PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología

FMVZ - USAC

 

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno ± anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

. El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

(diagnostico indirecto) .(diagnostico directo)  Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos.SEROLOGIA La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos. Se realizan en 2 vías:  Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno.

  La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. son de tipo no covalente. La fuerzas que los mantienen unidos. . como la atracción electrostática. los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua.

. Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente. entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico.  Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión.

  Especificidad. . Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno. cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar. capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas.

Dejar coagular la sangre en forma inclinada. Almacenar el suero en congelación. Se debe obtener en forma aséptica. No usar anticoagulante. Transportar en refrigeración.  . No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído.REACTIVOS Muestra: suero.

Ovinos y caprinos 5 ml. . Gallinas 2 ml.VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml. Pollos 1 ml. Perros y gatos 2 ± 3 ml. Equinos 10 ml. Cerdos 5 ml.

2. Constituidos por el microorganismo o parásito. 1. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. 3. Gérmenes recombinantes.REACTIVOS  ANTIGENOS. . Antigenos puros. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas.

pues los anticuerpos sedimentan. Realizar controles de calidad a los antigenos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO       Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. El suero debe agitarse suavemente. periódicamente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 ± 26 grados centigrados) . Los antigenos deberán conservarse en refrigeración.

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO      El tiempo de incubación debe controlarse con precisión. . No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado. Utilizar controles positivos y negativos. No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos.

Estandarizada y validada.CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO        Utilizar pequeñas cantidades de reactivos. económicos. Sencilla. Sensibles y especificas. Equipo y reactivos accesibles. Reproducible. .(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados.

CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 1.    Pruebas de unión primaria. colorantes fluorescentes o enzimas. utilizando radioisótopos. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo). Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia. .

y el elemento a investigar. o ac) añadido al ensayo a concentración limitada.  Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido. . Se les llama sistemas competitivos. Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. (ag.

. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno.Pruebas de union secundaria   Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. tipo de inmunoglobulina presente. de la temperatura. de la afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo. de los electrolitos presentes en la reacción. Son reacciones no reversibles. proporción entre ambos.

Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno ± anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. .CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 2. Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación. Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación.

. Son de menor sensibilidad que las primarias. pero mas clásicas.

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA       Aglutinación: en placa. Precipitación: Inmunodifusion en agar. en tubo. Inhibición de la hemoaglutinación. . Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro. Fijación de complemento. inmunoelectroforesis Hemoaglutinación.

Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. toxinas).CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS  Pruebas de unión terciaria. Identificación de toxinas. Pruebas de protección (anticuerpos) . Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus.

incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno. Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal. .

Programación de calendarios de vacunación. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. . Evaluación de programas o campañas de vacunación.OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA        Identificación de problemas de salud. Determinación de la distribución de una enfermedad. Medición de la inmunidad materna. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad.

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