Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

cultivo. particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. Composición Digerido enzimático de caseína 10. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los . P. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. Para E. E. E.s. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Con la adición de cicloheximida. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos.0 g Dextrosa 40. a una concentración final al 5% (v/v). estreptomicina y penicilina. Evitar el sobrecalentamiento.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar.0 g Agua destilada c.6 ± 0.p. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos. x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado. Para S.0 g Agar 15. 1000 mL pH final 5. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante.

05 Agar 15.0 pH final: 5. En el medio de cultivo.6 ± 0. puede ser tanto en tubo como en placa.2 Siembra Depende del uso. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias. pues la exposición al calor hidroliza los componentes. particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. etc. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. También es útil para el cultivo de levaduras. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar.0 40. Consultar referencias de métodos recomendados. la pluripeptona y la glucosa. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos.). Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.0 0. El alto contenido de glucosa. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento. Resultados . se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10. Mantener en lugar fresco. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. Además. la presencia de cloranfenicol y el pH ácido. al medio de cultivo. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. pelo.

Fermenten o no lactosa o sacarosa. acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. 3. Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. 4. el medio permanecerá de color rojo. Produzcan o no ácido sulfhídrico. la superficie del medio continuará de color rojo. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. mientras que si no es fermentadora de glucosa. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1. 2. significa que la bacteria es productora de gas. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . 4. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro. mientras que si no lo es. Produzcan o no gas. Si aparece rotura o desplazamiento del medio. 3. ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado. pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. se presentará un ennegrecimiento del tubo. Si la bacteria problema fermenta la glucosa. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). 2. Fermenten o no glucosa. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC.

el cual vira al color amarillo en medio ácido. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7.5 g del polvo por litro de agua destilada. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa.2 Instrucciones 3. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.3 ± 0. lactosa. Esterilizar a 121°C por 15 minutos.0 0. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.20 5g 0. lactosa y/o sacarosa. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. en aerobiosis.0 10. el extracto de carne y la pluripeptona. el sulfato de hierro y amonio.0 Suspender 62. en base a la fermentación de glucosa.0 20. de color negro. o ruptura del medio de cultivo.0 5. La lactosa. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. Siembra A partir de un cultivo puro. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol. indica que el microorganismo produce gas. es la fuente de iones Fe . Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido .0 10. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro.2 0.30g 0. Incubación A 35-37°C durante 24 horas. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente. se producen ácidos. sembrar en TSI. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables.025 13.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0.0 1. Fundamento En el medio de cultivo. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico. Enfriar en pico de flauta profundo. Por fermentación de azúcares. El rojo de fenol es el indicador de pH.2 0. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. 4-La presencia de burbujas.

2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada.2 0. enteritidis ATCC 13076 S. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro.1 0. para originar un compuesto de color rojo. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. pneumoniae ATCC 700603 P. calentar agitando y hervir durante un minuto. mirabilis ATCC 43071 S. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro. flexneri ATCC 12022 P. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich. Mezclar hasta disolver.0 6. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. . x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. coli ATCC 25922 K. Cuando no se utiliza el citrato. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. typhimurium ATCC 14028 S.E. y particularmente de la tripteína. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas. por el cambio del indicador de rojo a amarillo. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul. En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol.2. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Es importante que la siembra se realice en línea recta. La decarboxilación de la lisina.2. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. . El citrato de hierro y amonio. Por decarboxilación de la lisina. que se extiende mas allá de la línea de siembra.. typhimurium ATCC 14028 S. se produce la amina cadaverina. enteritidis ATCC 13076 S. coli ATCC 25922 K. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. pneumoniae ATCC 700603 P. basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. tiene lugar en medio ácido. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo). pero que son fermentadores de la glucosa. horas. Cepas indol negativas: sin cambio de color. pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio. El purpura de bromocresol. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. especialmente Salmonella spp. mirabilis ATCC 43071 S.8. Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. morganii. Características Medio preparado: ámbar. pueden dar un color parduzco. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. Erlich. y el tiosulfato de sodio. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. Providencia y algunas cepas de Morganella. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. Se debe inocular el centro del tubo.3 ± 0. Las cepas de los géneros Proteus. la movilidad puede ser difícil de observar. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa. del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. desaminan la lisina.2 3. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.Agar pH final: 7. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. La producción de sulfuro de hidrógeno. de en Kovac´s o de aerobiosis. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar. es el indicador de pH. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. Microorganismo E. esto produce un ácido alfa-cetocarbónico. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. que sólo crecen en superficie. el cual. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. Fundamento En el medio de cultivo. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. y el fondo amarillo.5 Solidificar en posición vertical.

Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. Esto sucede con cepas del género Proteus. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. amarillo.5 0. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp.2 Instrucciones 5. Citrobacter freundii Morganella spp.04 0. Providencia y alguna cepas de Morganella spp. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación.0 1. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta.7 ± 0.0 10. lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa..* Edwarsiella spp. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Incubación En aerobiosis.0 0. Dejar embeber unos 15 minutos. durante 24 horas a 35-37 °C. Características Medio preparado: del color medio violeta.0 3. Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC. x 500g :Código: B02-106-06 . Calentar cuidadosamente.02 15. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. pueden desaminar la lisina.