PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología

FMVZ - USAC

 

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno ± anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

. El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

(diagnostico indirecto) . Se realizan en 2 vías:  Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno.(diagnostico directo)  Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos.SEROLOGIA La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos.

  La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. como la atracción electrostática. son de tipo no covalente. La fuerzas que los mantienen unidos. los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua. .

Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente. . entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico.  Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión.

capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno. .  Especificidad. cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar.

REACTIVOS Muestra: suero. Transportar en refrigeración. Se debe obtener en forma aséptica. Dejar coagular la sangre en forma inclinada. No usar anticoagulante. Almacenar el suero en congelación.  . No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído.

Equinos 10 ml. Ovinos y caprinos 5 ml. Pollos 1 ml. Gallinas 2 ml. Cerdos 5 ml. . Perros y gatos 2 ± 3 ml.VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml.

. 3. Antigenos puros. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales.REACTIVOS  ANTIGENOS. Gérmenes recombinantes. 2. Constituidos por el microorganismo o parásito. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas. 1.

Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. El suero debe agitarse suavemente. pues los anticuerpos sedimentan. Realizar controles de calidad a los antigenos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO       Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. Los antigenos deberán conservarse en refrigeración. periódicamente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 ± 26 grados centigrados) .

. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado. No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Utilizar controles positivos y negativos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO      El tiempo de incubación debe controlarse con precisión. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos.

Sensibles y especificas.CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO        Utilizar pequeñas cantidades de reactivos. Estandarizada y validada.(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados. . Reproducible. económicos. Equipo y reactivos accesibles. Sencilla.

colorantes fluorescentes o enzimas. .    Pruebas de unión primaria. utilizando radioisótopos.CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 1. Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo).

Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. y el elemento a investigar. Se les llama sistemas competitivos. (ag. o ac) añadido al ensayo a concentración limitada.  Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. . Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido.

Pruebas de union secundaria   Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. de la temperatura. proporción entre ambos. de los electrolitos presentes en la reacción. Son reacciones no reversibles. de la afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno. tipo de inmunoglobulina presente. .

Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación. Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno ± anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. . Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación.CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 2.

 Son de menor sensibilidad que las primarias. pero mas clásicas. .

en tubo.PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA       Aglutinación: en placa. Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro. . Inhibición de la hemoaglutinación. Fijación de complemento. Precipitación: Inmunodifusion en agar. inmunoelectroforesis Hemoaglutinación.

Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus.CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS  Pruebas de unión terciaria. Pruebas de protección (anticuerpos) . toxinas). Identificación de toxinas. Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo.

incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno. . Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA        Identificación de problemas de salud. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. Evaluación de programas o campañas de vacunación. . Determinación de la distribución de una enfermedad. Programación de calendarios de vacunación. Medición de la inmunidad materna. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad.