia y evolucin de este determinante de resistencia en diferentes nichos ecolgicos. En este trabajo hemos analizado la plataforma gentica del gen blaVIM-2 de una cepa clnica de P. putida (LD209) resistente a carbapenemes aislada en un hospital de Rosario. La caracterizacin de la ML se efectu mediante ensayos microbiolgicos, y el gen correspondiente, mediante PCR y secuenciacin. El entorno genmico fue analizado mediante cebadores especficos de integrones, homlogos a segmentos conservados de los extremos 5 y 3 (5CS y 3CS, respectivamente). La falla en la amplificacin del 3CS indujo al empleo de un cebador con homologa a tniC, que codifica para la transposasa del mdulo de transposicin del transposn Tn402. Se amplificaron luego los genes del mdulo de transposicin completo (tniA, tniB, tniQ y tniC) y los productos fueron secuenciados. La transferencia del gen bla fue abordada mediante ensayos de conjugacin utilizando P. aeruginosa y Escherichia coli como hospedadoras. El anlisis de ADN plasmdico se efectu mediante digestin con enzimas de restriccin y electroforesis. Ensayos de PCR y secuenciacin mostraron que los cassettes de genes blaVIM-2 y aacA4 se encuentran dispuestos en este orden, en un integrn inusual clase 1, carente del extremo 3CS. Este elemento gentico ha sido descripto recientemente en P. aeruginosa como In71, y se halla flanqueado en su extremo 3 por tniC. Ensayos posteriores de PCR y secuenciacin permitieron evidenciar que el elemento presente en LD209 mostr en su extremo 3 el mdulo de transposicin completo. El anlisis de los extremos de la secuencia hallada mostr repeticiones invertidas (IR), as como repeticiones directas de 5 pares de bases (adyacentes a las IR), evidenciando la capacidad de movilizacin e insercin de este elemento gentico. Ensayos de conjugacin evidenciaron la presencia de un plsmido auto-transmisible de amplio rango de hospedador, portador del integrn inusual tipo Tn402 detectado. Este trabajo aporta evidencias de que elementos genticos mviles inusuales portadores de blaVIM-2 asociados a plsmidos auto-transmisibles, dentro de una especie propuesta como reservorio de genes de resistencia, podran ser responsables de la elevada diseminacin local y mundial de blaVIM-2.
De 337 muestras evaluadas el 12% correspondi a hemocultivos, en stos, en el 71% se aisl Bf y en el 29% Bgf. Todos los aislamientos fueron sensibles a PTZ, slo un B. fragilis fue resistente a IMI. En PyPB y GURI Bf mostr mayor sensibilidad a los ATB -lactmicos con respecto a los de abdomen y la MXF fue menos activa. En PyPB los Bgf fueron los ms resistentes. y en GURI los ATB -lactmicos fueron los ms activos. En abdomen hueso y lq. pericrdico Bf mostr resistencia y/o S disminuida a los carbapenemes y Bgf en abdomen y PyPB. Es importante monitorear el perfil de S a los ATB en estas especies, para detectar la emergencia de cepas resistentes y orientar el esquema teraputico.
P567 - 27473 COLITIS PSEUDOMEMBRANOSA POR Clostridium difficile. PRESENTACIN DE UN CASO FATAL. MONTIBELLO, S; GENTILINI, A; DEL BUSTIO, M; FORASTIERO, A; REY KELLY, G; KAUFMAN, S
Servicio Microbiologia Hospital Juan A. Fernndez Clostridium difcile es un bacilo anaerobio, gram-positivo asociado a un espectro clnico que va desde el portador asintomtico hasta progresar ocasionalmente hacia una colitis fulminante con megacolon txico, sepsis y muerte. La enfermedad afecta principalmente a mayores de 65 aos y pacientes inmunocomprometidos. El uso de antimicrobianos especialmente ampicilina, amoxicilina, cefalosporinas, clindamicina, y la estancia hospitalaria son los principales factores de riesgo. Se presenta el caso de una paciente femenina de 26 aos, cursando la semana 6 de embarazo que consult por disnea y fiebre de 72 horas de evolucin. Al ingreso se realiz radiografa de trax y se evidenci infiltrados algodonosos bilaterales, se interpret como neumona de la comunidad y se solicit hemocultivos, cultivo de esputo, hisopado para bsqueda de H1N1 y se inici tratamiento emprico con cefotaxima, claritromicina, osetalmivir. Los cultivos fueron negativos al igual que la serologa para Chagas, Toxoplasmosis, HBV y VDRL. La serologa para HIV fue reactiva. Se inici tratamiento antirretroviral. Al dcimo da de tratamiento antibitico refiere gases, distensin abdominal, prdida de peso, aumento de las deposiciones y dolor anal. La evaluacin proctolgica no demostr patologa que justifique el dolor y ante la buena evolucin clnica se le dio el alta. Dos das despus reingres por disnea y
P566 - 27470 ACTIVIDAD DE 10 ANTIMICROBIANOS FRENTE A Bacteroides grupo fragilis SEGN EL ORIGEN DE LOS AISLAMIENTOS. FERNANDEZ CANIGIA, L(1); LEGARIA, MC(1); CASTELLO, L(1); PREDARI, SC(1); DI MARTINO, A(1); ROSSETTI, A(1); ROLLET, R(1); CARLONI, G(1); BIANCHINI, H(1); LITTERIO, M(1); OTROS PARTICIPANTES, DE LA VIGILANCIA(2);
(1) Subcomision de Bacterias Anaerobias (SADEBAC-AAM), (2) M Bottiglieri (Crdoba), M Rocchi (Crdoba), MI Mrquez (Chaco), M Machain (Bs As), MC Mauro (Santa Fe), MR Nez
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fiebre observndose en la radiografa de trax un infiltrado intersticio-alveolar bilateral y se comenz tratamiento con piperacilina/ tazobactama, trimetoprima-sulfametoxazol (TMS), hidrocortisona y oxigenoterapia. Se realiz lavado bronco-alveolar en el que se observaron acmulos de Pneumocystis jirovecii. En el aspirado traqueal y urocultivo se aisl Acinetobacter baumannii por lo que se empez tratamiento con colistin, imipenem. Evolucion con diarrea lquida sin respuesta inflamatoria, dolor abdominal y leucocitosis de 30.000/mm3. La determinacin de toxina de Clostridium difficile por mtodo ELFA (miniVidas, Biomeriux) fue indefinido. Se decide agregar metronidazol. La ecografa abdominal mostr dilatacin de intestino delgado y colon y la repeticin por el mismo mtodo de la determinacin para toxina de Clostridium difficile dio positivo por lo que se modific el esquema teraputico a imipenem, TMS, metronidazol y vancomicina (oral-rectal). El anlisis anatomopatolgico de la endoscopa digestiva confirm el diagnstico de colitis pseudomembranosa con reas de colitis isqumicas. La paciente present falla orgnica mltiple con probable foco abdominal, insuficiencia respiratoria y falleci. En esta paciente inmunocomprometida las infecciones concomitantes llevaron a esquemas antibiticos de amplio espectro que fueron el factor predisponente para la adquisicin de este germen y el cuadro clnico asociado.
en los pases tropicales, particularmente en pases en vas de desarrollo. Lo hallado en nuestro medio podra deberse a hbitos alimentarios en relacin con el consumo de pollo. Es importante una vigilancia epidemiolgica con el objeto de tomar medidas preventivas.
P569 - 27476 ANTIBIOGRAMA DIRECTO DEL FRASCO DE HEMOCULTIVO PARA BACILOS GRAM-NEGATIVOS UTILIZANDO EL SISTEMA VITEK 2C. CORRELACIN CON LA METODOLOGA ESTANDARIZADA. CARRION, N; SOLOAGA, R; PIDONE, J; MENDEZ ARANCIBIA, M; GIOVANAKIS, M; SUJEMECKI, A; BONDULICH, C; GUELFAND, L; MARGARI, A
Hospital Naval El tratamiento inicial de la bacteriemia por bacilos gram-negativos con antibiticos para los cuales estos son sensibles, es crucial para disminuir la morbi-mortalidad de los pacientes. El objetivo de este trabajo, fue el de comparar los resultados de identificacin y de sensibilidad antibitica obtenidos por Vitek 2C (Biomerieux, Francia) para bacilos-gram negativos, realizados directamente a partir de frascos de hemocultivos (Bact-Alert) positivos con los correspondientes a los aislamientos de medios de cultivo slidos. Se estudiaron 138 episodios de bacteriemia monomicrobiana por bacilos gram-negativos en 136 pacientes. El antibiograma directo del frasco se realiz extrayendo 5-6 ml del caldo de los frascos positivos, luego se inocularon tubos separadores de suero (Beckton Dickinson), estos se centrifugaron a 2000 rpm durante 10 min; posteriormente se elimin el sobrenadante y con el sedimento obtenido sobre el gel se prepar en solucin fisiolgica al 45% una turbidez equivalente al 0,50,63 de la escala de McFarland y se procedi a sembrar las tarjetas para bacilos gram negativos GN y AST-082 del sistema Vitek 2C acorde a las instrucciones del fabricante. De las colonias desarrolladas en medios slidos a partir del subcultivo de los frascos positivos, se procedi de acuerdo a la metodologa estandarizada para el equipo. La mediana en horas para la deteccin de los episodios de bacteriemia fue de 14,4 hs (rango de 2,1-60 hs). Por otra parte la mediana en horas para obtener un resultado de identificacin y sensibilidad con el sistema Vitek 2C a partir del frasco de hemocultivo fue de 8,7 hs (rango de 4 a 18 hs). Los microorganismos aislados fueron: E. coli (n:49), K. pneumoniae (n: 30), P. aeruginosa (n: 15), P. mirabilis (n:13), A. baumannii (n:10), E. cloacae (n:4), S. maltophilia (n:3), Salmonella spp. (n:2), S. marcescens (n:3), C. freundii (n:2), M. morganii (n:1), B. cepacia (n:1), E. meningoseptica (n:1), E. aerogenes (n:1), R. picketii (n.2), A. lwoffi (n:1). La identificacin directa del frasco y a partir de colonia aislada fue concordante en 136/138 (99,5%) de los casos. No se produjeron errores mayores ni muy mayores para ampicilina, cefotaxima, ceftazidima, meropenem, amikacina, gentamicina, ciprofloxacina, ni para colistin. Se detectaron errores muy mayores en 3/138 (2,1%) piperacilina tazobactama; los errores mayores se produjeron en 1/138 (0,72%) de las cepas para piperacilina tazobactama, ampicilina-sulbactama, cefepima e imipenem Los errores menores se detectaron en 1/138 (0,72%) para ampicilina, cefotaxima, cefepima, gentamicina e imipenem, en 3/138 (2,1%) para ceftazidima y en 5/138 (3,6%) para ampicilina sulbactama. La correlacin esencial sobre 1656 tests fue del 98,8%. Tanto la identificacin como la sensibilidad antibitica realizadas directamente desde el frasco de hemocultivo brindaron resultados excelentes en comparacin con el mtodo estndar y permiten brindar resultados en el da para el manejo de pacientes crticos.
P568 - 27475 DIEZ AOS DE Campylobacter jejuni EN EL HOSPITAL ESPAOL (HE) DE ROSARIO. GAMBANDE, T(1,2,3); BORDA, N(3); PONESSA, A(1); BERMEJO, J(3); CERUTTI, G(1); HAILS, I(1); PUIG, C(2); TOMEY, MI(2); CORDOBA, L(1); LUCIANO, MI(1,2); NOTARIO, R(1,2,3)
(1) Universidad Nacional de Rosario, (2) Universidad Abierta interamericana, (3) Hospital Espaol La diarrea aguda de origen bacteriano es una importante causa de morbi-mortalidad en todo el mundo. En los distintos pases varan las etiologas segn el nivel socioeconmico, clima, factores culturales y fundamentalmente por la provisin de agua potable y la correcta eliminacin de las escretas. Campylobacter jejuni emergi como una de las ms importantes bacterias enterovirulentas por su frecuencia y su invasividad. El objetivo de este trabajo fue evaluar los datos de nuestro hospital de los ltimos diez aos. Se trata de un nosocomio de 112 camas, de nivel social medio con pacientes con cobertura social. Se estudiaron 1938 pacientes con diarrea desde el 01/01/2000 al 31/12/2009. Se tomaron muestras por defecacin espontnea que se sembraron antes de las 3 hs en medios para investigacin de Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Aeromonas spp., Yersinia spp., Vibrio spp. y hasta 2007 Escherichia coli diarregenos. Campylobacter jejuni se present con una frecuencia creciente, desde 0,5% de los casos de diarrea en 2000 hasta 8,56% en 2009. En los ltimos 5 aos afect a 68 pacientes (7,02%) en contraste con Salmonella spp. y Shigella spp. juntas, que entre las dos afectaron a 48 pacientes (4,95%). Escherichia coli enterovirulentos se aislaron en frecuencia decreciente, 12,8% en 2000 a 4,07% en 2007 (no disponemos de datos posteriores). El complejo Aeromonas hydrophila se aisl en un promedio de 2,05%. No se aisl Yersinia enterocolytica ni Vibrio spp en este perodo.
Estacin Verano Otoo Invierno Primavera N Casos (n) 11 17 33 28 Porcentaje 12.36% 19.1% 37.08% 32.8%
Destacamos el aumento de la incidencia de Campylobacter spp. en los ltimos aos, convirtindose en la principal causa de diarrea bacteriana, superando a Salmonella spp. y Shigella spp. juntas. El nivel de Aeromonas spp. probablemente est relacionado, en una poblacin riberea como la nuestra, con el consumo de agua y alimentos de ro. De los datos epidemiolgicos obtenidos de los pacientes con diarrea por Campylobacter spp., result llamativo que en nuestro medio se present con predominio en invierno y primavera, en contraste con numerosas publicaciones que lo refieren en verano o en la estacin de las lluvias
P570 - 27503 HALLAZGOS DE Chlamydia trachomatis EN MUJERES SEXUALMENTE ACTIVAS. SAUL, CLARA; MARTINELLI, MARIA ELENA; BUCCIARELLI, RICARDO
Sanatorio A. Feming Introduccin: Chlamydia trachomatis (CT) es una bacteria gram-negativa intracelular obligada, responsable de infecciones de transmisin sexual en la mujer, asociada a cuadros de cervicitis, uretritis y enfermedad inflamatoria plvica, y perinatales
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por transmisin de madre a hijo durante el parto causando en el neonato neumona y conjuntivitis. Las infecciones suelen ser asintomticas, retardando el diagnstico y tratamiento con aumento de riesgo de infertilidad. La OMS informa una prevalencia mundial de 4,4%. Objetivo: Establecer la prevalencia de CT en pacientes que concurren al servicio de ginecologa y obstetricia y al programa de fertilizacin asistida. Las mismas son derivadas a nuestro servicio con diagnstico presuntivo, con sintomatologa de leucorrea inespecfica, cervicitis o infertilidad. Materiales y mtodos: la muestra consisti en un hisopado endocervical tomado por personal del servicio, obtenido mediante rotacin en zona del cuello uterino con hisopo de Dacron. La deteccin de CT se realiz con un ensayo rpido de inmunocromatografa (CHLAMYCHECK-1 STRIP, VEDALAB), que detecta el lipopolisacrido (LPS) especfico de gnero Chlamydia. El perodo analizado va desde Noviembre 2008 a Abril 2010. Resultados: Se procesaron 119 muestras de las cuales 39 fueron positivas dando una prevalencia de 32,7%. La edad de las pacientes abarc de los 18 a los 60 aos. El 43,5% (17) de las muestras positivas correspondan a pacientes entre los 20 y 30 aos, mientras que el 41% (16) se ubicaba entre los 31 y 40 aos, por lo que el 84% se registr entre los 20 y 40 aos de edad. Sin embargo hubo una paciente de 18 aos y otra de 60 aos con resultados positivos. Las manifestaciones clnicas que motivaron la consulta fueron flujo vaginal persistente 41%, infertilidad 25%, vulvovaginitis 23%, cervicitis 8%, y aborto espontneo 3%. Conclusiones: Teniendo en cuenta que este estudio se centr en pacientes sintomticas, la prevalencia encontrada es alta en relacin a otros trabajos publicados. Por lo cual consideramos de suma importancia hacer la bsqueda de CT en aquellas pacientes con sintomatologa consistente con infeccin, independientemente de la edad de las mismas porque, como se puede apreciar, mientras la paciente sea sexualmente activa existe la probabilidad de infeccin, como se desprende de los resultados. Sin embargo, pacientes sexualmente activas sin sntomas manifiestos, tales como las adolescentes, debern tambin ser estudiadas, dada la alta circulacin de CT en el medio. Desde esta perspectiva y ante la alta tasa de hallazgos, se considera conveniente promover la participacin del servicio en estudios multicntricos de mayor envergadura empleando metodologas diagnsticas de alta especificidad como PCR para establecer los perfiles prevalentes en nuestro medio.
y 09/10=43) observndose un aumento significativo de la misma en el ltimo periodo respecto a los otros (p<0,01). Se aislaron 67 Shigella flexneri (07/08=19; 08/09=23 y 09/10=25) no habiendo un aumento significativo de este serogrupo respecto a los otros periodos (p>0,01). En la etapa evaluada no se obtuvieron cultivos positivos para Shigella dysenteriae y Shigella boydii. Los resultados obtenidos fueron:
07/08 (n=257) Shigella sonnei Shigella flexneri Total 2 19 21 08/09 (n=217) 7 23 30 09/10 (n=303) Total (n= 777) 43 25 68 52 67 119
Conclusiones: El incremento significativo de casos de Shigella sonnei en el periodo 09/10 en relacin a los valores esperados nos sugiere la presencia de un brote de este serogrupo. Es necesario hacer hincapi en la vigilancia epidemiolgica y en campaas que apunten a la prevencin de la enfermedad diarreica, como las buenas prcticas higinicas, lavado de manos, lactancia materna y facilitar el acceso al agua salubre a la poblacin; debido a que la misma constituye un problema de salud pblica de alto impacto.
P572 - 27558 EVALUACIN DE LA MEDICIN DEL PH Y DETERMINACIN DE AMINAS EN SECRECIONES VAGINALES COMO HERRAMIENTAS EN EL DIAGNOSTICO DE LA VAGINOSIS BACTERIANA. CHAVEZ, PIA ELISA; AGUIRRE, DIANA ALEJANDRA; ALFONSO, FERNANDO; AHLBOM, MONICA; PATO, ANA MARIA
Hospital Angela I. Llano, Corrientes La vaginosis bacteriana (VB) es una condicin clnica causada por el reemplazo del Lactobacilus spp., el cual normalmente produce cido lctico en la vagina, por un grupo de bacterias aerbicas y anaerbicas. Es la causa ms frecuente (45%) de secrecin o mal olor vaginal. En la VB los cambios bioqumicos son: elevacin del pH, incremento en la concentracin de diaminas, poliaminas, cidos grasos. Los criterios propuestos por Amsel y col para el diagnstico clnico de VB son actualmente aceptados, el flujo vaginal blanco o grisceo, el pH vaginal en ausencia de sangre o semen es superior a 4,5, la alcalinizacin del medio vaginal con hidrxido de potasio al 10% produce un olor comparado a pescado en mal estado como consecuencia de la liberacin de aminas: putrescina, cadaverina y trimetilamina, la presencia de numerosas bacterias fijadas sobre la superficie de las clulas epiteliales vaginales que llegan a oscurecer su borde constituyen lo que se ha llamado clulas gua o clue cells. Se han descrito complicaciones debidas a la afeccin en distintas pacientes tales como: Corioamnionitis, ruptura prematura de membrana, trabajo de parto pretrmino, endometritis postparto, etc. Objetivo: validar el test de aminas y la medicin del pH en el flujo vaginal como mtodos paraclnicos diagnsticos de VB frente a la estandarizacin de Nugent. Materiales y mtodos: Se estudiaron 192 pacientes entre 15 a 61 aos, que asistieron al consultorio externo de Patologa cervical y de control de embarazo e internadas en el sector de alto riesgo de la maternidad del Hospital Angela I. Llano de Corrientes desde el 23 de marzo hasta el 25 junio del 2010. Se tomaron muestras con espculo de fondo de saco vaginal, se midi el pH con tiras reactivas de rango especfico, y se realiz el test de aminas. Se evaluaron las secreciones por microscopa aplicando el score de Nugent para el diagnstico microbiolgico de VB. Se anotaron la presencia y caractersticas del flujo, edad y embarazo. Se excluyeron del estudio las pacientes que recibieron tratamiento previo y las que no tuvieron abstinencia sexual. Resultados: La prevalencia de VB fue de 29% (56). El valor predictivo negativo para ambas pruebas fue alto (>98%) en cambio, el valor predictivo positivo fue menor, siendo del 56% para la determinacin del pH y 86% para el test de aminas. La sensibilidad de ambos mtodos fue alta (> 94%), la especificad para el test de aminas fue del 94% contra un 68% para el pH. Los falsos positivos para ambas pruebas coincidieron con la presencia de levaduras, tricomonas y biota intermedia inespecfica. Conclusiones: la determinacin del pH si bien es un
P571 - 27547 Shigella sonnei: AUMENTO DEL NMERO DE CASOS EN EL AO 2010 EN LA CIUDAD DE CRDOBA. SANCHEZ, L; VIGNOLO, V; GRASSO, A; GONZALEZ, L
Hospital Infantil Municipal de Crdoba Introduccin: La shigelosis constituye la causa ms importante de disentera bacilar, enfermedad que se caracteriza por clicos abdominales y deposicin de heces con sangre y moco. Es endmica en pases en vas de desarrollo y afecta principalmente a menores de 4 aos con una mayor incidencia en periodo estival. Objetivo: Realizar un anlisis retrospectivo de los periodos diciembre 2007 a marzo de 2008 (07/08), diciembre 2008 a marzo de 2009 (08/09) y diciembre 2009 a marzo de 2010 (09/ 10); poca del ao donde se da el mayor nmero de casos a fin de evaluar los serogrupos de Shigella spp. aislados en materia fecal (MF) en el Hospital Infantil Municipal de la Ciudad de Crdoba. Materiales y Mtodos: Todas las muestras de MF se obtuvieron por evacuacin espontnea y correspondieron a pacientes ambulatorios. Las mismas se sembraron en Levine EMB agar y agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) y se incubaron a 37C durante 18 a 24 hs. Por otra parte se efecto un enriquecimiento en Caldo Selenito y se subcultivaron en los mismos medios. Las bacterias lactosa negativa sospechosas de Shigella spp. fueron identificadas con pruebas bioqumicas convencionales. La serotipificacin se realiz con antisueros provistos por el Servicio Antgenos y Antisueros del Instituto Nacional de produccin de Biolgicos, ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Resultados: Durante los periodos estudiados se recibieron 777 muestras de coprocultivo; 257 en el periodo 07/08, 217 en 08/09 y 303 en 09/ 10. Se obtuvieron un total de 119 aislamientos de Shigella spp.. De estos, 52 correspondieron a Shigella sonnei (07/08=2; 08/09=7
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mtodo rpido y altamente sensible para el screening de vaginosis bacteriana, es costoso y la especificidad hace necesaria la confirmacin por otro mtodo, por lo cual el test de aminas resultara un mtodo til y eficiente en nuestro medio para la evaluacin inicial del flujo vaginal.
P573 - 27567 AISLAMIENTO DE Turicella otitidis EN TRES PACIENTES PEDITRICOS CON OTITIS MEDIA AGUDA. BOTTIGLIERI, MARINA; BERRUEZO, FABIANA; ARGOITIA, MARIA JOSE; PERALTA, MARINA; AMIEVA, CRISTIAN
Clnica Universitaria Reina Fabiola Turicella otitidis es un bacilo gram-positivo no fermentador que puede estar asociado con otitis media, aunque su rol etiolgico es controversial. Esta bacteria fue aislada en cultivo puro o en flora polimicrobiana a partir de infecciones de odo medio, en la mayora de los casos en nios menores de 3 aos. Tambin se recuper de absceso cervical, mastoiditis y absceso auricular asociada a otitis media recurrente. Funke y col. en 1994 fueron los primeros en describir a Turicella otitidis como un bacilo gram-positivo corineiforme reconocido como posible agente causal de otitis media aguda en pacientes peditricos. Son inmviles y pueden presentarse en forma aislada, de V corta o en empalizada. Las colonias en agar sangre de oveja son no hemolticas, circulares, convexas y de 1 a 2 mm de dimetro. Son catalasa, CAMP y DNAsa positivas, y ureasa, nitratos, indol y esculina negativas. No utilizan los carbohidratos. Presentan sensibilidad a los betalactmicos, ciprofloxacina, rifampicina, tetraciclina y gentamicina y existe una alta resistencia a macrlidos y lincosaminas. Se presentan tres casos clnicos donde se recuper Turicella otitidis. Caso clnico 1: paciente varn de 2 aos con antecedentes de otitis media a repeticin. Consulta por supuracin de odo derecho de 7 das de evolucin. En ese momento se encuentra medicado con claritromicina por cuadro de neumona atpica. Al examen se observa perforacin de 2 mm en odo derecho, se toma muestra por aspiracin para cultivo. Al examen directo se observa bacilos gram-positivos en ausencia de respuesta inflamatoria. En el cultivo desarrolla Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae y Turicella otitidis. Se instaura tratamiento con ciprofloxacina e hidrocortisona, 3 gotas 3 veces al da por 7 das. A los 5 das se realiza control con buena evolucin y ausencia de supuracin. Caso clnico 2: paciente femenina de 7 meses. Consulta por fiebre de 7 das de evolucin, vmitos y diarrea. Sin antecedentes de otitis. Al examen se le diagnostica otitis media aguda y se obtiene muestra de odo izquierdo por puncin para cultivo. En el examen directo no se observa respuesta inflamatoria ni bacterias. En el cultivo desarrolla Turicellla otitidis. Se indica tratamiento con amoxicilina/ac clavulnico 2,5 cc c/12 hs por 7 das. Se realiza control a los 15 das con evolucin a otitis media con efusin. Caso clnico 3: paciente masculino de 7 meses. Consulta por enfermedad en vas areas superiores de varios das de evolucin, con fiebre desde hace 48 hs. Al exmen fsico se observa en odo derecho membrana timpnica abombando y se realiza puncin En el examen directo se observa 20 leucocitos PMN/campo, cocos gram-positivos y bacilos gram-positivos. En el cultivo desarrolla Staphylococcus aureus y T. otitidis y se indica tratamiento con rifampicina 4 cc/12 hs por 7 das. A los 3 das se hace control con buena evolucin. Conclusin: Turicella otitidis es de fcil identificacin pero suele ser pasado por alto en la mayora de los laboratorios de microbiologa. Su rol en la patognesis de las otitis medias est todava sin resolver y se requieren estudios adicionales para este propsito.
menores de un ao, hoy es la forma clnica y epidemiolgica ms frecuente de botulismo humano. Se produce por colonizacin intestinal de esporas de clostridios productores de neurotoxina botulnica (CPNB) y produccin de toxina in situ. Se caracteriza por hipotona y parlisis flccida simtrica y descendente, con un amplio espectro clnico, que requiere establecer diagnstico diferencial con otras patologas neurolgicas del infante. En Mendoza, desde marzo de 1982 hasta diciembre de 2009 se registraron 134 casos, ubicndose en segundo lugar en frecuencia luego de Buenos Aires. El estudio epidemiolgico de los casos revela una mayor prevalencia en la regin Centro-Oeste, con 48 casos de los 134 (36%), registrando el departamento de Tupungato el mayor nmero de la regin (24/48=50%) y de la provincia (24/ 134=18%). Con el fin de esclarecer el motivo de esta elevada prevalencia en la zona, se estudiaron en forma retrospectiva los 24 casos de BL ocurridos en Tupungato, y se tomaron 31 muestras de suelos en domicilio y/o peri-domicilio de los nios afectados y 43 muestras de suelo de sitios alejados. Las muestras se procesaron para la deteccin de esporas de CPNB sembrando en medio de carne picada (caldo Tarozzi). Luego de 5 das de incubacin a 31C, se realiz la prueba de toxigenicidad por medio de bioensayo en ratn (inoculacin IP en ratn blanco cepa suiza). Los caldos txicos fueron neutralizados con antisueros botulnicos polivalentes (ABF) y se procedi al aislamiento en medios slidos. La cepa aislada fue tipificada serolgicamente con antisuero botulnico especfico a nivel de 2.000 DL50/ratn. Resultaron positivas para esporas de CPNB el 62,1% (46/74) de las muestras; 17/46 (37%) muestras pertenecan al peridomicilio y 29/ 46 (63%) a lugares alejados y a otros sitios sin registro de casos. El serotipo identificado con mayor frecuencia en las muestras positivas fue el A (82,6%=38/46), coincidente con el tipo serolgico de los casos de BL; el serotipo B, se identific en el 2,2% (1/46) y se encuentran en proceso de identificacin el 15,2% (7/46). La mayor prevalencia de casos de BL se observ en los distritos de mayor densidad poblacional. En 22 de los 24 casos, los padres realizaban tareas rurales con gran contacto con la tierra (tractorista, agricultor, jornalero de galpones de ajo, cosechador, contratista de finca); en los otros 2, uno era propietario de uno de los 11 galpones de empacado de ajo para exportacin instalados en Tupungato; y en el otro, si bien no eran trabajadores rurales, s lo eran sus familiares directos. El estudio estadstico revel que no existe relacin significativa (p=0,05) entre la presencia de esporas de CPNB en suelo y la incidencia de BL en la zona. Por estos resultados se infiere que la sola presencia del patgeno en su ambiente natural, no sera el nico factor de riesgo de exposicin en la transmisin del BL; y se estima que las condiciones topogrficas y climticas de Tupungato y la participacin humana, con sus hbitos higinicos y su actividad laboral, seran factores asociados que favorecen la dispersin de las esporas, elevando el riesgo de exposicin.
P575 - 27573 PRIMER CASO DE TUBERCULOSIS EXTREMADAMENTE RESISTENTE (TBXDR) EN PACIENTE COINFECTADO CON VIH EN LA PROVINCIA DE CRDOBA, ARGENTINA. WOLFF, L; ALANIZ, V; NAVA, MC; NAVARRO, MA; GHELLI, R; VITTORI, E; CALVO, ML
Hospital Rawson, Crdoba La TBXDR es la producida por M. tuberculosis que agrega a la multirresistencia (TBMR), la resistencia simultnea al menos a una quinolona y un inyectable de 2 lnea (definida por OMS en 2006). En Argentina se detectan cerca de 8 casos por ao. Paciente varn, 27 aos, coinfectado con VIH, VHB (octubre/2006) y tuberculosis (TB) diseminada (2008). Oriundo de Per, vivi 7 aos en Bolivia (1999-2006) donde estuvo en contacto con mujer tratada por TB dos aos con abandonos reiterados. En 2006 se radica en Ro IV (Crdoba-Argentina).11/7/07 CD4 270-14,8%. Carga viral (CV) < 50 copias, anticore anti VHB reactivo 0,009. 3/ 8/07 CV VHB >640.000.000; funcin heptica normal. 20/2/08 CD4 175-12,5%; CV VIH 75.000. Regresa a la consulta mdica despus de no adherencia por temor, refiere sindrome febril sin foco evidente. 14/5/08: biopsia heptica: lesiones granulomatosas caseificantes compatibles con TB. TAC abdominal mltiples lesio-
P574 - 27569 FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A ELEVADA PREVALENCIA DE BOTULISMO DEL LACTANTE EN TUPUNGATO, MENDOZA ARGENTINA. DE JONG, LAURA I T(1); BERDUCCI, OCTAVIO(2); FERNANDEZ, RAFAEL A(1)
(1) Facultad de Ciencias Mdicas- Universidad Nacional de Cuyo, (2) Hospital Las Heras, Tupungato. El botulismo del lactante (BL), enfermedad neuroparaltica generalizada y severa (potencialmente letal) que afecta a nios
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nes hipodensas en bazo, hilio heptico y delante de vena cava. 13/6/08 internado en Hospital Rawson inicia tratamiento para TB con drogas de 1 lnea. 25/6/08 baciloscopa (B) para BAAR +++ de material supraclavicular. Inicia Truvada ms Efavirenz. 22/7/ 08 tres colonias de BAAR en biopsia de pleura: PCR + para TB. 30/7/08 200 colonias de lquido pleural se envan para antibiograma (ATB) a ANLIS Dr. C. Malbrn. Resonancia Magntica Nuclear: cuerpos vertebrales dorsolumbares hipodensos, cuerpo D11 aplastado. Lesin infiltrativa paravertebral D4-D5: B +. 7/ 8/09 ATB: resistente a isoniacida, estreptomicina, rifampicina(R), pirazinamida; sensible a etambutol(E), cicloserina(Cs), PAS, kanamicina(K), etionamida, capreomicina, ofloxacina(Of). Se solicita a Dr. Domingo Palmero asesoramiento teraputico. 6/9/08 inicia Cs, PAS, amicacina, moxifloxacina. 21/11/08:2 meses de tratamiento con drogas de 2 lnea. 17/12/08 alta hospitalaria.6/02/ 09 reinternacin por fiebre sostenida.17/02/09: impotencia funcional mano izquierda con edema. 5/3/09: coleccin mano izquierda B +++. Se agrega etionamida, claritromicina y linezolid. 8/3/09 afebril, mejora del dolor y tumefaccin. 1/4/09 Ecografa abdominal sin alteraciones hepticas ni adenomegalias. 28/4/09 afebril, alta hospitalaria. ATB 7/8/2009 aislamiento de mano: se agrega resistencia a E, K, amicacina y Of. El paciente contina con tratamiento ambulatorio a la espera de ATB de nuevo aislamiento de mano. Resaltamos el apoyo incondicional del Laboratorio Nacional de Referencia y del Dr. Domingo Palmero. Estos pacientes requieren tratamiento totalmente individualizado diseado por un especialista con mucha experiencia. En personas con antecedentes epidemiolgicos fuertemente positivos para TBMR, proponemos realizacin inmediata de prueba de sensibilidad preliminar a R utilizando el micobacterifago D29, que predice 91.7% de cepas MR, directamente a partir de muestras con B altamente positivas, previa al inicio del tratamiento. Paralelamente prueba de sensibilidad completa a fin de disear la asociacin de drogas a emplear. Insistimos en la necesidad de una anamnesis minuciosa en la cual se investiguen episodios anteriores de TB y contacto con casos de TBMR, teniendo en cuenta que tener TB, VIH/ SIDA y ser extranjero indocumentado, son estigmas que llevan muchas veces al ocultamiento y an a la negacin de esta informacin.
epidemiolgica de EACD se realiz la deteccin de toxinas A y B de heces con resultado positivo en 17 casos (28,3%). Del total de pacientes internados, la prevalencia global de EACD fue de 0,18%. Se observ una respuesta inflamatoria positiva en 14 de las 60 muestras. Los factores de riesgo asociados fueron: la edad avanzada con un promedio de 60,8 aos, la estada hospitalaria con promedio de 12,9 das, patologas de base como diabetes (9 pacientes) y el tratamiento antibitico (42 pacientes). De los 42, recibieron los siguientes antibiticos: lactmicos (BL) ms IBL (21), clindamicina (CLI) (6), fluorquinolonas ms - lactmicos (10), fluorquinolonas (FQ) (5). Seis pacientes estaban bajo tratamiento quimioterpico.
Ao Casos BL + IBL CLI FQ + IBL FQ Quimio- Toxinas Prevaterapia (+) global lencia (%) 2 1 3 6 7 2 8 17 0.22 0.06 0.25 0.18
2007 2008 2009 Total
17 14 29 60
7 4 10 21
2 1 3 6
8 0 2 10
0 2 3 5
La EACD es una enfermedad que debe ser considerada en el diagnstico diferencial de diarreas ya que es una patologa que se observa cada vez con mayor frecuencia en el mbito hospitalario. Su bsqueda debera implementarse en forma rutinaria en pacientes con sospecha clnica y factores de riesgo.
P577 - 27580 BUSQUEDA DE CARBAPENEMASAS EN ENTEROBACTERIAS: UN AO DE EXPERIENCIA GARBERVETSKY, LILIANA; ARISMENDI, PATRICIA; MIRANDA, GRACIELA
Laboratorio de Microbiologa. Policlnico Bancario La implementacin de la bsqueda de carbapenemasas en enterobacterias (EB) se hace necesaria debido al aumento de prevalencia en nuestro medio. Es importante su deteccin para controlar la diseminacin y prevenir fallas teraputicas. Objetivo: Conocer la incidencia de carbapenemasas en enterobacterias en nuestro hospital. Materiales y mtodos: Durante el periodo abril de 2009 a mayo de 2010 se estudiaron 241 cepas de EB productoras de beta lactamasa de espectro extendido (BLEE) y/o multiresistentes, provenientes de muestras de sangre, orinas y materiales varios. Las pruebas de sensibilidad se realizaron por difusin en agar segn normas CLSI y adems sistema automatizado VITEK, slo para una de ellas. A las cepas con halos de: imipenem (IMP) 20 mm, para Tribu Proteae IMP 20 mm + ertapenem 21 mm, o, IMP 20 mm + Meropenem 27 mm , se les realizaron pruebas de screening con discos de cido bornico (3-aminofenil- bornico) (BA) y de EDTA segn el esquema de deteccin de carbapenemasas sugerido por ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn. Tambin se les prob el mtodo modificado de Hodge recomendado por CLSI versin 2009. Resultados: De las 241 cepas estudiadas, 1 Escherichia coli, 1 Serratia marcescens (Sma), 4 Klebsiella pneumoniae y 3 Enterobacter cloacae presentaron disminucin de sensibilidad a todos o a algunos de los carbapenemes y prueba de sinergia con EDTA negativa. De ellas, 8 fueron portadoras de BLEE, 7 dieron la prueba de Hodge positiva y ninguna dio sinergia con BA. Slo la cepa de Sma present el siguiente perfil: BLEE negativa, prueba de Hodge positiva, sinergia con BA positiva y sinergia con EDTA negativa. Se confirm la sinergia con BA utilizando una placa de Mueller Hinton suplementada con 200 g de oxacilina para descartar resultados falsos positivos por presencia de AmpC. Los halos de inhibicin que present esta cepa para la cefalosporinas fueron: cefotaxima 15mm, ceftazidima 21mm y cefepime 21mm. El perfil de sensibilidad por sistema automatizado VITEK dio: CIM para cefotaxima 8 g /ml, para ceftazidima 16 g/ml y para cefepime 8 g/ml; BLEE negativa y fenotipo compatible con presencia de metalobetalactamasa o KPC. Las cepas fueron remitidas a centro de referencia para su confirmacin genotpica. Por los resultados obtenidos, la Sma aislada present un perfil compatible con la presencia de carbapenemasa tipo KPC. La sensibilidad disminuda a los carbapanemes en las 8 cepas restantes podra atribuirse a la presencia de BLEE (CTXM) en cooperacin con mecanismos de impermeabilidad y/o a niveles incrementados de beta lacta-
P576 - 27574 PREVALENCIA DE ENFERMEDAD ASOCIADA A Clostridium difficile (EACD) EN PACIENTES HOSPITALIZADOS EN UNA INSTITUCIN DE CRDOBA, ARGENTINA BOTTIGLIERI, MARINA; BERRUEZO, FABIANA; BRODA, EDUALDA; BERGOGLIO, MARINA
Clnica Universitaria Reina Fabiola Clostridium difficile es el principal patgeno productor de diarrea de origen infeccioso en pacientes hospitalizados y actualmente tambin se lo asocia a diarrea en pacientes ambulatorios que han recibido antibiticos. Produce una toxina A que es entero y citotoxica y B que es citotxica. La enfermedad asociada a Clostridium difficile (EACD) puede ocasionar manifestaciones clnicas variadas, desde una diarrea simple autolimitada hasta la colitis fulminante severa y el megacolon txico. El uso de antibiticos es una de las principales causas. Los ms frecuentes son los betalactmicos solos o con inhibidores (IBL) y clindamicina; infrecuentes son las fluorquinolonas, tetraciclinas, cloranfenicol. Otros factores incluyen quimioterapia, cirugas gastrointestinales, anticidos, opioides y alimentacin parenteral. La hospitalizacin y la edad avanzada son factores predisponentes. La incidencia de pacientes hospitalizados que adquieren esta infeccin vara entre un 0,1 a un 2%, de acuerdo a la institucin. El objetivo de este trabajo es conocer la prevalencia de EACD en pacientes hospitalizados en nuestra institucin durante el periodo enero 2007 a enero 2010 y la relacin entre los factores de riesgo asociados y los antibiticos involucrados. Se estudiaron 60 muestras de materia fecal de pacientes adultos internados en la Clnica Universitaria Privada Reina Fabiola. Se realiz recuento de leucocitos polimorfonucleares y deteccin de toxinas A y B de Clostridium difficile. Durante el perodo estudiado se internaron en la clnica 9351 pacientes adultos de ambos sexos. En 60 pacientes en los cuales se tuvo la sospecha clnica y
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masa cromosmica (AmpC). Se descart la presencia de carbapenemasas clase B en todas las cepas, debido a la ausencia de sinergismo con EDTA. Nuestra experiencia con el mtodo de Hodge fue que se observaron falsos positivos en concordancia con lo que refiere la literatura. El aumento de incidencia de EB portadoras de carbapenemasas hace necesaria la implementacin en la rutina del laboratorio de un mtodo eficiente para su deteccin.
P578 - 27615 PRIMER ESTUDIO EN MISIONES DE SEROTIPOS DE Streptococcus agalactiae EN GESTANTES COLONIZADAS. OVIEDO, P; QUIROGA, M; PEGELS, E; LACZESKI, M; VERGARA, M
Universidad Nacional de Misiones El estreptococo grupo B (EGB, Streptococcus agalactiae) parte de la microbiota normal humana intestinal y urogenital, adquiere relevancia en gestantes a trmino, por la posibilidad de transmisin vertical al recin nacido. La cpsula posibilita la distincin en serotipos (Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX) los que fueron investigados para esta presentacin. Diversas publicaciones dan cuenta de variaciones en la distribucin de los mismos, segn edad (factor ste asociado a la colonizacin), residencia de las gestantes y momento del estudio. Prevalecen Ia, Ib, II, III, V en pases europeos, EEUU y Mxico. El serotipo IV predomina en los Emiratos rabes y VI y VIII en Japn. Datos de diferentes zonas de nuestro pas (no includa Misiones) revelan un marcado predominio del serotipo Ia seguido por III y V en cepas recuperadas en procesos infecciosos del aparato genital. Objetivos: conocer los serotipos predominantes en la regin, con la finalidad de aportar herramientas locales al momento de disear estrategias vacunales. Establecer variaciones en la distribucin de los serotipos segn la edad y rea geogrfica de residencia de la gestante (capital e interior de la provincia) y momento del estudio. Material y mtodos: recuperamos 112 cepas de EGB en gestantes entre 35-37 semanas de embarazo (14 a 45 aos de edad), concurrentes a diferentes centros asistenciales de Misiones entre 2004 y 2010. Las cepas fueron serotipadas por el mtodo de aglutinacin Statens Serum Institut. Strep-B.Latex. Copenhagen S. Denmark, siguiendo instrucciones del fabricante. Resultados y Discusin: el serotipo ms frecuente es Ia (40%). Cuadro 1. Datos similares a los reportados por autores nacionales. Destacamos la presencia del serotipo IX (en nuestro pas no disponemos de datos). Detectamos variaciones en los serotipos segn edad (Cuadro 1) y segn residencia (mayor frecuencia en capital de Ia) y III en el interior. No detectamos serotipos IV, VI, VII y VIII.
< 20 aos % Ia Ib II III V IX NT (no tipables) 29 6 6 12 7 3 2 > 20 aos % 11 3 4 9 5 1 2 Total % 40 9 10 21 12 4 4
Introduccin: Streptococcus equi subsp. zooepidemicus es un estreptococo beta hemoltico perteneciente al Grupo C de Lancefield. Forma parte de la flora normal de piel y mucosa respiratoria de los caballos y no se considera flora humana normal. Es el agente etiolgico ms comn de infecciones respiratorias y heridas en potrillos produciendo descarga nasal purulenta y abscesos submandibulares. Los estreptococos beta hemolticos del Grupo C son poco frecuentes en infecciones humanas severas y se asocian a enfermedades de base tales como diabetes, enfermedad cardiopulmonar, insuficiencia cardaca, procesos oncolgicos, falla heptica o renal, enfermedades dermatolgicas crnicas y uso de drogas. Se han descripto casos de infeccin en humanos relacionados al consumo de leche y derivados sin pasteurizar y al contacto estrecho con caballos indicando a dicha infeccin como una zoonosis. Estas infecciones incluyen septicemia, meningitis, neumona, artritis sptica y glomerulonefritis. Caso clnico: paciente masculino de 68 aos con antecedentes de etilismo y viajes habituales al campo (ltimos 10 das previos a los sntomas) consulta por sndrome febril, polialtralgias que se iniciaron en rodilla derecha, amaurosis derecha de aparicin sbita (uvetis) y cervicalgia. Al ingreso se constata edema de rodilla derecha y fiebre sin meningismo. Se toman muestras de hemocultivos, urocultivo y lquido cefalorraqudeo (LCR). Evoluciona con shock sptico requiriendo vasopresores, intubacin y ventilacin mecnica. En menos de 12 horas se positivizan ambos hemocultivos, observndose cocos positivos en cadena, por lo que se inicia tratamiento con vancomicina y amikacina. A las 24 horas posteriores al ingreso se deriva a UTI donde se realiza puncin y evacuacin quirrgica de la rodilla derecha (con cocos Gram positivos en el directo). A las 48 horas se asla del LCR, lquido articular y hemocultivos un estreptococo beta hemoltico, posteriormente identificado como Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Evoluciona con shock refractario y obita. Materiales y mtodos: el LCR se sembr en agar sangre ovina 5%, agar chocolate, caldo tioglicolato en aerobiosis y se le realiz tincin de Gram. El liquido articular fue sembrado en agar sangre ovina 5%, agar chocolate, caldo tioglicolato en aerobiosis y agar sangre lacada con vitamina K en anaerobiosis. Los hemocultivos fueron incubados en equipo automatizado BacT/Alert (Biomerieux). El microorganismo fue tipificado por pruebas convencionales: bacitracina, PYR, LAP, seroaglutinacin por ltex, Voges Proskauer, sorbitol, trehalosa, almidn, API 20 Strep (Biomerieux) y Vitek 2 (Biomerieux). Se describe una infeccin por Streptococcus equi subsp. zooepidemicus en un paciente con un fuerte contexto epidemiolgico para adquirirla. Se asume que el antecedente de artritis de rodilla correspondera al foco primario y los factores predisponentes del paciente (alcoholismo) seran algunos de los responsables de la infeccin invasiva por este tipo de microorganismos.
P580 - 27654 CAMPYLOBACTERIOSIS EN PEDIATRA. LANDOLT, NOELIA; BARONI, MA ROSA; OCHOTECO, MA CRISTINA; ZURBRIGGEN, MA LAURA; SPADA, ROMINA; VIRGOLINI, MA STELLA
Hospital de Nios Orlando Alassia Introduccin: el gnero Campylobacter se asla frecuentemente en la materia fecal de los pacientes que presentan diarrea aguda, especialmente las especies termfilas C. jejuni y C. coli. Es una zoonosis de distribucin mundial cuyo reservorio son los animales de granja. Aunque generalmente slo produce enteritis, la infeccin tambin puede derivar en complicaciones como el Sndrome de Guilln Barr. Objetivo: describir epidemiolgicamente las infecciones ocasionadas por Campylobacter spp, analizando grupo etario y condicin internado/ambulatorio de los pacientes, recuento de polimorfonucleares en materia fecal y sensibilidad a los antibiticos. Materiales y mtodos: se estudiaron 967 coprocultivos entre enero de 2009 y mayo de 2010. Las muestras fueron obtenidas por evacuacin espontnea, cultivadas en el medio comercial Campylosel e incubadas en microaerofilia (nitrgeno 85%, hidrgeno 10% y oxgeno 5%) 48hs a 42 C. A las colonias sospechosas se les realiz coloracin con fucsina y las siguientes pruebas bioqumicas: oxidasa e hidrlisis del hipurato.
El desarrollo de vacunas incluyendo serotipos Ia, Ib, II, III y V sera de utilidad para la inmunizacin regional. La edad de la gestante (menor de 20 aos) se refiere como factor de riesgo para la colonizacin. Da cuenta de ello los serotipos acumulados en dicho rango y la ausencia del serotipo V (entre los asociados a mayor virulencia) en mayores de 30 aos. La ausencia de serotipos IV, VI, VII y VIII se asocia a la aparicin de los mismos llamados serotipos orientales que prevalecen en medio oriente.
P579 - 27635 SHOCK SPTICO EN UN PACIENTE CON ARTRITIS Y MENINGITIS CAUSADA POR Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. AMALFA, FLAVIA(1); ERSCHEN, AGUSTINA(1); DEGIUSEPPE, JUAN(1); SILBERSZAC, GEORGINA(2); VERDE, GABRIEL(2); CARRION, NATALIA(3); SOLOAGA, ROLANDO(3); BALLESTER, DANIELA(1)
(1) Hospital P. Piero. Microbiologa. Laboratorio Central. (2)Hospital P. Piero. Unidad de Terapia Intensiva. (3) Hospital Naval.
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Las pruebas de sensibilidad se realizaron segn normas del CLSI. Resultados: en el 18% (n= 176) del total de coprocultivos estudiados, se aisl algn enteropatgeno responsable de diarrea. Los patgenos aislados fueron: Shigella B (49%), Shigella D (19%), Salmonella OSA (4%), Salmonella OSB (3%), Campylobacter spp (21%), Escherichia coli enterohemorrgica (ECEH) 0:157 (2%) y otras ECEH (0,5%). En las muestras positivas para el gnero Campylobacter, se hall la especie C. jejuni en 94,6% y C. coli en 5,4% de los casos. El 73% de esas muestras presentaron un recuento de polimorfonucleares positivo, el 17% un recuento negativo y en el 10% restante, se encontraron hemates acompaando a los polimorfonucleares. La frecuencia de estos aislamientos fue mayor en nios de 2 a 4 aos (72%), mientras que fue 14% en nios menores de 2 aos y el mismo porcentaje en mayores de 5 aos. La resistencia antimicrobiana observada fue: 59% a ciprofloxacina, 19% a tetraciclina y 3% para eritromicina, ampicilina y trimetoprima - sulfametoxazol. Adems, un 5% de los aislamientos present sensibilidad intermedia a ciprofloxacina y un 3% a tetraciclina. Debido a que el gnero Campylobacter es el segundo enteropatgeno hallado con mayor frecuencia en nuestro hospital, siempre se debe investigar este agente etiolgico en los pacientes que presentan episodios de diarrea. La realizacin del coprocultivo cobra importancia si se tiene en cuenta que el tratamiento de eleccin es diferente al utilizado para el resto de los entopatgenos.
P582 - 27661 BRUCELOSIS EN NEUQUN: HALLAZGO DE LABORATORIO. GONZALEZ, G; SAUER, H; AMARILLA, A; DI RUSSO, V; BULGHERONI, MF
(1) Laboratorio de Microbiologa. Hospital Dr. Horacio Heller. Neuqun La brucelosis en una zoonosis, que afecta al hombre y se adquiere principalmente por va digestiva (ingestin de productos lcteos contaminados), area (inhalacin de partculas presentes en aerosoles) y drmica (contacto directo con animales infectados). La enfermedad se caracteriza por una fase bacteriemia aguda, seguida por una etapa crnica que puede afectar a muchos tejidos. Hay diez especies conocidas de Brucella, pero solo Brucella abortus, Brucella suis, Brucella canis y Brucella melitensis son patgenas para el hombre, siendo esta ltima la especie ms virulenta. Los microorganismos del gnero Brucella son coco-bacilos gram-negativos, pequeos, inmviles, aerobios y por lo general necesitan gares ms enriquecidos y condiciones especficas de incubacin. Caso: paciente de 40 aos trabajador golondrina, que ingresa al Hospital Dr Horacio Heller de la ciudad de Neuqun, con cuadro febril y diagnstico de diarrea invasiva de una semana de evolucin. Se procede a su internacin, posterior estudio microbiolgico para el cual se toman muestras de sangre y materia fecal, y se inicia tratamiento antibitico con Ciprofloxacina, sin que exista la sospecha clnica de brucelosis. Las muestras de sangre fueron inoculadas en frascos para hemocultivos BACTEC PLUS Aerobic/F e incubados en el instrumento BACTEC 9120 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems, Sparks, Md) a 35 C. Dicho instrumento examina el crecimiento de organismos mediante lecturas cada 10 minutos de la fluorescencia, inducida por el CO2 (medida de metabolismo bacteriano) emitida por el sensor de la base del frasco. La muestra de materia fecal fue sembrada en los medios habituales que componen el protocolo para coprocultivo, sin recuperarse ninguno de los enteropatgenos buscados (Shigella spp, Salmonella spp, Escherichia coli O157, Campylobacter spp, Yersinia spp ni Aeromonas spp). Al cuarto da de incubacin, los frascos de hemocultivos fueron detectados como positivos e inmediatamente fueron subcultivados en placas de agar chocolate e incubadas a 35C en jarra con vela. Luego de 48 hs de incubacin desarrollaron colonias pequeas, marrones a las cuales se les realiz las siguientes pruebas bioqumicas: coloracin de Gram, oxidasa, O/ F, urea de Christensen, nitrato, SIM. El resultado coincidi presuntivamente con Brucella spp. La cepa aislada fue derivada al Laboratorio Nacional de Referencia INEI-ANLIS Dr.C.G.Malbran donde fue confirmada como Brucella melitensis Biovar 1. El caso demuestra y resalta la importancia del laboratorio de Microbiologa desde, al menos, dos aspectos: 1) dada la baja incidencia de la enfermedad en nuestro medio, no existi la sospecha clnica de brucelosis lo cual condujo a un diagnstico y tratamiento incorrecto y 2) la importancia de recuperar este tipo de microorganismos utilizando herramientas automatizadas y poder tomar las precauciones de bioseguridad adecuadas debido a la peligrosidad del manejo de las cepas aisladas.
P581 - 27659 DETECCIN DE INTEGRONES COMPLEJOS CLASE 1 EN CEPAS DE ENTEROBACTERIAS PRODUCTORAS DE BETA- LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO. JURE, A(1); PRESTI, C(1); AULET, O(1); CUDMANI, N(2); GRELLET, L(3); LOPEZ, C(4); MUSA, H(4); QUIROGA, P(5); CENTRON, D(5); CASTILLO, M(1)
(1) Universidad Nacional de Tucumn, (2) Hospital Aellaneda, (3) Hospital Con. (4) CMM, (5) Facultad de Medicina - UBA Introduccin: las infecciones nosocomiales causadas por enterobacterias productoras de -lactamasas de espectro extendido (BLEE) son un problema creciente y complejo en todo el mundo. Est comprobado que en bacilos gram-negativos algunos genes de resistencia, movilizados por plsmidos y transposones, se ubican en integrones, estructuras genticas que pueden almacenar y diseminar genes de resistencia, entre especies. Estos elementos poseen la informacin necesaria para expresar una protena (integrasa) implicada en la captura y escisin de genes que se asocian a multiresistencia. Los integrones complejos clase 1, frecuentes en aislamientos de origen clnico, son integrones de clase 1 asociados al gen orf513, que forma parte de una zona denominada ISCR1, que es una recombinasa capaz de movilizar secuencias de ADN. El objetivo de este trabajo fue establecer la frecuencia de cepas portadoras de BLEEs tipo CTX-M-2, PER -2 y SHV y adems analizar la relacin entre produccin de BLEE e integrones complejos de clase 1 en enterobacterias aisladas de centros asistenciales de Tucumn. Materiales y Mtodos: se seleccionaron 108 enterobacterias caracterizadas fenotpicamete como productoras de BLEE, aisladas de muestras clnicas provenientes de 3 centros asistenciales de Tucumn entre marzo a setiembre de 2009. Por PCR se detectaron integrones de clase 1 utilizando iniciadores para el gen de la integrasa tipo 1. Para investigar la presencia de integrones complejos, se realiz una PCR para el gen orf513, obteniendo un amplicon de 500 pares de bases, que se envi a secuenciar a INTA Castelar. A todas las cepas tambin se les realiz la caracterizacin molecular de BLEEs tipo CTX-M-2, PER -2 y SHV. Resultados: de las 108 cepas ensayadas el 58% (n=63) presentaron integrones de clase 1, de ellas el 70% (n=44) asociadas a integron complejo. Por biologa molecular las BLEEs asociadas a integron complejo, fueron caracterizadas como tipo CTX-M2 (77%), SHV (4,5%), PER-2 (2,27%) y asociacin de SHV y PER-2 (9%). Este estudio multicntrico refleja la alta incidencia de BLEE asociada a integrones complejos clase 1 en aislamientos clnicos de enterobacterias en nuestra provincia , datos relevantes para ser tomados en cuenta y desarrollar medidas de control que permitan disminuir la diseminacin de resistencia.
P583 - 27663 ENFERMEDAD INVASIVA POR Haemophilus influenzae. VESCINA, CECILIA(1); ECHEVERRIA, MONICA (1); GATTI, BLANCA MARIA(1); GONZALEZ AYALA, SILVIA ELENA(2)
(1) Sala de Microbiologia, Laboratorio Central, (2) Servicio de Enfermedades Infecciosas, Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovica, La Plata Introduccin: la enfermedad invasiva por Haemophilus influenzae predomina en los menores de 2 aos. La causada por el serotipo b fue un problema de salud hasta el establecimiento de la estrategia de vacunacin universal desde el 01 febrero 1998. La presentacin de la enfermedad causada por otros serotipos ha sido observada desde la primera descripcin en este Hospital en 1994. Objetivo: describir las variaciones en la frecuencia de la enfermedad invasiva causadas por los diferentes serotipos de H. influenzae. Material y mtodos: estudio longitudinal prospectivo, observacional, directo de 216 nios internados con diagnstico
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confirmado de enfermedad invasiva por H. influenzae aislado en muestras obtenidas de sitios normalmente estriles, en el perodo 1996 2009 en el Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovica. La identificacin del microorganismo se realiz en la Sala de Microbiologia del Laboratorio Central del establecimiento. Se utilizaron tcnicas estandarizadas para el cultivo, aislamiento y la identificacin bioqumica. La identificacin serolgica se realiz con sueros capsulares monoespecficos (Difco Laboratorios MR, Detroit, Michigan, Estados Unidos). Resultados: La frecuencia de aislamientos segn muestra fue: hemocultivos 52,8% (n=114), lquido cefalorraqudeo 40,3% (n=87), lquido pleural 5,1% (n=11), lquido articular 1,4% (n=3) y lquido peritoneal 0,5% (n=1). La distribucin por perodos se presenta en la Tabla. Distribucin de los serotipos de los aislamientos de H. influenzae causales de enfermedad invasiva segn perodo, 1996-2009, Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovico. El rango/ao fue 0 16 para H. influenzae no b. Abreviatura: nt (no tipificable)
Perodo Total 1996-1997 pre vac 1998-2001 2002-2005 2005-2009 Total 216 78 53 47 38 b 120 77 30 9 4 no b 96 1 23 38 34 nt 77 16 31 30 a 6 3 3 c 1 1 d 2 1 1 e 4 1 3 f 6 2 3 1
lcera activa e inflamacin crnica inespecfica moderada a severa. En el cultivo de las 5 lesiones desarroll un coco gram positivo hipermucoide identificado como Streptococcus pneumoniae, hemocultivo sin desarrollo. El aislamiento present CIM (E-test) a penicilina de 0,006 g/ml y a ceftriaxona menor de 0.006 g/ ml, y por difusin en agar resistencia a tetraciclina, y sensibilidad a rifampicina, tetraciclina, clindamicina, eritromicina, ofloxacina, TMS, vancomicina y cido nalidxico. Luego de 5 das es dada de alta, con leve mejora de las lesiones con tratamiento con cloramfenicol. A las 3 semanas del alta consulta un familiar de la paciente con la misma lesin pero de 1 semana de evolucin, tambin secundaria a la picadura de un mosquito y que posteriormente se diagnostica como leishmaniasis cutnea. Se indica tratamiento con Glucantime en ambos casos con remisin total de las lceras. Streptococcus pneumoniae debe ser incluido en la lista de organismos causantes de infeccin de piel y tejidos blandos, tanto en la comunidad como en el ambiente hospitalario.
P585 - 27665 VARIACIN EN LA SUSCEPTIBILIDAD FRENTE A LAS DROGAS RECOMENDADAS PARA PROFILAXIS INTRAPARTO EN Streptococcus agalactiae RECUPERADOS DE MUJERES GESTANTES COLONIZADAS DE LA PROVINCIA DE MISIONES. QUIROGA, M; PEGELS, E; LEZCANO, MT; OVIEDO, P; LACZESKI, M; VERGARA, M
Univeridad Nacional de Misiones La colonizacin materna por Streptococcus agalactiae (SGB) es considerada el mayor factor de riesgo para la adquisicin de infecciones invasivas neonatales por SGB. Desde el ao 2002, el CDC ha recomendado la bsqueda de SGB utilizando el mtodo de tamizaje vaginal-rectal en toda mujer con 35-37 semanas de gestacin para as prevenir la enfermedad temprana con la aplicacin de profilaxis intraparto. La penicilina G (PEN), eventualmente ampicilina (AMN), es la droga de eleccin una vez establecido el diagnstico. Mientras que, clindamicina (CLI) y eritromicina (ERY) se recomiendan, como drogas de segunda lnea, para mujeres alrgicas a la PEN. SGB contina siendo sensible a PEN, aunque algunos escasos trabajos informan una disminucin de esta susceptibilidad (ligero aumento de la CIM). Por otro lado, desde 1996, mundialmente se ha informado de un marcado aumento de la resistencia de SGB a macrlidos y lincosaminas. Este estudio fue realizado con el objetivo de investigar la existencia o no de variaciones en la susceptibilidad frente a las drogas de eleccin para quimioprofilaxis en cepas de SGB recuperadas de mujeres gestantes colonizadas de la Provincia de Misiones comparando 2 perodos de estudio. El perfil de susceptibilidad frente a PEN, AMN, CLI y ERY fue evaluado frente a 36 aislamientos de SGB recuperados en el perodo 2004-2005 y 36 aislamientos recuperados en el perodo 2008-2009. La CIM a PEN, AMP y CLI fue determinada utilizando paneles para microdilucin (MicroScan, Dade Behring Inc, USA), mientras que la de ERY fue determinada utilizando tiras de E-test (Oxoid). Los resultados mostraron que los aislamientos de SGB de ambos perodos continuaban siendo totalmente sensibles a PEN (CIM90 (mg/ml): 0,03, Rango: 0,03-0,12) y a AMN (CIM ((g/ml): 0,25; 100% de las cepas). Por otro lado, se observ aumento de la resistencia a CLI y ERY durante el perodo 2008-2009 respecto al perodo 2004-2005 (Tabla).
Perodo 2004-2005(n=36 cepas) %S CLI ERY 100 97,2 CIM 0,25 0,25 %R 0 2,8 Perodo 2008-2009(n=36 cepas) CIM 0,25 0,25 %R 13,9 16,7 CIM90 2 2 Rango 1-2 1,5-2
Se ha producido una rpida y drstica reduccin en la ocurrencia de la enfermedad invasiva por H. influenzae b a partir del establecimiento de la estrategia de vacunacin universal as como tambin la emergencia de otros serotipos (80% no tipificables), en nuestro medio.
P584 - 27664 Streptococcus pneumoniae EN INFECCIONES DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS. REPORTE DE DOS CASOS EN PACIENTES PEDITRICOS. CORTES, PAULO (1); CONTRERAS FUNES, V(2); HUERTA, V(2); CHIAPELLO, L S(3)
(1) Hospital Peditrico, (2) Hospital Peditrico del Nio Jess, (3) Centro de Investigaciones en Bioqumica Clnica e Inmunologa (CIBICI) - CONICET Streptococcus pneumoniae puede encontrarse como colonizante de piel y de tejidos blandos o tambin como patgeno. Su rol como patgeno en neumona, otitis media, bacteriemia, y meningitis es indiscutido, sin embargo su aislamiento en piel y tejidos blandos es un hallazgo inusual con una interpretacin clnica dificultosa ya que puede variar desde una simple colonizacin en huspedes inmunocompetentes, a una infeccin severa en pacientes con diferentes condiciones de base. En el presente reporte se comunican dos casos de infecciones de piel y partes blandas producidas por S. pneumoniae. Caso 1: lactante de sexo femenino de 8 meses de edad, febril, es admitida con diagnstico clnico y ecogrfico de absceso en antebrazo izquierdo. El cuadro presentaba una evolucin de 1 semana y se encontraba bajo tratamiento con cefalexina durante 6 das sin mejora aparente. Se toma muestra del absceso por puncin aspiracin. El examen microscpico del material teido con coloracin de Gram evidenci gran cantidad de cocos gram positivos en diplos y cadenas. En el cultivo desarroll un coco gram positivo alfa hemoltico identificado por pruebas convencionales como Streptococcus pneumoniae, mientras que el hemocultivo no present desarrollo. Este aislamiento present una CIM (E-test) a penicilina de 1,5 g/ml y a ceftriaxona de 0.006 g/ml,y por difusin en agar resistencia a trimetroprima sulfametoxazol (TMS) y cido nalidxico, y sensibilidad a rifampicina, tetraciclina, clindamicina, eritromicina, ofloxacina y vancomicina. Se le rota el tratamiento antibitico a ceftriaxona, presentando buena evolucin clnica, dndole de alta a los 4 das sin secuelas. Caso 2: paciente de sexo femenino de 12 aos de edad proveniente de Santiago del Estero, requiere consulta con el servicio de Dermatologa, por la presencia de 5 grandes lceras asimtricas de dos meses de evolucin, en miembros inferiores y superiores, secundarias a la picadura de mosquito. Se decide la internacin y toma de muestra por biopsia para anatoma patolgica y cultivo, como as tambin hemocultivo. Luego de ello se le indica tratamiento por va oral con rifampicina y TMS. El informe anatomopatolgico refiere
CIM % S 2 86,1 83,3
El aumento y diseminacin de la resistencia a macrlidos y lincosaminas en cepas de SGB tiene profundas implicancias clnicas, tanto para la profilaxis como para el tratamiento en pacientes alrgicas a la PEN. Nuestros resultados muestran un notorio aumento de la resistencia de SGB frente a CLI y ERY, por lo que se hace necesaria la vigilancia y el monitoreo continuo de dicha resistencia ya que, eventualmente, de continuar en aumento sera necesario la utilizacin de antibiticos alternativos como drogas de segunda lnea.
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P586 - 27672 BACTERIEMIAS EN PACIENTES EN HEMODILISIS CRNICA. ETIOLOGA Y PATRONES DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA. ZARATE, MARIELA SOLEDAD; GARCIA, DOLORES; AGUIAR, ANA; DIAZ, CARLOS; SMAYEVSKY, JORGELINA
Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas (CEMIC) Las bacteriemias constituyen la segunda causa de muerte en pacientes en hemodilisis crnica. El conocimiento de la epidemiologa y los patrones de sensibilidad es til para establecer terapias empricas apropiadas. El objetivo de este estudio fue describir la distribucin y los perfiles de sensibilidad antimicrobiana de microorganismos aislados de bacteriemias de pacientes en hemodilisis crnica. Se analizaron 176 episodios de bacteriemias provenientes de pacientes en hemodilisis crnica durante el periodo 01/01/2006- 01/06/2010. Las muestras fueron recolectadas en frascos de hemocultivos Bact/Alert (Biomerieux). La identificacin bioqumica de los aislamientos fue realizada segn Murray y cols. y/o sistema VITEK (Biomerieux) y/o por sistema API NE (Biomerieux). Los perfiles de sensibilidad antimicrobiana se realizaron por el mtodo de difusin con discos o por sistema VITEK segn normas del CLSI. Se ensayaron frente a bacterias gram positivas: ampicilina (AMP), oxacilina (OXA), cefoxitina (FOX), ciprofloxacina (CIP), trimetoprima-sulfametoxazol (TMS), vancomicina (VAN) y teicoplanina (TEI) y frente a gram negativas: cefalosporinas de 3 (C3G) y 4 (C4G) generacin, CIP, TMS, gentamicina (GEN), amikacina (AKN), piperacilina-tazobactam (PTZ), imipenem (IMI) y meropenem (MER). Se observaron 132 episodios de bacteriemias por cocos gram-positivos: 71 correspondieron a estafilococos coagulasa negativos (ECN) (60 Staphylococcus epidermidis, 4 S. simulans, 3 S. warneri, 1 S. lugdunensis, 3 otros); 42 S. aureus; 11 Enterococcus faecalis y 8 por otros. Dentro de los bacilos gram-negativos se observaron 41 episodios: 22 correspondieron a la familia Entetobacteriaceae (9 Escherichia coli, 7 Klebsiella spp, 4 Enterobacter cloacae, 1 Proteus mirabilis y 1 Citrobacter grupo freundii) y 13 a bacilos gram-negativos no fermentadores (4 Pseudomonas aeruginosa, 3 P. putida, 2 P. fluorescens, 2 Stenotrophomonas maltophilia, 1 complejo Burkholderia cepacia y 1 Acinetobacter spp.). Dentro de los grmenes poco frecuentes se observaron 6 casos de bacteriemias, Achromobacter xylosoxidans (1), Aeromonas hydrophila (1), Vibrio cholerae (1), Capnocytophaga spp (1), Haemophilus influenzae (1) y Shewanella algae (1). Se observaron 3 bacteriemias por bacilos gram-positivos (2 Corynebacterium striatum y 1 Brevibacterium spp.). En ECN y S aureus el 81% y 15%, respectivamente fueron OXA resistentes. El 100% de los E. faecalis aislados fueron sensibles a AMP, VAN y TEI. Dentro del grupo de las enterobacterias la sensibilidad a C3G, CIP, TMS, GEN, AKN, TAZ, IMI y MER fue: 86, 81, 86, 77, 77, 86, 100 y 100%, respectivamente. Todos los aislados de P aeruginosa fueron sensibles a C3G, C4G, CIP, IMI y MER. Este trabajo nos permiti obtener datos de distribucin de microorganismos y sus patrones de sensibilidad antimicrobiana provenientes de hemocultivos de pacientes en centros de hemodilisis. Hemos documentado, en concordancia a lo descrito en la literatura internacional, como microorganismo aislado en primer lugar al ECN seguido por S aureus. El aislamiento de BNNF es mayor a lo reportado por otros autores y no hemos observado presencia de brotes por dichos microorganismos.
infeccin ocurre fundamentalmente durante la infancia, siendo su prevalencia mayor en pases en vas de desarrollo. Sin embargo, los factores ambientales, sanitarios y socioeconmicos de diferentes regiones dentro de un mismo pas estn estrechamente relacionados con la variabilidad de la prevalencia de H. pylori. Objetivos: debido a los cambios socioeconmicos ocurridos en nuestro pas durante los ltimos aos, nos propusimos evaluar la tendencia epidemiolgica de la infeccin por H. pylori en nios con sintomatologa digestiva de la Provincia de Buenos Aires durante el perodo 2002-2009 y su relacin con diferentes variables epidemiolgicas. Poblacin y Mtodos: el diagnstico de H. pylori se realiz mediante el 13C-Test del Aire Espirado (13C-UBT) en 1030 nios entre 3 y 16 aos que acudieron a la consulta gastroenterolgica. Adicionalmente se realiz una encuesta epidemiolgica a los padres de los nios. El anlisis estadstico fue realizado mediante los tests de Chi cuadrado, Mann Whitney, Student y regresin logstica. Resultados: en el primer trienio 2002-2004 la prevalencia de la infeccin por H. pylori fue de 41.2%; para el perodo 2005-2006, 23.9% y para el ltimo perodo 2007-2009, 26.0%. Mediante regresin logstica ajustada por perodo resultaron asociadas a la infeccin las variables tipo de bao, Odds Ratio (OR)=1.75 (95% CI, 1.13-2.69), material de la vivienda, OR=1.68 (95% CI, 1.07-2.62), material del piso, OR=2.04 (95% CI, 1.52-2.73), lugar de residencia, OR=0.59 (95% CI, 0.38-0.91), nmero de hermanos, OR=1.46 (95% CI, 1.31-1.63) y etnia, OR=1.83 (95% CI, 1.15-2.92). La disminucin de la prevalencia de H. pylori en el tiempo coincide con la reduccin del porcentaje de hogares bajo lnea de pobreza en la Provincia de Buenos Aires durante el perodo evaluado. Nuestros resultados muestran una disminucin significativa de la prevalencia de H. pylori entre el primer perodo 2002-2004 y los subsiguientes (2005-2006 y 2007-2009) siguiendo la tendencia epidemiolgica descripta a nivel mundial para esta infeccin.
P588 - 27691 Achromobacter xylosoxidans: PRIMER AISLAMIENTO PRODUCTOR DE BLEE TIPO GES EN ARGENTINA. YOYA, N(1); OTAEGUI, L(1); PASTERAN, F(2); RAPOPORT, M(2); CORSO, A(2); LASCURAIN, M(1); SEGOVIA, J(1); MOULINS, O(1)
(1) Laboratorio Microbiologa Hospital Masvernat, Concordia, Entre Ros. (2) Servicio Antimicrobianos INEI-ANLIS Carlos G Malbrn. Introduccin: la bacteriemia por Achromobacter xylosoxidans (Ax) es rara, y ms an, cuando el mismo es productor de beta lactamasa de espectro extendido (BLEE). La mayora de los pacientes que desarrollan bacteriemia por Ax presentan causas predisponentes. Los casos reportados definen el perfil clnico de riesgo: ancianos, neonatos, inmunocomprometidos, etc, que adquieren la infeccin durante su hospitalizacin (70%), aunque hay casos de infecciones adquiridas en la comunidad. Ax es un bacilo gram-negativo aerbico, mvil, no fermentador y oxidasa positiva. Se encuentra ampliamente distribuido. Los sitios hmedos son los predilectos: respiradores y nebulizadores; desinfectantes, cosmticos, soluciones acuosas y antibiticas (en frasco multiuso), jabones, agua corriente y destilada, fludos de dilisis, piletas de natacin. Puede sobrevivir tambin en equipos secos: barandas, mesas de luz, termmetros. Objetivo: presentacin de un caso clnico de bacteriemia por Ax multirresistente productor de BLEE aislado de dos hemocultivos en paciente de 8 meses de edad. Materiales y Mtodos: paciente sexo masculino con diagnstico de broncodisplasia pulmonar. Recin nacido pretrmino (1200gr) con enfermedad de membrana hialina, 3 das en asistencia respiratoria mecnica, tratamientos antibiticos mltiples. Requiri 5 meses de internacin en neonatologa de un hospital bonaerense. Por su patologa de base permanece con corticoterapia y medidas respiratorias. La cepa fue identificada por el sistema API 20NE y las pruebas de sensibilidad se llevaron a cabo mediante el mtodo de difusin en placa, interpretndose segn las recomendaciones del CLSI para enterobacterias. Resultado: se observ elevada resistencia a ceftazidima (CAZ), aminoglucsidos, piperacilina y ciprofloxacina y susceptibilidad a piperacilina / tazobactama, imipenem (IMP), meropenem y ertapenem. Debido al mecanismo observado (inhibicin entre CAZ e IMP) se compa-
P587 - 27681 TENDENCIA EPIDEMIOLGICA DE LA INFECCIN POR Helicobacter pylori EN NIOS DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES. PERODO 2002-2009. JANJETIC, MARIANA(1); GOLDMAN, CINTHIA G(1); CUETO RUA, EDUARDO(2); BALCARCE, NORMA(2); BARRADO, ANDRES(1); ZUBILLAGA, MARCELA(1); BOCCIO, JOSE(1)
(1) Ctedra de Fsica, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires, Argentina; (2) Hospital de Nios Sor Mara Ludovica, La Plata, Argentina. Introduccin: Helicobacter pylori es el principal factor etiolgico en el desarrollo de gastritis y lcera pptica. La adquisicin de la
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raron los halos entre CAZ y ceftazidima/clavulnico (CAC) (6 y 24 mm respectivamente), indicando claramente la produccin de BLEE, que fue caracterizada por PCR como blaGES. La terapia antibitica se realiz con IMP durante 14 das. El paciente evolucion favorablemente y fue dado de alta. El origen de nuestra cepa an no est claro. Consideramos que es multifactorial acorde a lo enumerado en la descripcin del caso. La adquisicin nosoco-mial queda excluida pues los aislamientos corresponden al ingreso del paciente. Conclusiones: la bacteriemia por Ax en neonatos est asociada a mortalidad del 80%. Es importante la rpida identificacin para instaurar el tratamiento antibitico adecuado evaluando no solo la resistencia a cefalosporinas sino tambin a carbapenemes (por produccin de metalobetalactamasas y disociacin imipenem/meropenem). Este es el primer hallazgo de blaGES en Ax. La inhibicin CAZ-IMP y/o la comparacin entre CAZ y CAC resultaron herramientas vlidas para la deteccin de BLEE en Ax.
P589 - 27692 SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA EN AISLADOS DE Salmonella spp. Y Shigella spp. EN UN CENTRO DE BUENOS AIRES. ESTUDIO DE 5 AOS. RAZETTO, MARIA GEORGINA; ALTAMIRANDA, STELLA; PRIORE, GRACIELA; MAGARIOS, FRANCISCO; SEMINO, ISABEL; ZARATE, MARIELA SOLEDAD
Sanatorio Gemes Salmonella spp. y Shigella spp. son los principales agentes causales de gastroenteritis en todo el mundo. En muchos pases las fallas de tratamiento por la adquisicin de -lactamasas de espectro extendido o por la resistencia a fluorquinolonas ha sido documentada y es preocupante dado la morbimortalidad que conlleva este tipo de infecciones. El objetivo de este estudio fue describir la distribucin de especies y los perfiles de susceptibilidad antimicrobiana en Samonella spp. y Shigella spp. recuperados de materia fecal. Se analizaron 129 aislados de Salmonella spp. y Shigella spp. durante el perodo 01/01/2005 al 01/05/2010. La identificacin bioqumica de los aislamientos fue realizada segn Murray y cols. y/o por sistema API E (Biomerieux). La distribucin de especies se determin por aglutinacin con antisueros especficos segn recomendaciones del fabricante (BIO-RAD). Los estudios de susceptibilidad frente a ampicilina (AMP), ciprofloxacina (CIP), cefotaxima (CTX), trimetoprima-sulfametoxazol (TMS) y nitrofurantona (NIT) se realizaron por el mtodo de difusin con discos segn normas de CLSI. Se observaron 129 aislados de los cuales 82 correspondieron a Shigella spp. (61 Shigella flexneri, 17 Shigella sonnei y 4 Shigellas spp.) y 47 Salmonella Entrica. Los perfiles de susceptibilidad en Salmonella Entrica frente a AMP, CIP, TMS, NIT y CTX fueron: 77%, 91%, 98%, 85% y 100%. En Shigella spp. la susceptibilidad frente a AMP fue del 28%, siendo mayor en Shigella sonnei (57%) que en Shigella frexneri (38%). La susceptibilidad frente a TMS ocup el 56%, siendo mayor en Shigella flexneri (61%) que en Shigella sonnei (41%). La susceptibilidad frente a CIP, NIT y CTX ocup el 98%, 85%y 100%, respectivamente. Este trabajo nos permiti obtener datos de susceptibilidad de Shigella spp. y Salmonella spp. aisladas en nuestro centro. Hemos documentado que en nuestro medio la susceptibilidad de Salmonella spp. y Shigella spp. frente a cefalosporinas de tercera generacin y ciprofloxacina es alta a diferencia de lo reportado por otros pases.
ternal de SGB a travs de mtodos culturales. Objetivos: Los objetivos del presente trabajo fueron evaluar: la prevalencia de colonizacin por SGB en nuestro centro, la sensibilidad de un medio cromognico para deteccin SGB comparando los resultados obtenidos frente al mtodo convencional modificado y validado por Lanza A y col. (SADEBAC 2006) y los tiempos de deteccin utilizando ambas metodologas. Materiales y Mtodos: entre enero de 2008 a junio del 2010 se estudiaron 1700 mujeres embarazadas de 35-37 semanas de gestacin. Se tomaron muestras de introito vaginal y muestra rectal, ambas se sembraron en un tubo de caldo Todd Hewitt adicionado de 10 mg/L de colistina y 15 mg/L de cido nalidxico (THS). Los tubos de THS se incubaron 24-48 hs a 35C y se subcultivaron con ansa calibrada a una placa de agar CHROM B (Biomerieux) y a una placa de agar sangre ovina al 5% (ASO). Partiendo de la siembra masiva del ASO se hizo una estra recta que se enfrent en forma perpendicular con una estra de Staphylococcus aureus ATCC 25923. Las placas fueron incubadas 24-48 h a 35 C en atmsfera de CO2 al 5%. Se consider sugestivo de SGB: la presencia de colonias de color rosa en el medio CHROM B y la presencia de hemlisis sinrgica en forma de punta de flecha en el medio ASO (CAMP positiva). Resultados: la prevalencia de colonizacin por SGB fue de 16.94% (287/1700). Se observ excelente concordancia en la recuperacin de SGB entre CHROM B y ASO. La sensibilidad de deteccin del medio CHROM B comparada con ASO fu de 99.6% y la especificidad de 100%. En relacin a los tiempos de deteccin el 90.9% de las muestras se resolvieron en 24 hs usando ambos medios de cultivo, en el 8.7% se detectaron 18-24 hs antes en CHROM B que en ASO y en el 0.35% se detect 18-24 hs antes en ASO que en CHROM B. CONCLUSIONES: En el medio CHROM B para deteccin de SGB se obtuvo una alta sensibilidad y especificidad comparada con el medio convencional modificado. Esta metodologa representa una herramienta rpida y sencilla para la deteccin de SGB.
P591 - 27718 PREVALENCIA DE RESISTENCIA BACTERIANA EN UN HOSPITAL DEL CONURBANO BONAERENSE. MIRANDA, GRACIELA; MENENDEZ, MARIA DEL PILAR
Policlnico del Personal de la Industria del Vidrio Las infecciones por microorganismos multirresistentes son de incuestionable impacto clnico, tanto por el desafo que representan para su tratamiento como por su potencial de diseminacin en el hospital. Objetivo: conocer la prevalencia global y en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI) de microorganismos con mecanismos de resistencia de relevancia clnica y epidemiolgica: enterobacterias (EB) productoras de beta lactamasa de espectro extendido (BLEE), bacilos gram-negativos no fermentadores (BNNF) resistentes a carbapenemes, estafilococos meticilinorresis-tentes y enterococos resistentes a glicopptidos (VRE). Materiales y mtodos: desde el 11/2006 al 4/2010 se relevaron 538 aislamientos significativos, no repetidos, de un total de 1.605 cultivos de pacientes internados. Los antibiogramas se realizaron por difusin en agar segn normas del CLSI. La presencia de BLEE se evalu por el mtodo del doble disco utilizando ceftazidima / ceftazidima-cido clavulnico y cefotaxima/cefotaxima-cido clavulnico. La resistencia a carbapenemes, se determin con discos de imipenem y meropenem, incluyendo ertapenem para EB, la meticilinorresistencia con discos de cefoxitina y la resistencia a glicopptidos con discos de vancomicina y teicoplanina. Resultados: de las EB estudiadas 19/135 (14,1%) Escherichia coli, 57/96 (59,4%) Klebsiella pneumoniae y 30/48 (62,5%) Proteus mirabilis demostraron presencia de BLEE. De los restantes aislamientos de EB, 9/ 37(24,3%) fueron BLEE positivas. No se detectaron EB productoras de carbapenemasas en el perodo relevado, no obstante 4 cepas presentaron sensibilidad disminuida a meropenem y resistencia a ertapenem, conservando sensibilidad a imipenem. Los BNNF estudiados fueron 48 Pseudomonas aeru-ginosa y 21 Acinetobacter spp., de los cuales 35,4% y 62,5%, respectivamente, fueron resistentes a imipenem y/o meropenem. Se aislaron 39/72 (54,7%) Staphylococcus aureus meticilino resistentes. Las cepas VRE recuperadas fueron todas con fenotipo Van A, de ellas 11 correspondieron a Enterococcus faecium y una fue Enterococcus faecalis.
P590 - 27717 PORTACION DE Streptococcus agalactiae EN EMBARAZADAS. EVALUACION DE UN MEDIO CROMOGENICO. SERRUTO, GISELA; RAZETTO, GEORGINA; ZARATE, SOLEDAD; SMAYEVSKY, JORGELINA
Centro de Educacin Mdica e Investigaciones Clnicas (CEMIC) Introduccin: Streptococcus agalactiae (SGB) contina siendo causa de morbimortalidad neonatal en pases desarrollados con una alta tasa de mortalidad. La transmisin de la madre colonizada al neonato se produce fundamentalmente en el momento del parto. La estrategia para evitar la transmisin intraparto de SGB est basada por un lado en el reconocimiento de los factores de riesgo en la madre y la identificacin de la portacin ma-
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Grupo de microorganismos
N total N (%) N (%) total resistentes resistentes en totales UCI 316 69 92 66 127 (40,5) 30 (43,5) 65 (70,6) 8 (12,1) 38 (43,7) 16 (55,2) 15 (78,9) 4 (23,5)
Resistencia evaluada
clon A y B a lo largo del tiempo para establecer conductas teraputicas adecuadas.
Enterobacterias Bacilos no fermentadores Estafilococos Enterococos
Mediada por BLEE Imipenem y/o Meropenem Meticilina Glicopptidos
P593 - 27742 Neisseria gonorrhoeae ABRUPTO INCREMENTO DE LA RESISTENCIA A CIPROFLOXACINA EN LA PROVINCIA DE CHACO. PICCOLI, LAURA IRENE(1); MARQUES, ISABEL ANA(1); COLEF, MIRTA ALICIA(1); PAGANO, IRENE(2); GALARZA, PATRICIA(2)
(1) Servicio de Microbiologa Clnica, Hospital Dr. Julio C. Perrando, Chaco. (2) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn En este trabajo nos proponemos describir el aumento de la resistencia a ciprofloxacina de Neisseria gonorrhoeae (NG) en la provincia de Chaco y avalar cambios en las normas de tratamiento sindrmico emprico de los pacientes con secreciones uretrales y sus contactos. En nuestra provincia se realiza tratamiento sindrmico de los pacientes sintomticos uretrales y sus contactos, con Ciprofloxacina. Desde el ao 2003 se realiza en forma sistemtica el control epidemiolgico de este tratamiento mediante el estudio de una muestra de la poblacin por el aislamiento de cepas de NG y la realizacin del antibiograma por difusin, en el Servicio de Microbiologa Clnica del Hospital Dr. Julio C. Perrando, laboratorio de referencia provincial. Los resultados de esta vigilancia epidemiolgica obtenidos desde enero del 2006 a diciembre de 2008, evidenciaron un aumento progresivo de cepas con sensibilidad disminuida a quinolonas fluoradas (cipro-floxacina), por disminucin del tamao del halo de inhibicin, llegando a alcanzar un 10,3% (n= 86 ). Al evaluar las cepas mediante CIM (Concentracin Inhibitoria Mnima) en medio slido, en el Programa de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Neisseria gonorrhoeae (ProVSAG), Centro Nacional de Referencia en Enfermedades de Transmisin Sexual, ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn (CNR), estos valores se ubicaron dentro del rango de sensibles. El primer caso de fracaso teraputico, post tratamiento emprico con ciprofloxacina, ocurrido en febrero de 2009, alert al sistema de vigilancia epidemiolgica de la provincia. Este fenmeno se sigui observando en cuatro pacientes ms, que recibieron tratamiento emprico con dicha droga, como lo indicaban las normas provinciales vigentes. Ante la permanencia de los sntomas, estos pacientes fueron estudiados confirmndose el aislamiento de cepas de NG resistentes y se extremaron los controles de los pacientes post tratamiento sindrmico. De un total de 3501 cultivos endocervicales y 83 secreciones uretrales procesados durante el perodo comprendido entre enero y diciembre de 2009, se aislaron 38 cepas de NG. Los aislamientos se identificaron por tincin de Gram, cultivo en Thayer Martin, super oxol, prueba de oxidasa y produccin de cido a partir de hidratos de carbono. La susceptibilidad frente a ciprofloxacina, se estudi por el mtodo de difusin con discos segn normas CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) 2009 y debido a las dificultades de la derivacion que presentan este tipo de microorganismos se confirmaron 29 cepas por CIM en el CNR. Se encontr resistencia a ciprofloxacina en 10/29 cepas por mtodo de difusin (31%) y se confirm este hallazgo en el CNR, con valores de CIM entre 4 y 16 ug./ml. La realizacin de una estricta vigilancia epidemio-lgica en la red de laboratorios, permiti detectar la emergecia de cepas resistentes a ciprofloxacina. Corroborar estos resultados en el CNR y elevar esta informacin al programa provincial de Control de las ETS en forma regular, suministr la informacin necesaria y exacta que aval la correccin de las normas provinciales de tratamiento sindrmico emprico de las secreciones uretrales.
Se observ alta prevalencia de resistencia, en particular en EB productoras de BLEE, con respecto a datos nacionales. La poblacin del hospital es mayoritariamente de la tercera edad, con severas patologas de base y enfermedades crnicas, lo cual incidira en la prevalencia de estas cepas. Se destaca la importancia de controlar la presin de seleccin de los antibiticos administrados para evitar la diseminacin horizontal de stos microorganismos multirresistentes.
P592 - 27731 Pseudomonas aeruginosa MULTIRRESISTENTE CON DISOCIACION EN LA SENSIBILIDAD DE CEFEPIMA Y CEFTAZIDIMA. GUARDATI, C(1); BALLERINI, V(2); GARCIA, M(1); JUANIZ, A(1); COCCONI, E(1); ROSSIGNOL, G(1); ESTERLIZZI, R(1); PITTET, C(1); HEREDIA, O(1)
(1) Lab.Microbiologa Hospital Emergencias Dr Clemente Alvarez. Sec. Salud Pblica. Municipalidad de Rosario. (2) Lab. Microbiologa Hospital Int. Carrasco. Sec. Salud Pblica. Municipalidad de Rosario. Introduccin: Pseudomonas aeruginosa (Pae) es un patgeno oportunista con capacidad de adaptacin para sobrevivir en ambientes hospitalarios con mnimos requerimientos nutricionales y es naturalmente resistente a gran cantidad de antimicrobianos. El principal mecanismo de resistencia observado frente a beta lactmicos es el enzimtico que sumado al dficit de porinas y bombas de eflujo hacen peligrar las opciones teraputicas disponibles. Asimismo las instituciones deben mantener estrecha vigilancia de los perfiles de sensibilidad de esta bacteria, para comprender y reconocer su comportamiento. Objetivos: i) Evaluar la relacin clonal de 6 aislamientos con fenotipo ceftazidima sensible (CazS) - cefepime resistente (FepR) recuperados de distintos pacientes en un determinado periodo de tiempo. ii) Detectar probables mecanismos de resistencia a -lactmicos. Materiales y mtodos: se seleccionaron 6 aislamientos de Pae multirresistentes, CazS-FepR, obtenidos en el periodo 07/2009 a 05/2010 correspondientes a muestras provenientes de pacientes internados en terapia intensiva (UTI) de un nosocomio de agudos de la red de salud de la municipalidad de Rosario. Se evalu el comportamiento frente a 11 antimicrobianos por el mtodo de difusin en agar segn recomendaciones de CLSI. La metodologa genotpica elegida para evaluar la relacin clonal fue PCR con oligonucletidos degenerados (OD-PCR). Se realizaron ensayos de sinergias para la deteccin de beta lactamasas de espectro extendido (Blee) y ensayos microbiolgicos confirmatorios (EMIB) utilizando Fep y Caz como sustratos y c. clavulnico (Cla) como inhibidor. Adems se utiliz E-test para medir la concentracin inhibitoria mnima (CIM) frente a Caz y PCR con cebadores especficos para la confirmacin molecular de CTX-M. Resultados: 3 aislamientos se hallaron en un lapso de 7 das de 09/2009 (G1) y los otros 3 durante 7 das entre 04 y 05/2010 (G2). Las pruebas de sensibilidad no mostraron diferencias entre los 6 aislamientos a excepcin de imipenem (Imi) que fue Resistente en los tres aislamientos del G1. Entre G1 y G2 hubo una programada disminucin en el uso de Imi en UTI. OD-PCR permiti distinguir 2 clones: A, con 5 aislamientos y B con slo 1 y perteneciente a G1. Las sinergias fueron negativas para Blee mientras que EMIB detect actividad no inhibida por Cla slo sobre Fep. La deteccin de CTX-M fue negativa. La CIM a Caz fue 16 ug/ml. Conclusiones: Hubo cambios a nivel fenotpico dentro del clon A provocados por presin de seleccin que no se registraron genotpicamente as como hubo discriminacin clonal entre aislamientos sin diferencias fenotpicas. Se sugiere la presencia de cefepimasa y bombas de eflujo que seran los responsables del fenotipo estudiado siendo el valor de CIM imprescindible para definir la terapia con Caz. Es necesario controlar la ocurrencia del
P594 - 27745 EVIDENCIA DE LA LOCALIZACIN PLASMDICA DE LOS GENES CODIFICANTES PARA CARBEPENEMASAS Y SU TRANSFERENCIA EN AISLAMIENTOS DE Acinetobacter baumannii. RAMIREZ, MARIA SOLEDAD; MERKIER, ANDREA KARINA; CENTRON, DANIELA
Facultad de Medicina UBA Acinetobacter baumannii (Ab) es un patgeno oportunista de importancia clnica en nuestro medio hospitalario, siendo en nues-
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tro pas una problemtica de larga data. Es bien reconocida su capacidad de diseminarse en el medio hospitalario ya sea a travs de fomites o a travs de las manos del personal intrahospitalario. Posee una marcada capacidad de adquirir diferentes genes y/o mecanismos que le suministran una mejor adaptacin al medio intrahospitalario. El alto nivel de resistencia observado para los antibiticos B-lactmicos y en especial hacia los carbapenemes han colocado a dicho patgeno en la mira de muchos estudios. En nuestro pas la resistencia en Ab a los antibiticos carbapenemes debida a la adquisicin de carbapenemasas constituye hoy da una emergencia a nivel infectolgico con valores de resistencia a los mencionados antibiticos que alcanzan el 100% en algunos hospitales. Estudios previos en nuestro laboratorio en 50 aislamientos de origen hospitalario provenientes de 3 centros hospitalarios, evidenciaron la dispersin de los genes codificantes para carbapenemasas blaOXA-23 (62%) y blaOXA58 (38%). La dispersin de ambos mecanismos result ser policlonal. El objetivo del presente trabajo fue identificar si los genes codificantes para carbapenemasas se encontraban localizados en plsmidos evidenciando asimismo su potencial transferencia hacia otras especies. Materiales y Mtodos: se seleccion un representante de cada uno de los clones epidmicos de nuestros centros de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires. Los aislamientos seleccionados fueron A311 y A182, portadores de blaOXA-23 y blaOXA-58, y de blaOXA-23, respectivamente. Se llev a cabo la extraccin plasmdica utilizando el kit QIAfilter midi kit (QIAGEN). Se determin la presencia de los genes por la tcnica de PCR utilizando primers especficos. Se realiz la transferencia de dichos plsmidos a travs del mtodo de transformacin utilizando como cepa receptoras al A118 (Ab) y E. coli. La extraccin plasmdica evidenci la presencia de un plsmido de 10 Kb en A311 (pDCMSR2) y de 5 Kb en A182 (pDCAKM1). Por PCR se corrobor la presencia de blaOXA-23 y blaOXA-58 en pDCMSR2 y de blaOXA-23 en pDCAKM1. El anlisis nucleotdico de un fragmento de PCR obtenido, evidenci la presencia de ISAba3, interrumpido por IS26, flanqueando el gen blaOXA-58. La transferencia de dicho plsmido result positiva, obteniendo colonias positivas tanto para A118 como E. coli, luego de llevar a cabo la transformacin con la extraccin plasmdica y seleccin antibitica adecuada. El nivel de resistencia conferido meropenem en las cepas receptoras fue de 2 ug/ml y 0,5 ug/ml, respectivamente. Conclusiones: la dilucidacin de la localizacin plasmdica de los genes codificantes para carbapenemasas explica, por un lado, la alta diseminacin de la resistencia a los carbapenemes en nuestro medio en las cepas nosocomilaes de Ab. Por otro lado, el bajo nivel de resitencia a carbapenemes conferido a E. coli tambin explica su ausencia en cepas de la familia Enterobacteriaceae, que posee generalmente otras carbapenemasas.
L.pn y S.pn por inmunocromatografa Binax NOW. En HNF se realiz inmunofluorescencia directa (IFD) para virus sincicial respiratorio, adenovirus (ADV), parainfluenza I, II, y III, influenza A y B; PCR multiplex para C.pn, C.ps y C.tr (Messmer et al 1997); PCR anidada para M.pn (Talkington et al 1998) y real time para H1N1 (CDC/2009). Se determin IgM e IgG para M.pn por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y para C.pn, C.ps y C.tr por microinmunofluorescencia (MIF). Un microorganismo se consider agente etiolgico definitivo cuando se recuper de cultivo de sangre, esputo, LP, fue positivo (+) para Aur de S.pn L.pn; y agente etiolgico probable con PCR (+) y/o IgM (+) y/o IgG >1/512. Resultados: se estudiaron 120 pacientes con edades comprendidas entre 18 y 99 aos (mediana: 54), 58 (52%) fueron varones. Un HNF fue (+) por IFD (ADV) y ninguno para H1N1. La PCR para M.pn result (+) en 10 (8%) pacientes, de los cuales 6 tenan IgM (+) y/o IgG >1/512. Adems 19 pacientes tuvieron IgM (+) y/o IgG >1/512 sin otra tcnica (+). Por PCR-multiplex fueron (+) 5 pacientes para C.ps y 2 para C.pn, con MIF(+) en 3. Adems MIF result (+) en 7 pacientes para C.pn en los que no se detect otro germen. Se recibieron 20 esputos y 6 fueron (+): 3 H. influenzae, 1 S. pneumoniae y 2 M. catarrhalis. En ninguno de estos casos result (+) ni el HC, ni el Aur. Se realizaron 33 Aur resultando (+) para S.pn, 8 de los cuales 2 se aislaron tambin en HC y otro en LP, y ninguno para L.pn. De los 120 HC recibidos resultaron (+) 9 (7.5%): 4 S.pn, 2 S. aureus, 1 con ambos grmenes, 1 S. pyogenes y 1 S. coagulasa (-). Usando mtodos directos convencionales se llega a un diagnstico en 17% (20/120) de las NAC, incluyendo serologa y PCR en 53% (53/120). No se detectaron infecciones mixtas. La frecuencia de deteccin de M.pn y S.pn fue similar 8%. Si consideramos tambin la serologa M.pn resulta el agente ms frecuente 25% (29/120), seguido por C.pn 10% (12/106). El diagnstico definitivo fue bajo debido a la incompleta recoleccin de muestras. El uso de tcnicas moleculares y serologa permite establecer un diagnstico probable en un porcentaje mayor de pacientes.
P596 - 27782 ESTUDIO DE AISLADOS DE PACIENTES FIBROQUISTICOS POR TECNICAS DE ADN-FINGERPRINTING Y RESISTENCIA ANTIBIOTICA. MARTINA, PABLO(1); BOSCH, ALEJANDRA(1); PRIETO, CLAUDIA(1); MIAN, ALEJANDRO(1); ZAPPA, EUGENIA(1); BETTIOL, MARISA(2); MONTANARO, PATRICIA(3); YANTORNO, OSVALDO(1)
(1) Centro de Investigaciones en Fermentaciones Industriales (CINDEFI), (2) Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovica, La Plata, (3) Hospital Crdoba El complejo Burkholderia cepacia (CBC) es un grupo de bacterias estrechamente relacionado de 17 especies Gram-negativas, que se encuentran en suelo, ros, invertebrados, plantas y animales. Representantes del CBC son patgenos oportunistas, capaces de causar serias lesiones con alta tasa de mortalidad en pulmones de pacientes con fibrosis qustica (FQ) y en individuos inmunocomprometidos. El tratamiento de las infecciones del CBC plantea un gran reto debido a su alto nivel de resistencia antibitica. Se ha atribudo la resistencia a los antibiticos -lactmicos a una -lactamasa cromosmica inducible, mientras que el mecanismo en fluoroquinonas se debe a la adquisicin de mutaciones. En cultivos positivos para CBC, provenientes de esputo de pacientes fibroqusticos e inmunocomprometidos, B. contaminans fue aislada con la ms alta frecuencia, en Argentina en los ltimos aos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la resistencia antimicrobiana y diversidad genotpica en aislados sucesivos de pacientes fibroqusticos. Se analizaron 24 aislamientos, previamente identificados como B. contaminans por secuenciacin del gen recA y RFLP, provenientes de 3 pacientes de Crdoba y 4 pacientes de La Plata. Se determinaron las MIC de ceftazidima, meropenem, minociclina, cotrimoxazol, azitromicina y ciprofloxacina para cada una de las muestras. Se evalu la diversidad gentica a travs de BOX-PCR, ERIC-PCR y Rep-PCR fingerprinting. La tcnica de rep-PCR DNA-fingerprinting es un mtodo simple y rpido que posee el poder de resolucin necesario para la identificacin al nivel de subespecies o cepas. La tipificacin molecular por DNA-fingerprinting revel 4 perfiles genticos. Cuatro de los pacientes presentaron aislados indistinguibles, un pa-
P595 - 27752 ETIOLOGA DE LAS NEUMONAS ADQUIRIDAS DE LA COMUNIDAD INTERNADAS. CABRAL, G(1); PELUFFO, G(2); FERNANDEZ, A(2); SANGUINERI, V(1); LAPERA, C(1); MAGDALENO, A(1); ACOSTA, V(1)
(1) Laboratorio de Virologa, (2) Bacteriologa. Hospital Prof. A. Posadas El conocimiento de los patgenos que causan neumona adquirida de la comunidad (NAC) constituye las bases de la seleccin del tratamiento emprico antimicrobiano. Los grmenes detectados difieren segn el rea, la poblacin y las tcnicas de diagnstico. El propsito de este estudio es analizar la etiologa de las NAC internadas en un hospital de la Pcia de Bs As. Materiales y mtodos: se incluyeron pacientes internados con NAC entre 24/06/2009 y 24/06/2010. Se excluyeron pacientes inmunocom-prometidos, con tuberculosis, sin muestra para bacteriologa virologa. Se obtuvo sangre, esputo y lquido pleural (LP) para cul-tivo, orina para antgeno urinario (Aur) de Legionella pneumophila (L.pn) y Streptococcus pneumoniae (S.pn), hisopado nasofarngeo (HNF) para virus respiratorios, Chlamydophila pneumoniae (C.pn), C. psittaci (C.ps), Chlamydia trachomatis (C.tr) y Mycoplasma pneumoniae (M.pn), y suero para serologa de C.pn, C.ps, C.tr y M.pn. Se procesaron los HC en Bact-alert, esputo y LP por mtodos convencionales con tipificaciones segn el germen; los Aur para
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ciente present 2 perfiles distintos y los restantes pacientes presentaron perfiles nicos. Se observ incremento de la resistencia frente a los distintos antimicrobianos en los microorganismos aislados de cada paciente durante el transcurso del perodo estudiado. Cinco pacientes presentaron resistencia a minociclina y ciprofloxacina, dos pacientes a cotrimoxazol y un paciente a meropenem. Resultados similares han sido reportado por otros autores para Pseudomonas aisladas de FQ. En conclusin observamos aumento de resistencia antibitica a lo largo del tiempo en la mayora de los aislados B. contaminans analizados, esto podra deberse a que en los pacientes son medicados habitualmente con los mismo antibiticos en donde se hallo resistencia.
CIN DE UN CASO. LOPEZ, MONICA ESTELA; GONZALEZ, MARIA; REGUERA, MARIA; GASPERI, SILVIA; LAZO, ALBERTO
Hospital Eva Pern Introduccion y objetivos: Erysipelothrix rhusiopathiae (Er) es una especie bacteriana distribuida como comensal o patgeno en diversos animales. Una forma de infeccin en humanos poco frecuente es la bacteriemia, habitualmente con compromiso cutneo y complicada con endocarditis infecciosa (EI). En este trabajo presentamos un caso de EI por Er sin compromiso cutneo aparente, con evolucin trpida y desenlace fatal. Paciente de 71 aos, oficio albail, que ingresa con astenia, adinamia, disminucin del peso, tos y expectoracin mucopurulenta, insuficiencia cardaca por miocardiopata dilatada, fibrilacin auricular y al cul por ecocardiograma se le constata vegetacin en vlvula mitral y artica. Materiales y mtodos: se tomaron dos muestras de hemocultivo que fueron procesadas a las 24 horas de incubacin a 36 C por mtodo manual y a las que se les realiz extendido para coloracin de GRAM y subcultivos en agar sangre, agar chocolate y caldo cerebro corazn. Resultados: en la coloracin de GRAM se observaron bacilos gram-positivos pleomrficos y en los subcultivos desarrollaron colonias puntiformes en agar chocolate y colonias alfa hemolticas en agar sangre ovina. Las pruebas de tipificacin resultaron: oxidasa negativa, catalasa negativa, Pyr positivo, produccin de sulfhidrico en TSI, movilidad negativa y vancomicina resistencia . La cepa aislada se identific como Er de acuerdo a la metodologa convencional y confirmada por el Servicio de Bacteriologa Especial del Departamento de Bacteriologa ANLIS Dr.Carlos G Malbran. Conclusiones: la EI se diagnostica por el hallazgo de microorganismos en hemocultivos y presencia de vegetacin en vlvulas cardiacas. Si se aislan microorganismos atpicos la presentacin clnica no sera la clasica y el curso de la enfermedad no predecible. En el presente caso el paciente recibi tratamiento con ampicilina y gentamicina endovenoso falleciendo luego de 20 das de internacin. En el caso de Er como agente etiolgico de EI, se requiere un alto ndice de sospecha por parte de microbilogos y mdicos tratantes ya que un diagnstico y tratamiento oportunos tienen alta probabilidad de conducir a una evolucin ms favorable.Se rescata la importancia de valorar aislamientos de bacilos gram-positivos a partir de hemocultivos y solamente considerarlos contaminantes cuando las caractersticas clnicas del paciente y/o las circunstancias del aislamiento as lo justifiquen.
P597 - 27784 BACTERIEMIA POR Kingella kingae EN UN PACIENTE PEDITRICO. PALAU, MARIA JULIANA (1); ODERIZ, SEBASTIAN(1); ACOSTA, DIEGO(2); CALLEJO, RAQUEL(3); VESCINA, CECILIA(1)
(1) Sala de Microbiologa, Laboratorio Central. (2) Residencia de Clnica Peditrica. Hospital de Nios Sor Maria Ludovica, La Plata. (3) Servicio Bacteriologa Especial INEI-ANLIS Carlos G Malbrn. Buenos Aires. Kingella kingae (Kk) es un cocobacilo gram-negativo de crecimiento lento perteneciente a la familia Neisseriaceae y se lo incluye dentro del grupo HACEK. Se ha considerado excepcionalmente como agente patgeno, sin embargo en los ltimos aos han aumentado los casos publicados, teniendo predileccin por lactantes y nios pequeos. Kk se encuentra colonizando el tracto respiratorio superior, con mayor frecuencia en nios menores de 3 aos. Una erosin de la mucosa orofarngea u otras barreras naturales podra ser la puerta de entrada a la circulacin sangunea. As, en la mayor parte de los pacientes con bacteriemia aislada existe historia reciente de estomatitis, infeccin de vas respiratorias altas o diarrea. Los casos de bacteriemia oculta por Kk sin foco son ms frecuentes en nios pequeos (alrededor del 60% en menores de 2 aos de edad). Las formas clnicas ms frecuentes son bacteriemia, infecciones osteoarticulares y endocarditis, y puede provocar infecciones de vas respiratorias bajas, oculares y del sistema nervioso central. La bacteriemia por Kk sin foco endocrdico o esqueltico no es una forma frecuente de presentacin y fue descripta recin en 1994. Se describe un caso de un paciente de sexo masculino de 16 meses de vida que acudi a la consulta por fiebre e intolerancia oral por gingivoestomatitis de 3 das de evolucin. Presentaba adems una neutropenia al momento del ingreso (actualmente en estudio). El paciente requiri internacin en Unidad de Terapia Intensiva Peditrica (UTIP) por posible estado sptico. Requiri ARM e inotrpicos y recibi esquema antibitico emprico (ampicilina-sulbactam + gentamicina). Se tomaron muestras para cultivo: hemocultivos (x2), urocultivo, lquido cefalorraqudeo y lesiones periorales. En un hemocultivo perifrico (BacT-Alert 3D, Biomerieux, tiempo de positivizacin: 10.7 hs) se recuper Kk, sin hallarse foco endocrdico o esqueltico, resultando el resto de los cultivos negativos. La identificacin del germen se hizo basndose en la tincin de Gram, las caractersticas del cultivo y pruebas bioqumicas: lento crecimiento en agar sangre con pequeo halo de -hemlisis, sin desarrollo en agar Mac Conkey, oxidasa positiva, catalasa negativa, fosfatasa alcalina positiva, ureasa e indol negativo, produccin de cido a partir de glucosa y maltosa, pero no de otros azcares como lactosa, sacarosa, xilosa y manitol. No se realizaron estudios de sensibilidad debido a la falta de estandarizacin por el CLSI. La confirmacin definitiva se realiz en el ANLIS-INEI Carlos G. Malbrn. El aumento de los aislamientos de Kk en los ltimos aos no significa necesariamente, que haya aumentado su patogenicidad, sino que probablemente la mejora en las tcnicas de cultivo e identificacin permite mayor recuperacin. La infeccin invasiva por Kk suele evolucionar de forma benigna, sin embargo el paciente en estudio requiri internacin en UTIP debido al rpido deterioro en su estado general. Por lo tanto, este germen debe ser sospechado tambin en casos de sepsis.
P599 - 27793 ACINOMICOSIS TORACICA POR Propionibacterium propionicum/avidum. MONZANI, VICTORIA; PONS, MAURICIO; PALMISCIANO, VERONICA; QUINTAS, SANTIAGO; MORVAY, LAURA
Hospital Interzonal Especializado Materno Infantil Introduccin: En el hombre, la actinomicosis torcica es una enfermedad poco frecuente, caracterizada por formacin de abscesos que pueden fistulizar. Se presenta tanto en pacientes inmunocomprometidos como inmunocompetentes. Existen factores predisponentes que condicionan el desarrollo de esta enfermedad como caries dentales, trauma, diabetes mal controlada, etc. Otras formas clnicas descriptas son: actinomicosis cervicofacial, abdominal y cerebral. La infeccin pulmonar aparece, por lo general, luego de la aspiracin de secreciones orofaringeas o de contenido gstrico. El diagnstico diferencial incluye otras infecciones crnicas (tuberculosis, nocardiosis) y enfermedades malignas e inflamatorias. Actinomyces spp., comensal y flora normal de orofaringe, tracto gastrointestinal y genital femenino, es el patgeno principalmente implicado en esta patologa, siendo muy poco frecuente el hallazgo de Propionibacterium propionicum/ avidum como causante de la enfermedad. Propionibacterium propionicum/avidum son bacilos gram-positivos anaerobios no esporulados, pleomrficos, ocasionalmente ramificados, que toman la coloracin de Gram en forma irregular. Son indistinguibles morfolgicamente de Actinomyces spp. en cultivo y en tejidos. Se diferencian del mismo, a travs de pruebas bioqumicas y sus productos metablicos. Caso clnico: varn de 7 aos, sin ante-
P598 - 27790 ENDOCARDITIS EN VLVULA MITRAL Y ARTICA PRODUCIDA POR Erysipelothrix rhusiopathiae: PRESENTA-
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cedentes infecciosos de relevancia, con desarrollo neurolgico normal que presenta tumoracin pulmonar en lbulo superior izquierdo. Ingresa con diagnstico sugestivo de actinomicosis por estudio histopatolgico. Se interna para tratamiento antibitico y estudios complementarios. Buen estado general, mal estado dentario. Al ingreso se observa drenaje de material purulento por formacin de fstulas hacia la pared anterior del trax. Se toma muestra por puncin de esta secrecin, la cual se procesa para grmenes comunes y anaerobios. La tincin de Gram revela escasa reaccin inflamatoria y escasos bacilos Gram positivos pleomrficos. A las 72 horas de incubacin en anaerobiosis, desarrollan colonias lisas, no hemolticas en agar sangre de carnero. Se realiza identificacin por API 20 A arrojando como resultado Propionibacterium propionicum/avidum. El paciente es tratado con Penicilina G 300.000 U.I./Kg/da cada seis horas, con evolucin favorable. Conclusines: La sospecha de actinomicosis fue de gran utilidad para el rescate de un microorganismo de difcil desarrollo que necesita condiciones adecuadas para su aislamiento. Si bien Propionibacterium propionicum es considerado un posible agente etiolgico de actinomicosis, es aislado con muy poca frecuencia como patgeno, segn la bibliografa consultada. No hemos encontrado casos documentados de actinomicosis torcica por Propionibacterium avidum. Se presenta un caso de actinomicosis torcica, entidad poco frecuente, en paciente peditrico sin antecedentes infectolgicos, cuyo nico factor predisponente es la presencia de caries dentales.
mayor en la poblacin adulta que en la peditrica. Este hallazgo es importante a fin de no subestimar el diagnstico de faringitis estreptoccicas en pacientes mayores de 18 aos. Por otra parte, la prevalencia de faringitis estreptoccica en los meses de junio, julio, agosto y septiembre de 2009, fue inferior a las reportadas para los mismos meses del perodo 2006-2008. Siendo la transmisin de esta enfermedad por va respiratoria, la disminucin de la prevalencia durante estos meses de 2009 coincide con las medidas de distanciamiento social llevadas a cabo en la lucha contra la propagacin de la gripe pandmica.
P601 - 27816 MIONECROSIS POS-TRAUMTICA, RPIDAMENTE PROGRESIVA POR Aeromonas veronii biogrupo sobria, EN UN PESCADOR INMUNOCOMPETENTE. COLOTTO, CELINA (1); LEDESMA, ELIZABETH(1); ENRICO, CECILIA(1); LAMBERGHINI, RICARDO(2); GUZMAN, EMILIA(3); BILBAO, LILIANA(1); PIERSIGILLI, ANDREA(1)
(1) Microbiologa, (2) Infectologa, (3) Terapia Intensiva. Sanatorio Privado Aconcagua El gnero Aeromonas es una causa reconocida de diarrea. De modo ocasional puede producir infecciones extraintestinales, entre las que se destacan las bacteriemias y las infecciones de piel y partes blandas. La mionecrosis por Aeromonas spp es un proceso infrecuente, aunque muy grave, que se asemeja a la producida por Clostridium spp y que puede evolucionar mortalmente o requerir tratamiento quirrgico radical. Objetivo: describir un caso de mionecrosis rpidamente progresiva por Aeromonas spp, en un paciente inmunocompetente, con antecedente de traumatismo. Caso Clnico: Paciente de sexo masculino, 58 aos, previamente sano, que mientras pescaba sufre herida punzante por espina de pescado en miembro inferior derecho; posteriormente se complica con celulitis en el sitio de la injuria, evolucionando trpidamente a sndrome compartimental, requiriendo fasciotoma. A las 48 hs es derivado a nuestra institucin por evolucin desfavorable (shock sptico y fallo multiorgnico secundario a gangrena gaseosa), realizndose tras el ingreso puncin de lquido sinovial (LS) de rodilla derecha y hemocultivos (H). Tras lo cual se realiza amputacin supracondlea y se instaura tratamiento con penicilina, clindamicina y gentamicina, junto a drogas inotrpicas, vasoactivas y asistencia respiratoria mecnica. En el examen directo del LS se observa bacilos gram-negativos. Ante la mala evolucin del paciente se rota el esquema antibitico a ciprofloxacina e imipenem. Los bacilos gram-negativos desarrollan a las 24 hs de incubacin con evidencia de -hemlisis en agar sangre. Resultan positivas las pruebas de catalasa, citocromo oxidasa y fermentacin de glucosa. Se informa identificacin preliminar del gnero Aeromonas. Se demuestra sensibilidad antimicrobiana a: gentamicina, ciprofloxacina, piperacilina/tazobactama, cefotaxima, e imipenem (CLSI). Luego de 10 das de internacin, el paciente fallece. Los cultivos del LS y de los H para microorganismos anaerobios resultan negativos. Posteriormente, se recibe informe de identificacin del Servicio Enterobacterias, INEI-ANLIS, Dr Carlos G. Malbran como Aeromonas veronii biogrupo sobria. Debe considerarse a Aeromonas spp en el diagnstico diferencial de las infecciones de piel y partes blandas, especialmente de heridas secundarias a traumatismos en contacto con agua. Como suelen ser polimicrobianas, debe evaluarse adems la posible coinfeccin con otros patgenos. Dado que la mionecrosis por Aeromonas spp, es una infeccin grave y poco comn (sobre todo en pacientes inmunocompetentes) y considerando que este agente es universalmente resistente a penicilina y ampicilina, la sospecha microbiolgica y el alerta precoz al clnico, resultan esenciales para la seleccin de los antibiticos efectivos y para decidir el correspondiente tratamiento quirrgico, nico modo de modificar la elevada morbimortalidad de la patologa.
P600 - 27808 PREVALENCIA DE FARINGITIS ESTREPTOCCICA EN EL HOSPITAL JUNN DE LOS ANDES, NEUQUN. ZURSCHMITTEN, ABEL; BRITEZ, MIRYAM; DI VITO, JUAN JAVIER; LUTZ, FABIANA; PALAZZOLO, MARIA SOLEDAD
Hospital Junn de los Andes, Neuqun La faringitis aguda es una de las enfermedades que motivan mayor nmero de consultas en atencin primaria. Hasta la fecha contbamos con datos parciales acerca de la prevalencia de faringitis estreptoccica en nuestra poblacin. El objetivo de este trabajo es conocer la prevalencia de faringitis estreptoccica en el Hospital de Junn de los Andes durante el perodo 2006-2009. Las muestras de hisopados de fauces provenientes de pacientes con diagnstico de faringitis aguda se sembraron en agar base Columbia con el agregado del 5% de sangre ovina desfibrinada, y se incubaron durante 24-48 hs a 35 2 C. La identificacin se realiz mediante las siguientes pruebas: catalasa, sensibilidad de bacitracina (0.04 U), hidrlisis de pirrolidonil-beta-naftilamida, prueba de Voges Proskauer y aglutinacin con partculas de ltex. En este perodo se procesaron 2869 muestras de hisopados de fauces, el 65,1% provinieron de pacientes peditricos (entre 18 meses y 18 aos), el 28,8% de adultos (pacientes mayores de 18 aos) y en el 6,1% de los casos no se pudo precisar la edad. La prevalencia de faringitis por S. pyogenes en la poblacin peditrica fue de: 13.4% (ao 2006), 17.6% (ao 2007), 17.9% (ao 2008) y 12.5% (ao 2009). La prevalencia en la poblacin adulta para el mismo agente etiolgico fue de: 20.0% (ao 2006), 19.5% (ao 2007), 16.1% (ao 2008) y 13.0% (ao 2009). La prevalencia de faringitis estreptoccica (incluyendo los aislamientos de estreptococos beta hemolticos grupo C y G) en la poblacin peditrica fue de: 17.5% (ao 2006), 19.9% (ao 2007), 21.2% (ao 2008) y 16.2% (ao 2009); y en la poblacin adulta fue de: 26.5% (ao 2006), 23.1% (ao 2007), 22.4% (ao 2008) y 15.0% (ao 2009). Por otra parte, la prevalencia de faringitis estreptoccica en los meses de junio, julio, agosto y septiembre de 2009 fue de 12.1%, 3.7%, 9.8% y 11.4% respectivamente. Estos registros fueron inferiores a los reportados para los mismos meses del perodo 2006-2008 (rango junio 06/08: 14.3%-27.9%, rango julio 06/08: 22%-33.8%, rango agosto 06/08: 14.4%-20.9%, rango septiembre 06/08: 17.2%-30.3%). Esta tendencia no se observ en ningn otro perodo. La prevalencia de S. pyogenes como agente etiolgico de faringitis en nuestra poblacin peditrica no difiere de las publicaciones existentes, sin embargo, la prevalencia en la poblacin adulta es mayor a lo reportado por varios autores (con diferencias cercanas al 10%). Cabe mencionar que la prevalencia de faringitis estreptoccica es similar o
P602 - 27848 RESERVORIOS URBANOS ANIMALES DE Escherichia coli SHIGATOXIGNICO RELACIONADOS A CASOS DE DIARREA AGUDA SANGUINOLENTA (DAS) Y/O SNDROME URMICO HEMOLTICO (SUH). RUMI, MV(1); CALVIO, MF(1); DEGREGORIO, O(2); REGALIA, A(3); BLANCO CRIVELLI, X(4); LLORENTE, P(1); MARCOS, E(5); MOLINA, J(5); BENTANCOR, A(1)
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(1) Microbiologa, (2) Salud Pblica, (3) Epidemiologa, Ministerio de Salud del Gobierno de la Ciudad de Bs As; (4) Patologa, FCV-UBA; (5) Instituto de Zoonosis Luis Pasteur Escherichia coli shigatoxignico (STEC), determina cuadros de diarrea leve, DAS y/o SUH. Se document correlacin entre SUH y alimentos pero no siempre se reconoce la fuente de infeccin. Cepas STEC bovinas no guardan identidad clonal con la totalidad de cepas aisladas de SUH. Rutas de contagio persona-persona relevantes en Argentina y otras rutas como mascota-persona y animales sinantrpicos-roedores, podran tener un rol epidemiolgico en la endemia. El objetivo fue estudiar posibles reservorios animales relacionados con casos de SUH/DAS notificados al Sistema Nacional de Vigilancia en Salud, CABA, en el perodo 2009-2010. Se muestrearon todas las mascotas (perros y gatos) con contacto directo con el caso (hisopado rectal). En zonas con presencia de roedores se procedi a la captura mediante trampa jaula en el foco y perifoco. Se evaluaron 28 casos de SUH y 49 de DAS. Se procesaron muestras de 15 caninos, 12 felinos y 14 roedores (Rattus spp.) relacionados con dichos casos. Se realiz tamizaje por PCR, aislamiento y tipificacin por bacteriologa bsica (Bentancor, 2007). Se evaluaron factores de virulencia: saa, stx1, stx2, eae y ehxA por PCR (Paton, 2002). Se estudi la susceptibilidad por mtodo de difusin a: ampicilina, amicacina, gentamicina, estreptomicina, c. nalidxico, ciprofloxa-cina, tetraciclina, trimetoprima-sulfametoxazol, cloranfenicol y nitrofurantona (CLSI, 2009). En 12 casos de SUH se registraron mascotas contacto y en 3 se capturaron roedores. En 7 casos de DAS se registraron mascotas y en 2 focos se logr captura. De los casos de SUH (10 perros, 3 gatos y 9 roedores) se identificaron 3 caninos portadores, 1 de ellos de cepas STEC (stx2+); y dos de EPEC (ehxA-, eae+, stx2-, stx1-, saa-). De un felino se aisl una cepa STEC (stx2+). De roedores se obtuvieron 3 cepas: 2 (stx2+) y 1 (ehxA+, eae+, stx2+). En casos de DAS (5 perros, 9 gatos y 5 roedores) se aisl slo de un felino, una cepa STEC (stx2+, eae+). No se detect O157:H7. Solo se detect resistencia a ampicilina, estreptomicina y trimetroprima-sulfametoxazol en cepas aisladas de roedores. La proporcin de casos de SUH con mascotas p=0,43 es significativamente mayor a la de casos de DAS con animales p=0,14 (Test diferencia de proporciones p:0,05). Se observan diferencias significativas entre la proporcin de caninos relacionados con SUH y DAS (p:0,01) y entre la de felinos relacionados con DAS y SUH (p:0,01). Este estudio muestra la importancia de los animales en su relacin con la aparicin de focos de SUH/DAS, muy particularmente con el aislamiento de cepas STEC en roedores (Rattus spp.) Ante focos de esta enfermedad deberan protocolizarse las acciones sanitarias locales frente a especies sinantrpicas que pueden actuar en su transmisin. Realizado con apoyo de una Beca Institucional,Ramn Carrillo-Arturo Oativia, Comisin Nacional Salud Investiga, Ministerio de Salud de la Nacin y UBACYT V401.
Pseudomonas spp. Extraccin de ADN. Reaccin de PCR dirigida a un fragmento interno del gen oprF utilizando cebadores complementarios a secuencias conservadas en Pseudomonas. Anlisis RFLP generados con endonucleasas TaqI y HaeIII. Resolucin por electroforesis en gel de agarosa, tincin con bromuro de etidio y visualizacin al transiluminador UV. Resultados: se construy una coleccin de 62 aislamientos de P.a. obtenidos a partir de diferentes tipos de muestras clnicas y diferentes secciones del Hospital de Nios de La Plata. El tamao del 98% de los amplicones oprF fue indistinguible del de cepas de referencia. Slo un aislamiento gener un producto con tamao menor, y se verific luego por secuenciacin que se trataba de una cepa de P. mendocina. Se analizaron los RFLP obtenidos mediante el uso de las endonucleasas TaqI y HaeIII sobre los productos de PCR, para conocer el grado de diversidad en las secuencias de los amplicones oprF, y evaluar la posibilidad de utilizar los mismos como herramienta de genotipificacin a nivel de especie. El 96% de los aislamientos de P.a. presentaron patrones de digestin con TaqI y HaeIII coincidentes con los de las cepas de referencia. El restante 4%, si bien presentaba productos de amplificacin por PCR con tamao indistinguible a los del resto, mostr un segundo tipo de patrn de RFLP con la enzima HaeIII. Estos ltimos aislamientos fueron posteriormente re-confirmados como P.a. mediante secuenciacin. Estas observaciones sugirieron que dentro del grupo de P.a. existen al menos 2 posibles patrones de RFLP diferentes. Se logr amplificar el producto de PCR esperado en la totalidad de los aislamientos de P.a. El uso de las enzimas TaqI y HaeIII permiti reconocer dos patrones de RFLP, ninguno coincidente con los registrados previamente en nuestro laboratorio para otras especies de Pseudomonas. Esto sienta las bases para el uso del ensayo de PCR-RFLP para la deteccin y tipificacin rpida de P.a. En una etapa subsiguiente, deber explorarse de modo sistemtico la sensibilidad y especificidad del mtodo utilizando para la PCR ADN extrado directamente de fluidos biolgicos colectados de pacientes infectados con P.a.
P604 - 27866 EVALUACIN Y COMPARACIN DE TRES METODOLOGAS PARA LA DETECCIN Y AISLAMIENTO DE Escherichia coli O157:H7 A PARTIR DE HECES HUMANAS. DEZA, N; MILIWEBSKY, E; BASCHKIER, A; ZOLEZZI, G; RIVAS, M
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC), O157:H7 es un patgeno emergente, asociado a casos espordicos y a brotes de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrgica, y sndrome urmico hemoltico (SUH). La dosis infectiva de STEC O157 es muy baja, por lo que se transmite con facilidad no solo a travs de alimentos sino tambin por el contacto persona a persona por la va fecal-oral. La rpida deteccin de este patgeno es necesaria para una efectiva prevencin de la diseminacin. Diferentes estrategias basadas en caractersticas fenotpicas, genotpicas e inmunolgicas han sido propuestas para aumentar la sensibilidad en el aislamiento de E. coli O157. El objetivo de este trabajo fue evaluar y comparar la capacidad de recuperacin de E. coli O157 a partir de materia fecal (MF) humana, utilizando las siguientes metodologas: PCR mltiple (PCRm) para la deteccin de los genes stx1, stx2 y rfbO157, separacin inmunomagntica (SIM) y dos ensayos automatizados inmuno-enzimticos fluorescentes basados en la unin de fagos a protenas especficas (mini-VIDAS UP E. coli O157 ECPT bioMrieux), y en una inmuno-concentracin (mini-VIDAS ICE bioMrieux). Se procesaron 43 muestras de MF tomadas de pacientes con SUH y DS por las tres metodologas. 1) Las muestras se sembraron en forma directa y luego del enriquecimiento en caldo tripticasa de soja suplementado con cefixima y telurito de potasio, en agar MacConkey-sorbitol. Una muestra de la zona de cultivo confluente se proces por PCRm. 2) Las muestras se sembraron en caldo Gram Negative (GN) y luego de enriquecidas se procesaron por SIM. Una alcuota inmunoconcentrada se sembr en agar cromognico chromIDTM O157:H7 bioMrieux, y posteriormente se proces por PCRm. 3) Alcuotas del caldo GN enriquecido se procesaron por mini-VIDAS ECPT. Una segunda alcuota de las
P603 - 27850 DETECCIN Y TIPIFICACIN DE Pseudomonas aeruginosa MEDIANTE UN ENSAYO DE PCR-RFLP A PARTIR DE MUESTRAS CLNICAS RECUPERADAS DE PACIENTES PEDITRICOS. LAGARES, ANTONIO(1); AGARAS, BETINA(1); BETTIOL, MARISA(2); GATTI, BLANCA(2); VALVERDE, CLAUDIO(1)
(1) Universidad Nacional de Quilmes (2) Hospital de Nios Superiora Sor Mara Ludovica, La Plata Antecedentes: Para contar con mtodos rpidos de tipificacin de P. aeruginosa (P.a.) que no requieran una etapa de cultivo, es necesario identificar regiones gnicas que sean marcadores especficos de especie. En nuestro laboratorio se evalu previamente a travs del diseo de un ensayo de PCR-RFLP (Polymerase chain reaction - Restriction Fragment Length Polimorfism), la potencialidad del gen oprF, altamente conservado en Pseudomonas y con una marcada diversidad de secuencia, para ser utilizado como marcador de especie en aislamientos recuperados de muestras ambientales, obtenindose resultados favorables. Objetivo: evaluar la capacidad de un protocolo de PCR-RFLP para genotipificar aislamientos recuperados de muestras clnicas identificados como P. aeruginosa por mtodos microbiolgicos convencionales. Material y Mtodos: cultivo en medio selectivo para
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muestras positivas por este procedimiento, fueron procesadas por mini-VIDAS ICE. El inmunoconcentrado obtenido se sembr en placa de agar chromIDTM O157:H7 y posteriormente una muestra de la zona de cultivo confluente fue tomada para realizar PCRm. En un total de 26 (60%) muestras los resultados fueron coincidentes por los tres procedimientos empleados, 7 positivos y 19 negativos. Del total de las 43 muestras, 16 (37,2%) resultaron ser O157 positivas y pudieron ser recuperadas por alguna de las tres metodologas: 11 muestras (68,75%) por PCRm, 12 (75%) por SIM, y 14 (87,5%) por mini-Vidas ICE. En 5 muestras se recuper E. coli O157 por las metodologas de inmunoconcentracin (SIM o mini-VIDAS ICE), y no por PCRm. Solo en 5 muestras donde se obtuvo seal positiva por el tamizaje con mini-VIDAS ECPT, no pudo recuperarse la bacteria en la inmunoconcentracin por mini-VIDAS ICE. De acuerdo a los resultados obtenidos con las tres metodologas se observ porcentajes similares de recuperacin. Es importante destacar que los procedimientos de inmunoconcentracin facilitan la recuperacin de la bacteria. Si bien por el ensayo automatizado se obtuvo el mayor porcentaje de recuperacin; en un 11,6% se obtuvo seal positiva por el tamizaje, pero no se logr el aislamiento con la inmunoconcentracin.
de un programa de control iniciado el 1 de mayo de 2006 para reducir las infecciones por SARM en UTI que incluy cultivos de vigilancia de SARM. Si bien se observa un aumento de fSARMCA en el ltimo ao, como se describe en la literatura, no se observa un aumento de la resistencia a meticilina en aislamientos intrahospitalarios, por este fenotipo.
P606 - 27874 VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A MACRLIDOS EN EL HOSPITAL JUNN DE LOS ANDES, NEUQUN. ZURSCHMITTEN, ABEL; BRITEZ, MIRYAM; DI VITO, JUAN JAVIER; LUTZ, FABIANA; PALAZZOLO, MARIA SOLEDAD
Hospital Junn de los Andes, Neuqun Entre 2004 y 2009 se registraron en la provincia de Neuqun 6480 casos de Coqueluche. Este hecho motiv un incremento en el consumo de macrlidos, con la posibilidad de un aumento en su resistencia. El objetivo de este trabajo es evaluar la resistencia a macrlidos en S. pyogenes, estreptococos beta hemolticos grupo C (EBHGC) y estreptococos beta hemolticos grupo G (EBHGG) aislados de hisopados de fauces de pacientes con diagnstico de faringitis aguda durante el perodo 2006-2009. Las muestras se sembraron en agar base Columbia con el agregado del 5% de sangre ovina desfibrinada dentro de las 2 horas de su extraccin, y se incubaron durante 24-48 hs a 35 2 C. Muestras tomadas en centros perifricos o guardia fueron conservadas en medio de transporte Stuart hasta su procesamiento. Las colonias beta-hemolticas fueron identificadas utilizando las pruebas de catalasa, sensibilidad de bacitracina (0.04 U), hidrlisis de pirrolidonil-beta-naftilamida (PYR-A-Enterococos, Britania, Argentina), prueba de Voges Proskauer y aglutinacin de ltex para identificacin de estreptococos a nivel de grupo de Lancefield (Streptococcal grouping kit, Oxoid, Inglaterra). Las pruebas de sensibilidad a eritromicina (ERY, 15 g) y clindamicina (CLI, 2 g) fueron realizadas por mtodo de difusin con discos segn normas CLSI. Se emple la cepa Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 como control de calidad. Los resultados de las pruebas de sensibilidad fueron cargados para su posterior anlisis en el programa Whonet 5.5, versin septiembre 2008, WHO Collaborating Centre for Surveillance of Antimicrobial Resistance. Durante el perodo 2006-2009 se procesaron 2869 muestras de hisopados de fauces. El 65,1% (n=1869) provinieron de pacientes peditricos (pacientes entre 18 meses y 18 aos), el 28,8% (n=826) de adultos (mayores de 18 aos) y en el 6,1% (n=174) de los casos no se pudo precisar la edad. Se aislaron 560 cepas, el 80.6% correspondi a S. pyogenes, 8% a EBHGC y 11.4% a EHBGG. Al 84.6% (n: 474) de las mismas se les realiz estudios de sensibilidad. Solo el 0.6% (2 de 391 cepas) de S. pyogenes fueron resistentes a ERY. Una de las cepas presento el fenotipo M, probable eflujo, y la otra el fenotipo MLSB constitutivo (cMLSB). El 16.7% (3 de 18 cepas) de EBHGC y el 8.3% (3 de 36 cepas) de EBHGG presentaron fenotipo M. La situacin endemo-epidmica de Cocheluque registrada en nuestra provincia deriv en un aumento del consumo de macrlidos, especialmente de claritromicina, antibitico de eleccin para el tratamiento de esta patologa. Sin embargo, la resistencia a macrlidos para S. pyogenes en nuestra poblacin fue slo del 0.6%. Si bien los porcentajes de resistencia a macrlidos en aislamientos de EBHGC y EBHGG son superiores, el bajo nmero de cepas estudiadas hace que no podamos obtener resultados concluyentes respecto a la resistencia a estos antibiticos.
P605 - 27873 EVOLUCIN DE LA RESISTENCIA A METICILINA EN Staphylococcus aureus (SARM) DURANTE 10 AOS EN UN HOSPITAL DE LA CIUDAD DE BUENOS AIRES. MALDONADO, I; ALMEIDA, MI; MESSINA, M; DOMECQ, P; FERNANDEZ CANIGIA, L
Hospital Alemn Staphylococcus aureus (SA) es un patgeno importante tanto en pacientes hospitalizados como ambulatorios. Un alto porcentaje de aislamientos intrahospitalarios (IH) son resistentes a meticilina. En los ltimos aos se comenzaron a aislar cepas de SARM adquiridas en la comunidad (SARM-AC), estos aislamientos tenan la particularidad de ser resistentes a -lactmicos y no presentar resistencia acompaante. Publicaciones recientes demuestran que un alto porcentaje de los SARM en pacientes hospitalizados correspondan al fenotipo SARM-AC. Objetivos: estudiar la evolucin de la resistencia a meticilina en SA en un hospital de la Ciudad de Buenos Aires durante 10 aos y analizar la prevalencia de los fenotipos en el medio hospitalario. Se analizaron los datos obtenidos por el programa SIR (Sistema Informtico de Resistencia a los Antibiticos, SADEBAC-AAM) de aislamientos de SA en pacientes internados, en el perodo comprendido entre 1 de mayo de 2000 al 30 de abril de 2010. Las pruebas de sensibilidad a los antibiticos (ATB) fueron realizadas por el mtodo de difusin con discos, segn el CLSI a los siguientes antibiticos: oxacilina, cefoxitina, gentamicina (GEN), eritromicina (ERI), rifampicina (RIF), cotrimoxazol (TMS), ciprofloxacina (CIP), vancomicina, teicoplanina. Se definieron los siguientes fenotipos: fSASM (SA sensible a meticilina); fSARM-HA (SARM asociado al hospital): SARM con resistencia a 2 ms de los siguientes ATB no -lactmicos (GEN, ERI, CIP, RIF, TMS), dentro de este fenotipo se diferenci el fSAMR-CO (Cordobs), resistente a GEN, ERI y CIP y sensible a RIF y TMS; fSARM-AC: SARM que expresa resistencia a no ms de 1 de los siguientes ATB no lactmicos (GEN, ERI, CIP, RIF, TMS). En el perodo mayo 2000abril 2007 (perodo I) se observ que el porcentaje de SARM en Terapia intensiva (UTI) (rango 61 a 68%) fue significativamente mayor (p<0.05) que en pacientes internados en noUTI (rango 38 a 47%). A partir de mayo de 2007 (perodo II) se observa una disminucin del porcentaje de SARM en UTI y noUTI, rango 24 a 32% y 22 a 26%, respectivamente (NS, p>0,05) y un disminucin significativa en el nmero de aislamientos por ao de SA con respecto al primer periodo: promedio UTI 54 vs 19 y noUTI 141 vs 86; p<0,05. Hasta el ao 2007 dentro de los SARM, predomin el fSARM-HA, en aislamientos de UTI y noUTI (rango 83-100%) con predominio del fSARM-CO. En los aos siguientes predomina el fenotipo SAMS en UTI y noUTI (r 68- 84%). La prevalencia en este perodo de fSARM-HA es comparable a la del fSARM-CA, observndose un mayor aumento de fSARM-CA en noUTI (4 vs 12% respectivamente). La disminucin significativa en la meticilino resistencia en los perodos estudiados coincide con el comienzo
P607 - 27876 SCREENING DE SUSCEPTIBILIDAD DE PATGENOS PERIODONTALES A AMPICILINA, AMOXICILINA ACIDO CLAVULNICO Y AZITROMICINA: INFORME PRELIMINAR. GLIOSCA, LAURA; BRUSCA, MARIA ISABEL(1); MACCARONE, GABRIELA(1); SILVA STEFFENS, NORA(2)
(1) Facultad de Odontologa UBA, (2) Facultad de odontologa Universidad de Chile Introduccin: Algunas formas recidivantes de periodontitis deben ser tratadas con antibiticos. La susceptibilidad de los diferentes microorganismos periodontopatgenos in vitro, varia am-
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pliamente en las poblaciones mundiales y muy poca informacin tenemos sobre el comportamiento de estos microorganismos en Argentina. Por lo tanto, creemos relevante contar con informacin que nos aporte datos cientficos confiables, acerca de un patrn de susceptibilidad mas ajustado a la clnica odontolgica nativa. El objetivo de este trabajo es establecer el perfil de susceptibilidad in vitro frente a ampicilina, amoxicilina - cido clavulnico y azitromicina de los aislamientos periodontopticos pertenecientes al grupo naranja, obtenidos de un grupo de pacientes con periodontitis crnica, con el fin de obtener datos de susceptibilidad locales que nos permitan sustentar una teraputica ajustada a las necesidades clinas odontolgicas de nuestro medio. Materiales y Mtodos: se estudi la susceptibilidad a ampicilina, amoxicilina cido clavulnico y azitromicina mediante la tcnica de dilucin en agar E-test, siguiendo las recomendaciones del CLSI (M11 A7) y las del fabricante (AB BIODISK- E-test) para establecer la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de estos antimicrobianos en cepas de P. intermedia (n= 5), (Pi) Fusobacterium nucleatum (n=7) (Fn) obtenidos a partir de muestras subgingivales de pacientes con periodontitis crnica, (n=25). Resultados: las CIM para ampicilina, amoxicilina cido clavulnico y azitromicina que se obtuvieron para P. intermedia estuvieron entre 0,016 - 8; 0,016 0.047 y 0.5 - 256 ug/ml respectivamente; mientras que para F. nucleatum fueron de 0.016 - 256; 0.016 0.094 y 0.064 - 3 ug/ml respectivamente. Conclusiones: los aislamientos de P. intermedia analizados fueron todos sensibles a la asociacin amoxicilna cido clavulnico, mientras que un 25% de estos aislamientos resultaron productores de beta-lactamasa, disminuyendo la sensibilidad a ampicilina a un 75%. F. nucleatum describi un perfil similar, presentando un 100% de sensibilidad a amoxicilna cido clavulnico y un 85.7% a ampicilina. Ninguna cepa de Fn present produccin de betalactamasa. Ambas especies, presentaron disminucin de la susceptibilidad a la azitromicina.
lamientos de alimentos (n = 93) se distribuyeron: 62% serotipo 1/ 2b y 38% serotipo 4b. Las cepas de origen alimentario (n = 31), mostraron 58% de serotipo 4b y 42% de serotipo 1/2b. Todos los aislamientos de origen animal (n = 6) fueron serotipo 4b. Todas las cepas fueron sensibles a todas las drogas antimicrobianas ensayadas. No se observaron diferencias significativas en los valores de CIM entre las distintas serovariedades y orgenes. Nuestros resultados han demostrado que las cepas de LM aisladas en Argentina durante un perodo de 20 aos siguen siendo sensibles a los agentes antimicrobianos utilizados en el tratamiento de la listeriosis, y que el patrn de sensibilidad no ha cambiado durante ese perodo. Es importante continuar con esta vigilancia en aislamientos humanos y alimentarios a nivel nacional para detectar la emergencia de resistencia.
P609 - 27968 AISLAMIENTO DE Lactobacillus rhamnosus EN UN PACIENTE CON EMPIEMA. NOGUERAS, MONICA(1); BADANO, ANDREA(1); OCHOA, PATRICIA(1); VAY, CARLOS(2); BELMONTE, ADRIANA(1)
(1) Policlnico PAMI II, (2) Hospital de Clnicas, FBI UBA La recuperacin de especies del gnero Lactobacillus de muestras clnicas, suele ser controvertido, por la duda que genera su hallazgo respecto de la importancia del mismo en determinadas patologas. Hay documentacin de su asociacin con peritonitis, meningitis y abscesos, siendo el aislamiento ms frecuente el de las especies L.casei y L. rhamnosus .Se ha hecho mencin de su hallazgo tanto en pacientes inmunocompetentes como inmunodeficientes. Normalmente su hbitat est limitado al tracto gastrointestinal y mucosa genital femenina, su recuperacin a partir de sitios estriles obliga a descartar posibles contaminaciones. Se trata de un bacilo gram-positivo, microaerfilo, no esporulado, catalasa negativa. Nuestro propsito es comunicar el hallazgo de L. rhamnosus en lquido y tejido pleural de un paciente adulto mayor. Caso clnico: Se aisl de una paciente de 81 aos internada en la unidad de terapia intensiva con diagnstico de empiema posterior a la realizacin de una laparoscopia, un cultivo puro de Lactobacillus rhamnosus en 2 muestras: lquido y tejido pleural. En el examen directo del lquido pleural se observ regular cantidad de bacilos gram-positivos y ms de 25 leucocitos polimorfonucleares/ campo. A las 72 hs de incubacin, se aislaron en ambas muestras procesadas colonias muy pequeas alfa hemolticas a partir de los medios como Agar Base Columbia Sangre (suplementados con 1% Extracto de levadura y 1% Proteosa-Peptona N3) y Agar Chocolate, en atmosfera de microaerofilia, y 37C. Para su identificacin se realizaron las siguientes pruebas metablicas: catalasa (-), movilidad (-), reaccin de CAMP (-), hidrlisis de urea de Christensen y de esculina: (-); SH2 en TSI (-) sin gas, fermentacin de hidratos de carbono: ramnosa (+), ribosa (+), arabinosa (-) y manitol (+), resistencia a vancomicina (30g) y ausencia de pigmento. Con estas pruebas se clasific como perteneciente al gnero Lactobacillus, especie rhamnosus. Esta tipificacin fue corroborada en la Ctedra de Microbiologa de la Facultad de Cs. Bioqumicas y Farmacia (UBA). Como terapia previa a los cultivos el paciente era tratado con piperacilina+tazobactama y vancomicina no respondiendo clnicamente a ellos. Ante el informe del examen bacteriolgico se rot el tratamiento a amoxicilina + sulbactama observndose una franca mejora en todos sus parmetros y dada de alta a su domicilio tras un mes de internacin. Si bien es poco frecuente el hallazgo de Lactobacillus rhamnosus como agente etiolgico de empiema, su aislamiento e identificacin exhaustiva, as como su jerarquizacin por el historial mdico, permite utilizar el tratamiento adecuado que redunda en beneficio del paciente con el xito teraputico.
P608 - 27949 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS DE Listeria monocytogenes. MONICA, PRIETO; CLAUDIA, MARTINEZ; LORENA, AGUERRE; ROCCA, MARIA FLORENCIA; CIPOLLA, LUCIA; CALLEJO, RAQUEL
Servicio Bacteriologa Especial. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Introduccin: Listeria monocytogenes (LM) es el agente etiolgico de listeriosis, una infeccin grave, con elevada mortalidad que afecta principalmente a pacientes inmunodeprimidos, mujeres embarazadas, recin nacidos y ancianos. La emergencia de la resistencia se describe a partir de 1988 en un aislamiento humano que era resistente a eritromicina, estreptomicina, cloranfenicol, tetraciclina y minociclina. El uso extensivo de antimicrobianos para mejorar la produccin ganadera ha generado un aumento de la resistencia. Se ha descripto una disminucin de la actividad de penicilina y ampicilina en aislamientos de alimentos, constituyendo un serio problema de salud pblica, dado que estos antibiticos son utilizados en el tratamiento de la listeriosis humana. Objetivo: realizar un estudio retrospectivo con el fin de investigar la sensibilidad a los antimicrobianos de aislamientos de LM de origen humano, alimentario, veterinario y ambiental aislados durante el perodo 1990-2009. Vigilar la emergencia de resistencia y establecer la primera base de datos con los perfiles de sensibilidad a los antimicrobianos. Materiales y mtodos: se determin la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM) en un conjunto de 287 cepas de LM aisladas en la Argentina durante el periodo 1990-2009. Se incluyeron aislamientos de origen clnico humano, veterinario, de alimentos y de medio ambiente. Se utiliz el mtodo de microdilucin en caldo segn normas del CLSI. Los antibiticos ensayados fueron: ampicilina, cloranfenicol, cotrimoxazol, eritromicina, gentamicina, penicilina G, tetraciclina y rifampicina. La seroagrupacin se realiz por PCR mltiple y el serotipo fue confirmado por el mtodo de aglutinacin tradicional. Resultados: los aislamientos de pacientes con listeriosis humana (n = 157) mostraron una prevalencia del serotipo 4b (71%) y el restante 29% correspondi a serotipo 1/2b. Los serotipos en ais-
P610 - 27972 EPIDEMIOLOGA Y MANIFESTACIONES CLNICAS DE LA INFECCIN POR Nocardia spp. AGUERRE, LORENA; PRIETO, MONICA; ROCCA, MARIA FLORENCIA; CIPOLLA, LUCIA; MARTINEZ, CLAUDIA; CALLEJO, RAQUEL
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn
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Introduccin: Nocardia spp. es un actinomiceto aerobio, grampositivo ramificado, parcialmente cido alcohol resistente. Las infecciones por Nocardia spp. eran infrecuentes hasta hace unos aos y la experiencia clnica era limitada. La presentacin ms frecuente es la infeccin pulmonar. Los principales factores de riesgo son: un sistema inmunitario debilitado o afectados de comorbilidad pulmonar crnica subyacente, como enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC), asma, sarcoidosis crnica y bronquiectasia. Los pacientes con VIH/SIDA, cncer, diabetes, alcoholismo y trasplantados representan un grupo altamente susceptible a infeccin pulmonar o diseminada. No obstante, hoy se observan infecciones por Nocardia spp. en inmunocompetentes. Otras infecciones pueden afectar piel y partes blandas y sistema nervioso. Objetivo: caracterizar genotpicamente las especies de Nocardia y describir las caractersticas clnicas de 32 pacientes durante el perodo 2008-2010. Materiales y mtodos: se estudiaron 32 aislamientos de pacientes cuyas principales caractersticas clnicas se describen a continuacin. Las colonias se identificaron en forma preliminar por la demostracin de micelio areo y las coloraciones de Gram y Kinyoun. La identificacin de especie se realiz por secuenciacin del gen 16S rARN. Resultados: los pacientes fueron 32 y correspondieron 23 al sexo masculino (71,8%) y 9 al sexo femenino (28,2%). Veintiseis pacientes presentaron comorbilidades asociadas y 6 no tenan factores predisponentes. Nueve especies de Nocardia fueron causantes de las infecciones en esta serie de pacientes: N. cyriacigeorgica (n= 12) (37.5%), N. farcinica (n=6) (18,7%), N. abscessus (n=5) (15,6%), N. asiatica (n=3) (9,4%), N. exalbida (n=2) (6,4%), N. beijingensis (n=1) (3,1%), N. arthritidis (n=1) (3,1%),N. nova (n=1) (3,1%) y N. brasiliensis (n=1) (3,1%). Las formas clnicas respiratorias fueron: neumona n= 14 (43.8%), empiema pleural crnico n=1 (3,1%); del SNC: absceso cerebral n=6 (18,8%), meningitis n=1 (3,1%); piel y partes blandas: celulitis n=2 (6,3%), ndulo cutneo n=1 (3,1%), absceso de glteo n=2 (6,3%), absceso de pared abdominal n=1 (3,1%), absceso dorsal n=1 (3,1%), infeccin asociada a catter n=1 (3,1%); otras localizaciones: ganglio n=1 (3,1%), infeccin de prtesis n=1 (3,1%). La evolucin fue favorable en 22 pacientes (68,7%) y desfavorable en 10 (31,3%). En esta serie de pacientes la infeccin mas frecuente fue la neumona de las cuales 7 casos fueron por N. cyriacigeorgica, descripta en el 2001 y que ha sido recuperada como agente etiolgico de infeccin humana en Europa, Japn, USA y Canad y considerado actualmente com un patgeno instalado y no un emergente. Es importante destacar 4 abscesos cerebrales, cuyo agente etiolgico fue N. farcinica, y la caracterstica principal fue el perfil de resistencia a los antimicrobianos. Es fundamental la identificacin correcta de Nocardia a nivel especie, debido a la variacin del potencial patognico entre especies y como gua en la eleccin correcta de los antimicrobianos para su tratamiento.
lamiento se realiz un antibiograma por difusin siguiendo las recomendaciones de CLSI (M31 A3 2008) y Concenso sobre pruebas de sensibilidad a antimicrobianos en Enterobacteriaceae (2005). Se emplearon monodicos (Britania SA) de ampicilina (AMP 10 g), amoxiclavulnico (AMC 20/10 g), ceftazidima (CAZ, 30 g), ceftazidima/ c. clavulnico (CAZ /CLA 30/10 g), cefoxitima (FOX 30g), piperacilina (PIP 100 g), piperacilina/tazobactam (TZP 100/10 g), cefalotina (CF 10 g), imipenem (IMP 10 g), meropenem (MER 10g), cefepime (FEP 30 g). Resultados: En un 14,25% (16/112) del total de los aislamientos de E.coli se identific fenotipicamente la presencia de algn tipo de enzima inactivante, correspondiendo a aislamientos de: Bovinos: 2 BLEA, Perros: 4 Hiper AmpC y 2 Hiper BLEA, Felino: 1 Hiper BLEA y 7 Hiper Amp C, Equino: ninguno. Conclusiones: La lectura e interpretacin del patrn de resistencia tiene como finalidad evitar la informacin de falsos sensibles y monitorear las betalactamasas que pueden estar presentes en los aislamientos de origen animal local y, con esta informacin volcada a la clnica, evitar la posibilidad de transmisin de esa resistencia. Los resultados obtenidos reflejan la mayor presin antibitica a que estn expuestos los animales domsticos de compaa como caninos y felinos y proporcionan datos a la escasa literatura local sobre este tema en animales domsticos. Subsidio Mastitis Bovina UBACyT V011 2008-2011.
P612 - 27981 MEDIASTINIS POS ESTERNOTOMA POR Corynebacterium striatum. MARINO, RICARDO; EZCURRA, CRISTINA; SCHIMANK, ENRIQUE; NEIRA, LILIANA; QUINTEROS, MIRTA; REBOLLO, MIRTA.
Policlnico del Docente (OSPLAD) La mediastinitis aguda es una infeccin poco frecuente, potencialmente fatal, que afecta las estructuras del mediastino. Provocada por perforacin del esfago y/o diseminacin contigua desde un foco orofarngeo. Actualmente son pos ciruga cardaca. Su frecuencia oscila entre el 0,5-8% y la mortalidad entre 15 - 50%. Entre los microorganismos involucrados encontramos: cocos gram-positivos (estafilococos > 50%, estreptococos > 10%), bacilos gram-negativos (E. coli, Enterobacter spp., Klebsiella pneumoniae 20%) y polimicrobianos 10%. El aislamiento de hongos y otros microorganismos es muy infrecuente (< 1%). Se presenta el caso clnico de una mediastinitis aguda pos esternotoma con aislamiento de Corynebacterium striatum. Caso Clnico: paciente masculino de 77 aos. Antecedentes: dislipemia, obesidad, tabaquismo, IAM, EPOC. Pos cinecoronariografa se detecta severa estenosis coronaria de la descendente anterior y coronaria izquierda (> 80%) motivo por el cual se realiz un doble by pass. 7 das pos ciruga presenta dehiscencia de sutura, flogosis del rea con salida de material purulento, inestabilidad del esternn, fiebre y aumento de glbulos blancos. Inicia tratamiento antibitico con imipenen + vancomicina + rifampicina. Se realiza toilette quirrgica dejando herida abierta trax abierto. Intercurre con insuficiencia renal aguda (requiriendo hemodilisis) y asistencia respiratoria mecnica prolongada. Bacteriolgicamente se detecta Corynebacterium striatum en puncin aspirativa de piel y partes blandas PyPB- y en la muestra quirrgica de toilette (fibrina, lquido mediastinal, alambre y mdula sea). Aspectos microbiolgicos: Corynebacterium striatum forma parte de la flora normal de piel y mucosas. Su participacin en infecciones severas es infrecuente y su hallazgo se encuentra asociado a infecciones de heridas quirrgicas y presencia de cuerpos extraos. En el caso clnico que se reporta el material quirrgico y la puncin aspirativa de PyPB revelaron la presencia en el gram de abundantes leucocitos y abundantes bacilos gram-positivos corineformes. Presenta resistencia a ciprofloxacina, rifampicina, eritromicina y clindamicina. Sensibilidad: CIM daptomicina 0.047 ug/ml, vancomicina 0.5 ug/ml, meropenem 0.25 ug/ml. Ante la trpida evolucin se modific el esquema teraputico antibitico a daptomicina ms imipenen. Comentarios: Corynebacterium striatum fue el nico microorganismo aislado en todos los materiales estudiados habindose observado adems en la microscopa directa. La mediastinitis aguda es una infeccin poco frecuente pero muy grave. La presencia de urea elevada, leucocitosis, cultivos positi-
P611 - 27974 Escherichia coli AISLADAS DE INFECCIONES EN ANIMALES DOMSTICOS: INACTIVACIN ENZIMTICA DE ANTIBITICOS BETALACTMICOS (COMUNICACIN PRELIMINAR). PEREYRA, MARIA DELIA; BARNECH, MARIA LAURA; DENAMIEL, GRACIELA; CARLONI, GRACIELA; GENTILINI, ELIDA
Microbiologa, Facultad Ciencias Veterinarias, UBA Introduccin: la deteccin de aislamientos de Escherichia coli resistentes a betalactmicos resulta de importancia en la clnica veterinaria, dado el empleo frecuente de estos antibiticos en la prctica diaria. El fenotipo de resistencia ms frecuente a esta gran familia de antibiticos, es por inactivacin enzimtica. Todas las E.coli presentan betalactamasa cromosmica natural en niveles basales (AmpC) o hiperproducida (Hiper AmpC) y pueden adquirir otras a travs de plsmidos como las beta-lactamasas de espectro ampliado (BLEA, Hiper BLEA) y de espectro extendido (BLEE). El objetivo de este estudio fue determinar a travs de la interpretacin del patrn de resistencia el tipo de betalactamasa presente en los aislamientos de Escherichia coli provenientes de procesos infecciosos en bovinos, caninos, felinos y equinos. Materiales y metodos: se estudiaron 112 aislamientos de E. coli (35 mastitis bovina, 58 infecciones urinarias en caninos, 11 de infecciones urinarias en gatos y 8 de metritis en yeguas). De cada ais-
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vos, tipo de ciruga, obesidad, tabaquismo, enfermedad pulmonar obstructiva crnica y la edad avanzada son signos de pronstico desfavorable. El tratamiento incluye debridacin quirrgica, lavado en el 100% de los pacientes, mtodos de irrigacin continua con iodopovidona y/o solucin con antibiticos y posteriormente azcar. En una segunda etapa se realiza la reconstruccin del trax. Siendo tan alta la morbimortalidad deben identificarse los factores de riesgo de cada paciente para tratar de prevenir esta complicacin.
P613 - 27994 ARTRITIS SPTICA POR Salmonella Typhimurium EN PACIENTE PEDITRICO. SESMA, A; FRANCISETTI, V; MANGIATERRA, S
Seccin Bacteriologa. Laboratorio Central. Hospital Italiano de Crdoba Salmonella spp. es una bacteria enteroinvasiva capaz de causar infecciones que pueden tener diferentes manifestaciones clnicas. Los cuadros gastrointestinales asociados a intoxicaciones alimentarias son la presentacin ms comn. Generalmente son autolimitados y caracterizados por fiebre y diarrea. Otras presentaciones clnicas menos frecuentes, pero ms severas incluyen bacteriemia, sepsis e infecciones focales. Estas ltimas pueden afectar distintos sitios del organismo y, en general, ocurren despus de una bacteriemia y en pacientes con algn tipo de inmunodeficiencia. Se presenta un caso de un paciente peditrico de 2 aos de edad que lleg a la consulta con vmitos, fiebre y diarrea. Se solicit recuento de polimorfonucleares (PMN) en materia fecal (mayor a 25 PMN por campo de 1000X), y coprocultivo. Se lo diagnostic como gastroenteritis aguda enteroinvasiva y se intern al paciente recibiendo aporte de lquidos y tratamiento con cloranfenicol endovenoso. En el coprocultivo se obtuvo desarrollo de Salmonella spp. A las 72 horas se le indic alta hospitalaria con tratamiento antibitico con fosfomicina evolucionando favorablemente. Al mes de su internacin el paciente regres por dolor en rodilla derecha, con limitacin de la movilidad y fiebre.Se tomaron dos muestras de hemocultivos que resultaron negativas. Se realiz puncin-aspiracin de lquido articular y el material se envi a la Seccin de Bacteriologa para su estudio. En el examen directo del mismo se observ una importante reaccin inflamatoria y presencia de bacilos gram-negativos. En el cultivo se obtuvo desarrollo de Salmonella spp. El antibiograma evidenci sensibilidad a cefalosporinas de tercera generacin, trimetoprima-sulfametoxazol, cloranfenicol y resistencia a ampicilina, igual al antibiotipo de la bacteria aislada en materia fecal. Las cepas del lquido articular y coprocultivo fueron derivadas para su serotipificacin al Servicio de Enterobacterias del Instituto Carlos G. Malbrn. Ambas fueron identificadas como Salmonella Typhimurium. El paciente recibi tratamiento antibitico con ceftriaxona con buena evolucin clnica. Se destaca este caso por la baja frecuencia de este tipo de presentacin clnica a punto de partida de una gastroenteritis aguda en pacientes peditricos.
bles a otras familias de antibiticos. La portacin nasal es un reconocido factor de riesgo para la infeccin por este patgeno. En el ao 2007, demostramos la prevalencia de un tipo clonal predominante, denominado CA-PFGE A entre aislamientos de SAMR provenientes de infecciones adquiridas en la comunidad recuperados de pacientes en diferentes reas geogrficas de nuestro pas. CA-PFGE A posee la leucocidina de Panton-Valentine (LPV), SCCmec IV, spa t311 y ST5. Objetivo: Investigar la presencia del clon CA-PFGE A (SAMR-IV-ST5- spa t311-LPV+) entre aislamientos provenientes de infecciones asociadas al mbito sanitario y en portadores sanos. Materiales y mtodos: se analizaron las siguientes colecciones de aislamientos: A- Aislamientos de un estudio realizado en el ao 2008 en el que se evalu la colonizacin por S. aureus en una poblacin infantil en la ciudad de San Antonio de Areco. Se recuperaron 317 aislamientos; 14 de ellos presentaron fenotipo SAMR-CA (resistencia a -lactmicos nicamente o acompaada de resistencia a slo otro antimicrobiano). B- Aislamientos de un estudio en el cual se recolectaron todos los aislamientos de S. aureus correspondientes a pacientes ambulatorios e internados que se atendieron en el Hospital de Clnicas en el ao 2008 (304 en total). El fenotipo SAMR-CA fue detectado en 26 de ellos. Todos ellos fueron previamente caracterizados, por lo que se conoce el tipo de SCCmec y la presencia o ausencia de LPV. Se tipificaron por PFGE los 40 aislamientos con fenotipo SAMR-CA provenientes de stos estudios previos y se compararon con aislamientos representativos del clon CA-PFGE A. Resultados: en ambos estudios se encontraron aislamientos estrechamente relacionados con el clon CA-PFGE A. 8/14 recuperados en el estudio de portacin y 10/26 asociados al mbito hospitalario. Al evaluar las historias clnicas de estas 10 cepas, 3 de ellas correspondieron a infecciones de inicio en la comunidad, 4 asociadas a cuidados de la salud, 1 intrahospitalaria y 2 correspondieron a pacientes ambulatorios de los cuales no se cont con historias clnicas. LPV fue detectada en todos los aislamientos excepto en 4 aislamientos de portacin correspondientes al mismo subtipo clonal. Conclusiones: el hallazgo de estos aislamientos de SAMR-CA tanto en el ambiente hospitalario como en portacin de nios sanos representa una alerta que obliga a incrementar la vigilancia epidemiolgica a fin de prevenir su diseminacin, teniendo en cuanta la epidemicidad y virulencia
P615 - 28033 ESTUDIO DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA EN ESTREPTOCOCOS BETA- HEMOLTICOS AISLADOS DE HISOPADOS FARNGEOS. PONESSA, A; ALL, L; GAMBANDE, T; DLUGOVITZKY, D; LUCIANO, M; CORDOBA, L; LOPEZ, S; COLMEGNA, E; COCA, M; NOTARIO, R
Facultad de Ciencias Mdicas, Rosario El tratamiento de eleccin para faringitis estreptoccicas contina siendo penicilina, sin embargo se deben considerar otras drogas en pacientes alrgicos. El objetivo de este estudio es describir la sensibilidad de estreptococos beta-hemolticos aislados de hisopados farngeos a diferentes antibacterianos. Metodologa empleada: las muestras de hisopados farngeos se cultivaron en agar sangre de carnero al 5% para la bsqueda de estreptococos beta hemolticos, la identificacin se efectu segn la metodologa convencional, la confirmacin de grupo se hizo empleando tcnicas de coaglutinacin. Para las pruebas de sensibilidad se utiliz el mtodo de difusin con discos segn normas de CLSI, se ensayaron los siguientes antibiticos: penicilina (10U) eritromicina 15 g), clindamicina (2 g), levofloxacina (5 g), tetraciclina (30 g), cloranfenicol (30 g), gentamicina (120 g) y estreptomicina (300 ug). Los discos de eritromicina y clindamicina se colocaron a 2 cm de distancia para observar los diferentes fenotipos de resistencia. Entre abril de 2009 y junio de 2010 se aislaron 107 estreptococos beta-hemolticos de 710 hisopados farngeos recolectados de pacientes con cuadro clnico de faringitis. De los aislados 75% (80) correspondieron al grupo A; 17% (18) al grupo C y 8% (9) al grupo G. Todos los aislados fueron sensibles a penicilina; ninguno de ellos mostr resistencia a altos niveles de gentamicina o estreptomicina. Uno de los aislamientos mostr sensibilidad intermedia a cloranfenicol (grupo A); 6 sensibilidad intermedia a tetraciclina (3 grupo A, 2 grupo C) y
P614 - 27999 Staphylococcus aureus RESISTENTE A METICILINA: PRESENCIA DEL CLON COMUNITARIO SCCmec IV, spa T1311 y ST5 EN INFECCIONES ASOCIADAS AL AMBIENTE HOSPITALARIO Y EN NIOS SANOS. GARDELLA, NOELLA(1); CUIROLO, ARABELA(1); DI GREGORIO, SABRINA(1); MURZICATO, SOFIA(2); CRUDO, FABIO(2); PERAZZI, BEATRIZ(3); VAY, CARLOS(3); GUTKIND, GABRIEL(1); FAMIGLIETTI, ANGELA(3); MOLLERACH, MARTA(1)
(1) Facultad de farmacia y Bioqumica UBA, (2) Hospital San Antonio de Areco, (3) Hospital de Clnicas, FFyB UBA Introduccin: La emergencia de S. aureus resistente a meticilina (SAMR) es un problema severo que hasta hace algunos aos se limitaba casi exclusivamente al ambiente hospitalario. Sin embargo, en los ltimos aos ha surgido como un patgeno emergente de la comunidad (SAMR-CA). Estos aislamientos se caracterizan por presentar el SCCmec tipo IV o V que le confiere resistencia a antibiticos -lactmicos; siendo generalmente sensi-
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uno sensibilidad intermedia a levofloxacina (grupo A). Con respecto a eritromicina 21 (20%) no fueron sensibles (intermedios y resistentes): 11 del grupo A y 9 del grupo C; 11 de estos aislados fueron sensibles a clindamicina sugiriendo un mecanismo de eflujo, slo en 2 de los aislamientos, ambos del grupo A, se observ un D-test positivo sugiriendo un mecanismos MLS inducible. Como era de esperar no se observ resistencia a penicilina; pero este trabajo revela un incremento en la resistencia a eritromicina como ya fue documentada por otros estudios en el pas. Con respecto al fenotipo de resistencia en el 52% se presume un mecanismo de eflujo, 38% constitutivo y 9% inducible. Se requiere una cuidadosa vigilancia en los aislamientos de estreptococos betahemolticos para monitorear la aparicin de resistencia a los diferentes antibioticos y sobre todo a aquellos que son prescriptos frecuentemente como alternativa teraputica a los beta lactmicos orales.
AGUSTIN(1); CITTADINI, ROSANA(2); VAY, CARLOS(1,2); GUTKIND, GABRIEL(1); MOLLERACH, MARTA(1)

(1) Facultad de farmacia y Bioqumica UBA, (2) Santorio Mater Dei Antecedentes: En trabajos anteriores documentamos la emergencia en Argentina de aislamientos de Streptococcus agalactiae portadores del gen lnuB que no estaban relacionados entre s en cuanto a su origen epidemiolgico. El gen lnuB codifica una enzima llamada lincosamida-nucleotidil transferasa que hasta la fecha es muy poco frecuente en este microorganismo. En este trabajo intentamos explorar si la presencia del gen lnuB puede atribuirse a la diseminacin de un nico clon. Metodologa: se estudiaron 4 aislamientos no relacionados de S. agalactiae, tres de ellos recuperados de mujeres embarazadas a partir de hisopado vaginal y rectal en la bsqueda de estreptococos Grupo B (EGB), el otro aislamiento se recuper de una lesin del glande. La bsqueda e idntificacin de EGB fue realizada de acuerdo al esquema convencional. Se determin la sensibilidad a antibiticos por difusin con discos siguiendo las recomendaciones del CLSI. Se analiz la presencia de genes codificantes de resistencia ermB, mef y lnuB mediante PCR. El anlisis de clonalidad fue realizado mediante PFGE utilizando las enzimas SmaI y ApaI. Resultados: los 4 aislamientos fueron sensibles a penicilina y eritromicina pero resistentes a clindamicina y lincomicina presentando el fenotipo L. En todos los casos se confirm la presencia del gen lnuB y ausencia de mef y en dos casos se confirm la presencia de ermB. El anlisis de los pulsotipos sugiere que los 4 aislamientos estn clonalmente relacionados y difieren de otros de la misma especie. Conclusiones: estos resultados permiten sugerir que la emergencia de S. agalactiae con fenotipo L podra deberse, al menos en parte, a la diseminacin de un clon portador del gen lnuB. Por otra parte, el significado de la presencia simultnea de ermB y lnuB en 2/4 aislamientos con fenotipo L deber ser explorada, en particular, considerando que los macrlidos son utilizados en la quimioprofilaxis intraparto en pacientes alrgicos a penicilina.
P616 - 28058 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA DE N. gonorrhoeae EN ARGENTINA PROVSAG 2009. GALARZA, PATRICIA; PAGANO, IRENE(1); OVIEDO, CLAUDIA(1); REGGIANE, SILVIA(1); RED, ITS(2)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn, (2) Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Gonococos (PROVSAG) Desde 1992 el CNR conduce el Programa Nacional de Vigilancia de la Sensibilidad Antimicrobiana de Gonococo (PROVSAG) para monitorear la prevalencia y tipos de gonococos resistentes en Argentina. La Red Nacional de Infecciones de Transmisin Sexual, comprende en la actualidad 67 laboratorios distribuidos en todo el pas. Los aislamientos de Neisseria gonorrhoeae (NG) son derivados por los laboratorios de la Red que participan del PROVSAG al CNR para estudios de sensibilidad. Se presentan los resultados de sensibilidad de las cepas NG estudiadas durante el 2009, a fin de describir las variaciones en la frecuencia de los diversos fenotipos de resistencia. Durante el ao 2009 se remitieron al CNR un total de 280 aislamientos provenientes de 27 laboratorios pertenecientes a la Red de ITS. Las cepas fueron conservadas a 70 C en caldo tripticasa soya + glicerol 20%. La deteccin de beta-lactamasa (blac) se realiz por el mtodo de la cefalosporina cromognica. Se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) mediante el mtodo de dilucin en medio slido segn normas DEL CLSI para penicilina (P), tetraciclina (T), espectinomicina (SP), ciprofloxacina (CP), ceftriaxona (CRO) y azitromicina (AZ). El 12,1% (34/280) de los aislamientos fueron blac positiva (PPNG). Dos de estas cepas present adems resistencia cromosmica a tetraciclina (2 y 4 g/ ml). Los datos aportados por la determinacin de la CIM se muestran en la siguiente tabla:
Antibitico Penicilina Tetraciclina Espectomicina Ciprofloxacina Ceftriaxona Azitromicina %R 20,4 23,2 0 21,8 0 3,2 %I 79,6 61,8 0 1,1 0 72,9 %S 0 15,0 100 77,1 100 23,9 CIM 50 1 1 32 0,008 0,008 0,25 CIM 90 8 4 32 8 0,016 0,5 Rango CIM g/ml 0,125 - 128 0,06 - 32 16 - 32 0,002 - 16 0,001 - 0,016 0,06 - 4
P618 - 28061 ENDOCARDITIS INFECCIOSA POR Abiotrophia defectiva EN PACIENTE HIV. MORENO, SUSANA; POLITANO, LORENA; CARBEL, MARIA
Hospital Rawson La endocarditis infecciosa es causada principalmente por microorganismos grampositivos, particularmente Streptococcus spp. Sin embargo, 5 a 20% de los casos quedan sin diagnstico microbiolgico, determinando un grupo denominado endocarditis con cultivo negativo. Se estima que entre 3 y 6% de estos cuadros clnicos son causados por estreptococos nutricionalmente variables (SNV). Estos microorganismos desarrollan en cultivos slo en presencia de L-cistena o piridoxal. Basndose en estudios moleculares, actualmente se dividen en dos gneros denominados Abiotrophia spp y Granulicatella spp. Se aislan con baja frecuencia, como agente de infecciones oportunistas en muestras clnicas de pacientes inmunocomprometidos. Caso clnico: paciente sexo masculino de 63 aos de edad, ingresa febril, lcido, soplo sistlico 3/6. Refiere antecedentes de estado confusional y fiebre espordica de 3 meses de evolucin. Antecedentes patolgicos: hipertensin arterial, diabetes tipo II, insuficiencia cardiaca, infarto agudo de miocardio, HIV (+), no drogadicto IV, relata extraccin dentaria 4 meses antes. Laboratorio: GB 8.300 con frmula normal, hemocultivos 2/2 positivos para cocos gram positivos en cadenas, sistema BACT/ALERT (Biomerieux). Se inicia tratamiento con penicilina ms gentamicina. Ecocardiograma transtorcico: imagen compatible con vegetacin en valva posterior de vlvula mitral, ecocardiograma transesofgico: valva posterior de vlvula mitral con vegetacin e imagen compatible con absceso perforado. Microbiologa: la cepa aislada no desarroll en medios habituales, si en agar chocolate (Biomerieux), observndose satelitismo con una estria de S. aureus ATCC 25923, resultando positivas las pruebas de PYR y LAP. La cepa se deriv al Instituto Malbran, confirmando su identificacin como Abiotrophia defectiva. El paciente es sometido a ciruga cardiovascular, durante la cual se observa que presentaba en la vlvula aortica tricuspdea 2 a 3 vegetaciones, la vlvula mitral
La variacin de los fenotipos de resistencia es cada vez ms frecuente, encontrndose en este ao 16 diferentes combinaciones de resistencias a distintos antibiticos tanto por mecanismo plasmdico como cromosmico. Los fenotipos prevalentes fueron los que no estaban asociados a otras resistencias: PPNG 10,7% (30/280), NG con resistencia plasmidica a T (TRNG) 8,9% (25/ 280) y NG resistentes a Cip (QRNG) 13,9% (39/280), el resto conforman aislamientos con multiresistencia. Se destaca la alta resistencia a quinolonas alcanzada, destacndose la provincia del chaco y CABA. Es notable la reaparicin de cepas TRNG sobre todo en las provincias de Crdoba y Santa Fe. Todas las cepas fueron sensibles a espectinomicina y ceftriaxona, por lo tanto pueden seguir usandose como tratamiento de primera lnea.
P617 - 28060 EMERGENCIA DE AISLAMIENTOS DE Streptococcus agalactiae CLONALMENTE RELACIONADOS PORTADORES DEL GEN lnuB. BONOFIGLIO, LAURA(1); ZAVALA,
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presentaba vegetacin con destruccin de la misma, perforacin de la valva posterior y absceso anular en la zona posterior. Se realiza doble reemplazo valvular, falleciendo en el postoperatorio por fallo multiorganico. Discusin: Abiotrophia defectiva, pertenece a la microbiota normal de la cavidad oral. Se asemeja por su aspecto microscpico y caracteres fenotpicos a otros gneros, tales como Streptococcus spp. y Enterococcus spp., por lo que puede ser identificada en forma errnea. La endocarditis por Abiotrophia defectiva generalmente implica mayor morbilidad y mortalidad que las causadas por Streptococcus del grupo viridans. Con frecuencia se requiere tratamiento quirrgico para colocacin de prtesis valvulares. La endocarditis en pacientes HIV + es mas frecuente en aquellos que son adictos a drogas endovenosas. Ante cultivos negativos se debe tener presente este gnero que si bien es poco frecuente. la implicancia de su patogenia es importante por su elevada mortalidad, agregada a la inmunodepre-sin del hospedador.
P619 - 28067 COMPLEJO Burkholderia cepacia EN UN HOSPITAL DE NIOS EN EL CUAL FUNCIONA UN CENTRO DE FIBROSIS QUSTICA: ES ALTO EL RIESGO DE TRANSMISIN A PACIENTES NO FIBROQUISTICOS?. GALANTERNIK, L(1); DEGROSSI, J(2); LOPEZ DE VOLDER, A(2); FARIAS, J(5); FALLO, A(4); TEPER, A(3); PROCOPIO, A(1)
(1) Servicios de Microbiologa, (3) Centro Respiratorio, (4) Unidad de Enfermedades Infecciosas, (5) Terapia Intensiva, Hospital de Nios Dr. R. Gutirrez, GCBA. (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica, Universidad de Buenos Aires El complejo Burkholderia cepacia (cBc) es un grupo de bacterias patgenas oportunistas que presentan un impacto clnico y social importante en los pacientes con Fibrosis Qustica (FQ). La transmisin de cBc entre estos pacientes esta bien documentada. Sin embargo, no hay mucha informacin en la transmisin entre pacientes FQ y pacientes no FQ. Se presentan dos episodios de infeccin por cBc en pacientes no FQ aparentemente relacionados a pacientes FQ. El primer caso involucr a dos pacientes inmunocomprometidos en la Unidad de Enfermedades Infecciosas (UEI), donde haba estado internado un paciente FQ con infeccin crnica por cBc. El segundo caso se presento en Terapia Intensiva (UTI) en un paciente no fibroqustico, durante la internacin de un paciente FQ con infeccin intermitente por cBc. Las cepas de los pacientes no FQ se recuperaron de hemocultivos. Muestras de aire y superficies en las unidades de internacin fueron analizadas. Los aislamientos se identificaron por pruebas bioqumicas y PCR del recA. La identificacin de especie de las cepas de cBc se determin por anlisis de secuencia del gen recA. La infeccin de los pacientes no FQ en la UEI fue debida a B. cenocepacia B, en tanto que la del paciente FQ internado en la misma sala fue B. contaminans. Las cepas aisladas en UTI tambin fueron diferentes: B. cepacia en el paciente con FQ y B. contaminans en el paciente no FQ. En una muestra de aire de la UEI se detect la presencia de B. contaminans. El anlisis de las especies aisladas no mostr evidencia de infeccin cruzada entre pacientes FQ y pacientes no FQ. Si bien es necesario contar con medidas estrictas de control de la infeccin en pacientes FQ colonizados con cBc, la infeccin en pacientes no FQ no significa que el origen haya sido a partir del paciente FQ. Otras fuentes de infeccin deberan ser investigadas, tales como el medio ambiente o material mdico contaminado.
rias. A comienzo de la dcada del 90 se describieron cepas resistentes a penicilinas por produccin de -lactamasa, asociada a resistencia de alto nivel a gentamicina y aos mas tarde se describi resistencia adquirida a glucopptidos. OBJETIVO: comunicar el hallazgo de un aislamiento de Enterococcus faecalis productor de -lactamasa y analizar datos de vigilancia a distintos antimicrobianos en aislamientos de orina en el perodo: enero de 2000 a junio de 2010. MATERIALES Y METODOS: se analizaron los datos ingresados en el programa de vigilancia WHONET de 131 cepas aisladas de urocultivo de pacientes internados (n: 90) y ambulatorios (n: 41). La susceptibilidad a antibiticos fue determinada por mtodos de difusin de acuerdo con las recomendaciones CLSI y la CIM empleando el mtodo epsilomtrico. La deteccin de -lactamasas se efectu por mtodo microbiolgico y empleando nitrocefn. Se investig la presencia del gen que codifica para -lactamasa mediante amplificacin por PCR empleando ADN genmico como templado. Resultados: Los porcentajes de resistencia observados a los distintos antibiticos ensayados se resumen a continuacin: ampicilina (AMP) 0%, ampicilina/sulbactama (AMS) 0%, nitrofurantona 1%, vancomicina 0%, teicoplanina 0%, gentamicina de alta carga 56% y estreptomicina de alta carga 49%. La media observada para los halos de AMP y AMS es de 25,7 mm y 27,3 mm respectivamente. Un aislamiento recuperado en junio de 2010, en un paciente internado, mostr un halo de 18 mm para AMP y de 26 mm para AMS. En el mismo se observ la presencia de -lactamasas mediante ambos mtodos fenotpicos. Sobre este aislamiento se amplific un fragmento por PCR compatible con el esperado para blaZ. Conclusiones: La disminucin en la medida del halo a AMP con respecto a la media poblacional y la diferencia de halo mayor a 5 mm para AMS hizo sospechar la presencia de una lactamasa como mecanismos de resistencia. Si bien este mecanismo no tiene implicancia en el tratamiento de la infeccin urinaria, su importancia es epidemiolgica debida a su baja incidencia. La vigilancia de la resistencia es una herramienta til para monitorear la emergencia o re-emergencia de mecanismos de resistencia, para poder alertar sobe medidas de control de infecciones y evitar su diseminacin.
P621 - 28075 PREVALENCIA Y SENSIBILIDAD A LOS ANTIBITICOS DE BACTERIAS AISLADAS EN HEMOCULTIVOS DE UN SERVICIO DE NEONATOLOGIA. CINQUEGRANI, MARIA DEL VALLE; BELTRAMINO, YANINA
Maternidad Faustino Herrera, ciudad de La Banda, Santiago del Estero La sepsis neonatal es una de las causas ms frecuentes de hospitalizacin en los servicios de neonatologa, las infecciones constituyen una causa importante y frecuente de morbimortalidad en el periodo neonatal, por lo que es necesario conocer la etiologa y susceptibilidad antimicrobiana para instaurar un tratamiento temprano y efectivo crucial para la sobrevida del neonato. El objetivo de este estudio fue conocer la tasa de positivizacin de hemocultivos de grmenes encontrados en recin nacidos con factores de riesgo de sepsis, atendidos en el servicio de neonatologa de La Maternidad Faustino Herrera de la ciudad de La Banda, Santiago del Estero. Se realizo un estudio retrospectivo de las bacteriemias significativas detectadas en un periodo de agosto de 2007- agosto 2009. La identificacin de los microorganismos aislados se realizo mediante mtodos convencionales y los estudios de sensibilidad antibitica por mtodo de difusin con discos en agar segn CLSI. Los criterios de inclusin fueron: hijos de madres con infeccin urinaria y embarazo no controlado, ruptura prematura de membranas, neonatos con fiebre en las primeras 24 hs de vida, distress respiratorio, bajo peso, y pretrminos. Se procesaron 498 muestras de hemocultivos, utilizando mtodo manual con frascos Britania. El 25% result positivo (123 muestras). Los grmenes ms frecuentes aislados fueron: Estafilococo coagulasa negativa (36,6%), Streptococcus viridans (12,2%), Pseudomonas aeruginosa (8,9%), Klebsiella pneumoniae (8,9%), Staphylococcus aureus (7,3%), Proteus mirabilis (7,3%), estreptococo beta hemoltico (4,8%), Escherichia coli (4,8%), Acinetobacter spp. (3,25%), Enterococcus faecalis (2,4%), Can-
P620 - 28073 Enterococcus faecalis b-LACTAMASA POSITIVO AISLADO DE UROCULTIVO. VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A DISTINTOS ANTIMICROBIANOS. QUINTEROS, MIRTA(1); DI CONZA, JOSE(2); PINO, M(2); BUSCEMI, LUIS(1); COSTA, NORA(1); DEODATO, BETINA(1); WALKER, LAURA(1); PASSICOT, GISELLA(1); GUTKIND, GABRIEL(2)
(1) Hospital de Infecciosas Dr. F. J. Muiz (2) Facultad de Farmacia y Bioqumica - UBA Enterococcus faecalis es un reconocido microoganismo uropatgeno, sensible habitualmente a ampicilina y nitrofuranos, antibiticos utilizados en el tratamientos de las infecciones urina-
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dida albicans (2,4%) y otros (1,15%). Se encontro un 82% de meticilino resistencia en estafilococo coagulasa negativa y un 22% en Staphylococcus aureus. Entre los grmenes gram-negativos, se encontr betalactamasa de espectro extendido en: Klebsiella pneumoniae (72%), Pseudomonas aeruginosa (23%), Proteus mirabilis (81%), Escherichia coli (50%). La sensibilidad a gentamicina fue de un 40% en todos los aislamientos y un 80% a amikacina; a piperacilina tazobactam 82% y a ciprofloxacina 100%, antibitico con uso restringido en neonatologa. Conclusin: la bacteria que prevaleci fue estafilococo coagulasa negativa con un alto porcentaje de meticilino resistencia, coincidiendo con la bibliografa; entre los bacilos gram-negativos predomin Klebsiella pneumoniae, Pseudomona aeruginosa, Proteus mirabilis, y E. coli, con un alto porcentaje de betalactamasa de espectro extendido, por lo que debera hacerse un uso restringido de las cefalosporinas de tercera generacin y un monitoreo continuo de la sensibilidad antibitica.
de los pacientes pueden tener una presentacin subaguda, con un curso menos agresivo.
P623 - 28078 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS EN Acinetobacter baumannii AISLADOS DE SECRECIONES TRAQUIALES (TQ) Y LAVADOBRONQUIOALVEOLAR (LB) DE PACIENTES INTERNADOS EN UTI. QUINTEROS, MIRTA; IRIARTE, ALEJANDRO; COSTA, NORA; DEODATO, BETINA; MARQUEZ, ALEJANDRO; MORASO, BEATRIZ; CALLEJO, RAQUEL
Hospital de Infecciosas Dr. F. J. Muiz Introduccin: A mediados de la dcada del 90, Acinetobacter baumannii (Aba) constitua el 13% de los aislamientos clnicos de pacientes internados en terapia intensiva en nuestro pas (Golberg y col. CCAC 2000), convirtindose en el mximo patgeno nosocomial en los ltimos aos, en la unidades de terapia intensiva. Por su multiresistencia a los antimicrobianos constituye uno de los problemas ms importantes para el tratamiento de infecciones en el paciente crtico. El aumento de los niveles de resistencia frente a los carbapenemes hizo necesaria la bsqueda de nuevas opciones de terapeticas. Objetivos: en ste trabajo se analiza la evolucin de la resistencia a imipenem, ceftacidima, aminoglucsidos y quinolonas en un perodo de diez aos de vigilancia y la sensibilidad frente polipeptidos y tetraciclinas en 67 aislamientos entre 2005 y 2009. Materiales y mtodos: se analizaron los niveles de resistencia a los distintos antimicrobianos de utilidad clnica, mediante el programa Whonet. Se dividieron en dos perodos: En el 1 perodo (2000-2004) se estudiaron 41 aislamientos de BAL y 36 de TQ y en el 2 perodo (2005-2009) se incluyeron 67 de LB y 47 de TQ. La determinacin de la sensibilidad se realiz por mtodo de difusin con discos y tiras de Etest en medio agar M. Hinton. La interpretacin se realiz de acuerdo a las recomendaciones del CLSI 2010 y para tigeciclina se adoptaron los puntos de corte de la FDA. Se utiliz la distribucin del c (chi cuadrado) para evaluar las diferencias de porcentajes de resistencia a travs del tiempo. Se consider significativo = 0,05. Resultados:% sensibilidad (1perodo / 2perodo): amipicilina sulbactama (34/40), ceftacidima (4/2), gentamicina (7/ 34), amicacina (12/22), imipenem (74/18). Fue nula la sensibilidad en los dos perodos para quinolonas y ceftacidima y del 100% para polipptidos, doxicilina, minociclina y tigeciclina. Cuando se analiz la resistencia a imipenem se observ un incremento del 5 5% en el 2000, alcanzando el 97% en el 2009. Los valores de la CIM 90 (E-test[g/ml]) de 67 aislamientos para poliptidos y tetraciclinas fueron: colistin 0,5 g/ml, doxiciclina 2 g/ml, minociclina 4 g/ml y tigeciclina 1 g/ml. CONCLUSIONES: los datos mostrados muestran una significaticativa disminucin de la sensibilidad a imipenem (p< 0,01) y un aumento (p<0,01) de la sensibilidad a gentamicina. Las nicas alternativas teraputicas son los polipptidos y tetraciclinas. Los datos de vigilancia deben llevar a un cambio en la estrategia a la hora de establecer tratamientos empricos y como alerta de la emergencia de resistencias, contribuyendo as a la construccin de polticas antimicrobianas tendientes a su uso racional.
P622 - 28077 ENDOCARDITIS INFECCIOSA POR Streptococcus pneumoniae: A PROPOSITO DE UN CASO. MORENO, SUSANA; POLITANO, LORENA; CARBEL, MARIA
Hospital Rawson La endocarditis infecciosa por Streptococcus pneumoniae es en la actualidad poco frecuente, pero su mortalidad es elevada a pesar del tratamiento. Los factores de riesgo que predisponen al desarrollo de este tipo de endocarditis no son del todo conocidos, aunque parecen ser los mismos que para la infeccin neumoccica en general. Caso Clnico: mujer de 58 aos de edad, con antecedentes de neumonas recurrentes, ex tabaquista. Consult por disnea y dolor en puntada de costado en hemitrax derecho, de inicio sbito, de 48hs de evolucin, sin otra sintomatologa. En la exploracin la paciente estaba taquipneica, TA 100/60; FC 86, T axilar 37, 5 C; a la auscultacin: murmullo vesicular conservado, con crepitantes bibasales y en tercio medio de pulmn izquierdo, R1 y R2 normofonticos, soplo sistlico 2/6 en foco mitral. No exista esplenomegalia ni se apreciaban estigmas perifricos de endocarditis. Laboratorio: Hb 10,7 g/dl , HTO 33%, GB 35.800/ mm3 (91% de neutrfilos); VSG 120 mm. Resto normal. Radiografa de trax: infiltrado intersticial alveolar bilateral a predominio de bases. Se interna a la paciente con diagnostico de neumonia aguda de la comunidad. Se solicita hemocultivos seriados y se inicia tratamiento emprico con ampicilina- sulbactam y doxiciclina. A las 24 hs la paciente se halla estable, afebril, el laboratorio de microbiologa informa la positivizacin de los hemocultivos con diplococos gram-positivos. Debido a que la paciente presenta un soplo no descripto en historia clnica anterior, se realiza ecocardiograma transtorcico evidenciando regurgitacin mitral, con la presencia de una imagen ecodensa en el extremo distal de la valva anterior de la valvula mitral de 6 mm x 6,9 mm compatible con vegetacin. Se rota el antibiotico a penicilina G y gentamicina, 24 hs despus el laboratorio informa la identificacin como Streptococcus pneumoniae, mediante las pruebas de sensibilidad a la optoquina y solubilidad en bilis. El microorganismo mostr sensibilidad a penicilina. Se realiza interconsulta con el servicio de cardiologa, quien luego de valorarlo sugiere conducta espectante, con tratamiento medico. Se decide rotar a ampicilina. Se solicita laboratorio control: GB 5600 (43% neutrfilos) VSG 109 mm y ecocardiograma control: vegetacin de 5 x 3,7 mm. DISCUSION: Streptococcus pneumoniae era uno de los grmenes causantes de endocarditis infecciosa ms frecuentes en la era preantibitica (alrededor de un 15-20% del total de casos). Una neumona o una sinusitis son habitualmente la fuente de bacteriemia, como probablemente ocurri en nuestro caso. Dada la agresividad de la enfermedad, que produce una destruccin local importante, el tratamiento quirrgico es necesario en la mayora de los enfermos, lo cual no fue necesario en este caso. La endocarditis neumoccica, a pesar de una menor incidencia y de los tratamientos actuales, sigue presentando una mortalidad global aproximada del 65%, sin que se haya demostrado un descenso significativo de estas cifras en los ltimos aos. Aunque el curso clnico de la endocarditis por neumococo es clsicamente agudo y agresivo, se calcula que entre un 5% y un 10%
P624 - 28084 QU PUEDE APORTAR EL OJO DEL BACTERILOGO PARA DIFERENCIAR M. tuberculosis (MTB) DE MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS (MNT) EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CLNICA WOLFF, L; KIGAN, X
Hospital Rawson, Crdoba Frente al aumento de patologa infecciosa producida por MNT en pacientes inmunodeprimidos, empleamos una identificacin rpida en base a pruebas fenotpicas y bioqumicas que permiten diferenciarlas de MTB. Esto evita la administracin sistemtica de tuberculostticos frente al aislamiento de bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR). Nuestro objetivo fundamental es hacer un diagnstico altamente presuntivo de MTB y MNT para poder iniciar una teraputica adecuada hasta que llegue la confirmacin que aporta el Laboratorio Nacional de Referencia (LNR), en una institucin con recursos econmicos y tecnolgicos insuficientes
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para el diagnstico de certeza. Deseamos transmitir la experiencia del Laboratorio de Microbiologa del Hospital Rawson de Crdoba, adquirida durante 10 aos (2001-2010) de utilizacin del esquema propuesto, respaldado por el LNR del ANLIS Dr. C. Malbrn. Estudiamos 273 aislamientos de micobacterias, 264 jerarquizadas como agentes etiolgicos de patologa infecciosa. Realizamos: 1) la observacin macroscpica de las caractersticas culturales: aspecto, pigmentacin y tiempo de desarrollo, 2) la observacin microscpica para definir la formacin de cuerdas (coloracin de Ziehl Neelsen) y 3) la actividad de catalasa (CAT) a temperatura ambiente (TA) y a 68 C. Si bien la formacin de cuerdas est descripta en medios de cultivo lquidos, es posible advertirla tomando una porcin muy pequea de la colonia y extendindola sobre una gota de solucin fisiolgica en el portaobjetos. Consideramos MTB a las colonias rugosas, secas, que no reflejan la luz, no pigmentadas, de desarrollo lento en Lowenstein Jensen (ms de 15 das), con formacin de cuerdas, CAT TA (+) y CAT 68C (-); M. avium intracellulare (MAI): aspecto liso, cupuliforme, reflejan la luz, no pigmentadas, desarrollo lento, sin cuerdas (patrn homogneo), CAT TA (+) y CAT 68C (+). 216 cepas fueron MTB y 57 MNT (33 MAI, 13 de rpido desarrollo complejo M. fortuitum chelonae abscessus,1 M. bovis, 1 M. simiae , 9 consideradas aislamientos ocasionales 5 M.terrae, 2 M. peregrinum,1 M. nonchromogenicum,1 M.vacae. Obtuvimos una correlacin total de los tres parmetros en 195 de 216 cepas de MTB, es decir el 90,27%. De las 21 que no se correlacionaron totalmente, 10 dieron CAT TA (-) lo que considerado error de tcnica dado que todas las micobacterias tienen actividad de catalasa a TA y las 10 fueron identificadas como MTB por el LNR-arroj 94,90% de correlacin. Es decir que la probabilidad de diagnosticar un aislamiento de MTB por el mtodo evaluado (sensibilidad) es casi del 95%. Consideramos altamente vlida y confiable la metodologa propuesta para la identificacin presuntiva de MTB y MNT, an en colonias nacientes. Es de particular importancia frente a BAAR aislados de hemocultivo o ganglio en pacientes con inmunodepresin celular severa evitando incrementar la polifarmacia y la suma de toxicidades. En muestras respiratorias de pacientes internados respalda la implementacin del aislamiento respiratorio. La observacin minuciosa y responsable contina siendo una herramienta de primer orden para el microbilogo clnico. Agradecemos el apoyo incondicional del LNR - Micobacterias
solo el 8% fue resistentes a azitromicina (CIM =1 g/ml). Cuatro de 50 NGRC presentaron sensibilidad disminuda a ceftriaxona. Los 50 aislamientos fueron sensibles a espectinomicina (CIM: 8 32 g/ml) (CIM: 0.125 0.5 g/ml). Dada la resistencia simultnea a 3 o ms antimicrobianos sobre 28 aislamientos de NGRC se ensayaron antibiticos no prescriptos para el tratamiento de la gonorrea con los siguientes valores de CIM (rango g/ml): cefepime, 0.001-2; telitromicina, <0.016-8; ertapenem, <0.016-0.5 y faropenem, <0.016-0.5. La resistencia simultnea a varios antimicrobianos y la aparicin de aislamientos con sensibilidad disminuida a ceftriaxona, alerta sobre la posibilidad de escasas alternativas teraputicas para el tratamiento de la gonorrea y obliga a la bsqueda de nuevas alternativas teraputicas. Si bien los carbapenemes muestran buena actividad, no seran recomendados para esta enfermedad. Se acenta la importancia de realizar rutinariamente el antibiograma y el control posttratamiento mediante cultivo.
P626 - 28118 RESISTENCIA A QUINOLONAS DE ENTERO-BACTERIAS DE UROCULTIVOS DE DIVERSOS SUBPOBLACIONES DE PACIENTES ADULTOS. CLARA, LIANA; VALLEDOR, ALEJANDRA; DAELS, PEDRO; TREIYERS, STEPHAN; AZJENZSLOS, MARTIN; SALAZAR, ESTELA; STANELONI, INES; BARCAN, LAURA
Hospital Italiano Introduccin: las quinolonas fluoradas son uno de los antibiticos ms frecuentemente utilizados en las infecciones urinarias pero es imprescindible evaluar su sensibilidad para los tratamientos empricos. Objetivo: describir la resistencia a quinolonas en enterobacterias de cultivos de orina de diversas poblaciones de pacientes de nuestra institucin. Material y mtodos: se describe la sensibilidad a quinolonas de aislamientos de 3 subpoblaciones seleccionadas de pacientes urolgicos: pre- nefrolitotricia percutnea y post- puncin de biopsia transrectal (fuente de datos: urologa, intervencionismo, Infectologa) e infecciones urinarias en pacientes transplantados renales (fuente: Infectologa). Resultados: nefrolitotricia percutnea de 96 pacientes del 28 marzo 08 al 22 junio 2009. Se realiza urocultivo previo al procedimiento, en 14 pacientes el urocultivo previo fue positivo y 3 de 8 enterobacterias (37%) eran resistentes a quinolonas. Rescate microbiolgico de urosepsis post puncin biopsia transrectal ambulatoria (ningn paciente sondado, todos con urocultivo previo negativo y profilaxis con ciprofloxacina periprocedimiento). Perodo aos 2005 a 2006; de 501 pacientes 22 presentaron infeccin urinaria post puncin prosttica, Escherichia coli (n 20) resistencia a quinolonas 100%. Sensibilidad a cefalosporinas de primera generacin: 67%, permitiendo inferir una sensibilidad ms alta para ceftriaxona. Esto motiv agregar ceftriaxona como profilaxis periprocedimiento con reduccin significativa de las complicaciones infecciosas hasta 2 aos despus. Infecciones urinarias (ITU) en transplante renal (junio 2009 a junio2010) 11 de 15 aislamientros eran enterobacterias. Resistencia a quinolonas y BLEE+: 8/11 (72%). ITU en trasplante renopancretico: 6/10 eran enterobacterias. Resistencia a ciprofloxacina y BLEE+: 4 de 6. Total transplantes renales y renopancrticos en ese perodo 38. Resumen: La resistencia a quinolonas en aislamientos de enterobacterias de urocultivos vara segn la poblacin estudiada siendo del 37% al 100%. Esto resalta la importancia de los datos estratificados. En estas subpoblaciones la produccin de BLEE no fue homognea siendo los pacientes ambulatorios con patologa prosttica los que tuvieron menos incidencia de BLEE+
P625 - 28106 Neisseria gonorrhoeae: LA ERA DE LA MULTIRESISTENCIA? GARCIA, SUSANA(1); CASCO, RICARDO(2); PERAZZI, BEATRIZ(1); DE MIER, CARMEN(1); YAYA, JOSE(2); VAY, CARLOS(1); FAMIGLIETTI, ANGELA(1)
(1) Laboratorio de Bacteriologa. Departamento de Bioqumica Clnica. Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA. (2) Programa de Enfermedades de Transmisin Sexual. Hospital de Clnicas Jos de San Martn, UBA. El patrn de resistencia a los antimicrobianos que exhibe N. gonorrhoeae plantea un verdadero problema para el tratamiento de la gonorrea. Se evalu el perfil de resistencia a los antimicrobianos en los aislamientos resistentes a ciprofloxacina (NGRC) en el perodo 2005-09. Se detect la presencia de lactamasa por el mtodo de Nitrocefin y se determin la concentracin inhibitoria mnima (CIM) de 11 antimicrobianos siguiendo las recomendaciones del CLSI. Se consider resistencia cromosmica a penicilina cuando la CIM fue 1-2 g/ml y -lactamasa negativa. Se aislaron 206 gonococos, de los cuales 50 fueron resistentes a ciprofloxacina. La prevalencia de NGRC segn el hbito sexual de los pacientes fue 32% en hombres que tienen sexo con hombres (HSH) y 16% en varones heterosexuales (HET). De 50 aislamientos de NGRC, 6% fueron productoras de Lactamasa (Bla), 46% presentaron resistencia cromosmica a penicilina (Bla y CIM: 1 2 g/ml) y las restantes mostraron sensibilidad disminuida (CIM: 0.125 0.5 g/ml). En el 36% de los aislamientos de NGRC se observ adems resistencia a eritromicina, en el 12% resistencia a tetraciclina y en el 26% resistencia simultnea a tetraciclina y eritromicina. La resistencia cromosmica y plasmdica a tetraciclina fue 34% y 4% respectivamente. El 62% fue resistente a eritromicina (CIM =2 g/ml) y
P627 - 28128 SEROTIPOS DE Streptococcus pneumoniae INVASIVO EN PACIENTES ADULTOS. MORTARINI, MIRIAM(1); ERDOIZ, JUAN M(1); DE VEDIA, LAUTARO(2); FENOLL, ASUNCION(3); ROLLET, RAQUEL(1)
(1): U. Bacteriologa Hosp. F.J. Muiz. (2): Sala 1 Hosp. F.J. Muiz. (3): Instituto Carlos III de Madrid, Espaa Streptococcus pneumoniae puede causar enfermedades invasivas como otitis media, meningitis, bacteriemias con eleva-
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da morbi-mortalidad. Existen ms de 90 serotipos capsulares los cuales se distribuyen segn la edad y el rea geogrfica, y permiten monitorear cambios epidemiolgicos. No obstante, son escasos datos sobre la frecuencia relativa de los serotipos que causan infecciones invasivas en pacientes adultos. Objetivo: Conocer los serotipos de S. pneumoniae causantes de infecciones invasivas en pacientes adultos internados en nuestro Hospital. Materiales y mtodos: Se estudiaron 90 aislamientos de S. pneumoniae obtenidos de hemocultivos (Bact-Alert, Biomrieux, France) de pacientes adultos internados entre enero de 2004 y mayo de 2010. Los mismos fueron identificados fenotpicamente y enviados al Instituto Carlos III de Madrid, Espaa para su serotipificacin mediante la tcnica de Dot Blot. Resultados: Los serotipos identificados (N) fueron los siguientes: 14 (15), 7F (13), 1 (11), 9V (9), 6A (8), 9N (5), 5 (4), 8 (3), 10A (2), 11A (2), 15B (2), 24F (2), 12F (2), 16F (2); 4 (1), 6B (1), 17F (1), 18C (1), 19A (1), 19F (1), 23A (1), 23F (1), 33A (1) y 35F (1). Los 5 (cinco) serotipos ms frecuentemente reconocidos correspondieron al 62,22% (I.C.95%: 51,65-72,79) de los aislamientos estudiados (56/ 90). Los serotipos identificados con mayor frecuencia no difieren de los que se han asociado a infecciones invasivas. Los serotipos 14, 7F, 1, 9V y 6A representaron ms de la mitad de los casos y concuerdan con los publicados por el SIREVA-OPS para infecciones invasivas en nios menores de 5 aos. Concluimos que los serotipos causantes de infecciones invasivas en pacientes adultos asistidos en el H.F.J. Muiz son coincidentes con los correspondientes a nios y las vacunas vigentes los incluyen.
clnica por estar relacionado con los niveles y la forma de transmisin de la resistencia. Como se sabe, las cepas predominantes en nuestro medio son de tipo Van A. El kit permite la utilizacin de muestras directas y de cultivos, pudiendo ser usado para screening o frente a la aparicin de una cepa aislada. La BM ofrece una rpida deteccin de las cepas frente al cultivo tradicional (4 horas versus 72 o ms), permitiendo al equipo mdico tomar tempranamente una conducta frente al resultado logrando disminuir costos de aislamiento y de tratamiento efectivo. A diferencia del cultivo tradicional, esta tcnica tiene un aporte significativo a nivel epidemiolgico ya que permite monitorear y clasificar la resistencia de los clones circulantes.
P629 - 28142 DETECCION DE RESISTENCIA A RIFAMPICINA, GENTAMICINA Y TRIMETHOPRIMA-SULFAMETHOXAZOLE EN ESTAFILOCOCOS COAGULASA NEGATIVA. COMPARACION DE E-TEST Y VITEK 2C. SOLOAGA, R; CARRION , N; PIDONE, J; GUELFAND, L; MENDEZ ARANIBAR, M
Hospital Naval Los estafilococos coagulasa negativa pueden producir infecciones serias asociadas a dispositivos mdicos como por ejemplo endocarditis protsica e infecciones de parches vasculares; en estas entidades es fundamental lograr con el esquema antibitico una actividad bactericida que aumente las posibilidades de xito teraputico. Rifampicina, gentamicina y en menor medida trimetoprima sulfametoxazol (TMS) son antibiticos utilizados en estas infecciones, en general en forma de diversas combinaciones entre s y con lactmicos. El objetivo de este trabajo fue el de comparar el rendimiento del sistema Vitek 2C (analizando CIM y las recomendaciones del sistema experto AES) para determinar resistencia a estos tres antibiticos con respecto a los resultados obtenidos por E-test. En el sistema Vitek 2C, la deteccin de resistencia se basa no solo en la determinacin cintica de la CIM sino tambin en el anlisis poblacional de la distribucin de CIM de diversos fenotipos de resistencia y de cepas salvajes que se encuentran en la base de datos con respecto a la cepa en estudio; el AES realiza el anlisis sugiriendo el mejor fenotipo detectado y eventualmente cambios en la categora si el mismo puede llevar a falla teraputica. Se estudiaron 77 cepas de estafilococos coagulasa negativa que incluyeron a S. epidermidis (n: 3); S. hominis (n: 15), S. haemolyticus (n: 11), S. capitis (n: 5), S. cohnii (n: 5), S. saprophyticus (n: 2), S. auricularis (n: 1) y S. simulans (n: 2). Solo se produjeron 2 errores mayores (2/77) con rifampicina y 1 (1/77) error menor con TMS. Con respecto a gentamicina considerando solo la CIM no hubieron errores mayores, se produjo un error muy mayor y 7 errores menores pero en todos los casos el AES correga el resultado a resistente al detectar poblacionalmente un mecanismo compatible con la enzima bifuncional AAC (6)I-APH (2")I lo que llevaba a la concordancia total en la interpretacin final con respecto a E-test. La correlacin esencial en cuanto a categora fue del 95,3%. El sistema Vitek 2C es una herramienta valiosa para la determinacin rpida de resistencia a gentamicina, rifampicina y trimetoprima sulfametoxazol debido al excelente rendimiento en comparacin con el E-test.
P628 - 28136 DETECCION RPIDA DE ENTEROCOCOS VANCOMICINA RESISTENTES (EVR) POR REAL-TIME PCR. FRANGI, E; ASTUDILLO, OG; NARDI, MA; CLARA, L; LIVELLARA, BI
Hospital Italaiano Introduccin: Los EVR son importantes patgenos nosocomiales que generan alta morbi-mortalidad y costos extras por aislamientos (bloqueo de camas e insumos). Las tcnicas de Biologa Molecular permiten demostrar la rpida diseminacin intra e interhospitalaria de uno o mas clones y la participacin de ms de una especie en un mismo brote. Objetivo: Demostrar la utilidad del diagnstico de EVR por real time PCR a partir muestras intra e interhospitalarias por medio de un kit comercial. Materiales y Mtodos: El estudio se realiz por medio de 6 experiencias (Exp). Se utiliz High Pure PCR template preparation kit (Roche) para extraccin y EVR detection kit (Roche) en sistema Lightcycler de Real-Time PCR para la deteccin. Exp 1: De 22 cepas de EVR se extrajeron colonias para suspender en PBS hasta concentracin (cc) de 109 UFC/ml. Exp 2: Con una suspensin inicial de cc 109 UFC/ml se realizaron diluciones seriadas al dcimo hasta lograr una cc de 102 UFC/ml. Exp 3: Se utilizaron 8 muestras de materia fecal y 6 hisopados anales para ser procesadas en forma directa. Exp 4: Deteccin de falsos positivos: se utilizaron cepas de EVR naturales (5 Pediococcus spp. y 5 Leuconostoc spp.) las cuales no deben su resistencia a genes transmisibles. Exp 5: Obtencin de la sensibilidad real de la tcnica: a partir de una solucin de 3.2 x 109 UFC/ml (cc obtenida por conteo en placa) se realizaron diluciones seriadas al dcimo hasta 3.2 101 UFC/ ml. Exp 6: Para optimizar la sensibilidad, se variaron las condiciones de la tcnica previas a la extraccin (se increment el volumen de la muestra) y se probaron las ltimas 4 diluciones del punto anterior. Resultados: 1) Las 22 cepas probadas fueron positivas por BM (de tipo Van A). 2) A partir de las instrucciones de fabricante se logr identificar la sensibilidad de la tcnica en 105 UFC/ml. 3) Todas fueron positivas (de tipo Van A) en ambos tipos de muestras. 4) Las muestras analizadas fueron todas negativas. 5) Se obtuvo una sensibilidad real de 3.2 104 UFC/ml. 6) Se logr una sensibilidad final de 3.2 101 UFC/ml. Conclusiones: Se comprob la validez del kit para el uso diagnstico comparado con el cultivo. Con la modificacin en el procedimiento se logr mejorar la sensibilidad conservando la especificidad y garantizar el diagnstico en estos casos estudiados (recuento del orden de 101 UFC/ml). El kit ofrece la posibilidad de identificar genes de resistencia Van A, Van B y Van B2,3, de importancia
P630 - 28162 HEMOCULTIVO: ANLISIS REALIZADO POR EL PERIODO DE UN AO EN EL HOSPITAL SAN MARTN PARAN ENTRE ROS. ALMARA, A; BOLEAS, M; MOBILIA, L; PETRUSSI, N; PIEDRABUENA, M; YONSON, N; SALAMONE, F
Hospital San Martn, Paran, Entre Ros La bacteriemia conforma un sndrome clnico complejo y en constante transformacin que ocasiona una importante y creciente morbimortalidad. En la emergencia mdica los hemocultivos (Hc) poseen un gran valor clnico. La certeza del diagnstico etiolgico es fundamental para definir correctamente la causa de la enfermedad. La tasa de contaminacin de los Hc constituye un indicador de calidad en la toma de muestra. El objetivo de este trabajo fue calcular la frecuencia de los microorganismos aislados de muestras de Hc, considerados clnicamente significativos. Se ana-
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lizaron retrospectivamente, 1572 muestras de Hc (2 frascos por muestra en su mayora),entre enero y diciembre de 2009 de pacientes internados en el Hospital San Martin de la ciudad de Paran. E.R, en los servicios de terapia intensiva, clnica mdica, traumatologa, urologa, ciruga y consultorio externo. Las muestras se incubaron a 35-37C, durante 5-7 das. Las muestras positivas, se identificaron por las pruebas convencionales de laboratorios de microbiologa. De las muestras procesadas 288 (18,3%) fueron positivas y 1167 (74,3%) negativas, 117 (7,4%) contaminantes. De las 288 positivas, 145 (50,4%) fueron gramnegativos, 134 (46,5%) gram-positivos, 6 (2,1%) levaduras y 3 (1%) flora polimicrobiana. Los patgenos ms frecuentes fueron: Escherichia coli 71 (24,7%), Staphylococcus aureus 69 (23,9%), Klebsiella pneumoniae 29 (10,1%), Staphylococcus coagulasa negativo (SCN) 26 (9%), Streptococcus pneumoniae 22 (7,6%), Proteus mirabilis 12 (4,2%), Pseudomonas aeruginosa 8 (2,8%). Los agentes etiolgicos aislados, se consideraron en su mayora clnicamente significativos, por evaluacin de historia clnica del paciente y considerando los criterios de laboratorio antes mencionado como bacteriemia verdadera. Del total de SCN aislados 143 (9%), 117 (7,4%), se los consider no significativos clnicamente, sospechados de ser contaminantes de la flora de piel del paciente, solo 26 (1,6%) fueron jerarquizados. La frecuencia en el aislamiento microbiolgico coincide con lo reportado en la bibliografa. El grado de contaminacin (7,4%) es elevado de acuerdo a los datos publicados en la bibliografa actual (2-3%). La causa de la misma radicara en problemas en la toma de muestra. Esto nos sugiere mejorar la tcnica, volver a formar al personal en este tema. La valoracin de la historia clnica del paciente, fue de gran ayuda en los casos de aislamientos de SCN, en el momento de determinar su jerarquizacin, de esta manera se evitaba la realizacin de tratamientos antibiticos innecesarios en los pacientes.
bla: TMS: trimetoprima/sulfametoxazol, C3G: cefalosporinas de 3a generacin, AMP: ampicilina, NAL: cido nalidxico, CMP: cloranfenicol, FOS: fosfomicina, ND: no determinado. La resistencia a antibiticos -lactmicos y TMS baj en este perodo y la de C3G casi desapareci en los ltimos aos. Se observan muy baja resistencia a CMP y FOS. No hubo resistencia neta a ciprofloxacina pero es muy preocupante el aumento de la resistencia a NAL en Argentina debido a la falla de tratamiento con fluoroquinolonas en infecciones extraintestinales por cepas con este fenotipo. Los% de resistencia a la mayora de los antimicrobianos en Salmonella sp son bajos en Argentina y contribuyen al diseo de estrategias de tratamiento y al uso prudente de estas drogas.
P632 - 28165 RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS EN Shigella spp. DE ARGENTINA. GALAS, M(1); LUCERO, C(1); TUDURI, E(1); VAZQUEZ, M(2); SOLOAGA, R(3); RED WHONET, ARGENTINA(1); CORSO, A(1)
(1) Dto Bacteriologa, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn, (2) Hospital de Nios Dr R Gutirrez, (3) Universidad Catlica Shigella spp., un patgeno humano de gran importancia sanitaria en pases en desarrollo, es la 1a causa de diarreas bacterianas en Argentina especialmente en los meses clidos y en la regin norte donde determina una morbi-mortalidad elevada. La resistencia a los antibiticos de 1a eleccin agrava la situacin y hace indispensable la vigilancia de la resistencia para guiar la eleccin del tratamiento emprico. El objetivo de este trabajo fue aportar los% de resistencia antibitica de Shigella spp. en Argentina desde 1994-2009. Se trabaj con la Red WHONETArgentina conformada por laboratorios clnicos de todas las provincias del pas. Se us la prueba de difusin con discos segn normativas del Clinical Laboratory Standards Institute (ex NCCLS) con estricto control de calidad interno evaluandose las drogas consensuadas por protocolo. La informacin fue obtenida por los laboratorios, cargada y analizada con el software WHONET. En el perodo estudiado se reportaron 30759 shigellosis, se observaron fluctuaciones en los% de resistencia y una marcada estacionalidad con picos importantes en el perodo de diciembre a marzo. La especie predominante fue S. flexneri (75,2%) seguida de S. sonnei (23,7%) que en determinados momentos y lugares pas a primer lugar debido a la existencia de brotes o la instalacin como endmica, la prevalencia fue muy baja para S. dysenteriae (0,3%) y S. boydii (0,8%) repecto de las dos primeras. Estas relaciones se mantuvieron durante los 16 aos analizados. Se constat la emergencia de -lactamasas de espectro extendido y del tipo AMP-C en Shigella spp. aunque no se diseminaron.
P631 - 28164 16 AOS DE VIGILANCIA NACIONAL DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS EN Salmonella spp. LUCERO, C(1); GALAS, M(1); TUDURI, E(1); VOLCOVICH, R(1); VAZQUEZ, M(2); RED WHONET, ARGENTINA(1); CORSO, A(1)
(1) Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI) - ANLIS Dr. C. Malbrn, (2) Htal de Nios Dr R Gutirrez Salmonella spp. es una importante causa de diarreas en el mundo y puede causar infecciones invasivas en pacientes inmunosuprimidos. En Argentina representa el segundo agente luego de Shigella spp. Las diarreas son en general infecciones autolimitadas y no requieren tratamiento antibitico, salvo en caso de cuadros severos o infecciones sistmicas. Objetivo: evaluar la evolucin de la sensibilidad a los antimicrobianos de Salmonella sp. de Centros de Salud de todo el pas durante el perodo 19942009. Participaron laboratorios de la Red WHONET Argentina. La sensibilidad antimicrobiana se determin mediante antibiograma por difusin segn normas CLSI evaluando la actividad de las drogas definidas en los protocolos nacionales vigentes para cada ao. Los resultados fueron colectados y analizados mediante el programa WHONET. Se analizaron 7496 Salmonella spp. durante los aos 1994 a 2009 aisladas de distintas muestras clnicas de Centros de Salud distribuidos en todo el pas. Se observ estacionalidad en la distribucin de los asilamientos con altas prevalencias en los meses clidos de enero, febrero y marzo. Los% de resistencia a los antimicrobianos se presentan en la taN de aislamientos 350 432 342 413 725 706 531 591 348 398 469 362 428 430 421 550 TMS 12 21 23 11 18 20 11 19 6 7 6 5 5 4 6 6 C3G 20 32 18 23 26 12 14 11 7 9 11 2 2 3 4 1 AMP 48 56 34 36 48 43 27 32 20 33 23 13 15 17 20 15 NAL ND ND ND ND ND ND ND ND ND 4 10 3 4 3 5 12 CMP 5 4 4 5 4 6 3 3 3 3 4 5 5 5 5 4 FOS ND ND 5 7 12 11 11 ND ND 5 3 0 1 1 2 1
1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009
Los% de resistencia a fosfomicina (FOS), ciprofloxacina (CIP), cefalosporinas de 3 generacin (C3G) y nitrofuranos (NIT) fueron muy bajos o nulos, en el caso de cloranfenicol (CMP), ampicilina (AMP) y cotrimoxazol (TMS) fueron variables entre especies. Si bien hay resistencia a las drogas de primera eleccin contamos con varias alternativas de tratamiento para shigellosis en Argentina.
XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010 - ndice de Autores
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INDICE DE AUTORES
ABALLAY, DANIELA; P174 ABALOS, ANDREA; P059 ABASCAL, SERGIO; P513 ABATE, CARLOS; P120 ABDALA , G; P105 ABECASIS, C; P244 ABEL, SOFIA; O20 ABELANDO, M; P461 ABRAHAM, ANALIA GRACIELA; P018, O7 ABRANTES, RUBEN; P201 ABRIL, ADRIANA; P324 ACCARINO, C; O17 ACEVEDO, ME; O15 ACOSTA, DIEGO; P597 ACOSTA, V; P595 ACTIS, LUIS; O43 ACUA, AJ; P289 AGAMENNONI, R; P287 AGARAS, BETINA; P603, O26 AGORIO, I; P168 AGOSTI, MR; P175, P358 AGUER, FERNANDO; P095 AGERO, MARIA VICTORIA; P099, P101 AGUERRE, LORENA; P401, P610 AGUIAR, ANA; P586 AGUIRRE, ALINA; P154, P353 AGUIRRE, C; P150, P376 AGUIRRE, DIANA ALEJANDRA; P572 AGUIRRE, GASTON; P281 AHLBOM, MONICA; P572 AHUMADA, CARLOS; P379 AIASSA, M S; P153 AIASSA, V; P480 AIMARETTO, CLAUDIA; P145 ALANIZ, V; P575 ALBANESI, ADA; P086 ALBARELLOS, G; P185 ALBESA, INES; P256, P480, O8 ALBORNOZ, EZEQUIEL; P339 ALCAIN, A; P146, P362 ALCALA, W; P394 ALCONADA, TERESA; P499 ALCORTA, MARIA MALENA; P180, P181, P186 ALE, MARIA; P076 ALEMANO, S; P105 ALFARO, JUAN MANUEL; P526 ALFONSO, FERNANDO; P572 ALIPPI, ADRIANA M; P233, P297, P521, P529 ALIVERTI, FLORENCIA; P219, P220 ALIVERTI, VIRGINIA; P219, P220 ALL, L; P615 ALLIGNANI, LUCIANA; P367 ALMADA, P; P461 ALMARA, A; P630 ALMEIDA, MI; P605 ALMUZARA, MARISA; P132, P350, P369, P391, P395, P549, P558, O54 ALONIO, V; P249 ALONSO, ANDREA; P306 ALONSO, MIRIAM; P420 ALONSO, MONICA ZULEMA; P245, P271, P443 ALTAMIRANDA, STELLA; P589 ALTAMIRANO, FANNY; P533 ALTHABEGOITI, M J; P104 ALTINA, MELISA; P016, P021, P104 ALVARES, PRISCILA PEDULLO; P229 ALVAREZ CRESPO, M CECILIA; O28 ALVAREZ, A; O60 ALVAREZ, AS; P278 ALVAREZ, CHRISTIAN; P161, P180, P181, P186 ALVAREZ, D; P105 ALVAREZ, HECTOR; P294 ALVAREZ, HM; P304 ALVAREZ, LAURA ALEJANDRA; P048, P059 ALVAREZ, LP; P266 ALVAREZ, LUCIA; P484, P554 ALVAREZ, MERCEDES; P222, P433 ALVAREZ, ML; O51 ALVAREZ, S; P396 ALVAREZ, VERONICA; P135, P551 AMALFA, FLAVIA; P337, P393, P562, P579 AMARILLA, A; P382, P582 AMARILLA, NOEMI; P212 AMENEIROS, M; P066 AMENTA, MELINA; P073 AMIEVA, CRISTIAN; P573 AMIGOT, SUSANA ; P199 AMOROSO, MJ; P300, P318, P319, O60 ANCHART, EDUARDO; P199 ANDRE, SILVIA; P017 ANDREETTA, A; O9 ANDREOLI, YOLANDA; P065 ANDRES, PATRICIA; P388, P389 ANDRINOLO, D; O31 ANGEL VILLEGAS, N; P258, O8 ANGELERI, PATRICIA; P393 ANGELINI, JORGE; P078 ANNAN, SOLEDAD; P371 ANODAL, M; P411 ANRIQUEZ, ANALIA; P086 ANSELMO, RICARDO; P237, P301, P544 ANZOVINI, M B; P119 ANZUAY, MARIA SOLEDAD; P102 APELLA, MARIA CRISTINA; P035, P037 APEZTEGUIA, MARIA; P131 APONTE, JUAN; P310 AQUILI, V; P244 ARAKAKI, CRISTINA; P468 ARAMBARRI, ANGELICA; P292, P499, P527, P530 ARANCEGUI, NORBERTO; P261
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ARANGO, C; P534 ARAUJO, CAROLINA MARTA; P278 ARAUJO, MARCELO G F; P211 ARCE MIRANDA, J; P258 ARCE MIRANDA, JULIO EDUARDO; P256 ARDUINO, SONIA; P394, P419 ARECHAVALA, ALICIA; P143, P168, P179, P184, P405, O48 AREDES FERNANDEZ, PA; P246 ARELLANO, O; O51 ARENAZ, F; P215, P 436 AREVALO P, PAULA; P539 AREVALO, PAULA; P524 ARGAARAZ MARTINEZ, ELOY; P037 ARGOITIA, MARIA JOSE; P573 ARIAS, ALICIA; O25 ARINGOLI, ELENA E; P455 ARINGOLI, ELENA E; P456 ARISMENDI, PATRICIA; P577 ARLETTAZ, DAIANA; P198 ARNAL, LAURA; P058 ARO, CAROLINA; P190, P379 ARROYO, GH; P450 ARRUEBARRENA DIPALMA, ANDRES; P073, P074, P503 ARTICO, J; P547 ARTIGAS, F; O58 ARZAC, MARCELA ALEJANDRA; P029 ASATO, V; P398 ASHLEY, A; P404 ASQUINEYER, YANINA; P149 ASSELBORN, MIRIAM; P541 ASTUDILLO, C; P412 ASTUDILLO, OG; P628 ASURMENDI, P; P013 AUDISIO, MARCELA CARINA; P022, P124, P500 AULET, OLGA; P282 AULET, OLGA CRISTINA; P359, P441, P581 AVILES, N; P547, P549, O47 AYBAR, MARIANA; P263 AZCARATE, SILVANA; P084 AZEVEDO, VASCO; P056 AZJENZSLOS, MARTIN; P626 AZZIZ, GASTON; O25 BABELIS, GERMAN; P315 BABOT, JAIME DANIEL; P035 BADANO, ANDREA; P609 BADANO, INES; P459, O12 BAIGORI, MARIO; P315 BAISETTO, MARIANELA; O37 BAJSA, NATALIA; O25 BAJUK, MILENA; P387 BALAGUE, C; P244 BALAGUE, L; P112 BALATTI, PEDRO; P112, P114, P521, P527, P528, P530 BALBARREY, Z; P249 BALCARCE, NORMA; P587 BALDI, PABLO; O39 BALDINI, MATIAS; P149 BALDINI, MONICA; P276, P316 BALDONE, V; P445 BALESTRASSE, KARINA B; P072 BALETTE, ILEANA; P459 BALLERINI, VIVIANA; P369, P565, P592 BALLESTE, RAQUEL; P202 BALLESTER, DANIELA; P158, P204, P393, P562, P579 BANDE, JOSEFINA; P349 BARAGGIO, NANCY GUADALUPE; P437
BARASSI, CA; P079 BARBAGELATA, MARIA SOL; P266, P484, P554 BARBAGELATA, R; P454 BARBERIS, CLAUDIA; P395, O54 BARBERIS, F; P392, P394 BARBERIS, I; P013 BARBERO, P; P418 BARBIERI, N; P396 BARCAN, LAURA; P417, P626 BARCENA, ALEJANDRA; P528, P530 BARGADOS, K; P412 BARNECH, MARIA LAURA; P611 BARNES, A; P480 BARONE, R; P376 BARONETTI, JOSE LUIS; P256 BARONI, MARIA ROSA; P172, P173, P561, P580 BARRADO, ANDRES; P587 BARRERA, VA; P107, P287 BARRIOS, CRISTIAN; P346 BARRIOS, HEBE; P237, P544 BASCHKIER, A; P192, P444, P447, P604, O6 BASILICO, JUAN CARLOS; P331, P423, P455, P456, P457, O37, O38 BASUALDO, JA; P127, P148, P163, P477 BATTISTONI, FEDERICO; P075 BAUAB, TAIS M; P211 BAUMAN, CARLOS; P328 BAVDAZ, BARBARA; P383 BECCARIA, ALEJANDRO; P006, P077, P165, O57 BECERRA, MC; O8 BECHERUCCI, A; P047 BELDOMENICO, HORACIO; P331 BELLOGIN IZQUIERDO, RAMON; O30 BELLOZAS, MONICA; P513 BELMONTE, ADRIANA; P159, P609 BELTRAMINO, YANINA; P621 BELTRANO, J; P534 BENAVIDES, M; P066 BENAVIDES, YEIMY; P248 BENDEZU, KARLA; P207 BENETTI, S; O14 BENIMELI, CS; P318, P319, O60 BENINTENDE, GRACIELA; P487, P488, P489, P497 BENINTENDE, MARIA CRISTINA; P517 BENINTENDE, SILVIA MERCEDES; P517 BENITEZ AHRENTDS, MR; P505 BENTANCOR, A; P458, P602, O35 BENZZO, MARIA T; P095 BEQUER URBANO, S; P304 BERDUCCI, OCTAVIO; P574 BERGAGNA, HFJ; P148 BERGAMINI, CARINA; P014 BERGER, MA; P368 BERGESSE, J; P498 BERGOGLIO, MARINA; P576 BERINI, CAROLINA; P463 BERLEMONT, RENAUD; P307 BERMEJO, J; P568 BERMEJO, VERONICA; P155 BERMUDEZ, IMELDA PILAR; P518 BERNADETTE, FRANCO; P007, P008, P009 BERNALDEZ, PATRICIA; P123, P249, P556 BERNALDO DE QUIROS, MARCIA; P403 BERNARDI, MARCELA; P330, P451, O36 BERNSTEIN, J; P477 BERRON, CLARA; P512 BERRUEZO, FABIANA; P573, P576
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BERTILLER, MONICA; P298 BERTOT, GUSTAVO; P262 BETTERA, SUSANA; P239, P312 BETTIOL, MARISA; P142, P336, P347, P384, P418, P596, P603 BIANCHI, JORGELINA; P100 BIANCHI, MARIO HORACIO; P143, P156, P179, P184, O48 BIANCHINI, FE; P303 BIANCHINI, H; P566, O23 BIANCO, ISABEL; P340 BIASOLI, MARISA; P199 BICH , GUSTAVO A; P380 BIGATTI, CECILIA; P205 BILBAO, GLADYS; P205 BILBAO, LILIANA; P348, P601 BINETTI, ANA; P005, P006, P010 BINSZTEIN, N; P398, O4, O34, O51 BIONDI, ESTEFANIA; P210, P395 BIONDI, LUCIANA; P261 BLANCO CRIVELLI, X; P602 BLANCO FERNANDEZ, MD; P461 BLANCO, N S; P152 BLANKENHEIM, THALITA; P221 BLARASIN, MONICA; P312 BLAZQUEZ, NESTOR; P383, O51 BLEJER, JORGELINA; P463 BOBATTO , A; P199 BOCCIO, JOSE; P473, P587 BOCCO, JL; P162, O22 BOCKELMANN, WILHEM; O1 BODRONE, ROMINA; P367 BOGADO, ISABEL; P346, P400, P559 BOIARDI, J; P097 BOITEUX, JOANA; P501, P522 BOLEAS, M; P630 BOMBICINO, KARINA; P387 BOMPADRE, JOSEFINA; P106 BONANSEA, EMANUEL; P016, P021, P243 BONDULICH, C; P366, P569 BONILLA, RUTH; P083, P092 BONNEU, BEATRIZ; P177 BONOFIGLIO, LAURA; P617 BONVEHI, P; P39, P394 BORDA, N(1); P381 BORDA, N(HE); P568 BORDAGORRIA, XIMENA(2); P136 BORRAS, MARIA MACARENA; P076 BORREGO, SOFIA(4); O56 BORSA, A(); P130 BOSALEH, A(GARRAHAN); P249 BOSCH, ALEJANDRA; P384, P402, P596 BOSCH, MA; P303 BOSCO BORGEAT , MARIA EUGENIA; P136, P194, O53 BOSSIO, J; P461 BOTERO, IMELDA; P248 BOTTARI, BENEDETTA; O3 BOTTERO, DANIELA; P418, O42 BOTTIGLIERI, MARINA; P381, P573, P576 BOURGUIGNON, N; P319 BOZANO, CLAUDIA; P155 BOZZA, FLORENCIA LUCIA; P197 BRAMBATI, DIEGO; P141 BRAMBILLA, LUCIANO; P060 BRANDAN, CELIA; P076 BRAVO BERRUEZO, LUCAS E; P495 BRECCIA, JAVIER; P196 BRENGI, SP; P146, P398, O51
BRENTASSI, ME; P525 BRIGGILER MARCO, MARIANGELES; P004 BRIHUEGA, B(2); P472 BRIHUEGA, BIBIANA; P481 BRION, MARIA CRISTINA; O13 BRITEZ, MIRYAM; P600, P606 BROCARDO, M SILVINA; P219, P220 BROD, C; P472 BRODA, EDUALDA; P576 BRODA, PAMELA; P546 BRUGNONI, LORENA INES; P218, P277 BRUNO, SUSANA; P136 BRUSA, VICTORIA; P219, P220 BRUSCA, MARIA ISABEL; P607 BRUSCA, MARISA; P552 BRUZONE, MARIA CLARA; P279 BUCCA, ROSA; P360 BUCCI, MARIA CONSTANZA; P286 BUCCIARELLI, RICARDO ADRIAN; P370, P399, P570 BUEMO, CARLA; P459 BUENO, DANTE JAVIER; P442, P474, P475 BUENO, MIGUEL ANGEL; P116 BULACIO, L; P137 BULGHERONI, FERNANDA; P334 BULGHERONI, MF; P382, P582 BUMA, ANITA GJ; P281 BURNS, PATRICIA; P010 BUSCEMI, LUIS; P620 BUSTAMANTE, ANA VICTORIA; P427, P428, P450 BUSTAMANTE, JUAN; P126 BUSUSCOVICH, ANDREA; P111 BUZZOLA, FERNANDA; P266, P484, P554 C DE FIGUEROA, LUCIA INES; P115, P519, P537, P538 CABALLERO GAITAN, SUSANA; P473 CABALLERO, ADRIANA C; P453, P454 CABALLERO, PA; P257 CABELLO, MARTA NOEMI; P490, P495, P504 CABRAL , MARTA; P372 CABRAL, G; P595 CABRERA, RICARDO; P416 CABRUJA, MATIAS; P047, O43 CACACE, ML; P041 CACERES, CLAUDIA; P259, P273 CADARIO, ME; P405 CAFFER, MARIA INES; P146, P362, P364, P422, O4, O51 CAIMI, KARINA; P481 CALAMANTE, GABRIELA; O11 CALANOCCE, G; P355 CALDEVILLA, CECILIA; P141 CALLEJO, RAQUEL; P401, P416, P597, P608, P610, P623 CALLEROS, LUCIA; P071 CALVIO, MF; P602 CALVO, DANIEL; P540 CALVO, ML; P575 CAMPOS, CARMEN A; P020, P230, P231 CAMPOS, ELEONORA; P293 CAMPOS, J; P249, O4 CAMPOS, RH; P253, P461, O10 CAMPOS, RODOLFO; P460, O12 CANDAL, ROBERTO; P295 CANE, A; P398 CANEL, ROMINA; O32 CANGEMI DE GUTIERREZ, ROSA DEL VALLE; P359, P371 CANTARUTTI, D; P408 CANTEROS, CRISTINA E; P188, P193, P194, O53 CANTEROS, MARIA LORENA; P347
266
CANTORE, M; O29 CAPARELLI, M; P462 CAPECE, P; P168 CAPPUCCIO, JAVIER; P335 CAPRA, MARIA LUJAN; P012 CAPRA, SILVANA; P141 CARABALLO, TERESITA; P553 CARASI, PAULA; P025, P026, O31 CARBALLEIRA, N; P412 CARBEL, MARIA; P618, P622 CARBONARI, C; P192, P441, P444, P447, O6, O35 CARDAMONE, LUISINA; P003 CARDOZO, CLARA; P446 CARDOZO, LUZ; P222 CARILLO, N; P547, O47 CARLETTI, SUSANA; P068 CARLETTO KORBER, FPM; P413 CARLONI, GRACIELA; P566, P611, O23 CARMONA, DENISE; P011 CAROBENE, M; O16 CAROL REY, MARIANA CARINA; P191 CARRARO, ALICIA; P348 CARRASCO, MARTA; P234 CARRERA, E; P514 CARRERO, MARTHA; P524, P539 CARRETTO, LUIS; P071 CARRILES, PEDRO; P091 CARRILLO, L; P505 CARRION, N; P135, P421, P562, P579, P629 CARRION, NA; P366, P551, P569 CARRION, SILVINA; P210 CARRIZO, CAROLINA; P174 CASABONNE, C; P244 CASALEGNO, MARIA L; P198 CASANOVAS, EM; P079 CASANUEVA, EV; P398 CASCO, RICARDO; P625 CASELLAS, JM; P381 CASERIO, V; P369 CASIMIR, L; P548 CASSAN, FABRICIO; P081, P090 CASSINO, L; O14 CASTAGNO, LUIS N; P090, P103 CASTAARES, ELIANA; P491 CASTAEDA, NANCY CLAUDIA; P268 CASTAEDA, NC; P150, O52 CASTAO, CAROLINA; P080 CASTELLANOS, ERIKA; P248 CASTELLARI, CLAUDIA; P424, P425, P426 CASTELLI, EDGARDO; P224, P340 CASTELLO, L; P566, O23 CASTIGLIA, VALERIA CAROLINA; P313, P323 CASTILLA , VIVIANA; P042, P252 CASTILLO , P; P105 CASTILLO, A; P463, O9 CASTILLO, M; P581 CASTRILLO, MARIA LORENA; P238, P435 CASTRO, E; P414 CASTRO, LIZ; P433 CASTRO, MARCELA; P020 CASTROVIEJO, L; P522 CASTUMA, CELINA; O42 CATALANO, MARIANA; P055, P473 CATALDI, ANGEL; P293, P445 CATTANA, ME; P138 CATTANEO, M; P355 CATTANI, ALEJANDRA; P553
CATTANI, EUGENIA; O18 CATTELAN, NATALIA; P058 CAYRE, ELISA; P247 CECI, M; P477 CECILIA DE CASTILLO, MARTA; P263, P282, P359, P371 CECILIA, MESTRE; P288 CEJAS, D; O23 CELIZ, GUSTAVO; P124 CENTENO, NESTOR; P495 CENTRON, DANIELA; P045, P052, P053, P054, P055, P062, P063, P132, P150, P268, P335, P345, P422, P581, P594 CEREGIDO, E; P178 CERIANA, PAOLA; P164, P171, P344, P397, 021 CERON CUCCHI, MARIA; P468, P483 CERQUETTI, M CRISTINA; O40 CERRUTTI, PATRICIA; P100 CERUTTI, G; P568 CERVANTES, G; P412 CHADE, MIRIAM E; P187, P189 CHAGAS, CELIO; P543 CHARTIER, K; P148 CHAVERO, GABRIELA G; P546 CHAVEZ, MONICA; P022 CHAVEZ, PIA ELISA; P572 CHAYEP, D; P548 CHEGUIRIAN, LAURA; P145 CHIALVA, C; P236 CHIANI, Y; P408 CHIAPELLO, L S; P584 CHIAPELLO, LAURA; P182 CHIERICATTI, CAROLINA; P423, P455, O37, O38 CHIESSA, GUIDO(2); P107, P287 CHINEN, ISABEL; P192, P236, P404, P441, P444, P447, P458, P466, O6 CHIOCCHIO, VIVIANA; P320 CIARMELA, LAURA; P131 CIFARELLI, MAXIMILIANO; P553 CINQUEGRANI, MARIA DEL VALLE; P621 CIPOLLA, LUCIA; P401, P608, P610 CIRONE, KARINA; P216, P223, P431 CISNEROS, GABRIELA; P117 CISTERNA, CECILIA; P267 CISTERNA, D; P404, P461, P462 CITTADINI, R; P617, O54 CLARA, LILIANA; P417, P626, P628 CLEMENTI A, ALEJANDRA; P199 COCA, M; P615 COCCONI, E; P592 COCIGLIO, R; P408 COCO, BARBARA; P347 COGUT, SANDRA; O18, O19 COLEF, MIRTA ALICIA; P593 COLELLO, R; P240 COLLADO, ISIDRO G; P515 COLLADO, SOLEDAD; P459 COLMEGNA, EMILIANO; P198, P615 COLOMBINI, M; P514 COLOMBO, LAURA; P550 COLOMBO, ROXANA; P106 COLOMBRINI, A; P405 COLOTTO, CELINA; P348, P601 COMBINA, MARIANA; P448 COMERIO, RICARDO; P286 COMESE, ROMINA VIVIANA; P506 CONDE, SANDRA; P267 CONDORI, S; P441 CONIGLIO, ROMINA; P120
267
CONSOLO, FABIANA; P499 CONSOLO, VF; P292 CONTI, MARTA E; P506 CONTINGIANI, M; P253 CONTRERAS FUNES, V; P364, P378, P584 COPES, JULIO A; P219, P220, P222 COPPOLILLO, E; P352 COPPOTELLI, BIBIANA; P296, P299 CORA ELISEHT, M; P352 CORBELLA, S M; P411 CORDERO, PAULA; P098, P531 CORDO, CRISTINA; P527, P535 CORDOBA, A; P127 CORDOBA, L; P568, P615 CORDOBA, L(UNR); P568 CORDOBA, S; P194, P201, P202 CORNEJO, LS; P413 CORREA, CRISTINA; P225 CORREA, JE; P361, P476, P557 CORREA, O; P121 CORREA, SILVIA G; P129 CORRES, M; P343 CORSO, ALEJANDRA; P151, P164, P171, P339, P344, P354, P373, P377, P397, P588, P631, P631, O18, O19, O20, O21, O22 CORTADA, P; P041 CORTES, PAULO R; P364, P378, P584 CORTIAS, TERESA; P259, P273, P482 COSSOLI, MARCELA R.; P113 COSTA SOUZA, TASSIA; P011 COSTA, CRISTINA; P264, P265 COSTA, MIRTA; P204 COSTA, NORA; P620, P623 COSTAGLIOLA, MARCELA; P296, P434, O58 COSTAS, JUAN PABLO; O45 COULLERY, ROMINA; O45 COURETOT, LUCRECIA; P094 COUTINHO, HEITOR DA C; O25 COVELLI, J M; P104 COZZI, JORGE; P107 CRAVERO, SILVIO; P468, P483 CREMASCHI, GRACIELA; P473 CRESPO, J; P097 CREUS, CECILIA; P073, P074 CRIOLLO, PAOLA; P092 CRISTOBAL, H; P300 CRISTOBAL, S; P561 CROCI, CLARA ANA; P214 CRUDO, FABIO; P614 CRUZ, Y; P391 CUADRA, DLOURDES; P310 CUATZ, DANIEL; P344 CUBITTO, MARIA AMELIA; P218, P277 CUDMANI, N; P581 CUELLO, A; P405 CUESTA, ALICIA; P200, P552 CUESTAS, ML; O9 CUETO RUA, EDUARDO; P587 CUFFINI, CECILIA; P139, P195, P479, P512 CUFFINI, MC; P414 CUIROLO, ARABELA; P410, P614 CULASSO, ACA; P253 CUOZZO, S; P319 CURA, J; O29 CURUTCHET, GUSTAVO; P284, P295
D ANDREA, ELENA; P154, P353 D ASTEK, BEATRIZ; P192, P404, P444, P447, P466, O6, O35 D AURIA, F; P508 D ESPOSITO, LOURDES; P430 D G M FRANCO, BERNADETTE; P028 DA SILVA, S; P019 DADAMIO, JESICA; P174 DAELS, PEDRO; P626 DAGOSTINO, M LAURA; P545 DALFOVO, MARIA C; P482 DALLA SANTINA, RODOLFO; P027 DALMAN, MARIA; P550 DALMASO, HERNAN; P159 DANIELLE, FURTADO; P008, P009 DARDANELLI, MARTA SUSANA; P116 DAVEL, GRACIELA; P064, P136, P188, P193, P194, P201, P202, O53 DAVIES SALA, CAROL G; P057 DAZ, MIRTA; P124 DE ANTONI, GRACIELA; P018, P026, P440, O31 DE BUNDER, SABRINA; P383, O51 DE CANDIA, C; O16 DE CARVALHO, K; O5 DE FALCO, P; P121 DE FRANCESCHI, M; P237 DE GARCIA, VIRGINIA; P280 DE GENNARO, MARIA F; P141 DE GREGORIO, PRISCILA; P263 DE GROSSI, JOSE; P208 DE JESUS, JUAN JOSE; P331 DE JONG, LAURA; P144, P257, P340, P574 DE LA FUENTE, AC; P031 DE LA IGLESIA, AGUSTINA INES; P415 DE LA OSA, ORLANDO; O32 DE LUCA, M; P477 DE MARCO, MB; P352 DE MIER, CARMEN; P625 DE NICOLA, MATIAS; P430 DE PAULIS, ADRIANA; P150, P361, P376, P476, P557, O52 DE URRAZA, PATRICIO; P464 DE VEDIA, LAUTARO; P627 DECANDIA, CRISTIAN; O13 DECCA, L; P147 DECOMBARD, GABRIELA; P460 DEDIOL, CORA; P017 DEFRIERI, ROSA L; P509 DEGESE, FERNANDA; P420 DEGIUSEPPE, JUAN; P579 DEGREGORIO, O; P602 DEGROSSI, JOSE; P269, P618 DEL BUSTIO, M; P567 DEL CASTILLO, L; P444 DEL CASTILLO, MARCELO; P395 DEL COCO, VF; P127 DEL MEDICO ZAJAC, M PAULA; O11 DEL MONACO, SILVANA M; P453 DEL PANNO, MARIA; P299 DEL PANNO, MT; P303 DEL PAPA, MARIA FLORENCIA; P082, O27 DEL RIO, AMANDA; P141 DELFINO, CECILIA MARIA; P463 DELFINO, SANTIAGO; O46 DELFOSSE, VERONICA; P166 DELGADO, GABRIELA; P161, P375
268
DELLA GIUSTINA, Z; P241 DELLAGOSTIN, O; P472 DELPECH, G; P163, P477 DELPINO, MARIA VICTORIA; P361, P476, P557, O39 DELPONTE, MARTA BEATRIZ; P333 DELSAUTE, MAUD; P307 DELUCA, G(); P251 DELUCA, GERARDO DANIEL; P251, P564 DENAMIEL, GRACIELA; P185, P611 DEODATO, BETINA; P620, P623 DESTRO, MARIA TERESA; P227, P229 DEZA, N; P192, P404, P441, P444, P447, P604, O6 DI CIOCCO, C; P121 DI CONZA, JOSE; P046, P563, P620 DI GIULIO, BEATRIZ; O49 DI GREGORIO, SABRINA; P409, P410, P536, P614 DI LORENZO, CECILIA ; P372 DI LORENZO, LUCILA; P226 DI MARTINO, A; P566, O23 DI RUSSO, VIRGINIA; P212, P582 DI SALVO, LP; P088, P119, P508 DI VITO, JUAN JAVIER; P600, P606 DIAB, ALEJANDRO; P224 DIAZ RICCI, JUAN CARLOS; P502 DIAZ ZORITA, M; P121 DIAZ, CARLOS; P586 DIAZ, JORGE; P363 DIAZ, L; P041 DIAZ, MONICA; P363 DIAZ, O; P041, P125 DIAZ, V; P290 DIB, MOISES; P182 DIBLASI, LORENA; P061 DICHIARA, D; P364 DIEZ, GRACIELA; P374 DIMITROV TODOROV, SVETOSLAV; P028 DINI, CECILIA; P464 DINOLFO, MARIA INES; P491 DIORIO, LUIS ALBERTO; P311, P314 DIOSMA, GABRIELA; P030, P112 DIRIALDI, NOELIA; P341 DLUGOVITZKY, D; P615 DOBRUSKIN, JUDITH; P533 DOLCEMASCOLO, N; P368 DOMECQ, P; P368, P605 DOMINGUEZ, MS; P302 DONATI, EDGARDO; P308 DORRONZORO, ANDRES; P176 DRIUTTI, ARTENIO A; P516 DRUT, R; P127 DUARTE, ANDREA; P344 DURAN, KATIA; P513 DURAND, K; P249 DURANTE, GABRIELA; P126 DURE, FRANCISCO; P141 DUVERNE, L; P438 EBNER, GUILLERMO; P356, P559 ECHEVARRIA, ROMINA; P096 ECHEVERRIA, GABRIELA; P470 ECHEVERRIA, MONICA; P583 EDAT, LILIANA; P338, P545 EFFRON, DIANA; P509 EFRON, A; P373 EGEA, A L; P162, O22 EGEA, CLARISA; P110 EIRIN, MARIA EMILIA; P463
ELBERT, GABRIELA; P155, O18 ELIADES, LORENA ALEJANDRA; P490, P495 ELIGGI, M SUSANA; P536 ELIZONDO, AM; P445 ELLENBERG , PAULA C; P252 ENCALADA, MARIA ISABEL; P558 ENGLER, S; P019 ENRICO, CECILIA; P348, P601 ENRIQUEZ, R; O17 ENTROCASSI, AC; P414 ENTROCASSI, C; P407 EPSZTEYN, SERGIO; P226 ERASO, JOSE ALBERTO; P029 ERBIN, MARIANA; P155, P344 ERCOLI, EDUARDO; O55 ERDOIZ, JUAN; P476, P627 ERIJMAN, L; O59 ERRECALDE, LAURA; P164, P344, O18, O19 ERSCHEN, AGUSTINA; P393, P562, P579 ESCALANTE, AH; P302 ESCOBAR ORTEGA, JHOVANA; P119, P508, P509 ESCUDERO, ME; P236 ESPADA, C; O16 ESPECHE, M CAROLINA; P024 ESPERANZA, X; P215, P436 ESPINAR MARCHENA, FRANCISCO; O30 ESPUNY GOMEZ, MARIA DEL ROSARIO; O30 ESQUIVEL, P; P192, P404, P560 ESSEN, O; P405 ESTERLIZZI, R; P047, P592 ESTEVAO BELCHIOR, SILVIA; P048, P056, P059 ESTRELLA, MARIA JULIA; P090, P103 ETCHEVERRIA, AI; P240, P271, O8 ETCHEVERS, F; P241 EZCURRA, CRISTINA; P612 EZCURRA, GERARDO; P198 FABIANO, ELENA; P075 FABRA, ADRIANA; P078, P089, P093, P102, P108 FACCONE, DIEGO; P151, P339, O19, O20, O22 FALLENSEN, S; P130 FALLO, A; P619 FAMIGLIETTI, ANGELA; P352, P387, P390, P395, P410, P558, P614, P625 FANGIO, MARIA FLORENCIA; P213 FANJUL, G; P412 FARACE, MARIA ISABEL; P224, P225, P340 FARBER, MARISA; P051, O46 FARIAS, FRANCO; P081 FARIAS, J; P619 FARIAS, MARTA; P036 FARIAS, ME; P246, P304 FARINATI, ALICIA; P169, P176, P381 FARINATI, ALICIA; P169 FARIA, JULIA; P070 FARRANDO, S; P451 FARRANDO, SILVINA; P019, P451 FASCIGLIONE, G; P079 FAVIER, GABRIELA; P232 FAY, F; O14 FEINSILBERG, ALEJANDRO; O54 FELDMAN, LAUREANA; P272, P478 FELIPE, VERONICA; P129 FELLER, GEORGES; P307 FELLNER, MD; P249 FENOLL, ASUNCION; P627 FERNANDEZ , MI; P381
269
FERNANDEZ BLANCO, GRACIELA; P126 FERNANDEZ CANIGIA, LILIANA; P368, P566, P605, O23 FERNANDEZ DI PARDO, AGUSTINA; P320 FERNANDEZ, ANALIA; P388, P389, P395, P595 FERNANDEZ, CLAUDIA; P212 FERNANDEZ, D; P242, P271, P407, P450, O52 FERNANDEZ, EDUARDO; P424, P425, P426 FERNANDEZ, FLORENCIA; P270 FERNANDEZ, HERIBERTO; P429 FERNANDEZ, JUAN M; P198 FERNANDEZ, JULIETA; P050 FERNANDEZ, LAURA; P106, P117 FERNANDEZ, LETICIA A; O26 FERNANDEZ, LUCIANA; P315 FERNANDEZ, M; P122, P128 FERNANDEZ, N; P194, P279 FERNANDEZ, NATALIA; P288 FERNANDEZ, RAFAEL A; P144, P257, P340, P574 FERNANDEZ, RJ; O15 FERNANDEZ, S; P134, P409 FERNANDEZ, VERONICA; P455 FERRARIS, GUSTAVO; P094 FERRARO, SEBASTIAN; P166 FERREIRO, D; P178 FERRER, M FLORENCIA; O11 FESTA, SABRINA; P299 FIGUERAS, L; P392 FIGUEROA, SILVIA; P350 FIGUEROA, VIRGINIA; P177 FIGUEROLA, ELM; O59 FILIPPI, MAURO; P084 FINGERMANN, MATIAS; O42 FIORENTINO, MARIA ANDREA; P216, P223, P431 FIORI, S; P418 FIORITI, A; P418 FISCHER, SONIA; P098 FLICHMAN, DIEGO; P460 FLOCCARI, MIRTHA; P064 FLORES, D; P418 FLORES, SANDRA; P429 FLORES, SILVIA; P388, P389 FLORES, V; P168 FOLABELLA, AM; P302 FONSECA, MARIA ISABEL; P069, P070, P120 FONT DE VALDEZ, G; P031, O5 FONTANA, JUAN MARTIN; P507 FONTANAZZA, A; P178 FONTENLA, PAULA; P288 FONTENLA, SONIA; P279, P285, P288 FORASTIERO, A; P567 FORD, MARIA LOURDES; P560 FORMENTO, JUAN CARLOS; P330, P451 FORT, MARCELO; P196 FORTE GIACOBONE, AF; P265, P291 FOSCH, SONIA; P206 FOSSATI, S; P377 FOURNIER, JULIO CESAR; P332 FRANCESCHI, V; O15 FRANCHI, LUISA; P452 FRANCI, TOMAS; P427 FRANCIA, LOURDES; P465 FRANCIONI, SILVIA; P203 FRANCISETTI, V; P406, P613 FRANCO, BERNADETTE DGM; P227, P229 FRANCO, MIRTA; P269, P270, P272, P478 FRANGI, E; P628 FREIRE, M C; P462
FRIEDMAN, LAURA; P270 FRIGERIO, CECILIA; P239, P312 FRIONI, LILIAN; P075 FRISON, LAURA N; P331, P456, P457 FRITZ, C; P292 FRITZ, MARIANA; O42 FRITZ, ROSALIA; P032, P213 FRIZZO, LAUREANO SEBASTIAN; P016, P021, P027, P243 FRUTOS, MARIA CELIA; P139, P195, P479, P512 FUCHS, LUMILA; P196 FUENTES, MS; P318 FUENTES, S; P319 FUMERO, MARIA VERONICA; P116 FURFARO, ALEJANDRA; P141 FUSE, LUIS; P134 GADDY, JEN; O43 GAGETTI, PAULA; P164, P171, P344, P373, P377, O20, O21, O22 GAGGIOTTI, MONICA; P423 GAGLIOSTRO, GERARDO; P216 GAILLARD, MARA EMILIA; O42 GALANTERNIK, L; P619 GALARZA, PATRICIA; P363, P593, P616, O17 GALAS, M; P183, P418, P631, P632 GALIOTTI, HUGO; P330 GALLARDO, ADRIANA A; P056, P059 GALLEGO, ALFREDO; P326, P327 GALLEGO, MARIA JOSE; P347 GALLENI, MORENO; P307 GALLERI, DELFINA; P220 GALLI, LUCIA; P466 GALLO VAULET, ML; P407, P414 GALVAGNO, MIGUEL; P100 GALVAN, M; P121 GAMARRA, M; P391 GAMARRA, SOLEDAD; O50 GAMBA, R; P440, O31 GAMBANDE, T; P615 GAMBANDE, T; P568 GAMBERO, MARIA LAURA; P239, P312 GARAY, FERNANDO; P086 GARBASZ, C; P157 GARBERVETSKY, LILIANA; P577 GARBINI, ADRIANA; P430 GARCIA , CYBELE C; P252 GARCIA DE SALAMONE, INES; P088, P119, P508, P509 GARCIA EFFRON, GUILLERMO; O50 GARCIA RAMIREZ, DOLORES; P419 GARCIA, CARLOS; P272, P478 GARCIA, D; P394 GARCIA, DANIEL; P076 GARCIA, DOLORES; P586 GARCIA, ILEANA; P523 GARCIA, JULIA E; P109 GARCIA, M; P013, P047, P592 GARCIA, MARIA JOSE; P239 GARCIA, MIRTA BEATRIZ; P116 GARCIA, MYRIAM; P469 GARCIA, PATRICIA; P084, P096 GARCIA, PL; P405 GARCIA, S; P194 GARCIA, SUSANA; P625 GARDELLA, NOELLA; P409, P410, P411, P563, P614 GARIBOGLIO VAZQUEZ, MARIA LUCRECIA; P191, P283, P325 GARITA, S; P534
270
GAROFALO, AILIN; P485 GARRIDO, MARIA FERNANDA; P092 GARRIZ, ANDRES; P515 GARRO, MS; P001, P031 GARRO, OSCAR; P247 GARROTE, GRACIELA LILIANA; P030, O7, O31 GASONI, LAURA; P107, P499 GASPAROTTO, A; P547, P549, O47 GASPERI, SILVIA; P598 GATICA, M S; P508 GATTA, C; P352 GATTI, BLANCA MARIA; P142, P175, P336, P374, P418, P583, P603 GATTI, MONICA; O3 GAUDIOSO DE ALLORI, MA CRISTINA; P263, P371 GECA; O53 GEMINI, VIRGINIA; P326 GENTILE, ADRIAN; P141 GENTILE, ALBERTO; P255 GENTILE, EMILIANO; P463, O9 GENTILI, ALEJANDRO; P316 GENTILINI, A; P567 GENTILINI, ANTONELA; P177 GENTILINI, ELIDA RAQUEL; P167, P170, P185, P494, P611 GENTINA, JC; P033 GERARD, MELISA; P456 GERARD, OSCAR A; P332 GERBALDO, G; P013 GERBINO, ESTEBAN; P002 GEREZ , M; P041 GEREZ, CARLA L; P018 GERHARDT, E; P458 GERLACH, E; P385 GEROSA, PAULA; P125 GERVASONI, L; P241 GHELLI, R; P575 GHIGLIONE, BARBARA; P046 GHIO, SILVINA; P078 GIACOBONI, GABRIELA; P335, P422 GIACOMINO, MARTA; P546 GIACOMODONATO, MONICA; O40 GIAI, CONSTANZA; P485 GIANECINI, ARIEL; P350 GIANNUZZI, L; P440, O31 GIECO, ADRIANA; P241, P305 GIGOLA, GRACIELA; P446 GIMENEZ, GUILLERMO; P222 GIMENEZ, L; P121 GIOFFRE, ANDREA; P166, P470 GIORGIO, ERNESTO MARTIN; P120 GIORI, GS DE; P001 GIOVANAKIS, M; P366, P569 GIUFFRE, LIDIA; P322 GIUGNO, SILVINA; P130, P357 GIUSIANO, GUSTAVO; P122, P128, P138, P152, P168, P251 GIUSTI, MARIA DE LOS ANGELES; P082, O27 GLIEMMO, MARIA F; P230, P231 GLIOSCA, LAURA; P607 GOBATTO, NADIA; P375 GODEAS, ALICIA; P106, P320 GODINO, AGUSTINA; P098 GOLDMAN, CINTHIA G; P473, P587 GOLOWCZYC, MARINA A; P018 GOMEZ BALTAR, MIGUEL A; P198 GOMEZ BONDUEL, MV; P548 GOMEZ COLUSSI, ANDREA; P165 GOMEZ DE SARAVIA, SANDRA; P507, O56
GOMEZ ZAVAGLIA, ANDREA; P002 GOMEZ, A; P408 GOMEZ, ALEJANDRO; P351 GOMEZ, ELENA DEL VALLE; P506 GOMEZ, I; P237 GOMEZ, L; P405 GOMEZ, MA; P493, P511 GOMEZ, MARIA VERONICA; P128, P560, P564 GOMEZ, MARISA; P485 GOMEZ, ROMINA; P527, P535 GOMEZ, SONIA; P339 GONZALEZ AYALA, SE; P175, P358, P418, P583 GONZALEZ CAPO, DIEGO; P043 GONZALEZ FRAGA, SOL; P045, P434 GONZALEZ ITTIG, RE; P413 GONZALEZ, ANA JULIA; P111 GONZALEZ, ANA JULIETA; P326, P327 GONZALEZ, ANA MARIA; P486, P496, P514 GONZALEZ, DAMIAN; P424, P425 GONZALEZ, G; P382, P582 GONZALEZ, GLADYS; P212, P334, P404 GONZALEZ, GUILLERMO; P180 GONZALEZ, L; P343, P571 GONZALEZ, MARIA; P598 GONZALEZ, MARIA E; P515 GONZALEZ, MARIA JULIANA; P500 GONZALEZ, MARIA LAURA; P161, P375 GONZALEZ, MARIA TERESA; P277 GONZALEZ, MARIA VIRGINIA; P553 GONZALEZ, MARIO; P429 GONZALEZ, N; P498 GONZALEZ, NORMA; P065 GONZALEZ, RUBEN DARIO; P029, P321 GONZOLEZ, GUILLERMO; P186 GOI, ANIBAL; P034, O45 GORDILLO, MARIA ANTONIETA; P518 GORDIOLA, MARIANA; P484, P554 GORDIOLA, ML; P266 GRACIA MARTNEZ, FLORENCIA; P196 GRAIEB, AUGUSTO; P418, O42 GRANADOS, GABRIELA; P387 GRANELL, A; O29 GRANOBLES VELANDIA, C; P467, P471 GRASSANO, ALICIA; P513 GRASSANO, ALICIA ESTER; P096 GRASSO, A; P343, P571 GRASSO, DANIEL; P293 GRASSO, PAULA; P559 GRAU, ROBERTO; P034, P260, P328, O44, O45 GRAZIANI, JAVIER; P459 GRECO, G; P164, P417 GRECO, MARIANA; P439, P452 GREGORINI, EDUARDO; P550 GRELLET, L; P581 GRENON, S; P385 GRENOVERO, S; P477 GROPPA, M; P066 GROSSO, OMAR; P206 GRUMELLI, YANINA; P219 GUALDASI, MARIA SOLEDAD; O13 GUALTIERI, ARIEL FELIX; P039 GUARDATI, C; P047, P369, P592 GUELFAND, LILIANA; P135, P155, P156, P168, P177, P366, P421, P551, P569, P629 GUERRERO MOLINA, MARIA FERNANDA; P502 GUERRERO, L; P355 GUERRERO, L D; O59
271
GUERRERO, SERGIO; P165 GUERRIERO, LEONOR; P354, P397 GUGLIELMOTTI, DANIELA; P003 GUIAMET, PATRICIA; P507, O56 GUIDA, ADRIANA MARCELA; P217 GUIGNO, SILVINA; P142 GUILLEMI, ELIANA; O46 GUIAZU, LORENA BELEN; O30 GUIVERNAU, MIRIAM; O55 GUSTINCIC, VIRGINIA; P365 GUTIERREZ, MA; P150, P376, O52 GUTKIND, GABRIEL; P046, P327, P387, P614, P617, P620, O23, O24 GUZ, LUCAS; P295 GUZMAN ARRAUSI, FRANCISCO; P080 GUZMAN, EMILIA; P601 HAAG, ELIANA; P006 HAILS, I; P568 HAMET, MARIA FERNANDA; O7 HAPON, MARIA VANDA; P501, P522 HARDIE, NELIDA; P416 HARTWIG, D; P472 HECHT, JUAN PEDRO; P039 HELLER, KNUT; O1 HEREDIA, J; P121 HEREDIA, O; P047, P592 HERMIDA LUCENA, PERLA SONIA; P261 HERMIDA, ELIDA; P532 HERMIDA, LAURA; P061 HERNANDEZ, C; P123, P337, P548, P556 HERNANDEZ, DIEGO; P250, P254 HERNANDEZ, EDGARDO ALEJANDRO; P281 HERNANDEZ, MARTIN; P071, P250, P254, P465 HERRERA, C; P019 HERRERA, F; P392, P394 HERRERA, M; P396 HERRERA, MELINA; P555, P563 HERZOG, L; P486 HIGA, LUIS; P540 HILARIO, FELIPE; P211 HOFFER, ALICIA; P225 HOLLENDER, DAIANA; P267 HORIANSKI, MARTA AURELIA; P238, P435 HOZBOR, DANIELA; P050, O42 HOZBOR, MC; P296, O58 HUALDE, MARIANA; P203 HUERTA, V; P364, P378, P584 HUERTAS, LUISA; P248 HUESO, L; O29 HUGO, AA; P275 HUMEN, MARTIN; O41 HYNES, ERICA; P014 HYYTIA TREES, E; P404 IACONO, RUBEN; P136 IBAEZ, FERNANDO; P093 IBAR, MARIELA; P422 IBARRA CAMOU, BELEN; P193 IBARRA, C; P458 ICELY, PAULA ALEJANDRA; P129, P211 IDOIPE, J; P178 IGLESIAS, ALBERTO; P077, P165 IGLESIAS, LUCIA; P134 IGLESIAS, MARIA C; P113, P516 ILLAN, HE; P462
ILLANES, ANDRES; P002 IMPERIALE, BELEN; O49 INGARAMO, DAMIAN; P415 IOVANNITTI, CRISTINA; P126, P207, P210 IRAIZOZ, LEIRE; P426 IRAOLA, GREGORIO; P071 IRIARTE, ALEJANDRO; P623 IRIARTE, H; P498 IRIARTE, LILIANA; P089 IRINO, K; P443, O35 ISA, MARIA BEATRIZ; P040 ISABEL, I; P041 ISAGUIRRE, ANDREA; P232 ISASMENDI, ADELA; P338, P545 ISLA, GUILLERMINA; P201, P202 ISLA, MI; P396 ISLA, MIGUEL; P095 IURLINA, MIRIAM; P032 JACOB, PAULINA; P095 JANJETIC, MARIANA; P587 JAQUET, BELEN; P189, P235 JERIC, PAOLA; P055, P268, P361, P476, P557 JERKE, GLADIS; P238 JERKE, GLADIS; P435 JEWTUCHOWICZ, VIRGINIA MARTA; P197, P200, P207, P552 JIMENEZ, MG; P413 JOFRE, EDGARDO; P098 JORDA VARGAS, LILIANA; O18 JORDA, GB; P217, P385 JUANIZ, A; P047, P592 JUAREZ TOMAS, MARIA SILVINA; P274 JUNQUEIRA DE CAMARGO, RITA; P028 JURADO, V; P462 JURE, MA; P441, P581 JURI AYUB, M; P236 JURQUIZA, VERONICA; P434 KAEN, RUTH MARIELA; P311, P314 KARAKACHOF, M; P408 KAUFMAN, SARA; P155, P177, P203, P344, P386, P567, O18, O19 KAWON, ALICIA; P417 KEMPPAINEN, MINNA J; O28 KERBER, M; P385 KIGAN, X; P624 KIGUEN, ANA XIMENA; P139, P195, P479, P512 KIKOT, GISELE; P499 KIRSANOV, NATALIA; P322 KNOTT , MARIA ELENA; P252 KOBAYASHI, KIROKU; P107 KOPCOW, ELENA; P126 KOROL, SONIA; P326, P327, P540 KOSSMAN, AV; P148 KOTLAR, CATALINA; P099, P101 KOVENSKY, JAIME; P360 KRAMER , FERNANDO L; P380 KREMER, LUIS EMILIO; P195 KRINSKY, MARIELA; P337 KRUGER, ALEJANDRA; P449, P450, P467, P471 KRUGER, HR; P511 KUHAR, FRANCISCO; P323 KULLDORFF, M; P183 KUMMRITZ, SILVANA; P469 KUSZNIERZ, G; P408
272
LACZESKI, M; P578, P585 LAGARES, ANTONIO; P082, P402, O27 LAGARES, ANTONIO; P603 LAGGER, SILVANA; P331 LAMATTINA, LORENZO; P073 LAMBERGHINI, RICARDO; P348, P601, O22 LANDABURU, FERNANDA; P207 LANDGRAF, MARIZA; P227, P229 LANDOLT, NOELIA; P173, P580 LANGE, CARLOS ERNESTO; P490 LAPERA, C; P595 LARA, C; P405, P418 LARRABURU, EZEQUIEL; P110, P111 LARZABAL, M; P445, P458 LASCURAIN, M; P588 LATORRE RAPELA, MG; P486, P492, P510, P514 LATORRE, GUSTAVO; P281 LATTAR, SANTIAGO; P554 LAVARI, LUISINA; P015 LAVIN, PAOLA; O56 LAZARTE OTERO, VALERIA; P232 LAZO, ALBERTO; P598 LAZZARINI, LE; P148 LEAL, F; P472 LEARDINI, NELIDA; P064 LECCESE TERRAF, MARIA CECILIA; P274 LEDESMA, ELIZABETH; P348, P601 LEGARIA, MC; P566, O23 LEGUIZAMON, L; P385 LEHMANN, ERICA; P143, P179, P184, O48 LEMA, C; P462 LENZ, ANA; P337 LEON, A; P440, O31 LEON, IGNACIO E; P297 LEON, JORGE; P310 LEON, LUCAS; P353 LEOTTA, GERARDO A; P219, P222, P433 LERMAN DE ABRAMOVICH, BEATRIZ; P536 LETT, LINA; P306 LEVIN, BATRIZ CLARA; P197, P200 LEVIN, LAURA N; P314 LEVIS, SILVANA; P064, P193 LEZCANO, MT; P585 LIBERMAN, CLAUDIA; P541 LIBKIND, DIEGO; P285 LIEVIN LE MOAL, VANESSA; O41 LIFSCHITZ, VIVIANA; P560 LILJESTHROM, G; P525 LIMANSKY, ADRIANA; P047, P049, P055, P356, P369, P550, P559, P565 LINERO , FLORENCIA N; P252 LIOTTA, JAVIER; P459, P460, O12 LISSARRAGUE, S; P163 LITTERIO, MR; P337, P341, P566, O23 LIVELLARA, BI; P628 LIZARRAGA, EMILIO; P371 LLORENTE, BERTA; P110, P111 LLORENTE, CARLA; P528 LLORENTE, P; P602 LO, TAI EN; P117 LOCATELLI, SILVANO; P526 LODEIRO, A R; P104 LOMBARDIA, ESTEBAN; O44 LOMBARDO, DANIELA; P239, P312 LONDERO, ALEJANDRA; O7 LOPARDO, HORACIO; P123, P162, P337, P341, P548, P556 LOPES, JANAINA THAIS; P227
LOPEZ CAZORLA, ANDREA; P218 LOPEZ DANERI, GABRIELA; P207 LOPEZ DE VOLDER, A; P619 LOPEZ DE VOLDER, MA; P269, P619 LOPEZ GARCIA, S L; P104 LOPEZ MORAL , L; P156, P157 LOPEZ RUITTI, PAULA; O20 LOPEZ, AM; P303 LOPEZ, ANA C; P233, P297 LOPEZ, C; P137, P441, P581 LOPEZ, DALILA; P222 LOPEZ, EL; P391 LOPEZ, G; P241, P393 LOPEZ, HORACIO; P545 LOPEZ, LUIS; P091 LOPEZ, M; P156 LOPEZ, ME; P598 LOPEZ, MF; P104 LOPEZ, N; P287 LOPEZ, O; P438 LOPEZ, S; P615 LOPEZ, SMY; P114 LOPEZ, ZONNIA OBDULIA; P309 LORDA, GRACIELA; P080 LORENA, AGUERRE; P608 LORENZO PISARELLO, MARIA JOSE; P038 LOSADA, M; P352 LOSCH, LILIANA SILVINA; P133, P283, P325 LOTO, FLAVIA; P315 LOUP, VERONICA; P220 LOUREIRO, JULIO; P473 LOZANO, MAURICIO JAVIER; P082, O27 LUCAS, N; P471 LUCATO, DIANA M; P351 LUCCHESI, PMA; P245, P427, P428, P443, P449, P450, P467, P471 LUCERO ESTRADA, CECILIA; P232, P236 LUCERO, C; P339, P393, P397, P631, P632, O22 LUCERO, G; P501, P522 LUCERO, MC; P354 LUCIANO, M; P615 LUCIANO, MI; P198, P568 LUDEMANN, VANESA; P439, P452, O32 LUNA, F; P097 LUNA, VIRGINIA; P081 LUQUE, GRACIELA; P149 LUQUEZ, CLAUDIA; P330 LURA, MARIA CRISTINA; P349, P486, P492, P496, P510, P514 LUTZ, FABIANA; P600, P606 MAC CORMACK, WALTER P; P281 MACARONI, LUCAS; P085 MACCARONE, GABRIELA; P607 MACHAIN, M; P178 MACHUCA, L; P486 MADEO, CECILIA; P126 MADSEN, ELIZABETH; P389 MADUEO, LAURA; P294 MAETO , CYNTHIA A; P252 MAGARIOS, FRANCISCO; P589 MAGDALENO, A; P595 MAIOLO, ELENA; P143, P179, P184, P405, O48 MALAN, RICHARD; P460 MALDONADO, I; P168, P605 MALDONADO, MARIA CRISTINA; P309, P518 MALO, MARINA; P430
273
MAMY, GISELLA; P403 MANCINI, MICAELA; P542 MANCIOLA, ELIZABETH; P363 MANEIRO, MARIA LAURA; P065 MANFREDI, EA; P192, P447, O6, O33 MANGANO, ANDREA; P269 MANGIATERRA, M L; P122, P138, P152 MANGIATERRA, S; P406, P613 MANNINO, CONSTANZA; P402 MANS, M C; P438 MANTERO, PAULA; P473 MANTO, MARIA DEL CARMEN; P197 MANTOVANO, JULIAN; P208 MANZONI, GERARDO; P393 MARANDINO, ANA EUGENIA; P254 MARAZZA, JA; P001 MARBAN, LILIANA; P523 MARCHIARO, PATRICIA; P550, P565 MARCIPAR, I; P510 MARCOPPIDO, GISELA; P468 MARCOS, E; P602 MAREQUE, CINTIA; P075 MAREY, EDITH; P226 MARGARI, ALEJANDRA; P135, P366, P551, P569 MARGUET, EMILIO; P020, P310 MARGUET, ROGELIO; P342 MARIN, H; P251 MARIN, J; P394 MARINA, MARIA; P515 MARINO, ANA; P521, P525 MARINO, M; P147 MARINO, RICARDO; P612 MARIANSKY, ANA LAURA; P562 MARIOLI, JUAN MANUEL; P500 MAROZZI, M L; P137 MARQUES, ISABEL ANA; P191, P593 MARQUEZ, ALEJANDRO; P623 MARQUEZ, VANINA; P165, O57 MARRAMA, MARCELA G; P546 MARSONET, SILVINA; P370, P399 MARTEARENA, MARA RITA; P526 MARTI, LUIS ENRIQUE; P027 MARTIN, GRACIELA; P133 MARTIN, PEDRO; P084 MARTINA, P; P384, P402, P596 MARTINELLI, MARIA ELENA; P570 MARTINENGO, NORA; O36 MARTINEZ ALCANTARA, V; P112 MARTINEZ TAGLE, MA; P414 MARTINEZ, ALICIA; P117 MARTINEZ, CLAUDIA; P401, P608, P610 MARTINEZ, MARIA VALERIA; P346 MARTINEZ, MC; P287 MARTINEZ, MIRIAN LILIANA; P238 MARTINI, CARLA; O27 MARTINI, MARIA CARLA; P082 MARTINICH, C; P369 MARTINO, PABLO; P439 MARTN, G; P258 MARTOS, GLADYS; P064 MARUCCI, PATRICIA LILIANA; P214, P218 MARUCCI, RAUL SALOMON; P217 MASANA, M; O35 MASCIARELLI , O; P105 MASEDA, JUAN PABLO; P430 MASIH, DIANA; P182
MASTROBERTI, MARISA; P360 MASTROIANNI, A; P548 MATEU GAGLIARDI, JANINA; P261 MATHET, VERONICA; P463, O9 MATHEUS, BARBOSA; P008 MATHIAS, LUIS ANTONIO; P221 MATOS, DULCILENA; P202 MATTEO, MARIO; P473 MATURANO, CARMEN; P118 MATURANO, PAOLA; P115 MATURANO, YOLANDA PAOLA; P448 MAUMARY, ROXANA; P486, P492, P496, P510 MAYO, JORGELINA; P345 MAZA, M; P451 MAZZA, MARIANA; P136, P188, O53 MAZZEI, JUAN; O54 MAZZEO, M; P148, P382, P445 MAZZEO, MELINA; P212, P334 MAZZUCCHINI, H; P407 MAZZUCOTELLI, CINTIA; P087 MBAYED, VA; P461, O10 MEDAURA, MARIA CECILIA; O55 MEDEOT, DANIELA BEATRIZ; P116 MEDINA, EMILCE; P315 MEDINA, MARCELA; P023 MEDINA, MARCELO; P133 MEDINA, MYRIAM; P133 MEDVEDEFF, MARTHA G; P187, P189, P235, P380 MEIRELLES BARTOLI, RAPHAELLA; P221 MELAMED, CELIA; P226 MELATINI, GABRIEL; P446 MELENDEZ, YAMIL; P481 MENDEZ ARANCIBIA, M; P366, P569 MENDEZ ARANIBAR, M; P421, P629 MENDEZ, EMILCE DE LOS ANGELES; P160, P190, P349, P367, P379, P381, P561 MENDEZ, LAURA; P216, P223 MENDEZ, MARCELO; P260 MENDOSA, MARIA ALEJANDRA; P172, P367, P561 MENDOZA, LUCIA; P036 MENDOZA, RODOLFO; P523 MENENDEZ, MARIA DEL PILAR; P591 MENENDEZ, VERONICA; P360 MENGHI, C; P352 MERCANTI, DIEGO; P003, O2 MERELES RODRIGUEZ, BEDA E; P187, P189 MERINO, LUIS ANTONIO; P128, P133, P283, P325, P560, P564 MERKIER, ANDREA KARINA; P054, P132, P345, P594 MERKT, MARIELA; P210, P420 MERLO, CAROLINA; P324 MEROLA, G; P411 MESA, ANA C; P202 MESQUITA, JP; P472 MESSINA, M; P605 MESTELAN, SILVIA; P306 MESTRE, MARIA CECILIA; P285 MEZA THOMAS, RICARDO; P235 MICELI, GRACIELA; P372 MICELI, PAOLA; P372 MIGLIERINA, AM; P493 MIGLIORANZA, CRISTINA; P203 MILIWEBSKY, ELIZABETH; P192, P357, P404, P444, P447, P604, O6 MINASSIAN, ML; O9 MINGORANCE, SANTIAGO; P226
274
MINNAARD, JESSICA; P025, P233, P529 MINOLI, MJ; P153 MINVIELLE, MARTA; P131 MIAN, ALEJANDRO; P384, P596 MIQUELARENA, AMADEO; P169, P176 MIRABILE, M; P019 MIRANDA, A; P385 MIRANDA, GRACIELA; P577, P591 MIRAS, MIRTA; P139 MOBILIA, LILIANA; P555, P563, P630 MODINI, LAURA; P536 MOJSIEJCZUK, LAURA; P459, P460 MOLDES, CARLOS ALBERTO; P513 MOLDES, SILVINA; P335 MOLGATINI, SUSANA LILIANA; P197, P200 MOLINA, J; P602 MOLINA, NORA; P131 MOLINAS, KARINA; P261 MOLINERI, ANA; P423 MOLLERACH, ANALIA; P367, P379, P561 MOLLERACH, MARTA; P409, P410, P411, P563, P614, P617 MOLLO, V; P547, O47 MON, LAURA; P470 MONELLA, RODRIGO; P487, P489 MONTANARO, PATRICIA; P139, P384, P596 MONTEAVARO, CRISTINA; P205 MONTELEONE, MARIA EMILIA; P085, P094 MONTERISI, A; P547, P549, O47 MONTIBELLO, S; P386, P567 MONZANI, VICTORIA; P599 MORAGA, NORMA; P300 MORAN, E; P412 MORANO, SUSANA; P190 MORASO, BEATRIZ; P623 MORCILLO, NORA; O49 MOREIRA, AR; P445 MOREIRA, MARCELO; P235 MOREIRA, MARIA DEL R; P087, P228 MORELLI, IS(); P294, P296, P299, P308 MORENO SARMIENTO, NUBIA; P539 MORENO VENTAS, XABIER; O55 MORENO, FABIANA; P134 MORENO, G; P147 MORENO, MARIA VIRGINIA; P491 MORENO, NUBIA; P524 MORENO, SUSANA; P618, P622 MORERA, G; P561 MORETTON, JUAN; P208, P209, P543 MORGANTE, CAROLINA; P129 MORI, GLADYS; P098 MORONI, M; P146, P362, P398, O34 MORSELLA, CLAUDIA; P216, P223, P431 MORTARINI, MIRIAM; P476, P627 MORTOLA, EDUARDO; P044 MORVAY, LAURA; P599 MOSCA, LILIANA; P139 MOSCHINI, RICARDO; P499 MOSCOLONI, MARIA; P158, P373, P377 MOULINS, O; P588 MUGNOLO, ANGELA; P306 MUJICA, MARIA TERESA; P207, P552 MUOZ, MARIA ANDREA; P448, P519, P538 MUOZ, MS; P153 MUOZ, VANINA; P093 MUOZ, VERONICA; P154, P353 MURISENGO, O; P194, O53 MURZICATO, SOFIA; P614
MUSA, H; P581 MUSSANTE, G; P398 MUSSI, ALEJANDRA; P047, O43 MUSSI, MA; P049 MYKIETIUK, A; P392 NACIF, NORMA; P017 NADER MACIAS, MARIA ELENA; P024, P274 NAGEL, ALICIA; P349, P367, P561 NAGEL, CLAUDIA; P388 NALLY, MARIA CRISTINA; P519, P537, P538 NARDELLI, M; P052, P063 NARDI, MA; P628 NARDIN, MARIA ELENA; P160, P190 NASTRO, MARCELA; P387, P390 NATES, SILVIA VIVIANA; P040 NAVA, MC; P575 NAVARRO OCONNOR, MARIA; P141 NAVARRO, ANTONIO ROBERTO; P309, P518 NAVARRO, M; P547 NAVARRO, MA; P575 NAVARRO, MARIA CECILIA; P278 NAVELLO, M; P212, P334, P382 NAZAR, JAVIER; P125 NAZARENO, MA; P001 NAZRALA, JORGE; P330 NEGRONI, RICARDO; P143, P184, O48 NEIRA, LILIANA; P612 NEIROT, R; O15 NEVE, HORST; O1 NEVIANI, ERASMO; O3 NICOLA, FEDERICO; P394, P419 NICOLET, CLARA; P550 NICOLI, JACQUES; P011 NIEVAS, JIMENA; P419 NOBILE, M; O51 NOGUERAS, MONICA; P609 NOTARIO, RODOLFO; P198, P381, P568, P615 NOTO LLANA, MARIANGELES; O40 NOVAK, PAULA; P469 NOVOA, MARIA JOSE; P091 NUNCIRA, TANIA; P182 NUEZ, JESUS DARIO; P503 NUEZ, LIDIA; P208, P209, P543 NUEZ, LORENA; P222, P433 NUEZ, PABLO; P051 NUEZ, S; P249 OBANDO, MELISSA; P083 OCAMPO, D; P130 OCAMPO, HORACIO; P457 OCAA CARRIZO, V; P549 OCAA, V; P547, O47 OCCHIONERO, M; P407, P414 OCHIUZZI, MARIA EUGENIA; P210 OCHOA, PATRICIA; P609 OCHOTECO, MC; P173, P580 ODERIZ, SEBASTIAN; P336, P357, P358, P374, P597 OJEDA , PABLO; P301 OLDRINO, MARCELA; P351 OLIVELLI, MELISA; P284 OLIVERA, NELDA; P298, P342 OLIVETTO, N; P237 ONCO, MARIA INES; P489, P497 OPPEZZO, OSCAR JUAN; P067 ORDEN, BIBIANA; P131 ORELLANA, NORA; P395
275
ORIANI, ALEJANDRA SOLEDAD; P316 ORIANI, DELIA; P316 ORMAZABAL, MAXIMILIANO; P050 ORTELLAO, L; P408 ORTIZ, NELIDA; P076 ORTIZ, RODOLFO; P259, P273 ORTIZ, S; P438 OSUNA, CAROLINA; P345 OTAEGUI, L; P588 OTERO, A; O15 OTERO, JOSE; P536 OTHEGUY, STELLA MARIS; P347 OUBIA, JR; O9 OVIEDO, C; P616, O17 OVIEDO, P; P578, P585 OYHENART, JORGE; P196 PADOLA, NL; P240, P242, P245, P271, P443, O8 PAEZ, ROXANA; P006, P015 PAGANINI, H; P162, O22 PAGANO, IRENE; P593, P616, O17 PAGLIERO, FABIOLA; P080 PAIRETTI, NATALIA ANDREA; P333 PALACIOS, G; O15 PALACIOS, J; P033 PALACIOS, MAURO; P220 PALACIOS, NICOLAS; P180, P181, P186 PALADINO, S; P451 PALAU, MARIA JULIANA; P597 PALAVECINO, NOELIA; P247 PALAZZOLO, MARIA SOLEDAD; P600, P606 PALLADINO, M; P444, O35 PALMIERI, MONICA; P166 PALMISCIANO, VERONICA; P599 PALOMBARANI, SUSANA; P350 PAMPURO, SANDRA; O13 PANAGOPULO, M; P146, P362 PANCOTTO, VA; P292 PANICCIA, L; P407 PANIZO, MERCEDES; P202 PANZERA, YANINA; P250, P254, P465 PAOLICCHI, FERNANDO; P216, P223, P431 PAPALIA, MARIANA; P327 PAPINUTTI, LEANDRO; P313, P323 PARADA, R; P041 PARAJE, MG; P256, P258, O8 PARCERISA, IVANA; P077 PARDO, ALEJANDRO; P439, P452, O28 PAREDES, M; P373 PAREDES, NI; P292 PAREJA, VIRTUDES; P144 PAREJAS, V; P257 PARMA, AE; P240, P242, P245, P271, P427, P428, P443, P449, P467, P471, O8 PAROLDI, EMILIO; P315 PASCUAL, L; P013 PASSERINI DE ROSSI, BEATRIZ; P272, P478 PASSICOT, GISELLA; P620 PASTERAN, FERNANDO; P339, P354, P393, P397, P588, 019, O18 PASTOR, ALEJANDRA; P329 PASTOR, NICOLAS; P531 PASTORINO, G; P112, P114 PATALLO, CLAUDIA; P158, P204 PATO, ANA MARIA; P572 PATRIARCA, ANDREA; P432 PAULUCCI, NATALIA SOLEDAD; P116
PAVETO, CRISTINA; P061 PAZ, MARTA; P208, P543 PAZ, NATALI; P198 PEDERSEN, D; P407 PEDRAZA, MARIA VIRGINIA; P541 PEDRAZA, RAUL OSVALDO; P502 PEDRIDO, MARIA EUGENIA; O44, O45 PEGELS, E; P578, P585 PEIROTTI, MARIA GABRIELA; P145 PELIZZA, SEBASTIAN ALBERTO; P490, P504 PELLICER, KAR; P220 PELUFFO, G; P595 PENNINI, MAGDALENA; P210, P420 PENON, E; P121 PEA, ALEXANDRA; P248 PERAL GARCIA, PILAR; P220 PERALTA, GUILLERMO; P014 PERALTA, MARINA; P573 PERAZZI, B; P352, P410, P614, P625 PERDIGON, GABRIELA; P446 PERDOMENICO, P; P088 PERDOMO, IVET; O56 PEREDA, R; P157 PERESSUTTI, SR; P296, O58 PERETTI, L; P486 PERETTI, SILVIA TERESA; P160 PEREYRA, ALEJANDRA; P074 PEREYRA, CINTIA; P074 PEREYRA, MARIA DELIA; P611 PEREZ BRANDAN, CAROLINA; P533 PEREZ CHAIA, A; P033, P035, P037, P038 PEREZ GIMENEZ, J; P104 PEREZ, GERMAN L; P516 PEREZ, JORGELINA; P244, P356, P400, P559 PEREZ, JUAN; P446 PEREZ, M; P215, P436 PEREZ, MARCELA; P151, P345, P365 PEREZ, MELISA; P489, P497 PEREZ, PF; P025, P026, P233, P275, O41 PEREZ, RUBEN; P071, P250, P254, P465 PERFUMO, CARLOS; P335, P422 PERGOLA, MARIANA; P106 PERLIN, DAVID S; O50 PERLO, OE; P153 PEROTTI, MARINA; P371 PERRIN, CELESTE; P415 PERTICARI, ALEJANDRO; P064, P068, P109 PESCE, VIRGINIA MERCEDES; P519, P537, P538 PETRONI, ALEJANDRO; P339 PETRUSSI, N; P630 PEZZANI, BETINA; P131 PEZZONI, MAGDALENA; P264, P265 PEZZULLO, SILVINA DESIREE; P278 PIACENZA, LAURA; P420 PIANCIOLA, LUIS; P148, P212, P334, P382, P404, P418 PIATTONI, VANESA; P077 PICCINETTI, CARLOS; P109 PICCOLI, LAURA IRENE; P593 PICCONI, MA; P249, O12 PICHEL, M; P045, P183, P398, P422, P434, O4, O34, O51 PICON, SANTIAGO; P133 PIDONE, J; P135, P366, P421, P551, P569, P629 PIECKENSTAIN, FERNANDO; P090, P515 PIEDRABUENA, M; P630 PIERANGELI, NB; P148 PIERINI, J; P276, P408 PIERMARIA, JUDITH; O7
276
PIERSIGILLI, ANDREA; P348, P601 PIGNATA, MARIA LUISA; P321 PIGNOLO , MARCELINO; P261 PIGONI, LUIS; P282 PINEDA, GLORIA; P220 PINEDA, MG; P398 PINGITORE, ESTEBAN; P009 PINHEIRO, JL; P123, P337, P548, P556 PINO, GLADYS; P154, P353 PINO, M; P620 PINTO DE ALMEIDA CAS, ALDANA; P205 PIEROS, OSCAR; P248 PIOLI, R; P486 PIPERS, DELPHINE; P307 PIQUET, ANOUK MT; P281 PIRES, PATRICIA; P217 PISANI, MARCELO; P423 PISTONE CREYDT, V; P458 PISTORIO, MARIANO; P082, O27 PITTET, C; P047, P592 PIVETTA, OMAR; P268 PIZARRO, RAMON; P264, P265, P291 PIZZUOLO, P; P501, P522 PODESTA, LAURA; P151, P345, P365 POIRRIER, P; P033 POLA, SANTIAGO; P207 POLIFRONI, R; P271, P450, O8 POLITANO, LORENA; P618, P622 POLLAK, CORA; O39 POLLINI, SIMONA; O24 POMA, RAMIRO; P255, P300 POMAR, MC; P523 PONCE, ALEJANDRA; P087, P228 PONDS, C; O29 PONESSA, A; P568, P615 PONISIO, DARIO; P457 PONS, MAURICIO; P599 PORCEL, NORMA; P263 PORPORATTO, CARINA; P129 PORTELA, GABRIELA; P306 POSSE, G; P168, P239, P452, P555, P563 POURCEL, N; P477 POWER, PABLO; P046, P307 PREDARI, SC; P150, P361, P376, P476, P557, P566, O23, O52 PRENAFETA BOLDU, FRANCESC; O55 PRESTI, C; P441, P581 PRETEL, MIGUEL; P348 PRIETO, CLAUDIA; P596 PRIETO, LUCIANO; P298 PRIETO, MONICA; P401, P608, P610 PRINCIPE, ANALIA; P098 PRINCIPI, DARIO; P293, O46 PRIORE, GRACIELA; P589 PROCOPIO, A; P391, P619 PROSDOCIMO, F; P237 PSENDA, L; P163 PUCCI, AJ; P290 PUCCI, GN; P289, P290 PUCCI, OH; P289, P290 PUDDU, MARCELO; P395 PUENTE, MARIANA; P068, P109 PUENTE, PABLO; P370, P399 PUENTES, NOEL; P209 PUIG, C; P568 PUIGDEVALL, T; P185 PURSLOW, PETER; P134
QUARLERI, J; O14 QUELAS, JI; P104 QUERCI, M; P392 QUIBERONI, ANDREA; P003, P004, P005, P012, O2 QUINTAS, SANTIAGO; P599 QUINTERO, E; P440, O31 QUINTERO, E(UDEA); O31 QUINTEROS, MIRTA; P612, P620, P623 QUIROGA, C; P052 QUIROGA, M; P578, P585 QUIROGA, MP; P045, P052, P053, P054, P063 QUIROGA, P; P422, P581 QUIROGA, SILVIA; P174 RABINOVITZ, BC; P445 RADICE, M; P046, P327, P387, O23, O24 RAFFELLINI, S; P438 RAGOGNA, GABRIELA; P172 RAHMAN, G; P130 RAIMONDI, KARINA; P145 RAINERI, MARGARITA; P347 RAJAL, V; P255, P300 RAMADAN, S; P137 RAMIA, VICTOR; P353 RAMIREZ, MS; P053, P054, P055, P062, P063, P132, P335, P350, P395, P594, O54 RAMIREZ, R; P367, P561 RAMIREZ, WALTER; P260, O44 RAMOS H, ANA; P070 RAMOS, CF; P160, P379 RAMOS, CLAUDIA(); P379 RAMOS, L; P137, P159 RAMPONE, HORACIO; P224 RANNO, G; P163 RANTICA, NOELIA; P154, P353 RAPOPORT, M; P339, P397, P588, O19 RASIA, RODOLFO; O43 RASKOVSKY, VIVIANA; P255 RASTELLI, SILVIA E; P317 RAVASI, P; P049 RAVETTI, S; P258, O13 RAZETTO, MARIA GEORGINA; P589, P590 RE, V; P253, P512 REBAGLIATI, JUAN; P400 REBOLLO, MIRTA; P612 REFOJO, NICOLAS; P136, P188 REGALIA, A; P602 REGGI, FERNANDO; P432 REGGIANE, SILVIA; P616 REGUEIRA, M; P175, P373, P377 REGUERA, M; P598 REIJTMAN, RV; P123, P556 REINHEIMER, J; P003, P004, P005, P006, P010, P011, P012, P015, O1, O2 RELLOSO, S; P168, P392, P394 RESTELLI, MARCELA; P262 REY KELLY, G; P567 REYES, S(H. BRITNICO); P168 REYES, S(H.MUIZ); P179 REYNOSO, X; P041 RIBAUDO, C; O29 RICO GOLBA, SILVIA; P439 RIERA, F; P147 RIERA, L; P392 RINAUDO, MARIANGEL; P550 RINCON, LORENA; P524
277
RINLAND, ME; P493 RIO CARRION, GERALDINE; P432 RIOS, RUTH PAOLA; P322 RISSO, MIGUEL; P372 RISSO, PAULA; P372 RIVAROLA, M; P147 RIVAS, CRISTINA; P188 RIVAS, FRANCO; P020 RIVAS, M; P192, P357, P404, P466, P604, O6, O33, O35 RIVERO, C; O9 RIVERO, GUIDO; P306 RIVIELLO LOPEZ, G; P461 RIZZOTTI, VIVIANA; P158, P204 ROBERT, ELIZABETH; P321 ROCCA, MARIA FLORENCIA; P401, P608, P610 ROCCHI, M; P547, P549, O47 RODRIGUEZ AREVALO, KAREN; P473 RODRIGUEZ ASSAF, LETICIA ANAHI; P115 RODRIGUEZ FERMEPIN, M; P407, P414 RODRIGUEZ GANDUGLIA, H; P215, P436 RODRIGUEZ VAQUERO, MJ; P246 RODRIGUEZ, ALEJANDRA; P117 RODRIGUEZ, ANDREA; P075 RODRIGUEZ, CECILIA; P345 RODRIGUEZ, DEYCI; P248 RODRIGUEZ, E; O15 RODRIGUEZ, F; P178 RODRIGUEZ, HERNAN; P387, P390 RODRIGUEZ, L; P411 RODRIGUEZ, M; P164, P171, P377, O21 RODRIGUEZ, MARIA MARGARITA; P046 RODRIGUEZ, MONICA; P158, P204 RODRIGUEZ, PAULA; P388, P389 RODRIGUEZ, RA; P493 RODRIGUEZ, SONIA; P488 RODRIGUEZ, YAMILA; P259, P273 ROGE, ARIEL; P136 ROISMAN, ALEJANDRO; P459 ROJAS, DORA; P468 ROJAS, F; P168 ROJAS, FD; P138, P152 ROJO, MC; P448 ROJO, R; P107, P287, P499 ROLDAN, L; P206 ROLDAN, ML; P172 ROLLET, RAQUEL; P416, P476, P566, P627, O23 ROLNY, IVANNA; P025 ROLON, MARIA JOSE; P344 ROMAGNOLI, MARIA VALERIA; P542 ROMANIN, DAVID; P030 ROMANIUK, ROMINA; P322 ROMANO, MARIA I; P470 ROMERO, ANDREA IRENE; P286 ROMERO, FERNANDO M; P515 ROMERO, HECTOR; P051 ROMERO, JOSE; P091 ROMERO, MERCEDES; P559 ROMERO, STELLA MARIS; P286 ROMERO, V; P547, O47 RONCHETTI, INES; P126 RONCHI, ANA LIA; P084, P096 RONCO, M; P534 RONDINA, C; P047 RORIG, MARCELA; P293 ROSA, ALCIRA; P552 ROSA, CARLOS A; P285 ROSA, DIANA; P131
ROSADO, ALEXANDRE S; O25 ROSALES, BLANCA M; P317 ROSAS, S; P498, O30 ROSAS, SUSANA; P531 ROSCONI, FEDERICO; P075 ROSI, PABLO; P061 ROSMINI, MARCELO; P016, P021, P027, P243 ROSSEN, ARIANA; P540 ROSSETTI, A; P566, O23 ROSSETTI, LIA; O2 ROSSI, FRANCO R; P515 ROSSI, G; P407 ROSSIGNOL, G; P047, P592 ROSSIGNOL, GUSTAVO; P565 ROSSO, G; O47 ROSSO, N; O9 ROSSOLINI, GIAN MARIA; O24 ROTHEN, CAROLINA; P117 ROURA, SARA INES; P087, P099, P101, P213, P228 ROVERA, MARISA; P531, O30 ROVETTO, ADRIAN; P034 ROY, POLLY; P044 RUARTE, SILVANA; P430 RUBINSTEIN, A; P130 RUBINSTEIN, GABRIELA; P383 RUBINSTEIN, SAMARA; O12 RUBIO MAS, MIGUEL; P161, P375 RUBIO, ESTEBAN; P109 RUDA VEGA, H; P352 RUGGIERI, DIEGO; P365 RUIZ, DANTE; P085, P094 RUIZ, F; P013 RUIZ, OSCAR A; P090, P103 RUMBO, MARTIN; P030 RUMI, MV; P458, P602, O35 RUSCITTI, M; P534 RUSSELL WHITE, KAREN; P234 RUVINSKY, SILVINA; P337 RUYBAL, PAULA; P481, O46 SABALL, E; P034 SABATE, DANIELA CONSTANZA; P500 SABATER, LAURA; P350 SACHETTA, M; P147 SAEZ, JM; P318 SAFENRAITER, MELANIA; P305 SAGUES, FEDERICA; P134 SAGUIR, FABIANA; P118 SAIZ, IVONE; P032 SALAMONE, F; P630 SALAMONE, HORACIO; P463 SALAS, MARIA EUGENIA; P082, O27 SALAZAR, ESTELA; P417, P626 SALERNO, C; P215, P436 SALERNO, GL; P292, P491, P499 SALIBA PINEDA, MARIA; P272, P478 SALINAS, AG; P236 SALINAS, ANDREA; P135, P551 SALINAS, ANGEL; P232 SALOMON, HORACIO; O13 SALOMON, S; O16 SALTO, ILEANA PAULA; P082, O27 SALUSTIO, EDUARDO; P267 SALVA, LILIANA; P355 SALVA, S; P396 SALVAREZZA, ROBERTO; P058 SALVARREY, MARCELA; P034
278
SALVATIERRA FRECHOU, DAMIANA MARIA; P311, P314 SALVUCCI, D; P112 SAMARTINO, LUIS; P267 SAMUDIA, GUSTAVO; P553 SANCHEZ, ANDREA; P189 SANCHEZ, CECILIA ISABEL; P517, P520 SANCHEZ, L; P343, P571 SANCHEZ, LIGIA; P083 SANCHEZ, MARIA LAURA; P017, P330, P451, O36 SANGORRIN, MARCELA; P454 SANGUINERI, V; P595 SANJUAN, JUAN; P090 SANJURJO, LUCIA; P075 SANNAZZARO, ANALIA I; P090, P103 SANSO, ANDREA MARIEL; P427, P428 SANSO, MA; P450 SANTA CRUZ, DIEGO M; P072 SANTAMARIA, C; P392 SANTANATOGLIA, SANDRA; P203 SANTARELLI, MARCELA; O3 SANTELLA, GISELA; O24 SANTISO, G; P143, P179, P184, P365, O48 SANTOIANNI, JE; P150, P376, O52 SANTOS DE ARAOZ, VIVIANA; P359 SANTOS, LOURDES C; P211 SANTOS, M; P492 SANTOS, MI; P510 SANZ, ME; P443, P450 SAPARRAT, MARIO; P527, P528, P530 SARNACKI, SEBASTIAN; O40 SARTI, GABRIELA; P509 SARUTE, LEITES; P465 SAUER, HERMAN; P334, P382, P582 SAUKA, DIEGO; P487, P488, P489, P497 SAUL, CLARA; P570 SAUMELL, CARLOS; P134 SCAPINI, JUAN PABLO; P415 SCARONE, JORGE; P084 SCARONI, ELSA; P526 SCHALAMUK, SANTIAGO; P535 SCHAPOVALOFF , MARIA E; P380 SCHEBOR, CAROLINA; P002 SCHELEGUEDA, LAURA I; P230, P231 SCHELL, C; P163, P477 SCHIAFFINO, GABRIELA; P110 SCHIAPPACASSE, EDUARDO A; P332 SCHIJMAN, M; P156, P157, P411 SCHIMANK, ENRIQUE; P612 SCHURR, THEODORE; O12 SCOLARO , LUIS A; P252 SCORSETTI, ANA CLARA; P490, P504 SEDAN, D; O31 SEGOVIA, J; P588 SEGURA, DAMIAN OMAR; P428 SEIXAS, F; P472 SELLART, GRISELDA; P345 SELUY, EDUARDO; O57 SEMINO, ISABEL; P589 SEUK, ISABEL A; P380 SEQUEIRA, GABRIEL JORGE; P027, P243 SEQUEIROS, CYNTHIA; P342 SEQUIN, CHRISTIAN JAVIER; P520 SERNA, C; P440, O31 SERPP, CARINA INES; P238 SERRA, D; P058, P384 SERRADELL, MARIA; P025, P026, O31 SERRUTO, GISELA; P590
SERVIN, ALAIN; O41 SESMA, A; P406, P613 SESMA, F; O5 SESMA, FERNANDO; P009 SESTO CABRAL, ME; O60 SFREDDO, ELIZABETH SUSANA; P017, P019, P064, P451 SFREDDO, LIZ; P330 SGROY, VERONICA; P081 SHIGENAGA, R; P438 SICA, MARIA GABRIELA; P218 SICARDI, MARGARITA; P075 SICCARDI, FERNANDO; P141 SIDOTI, A; P127 SIGNORINI, MARCELO; P016, P021, P423 SILBERMAN, JUAN; P086 SILBERSZAC, GEORGINA; P579 SILVA DE RUIZ, CLARA; P274 SILVA STEFFENS, NORA; P607 SILVA, FELIPE JORGE; P221 SILVA, HUMBERTO; P482 SILVA, JOANA; P018 SILVA, MARA GORETTI; P433 SILVA, TALITA; P221 SILVANI, VANESA; P106 SIMONETTA, ARTURO CARLOS; P234, P437 SIMURRO, EUGENIA; P521 SINNOTT, F; P472 SIOLI, N; P408 SISTI, FEDERICO; P050 SMANIA, A; P480 SMAYEVSKY, JORGELINA; P174, P392, P394, P419, P586, P590 SNITMAN, GABRIELA; P360 SOBRERO, SILVINA; P455 SOLA, C; P162, O22 SOLDANO, A; P496, P514 SOLER BISTUE, ALFONSO J C; P057 SOLERNOU, V; P249 SOLOAGA, R; P135, P171, P362, P366, P421, P551, P562, P569, P579, P629, O21 SOMMERFLECK, P; P123, P556 SORDELLI, DO; P266, P361, P476, P484, P554, P557 SORHOUET, C; P418 SORIA, MARCELO; P051 SORIA, MARIA CECILIA; P474 SORIA, MARIO ALBERTO; P442, P474, P475 SORIANO, SV; P148 SORTINO, M; P137 SOSA, MA; P138, P152, P257 SOSA, NATALIA; P002 SOSA, VANESA; P187 SOTO, LORENA; P243 SOTO, LORENA PAOLA; P016, P021, P027 SOTO, PEDRO; P205 SOTOMAYOR, CLAUDIA ELENA; P211, P256, P259, P273 SOUZA BARBOSA, MATHEUS; P028 SPADA, ROMINA; P173, P580 SPALDING, TAMARA; P565 SPARO, M; P163, P477 SPESSO, MARIA FLORENCIA; P182 SPIOUSSAS, SILVIA; P226 SPOLETI, MARIA JULIA; P346 STANELONI, INES; P417, P626 STEFANINNI, CARLA; P226 STEIL, LEIF; O45 STELLING, J; P183 STENGLEIN, SEBASTIAN ALBERTO; P491
279
STEPANIK, DEBORAH; P338, P545 STERREN, MARIA ALEJANDRA; P305 STIETZ, MARIA SILVINA; P055 STIVALA, MG; P246 STOCCO, A; P019 STREITENBERGER, MARIA EUGENIA; P276 STRYJENSKY, M; P392, P394 STURM, M ELENA; P448 SUAR, MB; P135, P551 SUAREZ ALVAREZ, ROBERTO O; P193 SUAREZ, IRINA; P328 SUAREZ, ME; P192, P404 SUAREZ, VIVIANA; P005, P014 SUAU, MATILDE; P149 SUCARI, ADRIANA; P210, P420 SUELDO, R; P079 SUEN, ELISA; O57 SUJEMECKI, A; P366, P569 SUSANA, ORTIZ; P403 SUTICH, EMMA; P346, P349, P356, P400, P559 SUZUKI, KUNIAKI; P222, P433 SVETOSLAV, TODOROV; P007, P008, P009 SZTOKHAMER, DANIEL; P345 SZUSZ, WANDA; P202 SZUSZ, WANDA; P201 TACHELLA, E; P163 TALIA, PAOLA; P293 TANARO, J; O35 TANNO, H; O14 TARANTO, MP; O5 TASAT, DEBORAH; P166 TAULE, CECILIA; P075 TAURIAN, TANIA; P078, P102, P108 TAVERNA, CG; P194, O53 TAYAGUI, AYELEN; P238 TEALDO, MARTA; P141 TEIXEIRA, PAULA; P018 TEJERINA, MARCOS R; P069 TEMPORITI, E; P392, P394 TEPER, A; P619 TERRAGNO, RAQUEL; P064, P146, P183, P362, P398, P442, O34 TERUSI, LAURA; P338 TERZANO, M; P411 TESTORELLI, F; P185 TEYSSIE, AR; P249 THEA, ANA E; P189, P235 TIBALDO, MAXIMILIANO M; P012 TINTILAY, ALEJANDRA; P557 TINTILAY, ALEJANDRA S; P361, P476 TIRABOSCHI, I; P156, P157 TIRIBELLI, C; O9 TOGNERI, ANA; P151, P345, P365 TOKUMOTO, MARTA; P388, P389, P395 TOLEDO, ANDREA; P521 TOLEDO, CRISTINA; P145 TOLMASKY, MARCELO E; P057, P062 TOMARO, MARIA L; P072 TOMAS, GONZALO; P250 TOMAS, LEANDRO JUAN; P140 TOMASINI, A; P153 TOME, G; P381 TOMEY, MI; P568 TONIN, N; P289 TONIN, NL; P290 TORABOSCHI, IN; P194
TORAN, JOSEFINA; P176 TORANZO, ADRIANA; P193 TORESANI, INES; P356, P559 TORESANI, SILVIA MARIA INES; P542 TORNELLO, CARINA; P208, P209 TORO, MARIA EUGENIA; P115, P315, P448, P519, P537, P538 TORRES SANCHEZ, ROSA; P284 TORRES TEJERIZO, GONZALO ARTURO; P082, O27 TORRES, C; O10 TORRES, J; P105 TORRES, MARTA; P174 TORRES, NANCY; P022, P533 TORRES, NICOLAS IGNACIO; P042 TORTORA, MARIA LAURA; P502 TOSELLO, MARA ELENA; P199 TRACOGNA, MARIA FERNANDA; P191, P283, P325 TRANCHIDA, MARIA C; P495 TRANGONI, MARCOS; P483 TREIYERS, STEPHAN; P626 TREJO, ANA; P161, P375 TREJO, FERNANDO; P026 TRINKS, J; O9 TRONCOZO, MARIA INES; P528, P530 TROSSERO, MARTA; P206 TROVERO, ALICIA; P136 TRUCCHIA, R; P549 TRUCCO, VERONICA; P005 TSCHAGGEY, S; P199 TUDURI, ALICIA; P350 TUDURI, E; P183, P631, P632 TURCATO, GABRIELA; P142 TURK, GABRIELA; O13, O16 TUTZER, SILVIA; P155, P177, P386, O18 TYMCZYSZYN, ELIZABETH; P002 ULLUA, EVANGELINA; P430 URSINO, VERONICA; P347 USECHE, YERLY; P248 VAAMONDE, GRACIELA; P286 VACCARI, MC; P492, P496, P512 VACCHINO, M; O17 VALDEZ, JUAN CARLOS; P375 VALENTINI, R; P394 VALENZUELA AVILA, A; P033 VALETTI, LUCIO; P089 VALLEDOR, ALEJANDRA; P626 VALLEJO, DANIELA; P109 VALLEJO, G; P522 VALLEJO, MARISOL; P020, P310, P342 VALLEJO, MARTHA; P538 VALVERDE, CLAUDIO; P603, O26 VAN BROOK, MARIA ROSA; P280 VAN DER PLOEG, C; P183 VANNINI, MV; O5 VARELA, PATRICIA; P329 VARGAS, E; P451 VAUSTAT, DANIELA; P416 VAY , CARLOS; P132, P270, P350, P352, P369, P384, P387, P390, P391, P395, P410, P478, P549, P558, P609, P614, P617, P625, O54 VAZQUEZ, FABIO; P115, P315, P448, P519, P537, P538 VAZQUEZ, GUSTAVO; P169, P176 VAZQUEZ, J; O17 VAZQUEZ, M; P391, P631, P632 VAZVELHO, MANUELA; P007
280
VECHIARELLI, MARIA SOL; P216, P223, P431 VEDOYA, MC; P187, P189, P235 VEGA AVILA, ANGELA DANIELA; P315 VEGA, ALBA EDITH; P259, P482 VELA, M ELENA; P058 VELAZQUEZ, ERNESTO; P187 VELAZQUEZ, LIDIA; P232 VENEZUELA, FERNANDO; P139, P195, P479, P512 VENUTA, ME; P548 VERA BLANCH, MARCELA; P415 VERA, MARA NOEL; P328 VERCELLINO, M; P511 VERDE, GABRIEL; P579 VERGARA, CINTIA; P329 VERGARA, M; P578, P585 VESCINA, CECILIA; P142, P336, P358, P374, P583, P597 VESCINA, CM; P175 VIALE, ALEJANDRO; P047, P049, P060, P356, P565, O43 VIALE, MARIANA; P470 VICARIO, JULIO CESAR; P116 VICENTE, MARIANA; P308 VIDAL, JIMENA; P141 VIDEIRA, L; P112 VIEIRA, LEDA; P011 VIERA, MARISA; P308, P317 VIGNOLO, GRACIELA; P247 VIGNOLO, V; P343, P571 VIGO, GERMAN; P335, P422 VILA, ALEJANDRO J; P565 VILA, FERNANDO; P159 VILACOBA, ELIZABET; P055 VILCHES, V; P398 VILEGAS, WAGNER; P211 VILLA, CECILIA; P259, P273 VILLALBA, CECILIA; P187 VILLALBA, L; P069, P070, P120 VILLALBA, V; P385 VILLANI, ME; P411 VILLANUEVA, MARIA PAZ; P429 VILLARREAL, MARTHA; P008 VILLEGAS, PEDRO; P250 VILLENA, JC; P396 VILTE, DA; P445, P458 VINDEROLA, GABRIEL; P006, P010, P011, P015, O1 VINTII, ELISA; P023 VIA, A; P391 VIAS CANALS, MARC; O55 VIAS, MR; P045, P183, P362, O34, O51 VIORA, S; P237 VIRGOLINI, MA STELLA; P173, P580 VISVISIN, C; P258 VITTORI, E; P575 VIVOT, EP; P305, P520 VIVOT, W; P194, P201, P202 VOLCOVICH, R; P631 VOLKER, UWE; O45 VON SPECHT, M; P385 VUARANT, CARLOS MARIA; P332 WACHSMAN , MONICA BEATRIZ; P042
WACHSMAN, MONICA; P007 WAGNER, JORGE; O32 WALKER, L; P143, P168, P179, P184, P620, O48 WALL, LG; O26, O59 WEHT, SEBASTIAN; P076 WEILER, NATALIE; P222, P433 WELTMAN, G; P418 WILKOWSKY, SILVINA; O46 WILLINER, NORBERTO ALEJANDRO; P333 WOELKE, MARIELA ROSANA; P116 WOLFF, L; P575, P624 YAHNI, D; P392 YANTORNO, OM; P058, P303, P384, P402, P596 YASHCHUK, OXANA; P532 YAYA, JOSE; P625 YIH, K; P183 YONES, CRISTIAN; P206 YONSON, N; P630 YOSSEN, VIVIANA; P107 YOYA, N; P588 ZABALETA, MARIA; P075 ZACARIAS, MARIA FLORENCIA; P010, P011, O1 ZALAZAR, CINTIA; P120 ZAMARO, JUAN MANUEL; O38 ZAMBRANO, CORINA; P083 ZAMORA, AS; P302 ZAMPINI, IC; P396 ZAPATA DE BASILICO, MARIA DE LA LUZ; P423, P455, P456, O37, O38 ZAPATA, ALEJANDRA; P149 ZAPATA, MJ; P448, P519 ZAPATA, PEDRO D; P069, P070, P120 ZAPPA, EUGENIA; P596 ZARATE, G; P033, P038 ZARATE, JM; P236 ZARATE, M; P394 ZARATE, MARIELA SOLEDAD; P174, P586, P589 ZARATE, NOEMI; P222, P433 ZARATE, SOLEDAD; P392, P590 ZARITZKY, NOEMI; P015 ZAVALA, AGUSTIN; P617 ZAWOZNIK, M; P066 ZAWOZNIK, MYRIAM; P068 ZBRUN, MARIA VIRGINIA; P016, P021, P027, P243 ZEDDE, AINARA; P216, P223, P431 ZERBATTO, MARIEL; P536 ZILLI, CARLA G; P072 ZITTA, MARIA EUGENIA; P040 ZITTO, TERESA; P545 ZOLEZZI, G; P447, P604 ZORREGUIETA, ANGELES; P057 ZUBILLAGA, MARCELA; P473, P587 ZUMARRAGA, MARTIN; O49 ZUMELZU, GUILLERMO; P107 ZUIGA HANSEN, ME; P033 ZURBRIGGEN, MARIA LAURA; P172, P173, P580 ZURITA, E; P418 ZURSCHMITTEN, ABEL; P600, P606
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Revista Argentina de Microbiologa (2006) 38: 49-52
INSTRUCCIONES PARA LOS AUTORES

La Revista Argentina de Microbiologa es una publicacin trimestral editada por la Asociacin Argentina de Microbiologa y destinada a la difusin de trabajos cientficos en las distintas reas de la Microbiologa. La Asociacin Argentina de Microbiologa se reserva los derechos de propiedad y reproduccin del material aceptado y publicado. Tipos de contribucin. La Revista Argentina de Microbiologa acepta: artculos originales, informes breves, artculos especiales, imgenes microbiolgicas, editoriales y suplementos. Los artculos originales son trabajos de investigacin completos y deben presentarse respetando las siguientes divisiones: Introduccin, Materiales y Mtodos, Resultados, Discusin, Agradecimientos y Bibliografa. Se admite la presentacin de Resultados y Discusin como una seccin conjunta. Los informes breves son trabajos de menor extensin, entre los que se incluyen casusticas, casos clnicos y descripciones de tcnicas o dispositivos nuevos avalados por trabajos experimentales concluyentes. Se deber omitir la divisin del texto en secciones y el manuscrito no podr exceder las ocho pginas, con un mximo de quince citas bibliogrficas y tres tablas o figuras. Los artculos especiales son actualizaciones o consensos de grupos de trabajo acerca de temas de gran inters en el mbito regional o internacional. Sus autores deben ser especialistas en la materia y el texto debe incluir una amplia y actualizada revisin bibliogrfica. Recientemente la Revista Argentina de Microbiologa ha incorporado la seccin imgenes microbiolgicas. Las contribuciones enviadas para esta seccin pueden corresponder a fotos de bacterias, hongos, parsitos o virus, tomadas de exmenes en fresco o con coloraciones, y observadas bajo microscopa ptica, electrnica o de fluorescencia. Tambin se admiten otras imgenes fotogrficas, por ejemplo, microorganismos en medios de cultivo, lesiones ilustrativas en pacientes o en animales de experimentacin; imgenes radiogrficas y ecogrficas, de tomografas computadas, de resonancias magnticas nucleares, etc. Estas imgenes de gran valor didctico y no necesariamente excepcionales, deben estar acompaadas de un texto explicativo y de flechas indicadoras, cuando corresponda. El conjunto no debe exceder una pgina impresa. En todos los casos se exigir excelente calidad fotogrfica, de modo que sea posible la fiel reproduccin de la imagen enviada. La versin electrnica (que siempre se deber suministrar, adems de la impresa) se realizar en el formato JPEG, con alta resolucin. Los editoriales abordan tpicos de gran actualidad y particular relevancia para la comunidad cientfica especializada en la Microbiologa. La oportunidad y autora de los editoriales, as como sus lineamientos generales, quedan exclusivamente a criterio del Comit Editor. Los suplementos corresponden a extensas revisiones de un tema especfico realizadas por una o varias sociedades cientficas o universidades, o a los resmenes de las contribuciones efectuadas en el marco de eventos cientficos organizados por la Asociacin Argentina de Microbiologa, o alguna de sus Divisiones o Filiales (comunicaciones orales, posters, conferencias, mesas redondas, etc.), a cargo de editores invitados. Las propuestas temticas de los suplementos y sus lineamientos generales debern ser aceptados por el Comit Editor. La revisin de los manuscritos correspondientes a suplementos estar a cargo de revisores elegidos por el Comit Editor (extensas revisiones) y de los editores invitados (resmenes de eventos). El suplemento deber ser financiado en su totalidad por la entidad que ha organizado la reunin cientfica, la que tendr en cuenta que el suplemento se deber distribuir entre todos los socios de la Asociacin Argentina de Microbiologa y todos los participantes del evento. Con respecto a la edicin, el suplemento deber respetar exactamente el formato y el estilo de la Revista Argentina de Microbiologa en todos sus aspectos (tapa, tipo de papel, impresin, tablas, figuras, fotos, etc.), tal como se describe en las instrucciones para los autores. Los suplementos correspondientes a los resmenes de los eventos deben incluir en este orden: nmina de los miembros del Comit Editor de la Revista Argentina de Microbiologa, datos de presentacin del evento (ttulo completo, lugar y fecha), ndice (en espaol y en ingls), agradecimientos, nmina de las autoridades del evento y mensaje/s del/los presidente/s. A continuacin se presentarn los resmenes numerados desde el uno con nmeros arbigos. Al final del suplemento debe incluirse el ndice alfabtico de autores y las instrucciones para los autores de la Revista Argentina de Microbiologa, en espaol y en ingls. El programa esquemtico del evento slo se podr incluir en forma de trptico, suelto en el interior del suplemento. La Revista Argentina de Microbiologa apoya las polticas para registro de ensayos clnicos de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y del International Committee of Medical Journal Editors (ICMJE), reconociendo la importancia de esas iniciativas para el registro y divulgacin internacional de informacin sobre estudios clnicos, en acceso abierto. En consecuencia, solamente se aceptarn para publicacin, a partir de 2007, los artculos de investigaciones clnicas que hayan recibido un nmero de identificacin en uno de los Registros de Ensayos Clnicos validados por los criterios establecidos por OMS e ICMJE, cuyas direcciones estn disponibles en el sitio del ICMJE. El nmero de identificacin se deber registrar al final del resumen. Presentacin de los originales. Los manuscritos debern ser enviados al Comit Editor de la Revista Argentina de Microbiologa, Den Funes 472, (C1214AAD) Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina El material ser analizado por el Comit Editor y sometido a la consideracin de dos rbitros cientficos designados para cada caso. El Comit Editor se reserva el derecho de rechazar aquellos manuscritos cuyos contenidos se superponen total o parcialmente con trabajos ya publicados, o aquellos cuya temtica no se corresponde con la de la Revista Argentina de Microbiologa. Asimismo, se reserva el derecho de efectuar las modificaciones gramaticales o literarias que considere necesarias.
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Los manuscritos podrn ser redactados indistintamente en espaol o en ingls, aunque el Comit Editor estimula a los autores a escribir los trabajos en ingls para favorecer su difusin y lectura a nivel internacional. Los autores cuya primera lengua no sea el espaol debern remitir los manuscritos en ingls. Los artculos originales, informes breves y artculos especiales incluirn dos resmenes de hasta 200 palabras. El primero de ellos estar redactado en el idioma empleado en el trabajo, y el segundo, en el otro idioma, estar encabezado por el ttulo completo del trabajo. Evitar en los resmenes las abreviaturas y las citas bibliogrficas. Los manuscritos se presentarn impresos por duplicado, en CD-ROM y podrn ser remitidos en lnea (ram@aam.org.ar). Las hojas debern estar numeradas correlativamente, y el texto se escribir dejando mrgenes amplios, a doble espacio, con un tamao mnimo de letra de 12 puntos. Las letras en negrita o itlica se usarn slo cuando corresponda. En la primera pgina se indicar: ttulo del trabajo (slo la primera letra en mayscula, el resto en minscula), iniciales de los nombres y apellidos completos de todos los autores; lugar de trabajo (nombre de la institucin y direccin postal), de haber autores con distintos lugares de trabajo, se colocarn superndices numricos (no encerrados entre parntesis) junto a los nombres, de manera de identificar a cada autor con su respectivo lugar de trabajo; fax y/o correo electrnico del autor responsable de la correspondencia (que se indicar con un asterisco en posicin de superndice ubicado junto al nombre) y ttulo abreviado del trabajo, de hasta 50 caracteres, para cabeza de pgina. En la segunda pgina se incluirn los dos resmenes, seguido cada uno de ellos de una lista de tres a seis palabras clave, en el idioma correspondiente. Introduccin. Incluir antecedentes actualizados acerca del tema en cuestin y los objetivos del trabajo definidos con claridad. Las citas bibliogrficas debern ser elegidas muy cuidadosamente y no se deber realizar una exhaustiva revisin del tema. Materiales y Mtodos. Contendr la descripcin de los mtodos, aparatos, reactivos y procedimientos utilizados, con el detalle suficiente para permitir la reproduccin de los experimentos. Resultados. Se presentarn a travs de una de las siguientes formas: en el texto, o mediante tabla/s y/o figura/s. Se evitarn repeticiones y se destacarn slo los datos importantes. Se dejar para la seccin Discusin la interpretacin ms extensa. Las tablas se presentarn en hoja aparte, numeradas consecutivamente con nmeros arbigos, encabezadas con un ttulo explicativo, con las leyendas y/o aclaraciones que correspondan al pie. Las llamadas para las aclaraciones al pie se harn empleando nmeros arbigos entre parntesis y superndice. Slo los bordes externos de la primera y la ltima fila y la separacin entre los ttulos de las columnas y los datos se marcarn con lnea continua. No se marcarn los bordes de las columnas. Las figuras se presentarn en hoja aparte, numeradas consecutivamente con nmeros arbigos. Los dibujos debern estar en condiciones que aseguren una adecuada reproduccin. Los grficos de barras, tortas o estadsticas debern tener el formato GIF. Los nmeros, letras y signos tendrn dimensiones adecuadas para ser legibles cuando se hagan las reducciones necesarias. Las referencias de los smbolos utilizados en las figuras debern ser incluidas dentro de la misma figura y no en el texto de la leyenda. Las fotografas debern ser realizadas en color o en blanco y negro, con buen contraste, en papel brillante y con una calidad suficiente para asegurar una buena reproduccin. Los dibujos originales o las fotografas tendrn al dorso los nombres de los autores y el nmero de orden escritos con lpiz. Las leyendas de las figuras se presentarn reunidas en una hoja aparte, ordenadas numricamente. La versin electrnica deber ser realizada en el formato JPEG, con alta resolucin. Tanto las figuras como las fotografas debern ser legibles y no debern superar los 580 pxeles de ancho. Las abreviaturas debern ser explicitadas despus de su primera mencin en el texto. Las unidades de medida se expresarn siguiendo las normas del Systme International dUnits. Discusin. Se har nfasis sobre los aspectos del estudio ms importantes y novedosos, y se interpretarn los datos experimentales en relacin con lo ya publicado. Se indicarn las conclusiones a las que se arrib, evitando la reiteracin de datos y conceptos ya vertidos en secciones anteriores. Agradecimientos. Deben presentarse en un tamao de letra menor y en un solo prrafo Bibliografa. Las citas bibliogrficas se escribirn en hoja aparte y se presentarn en orden alfabtico de autores, numeradas correlativamente empleando nmeros arbigos (no usar el formato lista, opcin de Word). En el texto, las citas aparecern con nmeros entre parntesis, en correspondencia con el nmero con que aparecen en la bibliografa. Las referencias a comentarios personales y a trabajos inditos debern mencionarse como comunicacin personal, escrito entre parntesis. Cuando el nmero de autores de una cita sea superior a seis, se deber indicar los nombres de los seis primeros seguidos por el marcador et al. Para las referencias se seguirn los siguientes modelos: a. Publicaciones peridicas Hritier C, Poirel L, Lambert T, Nordmann P. Contribution of acquired carbapenem-hydrolyzing oxacillinases to carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii. Antimicrob Agents Chemother 2005; 49: 3198-202. Los ttulos de las revistas sern abreviados segn el Index Medicus (el listado puede obtenerse en http://www.nlm.nih.gov). b. Captulos de libros/mdulos Ruoff KL, Whiley RA, Beighton D. Streptococcus. En: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of Clinical Microbiology. Washington D.C., ASM Press, 2003, p. 405-21. c. Presentaciones en congresos u otros eventos cientficos Aguilar M, Punschke K, Touati D, Pianzzola MJ. Estudios fisiolgicos y genticos en la bacteria sulfato reductora Desulfoarculus baarsii. Terceras Jornadas Rioplatenses de Microbiologa, 1997, Resumen J2, p. 102, Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina. d. Presentaciones en congresos u otros eventos cientficos reproducidas dentro de un suplemento publicado por la Revista Argentina de Microbiologa
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Fellner MD, Correa RM, Durand K, Teyssi AR, Picconi MA. Anlisis del ADN circulante de virus Epstein-Barr (EBV) en pacientes inmunosuprimidos con y sin linfomas asociados. VIII Congreso Argentino de Virologa, Resumen 10416. Rev Argent Microbiol 2005; 37 Supl 1: 95. e. Institucionales Clinical and Laboratory Standards Institute. Disk diffusion. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 15th informational supplement, 2005; M100-S15. Wayne, Pa, USA. Presentacin de CD-ROM. El CD-ROM con la versin electrnica de la contribucin enviada deber tener una etiqueta o rtulo que indique: el nombre del trabajo, el programa y la versin usados para confeccionar el texto, las figuras y las fotografas; y el nombre de los archivos que contiene. Recomendaciones. Incluir todo el texto del artculo en un slo archivo; en caso de haber imgenes, stas deben enviarse en archivos separados; tipear las maysculas, los espacios entre palabras, las itlicas y las negritas tal como se desea que salgan luego en el impreso; no dar espacios antes y despus de los subttulos; justificar el texto; para encolumnar las tablas, usar la tecla de tabulacin y no la barra espaciadora. Antes de enviar un manuscrito, es recomendable consultar algn ejemplar reciente de la RAM; de este modo se podr verificar si se han seguido las pautas de formato y estilo requeridas y, eventualmente, efectuar las modificaciones necesarias. Costo de la pgina. Por cada pgina publicada se cobrarn $ 75, o $ 200 si sta incluye fotos en color (Argentina, socios de la AAM), $ 200 o $ 600 (Argentina, no socios de la AAM) y U$S 70 o U$S 180 (otros pases). Separatas. Se suministrarn 25 separatas sin cargo.
Secretaria: Den Funes 472, (C1214AAD) Ciudad Autnoma de Buenos Aires - Argentina; Tel.: (54-11) 4932-8858 y (54-11) 4932-8948; e-mail: info@aam.org.ar; http://www.aam.org.ar SUSCRIPCIN ANUAL (4 nmeros) Socios AAM $ 120 Argentina no socios $ 240 Amrica Latina U$S 100 Otros pases U$S 200 Pago: Por giro postal a la orden de Asociacin Argentina de Microbiologa.
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INSTRUCTIONS TO AUTHORS
The Revista Argentina de Microbiologa is published by the Asociacin Argentina de Microbiologa (AAM) on a quarterly basis. It encourages scientific papers in the field of Microbiology. The Asociacin Argentina de Microbiologa reserves the right to use, reproduce and publish the accepted contributions. Types of Publications. The Revista Argentina de Microbiologa will publish: original articles, brief reports, special articles, images in microbiology, editorials and supplements. Original Articles: they are full research papers having the following sections: Introduction, Materials and Methods, Results, Discussion, Acknowledgements and References. Results and Discussions may be subsumed into one section. Brief Reports: they are less extensive than Original Articles. They include case reports and descriptions of new techniques and procedures based on experimental work. Division into sections is omitted; manuscripts must not exceed 8 pages, references will be limited to a maximum of 15, tables and figures to a maximum of 3. Special Articles: they are updates or workshop results which should be based on subject matter of local and international weight and include a new and comprehensive bibliography. Their authors must be specialists in their fields. Images in Microbiology: the Revista Argentina de Microbiologa has just incorporated this new section. Images may include: high quality pictures of bacteria, fungi, parasites and viruses using staining or direct observation through optical, electron or fluorescent microscopy; they may also include photographic images of microorganisms in culture media, lesions in humans and laboratory animals, x-rays and ultrasound images, tomographies, magnetic resonance, etc. Images having instructional worth, though not necessarily breaking new ground, should be accompanied by explanatory texts and diagrams if required. The set of images should fit one printed page at most. Images should use photographic material of the highest possible quality to ensure very good reproduction. Electronic versions, which should always accompany the printed version, must use JPEG in a high resolution format. Editorials: this section is the sole domain of the Editing Committee, who will determine editorial policy and authorship. Editorials focus upon the main topics under current discussion in the field of Microbiology. Supplements: they will mainly consist of the reviewing in detail of both specific subjects considered by scientific organizations and universities and abstracts of lectures, round tables and oral and visual communications from scientific meetings sponsored by the Asociacin Argentina de Microbiologa, its divisions or branches and presided by invited editors. Subjects and overall outlines should be approved by the Editing Committee. The articles under Supplements will be examined by reviewers selected by the Editing Committee in the case of extensive reviewing, and by invited editors in the case of abstracts of meetings. Supplements will be wholly financed by the body organizing the meeting, taking into account that copies have to be distributed to all the members of the Asociacin Argentina de Microbiologa and all the persons taking part.The style and format must conform to the standards of the Revista Argentina de Microbiologa set out in the Instructions to Authors in all respects: cover design, paper quality, preparation of tables and illustrations and printing, for example. Supplements of the meetings should list: the names of the members of the Editing Committee of the Revista Argentina de Microbiologa; title, date and venue of the meeting; contents of the meeting in Spanish and English; acknowledgements; organizing officers and presidential message; the abstracts, numbered consecutively with Arabic numerals starting from 1, should follow. An alphabetical index of authors and the Spanish and English versions of the Instructions to Authors of the Revista Argentina de Microbiologa must be printed at the end of the Supplement. The meeting schedule will accompany the Supplement as a separate leaflet. The Revista Argentina de Microbiologa follows the policies of the World Health Organization (WHO) and of the International Committee of Medical Journal Editors (ICMJE) for clinical trial registration, recognizing the importance of those initiatives for international dissemination of information on clinical research, in open access. Accordingly, only articles of trials previously registered in one of the Clinical Trial Registries that meet WHO and ICMJE requirements will be accepted for publication, starting in 2007. The list of registries accepted by WHO and ICMJE is available in ICMJE site. The trial registration number should be published at the end of the abstract. Preparation of Manuscripts. Manuscripts must be addressed to the Editing Committee of the Revista Argentina de Microbiologa, Den Funes 472 (C1214AAD) Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina. All material will be examined by the Editing Committee first and then by two scientific reviewers selected for each work. The Editing Committee will exercise the right to refuse manuscripts the subject matter of which falls outside the field covered by the Revista Argentina de Microbiologa, or deals partially or fully with topics already discussed in published papers. The Editing Committee will also correct grammar and style where necessary. Manuscripts may be written in Spanish or English; nevertheless, the Editing Committee encourages authors to use English so that their work reaches wider international diffusion. Authors whose first language is not Spanish must submit their papers in English. Original Articles, Brief Reports and Special Articles must be accompanied by two copies of an abstract not exceeding 200
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words: one of the copies should be written in the same language as the paper, the other, in the other language: the full title of the manuscript should be typed in this copy. Abbreviations and references are discouraged in abstracts. The original manuscript must be sent duplicate, on a CD-ROM or it could by sent on line (ram@aam.org.ar); pages must be numbered, typewritten on one side only using as a minimum size 12 characters, double-spaced and with wide margins. Bold and italics printing types may be used when necessary. Title page: it should include the title (using capitals only for first letters); authors names (initials of first name, full family name); place of work: institution and mailing address. If the place of work is different the institutional affiliation of each author should be given with superscriptions added to their names to identify each author with his/her affiliation. Fax number and e-mail address of the corresponding author, whose name should be asterisked, must be given. A short title with up to 50 characters should also be given for use as a running head. Second page: the Spanish and English versions of the abstract will be printed on the second page, each version listing from 3 to 6 keywords. Introduction. It should clearly state the antecedents of the study and the purpose in undertaking it. References should be carefully chosen and the problem addressed should not be reviewed in detail. Materials and Methods. Methods, procedures, reagents, and equipment used must be accurately described so that experiments can be replicated. Results. Results will be shown in one of these ways: in the text or in tables and illustrations. Repetition should be avoided by presenting only the most important data. In-depth interpretation will be under Discussion. Tables should be typed on separate pages and numbered consecutively with Arabic numerals; they should have a title above and a legend and/or explanation below. Reference marks for explanations should use superscripted Arabic numerals in parentheses. Lines will only be used for the first and the last row and to separate the headings of the columns from the data; vertical lines between columns should not be inserted. Illustrations should be presented on separate pages and numbered consecutively with Arabic numerals. Drawings must ensure good reproduction. Bar graphs, pie charts and tables should use a GIF format. The size of numbers, letters and signs should be large enough to remain legible if reductions are required. References of symbols in the figures should be given in the body of the figures and not in the legends. Photographs: both black and white and color photographs are accepted, their quality must be very high, with good contrast so that reproductions are precise; a gloss finish must be used. Original drawings and photographs must have the names of the authors and the sequence number in pencil overleaf. The legends of the illustrations should be typed on a separate page and in numerical order. Electronic forms must use a high resolution JPEG format. Illustrations and photographs must not exceed 580 pixels in width. Abbreviations should be defined at their first appearance in the text. Units of measure should be expressed in the Systme International dUnits. Discussion. Emphasis should be laid on the new and most important findings of the study; experimental data should be examined in the light of previously published work. Conclusions should be presented avoiding the repetition of what has already been stated in the preceding sections. Acknowledgements. They must be typed in smaller print in only one paragraph. References. The names of the authors cited should be listed in alphabetical order and numbered in sequence with Arabic numerals on a separate page. It should be noted that the Word list format must not be used. A citation in the text must be accompanied by the corresponding number in the Reference list in parentheses. Unpublished work and personal comments should be presented as: personal communication. Should the number of authors be more than six, the name of the first six must be followed by et al. Sample references: a. Periodical publications Hritier C, Poirel L, Lambert T, Nordmann P. Contribution of acquired carbapenem-hydrolyzing oxacillinases to carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii. Antimicrob Agents Chemother 2005; 49: 3198-202. The abbreviated title of the journal must follow the style of the Index Medicus (the list maybe obtained in http://www.nlm.nih.gov). b. Chapters of books/modules Ruoff KL, Whiley RA, Beighton D. Streptococcus. In: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of Clinical Microbiology. Washington D.C., ASM Press, 2003, p. 405-21. c. Presentations in meetings Aguilar M, Punschke K, Touati D, Pianzzola MJ. Estudios fisiolgicos y genticos en la bacteria sulfato reductora Desulfoarculus baarsii. Terceras Jornadas Rioplatenses de Microbiologa, 1997, Resumen J2, p. 102, Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina. d. Presentations in meetings in a supplement Fellner MD, Correa RM, Durand K, Teyssi AR, Picconi MA. Anlisis del ADN circulante de virus Epstein-Barr (EBV) en pacientes inmunosuprimidos con y sin linfomas asociados. VIII Congreso Argentino de Virologa, Resumen 10416. Rev Argent Microbiol 2005; 37 Supl 1: 95.
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e. Institutional publications Clinical and Laboratory Standards Institute. Disk diffusion. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 15th informational supplement, 2005; M100-S15. Wayne, Pa, USA. Preparation of the CD-ROM. The label should show: title of work, program and program version used for the text, figures and photographs, and the title of each of the files on the CD-ROM. Recommendations. Text format: type the whole text in only one file; images, if any, must be filed separately; capitals, spaces between words, italics and bold types should be those to be used in the printed version; there should be no spaces before or after subheads; the text should be justified; use tab-settings instead of spacing-bars for tables. Before submitting a manuscript one of the latest issues of RAM should be consulted in order to comply with the Instructions to Authors. Publishing charges. Each published page will cost $ 70, or $ 200 (pesos) when the page includes color photographs to AAM Argentine members; or $200 or $600 (pesos) to Argentine non-member price; and U$S 40 or US$ 180 to all other contributors. Reprints. Twenty-five off prints will be provided free of charge.
The Secretary: Den Funes 472, (C1214AAD) Ciudad Autnoma de Buenos Aires - Argentina; Tel.: (54-11) 4932-8858 and (54-11) 4932-8948; e-mail: info@aam.org.ar; http://www.aam.org.ar ANNUAL SUBSCRIPTION (4 issues) AAM members $ 120 Argentina non members $ 240 Latin America U$S 100 Other countries U$S 200 Payment: By check or money order, to the order of Asociacin Argentina de Microbiologa. Price includes mail postage. AAM members receive the Revista Argentina de Microbiologa free of charge.
Edicin realizada por Estudio Sigma S.R.L. - J. E. Uriburu 1252 - 8 F - Buenos Aires - Tel.: 4824-9431 / 4821-2702 E-mail: estsigma@gmail.com - www.estudiosigma.com.ar Impreso en el mes de septiembre de 2010

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N2 VOL 42 2010

REVISTA ARGENTINA DE MICROBIOLOGA

PUBLICACIN DE LA ASOCIACIN ARGENTINA DE MICROBIOLOGA

PUBLICACION DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE MICROBIOLOGIA

SECRETARIO DE REDACCIN Gerardo A. Leotta

COMIT EDITOR Alicia I. Arechavala

Franqueo Pagado Concesin N 4195 Tarifa Reducida Concesin N 628

21 de Octubre 2010 Organiza: Subcomisin de Buenas Practicas-DAMyC

21 y 22 de Octubre 2010 Organiza: DiMAyA

5 de Noviembre 2010 Organiza: DAMyC

8 al 26 de Noviembre 2010 Organiza: SAV

1 al 10 de Noviembre 2010 Organiza: Microbiologa General

4 al 11 de Noviembre 2010 Organiza: Filial Rosario

5-12-19 Y 26 de Abril 2011 Organiza: Comisin Directiva AAM

29 de Septiembre al 1 de Octubre 2011

XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGA

17 al 20 de octubre de 2010 Palais Rouge

Jernimo Salguero 1433/49 (C1177AFA) Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina

COMIT ORGANIZADOR DEL XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGA

XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010

COMISIN DIRECTIVA ASOCIACIN ARGENTINA DE MICROBIOLOGA

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

COMISIN DIRECTIVA DIVSIN AGRCOLA Y AMBIENTAL - DiMAyA

XII Congreso Argentino de Microbiologa

XII Congreso Argentino de Microbiologa

Mensaje del Presidente de la Asociacin Argentina de Microbiologa

XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010

XII Congreso Argentino de Microbiologa

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

Mensaje del Presidente del XII Congreso Argentino de Microbiologa

XII Congreso Argentino de Microbiologa 2010

Mensaje del Presidente del I Congreso de Microbiologa Agrcola y Ambiental (DiMAyA)

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

XII Congreso Argentino de Microbiologa

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICA

A/IB NR/IB NR/IA P/IB PA/IB Total

2 (11,8) 2 (11,1) 4 (7,8)

5 (100) 17 (100) 3 (100) 18 (100) 3 (37,5) 8 (100) 3 (5,9)

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

MICROBIOLOGA AGRICOLA Y AMBIENTAL

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

BACTERIOLOGA, MICOLOGA Y PARASITOLOGA CLNICA

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

N (%) 59 (4,5) 56 (4,2) 18 (1,4) 17 (1,3) 5 (0,4) 3 (0,2)

N (%) 170 (12,9) 86 (6,6) 82 (6,3) 17 (1,3) 9 (0,7) 782 (60,0)

XII Congreso Argentino de Microbiologa - Presentaciones Orales

Revista Argentina de Microbiologa (2010) 42 - Supl. 1

MICROBIOLOGA AGRICOLA Y AMBIENTAL