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Bioqumica heptica

(VII) Metabolismo heptico de xenobiticos.


Las reacciones hepticas de detoxificacin

Prof. J.V. Castell

Al ingerir alimentos, absorbemos muchos compuestos que no tienen valor nutritivo para nuestro organismo...

INGREDIENTES: Harina de trigo, Agua, Aceite Vegetal, Levadura, Azcar, Sal, Suero Lcteo, Emulgentes (E-471 y E-481), Conservantes (E-281 (EE(Ey E 202), Vinagre y Estabilizador (E-412). (E

INGREDIENTES: FLAN:AZUCAR, FECULA, ESTABILIZANTES Y ESPESANTES (E-410 E-407), E E- 407 SAL, VAINILLA Y COLORANTES ARTIFICIALES AUTORIZADOS (E-102 E-110). (EECARAMELO LIQUIDO: GLUCOSA LIQUIDA, AZUCAR Y CONSERVANTE (E-211) (E-

Algunos de los compuestos ingeridos, podran llegar a ser txicos si el organismo no los eliminase y se acumulasen en l... Lo mismo cabe decir de compuestos endgenos y exgenos administrados con fines teraputicos...

Algunos de los compuestos ingeridos, podran llegar a ser txicos si el organismo no los eliminase y se acumulasen en l...

ENDOBIOTICOS TOXICOS XENOBIOTICOS ATOXICOS TERAPEUTICOS

NUTRIENTES

Biotransformacinpor qu
RESPIRACIN RESPIRACI Voltiles XENOBIOTICOS Hidro-soluble ORINA HECES SUDOR BIOTRANSFORMACION Lipo-soluble? Lipo- soluble

Cmo se biotransforman los xenobiticos...

FASE I

XENOBIOTICOS

ELIMINACIN

FASE II

El metabolismo de xenobiticos por el hgado...


Xenobitico (RH) Xenobi
Fase I
Finalidad: aumentar la Finalidad: polaridad de las molculas, mol introduciendo nuevos grupos funcionales

ROH

Fase II

R-O-Conj

Finalidad: aumentar Finalidad: su solubilidad en agua, inactivacin de inactivaci su actividad biolgica biol

Eliminacin por la sangre / bilis Eliminaci

Reaccin de Fase I: reacciones en las que se introducen nuevos grupos Reacci I funcionales en la molcula aumentando su polaridad y reactividad

Reaccin de Fase II: Conjugacin con molculas endgenas de la clula, Reacci II por ej. cido glucornico, aumentando notablemente su solubilidad

Biotransformacin de xenobiticos Biotransformaci xenobi


Hidroxilacin Epoxidacin Desalquilacin Desaminacin S- y N-oxidacin

Fase I

o tin t es e l In Pi

Hgado

Pulmones Rin

Fase II

Glucuronidacin Glucosidacin Sulfatacin Metilacin Acetilacin Conjug. con GSH Conjug. con aminocidos
Vas de eliminacin de los metabolitos
Metabolitos
Retculo Ret endoplsmico endopl

Eliminacin Eliminaci
(detoxificacin)

Canalculo biliar Sinusoide

Frmaco

Por qu enzimas?
3. Enzimas microsomales extrahepticos extrahep
(P450, FMN monooxigenasas

1. Enzimas hepticos microsomales hep


(P450, FMN monooxigenasas)

2. Enzimas hepticos no-microsomales: hep noAlcohol/ aldehdo deshidrogenasa hidrolasas, aldeh reductasas (Fase I) (Fase I) Acetil transferasas, sulfato transferasas, GSH transferasas, glucoronil transferasas (Fase II) (Fase II)

Reacciones de biotransformacin de Fase I

P450 monooxigenasas

Peroxidasas Deshidrogenasas NADPH reductasas Esterasas

FMN oxigenasas

Tipos de reacciones catalizadas por el citocromo P450

Hidroxilacin aromtica

Hidroxilacin aliftica

N-Dealquilacin

O-Dealquilacin Deaminacin N-Oxidacin Sulfoxidacin

El citocromo P450
Hemoprotena. Absorbancia a 450 nm (forma Fe++) Una cadena de 35-45 KDa y grupo prosttico heme Asociado a otros componentes en la membrana del retculo endoplsmico Actividad monooxigenasa Baja especificidad de substrato

Hemoprotenas implicadas en reacciones de oxidacin Oxigenasas


O R + O2 RO2 O RH + O2 +DH2 R-OH + H2 O + D

Dioxigenasas Monooxigenasas

Oxidasas
RH2 + O2 R + H2O2 (2 ) 2 RH2 + O2 2 R + H2O (4 )

Peroxidasas
ROOH +2DH2 R-OH + 2 DH + H2O

Estequiometra de la actividad monooxigenasa del Citocromo P450

RH + NADPH + H+ + O2 R-OH + NADP+ + H2O

Origen de los electrones en la reacciones de oxidacin catalizadas por P450


dadores de
NAD(P)H P450 Reductasa FADH FMNH

O2
Xenobitico
(reducido)

P450
Xenobitico
(oxidado) oxidado)

Redoxina Fe/S

H2O

Reacciones catalizadas por el citocromo P450


dadores de
NAD(P)H P450 Reductasa FADH FMNH

O2
Xenobitico
(reducido)

P450
Xenobitico
(oxididado) oxididado)

Redoxina Fe/S

H2O

RH + NADPH + H+ + O2 R-OH + NADP+ + H2O

OH

Producto Fe3+ P450

Substrato

OH

Substrato

Fe3+ P450

Fe3+ P450

Substrato

e-

Substrato

(Fe3+O) (FeO) P450 P450

Mecanismo de la catlisis por el citocromo P450


H2O H
Substrato Fe2+OOH P450 Substrato

CitP450 Reductasa
Fe2+ P450 Substrato

O2

H+

H+

e-

Fe2+ O2 P450

Cit-b5

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Componentes del sistema P450


Citoplasma
NADPH
O2 H2O

e-

Citocromo P450 reductasa FMN FAD

Fe2+/Fe3+ P450

eCitocromo b5

Retculo endoplsmico
Citoplasma

R-OH

Nomenclatura del P450


Superfamilia de genes constituida por familias y subfamilias
FAMILIA: homologa del FAMILIA: homolog 40% aa

CYP 1 A 2

NUMERO del gen

SUBFAMILIA: homologa SUBFAMILIA: homolog del 55-60 % aa 55-

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Isoenzimas del Citocromo P450


Familias
1 2 3
4 5 7 8 11 17 19 21 24 27

Subfamilias
1A1 1B1

1A2

3A3 3A4 3A5 4A9 4B1 4F2 4F3 3A7 4A11

21A2 11A1 11B1 11B2

2A6 2B6 2C8 2D6 2E1 2F1 2A7 2C9 2C10 2C18 2C19

Abundancia relativa y variabilidad de los CYPs implicados en el metabolismo humanos de frmacos y xenobiticos
CYP 1A2 1B1 2A6 2B6 2C 2D6 2E1 3A4
2E

Abundancia
(% total)

Grado de variabilidad ~40-x ~30 - 100-x ~50-x 25-100-x >1000-x ~20-x ~20-x

~ 13 <1 ~4 <1 ~18 Hasta 2.5 Hasta 7 Hasta 28

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

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Los CYPs tambin se expresan en tejido extraheptico


CYP 1A1 1B1 2A6 2B6 2C 2D6 2E1 3A Tejido Pulmn, rin, intestino, piel, placenta Piel, rin, prstata, glndula mamaria Pulmn, epitelio nasal Intestino, pulmn Intestino delgado, laringe, pulmn Intestino Pulmn, placenta Intestino, pulmn, placenta, feto, utero, rin

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

Enzimas de Conjugacin
Glucoronidacin (UDP-GT)
1-naphtol morphine

Conjugacin con GSH (GSH-T)


GSH-T (subunidades 1 and 2) GSH-T (subunidades 3 and 4) GSH-T (subunidad 7)

Sulfotransferasas
Phenol ST (ST1A1) N-hydroxy acetaminofluorene (ST1C1), estrogen sulfotransferase (ST1E2) hydroxyesteroid sulfotransferases (ST 20-21, ST 40-41, ST 60)

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Reacciones de formacin y conjugacin del cido glucornico formaci conjugaci glucor

G1P + UTP UDP-G

UDP-G UDP-GA
COOH

Enzima: UGT 1A1

R-OH + UDP-GA R-O-GA OH O R-COOH + UDP-GA R-CO-O-GA COOH O

COOH

COOH

-R

-CO-R CO-

Conjugacin con GSH y formacin de derivados del cido mercaptrico Conjugaci formaci mercapt

1. Glutation S-transferasa

2. -glutamiltranspeptidasa

3. cisteinil glicinase:

4. N-acetil transferasa

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Conjugacin con sulfato

Fosfoadenosil fosfosulfato (PAPS)

Diferencias en la expresin de genes CYP no polimrficos


CYP1A2
70 60 50 40 30 20 10 0 22 20 18 19 21 16 11 7 17 1 5 12 8 3 4 13 6 10 9 2 14

CYP2B6
BROD ACTIVITY (pmol/mg x min)
25 20 15 10 5 0 4 3 1 17 7 12 16 14 2 11 8 6 9 19 13 18 5 10 22 20 21

MROD ACTIVITY (pmol/mg x min)

Patient N

Liver N

CYP2E1
CLZX ACTIVITY (pmol/mg x min)
TEST ACTIVITY (pmol/mg x min)
40000 30000 20000 10000 0 4 10 11 9 2 13 3 14 1 8 17 7 6 16 5 19 20 18 21 22
5000 4000 3000 2000 1000 0 1 17 8

CYP3A4

7 11 5 10 6

2 12 16 21 22 19 18 3 20 14

Liver N

Liver N

La variabilidad es mas bien la norma, antes que la excepcin...! excepci

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Variabilidad del Citocromo P450

GENOTIPO + Factores ambientales = FENOTIPO


Polimorfismos genticos gen
Edad Sexo Raza Dieta, estado nutricional Estados patolgicos Inductores enzimticos Variabilidad en los niveles de enzimas Diferencias en el metabolismo Diferencias en la farmacocintica farmacocin

Un ejemplo: el polimorfismo del CYP2D6


Metabolismo de la debrisoquina
- El 7% de la poblacin muestra una metabolizacin deficiente - Herencia autosomal recesiva - Afecta al metabolismo de 25 frmacos de uso comn
Debrisoquina CYP2D6 4-Hydroxydebrisoquina

% Poblacin

Metabolizadores Rpidos Metabolizadores Lentos Significantes diferencias en el metabolismo del frmaco

Debrisoquina 4-hidroxylasa

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Polimorfismos del P450


Causa del polimorfismo
No se expresa el gen Defecto parcial Alteracin funcional Varias copias del gen

Consecuencia
Ausencia de metabolizacin Descenso de la metabolizacin Alteracin de la especificidad Aumento de la metabolizacin

Otros polimorfismos frecuentes

Isoenzima P450 Frecuencia de la mutacin mutaci CYP2A6 5% CYP2C9 20% CYP2C19 10% CYP2D6 23% CYP2E1 2% (*) Enzimas de Fase II NAT-1/2 35% GST(M1/T1/M3/P1/A2) 5-50% UDP-GT ?

Factores ambientales que influencian la actividad de los CYPs

Nutricin Tabaco Alcohol Frmacos

1A1;1A2;2E1; 3A3; 3A4,5 1A1;1A2 2E1

1A1,1A2; 2A6; 2B6; 2C; 2D6; 3A3, 3A4,5 1A1,1A2; 2A6; 1B; 2E1; Medioambientales 3A3, 3A4,5
Rojo enzimas relevantes en el metabolismo de frmacos

S. Rendic & F. J. Di Carlo Drug Metab Rev 29: 413-580, 1997

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Las diferencias en el fenotipo de los enzimas metabolizantes de frmacos y sus consecuencias


Toxicidad debida a una dosis excesiva Eficacia teraputica terap Ineficacia teraputica terap

CYP

CYP

CYP

Metabolizador lento

Normal

Metabolizador rpido r

Consecuencias del polimorfismo del CYP


1. Diferencias en la farmacocintica: biodisponibilidad, vida media 2. Farmacodinmicas: respuesta exagerada, ineficacia teraputica 3. Interacciones medicamentosas 4. Produccin anormal de metabolitos txicos

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Interaccin frmaco-frmaco
+ ?
A A1 + A2

B1 + B2

Frmaco A
B
El metabolismo de uno de los frmacos puede verse f sensiblemente afectado por la presencia de otro que comparta el mimo enzima o grupo de enzimas para su metabolizacin metabolizaci

Frmaco B
B1 + B2
A1 + A2

B A

B1 + B2

A1 + A2

Interaccin frmaco-frmaco
CONCENTRACIN de A

A+B
Toxicidad

Ventana teraputica terap

Ineficacia

TIEMPO
La concentracin plasmtica del frmaco A puede elevarse en presencia del frmaco B causando efectos txicos

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Efecto de flavonoides presentes en el zumo de pomelo sobre el metabolismo de frmacos

5mg + zumo

control

Cl Cl CO 2 CH 3 CH 3

Cl

CH 3 O 2 C CH 3 N H

3A4

CH 3 O 2 C CH 3 N

Cl CO 2 CH 3 CH 3

D.G. Bailey, et al.; Br J Clin Pharmacol 1998, 46:101-110

Inhibidores de CYP3A4
H N N N N Cl N Clotrim azole H N Cim etidine

HN

S N

Cl Cl N N

O O O H O N N Ketoconazole

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El fenmeno de la induccin enzimtica

Qu es...? Qu trascendencia tiene...?

Induction of MC, Pb, Rif


Times Induction over control
20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 M C 2uM P b 2m M R if 5 0 u M

ol

19

2C

2D

1A

2A

3A

on

2C

(Human hepatocytes; incubation 48h)

3A

tr

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A (Cyp 2B)
x

B (Cyp 4A)
x

C (Cyp 3A)
x

(Cyp 1A)
x
Hsp90

PPAR

CAR

CAR

x
PPAR PPAR

x
RXR PXR RXR

x
CAR RXR

x
AhR Arnt

Hsp90

PXR

AhR

Sp1 HNF-1

C/EBP

C/EBP

TATAA HNF-3 C/EBP (LAP)

Nucleus
SXR=PXR=PAR=PRR

CYP-promoter

El fenmeno de la induccin enzimtica: por qu es relevante?


Si un compuesto acta como inductor enzimtico, la expresin de ciertos enzimas de biotransformacin aumentar tras la administracin repetida del compuesto. Cambios en la expresin de enzimas de biotransformacin influyen la farmacocintica de los frmacos Un frmaco cuya farmacocintica cambia el el curso de su administracin a un paciente es un frmaco de ms dificil manejo clnico

AhR

Cytosol

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Induccin del P450 - Importancia


Frmacos que inducen su propio metabolismo la biotransformacin de otros frmacos en el hombre
Grupo farmacolgico farmacol
Analgsicos, antipirticos y antiinflamatorios Antibiticos Anticonvulsivantes Antifngicos Antilipidmicos Antimalricos Diurticos Psicotropos Sedantes e hipnticos Esteroides Vitaminas

Ejemplos
Antipirina Fenilbutazona Rifampicina Carbamazepina, Fenitoina Griseofulvina Halofenato Quinina Espironolactona Clorimipramina Barbitricos Testosterona Vitamina C

Biotransformacin = Detoxificacin?

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Toxicidad como consecuencia del metabolismo...


Xenobitico (RH) Xenobi
Radicales & ROS Metabolitos electroflicos electrof Phase I

ROH

Metabolitos txicos t

Cell toxicity
Phase II

Conjugados reactivos

R-O-Conj

Metabolitos txicos t

Toxicidad para las clulas proximales c

Xenobitico
Detoxificacin
Biotransformacin Biotransformaci

Bioactivacin

Metabolito no-reactivo, nomenos txico t

Conjugacin Conjugaci

Metabolito reactivo

Lpidos

Protenas Prote

DNA

Eliminacin Eliminaci
Peroxidacin Peroxidaci de lpidos l Desnaturalizacin Genotoxicidad Desnaturalizaci Unin covalente Mutaciones Uni

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Paracetamol

NHCOCH3

NHCOCH3 1. Conjugacin Conjugaci sulfato

2. Conjugacin Conjugaci Glucornico Glucor OH 3. Citocromo P450

NHCOCH3

OSO3H NHCOCH3 GSH NHCOCH3 SCH2 CHCOOH

NCOCH3

OC6H9O6

+
O N-Acetil-p-benzoquinona imina

Unin Covalente a Uni protenas hepticas prote hep

OH Acido Mercaptrico Mercapt

Necrosis

Toxicidad heptica del paracetamol hep


El paracetamol (acetaminofeno) es una analgsico muy bien tolerado, y de toxicidad baja, que sin embargo puede ser fatal tras una sobredosis El metabolismo del paracetamol es primariamente a travs de su conjugacin con sulfato (1), pero dado que la capacidad del organismo es limitada, si se aumenta la dosis de frmaco (1-2 g) se formarn tambin conjugados glucurnicos (2) Si hay una sobredosis (>6g), cabe la posibilidad de que el frmaco de oxide (3) por el CYP2E1, formndose el intermedio reactivo N-Acetil-p-benzoquinona imina Este intermedio, ms reactivo y txico es conjugado con GSH y posteriormente eliminado como un derivado del cido mercaptrico En el caso de una sobredosis mayor (>10g), y dado que la capacidad de produccin y conjugacin con GSH es limitada, el intermedio reactivo puede reaccionar con grupos SH de protenas crticas, modificndolas (inactivndolas) y formando aductos covalentes Ello lleva a una necrosis del hepatocito que se manifiesta como una insuficiencia heptica fatal La administracin de precursores de GSH (N-acetilcistena) previene la toxicidad

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