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Bioqumica

Estructural y Metablica
TEMA 5. Enzimologa

Bioqumica Estructural y Metablica


TEMA 5. Enzimologa

TEMA 5. Enzimas. Clasicacin. Principios de la catlisis enzim6ca. Energa de ac6vacin. Velocidad de reaccin y equilibrio de reaccin. Cin6ca enzim6ca: ecuacin de Michaelis-Menten. Ecuacin de los dobles recprocos. Inhibicin enzim6ca. Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin de la ac6vidad enzim6ca: alosterismo, modicacin covalente, proenzimas. Isoenzimas.

Jess Navas Mndez

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TEMA 5. Enzimologa

ENZIMAS
Catalizadores de las reacciones biolgicas. La mayora son protenas aunque hay molculas de RNA con ac6vidad catal6ca (ribozimas). Gran poder catal6co. Alto grado de especicidad. Actan en soluciones acuosas a 37C y pH neutro. Su ac6vidad puede regularse. El 25% de los genes humanos codican enzimas que catalizan reacciones metablicas.

Jess Navas Mndez

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IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS


Cada paso de una va metablica est catalizado por un enzima. La medida de la acKvidad enzimKca en uidos biolgicos o tejidos es importante para el diagnsKco de muchas enfermedades. Muchas frmacos son inhibidores de la ac6vidad enzim6ca. Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.

Jess Navas Mndez

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TEMA 5. Enzimologa

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TEMA 5. Enzimologa

ENZIMAS: DEFINICIONES
Cofactor: necesario para la ac6vidad enzim6ca. Pueden ser iones metlicos o una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el cofactor est unido fuertemente al enzima se denomina grupo prost6co. Apoenzima: parte proteica del enzima (no ac6va). Holoenzima: apoenzima + cofactor.

NOMENCLATURA DE LOS ENZIMAS


SUSTRATO + TIPO DE REACCIN + ASA
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UN TERCIO DE LOS ENZIMAS REQUIEREN ALGN IN METLICO

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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MUCHAS VITAMINAS SON COFACTORES O PRECURSORES DE COFACTORES DE ENZIMAS

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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CLASES DE ENZIMAS

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LOS ENZIMAS ACELERAN LAS REACCIONES DISMINUYENDO LA ENERGA DE ACTIVACIN

E + S = ES = E + P
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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LOS ENZIMAS SON ESTEREOESPECFICAS PORQUE FORMAN VARIAS INTERACCIONES ENTRE AMINOCIDOS DEL CENTRO ACTIVO Y LOS DISTINTOS GRUPOS DEL SUSTRATO

Mathews & Van Holde. Bioqumica. McGraw-Hill, 1998. Jess Navas Mndez

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EL CENTRO ACTIVO DE LOS ENZIMAS ES COMPLEMENTARIO AL ESTADO DE TRANSICIN DE LA REACCIN CATALIZADA

Progreso de la reaccin
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Encaje inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa (Hexoquinasa = ATP: glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 ).

D-Glucosa
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km

Concentracin de sustrato [S]


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Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.

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RELACIN ENTRE Vo y [E]


Vo

[E]

La velocidad inicial es funcin lineal de la concentracin de enzima, siempre que la concentracin de sustrato sea alta.
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ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vmax (S) Vo = Km + (S)
E + S

K1
K1

ES

K2

K2 + K1 Km = K1
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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO

1/2 Vmax

Velocidad inicial

Km

Concentracin de sustrato [S]

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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CALCULO DE Km Y Vmax POR LA REPRESENTACIN DE LINEWEAVER-BURK

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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PARMETROS ENZIMTICOS
1. Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la Vo es 1/2 Vmax. Es una medida de la anidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor es la anidad del enzima por S. 2. Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas de sustrato conver6das en producto por molcula de enzima y unidad de 6empo, en condiciones de saturacin de sustrato. 3. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros ac6vos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad). 4. Unidad de enzima = can6dad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por min = una forma comn de expresar la velocidad. 5. AcKvidad especca = unidades por mg de protena total de la preparacin enzim6ca. En el caso de enzimas en suero: unidades/L.
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Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carbo- xilos -COOH; amino -NH2; 6ol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica posi- 6va, nega6va o neutra. Como la conformacin de las pro- tenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la ac6vidad catal6ca. Este es el llamado pH p6mo.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH p6mo pueden afectar drs6camente su ac6vidad. As, la pepsina gstrica 6ene un pH p6mo de 2, y la tripsina lo 6ene a pH 6. Ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturali- zacin de la protena, los seres vivos han desarrollado siste- mas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: los amor6guadores siolgicos.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

(Garret & Grisham)

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EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA


Los aumentos de temperatura por lo general aceleran las reacciones qumicas. Las reacciones catalizadas por enzi- mas siguen esta ley, solo que al ser protenas a par6r de cierta temperatura se empiezan a desnaturalizar. Esa temperatura se llama temperatura p6ma y es aquella en la que la velocidad enzim6ca es mxima.

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VARIACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EN FUNCIN DE LA TEMPERATURA

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INHIBICIN ENZIMTICA
Inhibicin irreversible (uniones covalentes entre inhibidor y enzima. Ejemplo: frmacos). Inhibicin reversible. COMPETITIVA. NO COMPETITIVA.

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INHIBICIN COMPETITIVA
+ Inhibidor

Unin del Inhibidor al centro ac6vo, compi6endo con S: Aumenta Km. No cambia Vmax.
Inhibidor compe66vo

Sustrato

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICIN NO COMPETITIVA
+ Inhibidor

Unin del Inhibidor a un si6o del enzima dis6nto del centro ac6vo: no compite con S: No cambia Km. Disminuye Vmax.
Sustrato Inhibidor no compe66vo Sustrato

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICION COMPETITIVA

INHIBICION NO COMPETITIVA

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Sustrato

Inhibidor compe66vo

Sustrato Inhibidor no compe66vo

Sustrato

Inhibidor acompe66vo

Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 5 ed. Freeman and Co, 2002. Jess Navas Mndez

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Regulacin de la canKdad de enzima presente en las clulas. Inhibicin reversible por productos. Interaccin con moduladores (protenas u otros): - AcKvacion/inhibicin alostrica: El modulador alostrico se une a un si6o dis6nto del centro ac6vo. La unin del modulador es reversible e implica cambio conformacional. Suelen ser enzimas mul6mricas. Tienen cin6ca sigmoidea. - Modicacin covalente: Fosforilacin. ADP-ribosilacin. Me6lacin. AcKvacin proteolKca de pro-enzimas.
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ENZIMAS ALOSTRICOS

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LOS ENZIMAS ALOSTRICOS NO PRESENTAN CINTICA MICHAELIANA

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+ Modulador alostrico posi6vo.

El sustrato es modulador posi6vo.

+ Modulador alostrico nega6vo.

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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ACTIVACIN/INACTIVACIN DE ENZIMAS POR FOSFORILACIN EJEMPLO: GLUCGENO FOSFORILASA

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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UNA ENZIMA PUEDE TENER VARIOS MECANISMOS DE REGULACIN

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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ACTIVACIN DE PROENZIMAS POR PROTELISIS

Auto-ac6vacin de quimotripsina

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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1% 3%

18%

45% 33%

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BIBLIOGRAFA
Lehninger Principles of Biochemistry. 5 ed. Freeman, 2009. Cap 6. Marks Basic Medical Biochemistry. A clinical approach. 3 ed. LWW., 2008. Cap 8. Devlin. Textbook of Biochemistry with Clinical correla>ons. 7 ed. Wiley, 2010. Cap 10. Feduchi y cols. Bioqumica: conceptos esenciales. Panamericana, 2011. Cap 8. Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 7 ed. WH. Freeman, 2011. Caps 8, 9. Voet and Voet. Biochemistry. 4 ed. Wiley, 2011. Caps 13, 14, 15. Baynes and Dominiczak. Bioqumica Mdica. 3 ed. Elsevier, 2011. Cap 6. Garreh and Grisham. Biochemistry. 4 ed. 2009. Caps 13, 14, 15.

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