Histologa (anatoma microscpica)

Objetivo: Mediante el uso de tcnicas microscpicas, comprender la micro-anatoma de clulas, tejidos y rganos, y correlacionar la estructura con su funcin.
Tcnicas de microscopa ptica ms usadas:

Combinacin de colorantes basfilos y acidfilos (por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrmico de Mallory) Histoqumica (Fosfatasa cida, PAS [cido peridico-Schiff]) Inmuno-histoqumica (uso de Ac contra estructuras especficas, conjugados con molculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas)
Microscopa electrnica de transmisin (MET) y de barrido (MEB)

Hematoxilina-Eosina: Tcnica de coloracin

Fijacin de la muestra con Formalina (solucin acuosa tamponada de formaldehdo). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (protenas pero no lpidos mal fijador de membranas).

Lavado y deshidratacin (serie de soluciones alcohlicas de concentracin creciente hasta el 100%). Extraccin del alcohol con Xileno, luego inclusin de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endurecimiento de la parafina Taco cortes de 5-15 de espesor con micrtomo que se montan sobre portaobjetos.
Coloracin con Hematoxilina: extraccin de la parafina con Xileno, rehidratacin del corte con soluciones alcohlicas de concentracin decreciente, y tincin con solucin acuosa de Hematoxilina. Coloracin con Eosina: deshidratacin del corte con soluciones alcohlicas de concentracin creciente, y tincin con solucin alcohlica de Eosina. Lavado con Xileno, agregado de un lquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente.

Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloracin

La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados). La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): Heterocromatina y nuclolos RNA ribosomal Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)

cido peridico-Schiff (PAS): Fundamento

El cido peridico rompe la unin entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehdo. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehdos para dar un color rojo prpura intenso.
La reaccin de PAS tie carbohidratos, y se usa para detectar: Grnulos de glucgeno Moco en diversas clulas

Membrana basal de los epitelios

Fibras reticulares del tejido conjuntivo