Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacárido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color característico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa. También es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiología, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne Peptona ácida de caseína Almidón Agar pH final: 7.3 ± 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de diámetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Incubación
Consultar en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden dar resultados erróneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la sección ³prueba de sensibilidad a los antimicrobianos´, la metodología apropiada.

0 g Agua destilada c. Presentación x 100 g Código: B02-137-05 6 x 50 ml Código: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 ºC. se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control: aureus coli aeruginosa faecalis desempeño de ATCC 35218 Características Medio del preparado: medio ámbar. Evitar el sobrecalentamiento. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos. E. Para S. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos.p. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización. E.0 g Dextrosa 40. Composición Digerido enzimático de caseína 10. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado. la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante. a una concentración final al 5% (v/v). La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. x 500 g Código: B02-137-06 12 x 100 ml Código: B04-137-06 Agar sabouraud El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado. Con la adición de cicloheximida. se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. coli evaluar el el control de precisión y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los . particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel.6 ± 0. P. 1000 mL pH final 5. AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.2 Preparación Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. estreptomicina y penicilina. Para E.s.cultivo.0 g Agar 15.

pues la exposición al calor hidroliza los componentes. Incubación El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté buscando aislar.2 Siembra Depende del uso. En el medio de cultivo.0 0.hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121°C. Además. pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos. pelo. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento.05 Agar 15. Resultados . al medio de cultivo. la pluripeptona y la glucosa. También es útil para el cultivo de levaduras. particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel. favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Mantener en lugar fresco. se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción. son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. etc.6 ± 0. puede ser tanto en tubo como en placa. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada.0 40. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del crecimiento de bacterias.0 pH final: 5. identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. El alto contenido de glucosa. Consultar referencias de métodos recomendados. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermético 10.). la presencia de cloranfenicol y el pH ácido.

Fermenten o no lactosa o sacarosa. Fermenten o no glucosa. Produzcan o no ácido sulfhídrico. Composición Peptona 15g Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g Proteosa de peptona 5g . 3. el medio permanecerá de color rojo. 4. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. mientras que si no lo es. x 500g :Código: B02-150-06 6x50ml: B04-150-84 El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. 4. pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. ligeramente del opalescente sin ningún medio precipitado. 2. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro). Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según: 1. se presentará un ennegrecimiento del tubo. Presentación x 100g :Código: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa. mientras que si no es fermentadora de glucosa. Si aparece rotura o desplazamiento del medio. significa que la bacteria es productora de gas. Si la bacteria problema fermenta la glucosa. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo). acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo. Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: 1. 3. Produzcan o no gas. 2. la superficie del medio continuará de color rojo. acidifica el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo.Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno Características Medio preparado: ámbar claro.

el sulfato de hierro y amonio.0 10.3 ± 0. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente.0 1. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo.0 Suspender 62. aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. Incubación A 35-37°C durante 24 horas.30g 0. que se detectan por medio del indicador rojo de fenol.2 0. picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Fundamento En el medio de cultivo.Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sódico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar 1g 10g 10g 0. de color negro. y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.025 13. El rojo de fenol es el indicador de pH. Enfriar en pico de flauta profundo. Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7. La lactosa. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido 3+ sulfhídrico. sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.5 g del polvo por litro de agua destilada. es la fuente de iones Fe .2 Instrucciones 3. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.0 10. sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. en base a la fermentación de glucosa. indica que el microorganismo produce gas. o ruptura del medio de cultivo.0 5. Por fermentación de azúcares.2 0. el extracto de carne y la pluripeptona. lactosa y/o sacarosa. los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro.0 0.el cual vira al color amarillo en medio ácido. 4-La presencia de burbujas. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa.20 5g 0. lactosa. Siembra A partir de un cultivo puro. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción sulfhídrico deácido .024g 12g TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. se producen ácidos.0 20. sembrar en TSI. en aerobiosis.

Cuando no se utiliza el citrato. mirabilis ATCC 43071 S. Fórmula (en gramos por litro) Tripteína Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20. typhimurium ATCC 14028 S. En el medio se evalúa la decarboxilación de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador púrpura de metacresol. para originar un compuesto de color rojo.2. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. y particularmente de la tripteína. por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono. También puede observarse la fermentación de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo. . aeruginosa ATCC 27853 A: K: A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K + + + + - + + + ácido alcalino Características Medio del preparado: medio rojo Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. También se evalúa la deaminación de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. Mezclar hasta disolver. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich. Eventualmente se puede observar la Producción de ácido sulfhídrico (H2S) por la presencia de color negro. En este medio también puede observarse la formación de H2S por el ennegrecimiento del medio SIM Medio Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. Presentación x 100g :Código: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 ºC. coli ATCC 25922 K. mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7. calentar agitando y hervir durante un minuto.0 6. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 P.1 0. La Fermentación de la glucosa produce acidificación del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. Fundamento El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas.E.2 0. producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. x 500g :Código: B02-134-06 El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. La producción de H2S se observa por la aparición de un precipitado negro. que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. por el cambio del indicador de rojo a amarillo. debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. La fermentación de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. pneumoniae ATCC 700603 P.

y de color violeta a pH igual o mayor a 6. Incubación Durante Luego 24 de la incubación. el cual. La producción de sulfuro de hidrógeno. Resultados Cepas móviles: producen turbidez del medio. El citrato de hierro y amonio. esto produce un ácido alfa-cetocarbónico. tiene lugar en medio ácido. la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. Siembra A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio sólido.. morganii. Presentación x 100g :Código: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 ºC. horas. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio. se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Producción sulfhídrico + + + de ácido Limitaciones -En las bacterias aerobias estrictas.Agar pH final: 7. por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas. producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. la movilidad puede ser difícil de observar. del medio Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich. Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. pero que son fermentadores de la glucosa. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. pneumoniae ATCC 700603 P. Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa.3 ± 0. se produce la amina cadaverina.2. Erlich. agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo °C. son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. Por decarboxilación de la lisina. y el tiosulfato de sodio. que no debe confundirse con el color negro debido a la producción de ácido sulfhídrico. de en Kovac´s o de aerobiosis. sembrar por punción profunda con aguja de inoculación recta (no usar ansa con anillo). pueden dar un color parduzco. desaminan la lisina. con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.2 3. mirabilis ATCC 43071 S. especialmente Salmonella spp. y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El purpura de bromocresol.8. enteritidis ATCC 13076 S. Características Medio preparado: ámbar.5 Solidificar en posición vertical. Providencia y algunas cepas de Morganella. es el indicador de pH. . basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico. coli ATCC 25922 K. Se debe inocular el centro del tubo. typhimurium ATCC 14028 S. que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. y la punción debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. que se extiende mas allá de la línea de siembra. y el fondo amarillo. Fundamento En el medio de cultivo. Las cepas de los géneros Proteus. La decarboxilación de la lisina. Microorganismo E. x 500g :Código: B02-131-06 Lisina Hierro Agar. Es importante que la siembra se realice en línea recta. que sólo crecen en superficie. Cepas indol negativas: sin cambio de color.

lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Púrpura Púrpura Rojo Púrpura Rojo Púrpura Púrpura Púrpura Color en la base del tubo Amarillo Púrpura Púrpura Amarillo Amarillo Amarillo Púrpura Púrpura Púrpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo *Algunas especies de Morganella spp. Incubación En aerobiosis. Presentación x 100g :Código: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 ºC. Providencia y alguna cepas de Morganella spp..* Edwarsiella spp.0 0. durante 24 horas a 35-37 °C. Esto sucede con cepas del género Proteus. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.0 10. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción. Dejar embeber unos 15 minutos. Citrobacter freundii Morganella spp. Calentar cuidadosamente. Siembra Por punción profunda con aguja de inoculación.5 0. 3-Producción de ácido sulfhídrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. Almacenamiento Medio Medio preparado: a 2-8 ºC.04 0.02 15.0 1. Resultados 1-Prueba -Prueba 2-Desaminación Decarboxilación Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta. Características Medio preparado: del color medio violeta. agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa.7 ± 0.2 Instrucciones 5. amarillo.Fórmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar pH final: 6.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada.0 3. x 500g :Código: B02-106-06 . pueden desaminar la lisina.

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