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Coloracin de Wright La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky; la cuales se han utilizado por ms de 100 aos en la clasificacin

morfolgica de las clulas hematopoyticas. Son extremadamente importantes en laboratorios de hematologa ya que puede obtenerse una cantidad abundante de informacin a partir del examen de un frotis de sangre bien teido. Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin; as como colorantes as como eosina Y o eosina B. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky y da una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutroflicos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y. Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras qumicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los ncleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante bsico. La eosina Y, colorante cido, se fija a los agrupamientos bsicos de las molculas de hemoglobina y a las protenas bsicas. El proceso de tincin empieza con el paso de fijacin con metanol que resulta en la adherencia de las protenas celulares al portaobjetos y evita que las clulas se deslaven durante los pasos subsecuentes. La fijacin adicional se realiza cuando el frotis se cobre con el colorante de Wright; la tincin efectiva se da con la adicin de un amortiguador al colorante que da lugar a la ionizacin de los colorantes. Despus se enjuaga con agua destilada y se deja secar al aire.

Fig. 1 Tincin de Wright

Tincin de Perls Dentro de los diversos procesos que afectan el metabolismo del hierro, en forma aislada o en asociacin con otros trastornos, se ha observado la acumulacin de hierro medular en cuadros como anemia hemoltica crnica, anemia sideroblstica y hemocromatosis. La determinacin de estos depsitos acumulados en forma anormal puede realizarse con la tincin de Perls, que forma parte de la batera de tinciones citoqumicas aplicadas principalmente a neoplasias hematolgicas y otros sndromes. Determina la presencia de hemosiderina en el citoplasma de cualquier tipo de clulas, de una extensin de sangre o de mdula. El proceso de tincin comienza con una fijacin de alcohol metlico, se introduce la extensin fijada en solucin clorhdrica de ferrocianuro a temperatura ambiente, despus se lava y contratie con hematoxilina de Harris; finalmente se enjuaga con metanol se deja secar y se observan grnulos intensos de color azul-verdoso que se observan en la zona de macrfagos.

Fig. 2 Tincin de Perls

Tincin con -Naftil esterasa La actividad de la -Naftil esterasa se detecta al incubar la muestra de acetato de -Naftil en un pH alcalino. Como resultado de la actividad de la esterasa hay una hidrlisis enzimtica de los enlaces de ster y se liberan compuestos de naftol libre. El naftol liberado se acopla inmediatamente con una sal de diazonio para formar un pigmento insoluble y visible en el sitio de la accin de la enzima. La -Naftil esterasa se detecta principalmente en monocitos y los sitios de actividad de la enzima muestran una granulacin negra. La actividad enzimtica se puede detectar en los megacariocitos, macrfagos e histocitos, y est prcticamente ausente en los granulocitos. La actividad enzimtica se puede detectar en los eritroblastos de la eritroleucemia y se puede observar actividad focal de la enzima en los linfoblastos de la leucemia linfoblstica aguda.

Tincin de Shiff (Reaccin con cido peridico de Shiff) El cido perydico de Shiff oxida los grupos 1,2 glicol a dialdehdos. Estos grupos aldehdos combinan con el reactivo de shiff para dar un producto de color rojo. Los componentes celulares que contienen polisacridos, mucopolisacridos y glicoprotenas poseen los grupos 1,2 glicol y se tien. La tincin del cido perydico de Shiff (PAS), se ve en casi todas las clulas hematopoyticas normales. Los monocitos exhiben un patrn de tincin difuso mientras que los linfocitos pueden ser negativos o mostrar unos cuantos grnulos positivos a PAS; los megacariocitos y las plaquetas se tien de manera intensa, y los eritroblastos normales no se tien. La actividad PAS es fuertemente positiva en la eritroleucemia (AML-M6); en esta enfermedad los eritroblastos tempranos exhiben positividad granulosa tosca, pero los eritroblastos de las etapas posteriores exhiben una positividad fina y difusa. Los linfoblastos en la leucemia linfoblstica aguda pueden exhibir positividad a PAS.

Referencias: 1.- Mckenzie; Hematologa clnica; Manual moderno, 2. Ed. 2.- Hematologa, Salvat, Williams-Heuter-Erstev-Hundles, Tomo I