[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F.

CAROL DAVILA ]

Boli Prionice
Introducere
Prionii (proteinaceous infectious particles)sunt particule infec ioase care cauzeaz un grup de maladii neurodegenerative caracterizate prin degenerarea sistemului nervos central si au perioad de incuba ie mare (de aici i confuzia ini ial cum c ace tia ar fi virusuri lente) Sunt lipsi i de orice tip de acid nucleic i pot induce o serie de maladii att la om ct i la animale. La om, cele mai cunoscute sunt: maladia Creutzfeld-Jacob (CJ), sindromul Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS), insomnia fatal familial (FFI), maladia Kuru intalnita Noua Guinee in care se practica un canibalism ritual. i sindromul Alpers (ntlnit numai la copii), iar la animale: scrapie (la oi i capre), encefalopatia spongiform bovin (BSE) sau boala vacilor nebune, encefalopatia spongiform a felinelor, a cervidelor, etc. Procesul care declan eaz boala este reprezentat de conversia unei proteine normale, sintetizat n mod natural n creierul tuturor mamiferelor (PrPc), ntr-una mutant , anormal (PrPSc). In func ie de factorul care induce conversia PrPc n PrPSc, natura acestor afec iuni poate fi genetic (n cazul unei muta ii punctiforme a genei pentru PrP, transmis autozomal dominant), infec ioas (ca urmare a consumului alimentelor contaminate, a folosirii unor instrumente chirurgicale nesterile, inject rii unor hormoni deriva i din hipofiza prelevat de la cadavre), sau sporadic (datorat unor muta ii spontane ale genei PrP, care intensific rata conversiei proteinei prionice, ct i unor factori necunoscu i). Bolile prionice reprezint un grup heterogen de disfunc ii neurodegenerative cunoscute ca encefalopatii spongiforme transmisibile (TSE), ce au n comun leziuni cerebrale, produse prin degenerescen a vacuolar a neuronilor. Post-mortem se constat un aspect spongios al creierului, aspect datorat prezen ei vacuolelor care se g sesc n special la nivelul substan ei cenusii, corespunz tor corpilor neuronali. Perioada de laten a acestor maladii este variabil (luni sau chiar zeci de ani). Odat instalat , boala evolueaz spre debilitate mintal , demen , pierderea controlului motor, imobilizare etc. Interesul crescut fa de aceste afec iuni este datorat unor particularit i legate de structura, modul de transmitere i patologia indus , intra sau interspecific, de c tre prion. Toate aceste maladii sunt asociate cu alterarea conforma ional determinat de conversia formei normale a proteinei prionice, sensibil la proteaz (PrPC), la o form rezistent la proteaz (PrPSc), marker specific TSE-urilor; aceast modificare are loc doar dup ce proteina prionic a fost ancorat la nivelul membranei celulare. Atunci cnd la nivelul genei care codific proteina prionic normal , au loc muta ii punctiforme, se realizeaz sinteza unei izoforme anormale, denumit , dup numele bolii la care a fost studiat PrP scrapie sau PrPSc. Aceasta protein scrapie mai este cunoscut si sub numele de prion. Conceptul de prion a fost introdus de Prusiner n urma studierii scrapiei la oi (encefalopatia spongiform a ovinelor). Prionii reprezint o categorie de agen i infec io i, considerndu-se ca sunt un mister din punct de vedere biologic, deoarece, n structura lor intr doar o molecul proteic . Fiind lipsi i de genom, difer de toate categoriile de agen i infec io i cunoscute pn n prezent, prin faptul c nu con in nici un tip de acid nucleic (ADN sau ARN). Este interesant de relatat faptul c prionii rezist la ac iunea multor factori fizico-chimici, printre care amintim: formol 10% (timp de 28 de luni), caldur

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

Page 1

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

(rezist la fierbere timp de 3 ore), factori inhibitori ai acizilor nucleici, precum i la ac iunea radia iilor UV (activitate infec ioas 100%). Prin analogie, forma normal a acestei proteine, prezent n condi ii normale n celul , a fost desemnat PrPC (proteina prionic ceular ).

Figura 1. Reprezentarea activitatii infec ioase a prionului si a organismelor cu grad diferit de organizare a ADN, sub actiunea UV. In ncercarea de a descifra cauza care st la baza apari iei acestor maladii, au fost formulate mai multe teorii. Imposibilitatea de a descoperi pe preparate provenite de la pacien i cu TSE, un agent infec ios reprezentat de un acid nucleic, precum i rezisten a foarte mare a acestor maladii la tratamente, care de obicei distrug acidul nucleic, conduce la formularea ipotezei proteinei prionice infectante. Aceast ipotez a fost postulat n 1982, de c tre Stanley Prusiner care sus ine etiologia proteic a TSE, i presupune c PrPSc ar ac iona ca matri n conversia izoformei PrPC normale, n PrPSc asociat cu boala. Astfel, n aceast viziune, proteina prionic se autopropag prin contactul cu proteina normal , pe care o determin ntr-un anume fel s adopte o conforma ie diferit fa de cea ini ial , lund forma prionic . Aceste modific ri se propag n lan , astfel nct noile particule infec ioase modific n continuare alte proteine prionice normale cu care vin n contact. S-a demonstrat c n absen a acestei proteine normale, PrPSc este incapabil de a determina apari ia bolii. Sar p rea, totu i, c diferitele forme de TSE ar fi determinate de diferite conforma ii i/sau de nivelul diferit de glicozilare al proteinei prionice. O alt ipotez incrimineaz un agent infec ios asem n tor virusurilor, numit virino, ale c rui copii ar permite dezvoltarea diferitelor variante ale bolii neurodegenerative i, ocazional, schimbarea caracteristicilor prin muta ie. Acesta este un agent infec ios subviral alc tuit dintr-o molecul mic de acid nucleic, asociat cu o protein codificat de celula gazd . In aceste condi ii se pare ca virino este asociat cu izoforma scrapie a proteinei prionice. Totu i, ipoteza cea mai vehiculat este c PrPSc ar fi ea ns i principalul i chiar singurul component al agentului infectios. Aceasta ipotez , protein only, propus de Griffith n anul 1967, arat c propagarea prionilor ar avea loc prin intermediul PrPSc care se replic cu nalt fidelitate prin recrutarea PrP endogene. In absen a acestei forme, s-a ar tat c PrPSc este incapabil de a se replica i de a induce boala. Pentru a fi infec ioas , PrPSc trebuie s g seasc n celula infectat molecule identice din punct de vedere chimic, pentru a le modifica structura.
[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calint,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4] Page 92

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ] Structura PrPC

Proteina prionic celular este exprimat la nivelul sistemului nervos central i periferic, n esutul limfatic i la nivelul jonc iunilor neuromusculare, ca o protein situat la suprafa celulei, fiind ancorat de membrana celular prin intermediul unei ancore glicolipidice. In mod normal, aceast form este produs n creierul tuturor mamiferelor i este inofensiv , ns , n anumite condi ii poate adopta o form alterat , care reprezint agentul infec ios implicat n dezvoltarea TSE. Odat instalat la nivelul creierului, acest agent transform moleculele proteinice normale ntr-un num r mare de copii infec ioase, care sunt depozitate extracelular ca pl ci amiloide sau intracelular ca fibrile sau "f ii" prionice (agregate de prioni). Proteina structural este o glicoprotein hidrofob , cu o greutate molecular de 28K.Da, avnd n compozi ia sa 208-220 de aminoacizi, n func ie de specie. Prezint un cap t NH2 -terminal, o regiune central i un cap t COOH-terminal. Domeniul NH2 -terminal con ine 80-100 de aminoacizi, o regiune alc tuit din cinci copii ale unei octarepeti ii, existnd cazuri n care acest num r este mai mare (de exemplu la bovine unde exist ase astfel de copii). Numeroase studii au ar tat c aceste repeti ii au un grad nalt de conservare n seria animal , ceea ce nseamn c ndeplinesc un rol important n func ionarea proteinei. La nivelul acestor repeti ii se g se te un situs de legare pentru ionii unor metale, n special pentru ionii de cupru i se presupune c activitatea proteinei ar depinde de prezen a acestor ioni. Acest domeniu se caracterizeaz printr-o plasticitate deosebit i prin prezen a unor structuri helicale, sugernd c este implicat n conversia PrPcpPrPSc. Cap tul COOH-terminal con ine 120 de aminoacizi, o secven semnal pentru ata area unui glicofosfatidil inozitol care reprezint ancora cu care PrP este prins de membrana celular , i o regiune conservat , reprezentat de dou resturi de cistein unite prin dou pun i disulfidice. Proteina este procesat post-transla ional astfel nct are loc o rearanjare a unui num r variabil de aminoacizi la nivelul ambelor domenii terminale. Forma patogen sau "scrapie" (PrPSc) este identic din punct de vedere al compozi iei n aminoacizi cu proteina prionic normal , ns exist diferen e marcante la nivelul structurii secundare i ter iare. Metodele biofizice, cum ar fi analizele RMN i dicroismul circular, au ar tat c exist diferen e ntre cele dou izoforme la nivelul structurii secundare, care constau n faptul c PrPc este bogat n structuri E-helix, regiuni n care scheletul proteinic se r suce te sub forma specific a unei spirale, n timp ce PrPSc este bogat n leg turi F-pliate, n care proteina este desf urat . Miezul proteinic al PrP con ine 3 Ehelixuri i o structur F-pliat scurt , restul moleculei prezentnd o mobilitate crescut . Originea diferen elor conforma ionale dintre cele dou forme este necunoscut . Ele ar putea fi determinate fie de organizarea ter iar a monomerilor PrPSc, fie ar putea rezulta din structura cuaternar diferit a polimerilor PrPSc. Func ia PrPc este nc necunoscut , ns i din acest punct de vedere exist o serie de ipoteze. Numeroase studii au fost realizate pentru a stabili rolul fiziologic al PrP la suprafa a celulei i s-a constatat c poate ac iona ca un receptor celular pentru un ligand extracelular care nu a fost nc identificat. O alt ipotez sugereaz c PrP, la suprafa a celulei, leag ionii de cupru, fiind implicat n transportul i metabolizarea acestora. Prin izolarea unei octarepeti ii din domeniul NH2 -terminal, s-a observat c prin legarea ionilor de cupru se formeaz o structur helical ceea ce ar favoriza formarea proteinei anormale. Ionii metalelor tranzi ionale redox-active cum sunt cupru i fierul, prezint o importan
[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4] Page 93

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

semnificativ n procesul neurodegener rii, deoarece intr n structura unor enzime, iar deficien a lor poate duce la apari ia unor disfunc ii la nivelul sistemului nervos central, generate de producerea de radicali liberi de oxigen i stress-ul oxidativ. Exist numeroase dovezi n sensul c PrP are activitate superoxid dismutazic (SOD), concluzie rezultat din faptul c celulele lipsite de PrP au o sensibilitate crescut la stress-ul oxidativ datorit activit ii sc zute sau chiar absente a SOD. Aceast activitate este facilitat de legarea ionilor de cupru iar celulele n care proteina prionic este truncat i nu prezint cap tul NH2-terminal, prezint o deficien a SOD, deoarece ionii de cupru se leag n special de acest cap t.. In plus, ionii altor metale (n special ionii metalelor grele), pot media, prin fixarea lor la nivelul unui situs specific din protein , neurotoxicitatea, favoriznd formarea de agregate i, implicit, apari ia bolii. De asemenea, s-a sugerat c aceast protein joac un rol important n reglarea apoptozei, cu distrugerea nivelului celular normal al PrP n cursul infec iei, conducnd ireversibil la moarte celular .

Mecanismul form rii PrPSc

Formarea PrPSc este rezultatul procesului de conversie al structurilor E-helicale prezente n structura secundar a proteinei celulare, n structuri F-pliate caracteristice proteinei scrapie. Studii realizate cu peptide sintetice au sugerat c o regiune din PrP, cuprins ntre resturile de aminoacizi 108-121, poate determina formarea de leg turi F-pliate n izoforma patogen , PrPSc. Aceast regiune pare a fi necesar pentru formarea PrPSc, deoarece dele ia ei previne formarea PrPSc n timp ce dele ia altor regiuni situate n amonte sau n aval de aceast regiune, permite formarea acesteia. Procesul de conversie implic doar o schimbare n topologia proteinei, f r a avea vreun efect asupra compozi iei n amioacizi. In acest proces de conversie, s-a dovedit c , din ntreaga structur a proteinei celulare, un rol important l are, datorit plasticit ii sale crescute, domeniul NH2-terminal, care permite formarea unor structuri helicale. In ceea ce prive te identitatea factorului care determin acest proces, exist mai multe ipoteze, mai mult sau mai pu in argumentate. Dintre toate modele propuse, cel mai vehiculat este acela c proteina nativ se g se te n mod normal ntr-un echilibru cu un ansamblu de de proteine care prezint modific ri conforma ionale minore precursori monomerici ai PrPSc. Ace ti precursori pot interac iona ntre ei cu eficien scazut i reversibil, pn cnd se formeaz un miez oligomeric infec ios i stabil. Cnd este atins o m rime critic , precursorii monomerici ai PrPSc se pot adi iona la aceast structur ntr-un mod ireversibil, pentru a permite m rirea particulei PrPSc. Particula infec ioas se poate apoi reproduce prin ruperea n particule mai mici i stabile. Cele patru etape (a) starea de echilibru dintre PrPc i PrPSc, b) interac ia precursorilor, c) reproducerea i d) formarea unei particule stabile) ale acestui proces sunt schematizate n figura de mai jos.

Figura 2. Etapele propag rii prionului.

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calint,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4] Page 94

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

Cnd cantitatea de PrPSc depozitat atinge un nivel critic, se declan eaz o cascad autocatalitic , care de obicei este ireversibil i care determin modificarea proteinelor normale nou sintetizate. In cazul maladiilor prionice, aceste depozite nu sunt distruse, ceea ce duce la acumularea lor n celule, determinnd vacuolizarea i necroza acestora. S-a constatat c n acest proces de conversie, PrPSc func ioneaz ca matri pentru formarea unor noi molecule PrPSc. Graham S. Jackson i colab. (2000), au urm rit experimental schimbarea conforma iei proteinei PrPC n cursul procesului de conversie. Pentru aceasta, ei au incubat PrPc, marcat cu 32S, cu un exces de PrPSc i au observat c se produce o protein de novo, rezistent la proteinaza K, pe care au desemnat-o PrPRES. Dup digestia cu proteaz , se observ c mobilitatea PrPRES n gel de elecrtoforez SDS-PAGE este crescut , ceea ce indic o sc dere a masei moleculare, punnd n eviden faptul c are loc o schimbare conforma ional n proteina prionic celular , n cursul procesului de conversie. Unii autori sugereaz c procesul de conversie poate fi indus i de factori fiziologici, cum ar fi valoarea pH-ului, cre terea temperaturii sau nivelul diferit de glicozilare al proteinei normale. De asemenea, exist unele supozi ii, precum c n procesul de conversie PrPcpPrPSc ar fi implica i anumi i cofactori, unii dintre ace tia apar innd familiei de proteine chaperone. Telling i colab. (1996), arat c exist un alt factor auxiliar, numit proteina X, care faciliteaz aceast conversie prin legarea sa la un epitop discontinuu de la nivelul PrPc. Se tie cu siguran faptul c formarea PrPSc este un proces posttransla ional, care are loc doar dup ata area PrPc la membrana neuronal . Daude i colab. (1997) au ar tat c n cazul formelor ereditare, acest proces are loc chiar la nivelul reticulului endoplasmic, nainte ca proteina normal s fie ancorat de membran . Indivizii respectivi mo tenesc direct forma mutant , ceea ce explic absen a pl cilor amiloide la nivelul esutului cerebral.

Alte ipoteze
Au fost propuse variate ipoteze pentru a explica mecanismul care determin distrugerea celulelor neuronale i aspectul spongios al creierului. Acestea includ printre altele: efectul neurotoxic manifestat de o regiune a proteinei prionice, care cuprinde resturile de aminoacizi 106-126, precum i stress-ul oxidativ crescut la nivelul neuronilor ca urmare a deple iei PrPC, care se presupune c func ioneaz ca un antioxidant. In cazul celor mai multe proteine globulare are loc o pliere a monomerilor care duce la formarea unei conforma ii stabile. Cnd plierea este incorect sau cnd apare o schimbare conforma ional , ca urmare a substitu iei unui aminoacid, a unei modific ri chimice, sau a unor factori necunoscu i, proteinele nu pot fi degradate i se agreg sub forma unor pl ci amiloide. Maladiile prionice apar ca urmare a unor fenomene destabilizatoarea a structurii proteinei prionice normale, care o predispun la formarea de agregate. Interac ia dintre PrPc i PrPSc ar putea fi facilitat de o muta ie, de legarea unui ligand sau a unei co-proteine. Studii realizate pe oareci transgenici au ar tat c nici o dele ie care are loc n amonte de aminoacidul din pozitia 106 a PrPC, nu determin apari ia unei maladii prionice, oarcele manifestnd un fenotip normal, n timp ce orice dele ie (muta ie punctiform ) ap rut n orice pozi ie dup situs-ul 106, conduce la ataxie sever precum i pierderea celulelor neuronale, simptome ( i patologie) complet absente la oarecii ablated ( oareci care prezint o alogen cu dele ie naintea situs-ului 106). Aceste dovezi conduc la ipoteza c PrP i o structur omoloag sunt n competi ie pentru un acela i ligand.

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

Page 95

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ] Gena PrP

Proteina prionic normal este sintetizat pe baza informa iei genetice con inut ntr-un fragment de ADN care se g se te att n celulele normale ct i n cele infectate, unde determin sinteza unei proteine normale, neprionice. Aceast gen , la om, este localizat pe bra ul scurt al cromozomului 20. La mamifere, gena are trei exoni i un ORF (open reading frame) care este implicat n codificarea acestei proteine. Inactivarea sau dele ia acestui ORF, n cele mai multe cazuri, are un efect nesemnificativ n dezvoltarea pre i neonatala a oarecilor, de i se tie c expresia PrP este o condi ie necesar , dar nu suficient , pentru propagarea particulelor infec ioase. La hamsterul sirian, gena prezint doi exoni separa i de un intron de 10 kb. Exonul 1 codific o por iune din secven a leader, situat la cap tul 5, care va fi netranslat , n timp ce exonul 2 codific pentru un ORF i secven a 3 netranslatat . La oarece, oi i obolan, gena con ine trei exoni, exonul trei fiind analog exonului doi de la hamster. Promotorii genei de la hamster i oarece con in regiuni bogate n G-C, repetate de un num r mare de ori i sunt de lipsi i de cutia TATA. Ace ti nonameri G-C, reprezint un motiv care poate func iona ca un sit de legare pentru factorul transcrip ional Sp1. Analiza comparativ a cromozomului 20 la om (bra ul scurt), pe care se g se te gena, i a cromozomului 2 la oarece, a scos n eviden faptul c cele dou regiuni sunt omoloage, ceea ce nseamn c aceast gen este conservat n evolu ie. La p s ri, gena con ine un singur exon la nivelul c ruia se g se te un ORF, ceea ce elimin posibilitatea form rii PrPSc printr-un splicing alternativ. Gena uman PRNP con ine un singur ORF care codific o protein de 253 de aminoacizi. Aceast protein este procesat posttransla ional, astfel nct are loc o rearanjare a unei secven e de 22 de aminoacizi de la cap tul NH2 -terminal. Acela i lucru se ntmpl la cap tul COOH, unde 23 de aminoacizi sunt rearanja i n cursul adi iei unui glicofosfatidil inozitol (GPI) care ancoreaz proteina de membrana celular . Au fost studiate o mul ime de variante ale proteinei PrP, din punct de vedere al compozi iei chimice, la mai multe specii i s-a constatat c doar secven a proteinic de la pui difer considerabil de cea uman . Din acestea se trage concluzia c exist un grad nalt de conservare n seria animal i c anumite func ii s-au p strat de-a lungul evolu iei. Maladii prionice la om pot fi considerate afec iunile n care fiecare individ prezint un progresiv declin subacut sau cronic al func iilor cognitive i motorii. De obicei, pacien ii cu vrsta cuprins ntre 40-80 de ani, manifest tr s turi clinice care permit stabilirea diagnosticului premorbid al maladiilor prionice, n special cei cu CJD. Faptul c 10% din aceste maladii sunt ereditare, duce la concluzia c fondul genetic joac un rol important. Muta iile au loc la nivelul ORF-ului sau n regiunea codificatoare a genei, iar acest lucru a fost observat la to i pacien ii cu maladii prionice mo tenite. Ipoteza c sindromul GSS ar putea fi transmis la maimu e, a fost emis prima dat cnd s-a presupus c scrapia, CJD si alte maladii prionice ar fi determinate de un virus. Cnd s-a descoperit c muta ia la nivelul codonului 102 din gena uman , n urma c reia prolina este nlocuit cu leucina este legat de apari ia maladiei GSS, s-a formulat ipoteza c maladiile prionice sunt att infec ioase ct i genetice. Aceast muta ie poate fi cauzat de deaminarea, n linia germinal , a unei insule CpG metilate, ceea ce duce la substitu ia unei timine cu o citozin .

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calint,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

Page 96

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

S-a constatat, att la om ct i la animale, c muta iile au loc n anumite pozi ii i c fiecare din aceste muta ii este asociat cu un anumit fentip. De exemplu, muta ia la nivelul codonului 102 din gena uman este asociat cu inducerea GSS, muta ia aminoacidului din pozi ia 129 a secven ei proteinice predispune la CJD att sporadic ct i ereditar, dubla muta ie din pozi iile 178 i 200 este asociat cu un alt fenotip GSS etc. De asemenea, s-a observat c un fenotip de CJD poate fi cauzat de inser iile unor octarepeti ii. Adi ia a 2, 4, 5, 6, 7, 8 i chiar 9 repeti ii la cele cinci prezente n mod normal, au fost identificate la indivizi care prezentau CJD ereditar; dele ia unei asemenea repeti ii nu este corelat cu apari ia bolilor neurodegenerative. Muta ia punctiform de la nivelul codonului 178 este corelat cu instalarea FFI (insomina familial fatal ). Analizele de genetic molecular au scos n eviden polimorfismele de la nivelul genei PrP. Polimorfismul din pozi ia 129 pare a fi capabil s influen eze expresia maladiilor prionice nu numai n formele ereditare dar i n cele sporadice sau infec ioase. Formele sporadice se refer n special la cazurile de CJD i posibil, (ntr-o mic m sur ), la cele de GSS. In cazul acestor pacien i nu s-au identificat muta ii la nivelul genei. Modul de apari ie a maladiei la ace ti indivizi nu este cunoscut; se presupune c ar putea avea loc o transmitere a factorului etiologic pe orizontal (ntre indivizii aceleia i specii sau apar innd la dou specii diferite), ca urmare a unor muta ii somatice la nivelul ORF-ului genei PrP sau prin conversia spontan a PrPc n PrPSc. Toate muta iile punctiforme identificate la nivelul genei PrP, au loc fie n secven e din interiorul, fie din apropierea unei regiuni din structura secundar a PrP, i, n felul acesta, determin destabilizarea structurii proteinei prionice.

Boli prionice,prezentare generala:

y

Maladia Kuru intalnita Noua Guinee in care se practica un canibalism ritual. Cei
ce au murit in urma bolii Kuru (peste 10% din o populatie de 35.000 membrii ai triburilor Fore) au mancat (in semn de respect pentru rudele decedate) creier de la cei morti. Probabil abraziuni in mucoasa bucala au facilitat infectia cu prionii din creierul contaminat.

y Boala Creutzfeld-Jacob(CJ)
Transmisia CJ la om a fost legata de inocularea cu hormon somatotrop hipofizar preparat (in anii '60) din hipofize de la bovine. Azi acest hormon se prepara prin bioiehnologie. In fine, transmisia interumana a CJ a fost mentionata consecutiv unor transte de cornee (de. la subiecti asimptomatici dar contaminati) sau dupa interventii neurochirurgicale stereotactice, in care instrumentele nu au putut fi decontaminate. Rezistenta prionilor la caldura, iradiere sau dezinfectante este cu totul remarcabila. Numai autoclavarea peste 30 minute la 134A C sau plasarea instrumentelor contaminate in solutie de hipoclorit (10 g la litru clor liber) peste noapte sunt mijloace de decontaminare acceptate.In aceasta boala, dementa progreseaz foarte repede, vederea si func iile musculare sunt sever afectate, dup care urmeaz moartea. Boala afecteaz , in general, persoanele in vrsta; totu i aproximativ zece cazuri au fost nregistrate la tineri pacien i englezi care mncaser carne de la vaci infectate cu BSE (bovine spongiform encephalopathy). Dereglarea comportamentala, ataxia, si pierderea coordon rii mi c rilor au ap rut imediat si au progresat rapid; in cele din urma pacien ii mu eau si r mneau nemiscati. In general ace ti pacien i nu supravie uiau mai mult de un an de la stabilirea diagnosticului, si la autopsie
[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4] Page 97

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

creierele lor sem nau mai mult cu cele ale vacilor infectate de BSE dect cu cele ale oamenilor suferind de sindromul CJ. Rezultatul acestor autopsii precum si alte experimente au condus la rezultatul ca boala vacii nebune fusese transmisa si la oameni EST este denumirea generica a unui grup de afectiuni prionice al caror impact pentru sanatatea publica a fost sesizat pentru prima oara in Marea Britanie in 1986. Suplimentarea hranei bovinelor cu concentrate alimentare fabricate din faina de carne si oase de la animale contaminate (bovine si ovine) a condus la infectarea unui numar mare de animale cu agentul (prionul) Encefalopatiei Spongiforme Bovine (ESB). Alte cai de transmitere a bolii la bovine cum ar fi transmiterea orizontala sau verticala (matemo-fetala) sunt in curs de studiu. De asemenea, posibilitatea contaminarii omului in urma ingestiei de carne infectata a fost numai partial confirmata. Esential de retinut este exceptionala rezistenta a agentului viral (prion) la caldura, la raze ultraviolete sau ionizante, la dezinfectante chimice. Etiologia prionica a ESB sau "cow mad disease" (boala vacii nebune) este indubiila. Interdictia din 1988 a reciclarii carnii ovinelor prin adaus in hrana rumegatoarelor sub forma de faina de oase sau de came) a determinat scaderea incidentei bolii dar nu a intrerupt epidemia Mai mult, cazuri izolate au fost semnalate la animale din Irlanda. Franta Elvetia si Portugalia, probabil in urma importului de animale contaminate din Marea Britanie. OMS a formulat in 1996 urmatoarele recomandari privind protectia omului impotriva EST: . Nu se vor introduce in lanturile alimentare umane sau animale produse sau parti provenind de la animale cu semne de ESB. 2. Toate tarile trebuie sa instituie un sistem de supraveghere si declarare a cazurilor de ESB. Tratamentul carcaselor provenind de la animalele bolnave trebuie sa garanteze indepartarea lor de la introducerea frauduloasa in alimentatie si inaclivarea efectiva a agentului etiologic. 3. In absenta datelor de supraveghere situatia unei tari in materie de ESB va fi etichetata ca "necunoscuta" si aceasta va atrage posibile restrictii la export. 4. Toate tarile trebuie sa interzica utilizarea tesuturilor de rumegatoare in hrana rumegatoarelor. 5. in ceea ce priveste alte produse se fac urmatoarele precizari: - laptele si produsele lactate sunt considerate fara pericol chiar si in tarile in care incidenta ESB este ridicata. In limitele cunostintelor prezente, laptele nu transmite aceasta maladie; - gelatina de uz alimentar (preparata din carne de bovine) este fara risc daca in procesul de productie au fost prevazute etape de inactivare a prionilor (extractie cu cloroform): - seul si gelatina pentru fabricarea capsulelor operculate folosite in conditionarea unor medicamente sunt, de asemenea, fara pericol, daca materia prima a fost tratata pentru inactivarea prionilor. 6. Riscul eventual de expunere in alte tari decat Marea Britanie este inferior (insa posibil in Elvetia, Franta, Irlanda, Portugalia); 7. Industria farmaceutica a contribuit la diseminarea maladiei (chiar la om, prin folosirea hormonului somatotrop de crestere preparat din hipofize de bovine etc). De aceea este necesar sa se evite utilizarea unor materiale provenite din carne de
Page 98

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calint,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

bovine in industria farmaceutica. Procedee stricte au fost elaborate pentru reducerea riscului de contaminare umana in urma transmiterii ESB prin produse farmaceutice (in special injecile) provenite din carne de bovine. Trebuie insa admis ca agentul ESB este foarte rezistent la inactivarea fizico-chimica incat riscul potential ramane.

y Sindromul Gerstmann-Straussler;
- insomnia fatala familiala: - boala Kuru (asociata, in trecut, canibalismului ritual in Papua - Noua Guinee. O varianta noua CJ (J) a fost identificata la mai multi bolnavi din Marea Britanie. Contrar cazurilor tipice, noua varianta atinge bolnavii tineri (varsta medie 26,3 ani, extreme: 16-41 ani) iar durata maladiei este relativ lunga (14,1 luni, in medie). Histopatologic, se observa un numar mare de placi amiloide in tot cncefalul inconjurate de zone de neuronoliza fara reac[ie inflamatorie (encefalopatie spongiforma). Leziunile cerebeloase sunt cele mai grave. Definitia clinica a bolii cuprinde: Semne psihiatrice incluzand anxietate, depresiune, modificari de comportament cu evolutie spre semne neurologice. Acestea din urma includ: sindrom cerebelos (alaxie). pierdere de memorie: dementa si mioclonii, in final. Traseele cleciroencefalografice tipice pentru CJ lipsesc. Diagnosticul trebuie confirmat obligatoriu histopatologic postmortem. Prionii nu induc raspuns imun.
PRECAUTII CU MATERIALELE CARE CONTIN AGENTI "NECONVENTIONALI"

Desi boala Creutzfeldl-Jakob a fost transmisa la om, nu par sa existe cazuri de infectii de laborator cu vreunul din acesti agenti. Cu loate acestea este prudent sa observam anumite precautii in manipularea materialului de la oameni sau animale infectate sau potential infectati. Produsele patologice trebuie manipulate in conditiile nivelului 2 de bioprotectie cu urmatoarele precautii suplimentare, pentru ca agentii nu sunt distrusi de procedurile obisnuite de dezinfectie si sterilizare. 1. Trebuie purtate manusi si protejati ochii. 2. Operatiile se executa in nise de bioprotectie. 3. O mare atentie trebuie acordala evitarii producerii aerosolilor sau taieturilor si intepalurilor pielii. 4. Tesuturile fixate in formol trebuie considerate inca infectioase, chiar dupa mentinerea indelungata in formol. 5. Omogcnizatoarele de tesuturi sau aparate similare nu trebuie utilizate din cauza problemelor de dezinfectie. Se vor folosi mojare. 6. Mojarele, fierbatoarele, vasele pentru incluzionare si alte instrumente trebuie colectate pentru decontaminare. 7. Aceste materiale trebuie autoclavate pentru 18 minute la 134 grade C. 8. Instrumentele care nu pot fi autoclavate se plaseaza in solutie de hipoclorit, 10 g/litru clor liber, cel putin 18 ore. Suprafetele trebuie expuse la hipoclorit, 10 g/litru
[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4] Page 99

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

clor liber, pentru decontaminare, cel putin 30 minute. Decontaminarea. Pentru decontaminare sunt recomandati hipocloritii si aldehidele. Hipocloritii trebuie sa contina 1 g/litru clor liber pentru uz general si 10 g/litru pentru sange. Glutaratul poate fi utilizat pentru decontaminarea suprafetelor.

Concluzii
De i cunoscute de sute de ani, maladiile prionice reprezint nc un domeniu pu in cunoscut din punct de vedere biologic i medical fiind necesare, nc , numeroase studii i cercet ri pentru stabilirea cu exactitate a cauzelor i a mecanismului care determin apari ia acestor boli. Faptul c exist numeroase variante ale acestor boli, i c pot fi de natur diferit , reprezint o barier n realizarea acestui obiectiv. Ipotezele formulate pentru descifrarea mecanismului acestor boli arat c acesta este comun att la om ct i la animale i c la baza lui se afl procesul de conversie a PrPc n PrPSc. Acest proces de conversie poate fi indus de o serie de factori, att endogeni ct i exogeni, i const n schimbarea conforma ional a proteinei normale (conversia structurilor E-helix n F-pliate) f r a afecta n nici un fel compozi ia chimic a acestor proteine. Un rol important n acest proces l au muta iile de la nivelul genei care codific proteina normal ; acestea au loc n pozi ii fixe i sunt corelate cu anumite fenotipuri. De i PrP este implicat n procesul neurodegenerativ, r mne neclar dac neurotoxicitatea PrPSc sau pierderea func iei PrPc (de exemplu activitatea superoxid dismutazic ), este determinantul major al manifest rilor clinice. Exist multe ntreb ri la care nu s-au g sit nc r spunsuri n ceea ce prive te rela ia dintre structura i func ia acestei proteine prionice.

Bibliografie
1) Brockes PJ., - Topics in prion cell biology, Current Opinion in Neurobiology, 1999, 571-577. 2) Daggett V., - Structure-function aspects of prion proteins, Current Opinion in Biotechnology, 1998, 9: 359-365. 3) Daude N, Lehmann S, Harris DA, - Identification of intermediate steps in the conversion of a mutant prion protein to a scrapie-like form in cultured cell, J Biol. Chem. 1997, 272: 11604-11612. 4) Foster J., Hunter N., - Transmissible spongiform encephalopathies: transmission, mechanism of disease, and persistence, Current Opinion in Microbiology, 1998, 1: 442-447. 5) Hope J., - Prions and neurodegenerative diseases, Current Opinion in Genetics & Development, 2000, 10: 568-574. 6) oa 7) Graham SJ., Collinge J., - Prion disease-the propagation of infectious protein topologies, Microbes and Infection, 2000, 2: 1445-1449.

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calint,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

Page 100

[BOLI PRIONICE-REFERAT CHIMIE -U.M.F. CAROL DAVILA ]

8) Graham SJ, Clarke AR., - Mammalian prion proteins, Current Opinion in Structural Biology, 2000, 10: 69-74. 9) Markus G., Aguzzi A., - Peripheral pathogenesis of prion diseases, Microbes and Infection, 2000, 2: 613-619. 10) Prusiner SB., Scott MR., - Genetics of Prions, Annu. Rev. Genet., 1997, 31: 139-175. 11) Rezaie P, Lantos PL, - Microglia and the pathogenesis of spongiform encephalopathies, Brain Research Reviews, 2001, 35:55-72. 12) Telling GC, Parchi P, DeArmond SJ, Cortelli P, Montagna P, Gabizon R, Prusiner SB, - Evidence for the conformational of the pathologic isoform of the prion protein enciphering and propagating prion diversity, Science, 1996, 274, 2079-2082. 13) Wadsworth JDF, Graham SJ, Collinge J.,Hill AF., - Molecular biology of prion propagation, Current Opinion in Genetics & Development, 1999, 9: 338-345. 14) Wickner RB, Edskes HK, Maddelein ML Prions: Portable prion domains, Current Biology,. 2000,10: 335-337.

[Buturca Marius-Daniel,Chirca Otilia,Chiru Calin,Chelmus Cristian-Seria I-Gr.4]

Page 101