Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

s.cultivo. Composición Digerido enzimático de caseína 10. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos.0 g Agua destilada c. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Con la adición de cicloheximida. E. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los . 1000 mL pH final 5. estreptomicina y penicilina. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes.0 g Dextrosa 40. Para S. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar.6 ± 0.p.0 g Agar 15. Evitar el sobrecalentamiento. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa. Para E. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante. E. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. a una concentración final al 5% (v/v). P. particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas. x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud.

pelo. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar. Mantener en lugar fresco. En el medio de cultivo.6 ± 0. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C. al medio de cultivo. Resultados . se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver.0 pH final: 5. la presencia de cloranfenicol y el pH ácido.05 Agar 15.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias.). particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. Además. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. El alto contenido de glucosa. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento. Consultar referencias de métodos recomendados. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.0 40. puede ser tanto en tubo como en placa. pues la exposición al calor hidroliza los componentes. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10.0 0.2 Siembra Depende del uso. etc. la pluripeptona y la glucosa. También es útil para el cultivo de levaduras. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias.

Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. significa que la bacteria es productora de gas. mientras que si no es fermentadora de glucosa. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro. el medio permanecerá de color rojo. 3. Si la bacteria problema fermenta la glucosa. 2. 3. pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Fermenten o no glucosa. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). mientras que si no lo es. 4. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. Fermenten o no lactosa o sacarosa. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Produzcan o no ácido sulfhídrico. 2. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). la superficie del medio continuará de color rojo. Produzcan o no gas. acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. 4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio. ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado. x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. se presentará un ennegrecimiento del tubo.

aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. o ruptura del medio de cultivo. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Por fermentación de azúcares.3 ± 0.2 0. Incubación A 35-37°C durante 24 horas. de color negro.024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias.0 20.el cual vira al color amarillo en medio ácido. en aerobiosis. Enfriar en pico de flauta profundo.0 Suspender 62.0 0. sembrar en TSI.2 0. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. lactosa. se producen ácidos. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. el sulfato de hierro y amonio. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido . La lactosa. 4-La presencia de burbujas. lactosa y/o sacarosa.0 10. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.20 5g 0. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. indica que el microorganismo produce gas. Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7. Fundamento En el medio de cultivo. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. el extracto de carne y la pluripeptona.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0.30g 0.2 Instrucciones 3. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. es la fuente de iones Fe . los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro.5 g del polvo por litro de agua destilada.025 13. El rojo de fenol es el indicador de pH.0 1. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa. en base a la fermentación de glucosa.0 5. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Siembra A partir de un cultivo puro. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol.0 10.

mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo.2. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. coli ATCC 25922 K. mirabilis ATCC 43071 S. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro. y particularmente de la tripteína.2 0.0 6. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 P. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas. por el cambio del indicador de rojo a amarillo. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro.1 0. x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. pneumoniae ATCC 700603 P. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. typhimurium ATCC 14028 S. para originar un compuesto de color rojo. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. calentar agitando y hervir durante un minuto. . que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver. Cuando no se utiliza el citrato. También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo.E. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol.

Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. pneumoniae ATCC 700603 P. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. Por decarboxilación de la lisina. enteritidis ATCC 13076 S. desaminan la lisina. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. pero que son fermentadores de la glucosa.Agar pH final: 7. horas. .2 3. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. El citrato de hierro y amonio. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. Fundamento En el medio de cultivo. El purpura de bromocresol. Cepas indol negativas: sin cambio de color. Erlich. la movilidad puede ser difícil de observar. Es importante que la siembra se realice en línea recta. pueden dar un color parduzco.5 Solidificar en posición vertical. de en Kovac´s o de aerobiosis. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo). y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. y el fondo amarillo. Providencia y algunas cepas de Morganella.2.3 ± 0. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.8. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar. Las cepas de los géneros Proteus. coli ATCC 25922 K. pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido. y el tiosulfato de sodio. Se debe inocular el centro del tubo.. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. morganii. se produce la amina cadaverina. typhimurium ATCC 14028 S. especialmente Salmonella spp. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. La producción de sulfuro de hidrógeno. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. que sólo crecen en superficie. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. La decarboxilación de la lisina. esto produce un ácido alfa-cetocarbónico. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio. mirabilis ATCC 43071 S. el cual. Microorganismo E. que se extiende mas allá de la línea de siembra. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. Características Medio preparado: ámbar. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. es el indicador de pH. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. tiene lugar en medio ácido. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra.

0 1. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa.0 10.0 0.* Edwarsiella spp. x 500g :Código: B02-106-06 . Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Características Medio preparado: del color medio violeta. Citrobacter freundii Morganella spp. Esto sucede con cepas del género Proteus. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp.2 Instrucciones 5.5 0. durante 24 horas a 35-37 °C. Providencia y alguna cepas de Morganella spp. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta.0 3.02 15. pueden desaminar la lisina. Calentar cuidadosamente.7 ± 0. Incubación En aerobiosis. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp.Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6.04 0. amarillo.. lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Dejar embeber unos 15 minutos.

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