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Medios cromogénicos y paneles miniaturizados de identificación_2

Medios cromogénicos y paneles miniaturizados de identificación_2

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Identificación bacteriana

Conjunto de técnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. Se utilizan en:
 

En el área clínica En la industria farmacéutica, cosmética y de alimentos En investigación básica

Clasificación de los métodos de identificación bacteriana

    

Métodos basados morfológicos Métodos basados Métodos basados Métodos basados Métodos basados Métodos basados

en criterios
en en en en en tinción diferencial pruebas bioquímicas tipificación con fagos pruebas serológicas detección molecular

Medio de cultivo
Los medios de cultivo deben contener los elementos nutritivos necesarios para permitir la multiplicación de las bacterias

Clasificación de acuerdo a su composición:

 Básicos  Enriquecidos  Selectivos  Selectivos-Diferenciales

Medios de cultivo cromogénicos

Medio selectivodiferencial preparado con sustancias cromogénicas.

Productos químicos de síntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que al ser hidrolizados por enzimas bacterianas especificas se libera produciendo un color intenso.

Ventajas:
Galactosa ONF (incoloro)

Fácil y rápida interpretación por su coloración especifica y morfología.

Β-galactosidasa

•Resultados
fiables.

seguros

y en

• •
Galactosa + ONF (amarillo)

Diferenciación cultivos mixtos

Menor tiempo en la identificación presuntiva (18-24 hrs).

•Reduce

gastos material y reactivos.

de

Desventaja:

No hay un medio de cultivo para cada microorganismo, solo para algunos

Medios cromogénicos para el aislamiento y recuento de microorganismos causantes de infecciones urinarias:

• CHROMagar
Orientation

•URI Select 4 •Agar CPS-ID3 •Chromogenic UTI

CHROMagar Candida  Cromogen albicans  Candida ID  Albicans ID2  CandiSelect  Fluoroplate Candida  Agar SDCA - MUAG

Fórmula:

Cromopeptona 10g Glucosa 20g Mezcla cromógena 2g Cloranfenicol 0,5g Agar 15g Agua purificada 1000mL pH 6,0 ± 0,3

• X-glucósido sustrato

para la detección de la enzima β-glucosidasa, común a las especies de Listeria.

• Un sustrato (L-α-

fosphatidylinositol) para una enzima fosfolipasa C que está presente en Listeria monocytogenes.

 Coliformes: enzima ß-D-galactosidasa, que rompe el sustrato Salmon-GAL, provocando la aparición de colonias de color salmón a rojo.

 El sustrato X-glucuronido, es usado para la detección de la ß-D-glucoronidasa, enzima característico de E.coli, (a excepción de E.coli 0157:H7) y produce una coloración azul de las colonias positivas. E.coli, al romper tanto Salmon-GAL como Xglucuronido, generan colonias de color azul oscuro a violaceas.

Agar cromogénico para Salmonella sp.
 El sustrato Magentacaprilate es hidrolizado por la Salmonella lactosa negativa.  El sustrato X-Gal es escindido por el enzima ß-D galactosidasa.

Diseñados para realizar varias pruebas bioquímicas simultáneamente y permitir la identificación en un tiempo más corto.
Microorganismos: • Bacterias • Levaduras

Características:
 

Pocillos de plástico Mínima cantidad de medio o de sustrato (liofilizado o desecado) Inoculación directa del medio (rehidratación del sustrato) Entre 10 y 50 pruebas

 

Manipulación y lectura siguiendo instrucciones del fabricante

Posibilidad de identificar enterobacterias, bacilos gram negativos no fermentadores, estafilococos, estreptococos, corineformes, bacterias anaerobias y levaduras.

Consta de tubos miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al inocularlos con la suspensión bacteriana pura.

Las pruebas se clasifican en grupos; a c/u de los ensayos con resultados positivos se les asigna un determinado valor numérico.
Obteniéndose un código que corresponderá a un determinado género o especie en un texto de la base de datos.

Sistemas comerciales
Manuales Automatizados
Sistema ATB (API automatizado)

Becton Dickinson Diagnostics Enterotubo
 

API

Abactor II

RapID ONE

Vitek

BD Phoenix

Ventajas de sistemas manuales
Fiabilidad semejante a pruebas
convencionales Ocupan poco espacio (incubación y almacenamiento) Larga duración (caducidad: 6-12 meses) Manejo sencillo Fácil inoculación Fácil interpretación de resultados Pruebas y medios uniformes

Características:

  

Tubo de polipropileno (forma de lápiz) 12 compartimentos 12 medios de cultivo diferentes (pruebas bioquímicas) 15 resultados posibles

Manejo

Lectura e interpretación de resultados

Lectura de las pruebas:
• Agrupar las pruebas de tres en tres
negativas (todas valen 0) Positivas: primera del triplete vale 4 segunda vale 2 tercera vale 1

• Obtención del número de biotipo (5 dígitos) • Comprobar identificación con ENCISE (Enterobacteriaceae

Numerical Coding and Identification System) (registro de perfiles)

Características:


  

Tiras de plástico con 20 minitubos Orificio en parte superior (inoculación) Contienen sustratos deshidratados de 20 pruebas bioquímicas Añadir 5 mL de agua a la bandeja para mantener la hidratación Necesaria suspensión bacteriana (Agua destilada o SSE NaCl al 0.85%)

Tipos

API 20E: Enterobacteriaceae

API STAPH

+

API 20 STREP

+

Levaduras
 Suspensión en 2 ml de agua destilada estéril hasta obtener una turbidez igual a 2 de McFarland.  Incubar a 30 °C durante 48-72 h.

Manejo

Indicaciones:
• Sin señalación: llenar solo el tubo
• Indicados con subrayado: llenar con aceite estéril la cúpula • Indicados con : Se llena tubo y cúpula

Lectura e interpretación de los resultados

Agrupar las pruebas de tres en tres  Negativas (todas valen 0)  Positivas : Primera del triplete vale 1 Segunda vale 2 Tercera vale 4

Transformación de las 20 pruebas en código de 7 dígitos (número de biotipo)

Tarjeta de resultados

Sistema Uni-Yeast-Tek (Candida)
Constituido por:
 

Una placa plástica con múltiples compartimentos Contienen un medio con agar para la asimilación diferencial de siete hidratos de carbono. También incorpora una cubeta central con agar harina de maíz-Tween 80 para determinar el crecimiento micelial y la producción de clamidosporas.

Además, está provisto de agar urea, agar para la asimilación y reducción de nitratos. Un caldo con extracto de carne al 2,6% (con 0,05% de glucosa) para realizar la prueba del tubo germinal.

Galería ID 32C

 Permite identificar 63 especies  Puede ser utilizada manualmente o bien de forma automatizada mediante los sistemas ATB Expression o mini API.

La galería se compone de 32 cúpulas: 29 contienen cada una un sustrato carbonado deshidratado Una es el control negativo Otra detecta la sensibilidad a la cicloheximida La última es una prueba colorimétrica para la esculina.

 

Ventajas de los sistemas automatizados
Estandarización de los procesos  Requieren un proceso de inoculación e incubación cortos  Rapidez de respuesta 6-18 hrs  Adecuación a la diversidad de agentes de importancia clínica  Objetividad de las determinaciones  Precisión y reproducibilidad de los resultados  Bioseguridad  Optimizan el tiempo el personal de laboratorio  Aumenta el control de las variables

Desventajas
 

Alto costo No incluyen características esenciales de ciertas especies No esta disponible para todo el espectro de bacterias Necesidad de cultivo puro Paneles no definidos por el usuario

 

Bacterias gramnegativas, gramnegativas urinarias, estafilococos y estreptococos

Manejo

Tarjeta de lectura
I. Exacta

I. Probable

Permite identificación de bacterias gramnegativas y grampositivas incluyendo patógenos de orina, patógenos entéricos, levaduras, anaerobios, Neisseria y Haemophilus

Tarjetas

Son de plástico transparente

Manejo

BD PHOENIX

 Diseñado para la identificación rápida y la prueba de sensibilidad a antibióticos  Bacterias aerobias grampositivas asi como aerobias y anaerobias facultativas gramnegativas  Incluye pruebas para la fermentación, oxidación, degradación e hidrólisis de diversos sustratos así como diversos antibióticos

 

Se inocula con una solución al 0.5 de McFarland Analiza los paneles cada 20 minutos hasta un máximo de 16 hrs.

Referencias bibliográficas

www.quimibell.com.mx www.biomerieux.com.mx

Rodríguez CE. Bacteriología General: Principios y prácticas de laboratorio. Costa Rica: Editorial Universidad. 2005 Prats G. Microbiología Clínica. Madrid: Médica Panamericana. 2005

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