Carmona Fernndez Ivonne Espinoza Islas Nidia Julieta Galicia Hernandez Maricela Reyes Prez Giovanni Ismael

Definicin de Droga de Abuso

y Bajo el nombre genrico de drogas de abuso se

pueden incluir una largusima lista de sustancias qumicas de diverso origen que pueden ser susceptibles de consumo con fines no teraputicos
y

Gisbert Calabuig Medicina Legal y Toxiologia Ed. Masson Barcelona 2001

Clasificacin de Drogas
y Alcohol etlico y Opiceos y Inhalantes y Cocana y Anfetaminas y sustancias afines y Otros estimulantes (Caf, Khat, etc.) y Derivados de la Cannabis Sativa y Alucingenos (PCP, LSD, etc.) y Hipnticos y ansiolticos y Tabaco

Efectos Farmacolgicos
y Compuestos psicoactivos y Estimulantes (cocana, anfetaminas) y Depresores (alcohol etlico) y Narcticos (opiceos) y Alucingenos (Cannabis sativa, PCP, LSD)

Investigacin Toxicolgica
y Es el conjunto de procesos analticos que tienen

por objeto el aislamiento, identificacin y determinacin cualitativa o cuantitativa de los txicos tanto en vivo como en el cadver, con el fin de permitir el diagnostico de intoxicacin y el esclarecimiento de los hechos.

Pasos de la Investigacin Toxicolgica

y Informacin y Toma de Muestra y Procesamiento de la

muestra

y Aislamiento,

Concentracin y Hidrlisis, digestin, desproteinizacion, etc.

y Diferenciacin y deteccin y Identificacin

y Comparacin datos

encontrados con bases de datos de referencia

y Cuantificacin y Interpretacin de los

resultados

Anlisis De Drogas En Muestras Biolgicas

y El anlisis es posible en todas las muestras

biolgicas y Diferentes muestras biolgicas dan diferente informacin y Interrelacin entre las muestras y Ventanas de Deteccin

Especmenes para bsqueda de drogas

y Vivos y Sangre* y Orina y Fluido Oral y Pelo y Sudor y Aliento y Muertos y Sangre y Orina y Humor Vtreo y Tejidos

Ventajas Y Desventajas De Diferentes Muestras

Muestra
Sangre (Total

Ventajas

Desventajas
Volumen reducido, bajas concentraciones, droga padre y metabolitos

Detecta Droga, /Suero/plasma) anlisis cuantitativo Orina Contenido Gstrico Pelo y uas Humor Vtreo Vsceras

Volumen elevado, No siempre disponible, metabolitos, altas concentraciones anlisis cuantitativo no siempre til Altas concentraciones Muestra variable, No siempre til Siempre disponible Putrefaccin limitada Requiere alta sensibilidad, exposicin de semanas a meses Volumen limitado

Altas concentraciones Anlisis cuantitativo difcil de interpretar, interferencias

Mtodos para el Anlisis de Drogas de Abuso

Presuntivas Inmunoensayos enzimaticos (EIA) Inmunoensayo por fluorescencia polarizada (FPIA) Radioinmunoanlisis (RIA) Cromatografa de capa fina (CCF) Confirmacin Cromatografa de lquidos espectrometria de masas (CL-EM) Cromatografa de gases Espectrometra de masas (CG-EM) Electroforesis CapilarEspectrometria de masas (EC-EM)

Mtodos presuntivos
y Anlisis inicial Screening
y Identificar muestras

y y y y

negativas Selectivos a familias de drogas Sensibles Rpidos Barato

y Negativo es negativo y Positivo necesita confirmarse y Inmunoensayos y Cromatografa en capa fina

INTRODUCCION A LOS INMUNOENSAYOS

Inmunoensayo es una prueba que usa complejos de anticuerpo y antgeno como medio para generar un resultado perceptible. Un complejo anticuerpo: antgeno tambin es conocido como inmuno-complejo. inmuno se refiere a una repuesta inmunolgica que hace que el cuerpo genere anticuerpos y ensayo se refiere a prueba. Entonces , un inmunoensayo es una prueba que utiliza inmunocomplejos cuando se unen los anticuerpos y los antgenos. Los inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio, como las pruebas colorimtricas, ya que usan complejos anticuerpo: antgeno para generar una seal que pueda medirse . En oposicin, la mayora de las pruebas de rutina de qumica clnica utilizan reacciones qumicas entre el reactivo (solucin de sustancias qumicas u otros agentes ) y la muestras del paciente para generar un resultado de la prueba

Inmunoensayos
y Radioinmunoensayo (RIA) y Inmunoensayo enzimtico

(EMIT, CEDIA) y Inmunoensayo por Polarizacin de la fluorescencia (FPIA) y Interaccin cintica de microparticulas en solucin (KIMS) y Ensayo por enzima unida a inmunoabsorbente (ELISA)

Inmunoensayos Principio -

Anlisis Toxicolgico Pruebas Presuntivas -

Equipo Viva Twin P.G.J.E.M.

PROCESO DE LA MUESTRA PARA INMUNOENSAYOS

y Orina
y Centrifugar la muestra

y Sangre
y Desproteinizacion
y

Disolventes
y y y y

Metanol Acetona Cloroformo Acetonitrilo

Acido sulfosalicilico y N,N Dimetilformamida y Humor vtreo

y

y Centrifugacin y Dilucin

Anlisis Toxicolgico
- Prueba Confirmativa y Un segundo anlisis, empleando generalmente una tcnica con un principio qumico diferente a la prueba presuntiva. y Tcnica cromatografica acoplada a una espectrometra
y

CG/EM, CL/EM

y Identifica sustancias y Sensibilidad y Generalmente,

cuantitativa y Mas confiable (Validez Legal)

Cromatografa
y Definicin y Es un mtodo de separacin basado en la diferente distribucin de los componentes de una muestra entre una fase mvil y una fase estacionaria. y Adsorcin: basado en diferencias en la afinidad entre una fase mvil y la fase estacionaria. y Particin: Diferencias en la solubilidad entre una fase liquida estacionaria y una fase mvil lquida o gaseosa.
Principles on Forensic Toxicology Barry Levine AACC Press (2004)

y La cromatografa, en general, es un mtodo de la fsica

de separacin en el cual los componentes de una muestra son separados como consecuencia de la diferente distribucin entre una fase mvil y una fase estacionaria. Las distintas combinaciones de estas fases nos proporcionan las diferentes clases de cromatografa; por ejemplo si la fase mvil es un gas tenemos la cromatografa de gases, CG, la cual puede ser gas - slido y gas - lquido segn la naturaleza de la fase estacionaria.

Tcnicas de Separacin y Sistemas de Fases

y Extraccin lquido lquido (ELL) y Extraccin en fase slida (EFS) y Cromatografa en capa fina y Cromatografa en columna y Cromatografa de Lquidos y Cromatografa de Gases

L/L L/S L/S L/S L/L L/L y L/S

Cromatografa Historia y 1903 -1906 Tswett y 1929 Lederer y 1938 -1939 Ismailov y y y y y

Shraiber (CCF) 1941 1952 Martin, Synge and James (CG) 1950 M.J.E. Golay 1960 CL 1960 CG- EM

Cromatografa de gases
y La cromatografa de gases es la tcnica a elegir para

la separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles. y La Cromatografa de Gases separa y detecta los componentes en una muestra. Primero ocurre una vaporizacin de la muestra problema la cual es transportada por un gas en la columna de separacin. Los compuestos de la muestra se separan y van saliendo o identificndose uno a uno.

Cromatografo de gases

Sustancias trmicamente estables y voltiles

Que proporciona la cromatografa de gases?

y SEPARACION y Diferencia analitos entre ellos y entre los componentes de la matriz y PARAMETRO DE RETENCION y Determinado por las diferencias de afinidad del analito por la fase estacionaria y la fase mvil
y

Parmetro cualitativo

y RESPUESTA DEL DETECTOR y Seales del detector son proporcionales a la concentracin de la sustancia
y

Parmetro cuantitativo

Deteccin multidimensional
y Espectrometra de masas y Analitos son transformados en iones cargados o fragmentos los cuales son subsecuentemente separados de acuerdo a su radio masa /carga y sus abundancias son medidas
y Proporciona informacin acerca de la estructura

molecular del analito

y Identificacin de los analitos (comparacin con bases de

datos)

Proceso

Un espectro de masas tpico

Abundancia 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z20 > 29 55 98 40 60 80 100 113 128 120 141 140 170 159 160 180 85 <--[C H ] + 6 13 43 71 <--[C H ] 5 11 + Dodecano: C12H26 Espectro medio de dodecano por EVALDEMO.D 57 <--[C H ] + (Pico base) 4 9

+ . M (Precursor)

y Ion molecular (ion precursor): prdida de

un electrn y Pico base: ion ms abundante en el espectro

y Preparacin de la muestra
y Disgregar la materia orgnica (slidas) y Hidrlisis (protena, glucuronidos) y Extraccin con una fase orgnica

Extraccin de Drogas de muestras biolgicas

y
y y

Matrices Lquidas
Extraccin lquido-lquido Extraccin en fase slida (discos, cartuchos) Microextraccin en fase slida

Muestras slidas
y

Extraccin lquido-slida (soxhlet, bligh & Dyer) Dispersin de la matriz en fase slida (MSPD) Extraccin de Fluidos supercrtico (SFE) Extraccin acelerada de disolvente (ASE) Extraccin asistida por microondas (MAE)

Factores que determinan la detectabilidad de las drogas

y Tipo de droga y Dosis consumida y Frecuencia de uso y Espcimen biolgico utilizado y Diferencias individuales en metabolismo y Momento de recoleccin vs consumo y Sensibilidad del mtodo
Chiang y Hawks, 1986

Limitaciones Anlisis de Drogasy Drogas detectables pero debajo del nivel de corte

(Negativo) y No pueden indicar la cantidad de droga consumida y No puede indicar cuando se consumi y No puede indicar la fuente de la droga

Limitaciones Anlisis de Drogas y Muchos inmunoensayos no detectan algunos opiceos

sintticos o semisinteticos (oxicodona, metadona, etc) y No existen inmunoensayos para muchas drogas y Algunas drogas requieren de inmunoensayos especficos