PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología

FMVZ - USAC

 

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno ± anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

 El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos). .

(diagnostico directo)  Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos. Se realizan en 2 vías:  Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno. (diagnostico indirecto) .SEROLOGIA La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos.

La fuerzas que los mantienen unidos.  La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. son de tipo no covalente. como la atracción electrostática. los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua. .

entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico. Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente.  Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión. .

cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar. .  Especificidad. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno. capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas.

No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído. Almacenar el suero en congelación.REACTIVOS Muestra: suero. Transportar en refrigeración. Se debe obtener en forma aséptica. No usar anticoagulante. Dejar coagular la sangre en forma inclinada.  .

Gallinas 2 ml. . Equinos 10 ml. Pollos 1 ml.VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml. Perros y gatos 2 ± 3 ml. Cerdos 5 ml. Ovinos y caprinos 5 ml.

REACTIVOS  ANTIGENOS. . 3. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas. Constituidos por el microorganismo o parásito. 1. Antigenos puros. 2. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. Gérmenes recombinantes.

Monitorear la temperatura del laboratorio (18 ± 26 grados centigrados) . Realizar controles de calidad a los antigenos. periódicamente.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO       Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. El suero debe agitarse suavemente. Los antigenos deberán conservarse en refrigeración. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. pues los anticuerpos sedimentan.

No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Utilizar controles positivos y negativos. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado. . Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO      El tiempo de incubación debe controlarse con precisión.

Reproducible. Estandarizada y validada. Equipo y reactivos accesibles. Sensibles y especificas. .(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados. Sencilla. económicos.CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO        Utilizar pequeñas cantidades de reactivos.

.    Pruebas de unión primaria.CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 1. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo). utilizando radioisótopos. Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia. colorantes fluorescentes o enzimas.

Se les llama sistemas competitivos. (ag. Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido. y el elemento a investigar.  Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. . o ac) añadido al ensayo a concentración limitada.

. proporción entre ambos. de los electrolitos presentes en la reacción. Son reacciones no reversibles.Pruebas de union secundaria   Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. de la temperatura. tipo de inmunoglobulina presente. de la afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno.

Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación. Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación. .CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 2. Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno ± anticuerpo va seguida de una segunda reaccion.

pero mas clásicas. Son de menor sensibilidad que las primarias. .

Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro. Inhibición de la hemoaglutinación. .PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA       Aglutinación: en placa. inmunoelectroforesis Hemoaglutinación. en tubo. Precipitación: Inmunodifusion en agar. Fijación de complemento.

Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. Pruebas de protección (anticuerpos) .CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS  Pruebas de unión terciaria. toxinas). Identificación de toxinas. Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus.

incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno. . Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA        Identificación de problemas de salud. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad. Evaluación de programas o campañas de vacunación. . Medición de la inmunidad materna. Determinación de la distribución de una enfermedad. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. Programación de calendarios de vacunación.

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