METODOS LUMINISCENTES

Quim. ANGEL A. NORABUENA SEGOVIA

a.norabuena@hotmail.com

LUMINISCENCIA
Su descubrimiento data del siglo XVI, cuando el fsico y botnico espaol Nicolas Monardes observ, en 1565, un misterioso matiz azulado en el agua almacenada en un recipiente construido con madera de la especie "Lignum nifriticum". Sin embargo, no fue hasta el siglo XIX en que el fsico ingls George Stokes estableci las bases de su utilidad analtica al describir los primitivos mecanismos de absorcin y emisin. Existe un numero de sustancias que solo pierde en forma de calor una parte de su exceso de su energa y emite el resto en forma de radiacin electromagntica de longitud de onda mas larga que la absorbida. Este proceso de emisin de energa se conoce con el nombre de LUMINISCENCIA.

DEFINICION:
Es la emisin de energa remanente en forma de radiacin electromagntica, de distinta frecuencia de la absorbida utilizado en fines analticos.

Una puede ser iluminando la sustancia con luz ultravioleta, es el fundamento de las seales de los billetes, que adems es una patente espaola o la luz azul que da la tnica debida a que contiene quinina. En reaccin qumica como ocurre en las ll "barritas luminosas" contiene una disolucin de cialumne o luminol y una ampollita con agua oxigenda al romper produce luz.

FOTOLUMINISCENCIA
FUNDAMENTO:

Estados singulete y triplete

Niveles de energa de un sistema fotoluminiscente

METODOS LUMINISCENTES

FLUORESCENCIA

FOSFORESCENCIA

QUIMIOLUMINISCENCIA

La fluorescencia y fosforescencia, la diferenciacin entre estos dos trminos se funda en el mecanismo por el que la molcula retorna a su estado fundamental.

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Se excita la muestra mediante la absorcin de un fotn de luz, desde su estado electrnico basal a uno de los distintos estados vibracionales del estado electrnico excitado. Las colisiones con otras molculas causan que la molcula excitada pierda energa vibracional hasta que alcanza el estado vibracional ms bajo del estado electrnico excitado. La molcula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibracin del estado electrnico basal, emitiendo un fotn en el proceso. Como las molculas pueden caer a cualquiera de los diferentes niveles de vibracin en el estado basal, los fotones emitidos tendrn diferentes energas y, por lo tanto, frecuencias. As pues, mediante el anlisis de las diferentes frecuencias de luz emitida por espectrometra de fluorescencia, junto con sus intensidades relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de vibracin.

FACTORES QUE AFECTAN LA FLUORESCENCIA

Influencia de la estructura molecular sobre la fluorescencia
El primer requisito para que exista florescencia (o fosforescencia) es que la molcula posea una estructura capaz de absorber radiacin ultravioleta o visible, esto es, puedan tener lugar transiciones >* y n>*.

Influencia de otros factores medioambientales sobre la fluorescencia

1. Influencia del disolvente:

Influencia de la polaridad del disolvente sobre la emisin de fluorescencia.

2. Influencia del pH
El espectro de fluorescencia de muchos compuestos aromticos conteniendo grupos funcionales cidos o bsicos es sensible al pH.

3.Influencia del oxigeno disuelto 4.Influencia de la temperatura

RELACION DE LA INTENCION LA FLUORESCENCIA Y CONCENTRACION

Segn la ley de Beer:

La fraccin de radiacin absorbida es:

Cantidad de radiacin absorbida es:

La intensidad de la radiacin fluorescente

K = Constante de proporcionalidad = Rendimiento cuntico de la fluorescencia

El termino

se desarrolla como un aserie de McLaren.

Si las concentraciones son bajas l se reduce:

Para diluciones diluidas:

RELACION ENTRE LA INTENCIDAD DE FLUORESCENCIA Y LA CONCENTRACION

INSTRUMENTACION
COMPONENTES BASICOS DE UN FLUORIMETRO

Un fluorometro caracterstico. ( Cortesa de Farrand Optical Co., Inc.)

Espectrofluorometro. (Cortesa de Jobin Yvon, Spex Division, Edison, NJ).

ESPECTROS DE EXCITACIN Y DE EMISION

COMPONENTES DE LOS FLUOROMETROS Y DE LOS ESPECTROFLUORIMETROS

Fuentes: Lmparas de wolframio o hidrgeno . Lmparas: Arco de mercurio a baja presin equipada con una ventana de slice fundida. Esta fuente emite lneas tiles para producir la excitacin previa a la fluorescencia a 254, 302, 313, 546, 578, 691 y 773 nm. Lseres: Se utiliza como fuentes de excitacin para medidas de fotoluminiscencia. Un particular inters tienen los lseres sintonizables de colorante que utilizan, como sistema de bombeo, un lser de nitrgeno pulsante o un lser de Nd:YAG. Filtros y monocromadores: Tanto los filtros de interferencia como los de absorcin se han utilizado en los fluormetros para la seleccin de la longitud de onda del haz de excitacin y de la radiacin fluorescente resultante, mayora de los espectrofluormetros estn equipados con al menos uno y a veces dos monocromadores de red. Detectores: Los tubos fotomultiplicadores son los detectores ms utilizados en instrumentos de fluorescencia sensibles, la refrigeracin de los detectores para mejorar la relacin seal/ruido. Cubetas y compartimentos para las cubetas: Se usa cubetas cilndricas como rectangulares, fabricadas con vidrio o con slice.

APLICACIONES Sustancia Inorgnicas:

Quelatos Fluorescentes

Determinaciones Indirectas

Determinaciones indirectas: Algunos aniones, tales como F ; CN

 Sustancias Orgnicas:
Determinacin fluorimetrica de vitaminas.

Vitamina A

Vitamina C

Vitamina K

1. Determinacin fluorimetrica de frmacos y drogas:

2. Anlisis forense:

3.Contaminacin ambiental:

EQUIPOS:

Espectrmetro de fluorescencia de rayos X por energa dispersiva (EDXRF) para anlisis del azufre en productos petroqumicos

Modelo: Fujifilm FLA-5100 Equipo de laboratorio que permite la captacin y anlisis de imgenes proveniente de muestras marcadas con istopos radiactivos, con agentes fluorescentes o con compuestos luminiscentes o quimioluminiscentes.

FLUORESCENCIA
VENTAJA Doble seleccin de longitudes de onda. Anlisis de fluorescencia es ms sensible que el de absorcin. En concentraciones mas bajas Analizar e identificar derrames de hidrocarburos. DESVENTAJA Sometidos a interferencias, se combinan con tcnicas cromatografas. Alto costo compra y mantenimiento. Los instrumentos son mas complejos.

Entre los numerosos compuestos que pueden determinarse por fluorescencia se encuentran los aminocidos, las protenas, las coenzimas, las vitaminas, los cidos nucleicos, los alcaloides, las porfirinas, los esteroides , los flavonoides y muchos metabolitos.