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Elisa Para Antigeno de Dengue Ns1

Elisa Para Antigeno de Dengue Ns1

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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICO-BIOLOGICAS
INGENIERÍA BIOQUÍMICA

REPORTE DE PRÁCTICA “Elisa para antígeno de Dengue NS1”

ALUMNO: Ramírez Carrasco Jesús Humberto

MAESTRA: MC. Janette Chávez Ontiveros

MICROBIOLOGÍA Cuarto grado

CULIACÁN SINALOA 7 DE DICIEMBRE DEL 2011

ELISA PARA ANTÍGENO DE DENGUE NS1 Objetivos: 1.200 CO > . que puede prolongarse hasta 12 meses. que se considera carcinogénico. la reacción enzimática es interrumpida mediante la adición de una solución ácida.400 Relaciones: Relación R3 < 0. En segundo lugar. Las técnicas ELISA tienen numerosas aplicaciones en bacteriología. Se han utilizado toda una variedad de enzimas. se forma un complejo inmune AcM-NS1AcM/peroxidasa. deberán de cumplirse los siguientes criterios:   Valor de densidad óptica de CO debe ser mayor a 0. es un método inmunoenzimático en una etapa de tipo sándwich. La preparación de conjugados se consigue. la peroxidasa dl rábano picante y la glucosa-oxidasa. La prueba utiliza anticuerpos monoclonales de ratón (AcM) para su captura y revelación.El alumno aprenderá a validar los resultados obtenidos. Tras los lavados practicados al final de la incubación. Se debe añadir un estabilizante enzimático antes de proceder a su conservación a 4°C.50 (Relación R5 = DO R5 / CO)…Control positivo . un color amarillo ( : 405nm) y oscuro ( : 450nm). temperatura y pH. en microplaca para la detección cualitativa o semicuantitativa del antígeno NS1 del virus de dengue en el suero o en el plasma humano. En presencia de antígeno NS1 en la muestra. parasitología y virología.400 (Relación R3 = DO R3 /CO)…Control negativo Relación R5 > 1.El alumno será capaz de realizar la técnica de ELISA. En primer lugar. Las muestras de pacientes y los patrones son incubados directa y simultáneamente con el conjugado durante 90 minutos a 37°C en las cúpulas (pocillos) de la microplaca sensibilizada por los AcM. respectivamente. Introducción Existen dos importantes variaciones en relación con ELISA. La densidad óptica obtenida a 450/620 nm es proporcional a la cantidad de antígeno NS1 presente en la muestra. la presencia del complejo inmune es revelada mediante el añadido de una solución de revelación enzimática que induce el desarrollo de una reacción coloreada. Algunos métodos precisan que las placas se mantengan durante toda la noche a 4° C. La fracción inmunoglobúlinica de la globulina antiespecie se aísla por precipitación salina. El 4nitrofenil fosfato o sustrato usado para la fosfatasa alcalina no es peligroso. a diferencia del ácido 5-aminosalicílico o sustrato de la peroxidasa del rábano. El glutaraldehído libre se elimina por diálisis. como pueden ser las placas de microtitulación o los tubos de poliestireno. La hidrólisis de éstos sustratos da. 2. entre los que citaremos la fosfatasa alcalina. que los anticuerpos o antígenos soluble se pueden hacer insolubles por adsorción a una fase sólida. Control de calidad Para validar la manipulación.. Principio La prueba Platelia TM para dengue NS1 Ag. La mezcla se incuba con glutaraldehído al 0. mediante la unión covalente con glutaraldehido. en un tampón de pH elevado. en el caso de la fosfatasa alcalina.. a los 30 min de incubación a temperatura ambiente. La adsorción depende también dl tiempo. los antígenos o anticuerpos se pueden conjugar al enzima sin pérdida de actividad.2% durante 2-4 horas a temperatura ambiente. Ésta se combina con el enzima en la proporción 3:1.

0 Relación ≥ 1. 4 = 0. 3) H (Mtra.18 = 2.081/0.074 0.18 = 0. iones metálicos). Conclusiones y Comentarios Debido a que la prueba fue hecha por varias manos los resultados nos salieron fuera de los rangos esperados pero aprendimos lo que es el principio que era el principal objetivo de la práctica.18 = 0.074/0.405/0.205 0.50 Relación ≥ 0. Contaminación puntual de la solución de revelación por agentes químicos oxidantes (lejías.25 Mtra. 1) F ( Mtra.155)/2 = 0.Interpretación de resultados Relación Relación < 0.18 = 0.067 0.37222 Mtra. 1 = .155 0.18 = 0.0 Resultado Negativo Equívoco Positivo Interpretación La muestra es considerada no reactiva para el antígeno NS1 Del virus del dengue La muestra es considerada dudosa para el antígeno NS1 del virus del dengue La muestra es considerada reactiva para el antígeno NS1 del virus del dengue.205+. 2) G (Mtra. Contaminación de las muestras negativas por un suero o plasma muy concentrado. 1) Densidad Optica 0.099 0.55 Mtra. .  Contaminación puntual de la solución parada.622 Relación R5 (+) = . Error en el pipeteo.405 0.4111 Mtra. 3 = 0. 2 = .50 y < 1.112 0.18 = 0. Resultado obtenidos Pocillo A (-) B (CO) C (CO) D (+) E ( Mtra.081 Promedio CO = (.45 Posibles Causas de error     Lavado insuficiente de las microplacas.067/0.18 Relación R3 (-) = .099/0.112/0.

por ejemplo. crecen a temperaturas bajas (-5 a 5 ºC). que es una masa entretejida de filamentos de una célula de espesor. llamados hifas. En la morfología de bacterias podemos encontrar algunas formas puntiformes. 3. (Son los hongos que aparecen comúnmente en los alimentos. sus colonias típicas son como las de las bacterias y se usan mucho en la fermentación de bebidas alcohólicas. consisten en células individuales alargadas con numerosos núcleos o subdivididas por tabiques llamados septos en muchas células. Mencione las diferencias entre la morfología colonial bacteriana y la morfología colonial de hongos. parecidos a hilos. . es decir. dependiendo de la especie que se trate.. Las levaduras son menos complejas y no poseen micelios. algunas son lisas. Ejemplos de hongos filamentosos: Penicillium sp. ¿En qué ambientes se encuentran este tipo de microorganismos? Ambos crecen en ambientes ácidos y son organismos psicrótrofos. 2. aun cuando su temperatura óptima de crecimiento sea alrededor de los 18 ºC. etc. Saccharomyces cerevisiae. Las hifas. Aspergillus flavus. otras como una especie de moco y en el caso de los hongos El cuerpo de casi todos los hongos es un micelio. El micelio posee estructuras llamadas "hifas" las cuales pueden o no ser septadas (divididas). ¿Cuáles son las condiciones óptimas para el crecimiento de hongos y levaduras? Los hongos y las levaduras pueden crecer en un sustrato o medio de concentraciones de azucares que inhiben a la mayoría de las bacterias esto por ejemplo el PDA. 4.Micro-9 1. sobre todo limones o naranjas). c/u con una o varios núcleos. ¿Qué diferencias existen entre la morfología microscópica de los hongos filamentosos (mohos) y las levaduras? Los mohos filamentosos poseen un micelio vegetativo "aéreo" y otro "profundo".

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