MAYDE CASTRO CRESPO CARLA MUOZ TOCO INFORME FUNDAMENTO 1.- Extraccin de ADN 1.

- La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como ser el sulfato de sodio emulsionan los lpidos de las membranas celulares y las rompen. 2.- La sal evita la unin de las protenas al ADN. 3.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa. 2.- Miniprep En esta prctica lo que se utilizo es Gel de agarosa teido con bromuro de etidio mostrando una serie de plsmidos purificados mediante miniprep. Aislamiento de plsmidos con miniprep y digestin con enzimas de restriccin. Una miniprep es una extraccin de ADN de naturaleza plasmdica de un cultivo bacteriano. El mtodo que se utiliz para ello es romper las clulas de dicho cultivo mediante un choque alcalino de modo que slo permee selectivamente su ADN plasmdico. Para ello, se toma una cantidad de cultivo crecido en medio lquido y se centrifuga, aislando as las clulas de aqul. Despus, se resuspende dicho pellet y se expone dicha suspensin a una disolucin que contiene NaOH y dodecilsulfato de sodio (SDS), la cual solubiliza en parte la membrana externa de las bacterias Gram negativas, lo que produce la liberacin del contenido celular de stas: ADN genmico y plasmdico desnaturalizados, ARN, protenas. Tras esto, se aade a la mezcla acetato potsico, acdico, lo cual neutraliza todo el debris celular y provoca la rpida renaturalizacin del ADN plasmdico, que queda en suspensin, mientras que el genmico y el resto de componentes celulares se reticulan y precipitan ayudados por la alta concentracin de sales, especialmente

del recin generado dodecil sulfato de potasio. Finalmente, se centrifuga nuevamente la mezcla para aislar el sobrenadante, rico en el ADN plasmdico y en ARN, el cual deber ser eliminado mediante una ribonucleasa. La miniprep es la tcnica inicial de purificacin y concentracin de ADN plasmdico. 3.- QUE DISTINGUE GEN MUTADO DEL GEN NO MUTADO? Homocigoto N/N 160 pb--------100 pb --------40 pb ---------Heterocigoto N/P 200 pb -------160 pb--------100 pb --------40 pb ---------Lo que distingue de un gen mutado y no mutado es la cantidad de fragmentos que presente cada uno dando asi para un homocigoto N/N 3 frangmentos con 3 pares de bases, para un heterocigoto N/P 4 fragmentos con 4 pares de bases y para un gen mutado da un homocigoto P/P solo con dos fragmentos de pares de bases y que tambin estos pares doblan su tamao uno del otro y con eso se puede identificar y distiguir de un gen no mutado. Homocigoto P/P 200 pb ------100 pb--------

RESULTADOS DE LA EXPERIENCIAS

MAYDE,ROCIO,DANITZA,CARLA HACIENDO UNA COMPARACION CON EL CUADRO CONTROL VEMOS QUE LA MUESTRA PRESENTA EL GEN RhD QUE CODIFICA PARA EL ANTIGENO RHESUS. HABLANDO DEL CROMOSOMA Y EN LOS RESULTADOS NO PRESENTA LA BANDA Y ESTO SE DEBE A QUE LA PACIENTE ES MUJER Y CONICIDE CON LA CORRIDA ELECTROFORETICA. Y LA FILA DE LA CORRIDA DEL GEN DE BETA-GLOBINA DA IGUAL QUE EL PATRON SIENDO ASI QUE ESTE GEN ES CONSIDERADO COMO CONTROL PARA TESTEAR LA CALIDAD DEL ARN MENSAJERO m.

EXPERIENCIA 2

BamHI EcoRI KpnI

2 MUESTRAS MARCARON EN LA DISTANCIA

EXPERIENCIA 3

PATOGENIA DEL FACTOR V El factor de riesgo gentico ms frecuente para la trombosis venosa es el factor V Leiden, presente en el 5 por ciento de la poblacin general. El factor V es uno de los factores normales de coagulacin sangunea. El factor V Leiden es una forma cambiada o "mutada" del factor V que se inactiva diez veces ms lentamente que el factor V normal. Esto provoca que permanezca ms tiempo en la circulacin, produciendo un estado de hipercoagulacin. En otras palabras, la sangre sigue coagulndose, lo que produce una posible obstruccin. Una copia del gen del factor V Leiden aumenta el riesgo de trombosis venosa de 4 a 8 veces, mientras que dos copias del gen aumentan el riesgo 80 veces. Otros defectos coexistentes de la coagulacin pueden producirse con el factor V Leiden y, en general, el riesgo de trombosis aumenta en los pacientes que tienen ms de un defecto gentico. La mutacin del factor V Leiden est implicada en el 20-40 por ciento de los casos de trombosis venosa, y se sospecha en individuos que tienen antecedentes mdicos de trombosis venosa o en familias en las que existe una alta incidencia de trombosis venosa.