TECNOLOSA DEL DNA RECOMINANTE

INTRODUCCIN
Principio I970 DMA moIecuIo mos difciI onoIi;or
Enormemenfe Iorgo
Qumicomenfe monofono
AcfuoImenfe DMA moIecuIo mos fociI de esfudior
Es posibIe seporor regiones deferminodos deI DMA
ObfenerIos en confidodes procficomenfe iIimifodos
Deferminor su secuencio de nucIeofidos o uno
veIocidod de vorios cienfos de nucIeofidos oI do.
Un gen puede ser oIferodo y fronsferido o ceIuIos
en cuIfivo o o Io Ineo germinoI de onimoIes
Impocfo en Io bioIogo ceIuIor
Deferminor Ios funciones de muchos profenos
De sus dominios
Desenmoroor compIejos meconismos de reguIocion
genico en eucoriofos
Disponer de grondes confidodes de profenos
minoriforios
A niveI comercioI: produccion o gron escoIo de hormonos
pepfdicos y vocunos o bojo cosfe y frobojo
Etupus principuIes deI desurroIIo de Iu
tecnoIogu deI DNA Recombinunte
Nirenberg Ochou y khorunu diIucidoron eI codigo genefico I9oo
AIber proporciono Io primero evidencio de Io exisfencio de Ios
nucIeosos de resfriccion deI DMA, que condujo o su posferior
purificocion y ufiIi;ocion en Io corocferi;ocion de Io secuencio deI
DMA por porfe de Nuthuns y H, Smith
I9oZ
SeIIer descubrio Io DMA Iigoso, Io en;imo ufiIi;odo poro unir
frogmenfos de DMA.
I9o7
Se desorroIIoron Ios fecnicos de cIonoje deI DMA en Ios
Ioboroforios de oyer Cohen erg y coIoborodores, en Io
Universidod de Sfonford y en Io Universidod de CoIifornio en Son
Froncisco.
I97Z-I973
Southern desorroIIo Io hibridocion y fronsferencio sobre geI,
poro Io defeccion de secuencios especficos de DMA
I97b
Sunger y urreII y Muum y SiIbert desorroIIoron mefodos
ropidos de secuenciocion deI DMA
I97b-I977
PuImiter y rinster produjeron un rofon fronsgenico, SprudIing
y Rubin produjeron moscos deI vinogre fronsgenicos.
I98I- I98Z
Miescher oisIo por primero ve; eI DMA
MuIIis y coIoborodores invenforon Io reoccion en codeno de Io
poIimeroso (PCP, de PIomerose Choin Peocfion)
I98b
Murmur y Doty descubrieron Io renofuroIi;ocion deI DMA,
esfobIeciendo Io especificidod y Io posibiIidod de Ios reocciones
de hibridocion de Ios ocidos nucIeicos.
I9oI
kornberg descubrio Io DMA poIimeroso I, Io en;imo que ohoro se
ufiIi;o poro producir sondos de DMA morcodos
I9b7
Wutson y Crick propusieron eI modeIo de Io dobIe heIice poro Io
esfrucfuro deI DMA, bosodos en Ios resuIfodos de royos X de
FrunkIin y WiIkins,
I9b3
Avery demosfro que eI DMA y no Io profeno confiene Io
informocion genefico
I944
I8o9
TecnoIogu deI DNA Recombinunte
Se pueden oIferor secuencios de DMA produciendo
versiones modificodos de Ios genes, Ios cuoIes se
pueden reinserfor en ceIuIos u orgonismos.
Ingenieru gnicu
Se puede conseguir que un frogmenfo de DMA se
infegre en un eIemenfo genico ouforepIiconfe
(pIosmidos, virus) que hobifo en uno bocferio, de foI
monero que de uno moIecuIo de DMA puede ser
reproducido generondo muchos miIes de miIIones de
copios idenficos.
CIonucin deI DNA
Hoce posibIe IocoIi;or secuencios deferminodos de
DMA o de PMA, con uno gron exocfifud y
sensibiIidod, ufiIi;ondo Io copocidod que fienen esfos
moIecuIos de unirse o secuencios compIemenforios de
ofros ocidos nucIeicos.
Hibriducin de Ios
cidos nucIeicos
Lo secuenciocion ropido de fodos Ios nucIeofidos de
un frogmenfo purificodo de DMA, hoce posibIe
deferminor Ios Imifes precisos de un gen y Io
secuencio de ominoocidos que codifico.
Secuenciucin
Pofuro especfico deI DMA, fociIifo enormemenfe eI
oisIomienfo y Io monipuIocion de Ios genes individuoIes
UtiIizucin de
nucIeusus de
restriccin
Tecnicos ufiIi;odos
EndonucIeusus de restriccin
Los genes no son enfidodes independienfes
Pegiones de uno moIecuIo de DMA de gron fomoo
Frogmenfocion meconico oI o;or
Tro;os pequeos
Un frogmenfo que confengo un gen oisIodo sero
uno enfre cienfos de miIes
SoIucion: endonucIeusus de restriccin
W. Arber, H. Smifh y D. Mofhons finoIes o0
8isfures de exquisifo presicion
Peconocen secuencios especficos en eI DMA de
dobIe heIice
Corfon ombos heIices en Iugores concrefos
Procedencio
Enconfrodos en gron voriedod de procoriofos
Funcion bioIogico desfruir moIecuIos de DMA exfroos
Los cenfros reconocibIes propios esfon mefiIodos
Peconocen secuencios especficos de 4-8 pores de boses
PoIndromo
PoIobro o frose que se Iee iguoI de i;quierdo o derecho,
que de derecho o i;quierdo:Podor, oniIino, DoboIe orro; o
Io ;orro eI obod
Enzimus utiIizudos en Iu tecnoIogu deI DNA recombinunte
EIiminor fosfofos ferminoIes de
exfremos b' o 3', o de ombos
Fosfofoso oIcoIino
EIiminor nucIeofidos deI exfremo b' de
un dpIex poro exponer Ios exfremos
3' monohebro
ExonucIeoso deI bocferiofogo
EIiminor residuos nucIeofdicos deI
exfremo 3' de uno hebro de DMA
ExonucIeoso III
Aodir coIos homopoIimericos oI grupo
OH deI exfremo 3' de un dpIex IineoI
Tronsferoso ferminoI
Aodir un grupo fosfofo oI grupo OH
deI exfremo b' de un poIinucIeofido
poro morcorIo o poro permifirIe Io
Iigocion
PoIinucIeofido quinoso
Hocer uno copio de DMA o porfir de
uno moIecuIo de PMA
Tronscripfoso inverso
PeIIenor Ios huecos de DMA dpIex
medionfe odicion escoIonodo de
nucIeofidos en eI exfremo 3'
DMA poIimeroso I
(E. CoIi)
Unir dos moIecuIos o frogmenfos DMA Iigoso
Pomper DMA por secuencios
especficos
EndonucIeoso de resfriccion deI fipo
II
Funcion En;imo(s)
Mos de 90 en;imos de resfriccion purificodos y corocferi;odos
Mombre obreviofuro fres Iefros que se refiere oI orgonismo,
seguido de un nmero romono
EcoPI Escherichio coIi
HindIII HoemophiIus infIuen;oe
HoeIII HoemophiIus oegypfius
Frogmenfos de resfriccion Frogmenfos de DMA generodos
por uno deferminodo en;imo de resfriccion
Mopo de resfriccion
Trofomienfo de uno moIecuIo de DMA con diferenfes
nucIeosos de resfriccion
Comporondo Ios fomoos de Ios frogmenfos de
resfriccion de uno region deferminodo
PefIejo Io disposicion de secuencios de nucIeofidos
especficos
Secuencius de reconocimiento puru uIgunus endonucIeusus de
restriccin tipo II
FIechos: enIoces fosfodiesfer hidroIi;odos por codo endonucIeoso
de resfriccion.
Asferiscos:Ios boses que esfon mefiIodos por Io correspondienfe
mefiIoso (si se conoce).
M represenfo cuoIquier bose.
EndonucIeusus de restriccin tipo II
Cortun eI DNA en
secuencius de buses
puIindrmicus
Roturu de moIcuIus de DNA en frugmentos reproducibIes
mediunte endonucIeusus de restriccin
DNA cromosmico
Sifio de
rofuro
Sifio de
rofuro
Secuencio de
reconocimienfo
Exfremos cohesivos
Exfremos romos
Vecfor de
cIonocion
pIosmdico
corfodo
con EcoPI y
PvuII
Los en;imos de resfriccion soIo reconocen y corfon secuencios
especficos.
0eneron exfremos cohesivos (con monocodenos) o exfremos romos.
Lo rofuro deI DMA produce uno serie corocfersfico de frogmenfos, y
esfos se pueden Iigor o ofros DMA, como eI vecfor de cIonocion corfodo
(pIosmido).
Lo reoccion de Iigocion esfo fociIifodo por eI oporeomienfo de exfremos
cohesivos compIemenforios, y Ios frogmenfos de DMA con exfremos
choesivos diferenfes (no compIemenforios) no sueIen Iigorse.
PoIiconector
PoIiconector sinttico
Vecfor de cIonocion
pIosmdico corfodo con
EcoPI
Conector Frogmenfo de DMA sinfefico que confiene Io secuencio de
reconocimienfo poro uno endonucIeoso de resfriccion.
PoIiconector Frogmenfo sinfefico que confiene secuencios dionos
poro vorios endonucIeosos de resfriccion.
Sepurucin de DNA de diferentes tumuos
EIecfroforesis en geI
PoIiocriIomido frogmenfos menores de b00 pb
DiIuciones diIuidos ogoroso
EIecfroforesis en geI de compo puIsonfe
VisuoIi;ocion
CoIoronfe bromuro de efidio
Morcoje rodiocfivo (
3Z
P) onfes de eIecfroforesis
Frogmenfos de
DMA grondes
Frogmenfos de
DMA pequeos
Tincin con bromuro de etidio
que emite fIuorescenciu cuundo
se iIuminu con Iuz uItruvioIetu
Secuenciucin deI DNA
Deferminocion de Io secuencio exocfo de un ocido nucIeico
A. Moxom y W. 0iIber Por hidroIisis qumico especfico
Hebro de DMA morcodo en eI exfremo b' con
3Z
P
b'-
3Z
P-0CTAC0TA-3'
Rupturu en A:
3Z
P-SCT
3Z
P-SCTACST
Rupturu en S:
3Z
P-SCTAC
Rupturu en C:
3Z
P-S
3Z
P-SCTA
Rupturu en T:
3Z
P-SC
3Z
P-SCTACS
Auforodiogromo muesfro un conjunfo de bondos sobre
eI cuoI se puede Iee direcfomenfe Io secuencio
Mefodo deI didesoxi de Songer Por inferrupcion confroIodo de Io
repIicocion
Se copio uno secuencio de DMA de uno hebro ufiIi;ondo Io
DMA poIimeroso I
Cebodor compIemenforio
Medio confiene
Los cuofro desoxirribonucIeofidos frifosfofo
(morcodos)
Los onoIogos Z',3'-didesoxi corecen deI grupo
hidroxiIo en 3' no se formo enIoce fosfodiesfer
Frogmenfos disfinfo Iongifud con onoIogos didesoxi
exfremo 3'
Secuenciucin DNA mtodo Sunger
Hebru
cebudoru
Hebru
moIde
Cebodor
MoIde
Auforodiogromo deI
geI de eIecfroforesis
Secuencio de Io
hebro
compIemenforio
Tcnicus de Ius hueIIus de DNA
{DNA footprinting}
Hibriducin de cidos nucIeicos
Northern y Southern
Especie I
Me;cIo y
enfriomienfo
Especie Z
DpIex hbrido
DpIex de Io
Especie I
DpIex de Io
Especie Z
I. Acidos nucIeicos seporodos de ocuerdo
con su fomoo, medionfe eIecfroforesis
en geI de ogoroso
Z. Acidos nucIeicos fronsferidos o un
popeI de nifroceIuIoso por succion deI
fompon o froves deI geI y deI popeI
3. Membrono con Ios oc. MucIeicos
hibridodos con Io sondo morcodo
4. PeveIodo medionfe mefodos de
defeccion especficos deI morcoje
PMA o DMA
Morcodores de
fomoo
0eI de
ogoroso

CIonucin de DNA
Cromosomu
eucuritico
Vector de
cIonucin
{pIsmido}
Roturu con
endonucIeusu
de restriccin
Roturu con endonucIeusu
de restriccin sepurucin
de Ios frugmentos
Vector
recombinunte
Trunsformucin
de Iu cIuIu
bucteriunu husped
Propugucin ceIuIur
Tipos de vectores de cIonucin utiIizudos en E,coIi
Hosfo
4b.000 pb
PepIicocion o modo
de pIosmido
CuoIquiero de Ios
mefodos onferiores,
dependiendo deI
fomoo deI frogmenfo
deI DMA inserfodo, Ios
frogmenfos Iorgos
necesifon eI
empoquefomienfo en
in vifro
Cosmidos,
consfruidos o
porfir de Ios
pIosmidos y de
genes de
Hosfo
Z3.000 pb
PepIicocion deI fogo
Infeccion con fogos,
posferior oI
empoquefomienfo in
vifro deI vecfor
recombinonfe en
porfcuIos de fogo
8ocferiofogo
Hosfo
Ib.000 pb
PepIicocion deI
pIosmido
Tronsformocion, Ios
ceIuIos se vueIven
compefenfes poro
incorporor eI pIosmido
recombinonfe, uno ve;
fronsformodos, Ios
ceIuIos se seIeccionon
medionfe un morcodor
seIeccionobIe
PIosmidos:
modificodos por
fecnicos de
DMA
recombinonfe
Tomoo
deI
frogmenfo
de DMA
que se
puede
cIonor
Mefodo de
propogocion
Mefodo de
infroduccion en
E.coIi
Tipo de
vecfor
PIsmidos MoIecuIos de DMA circuIor que se repIicon oporfe deI
cromosomo bocferiono
Tomoo enfre b.000 y 400.000 pores de bose
Trunsformucin Proceso por eI cuoI se infroduce un pIosmido en Io
ceIuIo bocferiono.
Incubocion ceIuIos y pIosmidos o 0"C en soIucion de
CI
Z
Co.
Choque fermico (37-4b"C)
PImido seIeccionubIe PIosmido que confengo un gen que Io ceIuIo
huesped necesife poro crecer bojo cierfos condiciones.
EI gen es generoImenfe eI de resisfencio o un onfibiofico SoIo
oqueIIos ceIuIos que hoyon sido fronsformodos por eI pIosmido seron
resisfenfes oI onfibiofico y podro crecer en presencio deI mismo.
Cuructersticus importuntes de un vector de cIonucin pIusmdico
Mecesifo un origen de repIicocion propogor eI pIosmido
y monfenerIo o niveI de I0 o Z0 copios por ceIuIo.
0enes que confiere resisfencio o onfibioficos permife
Io seIeccion
Vorios secuencios nicos de reconocimienfos poro
diferenfes endonucIeosos de resfriccio n generor sifios
por donde se puede inserfor Ios secuencios foroneos de
DMA
Tomoo gIoboI pequeo fociIifo Io enfrodo deI pIosmido
en Io ceIuIo
AIgunos sifios de resfriccion imporfonfes
0enes de resisfencio o onfibioficos
EI origen de repIicocion (ori).
PIsmido pR3ZZ
Pesisfencio o
Io ompiciIino
(omp
P
)
Origen
de repIicocion
(ori)
Pesisfencio o
Io fefrociIino
(fef
P
)
CIonucin de un DNA forneo en E, coIi con pR3ZZ
DMA foroneo
Tronsformocion de
ceIuIos de E. coIi
SeIeccion de Ios ceIuIos
fronsfromodos
Agor supIemenfodo
con fefrocicIino
Todos Ios coIinios
que con fienen
pIosmidos
CoIinios con
pIosmidos
recombinonfes
CoIinios fronsferidos
poro eI ensoyo
Agor supIemenfodo
con fefrocicIino
Agor supIemenfodo con
fefrocicIino y ompiciIino
ucterifugo
Permife cIonor segmenfos de DMA mos Iorgos
Corocferficos deI genomo deI fogo:
AIrededor de un fercio deI genomo no es
esencioI permife reempIo;orIo por DMA
foroneo.
EI DMA se empoquefo en porfcuIos de fogo soIo
cuondo fengo un fomoo enfre 40.000 y b0.000
pores de bose.
Empuquetumiento in vitro Cuondo Ios frogmenfos de DMA
foroneo de fomoo odecuodose hon Iigodo o Ios frogmenfos deI
fogo DMA recombinonfe se empoquefo denfro de porfcuIo de
fogo oI oodir exfrofo crudo de ceIuIos bocferionos( que confienen
fodos Ios profenos necesorios poro ensombIor un fogo compIefo)
Csmidos PIosmidos recombinonfes que combinon corocfersficos
fiIes de pIosmidos y deI bocferiofogo .
Permife Io cIonocion de frogmenfos mos Iorgos
MoIecuIos de DMA pequeos (b.000 o 7.000 pb)
Corocfersficos:
Origen de repIicocion pIosmdico
Uno o mos morcodores seIeccionobIes
Un nmero de sifios de resfriccion nicos donde se
puede inserfor eI DMA foroneo
Un sifio cos Uno secuencio de DMA deI bocferiofogo
que se necesifo poro eI empoquefomienfo.
Mo confienen ningn gen mos deI bocferiofogo
Se propogo en E. coIi como un pIosmido
Vectores de cIonucin deI bucterifugo
DMA de reIIeno (no necesorio
en eI empoquefomienfo)
Frogmenfo de
DMA foroneo
Hon perdido DMA esencioI
y/o son demosiodo corfos y
no se empoquefon
Empoquefomienfo
in vifro
8ocferiofogo que
confiene DMA foroneo
CIonucin con csmidos
0ron frogmenfo
de DMA foroneo
con exfremos
cohesivos
Cosmido
recombinonfe
SeIeccion de Ios ceIuIos
resisfenfes o cIoronfenicoI
Agor confeniendo cIoronfenicoI
y subsfrofo poro -
goIocfosidoso
CoIonios con cosmidos
recombinonfes (bIoncos)
Libreru de DNA Uno coIeccion de Ios frogmenfos derivodos deI
genomo de un orgonismo deferminodo inserfodo, uno por uno, en un
vecfor de cIonocion.
Pofuro deI DMA purificodo deI vecfor con uno en;imo de
resfriccion.
DMA genomico o cIonor se reduce o frogmenfos de fomoo
opropiodo por uno en;imo de resfriccion (Io mismo que eI
vecfor).
Seporocion de frogmenfos (cenfrifugocion isopcnico)
Me;cIo de frogmenfos con eI vecfor Iineori;odo y Iigocion.
Tronsformocion de ceIuIos bocferionos o empoquefomienfo
en porfcuIos de fogo.
ResuItudo gron pobIocion de bocferio o fogos, siendo codo
uno de eIIos porfodor de uno moIecuIo de DMA diferenfe.
Libreru genmicu Procficomenfe fodo eI DMA genomico
esforo represenfodo en Io Iibrero.
Libreru de cDNA Librero de DMA mos especioIi;odo, soIo
incIuye oqueIIos genes que esfon siendo expresodos en un orgonismo
deferminodo e incIuso cierfos fejidos o ceIuIos.
Se exfroe mPMA fofoI deI orgonismo
Se produce DNA compIementurio (cDMA) medionfe Io
fronscripfoso inverso.
Los frogmenfos de dobIe hebro se inserfon en un vecfor
odecuodo y se cIonon.
Libreru de cDNA
EI mPMA moIde se hibrido o un
cebodor (oIigo dT) sinfefico
Lo fronscripfoso inverso y Ios dMTP
producen Io codeno compIemenforio
Se degrodo eI mPMA
con oIcoIi
DMA poIimeroso I y dMTP
don DMA de dobIe codeno
Identificucin de un cIon con eI frugmento de DNA deseudo
Se presiono con un popeI
de nifroceIuIoso sobre Io
pIoco de ogor
EI frofomienfo con oIcoIi rompe Ios
ceIuIos y expone eI DMA
desnofuroIi;odoco de ogor
Sondo de DMA morcodo rodiocfivomenfe
Incubocion deI popeI con Io sondo
rodiocfivo y posferior Iovodo
Exposicion
deI popeI o
Io peIcuIo
de royos X
PIoco de ogor con coIonios de
bocferios fronsformodos
PopeI de nifroceIuIoso
DMA unido oI popeI
Sondo hibridodo con Ios
coIonios de inferes
AmpIificucin de unu secuenciu de DNA especficu
Peoccion en codeno de Io poIimeroso (PCP)
Cebudores: Snfesis de dos oIigonucIeofidos
compIemenforios o uno uno secuencio corfo de uno codeno
deI segmenfo de DMA deseodo.
DesnofuroIi;ocion deI segmenfo deseodo seporocion
de Ios dos codenos por coIenfomienfo (9b"C)
Enfrior, oodir Ios cebodores hibridon
Aodir DMA poIimeroso resisfenfe oI coIor ToqI
Aodir Ios cuofro desoxinucIeofidos frifosfofos
repIicocion seIecfivo deI segmenfo de DMA cebodo.
Pepeficion deI proceso Zb o 30 cicIos ompIificocion
deI segmenfo.
Suficienfemenfe sensibIe poro defecfor incIuso uno nico moIecuIo
de DMA de cosi cuoIquier muesfro.
CIonor frogmenfos de DMA de momios
Pesfos de onimoIes exfinguidos como eI momuf Ionudo
Herromienfo en Io medicino forense
Defeccion de infecciones vricos onfes de que cousen
snfomos
Diognosfico prenofoI de enfermedodes genefico
AmpIificucin de un frugmento de DNA mediunte PCR
Pegion de DMA o
ompIificor
Despues de Zb cicIos Io secuencio diono
se ho ompIificodo uno I0
o
veces
CoIenfor poro seporor Ios codenos
Enfrior, oodir Ios cebodores
oIigonucIeofidos sinfeficos
Aodir Io DMA poIimeroso
fermoesfobIe poro cofoIi;or Io
snfesis de DMA en direccion b'3'
Pepefir Ios posos y
Lo snfesis de DMA (poso ) esfo
cofoIi;oso por Io poIimeroso
fermoesfobIe (fodovo presenfe)
Pepefir desde Ios
posos o
Nuevu urmu puru Iu medicinu forense
TrodicionoImenfe fomo de hueIIos docfiIores
Ahoro HueIIo docfiIor deI DMA o regisfro o perfiI deI DMA
PoIimorfismo de secuencius pequeos diferencios secuencioIes
que se do enfre individuos uno ve; codo pocos cienfos de pores de
boses de promedio.
PoIimorfismo en eI tumuo de Ios frugmentos de restriccin o
RFLP AIgunos combios de secuencios ofecfon o dionos de
resfriccion originon diferencios en Ios fomoos de cierfos
frogmenfos de DMA digeridos con un en;imo de resfriccion, en
individuos disfinfos.
Defeccion de PFLP por Southern bIotting
Los secuencios de DMA genomico usodos en esfe fesf son
regiones que confienen DMA repefifivo, comunes en Ios genomos
de eucoriofos.
EI nmero de unidodes de repeficion voro de un individuo o ofro
(excepfo en gemeIos idenficos)
Usondo uno sondo opropiodo bondos disfinfos poro codo
individuo ensoyodo. Usondo vorios sondos fesf seIecfivo,
pudiendo indenfificor un individuo enfre fodo uno pobIocion.
Mecesifo muesfro fresco de DMA y moyor confidod de DMA deI
que hoy en Io esceno deI crimen.
Aumenfor Io sensibiIidod ocopIodo o Io PCP.
HueIIos docfiIores de DMA de:
Un peIo
Pequeo muesfro de semen
Muesfros de un mes e incIuso oos
UfiIidod en consfruir pruebos decisivos en fribunoIes de fodo eI
mundo
Mtodo dde trunsferenciu Southern upIicudo u Iu
determinucin de Iu hueIIu ductiIur de DNA
DMA cromosomico
(p.ej. sospechoso I)
Pofuro con endonucIeosos
de resfriccion
Frogmenfos de DMA
Seporocion de Ios frogmenfos por
eIecfroforesis en geI de ogoroso
(sin morcor)
Sondo morcodo
rodiocfivomenfe
DesnofuroIi;or eI
DMA y fronsferir
o popeI de
nifroceIuIoso
Incubor con Io
sondo y posferior
Iovodo
Exponer eI popeI
o uno peIcuIo de
royos X
Productos de Iu tecnoIogu deI DNA recombinunte
Epresin de Ios genes cIonudos
AIterucin de Ios genes cIonudos Mutugnesis dirigidu
CIonucin en pIuntus mediudus por pursito bucteriuno
CIonucin en cIuIus unimuIes Terupiu gnicu
ImpIicuciones de estu tecnoIogu
Epresin de Ios genes cIonudos:
Fin de cIonor un gen es obfener su producfo.
Profenos de gron inferes poro proposifos comercioIes,
feropeuficos e invesfigocion.
Vectores de epresin Vecfores de cIonocion que confienen
Ios seoIes de fronscripcion y fronsduccion necesorios poro
reguIor Io expresion de un gen cIonodo.
Mutugnesis dirigidu:
AIferondo Io secuencio de DMA de un gen cIonodo codificonfe
poro uno profeno se puede combior Io esfrucfuro de Io mismo.
UfiIi;odo poro invesfigocion de esfrucfuro (pIegomienfo) y
funcion de profenos.
Uso comercioI fobricor profenos con ocfividod incremenfodo
o con funcionoIidod en ombienfes exfremos de oIfo femperofuro,
disoIvenfes orgonico o pH exfremos.
CIonucin en pIuntus mediudu por pursitos bucteriunos:
Enorme pofencioI en ogricuIfuro cosechos mos producfivos y
obundonfes, resisfenfes o pIogos de insecfos, enfermedodes, fro
y sequo.
Los pIonfos ferfiIes de oIgunos especies se generon o porfir de
uno nico ceIuIo fronsformodo eI gen infroducido se fronsfiere
o generociones sucesivos
DificuIfod Mo se ho enconfrodo un pIosmido nofuroI en
pIonfos
Agrobocferium fumefociens bocferio que invode o Io pIonfo
por Ios heridos
Productos de Iu tecnoIogu deI DNA recombinunte
CIonucin en cIuIus unimuIes Terupiu gnicu
Tronsformocion de ceIuIos onimoIes imporfoncio poro eI
ovonce deI conocimienfo esfrucfuro y funcion genomo onimoIes,
generocion de onimoIes con corocferes nuevos.
Mecesifo uno fuenfe de ceIuIos individuoIes cuIfivo ceIuIor.
Mefodos poro infroducir DMA en uno ceIuIo onimoI:
AsimiIucin espontneu Precipifocion deI DMA con
cIoruro de coIcio o eIectroporucin (converfir Ios ceIuIos
fronsiforiomenfe permeobIe oI DMA por exposicion o
breves puIsos de voIfoje.
Microinyeccin Inyeccion direcfo deI DMA en eI ncIeo
de Io ceIuIo con oyudo de uno ogujo muy fino.
Vectores vricos Virus eucorioficos modificodos
infegron o veces su DMA en eI cromosomo de Io ceIuIo
huesped.
ProbIemofico:
Insercion deI DMA foroneo en eI cromosomo en IocoIi;ociones
oI o;or.
Infegrocion perjudicioIes debido o que se producen en genes
esencioIes, rompiendo su mensoje.
Lo expresion de un gen infegrodo depende de Io posicion de
infegrocion Lo fronscripcion no es iguoI de efecfivo en
cuoIquier Iugor deI genomo.
EI fipo de ceIuIo o fronsformor:
Lneos germinoIes Lo oIferocion se propogo sucesivos
generociones
CeIuIos somoficos Lo oIferocion ofecforo nicomenfe oI
onimoI frofodo.
AnimuIes trunsgnicos Cuondo uno fronsformocion eficienfe, con
infegrocion cromosomico, medionfe microinyeccion de DMA se reoIi;o
en eI ncIeo de huevos de rofon ferfiIi;odos.
CIonucin en cIuIus de mumfero con vectores retrovricos
0enomo refroviroI (PMA monohebro)
Lo fronscripfoso inverso convierfe
eI genomo de PMA en DMA de dobIe
codeno
Los genes vricos se reempIo;on por
un gen foroneo
EI DMA recombinonfe se infroduce
en cuIfivos ceIuIores
Los copios de PMA de virus
recombinonfes se producen en
Ios ceIuIos que confienen un
virus coodyudonfe y se
empoquefon en porfcuIos
vricos
EI genomo refrovrico con eI
gen foroneo se infegro en eI
cromosomo de Io ceIuIo diono
Los porfcuIos vricos
recombinonfes infecfon uno
ceIuIo diono
Productos de Iu tecnoIogu deI DNA recombinunte
PIonfo de foboco que expreso eI
gen de Io Iuciferoso de Iuciernogo
PIonfos de fomofe monipuIodos
geneficomenfe poro ser
resisfenfes o oIgunos Iorvos de
insecfos
CIonocion en rofones. Pofon que se
Ie ho infroducido eI gen de Io
hormono de crecimienfo humono
Productos de Iu tecnoIogu deI DNA recombinunte
ImpIicuciones de estu tecnoIogu