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BIOQUIMICA: ENZIMAS, CLASIFICACIÓN, LOCALIZACIÓN, ESPECIFICIDAD, SITIO ACTIVO

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMERICA)

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA
TEMA:
ENZIMAS: CLASIFICACIÓN, LOCALIZACIÓN, ESPECIFICIDAD, NOMENCLATURA Y SITIO ACTIVO

PROFESOR: 
Dra. Mercedes Soberón

REDACTORES: 
        Orellana Mantari, Angie Melissa Ylla Vasquez, Juan José Tafur Portocarrero, Geancarlo Huaman Berna, Luis Andrés Rosales Zuñiga, Josias Mirko Hurtado Flores, Maria Alejandra Román Santillán, Gianmarco Mamani Olivares, Juan Carlos Real Hernandez, Raúl Anthony

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Esta primera parte de las enzimas tiene que ver con lo que es definición, cómo es que ésta funciona en el laboratorio, qué nos permite dealguna manera visualizar que estrategias químicas utilizamos para ver si estamos frente a una enzima activa o no; y ya ustedes a partir del segundo capítulo de este curso las van a ver en acción frente a vías metabólicas.Hoy que es la primera parte de estos temas de enzimas, el objetivo esrepresentarlas y ver de qué manera las podemos realmente ³visualizar´ en el laboratorio. Entonces, hoy por ser la primera clase de enzimas vamos a ver su clasificación, la localización, nomenclatura, la especificidad(que tiene que ver con el sitio activo).Pero para ello queremos que al final de esta clase, usted pueda haber definido lo que una enzima, entender y explicar su clasificación, poder diferenciar entre una y otra clase, cómo se expresa la velocidad de reacción y también la importancia del sitio catalítico (en toda la estructura de la enzima porque es importante el sitio catalítico). Entonces veamos la motivación. Toda clase debe empezar con una motivación,he aquí la motivación :me parece que es de conocimiento de todos ustedes el uso de armas químicas, ¿verdad? Una de las ³armas químicas´ por ejemplo el gas lacrimógeno (las famosas bombitas lacrimógenas) cuyo efecto inmediato es picazón a nivel de los ojos. Tenemos también el gas pimienta, ¿lo han escuchado? Es un gas en forma de aerosol, así lo venden, y tiene la finalidad de que cuando a alguien lo asaltan, le echas el spray a los ojos y evitas que el asaltante haga su acción. Pero eso no ha quedado allí, existen otros gases que son mucho más tóxicos, en la lámina tienen ustedes a este grupo de soldados con mascarilla intentando utilizar esta arma química con la finalidad de dar un mejor ataque a su enemigo. Nos vamos a referir a uno en especial de estos gases, sobre todo los neurotóxicos.

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Tenemos abajo el famoso gas lacrimógeno que se usa cuando hay revueltas, cuando hay las protestas en aras de poder disiparlas. Perocomo repito, me voy a referir a unos más letales, como son los gases neurotóxicos. Miren en el año de 1995, en Japón, un grupo de una secta religiosa libera un gas denominado sarín en un terminal de trenes, ustedes pueden apreciar que esos lugares son cerrados, entonces ¿qué originó este gas sarín? La gente inhaló este gas y tuvo como consecuencia 2 muertes y 600 afectados. Ahora, este famoso gas sarín, es uno de los gases neurotóxicos que fueron utilizados ya en la Segunda Guerra Mundial por los alemanes frente a los franceses, así que su uso no era desconocido ya en esa época; y es más miren, se dice que en Chile, el general Pinochet hizo uso de este gas, mandó a fabricar este gas sarín y lo utilizaba para contrarrestar a todo aquello que se oponía a su régimen. ¿A quién utilizó para poder construir este gas sarín? Fue nada más y nada menos que a este bioquímico Eugenio Berríos. Él estuvo encargado del proyecto Andrea y su finalidad era fabricar este gas sarín. Ahora,qué es lo que produce este famoso gas sarín, que no es el único (o sea es parte de un grupo de gases) y que definitivamente afecta a enzimas siendo un gas de tipo neurotóxico, entonces tiene que ver afectando al sistema nervioso específicamente la transmisión del impulso nervioso. Entonces aquí vamos a ver que a este gas sarín, su contraataque es una enzima, la acetilcolinesterasa, pero retomemos un ratitoqué papel tiene la acetilcolinesterasa en la transmisión del impulso nervioso. Llega un estímulo y lo que sucede con las neuronaspresinápticas es un momento de polarización y despolarización a nivel de las membranas; la idea en general es que mantiene el impulso nervioso. ¿Qué es el impulso nervioso? No más que ondas eléctricas que se van difundiendo a través de las membranas de

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las neuronas que están haciendo sinapsis, se propaga y finalmente llega a un tejido que puede ser un músculo y que produce la acción. Entonces este proceso de polarización y despolarización da lugar a un proceso de potencial de acción. Esta despolarización y polarización, también se explica como un movimiento de iones, lo cual indica entonces aperturas y cierres de canales iónicos para que puedan entrar y salir determinados iones,y esto resulta como consecuencia diferencia de cargas eléctricas fuera y dentro de la membrana que se conoce como una diferencia de potencial; de un potencial de reposo, estas células nerviosas pasan a un potencial de acción. ¿Y qué trae como consecuencia ello? Trae como consecuencia que neurotransmisores que se forman en estas células nerviosas puedan salir. Tienen ustedes como pueden ver aquí, el caso de una sinapsis: una neurona presinaptica y una possinaptica y entre ellas queda el espacio sináptico, luego se ha formado un neurotransmisor (acetilcolina en este caso) que a través de las vesículas sinápticas sale al espacio sináptico por el proceso de diferencia de potencial. Ubicándonos en el espacio sináptico, hay receptores en la neurona possinaptica, esto va a originar la interacción receptor ± acetilcolina, produciéndose toda una seria de reacciones que se verán mejor en el curso de fisiología. Ahora, la acetilcolina no puede estar todo el tiempo haciendo interacción con su receptor, hay la necesidad de que entre en acción la acetilcolinoesferasa. La acetilcolinoesferasa hace la hidrolisis del neurotransmisor, convirtiéndolo en ácido acético o acetato o acetilcoenzima más colina, estos productos vuelven nuevamente a la neurona y se vuelve a formar acetilcolina. ¿Dónde es que actúa el gas sarin?, lo hace inhibiendo la

acetilcolinoesferasa (no hay degradación de la acetilcolina), elevando la
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concentración de la acetilcolina, lo que puede originar hasta la muerte de la persona, entonces este es el efecto que produce este gas y algunos otros derivados de estos tóxicos Por otro lado, podemos ver que acciones de compuestos tóxicos o benéficos su acción es a nivel de enzimas, ya sea en enzimas que forman parte de una víametabólica o enzimas que intervienen en todo un proceso fisiológico, vale decir químico, que se va a convertir en una acción física, por eso la importancia de las enzimas. Lo que les quiero decir es el hecho de que ustedes frente a un caso clínico, donde ustedes lo primero que ven son los síntomas, la explicación no solo queda ahí, ya se tiene mucha información de cómo ese síntoma tiene una explicación bioquímica, es más hasta molecular a nivel de ácidos nucleicos Enzimas, ¿cómo definimos las enzimas?, por mucho tiempo se dijo que eran macromoléculas proteicas que se encargaban de las reacciones químicas del organismo vivo, es decir nosotros somos un laboratorio de química andante, por eso vean con buenos ojos a la química, en especial la bioquímica. Pero miren, puse la palabra ³moléculas proteicas´ entre signos de interrogación porque esta definición ha cambiado gracias al descubrimiento de las famosas Ribozimas; en el años de 1982 Thomas Cech publica un artículo mostrando que existían porciones de RNA que tenían actividad catalítica, sobre todo a nivel de RNA transcritos. Ese mismo año SidneyAltman también publica un artículo donde explica la acción de la enzima ribonuecleasa P, explicando que también tenía activdad catalítica, en su investigación descubrió que no todo era proteína, había una porción de RNA de 377 nucleótidos que formaban parte de la composición de la enzima, tenía una parte proteica y una nucleotídica.

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Entonces aísla las porciones y descubre que la parte que hacia la célula analítica era nada más y nada menos que la parte nucleotídica, esa porción del DNA y no la parte proteica. También llego a la conclusión de que había porciones o habiaRNAs con actividad catalítica y le dio el nombre de ribozima. Ahora, ustedes van a ver este tipo de acciones de ribozimas componentes cuando vean los ácidos nucleicos; donde se ven que participan en la formación de los exones, porque un RNA naciente, no todo ello tiene información; hay la liberación de intrones, juntar exones, porciones que son fibras reactivas y recién ahí pasar formar ARN maduro. Y esto es lo que vemos acá, el proceso de corte de empalme, al RNA como sustrato, RNA naciente, pre trancrito y ven ustedes aquí la acción catalítica la ribozima haciendo la escicion en el RNA naciente para finalmente dar lugar a porciones de RNA donde haya información y posible RNA que no la tiene ¿cuántas de las porciones de RNA realmente van a seguir el proceso de una transcripción o el proceso de traducción?, bueno aquella parte del DNA que contenga los exones, ya que son los núcleos que contiene la información; entonces esa es la tarea de la ribozima que se le atribuye en la actualidad. Pero no son los únicos, esto ya es un experimento que ha llevado a cabo en laboratorio. Haciendo estudios con enzimasy viendo que ellas pasan por un estado de transición antes de formar producto (lo que vamos a ver más adelante en la formación de la enzima sustrato) en el laboratorio se sintetizo adrede este estado de transición (les adelanto que el estado de transición de las enzimas, es mitad producto y sustrato, osea, no está definido). Pero en el laboratorio se diseñó ese estado de transición, y ahora se dice ¿qué tal si este estado de transición creado, lo hacemos reaccionar con un anticuerpo?, a ese compuesto que es químicamente muy parecido al estado de transición de una enzima se le denominó abzima ¿Y, qué cosa es lo que
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se observa?, se puede ver que este anticuerpo monoclonales hacia escisión. y de ahí surge el nombre de abzima: anticuerpo con actividad catalítica. Entonces, ya cambia la definición de las enzima, ya no pueden ser moléculas proteicas, ahora son macromoléculas biocatalizadores, pueden ser porciones de RNA con un tamaño grande, pueden ser proteínas de tamaño grande ¿y quién sabe que otras cosa más encontraremos más adelante?, bioquímica no es algo estático sino que está cambiando con el tiempo y está buscando novedades. Y ahora, ¿por qué son tan necesarias las enzimas en el sistema biológico?, las reacciones químicas se van a expresar en acciones, si yo en este momento los observo, hablo es porque en este momento se está realizando una cantidad de reacciones químicas a una velocidad ideal, ¿sería posible que estas reacciones químicas, que se expresan en acciones, pudieran darse en temperatura ambiente, a ph constante, a una cantidad de energía baja y homogénea para todo?, de ninguna manera, es decir, miren, la tortuga sería más rápida que ese individuo; entonces necesitamos que las reacciones químicas se den a una velocidad ideal, estable, de tal manera que todo se concatenize, por ejemplo, las vías metabólicas son como una gran vía expresa, con segundo nivel, derecha e izquierda, arriba-abajo: completa, la idea es que todos los carros vayan por ahí sin que choquen y que todos lleguen a su destino; Usted ¿le va imprimir mayor velocidad a una vía para que todos choquen y se traben ahí?, no, deben ir a una velocidad ideal para que todo se mueve de una manera organizada; entonces a temperatura ambiente (20 grados centígrados) no sería posible conseguir ello a excepción de algunos organismos naturalmente, nos estamos refiriendo alos organismos humanos, entonces a temperaturas y PH de seres vivos, las reacciones químicas no se realizarían por si solas porque
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habria insuficiente energía para las contracciones musculas, la transmisión de impulsos nerviosos y toda ese seria de características que nos permitan decir que es un ser vivo; entonces necesitamos acelerar esas reacciones. Entonces hemos concluido que a temperatura ambiente no posible, puede ser

entonces como aumentaría la velocidad de reacción para que

todas las reacciones de un ser vivo se den normalmente, bueno una manera seria elevando la temperatura porque si se eleva la temperatura en una reacción química la velocidad de reacción se va a acelerar y por lo tanto podría darse lugar a acciones físicas. Pero esto no se puede hacer en un organismo humano ± si a los 40° centigrados ya convulsionamos y 40° centígrados no sería suficiente± por ello surgen las enzimas. Las enzimas van a disminuir la energía de activacion y con esto ellas van a acelerar la velocidad de reacción a un punto ideal de tal manera que todo el uso metabolico quede concatenado sin lugar a otro paso de las vías metabolicas. L as enzimas se clasifican en 6 clases: La primera de ellas es la clasificación de OXIDO-REDUCTASAS que catalizan reacciones de oxido-reduccion y las enzimas que mas vamos a ver son las hidrogenasas que se caracterizan por tener como coenzima a componentes derivados del complejo B como NAD (Nicotin Adenin Nucleotido), FAD (Flamin Adenin Nucleotido); uds. van a ver que en este tipos de enzimas la acción catalica radica en las coenzimas. Dentro de la clase oxido-reductasa hay sub clases y sucesivamente lo que indica que hay una familia que conforman esta clase, pero quiero que recuerden en esta ocasión a la subclase deshidrogenasa como por ejemplo la enzima succínico deshidrogenasa con la coenzima FAD que es la que realiza el que haya trabas en uno u

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proceso de oxido-reducción convirtiendo el acido succínico en acido fumarico y formando FADH2. Ejemplos: Hidrgogenasas

La segunda clase la conforman las enzimas llamadas TRANSFERASAS como lo dice su nombre pueden transferir grupos fosfatos, aminos, glucosidicos, monocarbonados, etc. Una de las subclases más resaltantes son las llamadas quinasas como por ejm las piruvato-quinasa o la fosfoprotein-quinasa, las quinasas siempre tienen como compañía al ATP dado que le quitan un grupo fosfato y lo transfieren al sustrato, otra subclase son las llamadas transaminasas o aminotransferasas que transfieren grupo amino (ejm. un aminoácido que tiene el grupo amino (alanina) se lo da a un cetoacido [ -cetoglutarato), y asi este cetoacido se convierte en un aminoácido (glutamato) y el aminoácido que ha cedido su grupo amino se convertirá en un cetoacido(piruvato)]. Ejm: Quinasas

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Ejm: Transaminasas

HIDROLASAS:

Catalizan la ruptura

de enlaces

químicos

con la

participación de las moléculas de agua, ésta es la clase de enzimas migrante. Aquí por ejemplo estan las peptidasas o proteasas (aquellas que rompen enlaces peptídicos). Miren ustedes aquí a la ureasa:

Esta es una molécula Simplemente la ha desdoblado en Medicina Humana. Promoción 2011 10 de urea, ¿que hizo la dos moléculas como producto, ureasa con la urea? con la activación de agua

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Y lo mismo sucede con el caso de las lipasas, que van migrando como acidos grasos (similar a deshojar margaritas): primero uno, luego otro y otro.

Y finalmente 2 a la múltiplo de la lipasa LIASAS:su objetivo principal es formar o quitar dobles enlaces.  Si el sustrato tiene doble enlace lo convierte en un producto que no tiene doble enlace.  y si el sustrato no tiene doble enlace lo convierte en uno de doble enlace Para ello van a eliminar o formar agua, ion amino (NH3 O NH2),CO2.
En este caso, el agua ya no aparece en el producto, sino forma parte de la molécula

ISOMERASAS: realizan aldosa, cetosa, cis, trans

acciones de isomerización de tipo ceto, eno,

Para que se den cuenta, observen el nombre, grupo Medicina Humana. Promoción 2011 (COO-) y formula que presenta

Ahora,noten la diferencia con el producto: cambio de 11 posición (como las isómeras)

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LIGASAS: ligan o desligan (tambiénrealizan acciones contrarias).Cuando ligan,siempre estan rodeadas deATP como las quinasas, con la diferencia que estas (las ligasas) no van a fosforilar el sustrato sino solo hacen una ruptura del enlace fosfoanhidro del ATPy usan la energía liberada para formar dos compuestos. Comoejemplo tenemos el caso de propionil CoA.

Este propionil CoAva a recibir ATP y ion bicarbonato, luego, usara

la

energía del enlace fosfoanhidro del ATP para unir este dos compuestos (bicarbonato y propionil CoA ). También se puede realizar la acción contraria. NOMENCLATURA Al igual que nosotros, las enzimas también tienen su DNI o código en números. La Enzyme Comission (e.c.)ha designado a las enzimas, además de clasificarlas por grupos y subgrupos, se les ha dado un número sistemático.
El nombre sistemático está basado en el donador, el aceptor y en la clase Medicina Humana. Promoción 2011 12

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En el número sistemático el primer número indica el grupo: clase 2, el subgrupo de esta clase 2 es en este caso 7 (lo que transfiere los fosfatos es subclase o subgrupo 7) y luego viene el sub-sub grupo o sub-sub clase: 1 y finalmente el número de la enzima propiamente dicha.

En el caso de las HIDROLASAS habría que ver quien es el sustrato, quien es el producto, y en base a eso reconocemos o formamos las peptidasas, proteasas. Entonces tenemos que ver el sustrato y el producto y en base a eso se utiliza el nombre sistemático de la enzima, de acuerdo. Ahora usualmente se usa« ejem miren, dios mio; ATP¶s, fosfatos, nitratos, José Luis alias chicho. Entonces usualmente lo que ustedes van a encontrar es justamente enzimas con nombres propios y por lo general mencionan al sustrato más la clase, el tipo de reacción que hacen o el producto mas el tipo de reacción que hace por ejemplo la fosfofructoquinasa ahí tendríamos que ver quien es el sustrato fructosa 6-fosfato. El producto fructosa 1,6difosfato y así fosfotransferasa. Se ve casos así aunque generalmente no lo usamos. Lo llamamos fosfofructoquinasa. De acuerdo, en el uso diario de las enzimas este nombre a usar es el que sea más sencillo. Las enzimas en aras de explicar como ellas funcionan, se establecido es tipo de acción o mecanismo de reacción« como pueden ver enzimas mas sustrato da este complejo enzima-sustrato al cual vamos a llamar estado de transición y finalmente enzima mas producto. Vamos a ver en el balance de cinética que la enzima no pertenece no forma parte del producto de tal manera que esta enzima puede venir acá y coger una molécula del sustrato, formar el estado de transición y salir con el producto con la posibilidad de emparejarse con
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otro sustrato; hasta que la vida media de la enzima concluya. Pues ahí podemos ver que es el estado de transición, esto que esta acá (revisar clase actualizada). Recuerdan que vimos el caso de las abzimas, vimos que en el laboratorio se había diseñado adrede químicamente la estructura del estado de transición de la enzima, que frente a haptenos actúan como anticuerpos monoclonales. Y vimos que el anticuerpo monoclonal tenía acción catalítica. Ósea hacia un incisión formando el producto. Entonces este estado de transición como se lo define, es un estado en el cual es ser y no ser, como así, el sustrato esta medio distorsionado, es decir no es producto propiamente dicho pero tampoco es sustrato, en la vida hay cosas no definidas. Entonces eso es el estado de transición. Ahora dijimos que la enzimas lo que hacen es agregar la velocidad de reacción disminuyendo la energía de activación ¿Cómo explicamos eso? Tienen ustedes aquí en el primer cuadro una reacción química con la presencia de catalizadores inorgánicos por ejemplo metales de transición como: rubidio. Entonces toda reacción que se convierta en producto. Tenemos ahí al sustrato debe pasarllegar a esta lomita- la cual nos representa el estado de transición, al estado de es y no es para al final ser. En productos. Y finalmente miren de aquí llega a productos. Pero para que este sustrato llegue al estado de transición se requiere una energía. Hay que ver el posicionamiento de los grupos y el sustrato, no es cierto, hay que romperlo« entonces para ser producto tienen una energía de activación. Lo ven aquí en el esquema. Ahora que pasa si usamos la enzima, la idea es que la enzima llegue al estado intermedio con otra energía de activación y finalmente da el producto, por eso es que las enzimas aceleran la velocidad de reacción por medio de disminuir esa energía de AC TI VA CI ON. De acuerdo. Bien hasta acá alguna duda? Muy bien, uhm, una ventaja de usar las enzimas esta en la especificidad que posee.

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¿Qué entendemos por especificidad? Es decir las enzimas reconocen determinado grupo de sustratos, y solomente actuan sobre ese grupo de sustratos por ejemplo, si se saca una muestra de sangre y se obtiene suero, en suero humanos hay una serie de metabolitos si se quiere determinar por ejemplo glucosa y solo glucosa en el suero, se puede hacer por varias formas pero dos principalmente, haciendo uso de un metodo quimico y por metodo enzimatico, por mucho tiempo se utilizo la reaccion de ortotolidina para determinar glucosa en una muestra de suero, y finalmente se uso un metodo enzimatico, pero que pasab con los metodos quimicos, por ejmeplo pudiera ser que este individuo tuviera alta cantidad de galactosa y se creia que los niveles de glucosa estarian aumentados pero no era galactosa, entonces con un metodo enzimatico donde se utiliza la bateria de enzimas, la primera de ellas la glucosa oxidasa esta enzima solo reaccuona con glucosa en suero, no lo hace con galactosa, entonces podria dar valores reales de glucosa en la muestra de suero, esto es lo que se denomina la especificidad. Especificidad absoluta solo un sustrato para una enzima y a medida que se ha ido descubriendo enzimas se ha visto que no todas son asi, hay enzimas que tiene especificidad relativa la mayor cantidad, a que se refiere con esto al sentido que tiene mas de un sustrato por ejemplo fosfatasa acida su sustrato puede ser paranitrofenilfosfato mas importante, glicerol fosfato, fenil fosfato, entonces no tiene un solo fosfato sino un grupo de sustratos sobre el cual actua. Pero comparando las enzimas con catalizadores inorganicos definitivamente su especificidad es tremendamente alta, entonces esta especificdad se ha visto en terminos de quimioselectividad, regioselectividad y enantioselectividad. Quimioselectividad o sea ella es especifica para un determinado grupo de sustratos que tiene un grupo quimico comun, como la
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fosfatasa acida que tiene el paranitrofenilfosfato, que tiene el fenilfosfato o el glicerol fiosfato en comun, tiene el comun el fosfato, entonces esto es quimioespecificidad o qimioselectividad, otrop ejemplo serian las amino oxidasas, las L amino oxidasa estas enzimas hacen que esta reaccion solo con aminoacidos de tipo L, oxigeno, agua forman el cetoacido, el amonio y peroxido de hidrogeno ¿es una transaminasa? Tiene amino es entonces una transaminasa ¿ si o no? ¿Qué es una transaminasa? Transfiere grupo amino de un aminoacido a un cetoacido dando lugar a un nuevo aminoacido. Ruptura de agua son hidrolasas, este grupo de enzimas por tener oxigeno tiene una funcion mas compleja, por tener oxigeno estan dentro del grupo de oxido reduccion, en el subgrupo de oxidasas. Enantioselectividad este es el caso de las lipasas, se encuentran en la clase hidrolasa, porque rompen los tres gliceroles en ácido graso más glicerol, pero las lipasas también hacen una acción contraria hacen una reacción de esterilización, en la explicación por qué, porque vamos a formar un ester, entonces las lipasas cuando se les controla la cantidad de agua en el sistema pueden hacer la reacción contraria, alcohol más un ácido forman un ester, entonces las lipasa va a hacer una reacción de esterificación, pero hay lipasas que tienen una enantioselectividad o enantioespecificidad de que manera, tenemos un alcohol que está en su forma en la célula, 50% de R alcohol y 50% de S alcohol, una mezcla de las formas de configuración óptica del alcohol R y S, tenemos aquí a la celulasa y la lipasa va a formar un ester como una de las formas enantiométricas del alcohol, según el ejemplo solo formara un ester con la forma R del alcohol dejando la forma S, de tal forma pues de que S ,esta reacción, puede servir para poder proporcionar una pureza enantiométrica al producto, no quiero que sea un ester mezclado con la forma S, entonces esta reacción de enantioselctivo de la lipasa contribuye a que se forme un producto con una determinada
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pureza enantiométrica y esto es importante en el caso de la farmacología, ustedes llegaron a saber del caso de la talidomida por ejemplo? La talidomida es un compuesto farmacéutico que lo tomaban mujeres embarazadas sobre todo para aliviar un poco las nauseas y los estragos que producen los primeros meses de gestación, por un tiempo funciono normalmente si ninguna complicación, pero de repente se pudo ver que mujeres que consumieron un determinado lote con un código de producción para talidomida los niños que nacieron de estas madres nacieron con deformaciones físicas, algunas de ellas producían abortos, entonces al hacer un estudio de este tipo de personas que tenían en común haber consumido la talidomida, se observo que efectivamente era este compuesto el que causaba esta deformación, qué había pasado con la talidomida, la talidomida se produce y se encuentra en dos formas enantiométricas es un tipo de ester que puede ser un tipo R o un S, puede ser un R ester más S alcohol o un S ester más R alcohol, pero resulta que una de las formas enantioméricas de este producto es tóxico, entonces que había ocurrido con la empresa que formaba la talidomida, habían más R ester que S ester o en su defecto había más S ester que era el dañino que R ester, o sea había más lo dañino que lo benéfico, desde este momento no se fabrica medicamentos que no tengan una pureza enantiomérica porque se ha visto en los casos que una forma enantiomérica puede ser benéfica y la otra muy dañina o en su defecto una es benéfica y otra indiferente el captopril por ejemplo que es un compuesto para presión alta, son medicamentos que requieren una pureza enantiomérica, entonces producirlo como una sola es costoso, de ah que si un medicamento está muy barato pregúntese, tiene más de la parte benéfica, más de la parte dañina o no tiene nada y es indiferente, imagínese un individuo que sufre de la presión alta y este ingiriendo un medicamento que no tiene la fórmula que es benéfica, eso es atentar contra la vida de una persona, bien cómo se consigue esa pureza
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enantiomérica, una de las formas es usando enzimas que ayuden a formar productos enatioméricamente puros como es el caso de las lipasas, de algunas lipasas porque no todas las lipasas lo pueden hacer, entonces es aquí que la enantioselectividad de las enzimas juega un papel tremendamente importante. Este es el caso de la especificidad absoluta por ejemplo la succínicodeshidrogenasa que es una enzima que está en el ciclo de Krebs o del ácido cítrico, esa si solo tiene un sustrato el succinato no hace reacción con otro tipo de sustrato que sea parecido a él y que haga reacción catalítica, ustedes si ven uno parecido, no pero no es igual entonces la inhibe o sea no hay producto, la idea es encontrar un sustrato de estructura parecida y que diera producto. Pero en el caso de la succitinico-deshidrogenasa es una de las pocas enzimas que tiene una especificidad absoluta. Un sustrato para una enzima. Ahora, ¿dónde radica la especificidad, este tipo de especificidad en las enzimas? Tiene que ver mucho con el sitio catalítico de las enzimas. Miren, cuando hablamos de enzimas hablamos de macromoléculas, osea, compuestos formados por aminoácidos a la ³n´. ¿De acuerdo? Sin embargo, ¿cualquier parte de la enzima hace catálisis? No. De ninguna manera. Hay un sitio específico donde se realiza la catálisis. Hay un sitio donde se une, osea, si la enzima es una enzima que requiere de coenzima, aquí tiene que entrar introducida la coenzima. Y ella hace la acción catalítica. Si hay una enzima que no requiere de coenzima, es puramente proteica como el caso de la quimiotripsina, entonces por el sitio catalítico se va a realizar la acción catalítica. No lo va a hacer por aquí, ni tampoco por este lado de acá. Ese sitio catalítico debe tener un ancho, largo y alto ideal, para que el sustrato encaje ahí y podamos ver la acción catalítica.

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Pero, ¿cuántos aminoácidos conforman el sitio catalítico? ¿Serán 100, 200, 400, 1000, 5000? A lo mucho son 20 aminoácidos los que están en el sitio catalítico. Y de esos 20 aminoácidos, son pocos los que hacen la catálisis propiamente dicha. Bueno, ¿y qué harán los demás? Porque hay 20 aminoácidos y solamente pueden ser 2, 3, 4 nada más. Es que estos de acá, que están en el sitio catalítico, van a ayudar aquí, a hacer por ejemplo la función de qué, de atraer al sustrato. Bien, no hay sustrato. Por interacción de iones. Van a hacer el papel proteólico de sujetar al sustrato. Ya está fijo. Ya está atrapado. Ahora hay que acercarlo a aquellos aminoácidos que van a hacer la catálisis propiamente dicha. Que haga el espacio ideal para que el aminoácido que va a hacer la catálisis propiamente dicha sea este y pueda hacer la escisión por ejemplo, o pueda hacer la transferencia. Entonces, todo este grupo de aminoácidos no se están peleando, no se están diciendo: ³No. ¿Por qué no lo puedo hacer? Yo también lo puedo hacer´. No, no. Todos trabajan de manera cooperativa. Por ejemplo, en el caso de la que les he colocado de la quimiotripsina. Miren: hay un espacio que se llama bolsillo hidrofóbico de tipo catalítico, constituido por aminoácidos que tienen grupos R hidrofóbicos. Porque acá provoca pensar en los carbonos E de los aminoácidos. No. Ellos están haciendo enlace peptídico. Estamos hablando de proteínas. De acuerdo. Entonces, aquí juega un papel importante el grupo R de los aminoácidos. Cada aminoácido que tiene un carácter hidrofóbico, ¿no? Este grupo de aminoácidos está aquí, formando el famoso bolsillo hidrofóbico. Y ¿cuándo hacemos función de ese bolsillo hidrofóbico? Compuesto por aminoácidos con grupo R hidrofóbico. Pues justamente viene a atacar a la parte proteica. Aquí miren Uds. una porción de la proteína. Este es un aminoácido que tiene un grupo R con un anillo fenólico. Aquí está el enlace peptídico: el CO NH2 Y el resto de la proteína. Una porción de la proteína. ¿Qué es lo que va a hacer la quimiotripsina? Como es una hidrolasa, como toda una proteasa,
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va a escindir, va a cortar enlaces peptídicos. ¿Dónde es su núcleo de acción? El enlace peptídico. Entonces, la idea es que el enlace peptídico este en un alto, ancho y largo cercano a aquellos aminoácidos que van a hacer la catálisis propiamente dicha. Pero, para ello, el anillo hidrofóbico lo ha atrapado y lo acerca la parte del enlace peptídico al aminoácido que va a hacer la catálisis. ¿Qué aminoácido inicia la catálisis? Bien, esta serina, que tiene número 195. ¿Con qué lo va a hacer? ¿Con su carbono E? No señor. Con su grupo R. Tiene un grupo hidroxilo en el grupo R. con ese es que va a iniciar la catálisis. Va a hacer un ataque nucleofílico al enlace peptídico. Y con ello, se inicia todo el proceso de la catálisis. ¿Por qué 195? Si yo a la quimiotripsina la alargo, y estudio su estructura primaria, la serina que está en el sitio catalítico, ocupa el número 195 en la estructura primaria de la proteína. ¿Es la única serina que hay en la quimiotripsina? No. Hay otras serinas. Pero es la que viene en la posición 195 la que está ubicada en el sitio catalítico. Y lo mismo sucede con la histidina 57. Y con el aspartato 102. Entonces, la serina inicia la catálisis. Miren como es que los demás aminoácidos han contribuido a que ese enlace peptídico esté cerca a la serina. Ahora, ¿qué va a hacer la histidina? La histidina va a actuar como un catalizador básico general, activando al hidroxilo de esta serina que hace de nucleótido. Y el aspartato 102 va a estabilizar la carga positiva de esta histidina. ¿Se imaginan peleando a la histidina 52 y al aspartato 102 con la serina y no contribuyendo a que ella haga la acción catalítica propiamente dicha? De ninguna manera. Estos tres aminoácidos trabajando de manera cooperativa, para que la serina se lleve los honores. ¿Quién hace la escisión propiamente dicha? La serina. Entonces, ese es el papel del sitio catalítico y de los aminoácidos que están presentes en ella. Este es un ejemplo. De acuerdo. ¿Por qué es importante el sitio catalítico?

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¿Se imagina usted que al utilizar esta enzima en lugar de colocar serina («) haya una glicina? ¿Cree usted que haría acción catalítica? No podría hacerlo. Entonces justamente las mutaciones, las que son realmente fatales, las que realmente originan que la enzima no esté activa, no funcione. Entonces inmediatamente se piensa que hubo una mutación a nivel de los aminoácidos... ¿no? ¿Qué aminoácido nos da una enzima normal y que aminoácido nos da está enzima alterada? Y un aminoácido nos puede llevar a un triplete ¿verdad? Y el triplete nos puede llevar a ver qué tipo de variación se produjo a nivel del DNA. Por eso, alteraciones de las enzimas alteradas por estos aminoácidos, inmediatamente a usted le dan una idea del tipo de trastorno. Ahora ¿cómo se estudia? ¿Cómo se yo que es una arginina, que es una serina, cómo sé? Bueno« Se han creado inhibidores altamente específicos para estos aminoácidos Entonces, si yo quiero saber si la arginina es la que esta presente en esta enzima y la serina es responsable de la acción catalítica; entonces le pongo un inhibidor específico para serina, la incubo en la enzima, le pongo el sustrato para esa enzima y si la enzima no hace nada, no genera los productos, entonces yo digo: ³la serina es un aminoácido importante en el ciclo catalítico de esta enzima´ Me dice que algunas serinas tienen que ver con el ciclo catalítico de la
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enzima. Ahora, la pregunta que se podrían hacer es: ³pero si el ciclo catalítico es solamente la catálisis que ayuda a sujetar al sustrato a la molécula, ¿por qué solamente funciona con 20 moléculas? Señores, el ciclo catalítico tiene que tener un ancho, un largo, un alto ideal, tiene que ser tridimensional, poseer un espacio conformacional ideal termodinámicamente y eso contribuye, a eso contribuyen todos los aminoácidos de la proteína, Miren que ejemplo de cooperación. Todo contribuye a que se abra un espacio tridimensional ideal completamente para poder formar («) Por eso es que una enzima no puede ser una microproteína o un macromolécula, si no que se tiene una macromolécula. Bien, entonces explicamos también la acción catalítica de las enzimas y por qué se deshidratan. Esto dio lugar a dos importantes exponentes El modelo de la cerradura y llave dada por Emil Fisher y el modelo del sustrato inducido dado por Hoslan El modelo de Cerradura-llave dice que el ciclo catalítico tiene un espacio tridimensional definido y que siempre será así. Este cerca o no esté cerca del sustrato. Y la idea es que el sustrato encaje con la forma tridimensional de la enzima. Si no encaja« Ni modo. No hay catálisis. Entonces se postulaba la especificidad absoluta de las enzimas. Pero con el tiempo se pudo ver que a medida que se fueron aislando más
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enzimas se pudo ver que la gran mayoría no encajan con este tipo de modelo. Entonces surge el otro modelo. En el año de 1958, Hoslan sostiene que el ciclo catalítico no es una estructura de la proteína que esta predeterminada, o sea que tiene siempre esa misma forma. Si no que hay un cambio conformacional d la enzima a medida que el sustrato se va acercando. Y esto induce a que esta parte del ciclo catalítico adquiera, recién ahí adquiera, un espacio ancho, alto, largo, ideal para que el sustrato encaje y se pueda realizar la acción catalítica. Una vez que le sustrato se aleja, no es lo mismo. Este es el famoso modelo del encaje inducido.

Muchas gracias«.

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