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NMX-AA-113-SCFI-1999 ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE HUEVOS DE HELMINTO - MTODO DE PRUEBA ANALYSIS OF WATER - DETERMINATION OF HELMINTH EGGS - TEST METHOD

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P R E F A C I O En la elaboracin de la presente norma mexicana, participaron las siguientes empresas e instituciones: ASOCIACIN NACIONAL DE LA INDUSTRIA QUMICA, A.C. Direccin General. ASOCIACIN NACIONAL DE PRODUCTORES DE REFRESCOS Y AGUAS CARBONATADAS Direccin Tcnica. CMARA DE LA INDUSTRIA DE TRANSFORMACIN DE NUEVO LEN Instituto para la Proteccin Ambiental - Direccin General. CMARA MINERA DE MXICO Comisin de Ecologa y Recursos Naturales. CMARA NACIONAL DE LA INDUSTRIA DE ACEITES, GRASAS Y JABONES Gerencia de Ecologa, Normas y Salud. CMARA NACIONAL DE LA INDUSTRIA DEL HIERRO Y DEL ACERO Instituto Mexicano del Hierro y el Acero. CMARA NACIONAL DEL CEMENTO COLEGIO DE INGENIEROS MECNICOS Y ELECTRICISTAS Coordinacin del Comit Nacional Permanente de Peritos de Riesgo Ambiental. COMISIN FEDERAL DE ELECTRICIDAD Gerencia de Proteccin Ambiental. COMISIN NACIONAL DEL AGUA Gerencia de Saneamiento y Calidad del Agua. COMIT TCNICO DE NORMALIZACIN NACIONAL DE PROTECCIN AL AMBIENTE CONFEDERACIN DE CMARAS INDUSTRIALES Comisin de Ecologa.

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CONFEDERACIN PATRONAL DE LA REPBLICA MEXICANA Comisin Nacional de Ecologa. DEPARTAMENTO DEL DISTRITO FEDERAL Subdireccin de Verificacin y Control de la Contaminacin. INSTITUTO MEXICANO DEL PETRLEO INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL Acadmia de Ingeniera Sanitaria; Centro de Investigacin y Estudios Avanzados. INSTITUTO TECNOLGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY Direccin General. PETRLEOS MEXICANOS Exploracin y Produccin-Subgerencia de Normatividad y Promocin; Refinacin-Gerencia de Proteccin Ambiental y Seguridad Industrial; Direccin de Gas y Petroqumica Bsica; Direccin Corporativa de Administracin. PROCURADURA FEDERAL DE PROTECCIN AL AMBIENTE Direccin General de Verificacin al Ordenamiento Ecolgico. SECRETARA DE AGRICULTURA, GANADERA Y DESARROLLO RURAL Direccin General de Agricultura. SECRETARA DE COMUNICACIONES Y TRANSPORTES Direccin General de Transporte Terrestre Federal. SECRETARA DE ECOLOGA DEL ESTADO DE MXICO Direccin General de Normatividad y Apoyo Tcnico. SECRETARA DE ENERGA Direccin de Seguridad y Proteccin al Ambiente. SECRETARA DE GOBERNACIN Direccin General de Proteccin Civil. SECRETARA DE MARINA Direccin de Proteccin al Medio Ambiente. SECRETARA DE MEDIO AMBIENTE, RECURSOS NATURALES Y PESCA Subsecretara de Recursos Naturales.

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SECRETARA DE SALUD Direccin General de Salud Ambiental. SECRETARA DEL TRABAJO Y PREVISIN SOCIAL Subdireccin de la Unidad de Estructuracin de Normas. UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA Coordinacin de Investigacin. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO Centro de Ciencias de la Atmsfera; Coordinacin de Investigacin Cientfica; Facultad de Ingenieria-Laboratorio de Control de Emisiones.

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NDICE DEL CONTENIDO Nmero de captulo 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Introduccin Objetivo y campo de aplicacin Referencias Definiciones Principio Muestreo Reactivos y materiales Aparatos Preparacin y acondicionamiento de la muestra Procedimiento Expresin de resultados Informe de la prueba Bibliografa Concordancia con normas internacionales 2 3 4 4 5 5 5 9 11 11 12 Pgina 1 1 2

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ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE HUEVOS DE HELMINTO - MTODO DE PRUEBA ANALYSIS OF WATER - DETERMINATION OF HELMINTH EGGS - TEST METHOD

INTRODUCCIN

Ante la escasez de recursos hdricos, la explosin demogrfica y el desarrollo industrial, la utilizacin de aguas residuales es una importante alternativa como fuente adicional de suministro, particularmente para riego agrcola. Sin embargo, dicha actividad tiene implicaciones negativas desde el punto de vista sanitario, ya que representa un riesgo a la salud de los trabajadores agrcolas y de los consumidores de los productos, en especial cuando se trata de aqullos que se consumen crudos como las hortalizas. Los helmintos representan un elevado riesgo a la salud humana debido a que sus diversos estados infecciosos (huevos embrionados o larvas) son altamente persistentes en el agua contaminada. As, el agua constituye un vehculo directo o indirecto de diseminacin de helmintos, aun cuando se encuentren en bajas concentraciones, dando lugar a enfermedades gastrointestinales, sobre todo cuando sta se emplea para el riego de cultivos.

OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta norma mexicana establece el mtodo para la deteccin y enumeracin de huevos de helminto en aguas residuales y lodos, con el fin de evaluar la calidad del agua y la eficiencia de los sistemas de tratamiento de la misma. Esta norma mexicana es aplicable para la evaluacin de la calidad del agua residual cruda y tratada.

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REFERENCIAS

Para la correcta aplicacin de esta norma se deben consultar las siguientes normas oficiales mexicanas y normas mexicanas vigentes o las que las sustituyan: NOM-001-ECOL-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 6 de enero de 1997. Que establece los lmites mximos permisibles de contaminantes para las aguas residuales tratadas que se reusen en servicios al pblico, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 21 de septiembre de 1998. Aguas residuales - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 25 de marzo de 1980. Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio usados en laboratorio. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 24 de agosto de 1973. Criterios generales para la operacin de los laboratorios de pruebas. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 25 de junio de 1992.

NOM-003-ECOL-1997

NMX-AA-003-1980

NMX-BB-014-1973

NMX-CC-013-1992

DEFINICIONES

Para los propsitos de esta norma se establecen las siguientes definiciones: 3.1 Aguas residuales

Son las aguas de composicin variada provenientes de las descargas de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrcolas, pecuarios, domsticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier otro uso, as como la mezcla de ellas. 3.2 Coagulacin

Es la adicin de compuestos qumicos para alterar el estado fsico de los slidos coloidales o suspendidos, a fin de facilitar su remocin por sedimentacin o filtracin. 3.3 Filtracin

Es la remocin de las partculas suspendidas de un lquido que fluye a travs de un medio de porosidad adecuada.

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3.4

Flotacin

Es la tcnica de concentracin donde las partculas de inters permanecen en la superficie de la solucin cuya densidad es mayor. Por ejemplo, la densidad de huevos de helminto se encuentra entre 1,05 y 1,18, y la de los lquidos de flotacin se sita entre 1,1 y 1,4.

3.5

Helmintos

Trmino designado a un amplio grupo de organismos que incluye a todos los gusanos parsitos (de humanos, animales y vegetales) y de vida libre, con forma y tamaos variados. Poseen rganos diferenciados, y sus ciclos de vida comprenden la produccin de huevos o larvas, infecciosas o no y la alternancia compleja de generaciones que incluye hasta tres huspedes diferentes.

3.6

Mtodo bifsico

Es la tcnica de concentracin que utiliza la combinacin de dos reactivos no miscibles entre s, y donde las partculas (huevos y detritus) se orientan en funcin de su balance hidroflico-lipoflico.

3.7

Sedimentacin

Es el proceso fsico de separacin entre dos fases debido a la diferencia de sus densidades.

PRINCIPIO

Este mtodo de anlisis se basa en la diferencia de densidades entre los huevos de helminto, las dems sustancias presentes en las aguas residuales, y las que se agregan para permitir la separacin. El mtodo comprende los procesos de coagulacin, sedimentacin, flotacin, decantacin y la tcnica bifsica para recuperar los huevos de helminto y efectuar el conteo.

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MUESTREO

El muestreo constituye una parte integral y fundamental de cualquier programa de evaluacin de la calidad del agua, por lo cual, ste debe efectuarse como se menciona a continuacin y de acuerdo a lo establecido en las normas mexicanas NMX-AA-003 y NMX-BB-014 (ver 2 Referencias): 5.1 5.2 5.3 Preparar garrafones de plstico inerte de 8 L, previamente desinfectados con hipoclorito de sodio al 10 % (NaClO). Lavarlos con agua potable a chorro y enjuagarlos varias veces con agua destilada. Se toman muestras de 5 L (volumen total), en estos garrafones de plstico inerte, los cuales deben ser cerrados y sellados. REACTIVOS Y MATERIALES Reactivos (grado analtico) cido sulfrico (H2SO4); Alcohol etlico (C2H5OH); Agua destilada; Cloruro de sodio (NaCl); ter etlico; Formaldehdo al 4 %; Hipoclorito de sodio (NaClO) (no aplica grado analtico), y Sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO4.7H2O). Materiales Aplicadores de madera; Barras magnticas; Bulbo de goma; Esptula; Garrafones de plstico inerte con paredes lisas y transparentes de 8 L de capacidad; Gradillas para tubos de centrfuga de 50 ml; Guantes de ltex; Mascarilla contra gases y vapores; Matraz Kitazato; Pipetas de 10 ml de plstico; Probetas graduadas de 50 ml y de 1 000 ml; Recipientes de plstico inerte con paredes lisas y transparentes de 2 000 ml y 4 000 ml de capacidad;

6 6.1 6.2 -

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Tamiz de 160 m (micras) de poro; Tubos de centrfuga de 200 ml, 450 ml o de mayor volumen segn sea la capacidad mxima de la centrfuga; Tubos de centrfuga cnicos de 50 ml, y Vasos de precipitados de 1 000 ml.

NOTA- Los materiales utilizados deben cumplir con lo establecido en la norma mexicana NMX-BB-014 (ver 2 Referencias). 7 APARATOS Agitador de tubos, con control de velocidad y adaptable a diversos tubos; Balanza granataria; Balanza analtica; Bomba de vaco con control de velocidad de succin; Campana de extraccin; Celda de Sedgwich-Rafter o cmara de conteo de Doncaster o cmara de Neubauer; Centrfuga. Capaz de mantener los intervalos de operacin de 1 000 r/min a 3 000 r/min o su equivalente en g; Densmetro (Hidrmetro). Capaz de mantener el intervalo de medicin de 1,0 g/ml a 1,4 g/ml, y temperatura de operacin de 0C a 4C; Incubadora; Microscopio ptico. Equipado para hacer iluminacin campo claro (Kheler), con aumento de 10 a 100x y platina mvil (opcional); Parrilla con agitacin magntica, y Refrigerador.

8 8.1 8.2

PREPARACIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA Las muestras deben mantenerse a una temperatura de 4C 2C hasta su llegada al laboratorio. La muestra debe procesarse dentro de las 48 h despus de su toma, o en caso contrario, debe fijarse con 10 ml de formaldehdo al 4 %, o bien, preservarse en refrigeracin para realizar su anlisis antes de 2 meses.

PROCEDIMIENTO

Los siguientes puntos describen la secuencia del mtodo de prueba, el cual debe realizarse conforme a lo descrito, con el fin de minimizar sesgos en los datos obtenidos.

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9.1 9.1.1

Preparacin de soluciones Solucin de sulfato de zinc (ZnSO4) con gravedad especfica de 1,3

Disolver 800 g de sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO4.7H2O) en 1 000 ml de agua destilada; mezclar en la parrilla magntica hasta homogeneizar totalmente. Medir la densidad con el densmetro. Ajustar la densidad a 1,3 agregando sulfato de zinc o agua destilada, segn sea el caso.

9.1.2

Solucin de alcohol-cido.

Homogeneizar 650 ml de cido sulfrico (H2SO4) 0,1 N, con 350 ml de alcohol etlico. Almacenar la solucin en un recipiente hermtico. 9.2 Calibracin de aparatos

Todos los equipos utilizados deben ser calibrados con patrones certificados o ajustados de acuerdo a las especificaciones del fabricante.

9.3

Seguridad

Durante el procesado de la muestra se debe utilizar guantes de ltex y cubreboca para evitar cualquier riesgo de infeccin. Se debe lavar y desinfectar el rea de trabajo, as como el material utilizado por el analista, antes y despus del ensayo. Cuando se efecte la agitacin de las soluciones con ter, sta se debe realizar en sitios ventilados o dentro de la campana de extraccin, y considerar su inflamabilidad. Evitar el contacto con los ojos, piel o ropa, ya que es un reactivo sumamente txico.

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9.4

Manejo de residuos

Todo material desechado debe ser previamente esterilizado o desinfectado con hipoclorito de sodio al 10%. 9.5 Concentracin y separacin de los huevos de helminto

La recuperacin de los huevos de helminto de la muestra se debe realizar efectuando los siguientes pasos: a) Dejar reposar la muestra al menos 3 h o toda la noche o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. Aspirar y desechar el sobrenadante por vaco y sin agitar, si la sedimentacin (separacin) se realiz por centrifugacin, decantar lentamente. Filtrar el sedimento en el tamiz de 160 m de poro. Lavar el tamiz con 5 L de agua (potable o destilada), y recuperar el agua de lavado junto con el sedimento filtrado. Colocar el filtrado y el agua de enjuague en el garrafn de 8 L donde originalmente se encontraba la muestra o en los recipientes utilizados en la centrifugacin. Dejar reposar la muestra al menos 3 h o toda la noche o centrifugar a 400

b)

c)

d)

g de 3 min a 5 min.
e) Aspirar con cuidado el sobrenadante al mximo y desecharlo. Depositar el sedimento en los recipientes para la centrfuga. Enjuagar 3 veces el garrafn perfectamente con poca agua destilada, y colocar en los recipientes para centrifugacin. Centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. Decantar nuevamente el sobrenadante por vaco. Asegurarse que en el fondo del recipiente exista la pastilla; en caso contrario, centrifugar nuevamente. Resuspender la pastilla en 150 ml de la solucin de sulfato de zinc (ZnSO4). Homogeneizar la pastilla con el agitador de tubos o con un aplicador de madera.

f) g)

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h)

Una vez ms, centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min, y recuperar el sobrenadante virtindolo en un recipente de plstico de 2 000 ml. Diluir cuando menos en 1 000 ml de agua destilada, y dejar sedimentar al menos 3 h, o toda la noche o centrifugar a 400 g de 3 min a 5 min. Aspirar con cuidado y al mximo el sobrenadante por vaco, y resuspender el sedimento por agitacin, utilizando poca agua destilada. Vertir la suspensin resultante en un tubo de centrfuga de 200 ml, incluyendo el agua de enjuague del recipiente y centrifugar a 480 g durante 3 min. Decantar nuevamente el sobrenadante y resuspender la pastilla con agua destilada en un tubo de 50 ml y centrifugar a 480 g durante 3 min. Decantar nuevamente el sobrenadante por vaco y resuspender la pastilla en 15 ml de la solucin de alcohol-cido por medio de un agitador de tubos, y agregar 10 ml de ter. Agitar suavemente y de vez en cuando destapar cuidadosamente los tubos para dejar escapar el gas que se desprenda. Por seguridad realizar en sitios ventilados utilizando la mascarilla o en la campana de extraccin Centrifugar una ltima vez a 660 g durante 3 min. Aspirar al mximo el sobrenadante, dejando menos de 1 ml del mismo y evitando la prdida de la pastilla; homogeneizar la pastilla, y proceder a la cuantificacin. Por seguridad realizar en sitios ventilados utilizando la mascarilla o en la campana de extraccin. Cuantificacin de los huevos de helminto Para evitar la sobreposicin de las estructuras y el detritus no eliminado, repartir la muestra en volmenes de 0,5 ml a 1,0 ml, con el fin de facilitar la lectura. Distribuir cada uno en una celda de Sedgwich-Rafter, o bien, en una cmara de conteo de Doncaster o cmara Neubauer.

i)

j)

k)

l) m)

9.6 a)

b)

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c) 10 10.1

Identificar visualmente una a una las estructuras, anotando los generos identificadas con ayuda de la figura 1. EXPRESIN DE RESULTADOS Clculos

Para determinar las revoluciones por minuto (rev/min) de la centrifuga, se utiliza la frmula siguiente: rev/min = Kg/r donde:

g
K r

es la fuerza relativa de la centrifugacin; es la constante cuyo valor es 89,456, y es el radio de la centrifuga en centmetros (cm).

La frmula para calcular g es la siguiente:

g = r(rev/min)/K
10.2 Expresar el resultado en nmero de huevecillos por litro, tomando en consideracin la expresin en clculos, o bien expresar el nmero de huevos contados y el volumen analizado:

HL =
donde:

H 5

H es el nmero de huevos ledos en la muestra; HL es el nmero de huevos por litro, y 5 es el volumen de la muestra. 10.2 Interferencias

La sobreposicin de estructuras y/o detritus no eliminado en el sedimento, puede dificultar su lectura. En tal caso, es importante dividir el volumen en las alcuotas que se consideren necesarias. La falta de experiencia en la identificacin de especies es tambin un elemento decisivo en el conteo y sobreconteo.

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FIGURA 1.-

Especies de huevos de helminto

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INFORME DE LA PRUEBA

El informe de la prueba debe incluir lo siguiente: Todos los detalles necesarios para la identificacin completa de la muestra; Los resultados, expresados de acuerdo con lo establecido en el punto 10, y Cualquier suceso particular observado durante el curso del anlisis, as como cualquier operacin no especificada en el mtodo, o considerada opcional, que pueda haber influido en los resultados.

12 12.1

BIBLIOGRAFA NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 14 de octubre de 1993. Ayres, R. M., A Practical Guide for the Enumeration of Intestinal Helmints in Raw Wastewater and Effluent from Waste Stabilization Ponds. (Gua prctica para la enumeracin de helmintos intestinales en aguas residuales y efluentes provenientes de estanques residuales de estabilizacin). Leeds University Departament of Civil Engineering.1989, 19 pp. CETESB, So Paulo, Helmintos e Protozoarios Patgenicos Contagem de Ovos e Cistos en Amostras Ambientais (Helmintos y protozoarios patgenos presentes en huevos y quistes en muestras ambientales). 1989, 33 pp. Cifuentes, E., U. Blumenthal, P. G. Ruiz y S. Bennett. Health Impact Evaluation of Wastewater Use in Mexico. (Evaluacin del impacto en la salud de las aguas residuales utilizadas en Mxico) Public Healt Rev. 1991/92 19:243-250. De Len, R., P. Ch. Gerba y B. J. Rose, Manual de Vigilancia de Parsitos en el Agua. Universidad de Arizona EEUU. 1988, 48 pp. Instituto Nacional de Referencias Epidemiolgicas (INDRE), Diagnstico Parasitolgico. 1993, Captulo IV-6, 1-43 p.

12.2

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Jimnez, B. y C. Maya, Evaluacin de las diversas tcnicas para la deteccin de los huevos de helminto, y seleccin de una para conformar la NMX correspondiente. Instituto de Ingeniera, UNAM, Mxico, 1996. Lamothe, R. y P. L. Garca, Helmintos del Hombre en Mxico-Tratamiento y Profilaxis. Edit. AGT, 1988, 25-98 pp. Martnez, B. M., Manual de Parasitologa Mdica. Edit. La Prensa Mdica Mexicana, 1986, 183-316 p. Organizacin Mundial de la Salud, Guas para la calidad del agua potable. 1995, Vol. 1, 2a. Edic., Espaa. Satchwell, G. M., An Adaptation of Concentration Technique for the Enumeration of Parasitic Helminth Eggs from Sewage Sludge (Adaptacin de la tcnica de Concentracin para la enumeracin de huevos de helminto parsitos provenientes de lodos residuales). Water Res. 1986, 20:813-816. Schwartzbrod, J., L. Stien, K. Bouhoum y B. Baleux., Impacto del Tratamiento de Agua Residual sobre Huevos de Helminto. Water Sc. Techn. 1989, 21:295-297.

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12.10

12.11

12.12

13

CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

Esta norma mexicana no equivale a ninguna norma internacional por no existir referencia alguna al momento de su elaboracin. MXICO, D.F. A LA DIRECTORA GENERAL DE NORMAS.

CARMEN QUINTANILLA MADERO.

JADS/LFVO/DLR/mrg.

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