Enzimas en Medicina Biotecnologa enzimtica

Enzimas en el diagnstico clnico

Existe en el suero sanguneo una gran cantidad de actividades enzimticas. De la relacin

Vmax = k+2 e0 Se deduce que la medida en suero de la actividad enzimtica es una medida directa de la concentracin de enzima en dicho medio.

Alteraciones de la concentracin enzimtica en suero, 1 1. Aumentos de la actividad enzimtica

(a). Incremento patolgico de la permeabilidad de membrana

(b). Muerte y destruccin celular

(c). Induccin enzimtica

(d). Proliferacin celular

Alteraciones de la concentracin enzimtica en suero, 2

2. Disminuciones de la actividad enzimtica (a). Intoxicaciones

(b). Enfermedades crnicas

(c). Alteraciones del estado nutritivo

Algunas enzimas con inters diagnstico

1. Aminotransferasas 2. Creatin kinasa 3. Fosfatasa alcalina 4. a-Amilasa 5. Fosfatasa cida 6. Lactato deshidrogenasa 7. g-Glutamil transferasa 8. Seudocolinesterasa

Aminotransferasas (Transaminasas)
Catalizan la interconversin reversible de aminocidos y cetocidos. Utilizan piridoxal fosfato como cofactor
COOH H2N CH R1

COOH + C O R2

COOH R1

COOH R2

C O + H2N CH

Su papel es importantsimo en el metabolismo de aminocidos. En clnica se determinan las siguientes:

EC 2.6.1.1, Aspartato aminotransferasa (AST, GOT) EC 2.6.1.2, Alanina aminotransferasa (ALT, GPT)

Aspartato aminotransferasa, EC 2.6.1.1 (AST, GOT)

COOC O +
-

COO+

COOC O CH2 COOOxalacetato

COO+

H3N CH CH2 COO

H3N CH CH2 CH2 COOGlutamato

CH2 CH2 COO-

Aspartato

a-Cetoglutarato

Aparece en citosol y mitocondrias de tejidos metablicamente muy activos. Su nivel se eleva en el suero ante afecciones hepticas y miocrdicas.

Alanina aminotransferasa, EC 2.6.1.2 (ALT, GPT)

COO+

COOC O + CH2 CH2 COOa-Cetoglutarato

COOC O CH3 Piruvato

COO+

H3N CH CH3 Alanina

H3N CH CH2 CH2 COOGlutamato

Enzima citoslica, de elevada concentracin en el parnquima heptico. Se considera casi especfica de lesin heptica.

Creatin kinasa, EC 2.7.3.2 (CK, CPK)

CH3 N CH2 COOH HN C NH2 Creatina HN C NH2 ATP ADP CH3 O O-

N CH2 CO O P O-

Creatin fosfato

Creatin fosfato es una forma de almacenamiento de enlaces ricos en energa en el tejido muscular. Es el prototipo de los compuestos conocidos como fosfgenos.

La CK se presenta en forma de tres isoenzimas especficas de tejido:

MM MB

- Forma MM (msculo esqueltico) - Forma MB (msculo miocrdico) - Forma BB (cerebro) La isoenzima MB es un marcador precoz de infarto de miocardio. Un nivel muy elevado es mal pronstico Las isoenzimas se distinguen electroforticamente o por mtodos inmunolgicos

BB

Fosfatasa alcalina, EC 3.1.3.1

O R O P O- + H2O OO R OH + HO P OO-

Hidroliza con baja especificidad fosfomonosteres, a un pH alto (de ah el nombre). No se conoce con certeza cul es su funcin metablica. Aparece en gran cantidad de tejidos.

La fosfatasa alcalina presenta varias isoenzimas: - sea - Heptica - Intestinal - Placentaria

Las ms importantes son las dos primeras. Se pueden distinguir por su termoestabilidad, siendo la sea ms termolbil.
sea: Propia del tejido seo en crecimiento y de enfermedades que cursan con neoformacin sea Heptica: Propia de las clulas del rbol biliar: se eleva en las colestasis (obstrucciones biliares) asociada a partculas de elevado peso molecular

g-Glutamil transferasa, EC 2.3.2.2 (GGT)

GSH + aa g-Glu-aa + Cys-Gly

Tiene un importante papel en el transporte de aminocidos a travs de membranas. Aparece, como la fosfatasa alcalina, en obstrucciones biliares asociada a fracciones de alto peso molecular. Es una enzima inducible, y su concentracin en suero aumenta con xenobiticos (alcohol, drogas, etc.)

a-Amilasa, EC 3.2.1.1
Es una enzima producida por las glndulas salivales y el pncreas.
Es un marcador muy importante de afecciones pancreticas agudas (pancreatitis). Puede incluso aparecer en la orina, debido a su bajo peso molecular (amilasuria)

Fosfatasa cida, EC 3.1.3.2

O R O P O- + H2O OO R OH + HO P OO-

Hidroliza fosfomonosteres con baja especificidad. Presenta varias isoenzimas, una de las cuales (Fosfatasa cida prosttica) es un marcador muy fiable del cncer de prstata y que se emplea en el diagnstico precoz del mismo.

Enzimas en Teraputica: producidas por recombinacin

Adagen (adenosine deaminase) Enzon, Inc. Autorizado su uso peditrico en inmunodeficiencias congnitas. Ceredase (alglucerase) Genzyme Corp. Autorizado su empleo en enfermedad de Gaucher tipo 1 Cerezyme (imiglucerase) Genzyme Corp. Autorizado su empleo en enfermedad de Gaucher tipo 1 Pulmozyme (Dnase) Genentech, Inc. Autorizado su empleo en fibrosis qustica Activase (recombinant alteplase) Genentech, Inc. Autorizado en infarto de miocardio y embolia pulmonar

Biotecnologa enzimtica
- Procesos industriales enzimticos: * Industrias del almidn * Detergentes * Industrias lcteas * Industrias de la fruta * Antibiticos - Biosensores y biochips

Biosensores

Anodo Ctodo Membrana de Teflon

Esquema de un biosensor de glucosa

Producto

Membrana semipermeable

Substrato

Enzima inmovilizada