Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

estreptomicina y penicilina. x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Para S. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. E. Evitar el sobrecalentamiento. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes.0 g Agar 15. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los .0 g Agua destilada c.s. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos.6 ± 0. Para E. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado. P. particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos.p. Con la adición de cicloheximida. E.0 g Dextrosa 40. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. a una concentración final al 5% (v/v). Composición Digerido enzimático de caseína 10. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. 1000 mL pH final 5.cultivo. AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.

También es útil para el cultivo de levaduras.6 ± 0. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. etc. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. puede ser tanto en tubo como en placa. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.05 Agar 15. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento.0 40. Resultados . particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. la pluripeptona y la glucosa.0 pH final: 5. En el medio de cultivo.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias.). Además. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar.2 Siembra Depende del uso. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C. Mantener en lugar fresco. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. al medio de cultivo. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción. pues la exposición al calor hidroliza los componentes. pelo.0 0. la presencia de cloranfenicol y el pH ácido. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10. El alto contenido de glucosa. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. Consultar referencias de métodos recomendados.

Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. 3. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). 4. 2. Fermenten o no glucosa. Produzcan o no gas. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. significa que la bacteria es productora de gas. mientras que si no es fermentadora de glucosa. 2. pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado. acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. se presentará un ennegrecimiento del tubo. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo. Si la bacteria problema fermenta la glucosa. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . 3. Fermenten o no lactosa o sacarosa. la superficie del medio continuará de color rojo. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1. 4. el medio permanecerá de color rojo. Produzcan o no ácido sulfhídrico. mientras que si no lo es. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro. Si aparece rotura o desplazamiento del medio.

0 10. El rojo de fenol es el indicador de pH. se producen ácidos.0 10. o ruptura del medio de cultivo. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.2 Instrucciones 3. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. Siembra A partir de un cultivo puro. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.0 Suspender 62. en aerobiosis.3 ± 0. en base a la fermentación de glucosa. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente. lactosa y/o sacarosa. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Por fermentación de azúcares.024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7.2 0.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo.025 13. Incubación A 35-37°C durante 24 horas. sembrar en TSI. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. 4-La presencia de burbujas. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.2 0. el sulfato de hierro y amonio. Esterilizar a 121°C por 15 minutos.0 0. es la fuente de iones Fe . 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico. el extracto de carne y la pluripeptona. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro. La lactosa. indica que el microorganismo produce gas.30g 0.5 g del polvo por litro de agua destilada. lactosa. Enfriar en pico de flauta profundo. de color negro. Fundamento En el medio de cultivo.0 1.el cual vira al color amarillo en medio ácido. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.20 5g 0. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables.0 20.0 5. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido .

aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. calentar agitando y hervir durante un minuto. typhimurium ATCC 14028 S. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro. coli ATCC 25922 K. . También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. enteritidis ATCC 13076 S. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. para originar un compuesto de color rojo. Mezclar hasta disolver.0 6. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul.2. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. Cuando no se utiliza el citrato. flexneri ATCC 12022 P.1 0. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. pneumoniae ATCC 700603 P. En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol. mirabilis ATCC 43071 S. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. y particularmente de la tripteína. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. por el cambio del indicador de rojo a amarillo. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo.2 0. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal.E. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido.Agar pH final: 7. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. horas. enteritidis ATCC 13076 S. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. desaminan la lisina. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa. es el indicador de pH. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. Las cepas de los géneros Proteus. Cepas indol negativas: sin cambio de color. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. coli ATCC 25922 K. mirabilis ATCC 43071 S. Fundamento En el medio de cultivo. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich.2.5 Solidificar en posición vertical. basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. tiene lugar en medio ácido. que se extiende mas allá de la línea de siembra. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. El purpura de bromocresol. el cual. -Algunas bacterias productoras de melanina como M.2 3. esto produce un ácido alfa-cetocarbónico. La decarboxilación de la lisina. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.. Es importante que la siembra se realice en línea recta. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo). pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. pneumoniae ATCC 700603 P. Se debe inocular el centro del tubo. Por decarboxilación de la lisina. . La producción de sulfuro de hidrógeno.8. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. y el tiosulfato de sodio. pueden dar un color parduzco. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. morganii. especialmente Salmonella spp. del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. typhimurium ATCC 14028 S. Erlich. Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. que sólo crecen en superficie. Providencia y algunas cepas de Morganella. la movilidad puede ser difícil de observar. se produce la amina cadaverina. y el fondo amarillo. de en Kovac´s o de aerobiosis. Características Medio preparado: ámbar. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. El citrato de hierro y amonio. pero que son fermentadores de la glucosa.3 ± 0. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. Microorganismo E. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar.

Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Providencia y alguna cepas de Morganella spp.02 15. pueden desaminar la lisina.* Edwarsiella spp. Características Medio preparado: del color medio violeta. agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. x 500g :Código: B02-106-06 .7 ± 0.0 0. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. lisina: Pico rojizo/fondo amarillo.0 1.04 0.5 0. Incubación En aerobiosis. amarillo.0 10. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta.2 Instrucciones 5. Calentar cuidadosamente. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción. Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC.0 3.. Citrobacter freundii Morganella spp. Dejar embeber unos 15 minutos. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6. Esto sucede con cepas del género Proteus. durante 24 horas a 35-37 °C. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación.

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