PRÁCTICA DE LABORATORIO Nº 15 AISLAMIENTO Y CUANTIFICACION DEL GLUCÓGENO HEPÁTICO OBJETIVO Determinar y cuantificar los niveles de glucógeno hepático de los

pollos durante los estados de ayuno y con dieta balanceada (normal). MARCO TEORICO

El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los animales, se encuentra en proporción mayor en el hígado (hasta 6%) y en el músculo, donde rara vez excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el músculo almacena tres a cuatro veces la cantidad de glucógeno que tiene el hígado como reserva. Al igual que el almidón, es un polímero ramificado de alfaglucosa . el glucógeno es un polisacárido de la D-glucosa con enlaces alfa 1-4, sin embargo, está más ramificado, y su molécula es más reducida que la amilopectina; las ramificaciones aparecen cada 8 a 12 residuos de glucosa. El glucógeno puede aislarse de los tejidos animales digiriéndolos con disoluciones calientes de KOH en las que los enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa 1-6 son estables. (5)
El peso molecular del glucógeno varia ampliamente según el grado de ramificación, y el tamaño global. En promedio se encuentra entre 2 y 5 millones. FUNDAMENTO El tejido hepático en presencia de una hidrólisis alcalina destruye a las proteínas y el glucógeno queda intacto. El glucógeno es precipitado por su baja solubilidad con el alcohol, luego se resuspende el glucógeno y se cuantifica expresado en mg de glucosa por gramo de tejido hepático (previa hidrólisis ácida con ácido sulfúrico). El Ácido Sulfúrico del reactivo Antrona hidroliza al glucógeno en unidades de glucosa, la cual es convertida en hidroximetil furfural por el mismo ácido y reacciona con antrona para dar un compuesto coloreado.

Reactivo de antrona en acido sulfúrico

0 g de cada hígado picar finamente. y llevar a Baño de agua hirviente hasta hidrólisis de los tejidos durante 30 minutos Enfriar a chorro de agua fría y agregar 7 mL de etanol absoluto refrigerado para precipitar Centrifugar a 3.000 r. uno en ayunas y otro en estado normal de alimentación. fotocolorímetro Hígado de dos pollos(uno de pollo con alimentación normal y otro sometido a ayuno durante 24 horas) Solución de hidróxido de Potasio (KOH) 30% Alcohol Etílico (CH3CH2 OH) 95 % Estandar de Glucosa 5 mg /100mL Reactivo Antrona 0. trasvasar a un homogenizador con 4 mL de solución de hidróxido de potasio al 30%. centrifuga.5 a 1. por 10 minutos Decantar el sobrenadante y disolver el residuo (glucógeno) con 100 ml de agua destilada .2% en Ácido Sulfúrico (H2SO4 ) concentrado PROCEDIMIENTO Se toman dos pollos. y se le extrae el hígado rápidamente y se coloca en baño de hielo. Se les sacrifica.m. pipetas.p. Separar y pesar 0.MATERIALES  Tubos de ensayo.

Realizar los cálculos correspondientes.50 0. antrona (ml) 4. Mezclar rápidamente. de tal manera que el chorro caiga en el centro del tubo.50 1.00 4.00 4. colocar los tubos en baño de agua hirviendo durante 10 minutos.00 1.50 4.50 Agua destilada (ml) 2.00 4.00 1.50 Patrón de glucosa (ml) 0.50 1.00 6 estándar 1.50 1.00 El reactivo de antrona debe añadirse rápidamente. . enfriar y Leer la absorbancia a 620 nm en el fotocolorímetro.Un pollo en ayunas y un pollo comido    Disponer 6 tubos de ensayo y proceder de acuerdo al siguiente cuadro 1 blanco 2 ayunas 3 alimenta 4 estándar Glucógeno ais (ml) 0.50 Rect.00 5 estándar 1.50 4.

4485*5.3999 Sabemos que se usara el estándar 4 porque contiene la misma concentración que el tubo de los pollos en estudio Glucosa mg/dl = Abs.050mg de glucosa el estándar 5 5mg existen →100ml Entonces X →1.025mg de glucosa el estándar 4 5mg existen →100ml Entonces X →1.4440 :101mg/dl .3740 0. Estándar g = P*F seria =0.Calculos.2696 0.5ml X=0.0ml X=0.075mg de glucosa el estándar 6 Leer la absorbancia a 620 nm en el fotocolorímetro Tubos de muestra Pollo en ayunas Pollo que comió Estándar 4 Estándar 5 Estándar 6 absorvancias 0. Desconocido * 5mg/dl Abs.5ml X=0.0mg/dl = 0.2514 0.3630 0. Determínanos las concentraciones de glucosa en los tubos estándar Sabemos que un decilitro es 1dl= 100ml 5mg existen →100ml Entonces X →0.

38 0.05 0.08 y = 0.355 0 0.04 0.075 0.06 0.39 0.4 0.3421 Series1 Linear (Series1) .3999 Absorbancias Vs concentraciones de glucosa mg/ml 0.36 0.02 0.37 0.405 0.contraciones absorbancia 0.365 0.03462 0.2696 0.738x + 0.375 0.374 0.385 0.363 0.025 0.395 0.03713 0.2514 0.

. Que función cumple el glucógeno en el organismo 5. Escriba las estructuras química del almidón y del glucógeno. 3. autor. capítulo y página). Compárelos los valores obtenidos con los valores normales que indica en la referencia (Indique: el título. Calcule de la concentración de glucógeno en cada uno de las experiencias (hígado del pollo con alimentación normal y en ayunas) y expréselos en mg de glucosa / g de tejido hepático. edición. 4. 2.CUESTIONARIO 1. KOH 30% en la experiencia. Mediante que reacción química se puede diferenciar el almidón de glucógeno.

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