PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

INMUNOLOGIA 2009 Dra. Virginia Bolaños de Corzo Departamento de Microbiología

FMVZ - USAC

 

Las respuestas inmunitarias contra la mayoría de los antigenos inducen la producción especifica de anticuerpos y linfocitos T efectores. Este reconocimiento entre el antigeno ± anticuerpo o linfocito sienta las bases del diagnostico inmunológico.

. El estudio de las inmunoreacciones se realiza mediante el empleo de técnicas inmunológicas basadas en la detección de y evaluación de la respuesta humoral ( anticuerpos y complemento) o de base celular (linfocitos T y fagocitos).

(diagnostico indirecto) .SEROLOGIA La medición de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnósticos. Se realizan en 2 vías:  Utilización de anticuerpos específicos para detectar el antigeno.(diagnostico directo)  Utilización de antigenos específicos para detectar anticuerpos.

son de tipo no covalente. como la atracción electrostática.  La reacción entre el Ag y el Ac es de naturaleza física y química. La fuerzas que los mantienen unidos. . los puentes de hidrógeno y las fuerzas de Van der Waals y la exclusión del agua.

  Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o intensidad de la unión. Avidez: es la fuerza con la que el anticuerpo multivalente se une a un antígeno multivalente. entre un sitio de unión del anticuerpo y un determinante antigénico. .

. Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antígeno.  Especificidad. capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar con una estructura química entre muchas. cuando este y el antígeno que estimulo la producción del anticuerpo especifico comparten un epitopo idéntico o muy similar.

Almacenar el suero en congelación. No usar anticoagulante. No refrigerar hasta que el coagulo se haya retraído. Transportar en refrigeración.  . Se debe obtener en forma aséptica. Dejar coagular la sangre en forma inclinada.REACTIVOS Muestra: suero.

Equinos 10 ml. Ovinos y caprinos 5 ml. . Pollos 1 ml. Gallinas 2 ml. Perros y gatos 2 ± 3 ml. Cerdos 5 ml.VOLUMEN RECOMENDADO La cantidad de sangre que se obtendrá depende de la especie animal: Bovinos 10 ml.

Antigenos puros. 3. Antigenos altamente purificados: Anticuerpos monoclonales. Constituidos por el microorganismo o parásito. Gérmenes recombinantes. . Antigenos crudos: presentan el inconveniente de dar reacciones heteroespecificas.REACTIVOS  ANTIGENOS. 1. 2.

periódicamente. Los sueros deben estar en buenas condiciones no hemolisados. pues los anticuerpos sedimentan. Los antigenos deberán conservarse en refrigeración. Realizar controles de calidad a los antigenos. El suero debe agitarse suavemente. Monitorear la temperatura del laboratorio (18 ± 26 grados centigrados) .BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO       Se debe leer con detenimiento los instructivos de la pruebas.

No se debe mantener los reactivos a temperatura ambiente mas de lo necesario. Manejar los materiales que se usaron como si fueran infecciosos. . Utilizar controles positivos y negativos.BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO      El tiempo de incubación debe controlarse con precisión. No se debe hacer modificaciones al protocolo de la prueba recomendado.

(Ínter laboratorios) Antigenos inactivados. Sensibles y especificas. Equipo y reactivos accesibles. Estandarizada y validada. Reproducible.CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE INMUNODIAGNOSTICO        Utilizar pequeñas cantidades de reactivos. . Sencilla. económicos.

   Pruebas de unión primaria.CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 1. colorantes fluorescentes o enzimas. . Radioinmunoanalisis (RIA) ELISA Inmunofluorescencia. utilizando radioisótopos. Miden la cantidad de inmunocomplejos (unión antigeno-anticuerpo).

Los anticuerpos conjugados suelen ser monoclonales o antinmunoglobulinas especificas. y el elemento a investigar. o ac) añadido al ensayo a concentración limitada. (ag. .  Los anticuerpos o antígenos marcados reciben el nombre de conjugado. Se establece competencia por los sitos de unión disponibles entre el reactivo conocido. Se les llama sistemas competitivos.

. Son reacciones no reversibles. tipo de inmunoglobulina presente. Dependen en gran medida del estado físico del antigeno. de la temperatura. de los electrolitos presentes en la reacción.Pruebas de union secundaria   Los complejos se agregan y originan fenómenos perceptibles visualmente. proporción entre ambos. de la afinidad y avidez en la interacción antigenoanticuerpo.

. Pruebas de unión secundaria: La reacción antigeno ± anticuerpo va seguida de una segunda reaccion. Si el antigeno es soluble la reacción que se da es de precipitación.CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS 2. Si el antigeno es particulado (suspensión) la reacción es de aglutinación.

pero mas clásicas. Son de menor sensibilidad que las primarias. .

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA       Aglutinación: en placa. inmunoelectroforesis Hemoaglutinación. Inhibición de la hemoaglutinación. . Neutralización y Seroneutralizacion realizadas in vitro. Fijación de complemento. Precipitación: Inmunodifusion en agar. en tubo.

Identificación de virus Medir la actividad de un anticuerpo para neutralizar a un microorganismo. toxinas). Pruebas de protección (anticuerpos) .CATEGORIAS DE PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS  Pruebas de unión terciaria. Identificación de toxinas. Evalúan la capacidad de los anticuerpos de neutralizar la capacidad biológica de un antigeno ( virus.

 Se basan en la medición de las manifestaciones biológicas que el sistema inmune desarrolla frente a un antígeno en el animal. . incluyendo la evaluación del efecto protector real de los anticuerpos o su capacidad de neutralizar la acción biológica del antígeno.

. Determinación de la distribución de una enfermedad. Evaluación de programas o campañas de vacunación. Medición de la inmunidad materna. Determinación de la incidencia y prevalencia de una enfermedad. Evaluación del sistema inmune del individuo o de una población. Programación de calendarios de vacunación.OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA        Identificación de problemas de salud.

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