PRACTICA DETERMINACION DE LA GLUCOSA EN SUERO TECNICA DE HULTMAN CON ORTOTOLUIDINA OBJETIVO: Construir la grfica de calibracin para glucosa en suero

y determinar Corella la concentracin de muestras problemas. TEORIA: La ORTOTOLUIDINA reacciona especficamente con las aldohexosas en solucin actica caliente para formar una mezcla en equilibrio de glicosilamina y la correspondiente base de Ziff. El color verde formado es proporcional a la cantidad de glucosa presente. MATERIAL Espectrofotmetro Balanza analtica 6 matraces de aforacin de 100 ml 6 tubos de ensaye de 16x150 mm (con tapn de rosca) 1 pipeta de 1 ml 1 bao mara REACTIVOS Ortotoluidina Solucin estndar de glucosa de 1 mg/ml Solucin de glucosa de 3mg/ml PROCEDIMIENTO 1. En un tubo de ensaye de 16x150 mm, aadir 0.1 ml de suero (problema), en otro tubo aadir 0.1 ml de agua destilada (blanco), y en otro aadir 0.1 ml de solucin patrn de glucosa 1 mg/ml (testigo) 2. Agregar 5 ml del reactivo de ortotoluidina a cada tubo y mezclar. 3. Tapar los tubos y colocarlos en bao de agua hirviendo durante 10 minutos (el nivel del agua en el bao, debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos). 4. Sacar los tubos y enfriarlos (con agua fra corriente). 5. Leer a una longitud de onda de 630 nanmetros. 6. Ajustar a 100% de transmitancia o 0 de absorbancia con el blanco de reactivos (el color es estable 20 minutos) 7. Determine la concentracin de glucosa utilizando la grfica de calibracin construida o por clculos. CURVA DE CALIBRACION # Tubo 1 2 3 4 5 Ml de solucin de glucosa 3mg/ml 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 Agua destilada 3.0 2.5 2.0 1.0 0.0 Miligramos en 100 ml 0.0 50.0 100.0 200.0 300.0

De cada una de estas diluciones tomar 0.1 ml y proseguir como se indica en la tcnica a partir del paso 2.

VALORES NORMALES DE GLUCOSA EN SANGRE. DE 70 A 100 mg en 100 ml de plasma

50

60

70

80

100

110

120

130

140

150

160

GLUCOSA (Mg/ml) CALCULOS: ABSORBANCIA DEL PROBLEMA ABSORBANCIA DEL TESTIGO X 100 = mg glucosa /100

NOTA:

ocasionalmente la mezcla del reactivo con el plasma problema puede enturbiarse debido al alto contenido de lpidos en la muestra. En este caso se agrega de una a dos gotas de alcohol insopropilico y se lee; si perdiste la turbiedad, repetir la prueba con un filtrado libre de protenas. Filtracin: tomar 0.2 ml. De la muestra y agregar 1.8 ml de acido tricloroacetico al 3 por ciento, dejarlo reposar de 5 a 10 min y filtrar. Tomar del filtrado 0.1 ml y proseguir como se indica en la tcnica tomando en consideracin la dilucin.