REPLICACION DEL DNA

La replicacin es el proceso mediante el cual, a partir de una molcula de DNA doble hlice, se sintetizan dos molculas idnticas. Tiene lugar cada vez que se divide una clula, ya que las dos clulas hijas han de tener exactamente, la misma dotacin gentica que la progenitora.

Molcula DNA parental

CARACTERISTICAS Es Semiconservativa Se produce sectorialmente. Es asincrnica Es monofocal en procariotas y multifocal en eucariotas Es Bidireccional Es Semidiscontinua Requiere de Cebadores Ocurre en el perodo S.

Cadena hija (nueva)

Molculas de DNA hijas

Es semiconservativa A partir de la doble hlice de una molcula de DNA se originan dos molculas de DNA, ambas compuestas por una cadena original (preexistente) y una cadena nueva (recin sintetizada). Es decir, que las dos cadenas de la molcula progenitora se separan y sirven cada una de molde para la sntesis de una nueva cadena hija complementaria, siguiendo la regla normal de apareamiento.

Molcula parental de DNA

Ambas cadenas parentales Sirven como molde

Dos molculas de DNA hijas idnticas

La Replicacin se produce sectorialmente

El DNA Se sintetiza a partir de mltiples sectores a lo largo de su molcula, cada uno de los cuales corresponde a un lazo, que representa una unidad de replicacin. Por consiguiente cada unidad abarca al DNA comprendido entre los puntos de origen y de llegada del lazo a su base, es decir entre las SAR (scaffold associated regions).

La Replicacin es asincrnica
Las bandas R (ricas en G-C) se replican durante la primera mitad de la fase S y las bandas G y Q (ricas en A-T) lo hacen durante la segunda mitad.

La Replicacin es Multifocal en Eucariotas

En eucariotas, para poder llevar a cabo la replicacin en un tiempo razonable, ha de ser multifocal, es decir, empezar por muchos puntos a la vez. Se ha comprobado que en el DNA de clulas de mamferos existen cerca de 50 000 a 100 000 replicones. En cambio la replicacin del DNA bacteriano es monofocal, es decir, existe un slo origen de replicacin.

Es Bidireccional
Al abrirse la doble hlice se forma una estructura llamada burbuja de replicacin, cuyo tamao aumenta a medida que avanza la separacin de las dos cadenas de DNA, evento que se produce en forma simultnea en los 2 extremos de la burbuja. Cada burbuja, tiene dos horquillas de replicacin que a partir de ese punto de origen comn avanzan en ambas direcciones opuestas y desaparecen cuando colisionan con sus similares de las burbujas contiguas, al culminar el acercamiento progresivo entre ellas.
Origen de replicacin Origen de replicacin

Origen de replicacin

Cadena parental

Cadena hija

Burbuja de replicacin

Dos molculas de DNA hijas

Se sintetiza en forma continua y discontinua

La cadena hija que adopta como molde a la cadena progenitora que corre en direccin 35 se sintetiza en forma continua, al crecer en direccin 53, y se denomina cadena adelantada (leading strand).

La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que corre en direccin 53 es sintetizada de un modo singular, ya que para poder crecer en esa direccin debe sintetizarse en direccin opuesta al avance de la horquilla de replicacin. El problema se supera haciendo de que la sntesis sea discontinua, lo cual significa que la nueva cadena se sintetiza de a pequeos fragmentos y se le llama cadena retrasada (lagging strand).

 La sntesis de la cadena retrasada se lleva a cabo en la direccin opuesta a la del movimiento de la horquilla de crecimiento, a partir de una serie de iniciadores (primers) de RNA cortos formados por la primasa en mltiples sitios de la segunda cadena molde. Los segmentos resultantes de RNA y DNA se conocen como fragmentos de Okazaki.

Es asimtrica

La replicacin es asimtrica, ya que una misma cadena se replica en forma continua de un lado de la burbuja y en forma discontinua del otro lado. Por tanto, cada burbuja presenta cuatro reas generadoras de ADN, dos que lo hacen de manera continua y dos de manera discontinua.

Requiere de Cebadores
Para empezar la sntesis de DNA se requiere una cadena de nucletidos para agregarle un nuevo nucletido. Cada fragmento de Okazaki se inicia con un RNA cebador primer (~10 bases de largo).

Ocurre en Fase S del ciclo celular. La replicacin del DNA

ocurre con alta fidelidad dentro de un perodo de tiempo determinado en forma precisa dentro del ciclo celular. Sntesis de DNA = replicacin

REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
EN PROCARIOTAS DNA Helicasa. Protenas SSB (Single- Strand binding). Topoisomerasas I y II RNA primasa. DNA Polimerasas (DNA Pol) I, II y III Pirofosfatasa. DNA Ligasa DNA molde o template Cebadores Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato: (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) Mg++ Abrazadera EN EUCARIOTAS DNA Helicasa. Protenas SSB (Single- Strand binding). Topoisomerasas I y II RNA primasa. DNA Polimerasas (DNA Pol) , , , , Pirofosfatasa. DNA Ligasa DNA molde o template Cebadores Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato: (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) Mg++ PCNA (Proliferating cell nuclear antigen) ORC (origin recognition complex) Nucleasa reparadora

DNA POLIMERASAS (DNA Pol)

La DNA Polimerasa, agrega un nucletido al extremo 3 de la cadena de DNA en crecimiento y forma un enlace fosfodister entre este extremo y el grupo 5-fosfato de nucletido entrante. El nucletido trifosfato entrante provee la energa necesaria para esta reaccin por la hidrlisis de los dos fosfatos terminales (PPi). Este pirofosfato es luego hidrolizado a fosfato inorgnico (Pi), lo cual permite que la reaccin de polimerizacin sea irreversible.

DNA HELICASAS Y PROTENAS SSB.

Una helicasa y las protenas de unin a las monocadenas (SSB) trabajan para desenrollar y mantener las cadenas de DNA separadas antes del avance de la horquilla de replicacin Las helicasas son una clase de enzimas capaces de desplazarse a lo largo del DNA utilizando la energa de la hidrlisis del ATP, para separar las cadenas. Las protenas SSB mantienen las cadenas separadas

DNA Helicasa

TOPOISOMERASAS
Las Topoisomerasas tipo I relajan el DNA (hacen desaparecer regiones superenrolladas) por corte y cierre de una cadena del DNA.

TOPOISOMERASA II (Girasa)

PROTENAS INVOLUCRADAS EN LA REPLICACIN EN PROCARIOTAS

PROTENA DNA gyrasa GENES nalA, novR* FUNCION Elimina superenrollamientos positivos o introduce superenrollamientos negativos. En bacterias, corta entrelazamiento entre cromosomas hijos al final de la replicacin. Desenrolla las dos cadenas de DNA Sintetiza el RNA cebador Sintetiza DNA Elimina el cebador y rellena huecos con DNA Une los extremos del DNA

Helicasa Primasa DNA Pol III DNA Pol I DNA ligasa

dnaB dnaG polC polA dnaL

ETAPAS DE LA REPLICACION

INICIACION
Reconocimiento de orgenes de replicacin Separacin de hebra Posicionamiento de maquinaria de replicacin

ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de replicacin Replicacin semiconservativa, semidiscontinua, coordinada.

TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin Desensamble de replisomas

1) INICIACION
La sntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin. Los orgenes de replicacin tpicamente contienen mltiples secuencias repetidas cortas. Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por protenas multimricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia ste otras enzimas de la replicacin.

La iniciacin de la replicacin del DNA en E. coli, se produce por la unin de la protena dnaA (proteina iniciadora) al nico origen de replicacin (oriC), seguida por la fijacin de la DnaB, una helicasa que disocia el DNA a la altura de la horquilla. La asociacin de la primasa (dnaG) a este complejo forma un primosoma. Tras la sntesis del iniciador la primasa se separa.

2) ALARGAMIENTO DE LAS CADENAS:

Una vez que el origen de replicacin se ha formado, el alargamiento para formar la cadena adelantada progresa sin mayor dificultad. Una primasa se une a un sitio adyacente a la helicasa en el segmento monocatenario del molde de la cadena retrasada e inicia la sntesis de otro iniciador de RNA, el mismo que la polimerasa procede a alargar para formar otro fragmento de Okasaki. El ncleo polimersico que sintetiza la cadena adelantada se desplaza, junto con su abrazadera de subunidad , a lo largo de su molde en la direccin del movimiento de la horquilla, y as alarga la cadena.

ELIMINACION DE LOS CEBADORES DE ARN Y UNION DE LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Debido a su actividad exonucleasa de 5 3, la DNA pol I elimina ribonucletidos a partir del extremo 5 de los fragmentos de Okasaki, y rellena los espacios entre los fragmentos de Okasaki con DNA. Los fragmentos de DNA resultantes son unidos con posterioridad por la DNA ligasa formando una hebra enteramente constituida de DNA

3) TERMINACIN
La replicacin finaliza cuando una horquilla de replicacin se encuentra con el otro lado del cromosoma circular en el lugar de terminacin, la regin ter ( ). La regin ter est formada por un par de secuencias ter de repeticiones invertidas. Cada secuencia ter evita una progresin posterior de una de las horquillas de replicacin cuando se une una protena de unin ter (TBP) de 26 KDa. Las dos molculas hijas de DNA se separan porque acta una topoisomerasa de tipo II.

LA DNA POLIMERASA HACE UNA LECTURA DE PRUEBA (PROOFREADING)

Muchos errores de copiado que se producen durante la replicacin del DNA son corregidos por la funcin de lectura de prueba de la DNA Polimerasa, que pueden reconocer bases errneas (mal apareadas) en el extremo 3 de la cadena en crecimiento y luego extraerlas por medio de una actividad inherente de exonucleasa 3 5.

DNA POLIMERASAS EUCARIOTICAS: , , , y .

Las enzimas son similares a aquellas involucradas en la replicacin del DNA bacteriano. La DNA topoisomerasa II est involucrada en aliviar superenrollamientos positivos en el DNA, mientras que la helicasa desenrolla las dos cadenas. LA DNA Pol- tiene baja procesividad y se encuentra asociada a una primasa sintetizando pequeos fragmentos de ARN-ADN durante la sntesis de la hebra tarda. Carece de actividad exonucleasa y es fuertmente inhibida por afidicolina (fuerte tambin para y ) DNA Pol / tiene alta procesividad en presencia de PCNA (tiene una funcin homloga a la subunidad de Pol III de E. coli ) y no tiene asociada una primasa. Sintetiza tanto la hebra conductora como la tarda; en sta ltima alarga los fragmentos de Okasaki inicialmente sintetizados por el complejo DNA Pol - primasa. DNA Pol es encontrada en la mitocondria y replica su DNA. DNA Pol tienen buena procesividad y estn involucradas en la reparacin del DNA.

La capacidad para sintetizar largo DNA es conferido a la DNA Pol- por el antgeno nuclear de clulas en proliferacin (PCNA). El PCNA est formado por 3 subunidades monomricas que forman un aro que se une a la polimerasa y no al DNA para impedir desprendimiento de la enzima ms no su deslizamiento. Los cebadores son eliminados por una nucleasa reparadora y su lugar lo ocupa una pieza equivalente de DNA, sintetizada por la DNAP- . El proceso culmina al actuar la DNA ligasa.