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Agrobiotecnologa

Curso 2011

Biotecnologa forestal
Sandra Sharry

Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires

Sumario
Los recursos forestales - Ecosistemas forestales: bienes y servicios - Superficie y distribucin de bosques - Mercado mundial de productos forestales

Problemas ms importantes del sector forestal. Demandas

Biotecnologa en forestales - Cultivo de tejidos vegetales - Marcadores moleculares - Transgnesis - Omicas Referencias

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Biotecnologa forestal

Ao Internacional de los Bosques 2011


La Asamblea General de Naciones Unidas declar el 2011 como el Ao Internacional de los Bosques de sensibilizacin sobre la gestin sostenible, la conservacin y el desarrollo sostenible de todos los tipos de bosques.
Cada ao desaparecen ms de 13 millones de hectreas de bosques en todo el mundo, una superficie equivalente a Panam. Los consumidores pueden asumir varias medidas para combatir esta deforestacin, que afecta a la biodiversidad y al bienestar de miles de millones de personas.

Introduccin a la Dasonoma, FCAyF, UNLP-2011

Recursos forestales

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Biotecnologa forestal

2010

Introduccion a la Dasonomia.Sandra Sharry

Introduccin a la Dasonoma, FCAyF, UNLP-2011

Introduccin a la Dasonoma, FCAyF, UNLP-2011

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Toona

sauce

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Arboles
Plantas perennes, longevas, con largos ciclos de vida, amplia fase juvenil y crecimiento secundario.

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Madera = xilema

Recursos forestales

Son los materiales heredables de valor econmico, cientfico o social que estn contenidos dentro y entre las especies forestales. Se consideran como tales: - Bosques - Tierras boscosas - rboles fuera del bosque

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Un ecosistema forestal est formado por una comunidad vegetal donde predominan los rboles

Bosque natural o nativo:


Bosque integrado por rboles autctonos no plantados por el hombre.

Forestacin industrial:
rea de bosque instalada por el hombre y manejada para la produccin de madera, generalmente con especies de rpido crecimiento.
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Las plantaciones forestales son agroecosistemas.

Aprovechamiento sustentable vs. deforestacin

Los recursos genticos forestales poseen un valor inestimable para la humanidad

Bienes y servicios forestales ms importantes: - Madera industrial - Madera para lea - Productos forestales no madereros - Conservacin de suelos y de agua - Conservacin de la diversidad biolgica - Mitigacin del cambio climtico global - Apoyo a los sistemas agrcolas - Generacin de empleo - Oportunidades recreativas - Proteccin del patrimonio natural y cultural - Recursos para educacin e investigacin

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rea de bosque como porcentaje del rea total de la tierra por pas, 2010

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La tasa de deforestacin muestra seales de reduccin, pero an es sumamente alarmante


13 millones de hectreas de bosques fueron convertidos en tierras destinadas a otros usos o se han perdido debido a causas naturales todos los aos durante el ltimo decenio

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Los Pulmones de la Tierra estn muriendo


Hace 50 aos el 50% de la tierra firme era boscosa hoy el numero solo llega al 26% (3,454 millones de hectreas)

Ms del 60% de los bosques se ubican en: Rusia, Brasil, Canad, Estados Unidos, China, Indonesia.
La variacin neta en el rea de bosque para el perodo de 2000-2010 se estima en 5,2 millones de hectreas por ao (una superficie de aproximadamente la dimensin de Costa Rica), inferior al nivel de 8,3 millones de hectreas por ao en el perodo de 19902000.

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Amrica del Sur y frica siguen teniendo la prdida neta de bosque ms elevada

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Cambio neto del rea de bosque por pas, 2005-2010 (ha/ao)

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Problemas ms importantes del sector forestal

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La gestin de los recursos forestales involucra una amplia gama de problemas

1. El cambio climtico y los bosques: Los bosques juegan un papel importante en la fijacin de carbono. Existe un aumento de la demanda de servicios ambientales. 2. Conservacin de la diversidad biolgica forestal: Se requiere desarrollar la ordenacin y el manejo adecuado de reas protegidas.

3. Conversin de bosques: Se requiere limitar la deforestacin causada por las actividades ilegales y la corrupcin en el sector forestal.
4. Consumo de productos forestales: El comercio de productos forestales crece ms rpido que la produccin.
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5.

Limitaciones de la mejora gentica tradicional en especies forestales: Se requieren perodos considerablemente prolongados.

Los bosques constituyen un importante sumidero de carbono

1. El cambio climtico y los bosques

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www.ine.gob.mx/dgicurg/cclimatico

Mediante la fotosntesis, los rboles en crecimiento despiden oxgeno y consumen agua, luz y CO2. Por ello, los bosques en expansin son calificados de sumideros: capturan carbono y lo transforman en biomasa.

Los bosques son los ecosistemas mas diversos del planeta

2. Conservacin de la diversidad biolgica forestal


De un total de 250.000 especies vegetales existentes, 155.000 se encuentran en ecosistemas forestales.

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Los recursos forestales, al igual que otros recursos producidos por los sistemas vivos, son renovables en la medida en que el capital biolgico permanece intacto.

La principal causa de deforestacin es el avance de la frontera agrcola

3. Conversin de bosques
Variacin anual neta de la superficie forestal por regiones (1990-2000)

Pases y bosques con altas tasas de cambio neto del rea forestada (1990-2000)

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Cambio de uso de la tierra

La oferta de madera proveniente de bosques naturales estar sujeta a fuertes restricciones en el futuro inmediato

4. Consumo de productos forestales


El 70 % de la madera proviene de bosques naturales. La obtencin de madera de los ecosistemas naturales debe reducirse un 30% para asegurar su sustentabilidad (Eco92). La madera no est donde se necesita; la mayora de los bosques naturales del mundo est en regiones alejadas de los centros de consumo.

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La mejora gentica tradicional en especies forestales requiere perodos prolongados

5. Limitaciones de la mejora gentica tradicional en especies forestales


- Los rboles son organismos con largos ciclos de vida, amplia fase juvenil y crecimiento secundario. - Las especies forestales han evolucionado en varios ecotipos y mantienen niveles muy altos de diversidad gentica dentro de las poblaciones. - Durante su ciclo de vida, los rboles deben enfrentar condiciones ambientales muy variables.

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Caracteres de inters para el mejoramiento

Situacin del Recurso Forestal en Argentina


Superficie de Bosque Nativo (Tierras Forestales + Bosques Rurales)

31.443.873 hectreas
Superficie de Otras Tierras Forestales (Otras tierras forestales) 64.975.518 hectreas

2010

Introduccion a la1Inv.Nac.de Bosques Nativos, 2007. Dasonomia.Sandra Sharry

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Bosques nativos

31 millones ha

Selvas subtropicales: Tucumano-Boliviana, Cedrela Paranaense Cedrela, Araucaria

Bosques Andino Patagnico s Nothofagus Problemas:


Deterioro y disminucin superficie, prdida de diversidad y calidad
2010 Introduccion a la Dasonomia.Sandra Sharry boscosos degradados a su funcin

Chaco, Espinal, Monte Prosopis


~26 millones ha Oportunidades: Abundante superficie, an Germoplasma forestal nativo, Alternativa productiva
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recuperar ecosistemas

productiva y de servicios

Selva misionera

Yungas

algarrobo Parque chaqueo

2010

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Bosque andino43 patagnico

Bosques nativos 33.2 millones ha Selvas subtropicales: Tucumano-Boliviana, Cedrela Paranaense Cedrela, Araucaria

Bosques Andino Patagnicos Nothofagus

Chaco, Espinal, Monte


Prosopis ~26 millones ha

Problemas: Deterioro y disminucin superficie, prdida de diversidad y calidad

Oportunidades: Abundante superficie, an Germoplasma forestal nativo, Alternativa productiva

recuperar ecosistemas boscosos degradados a su funcin productiva y de servicios

Perdida de bosques

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Situacin de los bosques nativos


Entresacados - empobrecidos Cada vez ms distantes Menores dimetros (menores rindes) Falta homegeneidad de materia prima Poca oferta en cantidad y calidad Actualmente costos irreales (extractivos) Largo tiempo para recuperacin Oposicin ambiental

19/05/2012

Situacin forestal ARGENTINA

2010

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Argentina promueve las plantaciones forestales a travs de instrumentos de promocin

Forestaciones en Argentina

Bosques Cultivados
1.1 milln de ha
LEY DE INVERSIONES PARA BOSQUES CULTIVADOS Ley 25.080

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Ley N 26432 conteniendo la modificacin de la Ley 25080, de Inversiones para Bosques Cultivados. Esta Ley sustituye el Artculo 4, y prorroga por el trmino de 10 aos los plazos previstos en los artculos 17 y 25 de la Ley 25.080.

Bosques cultivados

840 mil 60 135 30

95

1.2 millones ha (SAGPyA 2003)

Visin satelital real de las plantaciones


80 %

Neuqun

MISIONES

ENTRE RIOS

MISIONES

Participacin de tipos de bosques en Argentina (porcentual)


33

8.0

1.1
nativo cultivado

1.0
nativo cultivado

Superficie

Abastecimiento industria

Participacin de cultivados por especies en Argentina

Conferas
54%
19/05/2012

Eucaliptos 32%

Salicceas 11%

Esp varias
3%

Panorama forestal Argentina


Dos grandes vas de desarrollo del sector forestal
Bosques nativos Ordenamiento: la utilizacin y conservacin de los bosques en beneficio de las generaciones presentes y futuras. Cultivo de especies con alto potencial de domesticacin y madera de calidad Reforestacin de bosques degradados Bosques implantados Incorporacin de caractersticas de madera de calidad en los actuales programas de mejoramiento de exticas de rpido crecimiento, favorece zonas marginales absorbiendo costo flete Produccin de materia prima para disminuir presin de corte en nativas, sustituyndola en fines menos nobles

La biotecnologa puede apoyar el desarrollo de plantaciones productivas en Argentina

Factores que limitan las posibilidades de plantaciones forestales en Argentina


Falta de estimulo para el productor rural que necesita contar con material gentico superior o un mayor dominio sobre las practicas silviculturales modernas. Falta de material domesticado y mejorado de especies nativas. Obtencin y propagacin masiva de hbridos de inters de especies de rpido crecimiento (eucaliptos y pinos) Escalamiento de la produccin de plantas clonadas (biorreactores y semilla sinttica) Falta de capital y RRHH capacitados.

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Una plantacin forestal consiste en el establecimiento de rboles que conforman una masa boscosa y que tiene un diseo, tamao y especies definidas para cumplir objetivos especficos como plantacin productiva, fuente energtica, proteccin de zonas agrcolas, proteccin de espejos de agua, correccin de problemas de erosin, sistemas agrosilvopastoriles, entre otras.

Importancia bosques cultivados


Bajan presin de tala de bosques nativos Materia prima en distancias cortas (polos) Homogeneizan la oferta de madera Sustituyen nativas en usos menos nobles

Abastecen ms del 80% de la industria


Costos bajos- se puede agregar valor y M.O Se utilizan especies domesticadas de rpido crecimiento. Alta productividad neta. Aumenta la superficie de fijacin de CO2 Favorecen las condiciones ambientales (disminuyen erosion, restablecen ciclo del agua).
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Necesarias en condiciones de reclamacin.

Transicin en el manejo y cosecha forestal.


Tipo
Bosques naturales Bosques manejados Plantaciones forestales
Plantaciones con manejo intensivo Plantaciones, rboles superiores, mejora tradicional Plantaciones clonales, rboles superiores,OGM
Sedjo, 2001

Perodo 10000 AC-presente 100 AC-presente 1800- presente


1960- presente 1970- presente

2000-futuro

EG 6 meses con riego - Salta

Ganancia por mejora gentica Ej: pino


Tcnica Efecto (aumento de produccin)

Huerto Mixto, polinizacin abierta, primera generacin


Family block, mejores madres Polinizacin controlada (genes masculinos y femeninos) Biotecnologa-Clonacin

8%

11 % 21 %
20 m3-ha ao. costo econmico de formacin de madera 35 US$/m3. 25 m3/ha/ao - el costo de formacin se reduce a 23 US$/m3. (comparado con 90 US$/m3 de USA).

Por qu invertir en biotecnologa forestal?


En la ltima dcada, el desarrollo de la biotecnologa ha demostrado que puede revolucionar el mapa de la competitividad forestal. Revista Campo, Chile.2009 Los beneficios potenciales de la biotecnologa son an mayores en la silvicultura que en la agricultura, ya que en muchos casos permitir acelerar los procesos de mejoramiento de especies arbreas

Prospectiva Biotecnologa Forestal


Mejoramiento gentico para aumento de la productividad mejoramiento gentico para resistir plagas y enfermedades certificacin de calidad especies con caractersticas mejoradas mejoramiento de la madera criopreservacin de material gentico seleccionado semillas mejoradas identificacin clonal, seleccin asistida y certificacin usando marcadores moleculares rboles rectos y con volmenes ms altos bancos de germoplasma y genticos

propagacin utilizando organognesis y embriognesis somtica

Prospectiva Biotecnologa Forestal


Biopulpaje y banqueo en produccin de celulosa certificacin de bioseguridad clones y especies plus especies resistentes a estrs bitico y abitico genmica y bioinformtica

ingeniera gentica (transgenia)


marcadores moleculares mejoramiento gentico de especies introducidas mejoramiento gentico de especies nativas preservantes no txicos y no agresivos ambientalmente reciclaje de deshechos recuperacin, sustentabilidad y productividad especies nativas

Prospectiva Biotecnologa Forestal


Tratamientos de residuos bioremediacin subproductos rboles con menor contenido de lignina propiedades nutritivas de frutos de especies nativas homogenizacin de las plantaciones

recuperacin vegetativa nuevas especies rboles estriles

Prospectiva Forestal
Productos
Esencia de rboles nativos que son anticancergenos o antioxidantes celulosa blanqueada por medios orgnicos

madera protegida frente a agentes de biodeterioro, mediante antibiosis


semillas seleccionadas y mejoradas pulpa blanqueada con enzimas de hongos fibra de papel de mejor calidad saponina madera libre de nudos maderas duras de pequeas dimensiones pulpa de madera pretratada con organismos biolgicos

Prospectiva Forestal
Productos
Celulosa fibra larga taninos madera en trozos sin tratamientos qumicos resinas biocombustibles compost de madera

madera y productos terminados de sequoia celulosa fibra corta papel de alta resistencia

BIOTECNOLOGAS UTILIZADAS EN EL SECTOR FORESTAL

Herramientas 1. Micropropagacin y multiplicacin 2. Marcadores (bioqumicos y moleculares) 3. Genmica (funcional, estructural, comparativa,asociativa, estadsitica) 4. Modificacin gentica Aplicaciones: Caracterizacin de la diversidad (estudios de estructura, flujo de genes, impactos antrpicos, genetica de poblaciones y estudios de diversidad) Aspectos funcionales y aplicados de la investigacion gentica: mapeo,MAS, y genmica) Investigacin y aplicacin de propagacin vegetativa Alteracin del genoma por insercin de genes

Las aplicaciones biotecnolgicas en forestales se basan en tres grandes reas frecuentemente interconectadas

1. Biotecnologa basada en el cultivo de tejidos vegetales 2. Biotecnologa basada en marcadores moleculares 3. Biotecnologa basada en tcnicas de ADN recombinante

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4.Omicas

Cultivo de tejidos de especies forestales

Biotecnologa basada en el cultivo in vitro de tejidos

El cultivo de tejidos aplicado a la mejora y conservacin de especies leosas abarca las siguientes tcnicas:
1. Propagacin in vitro:
- Cultivo de callos seguido de organognesis o embriognesis somtica - Proliferacin de las yemas axilares y /o brotes adventicios - Microestacas obtenidas de brotes axilares, pices o microinjertos

2. Seleccin in vitro y variacin somaclonal. 3. Fusin de protoplastos, cultivo de haploides y rescate de embriones. 4. Cultivo de clulas en suspensin y produccin in vitro de productos naturales.
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5. Conservacin de germoplasma in vitro. Crioconservacin.


6. Control in vitro del estado de desarrollo.

La micropropagacin permite clonar individuos elite garantizando el mantenimiento de las cualidades seleccionadas

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La micropropagacin facilita el establecimiento de plantaciones clonales industriales. El mercado principal para estas plantaciones operacionales es la industria de la celulosa para la produccin de pulpa y papel y la venta de bonos de carbono.

Silvicultura de hoy.

El hecho de clonar individuos hace posible: -Estudiar el comportamiento de un genotipo en varias condiciones al mismo tiempo - Movilizar genotipos a zonas de inters -Instalar huertos semilleros formados solo por individuos selectos -Conservar germoplasmas por un perodo indefinido de tiempo - Aplicar tcnicas de ingeniera gentica.

Las tcnicas de cultivo in vitro como la organognesis y la micropropagacin se emplean actualmente para la produccin de plantas madres, que son utilizadas para la produccin de las estacas a enraizar.

Los callos nodulares con buenas


caractersticas morfognicas
B

Figura 1. A Callo obtenido a partir de raquis de Toona ciliata. B Brote diferenciado del callo. C Formacin de nuevas yemas a partir de la base del brote diferenciado

Los sistemas de inmersin temporaria ha dado muy buenos resultados en la micropropagacin de leosas Ventajas:
Aumento de la tasa de multiplicacin Automatizacin. Disminucin del costo de mano de obra

Eucalyptus nitens propagado en un sistema de inmersin temporal

Ventajas - La habilidad de capturar rpidamente una mayor proporcin de la variacin gentica (aditiva y no aditiva ) de la que puede obtenerse por cruzamiento. - La produccin masiva de individuos superlativos que renen caractersticas nicas. - La capacidad de utilizar la especificidad de un clon para potenciar la expresin en sitios especficos o bien utilizar clones de amplia adaptacin a diversos sitios. - La posibilidad de mejorar sustancialmente la inversin forestal por una mayor productividad, mejor calidad y uniformidad del producto final y reduccin de los turnos de corta.

La multiplicacin de microinjertos y microestacas representa una miniaturizacin de las tcnicas convencionales

Microinjertos: consiste en el injerto de pices caulinares en pies (plntulas) bajo condiciones in vitro. Se utiliza para regenerar especies recalcitrantes.

Subdivisin de microestacas

Microestacas: son pequeos esquejes que se multiplican in vitro. Aumentan las posibilidades de enraizamiento y reducen el tiempo de obtencin de plntulas por juvenilizacin.

La puesta a punto de la embriognesis somtica en especies leosas se logra bajo condiciones muy variables

La induccin de embriognesis somtica en especies leosas es ms fcil utilizando material embrionario.


Aplicaciones:
- Programas de mejoramiento - Propagacin masiva de plantas elite - Crioconservacin - Transformacin gentica - Cruzamientos interespecficos - Produccin de semilla sinttica

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Angiospermas

Gimnospermas

La embriognesis somtica ha sido puesta a punto en aproximadamente 150 especies leosas.

La embriognesis somtica est ampliamente considerada como la mejor va de regeneracin que utiliza las tcnicas de cultivo de tejidos vegetales en biotecnologa forestal.

Embriognesis: Obtencin de semillas artificiales


Semillas sintticas obtenidas por encapsulacin en alginato

ENCAPSULADO DE YEMAS
se elimina la fase de enraizamiento, aumenta el nmero de material de siembra, principalmente en aquellos cultivos donde la disponibilidad de semillas es limitada y especies en las que la produccin de semillas botnicas es difcil, se mecaniza la fase de siembra, permite la incorporacin de hormonas a la cpsula, productos fitosanitarios y microorganismos estimuladores del crecimiento, permite el almacenamiento, la conservacin, la manipulacin y transporte del material, favorece el intercambio de germoplasma,

Las encapsuladas se llevan al suelo para lograr su brotacin.

Desarrollos
Seed coat for manufactured seeds United States Patent 7168205

Seed coating machine United States Patent 4465017

Cartes, et al. 2009.

Encapsulado de Embriones Somticos y Embriones Cigticos para Obtencin de Semillas Artificiales de Raul (Nothofagus alpina (Poepp. & Endl.) Oerst.)

Ventajas

Una generacin de rboles generados por ES muestra un 30-50% de incremento del crecimiento comparado con rboles no mejorados y un 22-40% respecto a plantaciones de huertos semilleros con un ganacia de produccin del 8%

EMPRESAS QUE UTILIZAN EL CTV

Inversin en maderas nobles


bosques-naturales.com

Nuevos bosques, nueva vida


aitanaforestal.com

La biotecnologa vegetal contribuye a frenar el cambio climtico a travs de generar las condiciones para utilizacin de especies como el nogal, que absorbern CO2 (un lote de nogal fijar durante su desarrollo 63.5 Toneladas de CO2 de la atmsfera) y entregan retornos econmicos muy competitivos y amigables con el ambiente.

Utiliza plantas de nogal de extraordinario vigor. Gracias a tcnicas de microprogacin se obtiene un material enfocado solo a producir madera de alto valor comercial

En el rea de la productividad forestal hay ejemplos como el de Aracruz, 1984, dnde los rendimientos iniciales medios se encontraban en 33m3 ha/ ao, y con la utilizacin de clones hbridos se lleg a 70m3ha/ao. En la misma Empresa, utilizando clones, se consiguieron aumentos en la densidad bsica de la madera del orden del 25%; y en relacin al incremento del contenido de celulosa , en un 6%.

Industrial Multi-Varietal Forestry JD Irving, Ltd. Canad


www.irvingplantstrees.com

Desarrollo de variedades embriognicas de cruces controlados Criopreservacin y mantenimiento de variedades embriognicas Produccin de rboles derivados de ES y largos test de campo Produccin de una mezcla de multivariedades para establecer a campo.

Los programas de propagacin clonal de pinos se basan en la produccin de plantas clonales a partir de material seminal selecto, producto de ensayos de progenies o cruzamientos controlados. Los pinos clonados muestran mejores caractersticas que los plantados por sistemas tradicionales Las especies de pinos que se han clonado son: oaxacana, pseudostrobus, patula y jaliscana

BIOFOREST S.A.

El uso de seleccin in vitro y variacin somaclonal en rboles es muy limitado

Mediante seleccin in vitro se pudo obtener resistencia a enfermedades, tolerancia a herbicidas y tolerancia a estreses ambientales.

Los resultados del mejoramiento mediante variacin somaclonal son difciles de preveer. Se han obtenido rboles tolerantes a metales pesados y a bajas temperaturas.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

El cultivo de protoplastos y el rescate de embriones son tcnicas que parecen tener poca aplicacin en las especies forestales

Cultivo de protoplastos
- Existen problemas para regenerar rboles completos a partir de protoplastos, por lo que esta tcnica tiene poca aplicacin en especies forestales. - Se utiliza en casos aislados: Populus, Alnus, Ulmus.
Alamo haploide

Rescate de embriones
- Rescate de embriones abortivos derivados de hibridacin interespecfica o intergenrica.
- Rescate de material de propagacin con semillas de baja viabilidad. - Disminucin de perodo de latencia de semillas debida a inhibidores del desarrollo del embrin.

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Embriones de Picea sp

- Permite acortar el perodo desde la siembra a la floracin. - Se utiliza particularmente en frutales. - Tendr ms aplicacin cuando avancen los programas de hibridacin de rboles.

Tomado de: www.nrcan.gc.ca;

El uso de cultivos celulares para producir metabolitos podra atenuar la presin sobre los bosques naturales

Cultivos de clulas en suspensin


Agregado celular de Erythrina

- Crioalmacenamiento de germoplasma

- Sistemas de aislamiento de lneas mutantes - Seleccin de fenotipos resistentes a estrs - Transformacin gentica - Produccin a gran escala de embriones somticos

Obtencin de metabolitos secundarios Se ha logrado un xito considerable en la produccin de taxol in vitro (extrado de Taxus brevifolia). - Existen muchas otras sustancias de inters.
Taxus brevifolia

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La conservacin in vitro se utiliza para almacenar germoplasma amenazado de cultivos agrcolas, pero tiene poco uso en especies forestales

Conservacin in vitro y crioconservacin


Son importantes para mantener la fase juvenil durante la realizacin de ensayos clonales simultneos y como estrategia complementaria de conservacin. Los acervos gnicos de casi todas las especies forestales industriales estn bastante bien conservados en rodales in situ y ex situ, y en bancos de semillas.

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Sin embargo, la diversidad gentica de rboles est seriamente amenazada, sobre todo de angiospermas tropicales y especies no industriales.

La propagacin vegetativa de rboles adultos requiere de material fisiolgicamente juvenil o rejuvenecido que tenga la capacidad de enraizar

Control in vitro del estado de desarrollo


En leosas la aptitud para la propagacin vegetativa est asociada con el desarrollo.

En general, pierden su capacidad morfognica a medida que aumenta su edad, lo que dificulta su propagacin.
El control del estado de madurez incluye tratamientos in vivo e in vitro, tales como:
- Mantenimiento de la fase juvenil por aplicacin de fitohormonas y podas - Induccin de floracin temprana (in vitro) - Rejuvenilizacin (reversin del estado de madurez) y revigorizacin (reversin de la edad) mediante estaquillado, induccin de brotacin, aplicacin de hormonas,etc.

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Biotecnologa basada en marcadores moleculares

Aplicaciones
- Cuantificacin y caracterizacin de la diversidad gentica - Verificacin de genotipos - Seleccin asistida por marcadores - Mapas genticos

- Bsqueda de genes

Tipos de marcadores utilizados:


- Isoenzimas - RFLP

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- RAPDs - AFLPs - Microsatlites

- Otros

Conservacin de recursos genticos y gestin sostenible

1. Cuantificacin y caracterizacin de la diversidad gentica


- Caracterizacin de especies y poblaciones amenazadas. Bancos de germoplasma - Determinacin de la magnitud y localizacin de la variabilidad - Estudios filogenticos - Evaluacin de la dispersin de polen y semillas - Dinmica del movimiento de alelos - ndices de diversidad

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- Nmero de alelos por locus - Heterocigosidad

- Identificacin de caracteres genticos

Obtencin de material mejorado para plantaciones clonales que reducen la variabilidad gentica

2. Verificacin de genotipos - Finger-prints


- Identificacin y certificacin de variedades y clones - Estimacin de variabilidad y relaciones genticas - Anlisis de parentezco y certificacin de pureza gnica de hbridos - Monitorizacin de cruces controlados

- Contaminacin de huertos semilleros con individuos no deseables


- Taxonoma
Gel de SSR mostrando 5 loci marcados con diferentes fluorforos utilizado para anlisis de paternidad en lamo
www.fsl.orst.edu/tgerc/risk.htm

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Programas de mejoramiento donde la ganancia gentica puede ser rpidamente multiplicada

3. Seleccin asistida por marcadores


- Permite seleccionar en estado de plntula (acorta tiempos en programas de mejora gentica).

- Puede aplicarse para seleccionar por sexo.


- Se justifica su aplicacin en especies de alto valor econmico. Es compleja por que las especies leosas presentan: - Domesticacin ms reciente - Caractersticas complejas con expresin tarda - Fondos genticos heterogneos - Poblaciones grandes con formato jerrquico

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- Mtodos de mejoramiento que implican cambios graduales en frecuencias allicas va seleccin recurrente

Los mapas genticos permiten seleccionar marcadores genticos distribuidos a lo largo del genoma
13.6 9.1 2.2 1.1 5.8 11.8 11.4 6.2 8.8 7.0 11.7 9.1 4.1 4.5 4.6 19.5 14.0 3.3 6.6 10.9 4.1 6.0

4. Mapas genticos
Facilitan un mejor muestreo de todas las regiones del genoma en los anlisis de germoplasma. Por qu construir un mapa gentico? Son esenciales para el estudio gentico de cualquier especie en relacin a:
- Localizacin cromosmica - Agrupamiento de genes - Estudios evolutivos - Aislamiento de genes
L16_285 P10_1250 I4_340 24.2

EMBRA11 (5.2)
49.9

EMBRA40 (6.9)
35.3

EMBRA40 (5.8)

3.3 30.9

EMBRA11 29.2 (16.7)


J5_510 X15_85 0 Z19_510 R7_480 5.1 0.0 0.0 EMBRA56 1.8 (14.1) V7_400 7.8 K10_1106 13.4 Y20_620 3.9 J5_887 5.8 R9_670 7.8 U16_930 14.6 Y3_470 21.9 EMBRA6 6.4 (19.4) EMBRA16 4.5 (22.0) EMBRA70 20.9 (10.1) I4_1360 W20_660 P19_630 N20_800 W16_760

EMBRA36 2.2 (21.6) EMBRA44 (3.6) 38.5 U19_800 R20_1080 14.6 R20_2700 9.1 4.9 1.6 X1_720 3.9 K19_1495 11.9 F4_377 22.2 K9_884 0.0 EMBRA4 5.8 (21.0) I4_915 2.6 EMBRA19 (13.8) 13.2 Y13_750 2.6 N15_629 2.6 2.6

EMBRA36 (23.2) EMBRA44 8.5 (2.7)

24.7

EMBRA13 14.0 (15.6)


T8_525 R7_750 X9_650 D3_748 P10_530 N13_540 Y15_650 11.0 14.4 7.7 6.3 4.7 19.4 10.0

J7_808 W20_530

13.3

EMBRA38 (8.3)
18.8

EMBRA21 (5.1)
27.2 N12_207

EMBRA56 28.6 (22.3)


R15_870

15.6 EMBRA21 8.5 (14.5) 23.1


K12_631 N8_440 R8_460 M4_906 K15_1400 G2_1444 G5_304 Y9_1050 K10_339 K14_1329

B6_1581

10.9 2.1 2.1

EMBRA13 (10.3)
K9_941 P8_970 R20_370 K9_1500

EMBRA6 9.3 (22.0) EMBRA16 (18.3)


A10_1673 Q1_480 X2_1400 9.6

12.1

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

EMBRA70 (16.7)
U15_210

14.4 15.6 12.0

EMBRA61 11.9 (13.8) 3.3 EMBRA23 5.2 (12.2) EMBRA10 9.7 (12.2)
8.3 3.3 EMBRA33 6.3 (13.0) 2.7 R9_1300 1.2 J17_815 18.3 11.8 11.1 14.3

EMBRA12 (19.1)
X15_1600

EMBRA12 (19.6)
Z3_830 V7_450 R13_480 K8_2000

10.9 9.1 0.8 3.3 6.6 8.2 10.3 1.7

EMBRA61 (12.5) EMBRA23 (12.5) EMBRA10 (11.3) EMBRA33 (9.7)

R15_480 9.2 X17_800 21.0 Z6_520 W11_820 24.6 U13_450 K3_290 12.1 EMBRA66 (26.4) EMBRA35 14.3 (26.4) EMBRA4 16.1 (14.0) N15_485 U20_450 7.2 EMBRA19 10.4 (21.4) 6.6 V2_1300 4.2 N8_412

EMBRA17 (11.4)
U7_1100

EMBRA17 14.2 (8.3)


Z7_1580

EMBRA18 8.6 (10.0) EMBRA59 7.3 (15.6) 4.2 EMBRA58 (15.6)


Y15_740 J13_1370 Y20_550

10.9 1.5

EMBRA18 (13.8) EMBRA7 (18.2)


Q13_980

EMBRA58 (16.4)
X15_700 M4_1228

Mapa gentico de E. grandis y E. urophylla construido con marcadores RAPD y SSR

Variacin individual: seleccin


La seleccin clonal permite utilizar individuos genticamente valiosos para establecer forestaciones y huertos semilleros. Uno de los principales requisitos es contar con mtodos de identificacin de los materiales para poder controlar su comercializacin Los trabajos de identificacin usando marcadores moleculares muy polimrficos como AFLPs o microsatlites nucleares han mostrado gran utilidad

Caracterizacin clonal en Populus spp. Utilizando diferentes marcadores moleculares (AFLPSs, nSSRs) ha sido posible identificar cada uno de los clones existentes

CT V

MM

Caracterizacin de procedencias para su uso en repoblaciones


Permiten determinar los niveles de diversidad y la posibilidad de diferenciar, as como evaluar los riesgos asociados al movimiento de semillas entre zonas con caractersticas ecolgicas distintas

Tamao del genoma

Arabidopsis

Humano

Pino martimo (51pg ADN/2C)


Diploide 2n=24

Pino martimo: 2.000 cM (51,5 pg/2C) Arabidopsis thaliana: 675 cM (0,3 pg/2C)

PROTEMICA forestal

Como utilizar la omicas para obtener el rbol ideal?

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

PROTEMICA forestal

Como utilizar la omicas para obtener el rbol ideal?

1.Regulacin da xilogenesis (formacin de madera) 2.Regulacin da expresin gnica de las races de E. grandis en respuesta al estrs hdrico 3.Formacin de madera de tensin 4. Diferencias entre los proteomas de madera juvenil y adulta

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Transcritoma SAGE
Proteoma 2DE

Anlisis del proteoma de la regin cambial de E.grandis en tres edades de desarrollo

Plantas de 6 meses

rboles de 3 aos

rboles de 6 aos
Celedon et al. Proteomics (2007) 7: 2258-2274

Diferencias entre los proteomas de madera juvenil y adulta

6 aos

22 aos

Anlisis del proteoma de raz en respuesta al estrs hidrico

Control

7 das de estres

Bsqueda de genes. Genmica en forestales

Proyectos genoma en rboles

Otros

Actividades de investigacin en biotecnologa forestal

Distribucin de actividades reportadas de biotecnologa forestal, excluyendo la modificacin gentica, clasificadas por categoras y aplicaciones (estudios de laboratorio, ensayos de campo y liberaciones comerciales)

Biotecnologa basada en tcnicas de ADN recombinante

La transformacin gentica es una herramienta con gran potencial en la mejora de especies leosas, si bien debe ser complementaria de las lneas de mejora clsica.

Sistemas de transformacin gentica comnmente utilizados en rboles:


- Agrobacterium tumefaciens (angiospermas). - Biobalstica (gimnospermas).
Debido a su genoma pequeo, ciclo de rotacin corto, rpido crecimiento y fcil propagacin vegetativa, el lamo (Populus sp.) se ha constituido en un sistema modelo en biotecnologa forestal.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Transformacin genetica de Populus sp.

Rick Meilan, Tree Genetic Engineering Research Cooperative

La ingeniera gentica ofrece un amplio espectro de aplicaciones para el mejoramiento de especies forestales

Areas potenciales de aplicacin.


- Modificacin de la forma y el tamao - Reduccin del tiempo generacional y de la floracin

- Modificacin del contenido de lignina y celulosa


- Resistencia a plagas y enfermedades - Tolerancia a herbicidas - Tolerancia a estrs abitico
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

- Fitorremediacin

Principales objetivos reportados en investigaciones relacionadas con la modificacin gentica de forestales

Caracteres que pueden ser mejorados por modificacin gentica


Silvicultura
Tasa de crecimiento Nutricin Copa-tronco Control de la floracin Herbicidas

Adaptabilidad
Tolerancia a sequa Tolerancia a baja temperatura Resistencia a hongos Resistencia a insectos

Calidad de madera
Densidad de madera Reduccin de lignina Extraccin de lignina Fibras Ramificacin

Modificacin de la forma y el tamao

Se transformaron varias especies forestales con genes que participan en la sntesis de hormonas, tales como:
- Genes de Agrobacterium tumefaciens: iaaM iaaH (sntesis de auxinas); isopenteniltransferase (ipt) (sntesis de citoquininas). - Genes de Agrobacterium rhizogenes: rol A, B, C, D, aux1 y aux2 (sntesis de auxinas y citoquininas). - Gen de la GA 2-oxidasa (GA2ox), involucrado en la sntesis del cido giberlico.

Resultados:
- Modifican el fenotipo, las caractersticas de la madera y el crecimiento.
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Aplicaciones:
- Modificacin de la produccin de frutos, rboles enanos para manejo de riesgo, cambio de las fibras para industria del papel, manejo de huertos semilleros y produccin de ornamentales.

Transformacin de Populus tremuloides con genes que participan en la sntesis de auxinas


El gen iaaM est involucrado en la sntesis del cido indol actico

Actividad GUS en seccin transversal de la base del tallo.

D
Lneas silvestres y transgnicas Fenotipos de lamo silvestre (izquierda) y transgnico (derecha)

Hibridacin in situ del gen iaaM en seccin transversal de la base del tallo.

Co: corteza, P: floema, CZ: cambium, X: xilema

En las lneas transformadas con el gen iaaM se observaron diferencias en la proliferacin de yemas axilares y la disposicin de las hojas

Transformacin de Populus spp. con genes rolC y rolD de Agrobacterium rhizogenes


lamos transgnicos que expresan el gen rolC (izquierda y centro) y control (derecha) Reversin al genotipo silvestre de lamos transgnicos que expresan el gen rolC

- Los genes rolC y rolD originan plantas ms bajas, con hojas pequeas y hbito arbustivo. - Las plantas con genes rol producen menos xilema y rompen sus yemas ms tarde que las plantas control. - Las fibras de xilema son ms cortas y tienen menor concentracin de carbohidratos solubles. - Los genes rolC y rolD inducen el fenotipo rol, el que se acenta por los genes rolA y rolB y se atena por los genes aux1 y aux2.

Transformacin de Populus spp. con modificaciones en la sntesis de giberelinas

lamos transformados con el gen de GA20 oxidasa


Tomado de: Eriksson et al, Biotechnology, 2000. Tomado de: Busov et al., Plant Physiology, 2003.

Control

Lnea 11

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Lneas transgnicas de lamo (Lnea 11), mostrando mayor altura y crecimiento en dimetro que el fenotipo salvaje.

Plantas wild type y mutantes stumpy crecidas bajo las mismas condiciones. La planta stumpy se muestra del lado izquierdo y la wild type a la derecha.

Modificacin de la forma, el tamao y el crecimiento. Sntesis de giberelinas.


Hbridos de lamo 6 semanas.
De izquierda a derecha: lnea transgnica con el gen antisentido de GA 20-oxidasa, tipo silvestre y lnea transgnica que sobrexpresa el gen de GA 20-oxidasa

Fenotipo de lamo hbrido transformado con el gen phyA de cebada.


Tomado de http://www.upsc.nu/Default.asp?pageid=720&path=756%2C760%2C766

Cisgenia
Es un tipo de ingeniera gentica que es conceptualmente similar al mejoramiento tradicional. Usa genes de la misma especie o de especies relacionadas que son sexualmente compatibles. Ej. Sobre expresin y supresin de genes de giberelinas de lamo.

Comparison of GA20ox7 transformed plants (left group) to the empty vector controls (right group) after six w. The transgenic plants had an average stem volume that was increased by 40% compared with the controls. Oregon State University

Gou, J., S.H. Strauss, C.J. Tsai, F. Kai, Y. Chen, X. Jiang and V.B. Busov. 2010. Gibberellins regulate lateral root formation in Populus through interactions with auxin and other hormones. Plant Cell 22:623-639.

Reduccin del tiempo generacional y la floracin

Induccin de floracin temprana y esterilidad


- Debido a la maduracin tarda de las especies forestales, la floracin precoz se considera un objetivo importante en la mejora gentica de rboles. - Es interesante obtener rboles estriles que redirijan el gasto energtico dedicado a la floracin hacia la produccin de madera y que no permitan la diseminacin de polen.

Alamo
Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal
Tomado de: www.salk.edu/LABS/ pbio-w/gallery.html Tomado de: bioenergy.ornl.gov/ gallery/terc/terc2.html

Induccin de floracin precoz en lamo transgnico 35S::LFY (flor masculina)

Expresin tejido-especfca del gen uidA en lamo transgnico

La expresin del gen APETALA1 de Arabidopsis en plantas de citrus reduce el tiempo generacional

Acortamiento de la fase juvenil

Las plantas de 8 meses muestran caractersticas de plantas adultas, incluyendo floracin.


Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Pea et al. Nature Biotechnology, 2001.

La expresin del gen LEAFY de Arabidopsis en plantas de lamo reduce el tiempo generacional

Acortamiento de la fase juvenil

Las plantas de 6 meses muestran caractersticas de plantas adultas, incluyendo floracin.

Alamo modificado con el gen LEAFY de Arabidopsis. Los brotes se transforman en flores.

Floracin temprana
Construccin: gen BpMADS4 de abeto, el gen Leafy de Arabidopsis, rolD de Agrobacteirum y un gen, XX. La promocin de la habilidad de floracin por el gen rolC fue significativamente mejorada con el uso del gen Leafy y un gen XX (conf). Los lamos transgnicos florecieron luego dos a doce meses, demostrando la estimulacin de la floracin comparados con los tres a cuatros aos que toman los lamos transformados solo con el gen rolC y los 8 aos que toman los lamos no transformados.

Flor masculina en un lamo con floracin temprana modificado genticamente con el gen Leafy

Flores masculinas simples en lamo transgnico de floracin temprana

Induccin de esterilidad.
La introduccin de genes de esterilidad BpMADS1::Barnase y 35S::Leafy permiti la obtencin de plantas femeninas (2002). Se obtuvieron plantas con androesterilidad y floracin temprana. Muchas de estas lineas GM han florecido in vitro.
Flor femenina en un lamo transgnico modificado con el gen Leafy

Transgnico

NO Transgnico

Anteras de lamo GM que no

Modificaciones en la sntesis de lignina


Existe enorme inters en desarrollar rboles que acumulen menos lignina y/o lignina ms fcilmente extrable.
- Muchas de las demandas de fibra, compuestos qumicos y energa se satisfacen con el procesamiento de la madera a escala industrial. - El xilema secundario (del cual se deriva la pulpa) se compone de celulosa, lignina y hemicelulosa en una proporcin aproximada de 2:1:1. - La lignina es un problema en los procesos basados en la obtencin de celulosa y debe ser separada de la misma con un alto costo energtico, qumico y ambiental.

Diagramas de la composicin qumica de la madera y de la estructura de la lignina, celulosa y hemicelulosa.

Lignina

La ruta de sntesis de la lignina ha sido estudiada en gran detalle


PAL: fenilalanina amonio-liasa C4H: cinamato 4-hidroxilasa C3H: 4-hydroxicinamato 3-hidroxilasa COMT: cido cafeico 3-O-metiltransferasa F5H: ferulato 5-hidroxilasa 4CL: 4-cumarato:CoA ligasa CCoA-3H: cumaril-coenzima A 3-hidroxilasa CCoA-OMT: cafeil-coenzima A O-metiltransferasa CCR: cinamil-CoA reductasa CAD: cinamil alcohol dehidrogenasa

Ruta de biosntesis de la lignina

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Represin de la sntesis de lignina mediante un gen antisentido de C4L

Transformacin de Populus tremuloides con una construccin antisentido de la 4-cumarato:CoA ligasa

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Tomado de: Hu et al.,`Nature Biotechnology,1999

Aumento del crecimiento en lamos transgnicos


A: Plantas control de 10 semanas y transgnicas crecidas en invernadero (regla = 25 cm). B y C: Microscopa electrnica de cortes transversales de tallos control (B) y transgnico(C). D: Estaca enraizada ex vitro de 2 semanas de plantas control y transgnicas A5 y A6. E: Superficie foliar en plantas control y transgnicas.

Transformacin de lamos con genes antisentido de la cinamil alcohol dehidrogenasa y cafeato O-metiltransferasa

Alamos transformados con CAD mostrando tejido de coloracin rojiza

Tomado de: www.nf-2000.org/secure/Fair/s343.htm

- Se inhibi la expresin de las enzimas CAD y COMT mediante construcciones antisentido dirigidas por un promotor constitutivo. Se transformaron lamos con estas construcciones. Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

- Los niveles de lignina no fueron alterados por el gen anti-COMT pero fueron levemente reducidos por el gen anti-CAD. - Los lneas COMT nuestran considerables alteraciones de la estructura de la lignina, dificultando el proceso de pulpado Kraft. - La alteracin producida por CAD permite que la lignina sea ms fcil de extraer en el proceso de pulpado Kraft.

Modelos de estructuras tridimensionales de la lignina obtenida en lamos transgnicos y control

Lignina de aserrn de madera de lamo wild-type

Lignina de aserrn de madera de lamo deficiente en la enzima COMT

Pruebas de campo con rboles transgnicos

Ensayos agronmicos de lamos modificados con genes antisentido CAD o COMT

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

D
Tomado de: Pilate et al., Nature Biotechnology, 2002.

A: Ensayo en Ardon, Francia. B: Fotografa area del ensayo en Jealott's Hill, Reino Unido. C: Troncos descortezados del tipo silvestre cosechados a los 4 aos. D: Troncos descortezados del lamo transgnico ASCAD21

Plantaciones bioenergticas
The production of biomass as an energy crop can be optimized through breeding and genetic modification

Hacia la produccion de lignina ms degradable. August 2008 - August 2011 , Wout Boerjan, Department of Plant Systems Biology, Flanders Institute for Biotechnology (VIB), Ghent University

Alamos transgnicos para bioenerga Arboles que producen menos lignina producen ms celulosa , para producir etanol

Tolerancia a herbicidas (lamos transgnicos tolerantes a glifosato y glufosinato de amonio)


Pruebas de campo Ensayos de tolerancia in vitro
PV-LEGT02 Control

Glifosato 1 mg/L
Tomado de: www.fsl.orst.edu/tgerc/glyproj.htm

Los rboles transgnicos son primero ensayados por su tolerancia a glifosato en condiciones de laboratorio y luego se prueban en plantaciones a campo.

Alamos resistentes a insectos transformados con el gen cry3A

Ensayos confinados de resistencia a insectos


Daos en hbridos de lamo control (derecha) y transgnico (izquierda) expresando el gen cry3A, expuestos a larvas del coleptero Chrysometa scripta en pruebas de invernadero.
Tomado de: www.fsl.orst.edu/tgerc/btproj.htm

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Resistencia a hongos

El desarrollo de rboles resistentes a enfenrmedades fngicas puede ser alcanzado a travs de la incorporacin de genes que codifican productos con actividad antifngica. Inconvenientes:

La resistencia a hongos es un carcter determinado por mltiples genes. Se necesitan un gran nmero de genes para transferir y que se expresen coordinadamente. Muchas especies de hongos rpidamente desarrollan sistemas de detoxificacin contra los componentes antifngicos que sintetiza la planta.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Avances: Expresin de enzimas hidrolticas (quitinasas y B-1,3glucanasas). Degradan los polisacaridos de la pared. Populus resistente a Septoria musiva (Dixon, 2001). Expresan la enzima Oxalato oxidasa (Oox) de trigo. No se alcanz la resistencia completa, pero los sntomas de la enfermedad se reducen.

La tolerancia a estreses abiticos es uno de los mayores desafos de la biotecnologa forestal

Eucalyptus GM con tolerancia a sal en invernadero

Eucalyptus GM con tolerancia a sal a campo

- Tolerancia a ozono: se transformaron lamos que sobrexpresan el gen de la enzima glutation sintetasa, Las plantas transgnicas resultaron menos sensibles altos niveles de ozono que las plantas control. Tolerancia a sal: se introdujo el gen de colina oxidasa de Arthrobacter globiformis((codA) en Eucalyptus camaldulensis. Las plantas transgnicas fueron ms tolerantes a estrs salino que las testigo.(Japn. Akira KIKUCHI -Tolerancia a sequa: se utiliz el gen que codifica el factor de transcripcin DREB1A que acta en mecanismos de respuesta a estrs para transformar eucaliptus. Las plantas transgnicas mostraron mayor nivel de tolerancia a sequa. - Tolerancia a fro: eucalyptus con factor de transcripcin.

Fitorremediacin mediante rboles transgnicos


Transformacin de Liriodendron tulipifera y Populus deltoides con genes bacterianos merA para la remediacin de suelos contaminados con Hg2+

wild type merA merA

Liriodendron tulipifera
- Las plntas transgnicas crecen vigorosamente en medios que contienen niveles txicos de Hg2+. - Las plantas transgnicas absorben 10 veces ms Hg2+ que las plantas no transformadas.

Populus deltoides
- Las plantas transgnicas cultivadas en un medio con 25 M Cl2Hg muestran un crecimiento normal, mientras las plantas control mueren.
Tomado de: www.forestry.UGA.edu//merkle/merklecont.html

Fitorremediacin mediante rboles transgnicos ALAMO TRANSGENICO QUE REMUEVE BENCENO DEL AIRE Y TRICLOROETILENO DEL AGUA. UNIVERSITY OF WASHINGTON

ScienceDaily (Jan. 15, 2008) Purdue University en colaboracin con Chrysler LLC

Se introdujo el citocromo P450 2E1, una enzima que degrada varios contaminantes en el higado humano y de otros mamferos. Las estacas de rboles modificados, colocadas en agua con TCE absorbieron el contaminante 53 veces ms rpido que los wild type y removieron 51 a 91% del mismo. Los lamos GM degradan el TCE 121 veces mejor que los lamos control.

Arboles transgnicos con mayor crecimiento vegetativo.


Alamos transgnicos que expresan la glutamina sintetasa citosolica de pino Presentan un mayor capacidad de asimilacin de amonio y sntesis de glutamina debido a la sobreproduccion de glutamina sintetasa en el citosol en tejidos fotosintticos, que confiere a los arboles un mayor contenido en protena y clorofila en las hojas, y un mayor crecimiento vegetativo que los arboles controles. United States
Patent 6911576-1999

GM para estudios bsicos sobre bioseguridad


Oregon State University. Alamos GM. Estudios de movimiento de polen para reducir los riesgos de la liberacin de rboles GM al ambiente.
Reversin al genotipo silvestre de lamos transgnicos que expresan el gen rolC

ESTABILIDAD DEL TRANSGEN


lamos transgnicos que expresan el gen rolC (izquierda y centro) y control (derecha)

Arboles transgnicos en el mundo

1988: Primera prueba a campo oficial con lamos transgnicos en Blgica. China es el primer pas en reportar plantaciones comerciales de lamos transgnicos resistentes a insectos.

Bt CrylA gene (Bacillus thuringiensis) transgenic poplar (Populus nigra L.) and CpTI (Cowpea trypsin inhibitor) transgenic poplar ((P. tomentosaP. bolleana)P. Tomentosa)

Test planting with Bt poplars and conventional poplars in mixed cultivation, China

Deliberate release of genetically modified treesin the USA. (Feb 2010) Source: ISB Information systems for biotechnology

Pruebas a campo de rboles GM en USA. (Feb 2010)


Source: ISB Information systems for biotechnology

Poplar

190

Pine
Eucalyptus Apple

150
71 57

ArborGen vende unas 250 millones de plntulas micropropagadas al ao. Es la primera y nica empresa con rboles GM en proceso de desregulacin en USA. Eucalyptus GM
Tolerante a fro factor de transcripcin CBF (C-Repeat Binding Factor) que regula la expresin de varios genes que confieren resistencia al fro. Un promotor inducible por estrs. Andro esterilidad en una sp modelo de floracin temprana ( E. occidentalis ), barnase gene 100 % de eficacia en prevenir la formacin de polen. Alteracin del contenido de lignina: los genes CBF y barnase fueron introducidos junto a un gen que altera la sintesis de lignina.

USDA Approves Field Testing of ArborGen Freeze Tolerant Eucalyptus Today, the U.S. Department of Agriculture's Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS) announced the approval of two ArborGen permit applications for planting and growing genetically engineered (GE) eucalyptus trees. cold tolerance. http://www.aphis.usda.gov/biotechnology/fr_notices.shtml.

Modificaciones gentica por regiones del mundo y por gnero vegetal

Prospectiva Forestal
Productos Transgnicos
Pino radiata resistente a insectos u hongos eucaliptus globulus resistente al frio rboles con mayor capacidad de captura de CO2 eucalipto con menor contenido de lignina eucalipto resistente a la sequa eucalipto de zonas ridas con mayor potencial de celulosa eucalipto globulus resistentes a herbicidas alerce de rpido crecimiento pino radiata con lignina tipo siringil pino tolerante al frio rboles estriles

Prospectiva Forestal
Productos Trangnicos
Cerezo resistente a plagas y enfermedades pino tolerante a sequa pino y eucalipto tolerante a la salinidad pino radiata resistente al Silex noctilio

Riesgos asociados con la transformacin gentica de rboles

Riesgos
- Impacto en la biodiversidad. Flujo gnico. - Largo perodo de adaptacin. - Herencia y estabilidad del transgn.

Anlisis de riesgos
- Controlar el flujo gnico tanto en poblaciones naturales como en plantaciones hbridas, para predecir las consecuencias de un posible traspaso de genes desde las plantaciones genticamente modificadas. - Evaluar si la introduccin de esterilidad por ingeniera gentica es importante para la liberacin de rboles transgnicos. - Establecer hacia qu tipo de ambientes y qu tipo de rboles transgnicos habra que dirigir los esfuerzos para reducir el flujo gentico.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal

Principales tcnicas biotecnolgicas en aplicacin


Micropropagacin y multiplicacin UNLP, UNAM, Biofbrica; UNNE, UNSL, UNF, UNJujuy, UNSalta, UNSE, CIEFAP, INTA INTA-UBA-UNComahue

Caracterizacin de recursos genticos para domesticacin y conservacin mediante marcadores moleculares Manejo asistido de poblaciones de mejoramiento Mapeo gentico, caracterizacin QTL Variabilidad genes candidatos (estrs abitico, calidad madera: densidad, lignina)

INTA

INTA INTA UBA UNSE

Transformacin gentica

INTA, UNLP

Priorizaciones:
Estrs abitico, situacin
Argentina 2.8 millones de km2 El 75% semirido
Aproximadamente 60 millones de hectreas estn sometidas a procesos erosivos en la Argentina Cada ao se suman unas 650.000 hectreas a los procesos de erosin

TEMAS

Escenario de cambio climtico

TEMAS Priorizaciones
Estrs abitico (sequa, salinidad, temperaturas extremas)
Sequa Salinidad Fro influyen crecimiento y desarrollo Limitan la productividad en reas cultivadas Dao celular por deshidratacin Objetivos a largo plazo: Contar con rboles con caractersticas mejoradas y resistentes a estrs abitico. En el caso de especies cultivadas, extender las regiones productivas a zonas marginales Combatir la desertificacin recuperando suelos degradados, reduciendo la salinidad y mejorando la fertilidad Proteger la biodiversidad utilizando especies nativas

Estrs abitico
Objetivos inmediatos:
Identificar genes/mutaciones relevantes en la adaptacin (anlisis de la diversidad adaptativa en nativas y cultivadas, deteccin mutantes/biotipos)

Estudiar mecanismos de adaptacin de las especies nativas a los distintos requerimientos ambientales de estrs.
Estudiar factores genticos involucrados en los procesos de tolerancia a sequa y monitorear la variabilidad presente en los genes candidatos para estrs hdrico/salino.

Estrs abitico: nativas y cultivadas


Existen forestales nativas con alto potencial adaptativo, que se desarrollan en zonas marginales donde la caracterstica adaptativa de inters es la respuesta al estrs hdrico Pueden ocupar nichos que no se superponen con la produccin forestal de especies exticas de alto rendimiento

Posibilitan la restauracin de ecosistemas degradados por la explotacin forestal extractiva brindando alternativa productiva combinados con la actividad agrcola o ganadera.
Diseo, exploracin de Ensayos para deteccin genotipos con tolerancia al estrs cultivadas (cmaras, sitios, etc)

Priorizaciones
Caracterizacin, genotipificacin y estudios de diversidad La diversidad gentica constituye la base de la potencialidad evolutiva y del mejoramiento gentico de las especies. Cambio climtico implica acciones de monitoreo, ordenacin y rescate. Objetivos: Desarrollo y ajuste, definicin de grupos de marcadores neutros para genotipificacin/diversidad (cultivadas y nativas) Conocer la variabilidad de poblaciones de mejoramiento introducidas y nativas de inters para Manejo asistido de la diversidad. (Variabilidad neutra y/o funcional). Determinar unidades de conservacin en el ordenamiento territorial

Caracterizacin, genotipificacin y estudios de diversidad


Objetivos especficos:

Definir poblaciones y ensayos para estudiar diversidad (cultivadas, nativas) y estudios ecofisiolgicos
Explotar la variabilidad gentica que hay en los genomas

Definir genes para estudiar diversidad funcional

Priorizaciones
Calidad de madera (densidad, lignina, etc) Es necesario incorporar estas propiedades en los actuales programas de mejoramiento Objetivo: Detectar genes/variantes allicas que participen en la calidad de madera. Mapeo de asociacin, QTL, genmica funcional, etc.

Calidad de madera
Objetivos:
Definir genes y ESTs para evaluar variabilidad Definir y evaluar caractersticas de madera en poblaciones selectas para mapeo de asociacin y/o generar poblaciones controladas para mapeo de QTLs

Propuesta
Variabilidad funcional para estrs y calidad de madera desarrollando metodologas de multiplicacin in vitro para rplicas de ensayos biolgicos (Ensayo de genes candidatos/mapeo de asociacin)

CONCLUSIONES La biotecnologa puede contribuir a resolver varios de los problemas que se presentan en el sector forestal
El desarrollo de los mtodos de cultivo de tejidos y de ingeniera gentica, y el conocimiento de las rutas metablicas incrementan las posibilidades de mejorar rboles. Los mtodos de micropropagacin favorecen el desarrollo de la silvicultura clonal, lo que contribuye al incremento de la superficie forestada y a la mitigacin del efecto invernadero. La combinacin de las tcnicas moleculares y de gentica clsica permiten acortar los tiempos de los programas de mejoramiento. Los marcadores moleculares y el cultivo de tejidos son herramientas fundamentales en los programas de conservacin y caracterizacin de germoplasma forestal. Proporciona las bases para el establecimiento de bancos de germoplasma, los cuales constituyen un excelente recurso para concretar la idea de un desarrollo sustentable, donde se plantea mantener la estabilidad de las condiciones fsicas de un rea, reservar la biodiversidad, reducir la degradacin ambiental y mantener la productividad agrcola. Limitaciones:

- Poco conocimiento del control gentico de muchos caracteres - Aspectos de bioseguridad e impacto ambiental - Costos relativos (financieros, sociales, polticos o ambientales) - Necesidad de largos perodos de tiempo

C.E.Pro.Ve
Banco

de Germoplasma de Especies Forestales Nativas de la Prov. de Buenos Aires. UNLP - Sec. de Poltica Ambiental

Propagacin

vegetativa de especies forestales, frutales, aromticas y medicinales. UNLP - Ministerio de Educacin de la Nacin
Incremento

de la variabilidad genetica de Melia sp utilizando biotecnicas. CICPBA

Transforamcin

gentica de clones de Populus sp. CEProVe, FCAyF.

Ubicacin: Latitud 36 S / Longitud 57 30' W

Sistemas de propagacin
Semillas

Macropropagacin

Micropropagacin

Organognesis adventicia

Acacia caven (Mol.) Mol. (espinillo) Erythrina crista-galli L. (seibo) Parkinsonia aculeata L. (cina-cina) Celtis tala Gill. ex Planch. (tala) Scutia buxifolia Reiss. (coronillo) Jodinia rombifolia (sombra de toro) Sesbania punicea (Cav) Benth. Ceasalpinia gilliesii Gleditsia amorphoides. Taubert. Tessaria sp. Terminalia sp.

Embriognesis Somtica de Acacia caven

Identificar y evaluar mecanismos de propagacin de productos forestales no maderables

Medicinales Ornamentales Restauracin de ecosistemas Melferas

Captulo 5: Aplicacin de la biotecnologa en la mejora y conservacin de especies forestales. Susana Marcucci Poltri, Leonardo Gallo, Noga Zelener, Susana Torales, Sandra Sharry

http://intainforma.inta.gov.ar/?cat=346

Referencias

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Campbell, M., Brunner, A., Jones, H. and Strauss, S. Forestrys fertile crescent: the application of biotechnology to forest trees. Plant Biotechnology Journal, 1:141-154, 2003 Giri, C., Shyamkumar, B. and Anjaneyulu, C. Progress in tissue culture, genetic transformation and applications of biotechnology to trees: an overview. Trees Structure and Function, 18:115-135, 2004. Glaubitz, J.C. and Moran, G.F. Genetic tools: the use of biochemical and molecular markers. In: Forest Conservation Genetics: Principles and Practice Young, A., Boshier, D. and Boyle, T. (eds.). pp 39-59. CSIRO Publishing, 2000. Pea L. and Seguin A. Recent advances in the genetic transformation of trees. Trends in Biotechnology,19:500-506, 2001. Tzfira, T., Zuker, A. and Altman, A. Forest tree biotechnology: genetic transformation and application to future forests. Trends in Biotechnology, 16:439-446, 1998.
www.forestbiotech.org

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5. 6.

7.

Agrobiotecnologa
Biotecnologa forestal