PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología

FMVZ - USAC

 

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno ± anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

. El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

(diagnostico indirecto) .(diagnostico directo)  Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos.SEROLOGIA La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos. Se realizan en 2 vías:  Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno.

son de tipo no covalente. los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua. como la atracción electrostática. .  La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. La fuerzas que los mantienen unidos.

  Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión. entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico. . Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente.

cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno.  Especificidad. . capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas.

 . No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído. No usar anticoagulante. Dejar coagular la sangre en forma inclinada. Transportar en refrigeración.REACTIVOS Muestra: suero. Almacenar el suero en congelación. Se debe obtener en forma aséptica.

Cerdos 5 ml. Equinos 10 ml. Perros y gatos 2 ± 3 ml. Pollos 1 ml. Gallinas 2 ml.VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml. Ovinos y caprinos 5 ml. .

Constituidos por el microorganismo o parásito. Gérmenes recombinantes. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas. Antigenos puros.REACTIVOS  ANTIGENOS. 3. 1. . Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. 2.

periódicamente. Realizar controles de calidad a los antigenos. Los antigenos deberán conservarse en refrigeración.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO       Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas. pues los anticuerpos sedimentan. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. El suero debe agitarse suavemente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 ± 26 grados centigrados) .

. No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Utilizar controles positivos y negativos. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO      El tiempo de incubación debe controlarse con precisión. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado.

Estandarizada y validada. Sencilla. económicos.(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados. . Equipo y reactivos accesibles.CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO        Utilizar pequeñas cantidades de reactivos. Sensibles y especificas. Reproducible.

. colorantes fluorescentes o enzimas. utilizando radioisótopos.    Pruebas de unión primaria.CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 1. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo). Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia.

Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido. Se les llama sistemas competitivos. o ac) añadido al ensayo a concentración limitada. . Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas.  Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. y el elemento a investigar. (ag.

de la afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo. .Pruebas de union secundaria   Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. proporción entre ambos. de la temperatura. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno. Son reacciones no reversibles. tipo de inmunoglobulina presente. de los electrolitos presentes en la reacción.

Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación. Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno ± anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. .CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 2. Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación.

 Son de menor sensibilidad que las primarias. pero mas clásicas. .

Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro. Fijación de complemento.PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA       Aglutinación: en placa. Inhibición de la hemoaglutinación. Precipitación: Inmunodifusion en agar. . inmunoelectroforesis Hemoaglutinación. en tubo.

Pruebas de protección (anticuerpos) . Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus.CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS  Pruebas de unión terciaria. Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. toxinas). Identificación de toxinas.

incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno. . Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA        Identificación de problemas de salud. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. Medición de la inmunidad materna. . Programación de calendarios de vacunación. Determinación de la distribución de una enfermedad. Evaluación de programas o campañas de vacunación.

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