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Medios de Cultivo Agar

Medios de Cultivo Agar

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Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas. x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. 1000 mL pH final 5. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. Con la adición de cicloheximida. E. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. Para S.p. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes. estreptomicina y penicilina. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos.0 g Agua destilada c. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos. Composición Digerido enzimático de caseína 10.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. a una concentración final al 5% (v/v).cultivo. Evitar el sobrecalentamiento.0 g Dextrosa 40. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los .0 g Agar 15. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado.6 ± 0.s. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. Para E. P. E.

Consultar referencias de métodos recomendados. etc.05 Agar 15. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10.2 Siembra Depende del uso. pelo. puede ser tanto en tubo como en placa.0 0. la pluripeptona y la glucosa. En el medio de cultivo. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.6 ± 0. pues la exposición al calor hidroliza los componentes. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos.). se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción. Además. El alto contenido de glucosa.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias. Mantener en lugar fresco.0 pH final: 5. Resultados .0 40. particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar. También es útil para el cultivo de levaduras. al medio de cultivo. la presencia de cloranfenicol y el pH ácido. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C.

4. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. 3. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo. la superficie del medio continuará de color rojo. mientras que si no es fermentadora de glucosa. 2. pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro. mientras que si no lo es. 4. se presentará un ennegrecimiento del tubo. Fermenten o no glucosa. significa que la bacteria es productora de gas. Produzcan o no ácido sulfhídrico. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). Si aparece rotura o desplazamiento del medio. Si la bacteria problema fermenta la glucosa. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1. el medio permanecerá de color rojo. x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Produzcan o no gas. 2. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . 3. Fermenten o no lactosa o sacarosa. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado.

Incubación A 35-37°C durante 24 horas.0 0. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.el cual vira al color amarillo en medio ácido. el sulfato de hierro y amonio. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.30g 0. 4-La presencia de burbujas. lactosa y/o sacarosa. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. lactosa. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente. El rojo de fenol es el indicador de pH.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa.0 20. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. La lactosa.024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico. Fundamento En el medio de cultivo. Siembra A partir de un cultivo puro. en base a la fermentación de glucosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro.3 ± 0.2 0. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido .0 10.5 g del polvo por litro de agua destilada. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.025 13. se producen ácidos. o ruptura del medio de cultivo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos.0 5. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. es la fuente de iones Fe . sembrar en TSI.0 10. en aerobiosis. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.20 5g 0. de color negro. indica que el microorganismo produce gas.0 1. Enfriar en pico de flauta profundo. Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7. el extracto de carne y la pluripeptona.0 Suspender 62.2 0. Por fermentación de azúcares.2 Instrucciones 3.

Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. pneumoniae ATCC 700603 P. coli ATCC 25922 K. También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul. . En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol. enteritidis ATCC 13076 S. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro. x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono.2. Cuando no se utiliza el citrato. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. Mezclar hasta disolver. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich. flexneri ATCC 12022 P. typhimurium ATCC 14028 S. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura.1 0.0 6. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. por el cambio del indicador de rojo a amarillo. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. mirabilis ATCC 43071 S. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. calentar agitando y hervir durante un minuto. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. y particularmente de la tripteína.E. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro.2 0. para originar un compuesto de color rojo. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC.

la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. esto produce un ácido alfa-cetocarbónico.2 3. El citrato de hierro y amonio. . La producción de sulfuro de hidrógeno.5 Solidificar en posición vertical.Agar pH final: 7.2. pero que son fermentadores de la glucosa. especialmente Salmonella spp. Por decarboxilación de la lisina. Microorganismo E. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. pueden dar un color parduzco. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa. Características Medio preparado: ámbar. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. enteritidis ATCC 13076 S. Las cepas de los géneros Proteus. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. de en Kovac´s o de aerobiosis. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido. Se debe inocular el centro del tubo. y el tiosulfato de sodio. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. tiene lugar en medio ácido. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. se produce la amina cadaverina. Erlich. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. Es importante que la siembra se realice en línea recta. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. coli ATCC 25922 K. es el indicador de pH. que se extiende mas allá de la línea de siembra.8. y el fondo amarillo. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. morganii. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. typhimurium ATCC 14028 S. que sólo crecen en superficie.. basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. horas. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C.3 ± 0. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. pneumoniae ATCC 700603 P. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. el cual. mirabilis ATCC 43071 S. El purpura de bromocresol. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo). del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. Cepas indol negativas: sin cambio de color. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. desaminan la lisina. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. la movilidad puede ser difícil de observar. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio. Providencia y algunas cepas de Morganella. La decarboxilación de la lisina. Fundamento En el medio de cultivo.

Citrobacter freundii Morganella spp. Providencia y alguna cepas de Morganella spp. Esto sucede con cepas del género Proteus. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp. Incubación En aerobiosis. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.0 3.02 15..Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada.* Edwarsiella spp. x 500g :Código: B02-106-06 . Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Dejar embeber unos 15 minutos. agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa.0 10.2 Instrucciones 5.7 ± 0.0 0. durante 24 horas a 35-37 °C.0 1.04 0. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación. pueden desaminar la lisina. amarillo. Características Medio preparado: del color medio violeta. lisina: Pico rojizo/fondo amarillo.5 0. Calentar cuidadosamente. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción.

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