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hemocultivo

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NORMA DE INDICACIÓN Y TOMA DE MUESTRAS PARA HEMOCULTIVOS.

HEMOCULTIVO: Es un examen microbiológico que permite la detección en el laboratorio, de una bacteremia, lo cual contribuye a adecuar la terapia antimicrobiana de acuerdo al microorganismo aislado y a la sensibilidad in vitro que éste presente, ya que la terapia, generalmente se plantea en forma empírica. Hemocultivos positivos pueden indicar : 1.-Bacteremia real por agente patógeno: •Bacteremia primaria: sin foco evidente de infección en otro sitio. •Bacteremia secundaria: existe foco de infección primaria con el mismo agente, como : Infección del tracto urinario, Infección respiratorio, Infección de herida operatoria. Otros. 2.-Bacteremia transitoria: Instrumentación de mucosas contaminadas. Cirugía de áreas contaminadas. 3.-Contaminación: La incidencia de bacteremia, varía de acuerdo al tipo de infección que la origina, por ejemplo: Porcentaje de Bacteremia : Endocarditis bacteriana 77-100 % Neumonia Bacteriana 20-30 % Artitis séptica 10-60 % Neutropénicos febriles 20-30 % Meningitis bacteriana 45-55 % Haemophilus influenzae tipo b 80 % Neisseria meningitidis 33 % Streptococcus pneumoniae 52 % Niños febriles menores de 2 años 6 % La detección en el laboratorio de una bacteremia depende de numerosos factores: -Indicación del examén -Número de muestras cultivadas -Volumen de sangre cultivada -Dilución de cultivo -Aditivos del medio. INDICACION CLINICA DE HEMOCULTIVO: -Infección del SNC. -Lactante menor de 03 meses con hipertermia (mayor de 39.5) -Síndrome febril de más de 04 días de evolución, sin foco clínico evidente. -Pleuroneumonias. -Paciente inmunodeprimido, con fiebre -Sospecha clínica de septicemia. -Cardiopatía, con fiebre, sin foco clínico evidente. -Osteoartritis aguda. -Celulitis facial en niño menor de 05 años.

existe una relación directa entre el volumen de sangre cultivada y el porcentaje de bacteremias detectadas. (07-10ml por muestra). dos y tres muestras para hemocultivo es de 91%. •Niños: El volumen es variable según edad: Edad Recién Nacidos Lactantes de 1mes a 2 años Mayores de 2 años Adolescentes INTERVALO DE TOMA DE MUESTRA: Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak febril. no siendo necesario fijar plazos determinados entre una muestra y otra. al no existir diferencia significativa al tomar 2 o 3 muestra se indicará: Adultos: 2 muestras. a que el aislamiento de microorganismos habituales de la flora bacteriana de piel. Se ha demostrado que en un episodio bacterémico la positividad de una. por lo tanto. se recomienda tomar un volumen total de 20 ml en las 2 muestras. para evitar su contaminación.NÚMERO DE MUESTRAS CULTIVADAS: La mayoría de las bacteremias. . se hace necesario extremar las precauciones en la toma de muestra. son intermitentes y de baja magnitud. de diferentes sitios de punción. obtener un segundo set de 2 hemocultivos más. disminuye la positividad diagnóstica y la evaluación de contaminación. 98% y 99% respectivamente. • Volumen 1-2 ml 2 a 3 ml 5ml 10ml . Niños : 2 muestras. EVITAR CONTAMINACION: Debido. VOLUMEN DE MUESTRA: •Adultos: Por la baja incidencia de las bacteremias en los adultos. si estos van negativos a las 24 horas . • Se debe obtener los 2 hemocultivos en un periodo máximo de 24 horas. • Ambas muestras pueden ser obtenidas en el mismo momento. con excepción de las asociadas a endocarditis bacteriana e infecciones intravasculares y las que se producen en los niños. Paciente con sospecha de Endocarditis bacteriana: obtener 2 muestras para hemocultivo. puede plantear problemas en la interpretación del examen. En ningún momento está recomendado la obtención de una muestra de sangre para hemocultivo en forma aislada. • En pacientes con terapia antimicrobiana la muestra debe ser obtenida inmediatamente antes de la próxima dosis de antimicrobiano. lo cual generalmente coincide con un periodo de calofríos.

* Pleuroneumonias. con fiebre sin foco clínico evidente. sin foco clínico evidente. está actualmente implementado para los servicio de: Medicina Adulto. contaminación o deterioro como: derrames. -Lavado de piel del paciente con agua y jabón. El método autoanalizador Bactec 9050. en un lugar seco. el frasco de cultivo debe estar a temperatura ambiente.C. *Conservar entre 2ºC y 25ºC. Medicina Infantil. • Para la toma de muestra se puede utilizar sistema de extracción al vacío. *En el momento de la toma de muestra.C. Indicaciones: * Infección bacteriana del S. * Sospecha clínica de septicemia.I. * Paciente inmunodeprimido. *Se debe examinar cada frasco antes de usarse para ver si presenta indicios de daño. el frasco se debe devolver a Laboratorio Central. -Uso de antiséptico. * Osteoartritis aguda.Se recomienda: -Técnica aséptica en la toma de la muestra. * Lactante menor de 03 meses con hipertermia (mayor de 39. de acuerdo a Norma de toma de muestras para hemocultivos. La contaminación de hemocultivos no debe superar el 3% SISTEMA AUTOMATIZADO DE HEMOCULTIVOS BACTEC 9050 Recepción de Muestras: La recepción se realizará las 24 hrs. si es así. Infecciosos y U. del día. decoloración u oscurecimiento o el tampón hinchado o hundido. La implementación de este método para otros servicios clínicos será informada oficialmente en el momento que se produzca. * Celulitis facial en niño menor de 05 años. (Meningitis purulenta).N. Toma de muestras: • La muestra debe extraerse utilizando técnica aséptica para reducir la posibilidad de contaminación. Frascos de cultivo: (frascos BACTEC) *Serán entregados a cada servicio por Laboratorio Central. con fiebre. Se sabe que los porcentajes de contaminación se reducen.5ºC).. * Pielonefritis. * Cardiopatía. . están cerrados con tapón de goma a través del cual se inyecta la sangre. cuando los frascos que se usan. turbidez. fuera de la luz directa del sol. * Síndrome febril de más de 04 días de evolución.

Semi-automatizados: Lisis-centrifugación . cuidando no escribir sobre el código de barras.N° MUESTRAS : Adultos : 02 (I-II) Niños : 02 (I-II) Volumen x muestra : Volumen x muestra : Adultos : 08 – 10 ml De acuerdo a tabla de volumen según edad. del día.05% de polianetol sulfonato de sodio (SPS) como anticoagulante. la temperatura y atmósfera de incubación es decisión del microbiólogo basado en el diagnóstico clínico. Peptostreptococcus.2%. Una desventaja de este sistema con relación al automatizado es el mayor riesgo de contaminación por la manipulación de las botellas al realizar los procedimientos de tinción y traspasos.Manuales o convencionales . En general existen 3 tipos de sistemas de hemocultivos: . son inhibidas por el SPS. este efecto puede ser neutralizado suplementando el medio con gelatina 1. Recepción de muestras: La recepción se realizará las 24 hrs. neutraliza lisozimas y algunos antibióticos del grupo de aminoglicósidos. * Informes positivos. • Los frascos deben identificarse con el nombre del paciente en el lugar señalado en la etiqueta. se enviará al 5º día de cultivo. además inactiva el complemento. se comunicarán inmediatamente. .Automatizados Manual: El medio de cultivo debe contener 0. Gardnerella y algunas cepas de Neisseria spp. este inhibe la actividad bactericida del suero contra muchas bacterias y la fagocitosis. En los sistemas manuales la elección del medio de cultivo.025 a 0. Informe : * Informe final negativo.

según lo que se haya utilizado como lavador. 4. La desinfección de la piel se realiza con povidona yodada. la piel debe ser lavada con povidona yodada. Estos se basan en la detección de productos del metabolismo bacteriano (CO2) mediante técnicas radiométricas. se considera el método de elección en bacteriemias por Micobacterias (pacientes HIV) y permite realizar hemocultivos cuantitativos que son útiles para diagnóstico de bacteriemia relacionada a Catéter Venoso Central (CVC) 2. ya que en la actualidad con los sistemas automatizados de hemocultivos que evitan la manipulación de los mismos. lavador quirúrgico. aplicado en forma excéntrica desde el sitio de punción elegido. anaeróbicos. 4. Por esto.3 SISTEMAS AUTOMATIZADOS Los sistemas automatizados consisten básicamente en botellas con diversos medios de cultivo (aeróbicos. con un aumento de los falsos positivos de 1. saponina como agente lítico de eritrocitos. Después de la palpación de la vena. con gluconato de clorhexidina al 2-4% o con agua y jabón. polipropilenglicol como antiespumante y un fluoroquímico inerte de alta densidad. tintura de yodo o con clorhexidina alcohólica.7 a 3. ya que estudios de microscopía electrónica revelan que el 100% de los catéteres se colonizan con microorganismos de la piel a las 48 horas de instalados (25). este método permite mejorar en un 25 a 50% la detección de hongos levaduriformes y filamentosos. Sin embargo dado que este momento no se puede predecir. micobacterias y con resinas que captan antibióticos) que se incuban en equipos que agitan constantemente las muestras y que poseen modernos sistemas de detección microbiana.0 TOMA DE LA MUESTRA 4. Se . La muestra obtenida por catéter venoso central esuna muestra inadecuada. la recuperación de microorganismos en el hemocultivo obtenido a través del catéter puede corresponder al arrastre de las bacterias que están colonizando la superficie interna más que a la presencia de bacterias en el torrente sanguíneo.2 MÉTODO DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA La muestra debe obtenerse por punción periférica (venosa o arterial).SISTEMAS SEMI AUTOMATIZADOS: LISIS-CENTRIFUGACIÓN Consiste en un tubo de lisis cuyo contenido es polianetol sulfonato de sodio como anticoagulante. leucocitos y macrófagos. siempre por una nueva punción y debe ser la primera muestra que debe obtenerse si existe indicación de otros exámenes.3 PREPARACIÓN DE LA PIEL Este aspecto es esencial si se quiere evitar la contaminación de los hemocultivos.6).8% (10). de diferentes sitios de punción. espectrofotométricas.1 MOMENTO DE LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak. hongos. si se trata de un paciente que va a requerir inicio inmediato de antimicrobianos. El computador asociado a los equipos relaciona las mediciones con índices y/o gráficas de crecimiento microbiano que dan un aviso cuando la detección sobrepasa un punto de corte. fluorométricas y/o colorimétricas. Luego se somete a la muestra a una centrifugación a alta velocidad que permite la concentración de microorganismos en el sedimento que se siembra en medios de cultivo específicos (9. momento que puede ser precedido por calofríos (Figura Nº3). se hace una tinción de Gram y se informan precozmente. En general. se recomienda en forma arbitraria obtener dos hemocultivos en 24 horas separados por 30 a 90 minutos o bien obtener los dos hemocultivos al mismo tiempo. 4. Las botellas se descargan. prácticamente no existe la posibilidad de que los hemocultivos se contaminen en el laboratorio.

En el caso de los sistemas manuales que no son sellados. 3 a 5 ml para niños mayores de 2 años y 10 ml para adolescentes.debe esperar que el antiséptico se seque para que ejerza su acción residual (30). mayor es la sensibilidad del hemocultivo. no sólo aumenta la probabilidad de recuperar las bacterias a partir de la sangre sino que también permite diferenciar una bacteriemia verdadera de una contaminación. Si se utiliza tintura de yodo. Por esto es que las recomendaciones son obtener el máximo de volumen que la botella sea capaz de tolerar manteniendo la relación 1:5 a 1:10 entre la muestra y el volumen de medio de cultivo. un meta-análisis reciente demuestra que el cambio de aguja disminuye el porcentaje de contaminación (33). Si se sospecha endocarditis infecciosa. se debe retirar completamente con agua para evitar quemaduras.4 VOLUMEN DE LA MUESTRA Se considera actualmente una de las variables más críticas en el aumento de la positividad de los hemocultivos. Este procedimiento tiene riesgo de contaminación por lo que se debe tener máxima precaución en no tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja. que deben ser estériles cuando se requiere nuevamente la palpación de la vena. esta dilución permite neutralizar las propiedades bactericidas de la sangre y de los agentes antibacterianos que puedan estar presentes en la muestra. 2 a 3 ml para lactantes de 1 mes a 2 años.5 INOCULACIÓN DE LAS BOTELLAS En el caso de los sistemas automatizados. obtener un segundo set de 2 hemocultivos más. se recomienda obtener el primer set de 2 hemocultivos y si estos van negativos en las primeras 24 horas. 4.6 NÚMERO DE LOS HEMOCULTIVOS La obtención de 2 hemocultivos en 24 horas. En ningún caso se recomienda la obtención de sólo un hemocultivo y en el último tiempo se ha considerado la evaluación de los hemocultivos solitarios (únicos) como un instrumento para evaluar el control de calidad en microbiología (29). Para la gran mayoría de los sistemas automatizados este volumen es de 10 ml para adultos y es variable para los niños según la edad: 1 a 2 ml para recién nacidos. ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de éste. . se debe destapar el frasco para inocular la muestra. se debe descontaminar el tapón de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar que se seque. 4. Dado que la mayoría de las bacteriemias son de baja magnitud (< 1 a 10 ufc/ml) a mayor volumen de muestra obtenido. Se sabe que por cada ml adicional de muestra que se inocule en la botella aumenta la positividad entre un 2 a 5%. Siempre la punción debe ser efectuada con guantes. 4.

a. Las muestras se transportan a temperatura ambiente. (Tabla Nº2)..0 PROCEDIMIENTO 6.0 MANTENCIÓN Y TRANSPORTE DE LAS BOTELLAS Mantener a temperatura ambiente y enviar rápidamente al laboratorio. independientemente del aspecto macroscópico que presente la botella. turbidez.. etc. 6.Los hemocultivos corrientes se incuban por 7 días a 35ºC en atmósfera normal y en endocarditis bacteriana subaguda hasta 14 días. Subcultivar a una placa de agar chocolate suplementado y a una placa de agar sangre de cordero al 5%. pudiendo darse como máximo de tiempo 2 horas desde que se tomó la muestra. colonias.1 PROCEDIMIENTOS GENERALES Mantener las precauciones de bioseguridad universales para nivel II para el manejo de líquidos corporales. en la toma de muestra y en el transporte (Tomo Bioseguridad).Observar diariamente el aspecto macroscópico en busca de signos que indiquen desarrollo bacteriano: hemólisis. presencia de gas..(Tabla Nº3). La incubación a 35ºC debe realizarse lo antes posible. En ese momento hacer tinción de Gram directo de la siguiente forma: homogeneizar el contenido del frasco de hemocultivo por agitación suave.5. c. colocar una gota en el extremo del porta objeto y extender con un cubre objeto en ángulo 45º. .Realizar subcultivos ciegos aunque no se observen evidencias de desarrollo a las 24 horas y al 7º día de incubación. b. Nunca refrigerar.

Subcultivar hemocultivos positivos en agar sangre cordero al 5% suplementado con Piridoxal al 0. incubar en atmósfera normal por 7 días. Para efectuar el aislamiento se recomienda incorporar al medio de cultivo sacarosa o manitol al 10%. a 35ºC.) b.. caldo Brucella. 6. estos deben ser suplementados con Piridoxal al 0.Sembrar cruzando la superficie del agar con Staphylococcus aureus e incubar 18 hrs.Colocar asépticamente un disco de Piridoxal (catálogo Remel Nº21-137) en el área con mayor inoculo. o L-cisteina al 0.2 MICROORGANISMOS DE PARED DEFICIENTE Se sospecha frente a un paciente con endocarditis bacteriana que presenta hemocultivos negativos. PROCEDIMIENTOS ESPECÍFICOS En sospecha de Brucelosis incubar hasta 30 días en atmósfera con 5-10% CO2.001%.1 Streptococcus NUTRICIO-DEFICIENTES Algunas cepas de Streptococcus viridans son dependientes de Piridoxal para su crecimiento. d.Observar la presencia de pequeñas colonias satélites alrededor de S. Los cultivos para Leptospira deben incubarse en oscuridad a 28-29ºC por 4-6 semanas. pero como este elemento no se encuentra presente en los medios en que se realiza el subcultivo. aureus.2.001% o L-cisteina. 6.. 6. a....Sistema bifásico (Brucella spp. Al parecer el Piridoxal (vitamina B6) presente en la sangre humana permite el desarrollo de estos microorganismos en el medio de hemocultivo. c... caldo soya tripticasa. a. e. caldo Columbia. a 35ºC.Medios específicos para anaerobios: Caldo Tioglicolato.Medios específicos para aislamiento de hongos.1% o ambos.. caldo peptonado suplementado. c. Métodos alternativos.Inocular una placa de agar sangre con varias gotas del medio suplementado que contiene el microorganismo sospechoso.3 EXAMEN DE LOS CULTIVOS . b. 6. Otros medios son: a.Medios específicos para aislamiento de micobacterias.d.Observar características macroscópicas de las colonias y hacer tinción de Gram directo. d.Efectuar las pruebas bioquímicas y estudio de susceptibilidad antimicrobiana que corresponda al tipo de aislamiento.2. Para hemocultivos anaeróbicos si se utilizan medios comerciales específicos. b. c. Se debe sospechar la presencia de estos microorganismos cuando se observan al Gram la presencia de cocáceas y no se obtiene desarrollo en los subcultivos en diferentes atmósferas (aerobio-anaerobio). el medio de cultivo es un medio enriquecido que consiste en un caldo adicionado de suero de conejo.. Algunos medios usados para hemocultivo son: Caldo cerebro corazón.2.05-0...Incubar la placa por 18 hrs..Observar la presencia de colonias satélites alrededor del disco.

Si dispone de sistemas automatizado. Haemophilus influenzae. Dra. Leptospira (solo muestras de suero). morfología y agrupación. Se debe notificar al clínico todos los resultados. Neisseria meningitidis. Streptococcus pneumoniae provenientes de cuadros invasores. incluidos los presuntos contaminantes..9. para confirmación y vigilancia epidemiológica de acuerdo a lo indicado en el reglamento N° 712 sobre notificación de enfermedades transmisibles. Patricia García C. indicando: cantidad. Para un hemocultivo positivo informar el microorganismo identificado con su respectiva susceptibilidad a antimicrobianos cuando corresponda. Brucella. HEMOCULTIVOS Profesionales de la Sección Bacteriología General.0 ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Enviar al Laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública en caso de aislamiento debacterias como: Salmonella spp.* y Carlos Pérez C.* *Pontificia Universidad Católica de Chile . 9.0 INFORME DE RESULTADOS 9. informe las horas transcurridas hasta la positividad. 10.1 PREINFORME Informar de inmediato al médico si se observan bacterias al Gram.2 INFORME DEFINITIVO Indicar el período de incubación durante el cual no se observó desarrollo cuando se emite un informe negativo.

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