MICROBIOLOGA DE AGUA CONCEPTOS BSICOS Mara C.

Apella-Paula Araujo
CERELA - CONICET - UNT- CNEA

El agua es apta para consumo humano si est exenta de microorganismos patgenos

ENTRICOS PARASITARIOS VIRUS

MICROBIOLOGA
Estudia seres microscpico vivientes de tamao

clulas aisladas o asociadas

no celulares

virus

MICROBIOLOGA
ORGANISMOS PROCARIOTAS
Bacterias Archaeas

ORGANISMOS EUCARIOTAS

Hongos

Protozoarios

Algas

VIRUS

MICROBIOLOGA
TIPO DE CLULAS

Eucariotas Procariotas

Clula Eucariota

pili flagelo

nucleoide

ribosomas

Clula Procariota

membrana citoplasmtica

pared celular

cpsula

MORFOLOGA BACTERIANA
TAMAO

MORFOLOGA BACTERIANA
FORMA

Cocos

MORFOLOGA BACTERIANA
FORMA

Bacilos

MORFOLOGA BACTERIANA
FORMA

Espirilos
Espiral rgido

MORFOLOGA BACTERIANA
FORMA Espiroquetas
Espiral flexible y ondulado

MORFOLOGA BACTERIANA
FORMA

Filamentosas

MORFOLOGA BACTERIANA
AGRUPACIONES BACTERIANAS

Divisin a lo largo del mismo plano cocos solos

Divisin a lo largo de 2 planos diferentes

Divisin a lo largo de 3 planos

2 cocos juntos
DIPLOCOCOS

4 - 20 en cadenas
ESTREPTOCOCOS TTRADAS

regularmente
SARCINAS

irregularmente
ESTAFILOCOCOS

MORFOLOGA BACTERIANA
AGRUPACIONES BACTERIANAS

(diplococos en forma de anillos)

Neisseria gonorrhoeae

Streptococcus pneumoniae
(cadenas)

Estafilococcus aureus
(par de ttradas)

Staphylococcus aureus
(racimos)

MORFOLOGA BACTERIANA
AGRUPACIONES BACTERIANAS

Empalizadas, bacilos Bacilos solos Dos bacilos juntos Cadenas de bacilos lado con lado o en figuras en X, V o Y

MORFOLOGA BACTERIANA
APNDICES SUPERFICIALES Flagelos
rganos de locomocin tienen diferente tamao se observan generalmente en bacilos y raramente en cocos

MORFOLOGA BACTERIANA
APNDICES SUPERFICIALES Flagelos Distribucin
Monopolar (monotrica) Monopolar (politrica)

bipolar (anfitrica)

peritrica

MORFOLOGA BACTERIANA
APNDICES SUPERFICIALES Pili o fimbrias
son cortos, finos y rgidos (cabellos)
Algunas bacterias flagelos como pili poseen tanto

Algunas muestran un pili sexual (participa en la conjugacin: transferencia de genes) y pilis convencionales

MORFOLOGA BACTERIANA
ENDOSPORAS

son resistentes a agentes fsicos (calor, desecacin, radiacin) y qumicos se eliminan slo por esterilizacin son formadas por bacilos como Bacillus y Clostridium su volumen es igual a 1/10 parte de la bacteria que la origina

PARED CELULAR Y TINCIN DE GRAM DE BACTERIAS PARED CELULAR

est constituida de peptidoglicano, murena, que determina la forma caracterstica y confiere proteccin mecnica a la bacteria es permeable y elstica est ausente en Mycoplasma y formas L derivadas de bacterias que perdidieron habilidad para sintetizarla
Mycoplasma pneumoniae

PARED CELULAR

Bacteria Gram Positiva

Bacteria Gram Negativa

EXAMEN MICROSCPICA DE LA TINCIN DE GRAM

Bacteria Gram positiva

Bacteria Gram negativa

CRECIMIENTO MICROBIANO
Es el aumento ordenado de todos los componentes qumicos que llevan a un incremento de los constituyentes y estructuras celulares, a la divisin celular y al crecimiento de la poblacin es necesario la disponiblidad de agua nutrientes biosintticos o anabolismo energticos o catabolismo

PRINCIPALES GRUPOS NUTRICIONALES

Tipos Nutricionales Fotoauttrofos Fotohetertrofos Fuente de Energa Luz Luz Fuente de Carbono CO2 CO CO2 CO Ejemplos
Cianobacterias, algunas bacterias verdes y prpuras Algunas bacterias verdes y prpuras Pocas bacterias y muchas arquibacterias Mayora de las bacterias y algunas arquibacterias

Quimioauttrofos CI H2 , NH3 , NO2 , H2 S o Littrofos Quimiohetertrofos CO o Hetertrofos

CRECIMIENTO MICROBIANO MEDIOS DE CULTIVOS

Son ambientes artificiales diseados por el hombre para proporcionar todas las sustancias necesarias para el crecimiento microbiano

Clasificacin segn composicin qumica

Sintticos o definidos Complejos o indefinidos

CRECIMIENTO MICROBIANO Fisin binaria

20 21 22

23

2n

Es exponencial

CRECIMIENTO MICROBIANO
TIEMPO DE GENERACIN O TIEMPO DE DUPLICACIN

es el intervalo de tiempo requerido para que una poblacin se duplique

g= t x 3,3log xo

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO es el nmero de generaciones que ocurren en un tiempo t x

3,3log xo k= t

CRECIMIENTO MICROBIANO CURVA DE CRECIMIENTO

exponencial
lag

estacionaria

muerte

log x

dx/dt=kx

dx/dt=0 tiempo

dx/dt=-kx

CRECIMIENTO MICROBIANO MTODOS DE DETERMINACIN

Vivas y Muertas Recuento en cmara Recuento indirecto en portaobjetos Contador automtico de partculas Nefelometra Recuento en medio slido Filtracin sobre membrana Determinacin de peso seco Estimacin de protenas Turbidimetra Acumulacin de metabolito Consumo de un nutriente

DETERMINACIN DEL NMERO DE CLULAS DETERMINACIN DE LA MASA CELULAR

Vivas Directos Indirectos

CRECIMIENTO MICROBIANO EFECTO DE FACTORES FISICOQUMICOS

temperatura pH biodisponibilidad de agua presin osmtica disponibilidad de O2 tensin superficial radiaciones

TEMPERATURA Velocidad crecimiento

Reacciones enzimticas con mxima velocidad Reacciones enzimticas con velocidad creciente

ptima

Mnima

Mxima

TEMPERATURAS CARDINALES

Temperatura
Membrana y citoplasma pierden fluidez; proceso de transporte lento que impide el crecimiento Desnaturalizacin proteica; colapso de la membrana; lisis trmica

CRECIMIENTO MICROBIANO EFECTO DE FACTORES FISICOQUMICOS Temperatura tasa de muerte trmica o punto de muerte trmica es la menor temperatura que mata a toda la poblacin microbiana en 10 min

CLASIFICACIN DE LOS MICROORGANIMOS SEGN LA TEMPERATURA DE CRECIMIENTO

Termfilo facultativo
Velocidad crecimiento

Termfilo estricto

Termfilo extremo

Temperatura (C)

EFECTO DE FACTORES FISICOQUMICOS pH

cido acidfilos extremos acidfilos

neutrfilos

alcalfilos Alcalfilos extremos

bsico

EFECTO DE FACTORES FISICOQUMICOS pH

existe un rango de pH en el cual existe crecimiento y un pH ptimo valores superiores o inferiores al rango de pH en el cual existe crecimiento son nocivos afectan la estabilidad de la membrana plasmtica, inhiben enzimas y alteran el transporte de nutrientes efecto nocivo indirecto por ionizacin de algunos nutrientes inhibe el transporte pasivo efecto nocivo directo por acidificacin o alcalinizacin protenas cidos nucleicos

EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES

Disponibilidad de O2

aerobios obligados requieren O2 (respiracin aerbica)

Psedomonas

anaerobios aerotolerantes no requieren y no crecen mejor con O2 (fermentacin)

Enterococcus

anaerobios obligados O2 txico (respiracin anaerbica o fermentacin)

Clostridium

aerobios facultativos crecen mejor con O2 (respiracin aerbica y anaerbica,fermentacin) Enterobacterias

Microaerfilos requieren O2 (< atmosfrica) (respiracin aerbica)

MICROORGANISMOS PRESENTES EN AGUAS NATURALES

CLULAS EUCARIOTAS

Algas Protozoarios

CLULAS PROCARIOTAS VIRUS

Bacterias

ALGAS
contienen clorofila son aerobias

Chlorophyta
familias

Cyanophyta Chrysophita (Aulococeira y Cyclotella.)

PROTOZOARIOS

Giardia lamblia
es flagelado mide 15 m se transmite a travs de agua contaminada con materia fecal sus clulas producen quistes giardiasis Criptosporidiosis

Cryptosporidium parvum

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Pseudomonas
comunes en napas freticas bacilos psicrfilos presentan flagelos pertricos

usan diversas fuentes de carbono bajos requerimientos nutricionales

producen pigmentos (verde, azul verdoso, rojo, marrn) no forman esporas

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Pseudomonas

morfologa y nicho ecolgico coincide con bacterias entricas, se diferencian por ser de metabolismo respiratorio sanitaria

Pseudomonas aeruginosa es la de mayor relevancia

resistente al cloro es un indicador de eficiencia de la cloracin

patgeno oportunista por excelencia

Enterobacteriaceae

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

son las ms importantes de los anaerobios facultativos habitan naturalmente el intestino de los animales
su presencia en agua est asociada a contaminacin fecal

son bacilos no esporulados

no mviles y si lo son es por flagelos de insercin pertrica requerimientos nutricionales relativamente simples patgenos humanos

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Enterobacteriaceae
Klebsiella Escherichia coli

Shigella

Sal. typhimurium

Sal. typhi

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Vibrio
bacilos curvados poseen flagelos polares, algunos pertricos anaerobios facultativos presentes en aguas dulces o marinas
especie ms representativa patgeno para humanos responsable del clera transmisin casi exclusivamente por va hdrica

Vibrio cholerae

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

No son un grupo muy difundido en agua Incluye algunos patgenos humanos aislados especialmente de aguas subterrneas

Micrococcus y Staphylococcus
aerobios y tolerantes a altas concentraciones salinas

Streptococcus Ent. faecalis

habita normalmente en el intestino de hombres y animales es un indicador complementario de contaminacin fecal de aguas

BACTERIAS GRAM POSITIVAS Bacterias esporulantes

Bacillus

aerbicas presentes en suelos y acuferos aerbicos

Bacillus anthracis
anaerbicas

antrax

Clostridium

se encuentra en la ltima porcin de tracto intestinal de animales presente en suelos, sedimentos, aguas subterrneas anaerbicas

Clostridium tetani

ttano

VIRUS
El 87% de las enfermedades virales de transmisin hdrica son causadas por el virus de la hepatitis

Adenovirus

Rotavirus

BACTERIAS INDICADORAS DE CALIDAD DE AGUA

Requisitos
fciles de aislar y crecer en el laboratorio relativamente inocuas para el hombre y animales presencia cuali y cuantitativamente se relacione con la de otros microorganismos patgenos de difcil aislamiento

BACTERIAS INDICADORAS DE CALIDAD DE AGUA

Coliformes fecales
Indican contaminacin fecal

Aerobias mesfilas
Determinan efectividad del tratamiento

Pseudomonas
sealan deterioro en la calidad o recontaminacin

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Coliformes
habitan el tracto intestinal de mamferos y aves fermentan lactosa a 35C

Gneros
Escherichia Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter , Edwardsiella

COLIFORMES TOTALES Incluye a coliformes de cualquier origen Indicadoras de contaminacin sin asegurar su origen COLIFORMES FECALES Incluye a coliformes de origen exclusivamente intestinal con capacidad de fermentar lactosa tambin a 44,5 C Indicadoras de contaminacin de origen intestinal

E. coli es el indicador universal

ENTEROCOCOS FECALES que desarrollan a 35C son indicadores complementarios de contaminacin fecal

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Validez de todo examen bacteriolgico

recipiente de boca ancha Toma de muestra apropiada estril metodologa precisa refrigerado tiempo corto

Transporte y conservacin de la muestra

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Anlisis cuantitativo
Recuento indirecto (Tcnica de los Tubos Mltiples) basado en clculos estadsticos siembra de diluciones seriadas de la muestra en medios de cultivos lquidos especficos se consideran nmeros de cultivos positivos y negativos los resultados se expresan como NMP de microorganismos

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Anlisis cuantitativo
Recuento directo de microorganismos cultivables siembra de la muestra sobre o en un medio de cultivo selectivo agarizado la muestra se concentra por filtracin sobre membrana Tcnica de la Membrana Filtrante

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Anlisis cuantitativo
Tcnica de la Membrana Filtrante se filtra un Vm (100 mL) a travs de membranas de steres de celulosa de 0,45 m la membrana se deposita sobre un medio de cultivo selectivo se cuentan, despus de incubacin, el nmero de colonias desarrolladas sobre la membrana se determina el nmero de UFC por unidad de volumen

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Anlisis cuantitativo
Tcnica de la Membrana Filtrante evitar la filtracin de aguas con alto contenido de material en suspensin el nmero de colonias desarrolladas sobre la membrana debe ser inferior a un determinado valor (80 y 100)

Medios de cultivo, temperaturas y tiempos de incubacin, y color de las colonias de algunas bacterias indicadores de contaminacin
MEDIO DE CULTIVO Endo FC KF EC Cetrimida TEMPERATURA Y TIEMPO DE INCUBACIN 35C; 24 h 44,5C; 24 h 35C; 48 h 44,5C; 24 h 37C; 72 h COLOR DE LAS COLONIAS Rojo con brillo metlico en superficie Matices de azul Marrn Blanco crema Verde

MICROORGANISMOS Coliformes totales Coliformes fecales

Ent. faecalis E. coli P. aeruginosa

BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN

Anlisis cuantitativo
Tcnica de hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) utilizando sondas marcadas en base a secuencia nucleotdica del gen 16S.

MICROBIOLOGA DE AGUA CONCEPTOS BSICOS Mara C. Apella-Paula Araujo

MUCHAS GRACIAS !!!!