利用 SDS 的鹼性裂解配製質體 DNA

目的:
質體 DNA 能利用強鹼和 SDS 的處理從小刻度(1-2ml)的細菌培養物中被分離出。
此產生的 DNA 配製品能藉著被電泳篩選或限制內核酸酶分解。利用 PEG 的處理
使其更進一步的純化，此配製品能在 DNA 後來的反應中被模版使用。

材料和方法:
材料:
Buffers and Solutions
Media
方法:
Preparation of Cells
1. 培養 2ml 充滿營養的壞境(LB,YT,or Terrific Broth)容納適合的抗生素和單一
菌落的突變細菌，細菌培養物會在攝氏 37 度下的晃動一個晚上後慢慢形成。
2. 注入 1.5ml 的培養菌至離心管中。在攝氏 4 度下以極速離心 30 秒。貯存未使用
的部份的最初培養菌於攝氏 4 度中。
3. 離心完，盡可能將上清液完全移除，留下 pellet。
4. 此細菌的顆粒小物經由強而有力的旋轉再次懸浮在 0.1ml 的冰冷的鹼性裂解
溶液 I 中。
5. 加入 0.2ml 新配製鹼性裂解容液 II 到上清液中。密封住試管以上下顛倒的方
式快速地的混合內容物 5 次。不要用旋轉的! 貯存試管於冰塊中。
6. 加入 0.15ml 的冷凍鹼性裂解容液 III。密封試管以上下顛倒的方法混合數次使
鹼性裂解分散到黏性的 Bacterial Lysate。貯存試管在冰上 3-5 分鍾。
7. Bacterial Lysate 置於離心機中在 4 度 C 中以最大速度離心 5 分鍾。將其上清液
移到新試管中。
8. 加入一等量體積的 Phenol:chloroform.利用旋轉混合有機的和水的相。並將其
乳狀物在 4 度 C 以最大極速離心 2 分鍾。將其上層液體移到新的試管中。
9. 從表層沉澱的核酸在室溫中加入 2 毫升的酒精。混合均於後在室溫下使用離
心機離心兩分鐘。
10. 取沉澱的核酸在 4 度 C 以最大轉速離心五分鐘。
11. 和緩地把上層液抽取掉，如第三步驟。把試管反置在紙毛巾上排掉液體。使用
Kimwipe 或用完既丢移液管去除黏附在管壁上的溶液。
12. 剩餘下來的顆粒狀物加入 70% 1 毫升的酒精搖晃數次。再放入微量離心管在
4 度 C 用最大轉速離心兩分鐘即取得所要的 DNA。
13. 再一次和緩地把上層液抽取掉，如第三步驟。
14. 去除在管邊的酒精氣泡後，在室溫下儲存直到酒精蒸發掉且看不到液體。
15. 使用包含 20 μg /毫升胰核糖酸水解酶的 50 μl TE 溶液 (Ph 8.0)溶解掉核酸，
再和緩地搖晃幾下。接著儲存 DNA 在-20 度 C。