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Lucija Leskovek, Marijana Jake, Borut Bohanec

Plant Cell Tiss Organ Cult (2008) 93: 181-189

Apresentado por: Lus Carlos Vieira

Eruca sativa (sinonmia: Eruca vesicaria ssp.sativa) (arugula, roquette, rocket, rauke, rucola, rcula) Brassicaceae/Cruciferae. 2n = 22 Origem : Centro e Sul da Europa
Regio do Mediterraneo (Marrocos e Portugal, at Oeste da Jordania e Turquia)

cido ercico um cido graxo omega-9 monoinsaturado Uso industrial amplo CANOLA x HEAR

Enzimas (humanos) - crianas

Perspectivas de mercado: Famlia Brassicas: maioria hbridos > vigor, uniformidade e propriedade intelectual Poucas cultivares de poliniz. aberta registradas

Desenvolvimento de linhagens 1 passo p/ produo de hbridos > duplos haplides Estudos genticos > menor n de plantas necessrias que populao segregante F2 Estudos de mutao, mapeamento gnico e genmicos

Cultura de antera ou microsporo comum em Brassicas, em espcies que j tem protocolos disponveis

Vrios fatores influenciam sucesso da tcnica

o o

Estgio de desenvolvimento do micrsporo Condies de crescimento


(luz/escuro 20/15 ou 15/10 C)

o
o o o

Tratamento trmico
(>30 C por 24-72 horas)

Pr tratamento com frio Adio de carvo ativado ao meio de cultura Colchicina

Estabelecer um protocolo eficiente para induo de embriognese haplide em rcula, usando cultura de microsporo, determinar tratamentos para tima converso de embrio, e analisar a ploidia dos regenerantes

Lotes de sementes de 4 cultivares empresas Botes florais coletados 2 semanas aps inicio da florao (4-5mm)

Exame da desenvolvim. do microsporo (DAPI), e da viabilidade (MTT)


Desinfeco Teste de adio de carvo ativado (absoro de compostos prejudiciais )

Cutura dos microsporos Culturas mantidas em escuro at converso dos embries Choque de calor 32 C (24 ou 48h), depois mantidas em 24 C, aps 10 dias centrifugadas

Converso de embries Aps 3-4 semanas de cultura > embries de 48 mm expostos aos tratamentos (protocolos p/ brassicas) ABA Dessecao (24 C, 0-3 semanas)

Embries pr-tratados ou no, colocados em meio B5 (sacarose, agar, pH 5,8, 24 C 16 h fotoperiodo)

Embries convertidos c/ 2-3 folhas transferidos para potes c/ mesmo meio Plantulas c/ 4-5 folhas transferidas para casa de vegetao climatizada

Ploidia determinada por citometria de fluxo

Botes florais c/ 4-5 mm fase uninucleada tardia, ou binucleada precoce (Tabela 1) Viabilidade: mais de 80% (Fig. 1 a)

Desenvolvimento inicial de microsporos visiveis 4-7 dias de cultura


Alguns microsporos inchados div. gametofiticas, outros menos inchados div. cel. esporofiticas (clusters muticelulares c/ 4-12 nucleos) (Fig 1 b)

Embries globulares visiveis 12-15 dias de cultura (Fig 1 c) Embries bem desenvolvidos (visiveis a olho nu) aps 14-21 dias (Fig 1 d)

Avaliao produo de embries haplides:


Muitos experimentos c/ sucesso (Fig 2 a)

Porm muita inconsistncia, muita variao dentro de tratamentos e entre experimentos (Tab 2) Variao devida (provavelmente) heterogeinidade do material (plantas da mesma cultivar) (Tab 3)

Adio de carvo no 2 ano de testes > recuperou nveis de embriogenese do 1 ano Neste trabalho avaliaram dois fatores: carvo ativado e tratamento de calor/frio (tab 4) Nenhum embrio se desenvolveu no meio sem carvo ativado ( tab 5)

Converso de embries em plantas:


Adio de ABA em 4 concentraes (0, 1 , 3, 5 mg/l), por 1, 2 , 3 semanas (Tab 6)

Baixa converso pode ter sido causada por hiperdratao dos tecidos, ou excessiva embriogenia secundria

Nvel de ploidia: Determinado em 489 plantulas (Tab 7) 65,6% diplodes 29,8% haplides 2,0 % triploides 2,5% tetraploides

Variabilidade do material vegetal leva alta variabilidade nos resultados > Linhas endogmicas p/ minimizar efeito genotpico duplo haplide

Adio de carvo ativado contribuiu positivamente

Protocolo baseado uso de ABA teve efeito detrimental e alta mortalidade dos embries Tratamento com calor foi eficiente (24 h a 32 C mais eficiente que 48 h)

Necessidade de estudos adicionais: - c/ suplementao do meio com clcio e


vitaminas p/ melhorar converso de embries - Suplementao do meio com polietileno glicol p/ induo do embrio

Diploides regenerantes: seriam duplos haploides ou derivados de microsporos 2n ??

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