ANTIBIOGRAMA

OBJETIVO:
Determinar la sensibilidad de bacterias Gram positivas y gran negativas a diferentes antibiticos utilizando la tcnica de difusin en placa de Kirby-Bauer.

PROCEDIMIENTO:
Preparacin de la suspensin bacteriana: 1. Preparar los cultivos de las bacterias en Agar soya tripticasa o en su caso en Agar sangre, estriando de manera de obtener colonias aisladas e incubarlos 18 -24 horas a 37 C. 2. estndar 0,5 de la escala de Mc. Farland (por lo general de 2 a 6 horas). 3. Ajustar la turbidez del inculo con solucin salina o caldo apropiado hasta el tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland, por comparacin visual con el estndar. Para realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra un fondo blanco con lneas negras como contraste. Inoculacin de las Placas 1. Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inculo, sumergir un hisopo estril en la suspensin, rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del lquido para remover el exceso de inculo. 2. Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton, estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar una distribucin uniforme del inculo. Antes de colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad Aplicacin de discos: 1. Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza estril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar.

CUESTIONARIO:
1. Que significa el desarrollo de algunas colonias dentro del halo de inhibicin en un antibiograma por difusin.
En los mtodos de difusin de mutantes resistentes aparecen como colonias aisladas dentro del halo de inhibicin, por lo tanto esto indica que no se puede usar ese antibitico y se debe informar como resistente. La forma rigurosa de estandarizar un inculo es normalizando la turbidez por un mtodo fotomtrico utilizando una suspensin de sulfato de bario como estndar, segn la escala de Mac Farland.

2. Como se realiza y como se interpreta la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos por el mtodo de Etest.

Fundamento: El principio de este mtodo es una expansin de la tcnica de difusin en disco. En el mtodo E-test (AB Biodisk, Suecia) podemos, mediante lectura directa, determinar la concentracin inhibitoria mnima (CMI). Consiste en una tira de plstico no poroso de 6 cm de largo por 5 mm de ancho que incorpora un gradiente predefinido de antimicrobiano equivalente a 15 diluciones. El protocolo para preparar el inculo es el mismo que para la difusin en disco. Siguiendo el mtodo de difusin, una vez inoculado la placa de agar con el microorganismo, se coloca la tira de E-test sobre su superficie, producindose de forma inmediata una difusin del antibitico desde el soporte hasta el agar, crendose de este modo a lo largo de la tira un gradiente exponencial de las concentraciones del antimicrobiano. Tras la incubacin de las placas, se puede observar una zona de inhibicin elipsoidal y simtrica. Despus de la incubacin la CMI ser el valor obtenido en el punto en el que el extremo de inhibicin intersecciona con la tira.

Interpretacin. Como se ha observado una relacin directamente proporcional entre los valores de E-test y los valores de referencia de la NCCLS obtenidos por dilucin en agar, los puntos de corte de la CMIs sern apropiados para categorizar la bacteria estudiada como sensible, intermedia o resistente.

RESULTADOS:
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS Susceptible a: y Cloranfenicol (CL) y Nitrofurantiona (NF) Intermedio a: y Netilmicina (NET) Resistente a: y Amikacina (AK) y Ampicilina (AM) y Cefepime (FEP) y Cefalotina (CF) y Cefotaxima (CTX) y Cefitriaxona (CRO) y Gentamicina (GE) y Levofloxacina (LEV) y Trimetroprim-sulfametoxazol (SXT)

CONCLUSIN:

Se determino correctamente la sensibilidad de bacterias Gram negativas a diferentes antibiticos con la tcnica en placa de Kirby-Bauer. Ordenando los resultados de mayor sensibilidad a menor sensibilidad.