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Transcripcin en Clulas Procariotas

La expresin gnica se concretiza por la transformacin de la informacin gentica desde molculas de ADN a molculas de ARN y desde estas hasta los polipptidos correspondientes. Las molculas de ARN son sintetizadas usando como molde a segmentos especficos de ADN, en la reaccin de polimerizacin que es catalizada por la enzima conocida como ARN polimerasa. Debemos tener en cuenta antes de sumergirnos en el proceso de transcripcin: A) Los precursores en la sntesis de ARN (unidades estructurales) son cuatro ribonucletidos trifosfatados: rATP; rCTP; rGTP; rUTP B) La secuencia de bases, del ARN a polimerizar, esta determinada por medio de la secuencia de bases de la molcula de ADN utilizada como molde para su sntesis. He ah que se la denomine Cadena Molde de ADN. C) La cadena de ARN crece en direccin 5 3. Esta direccin coincide con la sntesis de ADN. D) La ARN polimerasa, a diferencia de la ADN polimerasa, es capaz de iniciar su sntesis sin la presencia de ningn tipo de molcula cebadora.

Etapas en la sntesis del ARN mensajero Con la finalidad de ordenar el estudio de la transcripcin, dividiremos la misma en cuatro etapas fundamentales: 1 etapa2 etapa3 etapa4 etapaUNIN de la ARN polimerasa al ADN INICIACIN de la sntesis ELONGACIN de la cadena de ARN mensajero TERMINACIN de la sntesis y liberacin de la cadena de ARNm.

Caractersticas de la ARN polimerasa procariota La ARN polimerasa es una de las enzimas ms grandes que se conoce. Consta de cinco sub-unidades: dos alfa (), beta (), beta prima () y sigma (). La enzima completa es denominada Holoenzima y se divide en dos componentes principales: La enzima central, denominada Core, formada por las sub unidades 2, y El Factor Sigma ( el polipptido ) Los nombres indican que solamente la Holoenzima tiene la capacidad de unirse a la cadena molde de ADN e iniciar la transcripcin; pero una vez realizada esta, el factor es liberado, dejando que el Core contine con la elongacin. En definitiva, es el factor el que le da la capacidad a la ARN polimerasa para poder iniciar la sntesis del ARN mensajero en el sitio apropiado. 1

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La Holoenzima reconoce un sitio de unin especfico en el ADN, este sitio es denominado Promotor. Como consecuencia de lo dicho, la ADN polimerasa puede encontrarse en dos estados: 1) Un estado apropiado para la unin con el Promotor: estado de iniciacin u Holoenzima. 2) Un estado apropiado para la elongacin: Core de la enzima

La unin de la Holoenzima con el promotor, determina el Complejo Promotor Abierto, y esto es posible gracias a la presencia del factor

La ARN polimerasa es lo bastante grande como para tomar contacto con muchas bases del ADN, as la enzima cubre aproximadamente unas 60 pb (pares de bases), aunque el segmento de ADN desenrollado, y que sirve como molde, comprende nicamente unos 17 pb. El Promotor Procariota: la seal de inicio Se mencion anteriormente que la ARN polimerasa se una a un sitio especfico del ADN denominado Promotor. La enzima es capaz de reconocer este sitio del ADN y, convenientemente, abrir localmente las cadenas de ADN para poder leer la cadena molde. Es de esperarse entonces que, el sitio de contacto con la Holoenzima tuviese regiones comunes a todos los Promotores. Se ha comprobado que estos sitios mencionados contienen secuencias de bases comunes, a las que se las ha denominado Secuencias de Consenso. Por mera convencin entre los cientficos, se considera que el sentido de la transcripcin de un gen determinado es hacia la derecha. Al punto en el cual se inicia este proceso se lo denomina punto 0. Con nmeros negativos se sealan las bases ubicadas a la izquierda del punto 0. Con el mismo criterio, se sealan con nmeros positivos a las bases ubicadas a la derecha del punto 0. Punto de inicio de la transcripcin 3 -20 0 30 5 ADN molde

Sentido de la transcripcin La secuencia de consenso ms importante y mejor estudiada, comprende seis bases y su centro est ubicado a diez bases a la izquierda del punto de inicio (-10). La secuencia de consenso es TATAAT y se la denomina TATA box o Caja Pribnox. Esta caja es responsable de orientar a la ARN polimerasa en la direccin de sntesis de ARN y es la regin en la cual la doble hlice se abre para formar el Complejo Promotor Abierto. El hecho de que la TATA box contenga las bases A-T no es mera casualidad, ya que estas

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se unen con sus complementarias por medio de dos enlaces del tipo Puente de Hidrgeno, lo cual implica un menor gasto de energa para la apertura del ADN.

INICIACIN de la sntesis del ARN mensajero La iniciacin se produce mediante la unin de la ARN polimerasa (Holoenzima) al ADN de doble cadena. Para que la cadena molde est disponible para el apareamiento de bases con los ribonucletidos, las dos cadenas de ADN deben separarse. El desenrollamiento es local y se produce cuando la Holoenzima contacta con la TATA Box. Una vez que el complejo promotor se encuentra abierto, la ARN pol. Comienza la sntesis. La fase de iniciacin no se completa hasta que se hallan polimerizado los primeros seis ribonucletidos.

ELONGACIN de la cadena: Despus que se han colocado los primeros seis ribonucletidos, la ARN polimerasa sufre un cambio en su conformacin, perdiendo la sub unidad . Se contina la sntesis en el estado de Core anteriormente descrito. El Core se mueve a lo largo del ADN colocando los ribonucletidos complementarios a la cadena de ADN molde, abriendo la hlice a medida que se desplaza. Los ribonucletidos se unen al extremo 3 de la cadena de ARN en crecimiento, formndose un Hbrido ARN-ADN en la regin desenrollada, el cual se mantiene estabilizado mediante enlaces puente de Hidrgeno. El hbrido tiene una longitud aproximada de 12 pb y el nuevo ARN es liberado de estas uniones cuando el ADN recupera su estado de doble hlice por desplazamiento del Core.

TERNINACIN y LIBERACIN del ARN sintetizado La terminacin ocurre en una secuencia determinada del ADN, denominada Secuencia Ternimadora. En este punto, la enzima deja de aadir los ribonucletidos a la cadena de ARN en crecimiento, liberando el producto terminado y disocindose del ADN. La terminacin requiere que todos los enlaces Puente de Hidrgeno, que mantenan al Hbrido ARN ADN, se rompan volvindose a reconstituir el ADN dplex. Las secuencias terminadoras muestran las siguientes similitudes: i) Todas contienen secuencias Palindrmicas justo antes del punto de terminacin. El palndromo est caracterizado por poseer repeticiones inversas conteniendo un segmento central no repetido (ej. ATCATCGACTA). La secuencia palindrmica contina con una secuencia de pares A-T, las cuales producen en el ARN mensajero una secuencia de 6 a 8 Uracilos en el extremo transcripto. La secuencia de Uracilos suministra la seal que permite a la ARN polimerasa disociarse del ADN molde.

ii)

Biologa Molecular ESTRUCTURA DEL ARN mensajero PROCARIOTA

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Un ARNm que codifica para una cadena polipeptdica simple se denomina ARNm Monocistrnico. En clulas Procariotas es comn hallar ARNm que codifican para varias cadenas polipeptdicas diferentes, en este caso esta molcula se denomina ARNm Policistrnico. Todo ARNm contiene dos tipos de regiones, una codificante y otra no codificante. La primera, comprende una serie de codones que determinan la serie de aminocidos de la protena. Esta regin se extiende desde un codn de inicio (usualmente AUG) hasta un codn sin sentido. Raramente el codn de inicio se encuentre en el extremo 5 del ARNm, ya que a ste lo preceden centenares de bases que conforman una de las regiones no codificantes. El sector comprendido entre el extremo 5 y el codn de inicio se denomina Lider. Tampoco se traduce la secuencia comprendida entre el codn sin sentido y el extremo 3 del ARNm y, a esta regin, se la denomina extremo Trailer. Los ARNm Policistrnicos presentan secuencias de longitud variable que separan las regiones codificantes o Cistrones, estas se denominan regiones espaciadoras, usualmente de 10 pb. de longitud. Cada Cistrn posee un codn de inicio y uno sin sentido. Por lo general las protenas codificadas por un ARNm Policistrnico, participan en una misma va metablica (ver Opern Lac).

Esquema del ARNm policistrnico:

Extremo 5

Extremo3

LIDER

CISTRN

CISTRN

TRAILER

Secuencia espaciadora

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Transcripcin en Clulas Eucariotas La estructura de los ARNm y el proceso de transcripcin en las clulas eucariotas, es similar a lo expresado anteriormente para las clulas procariotas. Sin embargo, debemos considerar las siguientes diferencias: a) Las clulas eucariotas poseen tres clases de ARN polimerasas (I, II y III), las cuales se utilizan para sintetizar los distintos tipos de ARN existentes. b) Los extremos 3 y 5 de los ARNm estn modificados. En el caso del extremo 5 encontraremos una estructura denominada CAP y, en el correspondiente extremo 3, se encuentra adherido una larga secuencia de nucletidos cuya base nitrogenada es la Adenina (Cola Poly A) c) Las molculas de ARNm, luego de ser sintetizas, son modificadas. Los transcriptos primarios eucariotas sufren un proceso por el cual determinadas secuencias (Intrones) son eliminadas. d) Los ARNm eucariotas son Monocistrnicos. Las ARN polimerasas eucariotas: Ya se ha mencionado que, en las clulas del tipo Eucariota, encontramos tres tipos de ARN polimerasa las cuales se denominan: ARN polimerasa I, ARN polimerasa II y ARN polimerasa III. Sus composiciones en sub unidades son complejas y aun no se conoce en exactitud la funcin de cada una de estas sub unidades. Lo que s se conoce con exactitud, es la localizacin y el producto de cada una de ellas.

ENZIMA ARN Polimerasa I ARN Polimerasa II ARN Polimerasa III

Localizacin Nuclelo Nucleoplasma Nucleoplasma

Producto Pre- ARNr Pre-ARNm Pre- ARN t y ARNr 5S

El Promotor Eucariota para la ARN Polimerasa II Los promotores de la ARN Polimerasa II muestran una mayor variacin en secuencia y la enzima es incapaz de iniciar la transcripcin sola, sino que requiere de una serie de factores de transcripcin, los cuales son los encargados del reconocimiento de un promotor particular. Recordemos que, en las clulas Procariotas, el factor sigma es el que le confiere a la ARN Polimerasa la capacidad de seleccionar a cada uno de los promotores. En Eucariotas, al igual que en los Procariotas, las homologas en las regiones prximas al punto de inicio estn restringidas a secuencias relativamente cortas. La mayora de los promotores tienen una secuencia denominada TATA box o Caja Hogness, centrada a 25 Pb del punto de inicio. Esta TATA box es idntica a la

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mencionada en la Transcripcin de las clulas Procariotas, variando solamente en su localizacin. Los EXALTADORES o ENHACERS Los promotores Eucariotas no trabajan solos para asegurar una transcripcin eficaz. En algunos genes o tipos celulares, la actividad de un promotor est aumentada por la presencia de otra secuencia conocida como Exaltador o Enhacer. Las caractersticas de los Exaltadores son las siguientes: Estn formados por cientos de bases Generalmente incluyen secuencias repetidas Actan a distancia, miles de bases del promotor. Son activos en cualquier orientacin respecto al promotor, incluso suele encontrrselos dentro del mismo gen. Los exaltadores, entonces, actan como reguladores de la expresin gnica. No est claro an el mecanismo de accin de los exaltadores, ms an cuando estos se encuentran localizados a cualquier distancia (1000 a 2000 Pb) y direccin del mencionado promotor. El ARN mensajero en Eucariotas: Si bien la sntesis y estructura de los ARN mensajeros en Eucariotas es similar a las Procariotas, deben mencionarse las siguientes diferencias: a) Ambos extremos estn modificados, el 5 presenta una estructura denominada CAP (caperuza) y el 3 contiene una secuencia de cido Poliadenlico denominada Cola Poly A. b) La molcula que sirve de molde para la sntesis de protena (ARNm maduro) es ms corta que el ARN mensajero recin sintetizado (Pre ARN mensajero). Esto se debe a que los ltimos sufren un proceso de eliminacin de secuencias no codificantes. Dicho proceso se denomina Splicing. Modificaciones de los extremos del ARN mensajero Eucariota: El extremo 5 contiene dos nucletidos conectados que siempre estn metilados (-CH3). La reaccin de la incorporacin del CAP ocurre inmediatamente despus de iniciada la transcripcin y siempre precede a cualquier modificacin que se le realice al ARN m precursor. El CAP tendra la funcin de proteger al ARNm de la degradacin, con lo cual aumenta su vida media. En el extremo 3, segn se mencion antes, los ARNm Eucariotas contienen una secuencia de 20 a 200 nucletidos que poseen como base nitrogenada a la Adenina. La secuencia Poly A no est codificada en el ADN, sino que es aadida al ARN despus de finalizada la transcripcin. La funcin de la Cola Poly A es la de aumentar la estabilidad de los ARN m.

Biologa Molecular Splicing de los precursores de ARNm en Eucariotas:

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Los Pre- ARN m en Eucariotas, contienen largas secuencias no codificantes que corresponden a la transcripcin de regiones del gen conocidas como Intrones. Todos los genes Eucariotas poseen una organizacin particular, en ellos se distinguen secuencias que se expresan (Exones) y secuencias no codificantes o que no tienen su contrapartida con la protena traducida (Intrones). Por lo mencionado, se dice que los genes en clulas Eucariotas son Discontinuos. Todos los Pre- ARN m sufren un proceso denominado Splicing, que tiene como finalidad eliminar a los Intrones (secuencias no codificantes). Este proceso ocurre en el ncleo y da origen al ARN m que ser desplazado al citoplasma, para ser partcipe del proceso de Traduccin. En el Splicing son descartados del 50% al 90% del Pre-ARNm (transcripto primario). Los elementos remanentes (exones) son unidos o ensamblados. El nmero de intrones, generalmente sobrepasa al de los Exones. No esta dems aclarar que, durante el Splicing, No son eliminados el CAP ni la Cola Poly A. La reaccin de Splicing es realmente precisa, esta precisin se basa en el reconocimiento de secuencias de bases particulares ubicadas en la zona de unin entre el Intrn y el Exn adyacente. En las zonas de corte o escisin se puede encontrar Secuencias de Consenso.

Figura N 1 : Estructura del Pre ARN mensajero Eucariota. Observese los Exones 5y 3ubicados a ambos lados del Intrn, en el cual se encuentra el punto de ramificacin.

La reaccin de Splicing puede dividirse en dos etapas. En la primera se produce el corte en el extremo 5del Intrn. El mismo extremo a su vez se une a una secuencia del Intrn denominada Punto de Ramificacin, formando as un Lazo. Como consecuencia de este primer paso se obtienen dos molculas, las cuales son: el Exn 5 libre y el Intrn-Lazo-Exn 3. En la segunda etapa de corta el Exn que permaneca unido al Intrn-Lazo y se une al Exn 5. En la reaccin de Splicing participan pequeas partculas ribonucleoproteicas, las sn RNP (smoll nuclear RiboNucleoProtenas).

Biologa Molecular Splicing Alternativo

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Hay situaciones en las cuales la regin promotora y el sitio de terminacin de la transcripcin son nicos y por lo tanto, siempre se sintetiza el mismo Pre ARNm en todos los tipos celulares. Sin embargo, el Splicing vara en distintos tipos de clulas, el Splicing es Alternativo y esto originar ARNm de diferente ndole. Es decir, ante una misma secuencia de ADN segn el Splicing que se realice en los distintos tipos celulares, se pueden obtener distintos ARN mensajeros. En definitiva, se obtendrn distintas Protenas a partir de una misma secuencia de ADN molde.

Figura N 2: Proceso de Splicing. En la primer etapa es separado el Exn 5 del Intrn, este ltimo se pliega sobre s mismo conformando el complejo Intrn Lazo Exn. En la segunda etapa es escindido el Intrn y se unen los dos exones correspondientes.

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Regulacin de la Transcripcin
Dentro del metabolismo celular, encontraremos enzimas que son necesarias en forma continua y otras que solo se necesitan en determinadas circunstancias. Las primeras se sintetizan siempre, mientras que las segundas solo son sintetizadas en determinadas condiciones. Es decir que, la clula, debe contar con mecanismos que le permitan regular esta sntesis, ya que sera un gasto de energa innecesario el transcribir y traducir una protena que luego no ha de ser utilizada. Los principales mecanismos de regulacin de la expresin gnica, recaen en el proceso de transcripcin. Es as como, la clula podr elegir qu genes transcribe y cules no, dependiendo de las necesidades metablicas reinantes en ese momento. Cada da se postulan ms mecanismos por los cuales la transcripcin puede ser regulada, nosotros nos dedicaremos al estudio del mecanismo clsico de regulacin: el Modelo del Opern. El Modelo del Opern fue descripto en clulas Procariotas, por los investigadores franceses Francois Jacob y Jacques Monod, quienes se hicieron acreedores del Premio Nobel en el ao 1965. Tal como postularan Jacob y Monod, los grupos de genes que codifican para protenas asociadas se encuentran en unidades conocidas como Operones. Un Opern est constituido por: un Promotor, un Operador y Genes Estructurales. El Promotor, segn vimos en el apartado anterior, es el lugar del ADN en el cual se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripcin. El operador es una secuencia de nucletidos que se encuentra interpuesto entre el promotor y los genes estructurales. Los Genes Estructurales son las porciones de ADN que codifican para la sntesis de las protenas asociadas metablicamente. La transcripcin de los Genes Estructurales depende de la actividad de otro gen denominado Gen Regulador, que generalmente esta ubicado a unos cientos de pares de bases del sitio promotor. El gen Regulador codifica para una protena que tiene afinidad para unirse al operador. Siempre que el represor se encuentre unido a esta protena, se ver boqueada la unin de la ARN polimerasa al promotor, inhibindose as la transcripcin de los Genes estructurales. Por el contrario, cuando el operador se encuentre libre, la ARN polimerasa podr formar el Complejo Promotor Abierto y la transcripcin ser un hecho. Veamos ahora dos modelos especficos en la regulacin de la Transcripcin: El Modelo del Opern Lac y el Opern Triptofano. Opern Lac: En el estudio de las vas metablicas de la Bacteria Escherichia coli, se observ que las enzimas que intervienen en la degradacin de la Lactosa no siempre eran sintetizadas. Esto llevo a postular que la transcripcin de las mismas deba estar controlada, surgiendo as el modelo del Opern Lac. Es sabido que el principal combustible celular es la Glucosa, pero la clula puede recurrir, ante el dficit de este monosacrido, a la degradacin de otros compuestos para obtener la energa requerida. Uno de estos compuestos es la Lactosa. Los genes que intervienen en la produccin de las enzimas responsables del catabolismo de la lactosa se encuentran asociados, respondiendo al modelo del Opern. Contiguo a estos genes encontraremos entonces el operador y el sitio promotor.

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Ante la alta concentracin de glucosa, sera un gasto de energa innecesario que la clula sintetice las enzimas pertenecientes a la va degradativa de la Lactosa; ms innecesario an sera que estas enzimas fuesen sintetizadas ante la ausencia de la misma lactosa. Por esto, cuando la concentracin de lactosa es baja o la de la glucosa es alta, el gen regulador sintetizar una protena, el represor, que se unir al operador. Por lo dicho con anterioridad, al quedar el operador ocupado, la ARN polimerasa se ver imposibilitada de unirse al sitio promotor y, la transcripcin de los genes estructurales se ver inhibida. En el caso en el que la concentracin de Glucosa sea baja y la de la Lactosa sea alta, el regulador se unir a una molcula inductora de la transcripcin de los genes estructurales para la sntesis de las enzimas degradativas de dicho disacrido. El represor entonces no podr unirse al operador. Por consiguiente, al quedar este ltimo libre, la ARN polimerasa formar el Complejo Promotor Abierto pudindose producir la transcripcin de los genes estructurales. Ahora bien, la molcula inductora deber marcar la presencia de Lactosa en el medio y, quin mejor que la lactosa misma para cumplir con esta funcin. Es as como la Lactosa induce su propia degradacin. Opern Triptofano: A diferencia del Opern Lac, el Opern Triptofano regula la transcripcin de las enzimas que intervienen en una va anablica. Las cinco enzimas que regula este Opern pertenecen a la va anablica del aminocido Triptofano. Es ms que innecesaria la sntesis de un aminocido, por parte de la clula, cuando la misma contiene cantidades suficientes de l. Cuando la concentracin de Triptofano es la adecuada el represor inactivo, codificado por el gen regulador, se une a otra molcula que le confiere la capacidad para acoplarse al operador. Al estar el operador ocupado, la ARN polimerasa no podr formar el Complejo Promotor Abierto, por lo tanto, la sntesis de las enzimas intervinientes en la va anablica del Triptofano no son producidas. El co-represor, molcula que confiere la activacin del represor, es nada ms ni nada menos que el Triptofano. Es sumamente lgico que lo sea, ya que cuando hay una alta concentracin de Triptofano, no es necesario gastar energa en sintetizarlo. Si la concentracin de mencionado aminocido es baja, el represor no podr unirse al co-represor, por tal motivo el represor no adquirir la capacidad de unirse al operador. Al encontrarse el operador libre, la ARN polimerasa podr iniciar la transcripcin de los genes estructurales, obtenindose las enzimas necesarias para poder sintetizar este aminocido esencial. Diferencias entre el Opern Lac y el Opern Try: El Opern Lac interviene en la regulacin de la transcripcin de enzimas pertenecientes a la va catablica de la Lactosa, mientras que el Opern Try interviene en la regulacin de la transcripcin de enzimas pertenecientes a la va anablica del Triptofano. La Lactosa acta induciendo la transcripcin de los genes estructurales, mientras que el Triptofano acta como Co- represor, inhibiendo la transcripcin de los genes estructurales. Cuando hay alta concentracin de Lactosa, los genes estructurales se transcriben, en el caso de la alta concentracin del Triptofano, los genes estructurales No se transcriben.

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Figura N 3: Opern Lac. A) cuando la concentracin de glucosa en la clula es alta, los genes estructurales no son transcriptos. El represor se une al operador bloqueando la transcripcin. B) Cuando la concentracin de glucosa es baja y la de lactosa alta, esta ltima acta bloqueando la unin del represor al operador. La transcripcin se lleva a cabo.

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Figura N 4: Opern Try. A- Cuando la concentracin de Try es alta este, en funcin de CoRepresor, impide la unin de la ARNp al operador reprimiendo su sntesis. B- Cuando la concentracin del mencionado aminocido baja, el represor queda libre, impidiendo su unin al operador y generndose la sntesis de las Enzimas necesarias para la produccin de Triptofano.

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Traduccin
En el captulo anterior hemos desarrollado el proceso de transcripcin. A partir de una porcin de ADN, que contiene la informacin necesaria para la sntesis de protenas, se sintetiza el ARNm. Para que la sntesis de protenas llegue a su fin, es necesario traducir la informacin que lleva esta molcula. La secuencia de bases del ARNm debe cobrar significado indicando qu aminocidos y en qu orden deben formar parte de la cadena polipeptdica a sintetizar. Pensemos lo siguiente: Las protenas sintetizadas por las clulas estn formadas por 20 aminocidos distintos. Si la cadena de ARNm tomase sentido codificando cada base nitrogenada a un aminocido distinto, podra portar informacin suficiente para sintetizar 4 aminocidos (41 = 4). La Adenina, el Uracilo, la Citosina y la Guanina codificaran cada una para un aminocido distinto. Por consiguiente, nos quedaran fuera de nuestra codificacin 16 aminocidos. Por el contrario, si el cdigo cobrase sentido de a dos bases nitrogenadas, podramos codificar 16 aminocidos distintos (42 = 16), quedndonos fuera del cdigo cuatro aminocidos. Por ltimo, si el cdigo gentico cobrase sentido cada tres bases nitrogenadas, nos dara un total de 64 combinaciones distintas (43 = 64), con lo cual nos alcanza para codificar los 20 aminocidos que son utilizados para sintetizar las distintas cadenas polipeptdicas. Cada triplete del ARNm, denominado Codn, cobrar sentido al codificar qu aminocido deber acoplarse para sintetizar la protena en cuestin. De esto se desprende que, no solamente nos alcanza para codificar esa cantidad de aminocidos, sino que tambin nos sobra. Cuando los cientficos comenzaron a conocer el cdigo gentico se dieron cuenta que un aminocido poda ser codificado por ms de un triplete de bases del ARNm, por esta razn, diremos que el Cdigo Gentico es Degenerado. Otra de las caractersticas tpicas del Cdigo Gentico, es que ste es Universal, puesto que es idntico para todos los Organismos. Recientemente, se ha descubierto que hay ciertas excepciones a esta regla puesto que se ha demostrado que en las mitocondrias eucariotas no se sigue dicho Cdigo al pie de la letra y habra ciertos aminocidos que seran codificados por codones distintos a los ya conocidos. 2 Base 1 Base 3 Base U C A G

U C A G

Fenilalanina Fenilalanina Leucina Leucina Leucina Leucina Leucina Leucina Isoleucina Isoleucina Isoleucina Metionina Valina Valina Valina Valina

Serina Serina Serina Serina Prolina Prolina Prolina Prolina Treonina Treonina Treonina Treonina Alanina Alanina Alanina Alanina

Tirosina Tirosina STOP STOP Histidina Histidina Glutamina Glutamina Asparagina Asparagina Lisina Lisina A. Asprtico A. Asprtico A.Glutmico A.Glutmico

Cistena Cistena STOP Triptofano Arginina Arginina Arginina Arginina Serina Serina Arginina Arginina Glicina Glicina Glicina Glicina

U C A G U C A G U C A G U C A G

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Si observamos el Cdigo Gentico, podremos percatarnos que los codones que codifican para un mismo aminocido varan en la tercer base nitrogenada. Por ejemplo, la Valina es codificada por los codones GUU, GUC, GUA y GUG. Esto confiere al proceso de traduccin menor probabilidad de error ante la variacin de una base nitrogenada. Puesto que si el error recae en la tercer base, la posibilidad que ese error se traslade a la cadena polipeptdica ser menor. Los codones UAA, UGA y UAG no codifican para ningn aminocido, por esto son conocidos como los Codones Sin Sentido que marcan el fin en la sntesis de una protena. Si, por ejemplo, un ARNm es Monocistrnico poseer un solo Codn Sin Sentido. En cambio, si se tratase de un ARNm Policistrnico, ste poseer un Codn Sin Sentido por cada Protena que codifique. Traduccin: La sntesis de protenas requiere, adems del ARNm, otras dos clases de ARN: el ARN ribosmico (ARNr) y el ARN de Transferencia (ARNt). Estos tipos de ARN difieren estructural y funcionalmente con el ARNm. El ARNr es el ARN de mayor abundancia en la clula, los ribosomas estn formados por dos sub unidades, la mayor y la menor. Estn constituidos por 2/3 de ARN y 1/3 de protenas. La sub unidad menor de los ribosomas posee un sitio para la unin con el ARNm, mientras que la sub unidad mayor posee dos sitios por los cuales se une con el ARNt. Los ARNt son molculas pequeas, de entre 75 y 85 nucletidos de largo, con una conformacin especial; esta recuerda a la forma que adopta en el espacio una hoja de trbol. En su constitucin posee dos sitios de fundamental importancia, uno de ellos es el denominado Anticodn, formado por tres bases nitrogenadas que se unirn en forma complementaria a los codones del ARNm. El otro sitio relevante de la molcula es contrapuesto al mencionado y es el lugar de unin al aminocido. Funcionalmente, los ARNt juegan el rol de ser el diccionario por medio del cual se traduce el lenguaje del ARNm al lenguaje de los aminocidos. En el extremo 3 del ARNt se acopla el aminocido, siempre en este extremo encontraremos el triplete de bases CCA. Los dems nucletidos varan dependiendo el tipo de ARNt que se trate. La unin de los aminocidos a su respectivo ARNt est catalizada por un grupo de protenas denominada aminoacil-ARNt-sintetasas. Se conoce hoy, un grupo de aproximadamente 20 de estas enzimas, uno para cada aminocido. Cada una de estas enzimas posee un sitio para la unin con el aminocido y otro para su unin al ARNt. Dividiremos el proceso de traduccin en cuatro etapas: 1. Activacin de los aminocidos 2. Iniciacin 3. Elongacin 4. Terminacin 1-Activacin de los aminocidos: Para que el aminocido sea unido al correspondiente ARNt se necesitan dos reacciones qumicas que demandarn energa. La primera reaccin es la que aporta la energa necesaria para que la unin se produzca. Se escinde la molcula de ATP, se liberan dos grupos fosfatos y se forma un complejo entre el AMP y el aminocido en cuestin. Este complejo Aminocido- AMP Enzima, se mantiene intacto hasta que se encuentra con la molcula de ARNt correspondiente. En la segunda reaccin, la molcula de AMP se

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desprende de la enzima, formndose un enlace entre el aminocido y la porcin 3 del ARNt. Gracias a estas reacciones, el aminocido queda unido al ARNt y este complejo queda listo para formar parte de la sntesis proteica. Aminocido + ATP Aminoacil-AMP + ARNt Aminoacil-AMP + PPi Aminoacil- ARNt + AMP

2-Iniciacin: Una vez que los aminocidos son unidos a su correspondiente ARNt, estn listos para comenzar la sntesis de protenas. La primera etapa, la iniciacin, comienza cuando la sub unidad menor del ribosoma se une al ARNm, por su extremo 5. Cada ARNm posee, en forma previa al primer codn, una secuencia de bases complementaria a una secuencia de consenso de la sub unidad menor del ARNr. Una vez sucedido este, el primer aminoacil-ARNt se une, por medio de su Anticodn, al primer codn del ARNm. Se ha observado que, habitualmente, el primer codn del ARNm es el AUG. Si recurrimos al cdigo gentico veremos que, en consecuencia, el primer aminocido incorporado a la cadena peptdica en formacin es la Metionina. Sin embargo la Metionina, una vez finalizada la sntesis proteica, puede ser removida. La combinacin entre el ARNm, la sub unidad ribosmica menor y el aminoacil-ARNt es conocida como el Complejo de Iniciacin de la traduccin. Para que se vea posibilitada la formacin del Complejo de Iniciacin, es necesaria la participacin de ciertas protenas denominadas Factores de Iniciacin. En Procariotas se conocen tres de estos factores, mientras que en Eucariotas el nmero conocido hasta el momento asciende a once. A continuacin, la sub unidad mayor del ribosoma se une al complejo de iniciacin. Hemos mencionado que esta sub unidad contiene dos sitios por los cuales se unir con los distintos ARNt. Uno de ellos es conocido como Sitio P (peptdico) y el otro se denomina Sitio A (aminoacil). Es de suma relevancia destacar que la unin entre el primer ARNt y la sub unidad mayor, se propicia por medio del Sitio P. En consecuencia, una vez que la sub unidad mayor se encuentre acoplada al complejo de inicio, el sitio P se encontrar ocupado por el primer ARNt, mientras que el Sitio A se encontrar vaco. La energa necesaria para este paso, la suministra la hidrlisis de una molcula de GTP. 3- Elongacin: Al iniciarse esta etapa en el Sitio A, de la sub unidad mayor del ribosoma, se encuentra el segundo codn del ARNm. Un aminoacil ARNt que posea su Anticodn complementario al segundo codn del ARNm, ingresar al sitio A del ribosoma. Una vez que ambos sitios de la sub unidad mayor del ribosoma se encuentran cubiertos, la enzima de sta sub unidad, la Peptidil Transferasa, realizar el primer enlace peptdico entre los aminocidos portados por ambos ARNt. En dicho enlace interviene el grupo amino (NH2) del segundo aminocido con el grupo carboxilo (COOH) del aminocido anterior.

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As cada vez que ingresa un ARNt cargado al Sitio A y se produce la unin entre el grupo COOH del aminocido de la cadena en crecimiento y el grupo NH2 del Aminocido del Sitio A, se cumple la fase de elongacin. El primer ARNt, que estaba ocupando el Sitio P, rompe la unin que lo mantena adherido al primer aminocido y es liberado al medio. El ribosoma se desplaza un codn hacia el extremo 3 del ARNm. En consecuencia, el segundo ARNt incorporado en el Sitio A, se traslada al Sitio P, llevando consigo los dos aminocidos incorporados hasta el momento. De esta manera, en el Sitio A queda el tercer codn a ser traducido, ingresando al mismo un tercer aminoacil - ARNt que posee un Anticodn complementario al mencionado triplete de bases del ARNm. Nuevamente, la enzima ribosmica realiza la unin peptdica entre el segundo y tercer aminocido incorporado. El segundo ARNt es liberado al medio, quedando el tercer ARNt con los tres aminocidos unidos a l. De la misma manera que fue realizado en la etapa anterior, el ribosoma se desplaza un codn hacia el extremo 3 del ARNm, quedando ahora el tercer ARNt en la posicin P de la sub unidad mayor. El ribosoma seguir corrindose hacia el extremo 3 del ARNm y los aminocidos sern incorporados de igual forma a lo largo de toda esta etapa. Una de las formas por las cuales se logra que la traduccin se lleve a cabo a una velocidad mayor, es mediante el accionar de varios ribosomas a lo largo del ARNm. La estructura que forma esta multitud de ribosomas, traduciendo un mismo ARNt, es conocida como polisoma o polirribosimas. 4- Terminacin: El proceso descripto se llevar a cabo, en forma repetida, hasta que en la molcula de ARNm se encuentre un codn sin sentido. Tal cual lo expresamos con anterioridad, se conocen tres codones sin sentido, el UAG, el UUA y el UGA. No existe ningn ARNt que sea complementario a estos codones de STOP, de manera que no entrar ningn ARNt al Sitio A. Cuando se encuentra un Codn de STOP, la traduccin se detendr, la cadena polipeptdica se desprender y las dos sub unidades ribosmicas se separarn. Finaliza as el proceso de traduccin, obtenindose como producto la cadena polipeptdica en forma libre. Esta cadena proteica se libera as al citoplasma, pudiendo luego sufrir procesos post-traduccionales que la modifiquen activndola o desactivndola.

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Figura N 5: Traduccin Proteica. Las figuras A y B muestran la etapa de Iniciacin. Puede observarse en C, D y F la fase de Elongacin. La finalizacin de la Traduccin est representada en la figura F.

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