Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Evitar el sobrecalentamiento. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes. Con la adición de cicloheximida.0 g Agua destilada c. Para E. AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. estreptomicina y penicilina. Composición Digerido enzimático de caseína 10. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa.0 g Agar 15. E. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. E. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante.0 g Dextrosa 40.s. Para S. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los . x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel.6 ± 0. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC.cultivo. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar. a una concentración final al 5% (v/v). 1000 mL pH final 5.p. P.

También es útil para el cultivo de levaduras. Además. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. la pluripeptona y la glucosa. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10.). particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar. pues la exposición al calor hidroliza los componentes.0 pH final: 5.05 Agar 15. El alto contenido de glucosa. al medio de cultivo. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. la presencia de cloranfenicol y el pH ácido. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C. Resultados .2 Siembra Depende del uso. se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción. En el medio de cultivo.6 ± 0. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias. puede ser tanto en tubo como en placa.0 40. etc. Mantener en lugar fresco. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. Consultar referencias de métodos recomendados. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada.0 0. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento. pelo.

Si la bacteria problema fermenta la glucosa. Fermenten o no lactosa o sacarosa. Produzcan o no ácido sulfhídrico. 2.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro. mientras que si no es fermentadora de glucosa. 3. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1. x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. Si aparece rotura o desplazamiento del medio. el medio permanecerá de color rojo. 3. Fermenten o no glucosa. 4. Produzcan o no gas. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo. mientras que si no lo es. se presentará un ennegrecimiento del tubo. significa que la bacteria es productora de gas. 4. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . 2. ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. la superficie del medio continuará de color rojo.

Mezclar bien y calentar con agitación frecuente.el cual vira al color amarillo en medio ácido. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. el sulfato de hierro y amonio.0 20.0 10. Fundamento En el medio de cultivo.5 g del polvo por litro de agua destilada.0 0. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0.2 0. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Enfriar en pico de flauta profundo. sembrar en TSI. es la fuente de iones Fe . Por fermentación de azúcares. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa. 4-La presencia de burbujas. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.2 Instrucciones 3. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Siembra A partir de un cultivo puro. o ruptura del medio de cultivo. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. de color negro.30g 0. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. en aerobiosis. se producen ácidos. indica que el microorganismo produce gas. El rojo de fenol es el indicador de pH. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo.0 5.3 ± 0. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. lactosa.2 0. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.025 13.0 Suspender 62. Incubación A 35-37°C durante 24 horas. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico.20 5g 0. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. La lactosa. el extracto de carne y la pluripeptona. lactosa y/o sacarosa.0 1.0 10. en base a la fermentación de glucosa. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido . Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7.024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias.

Mezclar hasta disolver. mirabilis ATCC 43071 S. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. . para originar un compuesto de color rojo. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas. pneumoniae ATCC 700603 P.2. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul. En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol. calentar agitando y hervir durante un minuto. Cuando no se utiliza el citrato. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. flexneri ATCC 12022 P. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. por el cambio del indicador de rojo a amarillo.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. enteritidis ATCC 13076 S.1 0.E. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. y particularmente de la tripteína. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro. typhimurium ATCC 14028 S. aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich.0 6. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro.2 0. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. coli ATCC 25922 K. También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo.

y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. Fundamento En el medio de cultivo. el cual. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. y de color violeta a pH igual o mayor a 6. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo).2 3. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. la movilidad puede ser difícil de observar. pneumoniae ATCC 700603 P. enteritidis ATCC 13076 S. typhimurium ATCC 14028 S. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa. La producción de sulfuro de hidrógeno. Erlich. que sólo crecen en superficie.5 Solidificar en posición vertical. Se debe inocular el centro del tubo. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido.3 ± 0. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. pero que son fermentadores de la glucosa. y el tiosulfato de sodio. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. Características Medio preparado: ámbar. El citrato de hierro y amonio. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C. El purpura de bromocresol. Por decarboxilación de la lisina. desaminan la lisina. Es importante que la siembra se realice en línea recta. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. de en Kovac´s o de aerobiosis..8. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. y el fondo amarillo. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. tiene lugar en medio ácido. es el indicador de pH. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. morganii. se produce la amina cadaverina. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. horas.2. mirabilis ATCC 43071 S. Cepas indol negativas: sin cambio de color. que se extiende mas allá de la línea de siembra.Agar pH final: 7. pueden dar un color parduzco. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. especialmente Salmonella spp. . esto produce un ácido alfa-cetocarbónico. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. Las cepas de los géneros Proteus. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. La decarboxilación de la lisina. Providencia y algunas cepas de Morganella. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.

agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa.0 10. Providencia y alguna cepas de Morganella spp. Características Medio preparado: del color medio violeta. x 500g :Código: B02-106-06 .Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6. Citrobacter freundii Morganella spp. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación.5 0.7 ± 0.* Edwarsiella spp.2 Instrucciones 5. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. amarillo. Dejar embeber unos 15 minutos.02 15. pueden desaminar la lisina. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción. Incubación En aerobiosis. lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.0 0.0 3. Calentar cuidadosamente. Esto sucede con cepas del género Proteus. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta. durante 24 horas a 35-37 °C. Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC.04 0..0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp.0 1.

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