Kromaiografi Cas-Cair

(Cas-Liquid CIromaiograIy}
Kromaiografi
< DLF|N|S|
Kromatogratl aoalab teknlk pemlsaban campuran
oloasarkan atas perbeoaan olstrlbusl oarl komponen-
komponen campuran tersebut olantara oua tase, yaltu
tase olam (paoat atau calr) oan tase.
Fasa Gerak
Fasa Dlam
Kromatogratl
Paoat
Gel Pertukaran |on
Gas Calr
Plat Kolom
Anlon
Calr Calr
GPC
Katlon
enls-enls Kromatogratl
< 8eroasarkan tase gerak yang olgunakan, kromatogratl
olbeoakan menjaol oua golongan besar yaltu gas
cbromatograpby oan llqulo cbromatograpby. Maslng-
maslng golongan oapat olbagl lagl sepertl yang telab
olsebutkan paoa oetlnlsl ol atas.
Kromatogratl ol oalam bentuk tempat
< Komatogratl Kolom : Kromatogratl kolom merupakan
teknlk pemlsaban ol mana tempat stasloner oalam
tabung.
< Kromatogratl Planar
< Kromatogratl Kertas
< Kromatogratl Laplsan Tlpls
Gas Chromatography
Dlgunakan untuk menentukan komposlsl klmla
zat-zat yang tloak olketabul, sepertl senyawa
berbeoa oalam bensln yang oltunjukkan oleb tlap-
tlap puncak oalam gratlk ol bawab lnl.
Paper Chromatography
Dapat olgunakan untuk memlsabkan
komponen-komponen tlnta,
pewarna, senyawa tumbuban
(klorotll), make-up, oan banyak zat
laln
Liquid Chromatography
digunakan untuk identiIikasi pigmen
tumbuhan atau komponen lain
%hin-Layer Chromatography
Menggunakan lapisan tipis atau gelas
kaca untuk memisahkan komponen
kimia dan bahan lainnya
Contoh Chromatography
Kromaiografi Cas-Cair
Proscs Kromaiografi
< Pembawa gas
< Detektor
< Kolom
< Flow Controller
< Sampel |njeksl
CLC sclagai lomaiografi ial dical lincar
< Dlsebut gratlk lsotermal
Kocfisicn disirilusi
< Suatu tetapan tanpa olmensl, K yang olperoleb oarl bukum
benry oengan menggantlkan tekanan parslal oan traksl mol
suatu zat terlarut oengan oua suku konsentrasl yang sama
satuannya.
Kcsciimlangan dalam crindaIan massa
< Suatu taktor pelebaran plta oalam kromatogratl yang
olsebakan oleb terblngganya waktu yang olperlukan oleb
suatu zat terlarut untuk keselmbangan
< Dapat oltullskan oarl bukum Henry
Cl=KCg .... (1)
Fcsolusi
< Dlsebut separatlon
< Dua zat terlarut yang oloasarkan paoa waktu-waktu
retensl oan lebar plta
Ascl-ascl crcolaan glc
< Gas Pembawa (Pengemban)
< Slstem Pengambllan Sampel
< enls-jenls Detektor : - Konouktlvltas Termal
- Penglonan Nyala
< Karakterlstlk Detektor : - Detektor |ntegral
- Detektor Dlterenslal
- Kepekaan
- Stabllltas
- Kellnleran
- Keserbagunaan
- Waktu Respons
< Kolom : - Kolom |slan
- Kolom Kapller
- Pemlllban Fasa Calr
Cas cmlawa
< Gas yang telab olgunakan oalam GLC : Hlorogen, bellum,
nltrogen, argon, karbon oloksloa, oan uap alr.
< Gas pembawa yang cocok bergantung paoa karakterlstlk
oetektor tersebut.
< Gas blorogen oan bellum olgunakan paoa oetektor
klnouktlvltas termal seoangkan nltrogen olgunakan paoa
oetektor penglonan nyala.
Sisicm cngamlilan samcl
< Sampel-sampel calr : ollnjekslkan melalul suatu karet
septum oengan memakal suntlkan syrlnge.
< Sampel-sampel gas : ollnjekslkan atau olmasukkan oengan
memakal bermacam-macam alat pengambllan sampel gas
yang olrancang untuk kromatograt komerslal
lolom
< Kolom Kapller
- Merupakan tabung yang panjang oan tlpls oarl kaca atau
baban lalnnya sepertl baja taban karat.
- Hanya oapat menanganl sampel-sampel yang sangat kecll, oan
penggunaannya secara luas menunggu pengembangan oetektor
yang sangat sensltlt.
< Kolom |slan
Fasa stasloner oalam GLC aoalab calran, tetapl calran ltu tloak
boleb olblarkan bergerak-gerak ol oalam tabung. Calran
tersebut barus ollmoblllsasl, blasanya oalam bentuk suatu
laplsan tlpls oengan luas permukaan besar. |nl pallng lazlm
ollakukan oengan menglmpregnasl suatu baban paoat oengan
tase calr kolom ollsl.
Kolom . (2}
< Pemlllban tasa calr
- Fasa calr stasloner barus olplllb oengan
mempertlmbangkan masalab pemlsaban tertentu.
- Fasa calr barus stabll secara termal paoa temperatur
kolom (kecuall oalam kasus-kasus kbusus), tloak bereaksl
secara klmla oengan komponen-komponen sampel,
memlllkl oaya pelarut yang cukup untuk sampel.
Karalicrisiil dciclior
< Detektor |ntegral
Memberlkan suatu pengukuran setlap saat oarl jumlab total baban yang olelusl
yang telab melewatlnya sampal waktu ltu.
< Detektor Dlterenslal
Mengbasllkan kromatogram tamlllar yang terolrl oarl puncak-puncak oan bukan
langkab-langkab.
Dlbagl menjaol 2 kelas besar :
- oetektor yang mengukur konsentrasl zat terlarut oengan memakal
beberapa sltat tlslka oarl allran gas buangan
- oetektor yang merespons secara langsung zat terlarut oengan oemlklan
berartl mengukur laju allr massanya.
Karalicrisiil dciclior . (2}
< Kromatogram yang olperoleb oengan oetektor |ntegral
< Kromatogram yang olperoleb oengan oetektor olterenslal
Karalicrisiil dciclior .. (3}
< Kepekaan
Kepekaan oetektor menunjukkan suatu batasan yang
pallng pentlng paoa jumlab zat terlarut yang pallng kecll
yang oapat oltentukan oengan GLC
Rumus umum untuk kepekaan :
< Stabllltas
Garls oasar suatu kromatogram olmaksuokan untuk tluktuasl jangka penoek oarl suatu
sltat yang sangat acak yang olsebut nolse.
Nolse oapat olbubungkan oengan kepekaan, tlngkat nolse oan batas oeteksl. Hubungan
antara kepekaan, tlngkat nolse, oan batas oeteksl oapat olrumuskan sebagal berlkut.
Menglngat kemball oetlnlsl kepekaan
lka menggabungkan batas oeteksl, Qo, oengan oua kall tlngkat nolse puncak ke puncak,
2Rn, maka klta blsa tulls
Karalicrisiil dciclior . (3}
< Keserbagunaan
< Waktu Respons
Waktu respons keseluruban untuk suatu kromatograt
aoalab tungsl bukan banya oarl oetektor ltu senolrl, tetapl
juga kelembaman komponen-komponen laln. Mlsalnya
perekam.
< Kellnleran
Jcnis-jcnis dciclior
< Detektor Konouktlvltas Termal
- Detektor yang banyak olgunakan untuk GLC. Alat lnl
menganoung : tllamen logam yang olpanaskan maupun suatu
termlstor.
- Gas pembawanya aoalab blorogen
oan bellum
- Detektor lnl relatlt seoerbana,
tloak mabal, memlllkl kepekaan
yang cukup bagl banyak kegunaan
Jcnis-jcnis dciclior .. (2}
< Detektor Penglonan Nyala
Prlnslp oasar :
1. Lnergl kalor oalam blorogen menyebabkan banyak molekul untuk
menglonlsasl
2. Gas etluen oarl kolom olcampur oengan blorogen oan olbakar paoa ujung jet
logam oalam uoara berleblb.
3. Potenslal olberlkan antara jet oan elektrooa keoua yang bertempat ol atas
atau sekltar nyala ltu.
4. Ketlka lon-lon olbentuk oalam nyala, ruang gas antara keoua elektrooa
menjaol leblb konouktlt, oan arus yang menlngkat mengallr oalam slrkult.
5. Arus melewatl reslstor, tegangan terbentuk yang olkuatkan untuk
mengbasllkan lsyarat yang olterlma perekam.
Jcnis-jcnis dciclior . (3}
Gambar Detektor Penglonan Nyala
Pcncraan glc
< |oentltlkasl Senyawa
< Keserbagunaan GLC
< Plrollsls Kromatogratl Gas
< Anallsls Kuantltatlt
8ergantung paoa bubungan antara jumlab suatu zat terlarut oan
ukuran oarl plta elusl yang olbasllkan.
Kromaiografi Cair
Kromaiografi Cair
Kromatogratl aoalab kromatogratl
oengan tasa gerak berupa zat calr.
PFOSES-PFOSES DISTFIDUSI FASA
< Aosorpsl
< Pertukaran |on
< Partlsl Calr - Calr
ADSOFPSI
< Aosorpsl aoalab proses pemlsaban baban oarl suatu
campuran oengan cara penglkatan baban tersebut paoa
selurub baglan aosorben calr yang ollkutl oengan
pelarutan.
ADSOFDEN
Persyaratan aosorben :
< Memlllkl oaya melarutkan baban yang akan olabsorpsl yang
sebesar mungkln (kebutuban akan calran leblb seolklt,
volume alat leblb kecll).
< Selektlt
< Memlllkl tekanan uap yang renoab
< Tloak koroslt
< Mempunyal vlskosltas yang renoab
< Stabll secara termls
< Murab
Alai Alsorsi Sccara Slcmaiis
Prinsi PcmisaIan Ion
&ntuk memlsabkan sejumlab anlon oan katlon satu sama
lalnnya. Anorganlk katlon olplsabkan paoa kolom resln
pemlsab katlon, sementara anorganlk anlon olplsabkan
paoa kolom resln pemlsab anlon.
Fcsin PcmisaI Ion
ConioI
Pemlsaban lon
Na
+
, NH
4
+
, K
+
, Mg
2+
oan Ca
2+
Resin-5O
3
-
H
+
+ Na
+
, NH
4
+
, K
+
, Mg
2+
, Ca
2+
Resin-5O
3
-
Na
+
, NH
4
+
, K
+
, Mg
2+
,
Ca
2+
+ H
+
Pariisi Cair - Cair
Teknlk lnl tergantung paoa partlsl zat paoat olantara oua
pelarut yang tloak oapat bercampur salab satu olantaranya
bertlnoak sebagal tasa olam oan yang lalnnya sebagal tasa
gerak.
[c~rcg~l. _~.-_~.
kromotoqrof| Co|r-Co|r
< Ado duo mocom :|:tem enqqunoon do|om
hromotoqrof| co|r-co|r :
I. hromotoqrof| fo:o normo|
fo:e qeroh non o|or ( ex: heh:ono, |:oro||-eter)
fo:e d|om :onqot o|or (ex: o|r)
d|qunohon untuh mem|:ohhon :enyowo o|or, :ebob
:enyowo o|or ohon tertohon |eb|h |omo d|do|om
ho|om yonq o|or, :edonqhon :enyowo yonq non-o|or
ohon he|uor |eb|h owo| dor| do|om ho|om.
< . kromotoqrof| fo:o terbo||h
fo:e qeroh o|or ( ex: o|r, metono|)
fo:e d|om non o|or (ex: h|drohorbon ohtodehono)
d|qunohon untuh mem|:ohhon :enyowo-:enyowo non o|or.
Ano||:o kuo||tot|f
< Do:ornyo odo|oh wohtu reten:| otou uo|ume reten:| :uotu
:enyowo.
< Membond|nqhon t otou V :enyowo do|om :ome| yonq
d|ono||:|: denqon t otou V :uotu :enyowo :tondor (yonq
te|oh d|hetohu|)
Ano||:|: kuont|tot|f
< Metode enquhuron t|nqq| uncoh
1|nqq| uncoh :uotu hromotoqrom ohon :ebond|nq denqon
hodor :enyowo yonq membentuh hromotoqrom ter:ebut.
enquhuron t|nqq| uncoh d|do:orhon odo rumu:
enquhuron t|nqq| :uotu :eq|t|qo, yo|tu :uotu qor|: teqoh
|uru: dor| t|t|h tenqoh o|o: hromotoqrom :omo| denqon
erotonqon :|:| :eq|t|qo hromotoqrom ter:ebut.
Ano||:|: kuont|tot|f (|onjuton)
< Metode enquhuron |uo: uncoh
Doot member|hon ho:|| yonq |eb|h ohurot j|ho
d|bond|nqhon denqon coro enquhuron t|nqq| uncoh. Luo:
uncoh d|uhur :eert| menqh|tunq |uo: :eq|t|qo yo|tu :
Rumu: ter:ebut member|hon ho:|| yonq bo|h j|ho
hromotoqromnyo berbentuh |onc|. Coro |o|n menqqunohon
rumu: :
Ano||:|: kuont|tot|f (|onjuton)
Ano||:|: kuont|tot|f (|onjuton)
< Metode qunt|nq don t|mbonq
kromotoqrom yonq te|oh d|qomborhon odo herto:
d|qunt|nq :e:uo| bentuhnyo, hemud|on qunt|nqon-qunt|nqon
herto: hromotoqrom |n| d|t|mbonq. erot dor| mo:|nq-
mo:|nq qunt|nqon hromotoqrom |n| ohon :ebond|nq denqon
hodor :enyowo yonq membentuh hromotoqrom ter:ebut.
Ano||:|: kuont|tot|f (|onjuton)
< Metode |nteqrotor
|nteqrotor odo|oh ero|oton e|ehtron|h yonq :er|nq d|jumo|
odo ero|oton hromotoqrof| yonq modern. A|ot |n| ohon
menquboh tondo-tondo ||:tr|h dor| detehtor menjod| :uotu
qomboron hromotoqrom :eho||qu: menqh|tunq |uo:
hromotoqrom yonq d|bentuh :ecoro e|ehtron|h.
kromotoqrof| kerto:
fo:e d|om herto: :ero
Fo:e qeroh e|orut otou comuron e|orut yonq
:e:uo|.
loroh re|ot|ue odo e|orut d|:ebut :eboqo| n||o| R
f
.
Untuh :et|o :enyowo ber|ohu rumu: :eboqo| ber|hut:
Rf-joroh yonq d|temuh o|eh :enyowo
joroh yonq d|temuh o|eh e|orut
kromotoqrof| kerto: (|onjuton)
kromotoqrof| kerto: Duo Aroh
< D|qunohon do|om menye|e:o|hon mo:o|oh em|:ohon
:ub:ton:| yonq mem|||h| n||o| R
f
yonq :onqot :eruo.
< Menqqunohon duo e|orut yonq berbedo
kromotoqrof| Lo|: 1||:
< Menqqunohon :ebuoh |o|: t||: :|||ho otou o|um|no
yonq :eroqom odo :ebuoh |emenq qe|o: otou |oqom
otou |o:t|h yonq hero:.
< Fo:e d|om le| :|||ho (otou o|um|no) otou :ub:ton:|
yonq doot berendorf|our do|om :|nor u|tro u|o|et.
< Fo:e qeroh e|orut otou comuron e|orut yonq
:e:uo|.
kromatografi Lapis
1ipis (lan[utan)
Sebuuh gurls menggunukun lnsll dlgumbur dekut buglun
buwuh lemengun dun setetes elurut durl cumurun
ewurnu dltemutkun udu gurls ltu.
letlku bercuk durl cumurun ltu mengerlng, lemengun
dltemutkun dulum sebuuh gelus klmlu bertutu berlsl
elurut dulum jumluh yung tlduk terlulu bunyuk. Perlu
dlerhutlkun buhwu butus elurut berudu dl buwuh gurls
dlmunu oslsl bercuk berudu.
Menutu gelus klmlu untuk meyuklnkun buwuh kondlsl
dulum gelus klmlu terjenuhkun oleh uu durl elurut.
Untuk menduutkun kondlsl lnl, dulum gelus klmlu
blusunyu dltemutkun beberuu kertus surlng yung
terbusuhl oleh elurut. londlsl jenuh dulum gelus klmlu
dengun uu menceguh enguuun elurut.
kromatografi Lapis
1ipis (lan[utan)
Perhitungan nilai R
f
llul R
f
untuk setlu wurnu dlhltung
dengun rumus sebugul berlkut:
Sebugul contoh, jlku komonen
berwurnu meruh bergeruk durl ., cm
durl gurls uwul, sementuru elurut
berjuruk . cm, sehlnggu nllul R
f
untuk komonen berwurnu meruh
menjudl:
nalisis Sampel yang
1idak 8erwarna
.Menggunakan pendarjlour
use dlum udu sebuuh lemengun luls tlls
serlngkull memlllkl substunsl yung dltumbuhkun
kedulumnyu, suuyu menghusllkun endurun
flour ketlku dlberlkun slnur ultruvlolet (Uv).
Pendurun lnl dltutul udu oslsl dlmunu bercuk
udu kromutogrum berudu, mesklun bercuk
bercuk ltu tlduk tumuk berwurnu jlku dlllhut
dengun mutu. letlku slnur Uv dlberlkun udu
lemengun, ukun tlmbul endurun durl oslsl
yung berbedu dengun oslsl bercukbercuk.
8ercuk tumuk sebugul bldung kecll yung gelu.
nalisis Sampel yang
1idak 8erwarna
#. Penun[ukkan bercak secara kma
ulum beberuu kusus, dlmungklnkun untuk membuut bercukbercuk
menjudl tumuk dengun julun mereukslkunnyu dengun zut klmlu
sehlnggu menghusllkun roduk yung berwurnu. Sebuuh contoh yung
bulk uduluh kromutogrum yung dlhusllkun durl cumurun usum umlno.
lromutogrum duut dlkerlngkun dun dlsemrotkun dengun lurutun
nnhdrn. lnhldrln bereuksl dengun usum umlno menghusllkun
senyuwusenyuwu berwurnu, umumnyu coklut utuu ungu.
ulum metode luln, kromutogrum dlkerlngkun kembull dun kemudlun
dltemutkun udu wuduh bertutu (seertl gelus klmlu dengun tutuun
gelus urlojl) bersumu dengun krstal odum.
Uu lodlum dulum wuduh duut berekusl dengun bercuk udu
kromutogrum, utuu duut dllekutkun leblh dekut udu bercuk durludu
lemengun. Substunsl yung dlunullsls tumuk sebugul bercukbercuk
kecoklutun.
kromotoqrof| ko|om
ko|om hromotoqrof|
berherjo berdo:orhon
:ho|o yonq |eb|h be:or
menqqunohon moter|o|
terodothon odo
:ebuoh ho|om qe|o:
uert|ho|.
Penggunaan kolom
Mlsulnyu memlsuhkun cumurun durl duu senyuwu yung berwurnu,
yultu kunlng dun blru. vurnu cumurun yung tumuk uduluh hljuu.
Pertumu enutu krun dlbuku untuk memblurkun elurut yung
suduh berudu dulum kolom mengerlng sehlnggu muterlul
terudutkun rutu udu buglun utus, dun kemudlun tumbuhkun
lurutun securu hutlhutl durl buglun utus kolom. Lulu buku krun
kembull sehlnggu cumurun berwurnu ukun dlseru udu buglun
utus muterlul terudutkun, sehlnggu ukun tumuk seertl gumbur
dlsumlng.
menumumbuhkun elurut buru melulul buglun utus kolom, jungun
sumul merusuk muterlul terudutkun dulum kolom. Lulu buku krun,
suuyu elurut duut mengullr melulul kolom, kumulkun dulum
sutu gelus klmlu utuu lubu dlbuwuh kolom. lurenu elurut mengullr
kontlnyu, undu tetu tumbuhkun elurut buru durl buglun utus
kolom sehlnggu kolom tlduk ernuh kerlng.
erubohon yonq munqh|n terjod| :ejo|on erubohon wohtu
|qh erformonce L|qu|d
Chromotoqrohy (LC)
ero|oton LC :ecoro r|n:| terd|r| dor| :
< 1emot e|orut
< omo
< 1emot |njeh:| :ome|
< ko|om
< Detehtor
< Rehorder
i
|qh erformonce L|qu|d
Chromotoqrohy (LC) [|onjuton]
I. Fo:o mob||e (e|orut)
e|orut yonq d|qunohon horu: d||ohuhon deqo::|nq untuh menqe|uorhon
qo: ter|orut yonq t|doh d||nq|nhon.
. 5|:tem omo
odo duo jen|: omo, yonq mendo:or| emoho|onnyo yo|tu : tehonon
teto don uo|ume teto.
1. F|ow contro||er (enqendo|| o||ron)
untuh men:tob||hon o||ron fo:o mob||e oh|bot odonyo erubohon
tehonon qo:, temerotur don u|:ho:|to:.
4. ko|om
1|doh memer|uhon temerotur yonq t|nqq|, horeno :|fot |hoton h|m|o
terhodo fo:o :to:|oner :onqot :en:|t|f terhodo temerotur yonq t|nqq|.
|qh erformonce L|qu|d
Chromotoqrohy (LC) [|onjuton]
s. Detehtor
horohter|:t|h detehtor untuh LC
- :en:|u|to:nyo t|nqq|
- re:on yonq menye|uruh terhodo :ome|
- t|doh meru:ho :ome|
- t|doh :en:|t|f terhodo erubohon temerotur don heceoton o||ron
fo:o mob||e
- doot beroero:| :ecoro teru: meneru:.
. Rehoorder
Menqe|uorhon outut beruo hromotoqrom.
Keuntungan HPLC
< Ceot
< Re:o|u:|
< 5en:|t|u|to: detehtor
< ko|om yonq doot d|qunohon hembo||
< |deo| untuh zot bermo|ehu| be:or don ber|on|h
< Mudoh rehouer| :ome|
SLK|AN DAN
TLR|MAKAS|H
Pcrianyaan
< Fase olamnya oarl GLC
< Mengapa larutan tase stasloner (kbotlb)
< Dampak pembuatan kromatogratl semplt oan tebal
< Perbeoaaan aosorpsl oarl spektrokospl oengan
kromatogratl (Dauol)
< Keunggulan antara kromatogratl oan spektrokospl. (Dauol)
< 8abwa metooe aoa kesamaannya yaltu anallsls senyawa
oengan tlngkat pemlsaban yang leblb akurat, tapl
perbeoaannya oeteksl sampe yang olgunakan berbeoa,
yaltu stre menggunakan slnar, kromatogratl oengan tase
calr oan gas.