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質 體 DNA 的 小 量 抽 取

第八組 四生三甲、郭家甫、931242008

一、目的:
利用 Alkaline Lysis 和 SDS 將細菌分解或打破,以便分離純化出質體。

二、材料:
Alkaline lysis solution I(冰):25mM Tris-HCl、10mM EDTA。
Alkaline lysis solution II(室 、需現配):0.2N NaOH、1% SDS。
Alkaline lysis solution III(冰)
Phenol:choroform(v/v=1:1)
Antibiotic for plasmid selection
Ethanol
TE(PH=8.0)containing 20μg/ml DNase-free RNase A
LB、YT、or Terrific Broth
Pipette、Tip
離心機、Microfuge tube
37℃培養箱、震盪器

三、方法和步驟:

1. 將含有質體的細菌培養於 2ml 含有抗生素的培養液中,37℃隔夜震盪培養。

2. 取 1.5ml 菌液至微量離心管,離心(max) 30 秒、4℃(剩下的菌液保存於 4℃)。

3. 離心完,盡可能將上清液完全移除,留下 pellet。

4. 加入 solution I 100μl,充分震盪以懸浮菌塊。

5. 加入 solution II 200μl, 和翻轉 5 次後置於冰上(切勿振盪)。

6. 加入 solution III 150μl, 和翻轉數次後置於冰上 3~5 分鐘。


7. 離心(max) 5 分鐘、4℃後,將上層液移至新的微量離心管。

8.

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