Mtodo Espectrofotomtrico.

1- Fundamento de la espectrofotometra: La espectrofotometra es un mtodo que se utiliza para determinar la concentracin de sustancias en solucin a travs de la intensidad de color que poseen naturalmente o que producen por una reaccin cromtica. La intensidad de color se determina mediante la absorcin de luz de longitud de onda determinada en el espectro visible. El aparato utilizado se llama espectrofotmetro.

Esquema del aparato:

Fuente de luz Filtro Tubo con solucin coloreada Clula fotoelctrica galvanmetro

Como fuente de luz se utilizan lmparas de tungsteno que emiten luz que abarca el

Para seleccionar parte del espectro se utilizan redes de difraccin. La seleccin la longitud de onda a utilizar depende del color de la sustancia a medir, es decir la zona del espectro donde mejor absorban. La luz llega al tubo con intensidad Io, atraviesa el mismo y sale con una intensidad I. Siempre la intensidad de la luz emergente es menor debido a que la solucin absorbe luz. Se define la transmitancia (T) como el cociente entre la luz emergente y la luz incidente. Su valor siempre es inferior a 1. I T = I0

Este valor se puede expresar como T % =100 x T. Para medir la luz emergente se utilizan clulas fotoelctricas que excitadas por la luz emiten una corriente elctrica la cual se detecta en el galvanmetro. Se denomina Absorbancia (A) o densidad ptica (DO) al logaritmo negativo de la transmitancia. A o DO = - log T La absorbancia depende de la concentracin de la sustancia coloreada y del espesor del tubo lo cual se expresa por la ley de Lambert- Beer. -log T = A = e. c . l A= absorbancia. e l = espesor del tubo. c = concentracin de la sustancia coloreada.

Colores de la luz visible

Longitud de onda de la absorcin mxima (nm) 380 420 420 440 440 470 470 500 500 520 520 550 550 580 580 620 620 680 680 780 Color absorbido Violeta Azul - violeta Azul Verde - azulado Verde Verde amarillento Amarillo Naranja Rojo Prpura Color observado Amarillo - verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura Violeta Azul - violeta Azul Verde - azulado Verde

En todo mtodo espectrofotomtrico se debe realizar un tubo "blanco" (B), un tubo testigo (T) y un tubo desconocido (D). El tubo B contiene los reactivos, pero en l no aparece la sustancia a determinar. Con este tubo se calibra el aparato a cero. El tubo T contiene todos los reactivos y la sustancia en concentracin conocida (CT). El tubo D contiene los reactivos y la sustancia a determinar (CD). De acuerdo a la ley de Lambert- Beer la absorbancia de cada tubo es directamente medidos bajo el mismo espesor (igual l), la nica variable es la concentracin. AT = e . CT. l AD = e . CD. L Dividiendo miembro a miembro y simplificando AT = AD CD De esta expresin podemos despejar la concentracin desconocida CD = CT AD AT CT